Серологические и молекулярно-генетические маркеры вирусных гепатитов А и Е у лабораторных приматов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Догадов Дмитрий Игоревич

• Догадов Дмитрий Игоревич
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Догадов Дмитрий Игоревич

ВВЕДЕНИЕ

Часть 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ГЕПАТИТ А

1.1. Общая характеристика и таксономия гепатита А

1.2. Серологические маркеры ВГА-инфекции обезьян

1.3. Молекулярно-генетическая характеристика штаммов ВГА обезьян

1.4. Чувствительность обезьян к ВГА при экспериментальном

заражении

Глава 2. ГЕПАТИТ Е

2.1. Общая характеристика и таксономия гепатита Е

2.2. Молекулярно-генетическая характеристика штаммов гепатита Е

2.3. Естественное инфицирование обезьян ВГЕ

2.4. Восприимчивость обезьян к ВГЕ при экспериментальном заражении

ЧАСТЬ 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Характеристика животных

3.2. Образцы, полученные от обезьян

3.2.1. Образцы сывороток крови

3.2.2. Образцы фекалий

3.3. Методы определения серологических маркеров ВГА- и ВГЕ-инфекций

3.4. Методы определения молекулярных маркеров ВГА- и ВГЕ-инфекций

3.4.1. Выделение нуклеиновых кислот и обратная транскрипция

3.4.2. Выявление РНК ВГА обезьян

3.4.3. Выявление РНК ВГЕ обезьян

3.5. Анализ нуклеотидных последовательностей

3.6. Методы статистического анализа

ГЛАВА 4. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ВГА-ИНФЕКЦИИ У ОБЕЗЬЯН

4.1. Маркеры ВГА-инфекции у обезьян, рожденных в Адлерском питомнике

4.2. Маркеры ВГА-инфекции у обезьян, импортированных в Адлерский питомник

4.3. Генетический анализ выделенных изолятов ВГА

ГЛАВА 5. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ВГЕ-ИНФЕКЦИИ У ОБЕЗЬЯН

5.1. Сравнительная характеристика маркеров ВГЕ-инфекции у обезьян, рожденных в Адлерском приматологическом центре и импортированных животных

5.2. Маркеры ВГЕ-инфекции у обезьян различных групп, импортированных из Вьетнама

5.3. Генетический анализ выделенных изолятов

ГЛАВА 6. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕРОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ВГА- И ВГЕ-ИНФЕКЦИИ

У ОБЕЗЬЯН

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И

ТЕРМИНОВ

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

102

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Серологические и молекулярно-генетические маркеры вирусных гепатитов А и Е у лабораторных приматов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности.

Обезьяны подвержены почти всем антропонозным вирусным инфекциям. Кроме того, они являются естественными хозяевами ряда инфекционных агентов, опасных для человека [16]. Для многих из них уже доказана патогенность для человека, роль других изучается.

Помимо того, что обезьяны и люди имеют сходную вирусную флору, они могут обмениваться ею. Об этом свидетельствуют данные об обнаружении у обезьян маркеров различных вирусных инфекций - кори, краснухи, паротита, гепатита А и Е, парагриппа, рео-, адено-, энтеро и других вирусов человека [1, 4, 7, 11, 14, 17, 69].

Изучение спонтанной патологии инфекционных заболеваний обезьян является важным в связи с использованием их в качестве лабораторных животных: тесные контакты людей в лабораторных условиях с обезьянами, их тканями, кровью, экскрементами могут приводить к заражению персонала [16]. Обезьяны, поступающие из-за рубежа, особенно из мест естественного обитания, могут быть, несмотря на свой здоровый вид, носителями различных патогенов, представляющих опасность как для окружающих животных, так и для контактирующих с ними людей [7, 9, 14]. Кроме того, импортированные обезьяны могут быть подвержены вирусным инфекциям, распространенным среди рожденных в питомнике животных. Поэтому определение специфических маркеров вирусных инфекций у импортированных обезьян является важным и необходимым этапом во время их содержания в карантине [16].

Современный подход к изучению вирусных инфекций обезьян состоит в использовании молекулярно-генетических методов исследования. Данные методы представляют собой различные модификации полимеразной цепной реакции (ПЦР) и секвенирования, которые позволяют эффективно выявлять комплекс вирусных возбудителей и проводить оценку идентичности вирусных изолятов. Кроме того, методы молекулярной эпидемиологии

позволяют решать ряд практических задач, заключающихся в расшифровке вспышек, определении непосредственного источника заражения, а также проследить пути перемещения возбудителя в восприимчивом коллективе [14].

Гепатит А - широко распространенная высококонтагиозная антропонозная вирусная инфекция, вызываемая вирусом гепатита А (ВГА), описанная многими авторами у людей и различных видов обезьян [1, 2, 3, 4, 24, 31, 93, 111].

До настоящего времени было проведено ограниченное число исследований по генотипированию ВГА обезьян. Основные были проведены в конце 80 -х начале 90-х гг. [93, 107, 123] и за последние 25 лет имеется всего две публикации, в которых генетическое разнообразие ВГА-обезьян представлено только одиночными последовательностями [28, 34].

Среди острых вирусных гепатитов особое место занимает гепатит Е (ГЕ), особенность которого заключается в том, что в отличие от других вирусных гепатитов (А, В, С и D) только ГЕ является зоонозом. Несмотря на то, что эта инфекция является эндемичной для стран с тропическим и субтропическим климатом, циркуляция вируса гепатита Е (ВГЕ) среди людей и животных регистрируются в различных регионах России, в том числе в Краснодарском крае [10,11].

Обезьяны являются важными лабораторными животными для изучения экспериментальной ВГЕ-инфекции. Многие виды обезьян, такие как шимпанзе, игрунки, макаки резусы, макаки яванские, макаки лапундеры и японские макаки восприимчивы к ВГЕ [10, 11, 62, 64, 130], однако в настоящее время в литературе имеется только две работы, посвященные выявлению разных генотипов ВГЕ у обезьян [130, 132].

На сегодняшний день выделение ВГЕ, циркулирующего среди обезьян, и его характеристика являются очень важными. Необходимо определить, вовлечены ли обезьяны в зоонозную передачу инфекции человека. Поэтому изучение естественного инфицирования низших обезьян Адлерского

питомника и импортированных животных вирусом гепатита Е, а также выделение РНК ВГЕ, представляется крайне актуальной задачей.

Таким образом, важность молекулярно-генетического изучения энтеральных вирусных гепатитов А и Е у обезьян представляет большой интерес. Прежде всего, это связано с тем, что на сегодняшний день в базе данных ОепБапк имеется только 20 последовательностей этих вирусов, выделенных от обезьян: 8 последовательностей ВГА и 12 последовательностей ВГЕ. Данные о выделяемых от обезьян штаммах ВГА и ВГЕ помогут в осуществлении надзора за этими инфекциями среди животных и людей, а также важны для моделирования этих инфекционных заболеваний человека на обезьянах при изучении нерешенных вопросов пато- и иммуногенеза, а также испытании лечебных и профилактических препаратов.

Автор выражает благодарность научному руководителю, доктору медицинских наук, главному научному сотруднику, заведующему лабораторией инфекционных вирусов ФГБНУ НИИ «Медицинской приматологии» Корзая Лидии Ивановне за оказанную помощь при работе с диссертацией. Научному консультанту, доктору биологических наук, профессору РАН, главному научному сотруднику Научно -исследовательского института молекулярной и персонализированной медицины ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Кюрегяну Карену Кареновичу за оказанную помощь при работе с диссертацией. Доктору медицинских наук, члену-корреспонденту РАН, главному научному сотруднику Научно -исследовательского института молекулярной и персонализированной медицины ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Михайлову Михаилу Ивановичу за содействие и помощь в организации исследований. Научному сотруднику Научно-исследовательского института молекулярной и персонализированной медицины ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного

профессионального образования» Карлсен Анастасии Андреевне за помощь в проведении отдельных этапов исследования. Директору ФГБНУ НИИ «Медицинской приматологии», доктору медицинских наук, члену-корреспонденту РАН Орлову Сергею Владимировичу за помощь в организации исследований.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящей работы было серологическое и молекулярно-генетическое изучение энтеральных вирусных гепатитов А и Е у обезьян Адлерского приматологического центра, а также у импортированных животных.

Задачи:

1. Определение частоты выявления серологических маркеров ВГА- и ВГЕ-инфекции (антитела классов IgG и IgM) у обезьян, родившихся в Адлерском приматологическом центре, а также среди животных, импортированных из Танзании, Республики Маврикий и Вьетнама в период содержания в карантине.

2. Анализ показателей реактивности позитивных по антителам к ВГА и ВГЕ сывороток от обезьян, в зависимости от их вида, группы и сроков обследования.

3. Выявление РНК ВГА и ВГЕ в фекальных образцах серопозитивных по IgM антителам обезьян и при скрининговом обследовании животных родившихся в Адлерском приматологическом центре, а также среди импортированных животных.

4. Секвенирование и филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей ВГА, выделенных от различных видов обезьян Адлерского питомника и зеленых мартышек вервет (СЫотосеЪт ру^етуХкти^)., импортированных из Танзании.

5. Секвенирование, филогенетический и филодинамический анализ нуклеотидных последовательностей ВГЕ, выделенных от макак яванских, импортированных из Вьетнама.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

1.Впервые на большом количестве обезьян охарактеризованы серологические и молекулярно-генетические маркеры ВГЕ у импортированных животных. Установлена широкая распространенность анамнестических антител к ВГА и ВГЕ у импортированных и содержащихся в питомнике обезьян, свидетельствующая об интенсивной циркуляции этих вирусов среди содержащихся в неволе обезьян.

2. Впервые выделен V генотип ВГА от импортированных зеленых мартышек вервет (Chlorocebus pygerythrus) из Танзании (4 геноизолята), а также от макаки яванской (Масаса fascicularis) из Адлерского питомника. Кроме того, было выделено два новых геноизолята от макак резусов (Macaca mulatta), рожденных в Адлерском приматологическом центре. Полученные результаты позволили расширить круг хозяев 5 генотипа ВГА и продемонстрировать значительное генетическое разнообразие данного генотипа вируса.

3. Впервые описан случай завоза ВГЕ генотипа 4 на неэндемичную территорию с импортированными обезьянами. Впервые показано, что макаки яванские (Масаса fascicularis) могут являться резервуаром ВГЕ генотипа 4, устойчивая циркуляция данного генотипа вируса среди этого вида обезьян подтверждена данными филогенетического анализа с временной шкалой.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Характеристика маркеров энтеральных вирусных гепатитов А и Е позволила оценить их распространенность среди обезьян Адлерского приматологического центра, а также у животных, импортированных в питомник. Полученные данные свидетельствуют о широкой распространенности этих вирусов у обезьян, содержащихся в питомнике, а также у импортируемых животных. Установлено, что заражение ВГА и ВГЕ у обезьян не сопровождается развитием клинически выраженного заболевания. Полученные данные имеют большое значение для

моделирования инфекционных заболеваний человека, для испытания на обезьянах лечебных и профилактических препаратов, а также для разработки профилактических мероприятий для защиты от инфицирования ВГА и ВГЕ сотрудников приматологических питомников.

Анализ нуклеотидных последовательностей вирусов энтеральных гепатитов позволил изучить генетическое разнообразие этих вирусов не только у обезьян Адлерского приматологического центра, но и у импортированных животных.

В процессе исследования нам впервые удалось выделить последовательности РНК ВГА у обезьян Адлерского приматологического центра, а также последовательности 4 генотипа ВГЕ среди макак яванских, поступивших из Вьетнама. Полученные штаммы могут быть применены для разработки модели ВГЕ человека на обезьянах.

В результате проведенной работы в GenBank были депонированы нуклеотидные последовательности 7 выделенных изолятов ВГА (участок VP1-2A) и 7 изолятов ВГЕ (участки ОРС1 и ОРС2).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Результаты сероэпидемиологического исследования свидетельствуют о широкой распространенности ВГА и ВГЕ среди обезьян, содержащихся в Адлерском приматологическом центре, также установлена возможность завоза новых штаммов этих вирусов с импортированными животными.

2. Данные филогенетического анализа РНК ВГА свидетельствуют о циркуляции генотипа V ВГА среди обезьян Адлерского приматологического центра и о значительном генетическом разнообразии ВГА в рамках данного генотипа. Выделение РНК ВГА не только от зеленых мартышек, но и от макак резусов и макак яванских указывает на более широкий, чем предполагалось ранее, спектр восприимчивых к данному генотипу ВГА видов обезьян.

3. Описан случай завоза ВГЕ генотипа 4 с импортированными из Вьетнама макаками яванскими.

4. Результаты филогенетического анализа с временной шкалой вместе с эпидемиологическими данными указывает на стабильную циркуляцию ВГЕ генотипа 4 среди макак яванских во Вьетнаме в течение нескольких лет, то есть свидетельствуют о том, что данный вид животных может являться резервуаром ВГЕ данного генотипа.

МЕТОДОЛОГИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена с использованием общенаучных и специальных методов исследования (молекулярно-генетические, биоинформационные методы). Молекулярно-генетические методы включали проведение ОТ-ПЦР и секвенирование полученных ампликонов. Биоинформационные методы заключались в выравнивании нуклеотидных последовательностей и проведении филогенетического и филодинамического анализа.

Основной объем исследований (сбор и обработка материала, иммуноферментный анализ и полимеразная цепная реакция) проведен автором самостоятельно. Очистку и секвенирование образцов; филогенетический и филодинамический анализ были проведены совместно с сотрудниками лаборатории вирусных гепатитов ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» (заведующий лабораторией вирусных гепатитов М.И. Михайлов, ведущий научный сотрудник лаборатории вирусных гепатитов К.К. Кюрегян, научный сотрудник лаборатории вирусных гепатитов Карлсен А.А.).

СТЕПЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ И АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

ИССЛЕДОВАНИЯ О достоверности результатов свидетельствует использование сертифицированных тест-систем для иммуноферментного анализа, реагентов для различных этапов полимеразной цепной реакции, очистки образцов и секвенирования, а также проведение филогенетического и филодинамического анализов. Большое число обследованных животных позволило корректно провести статистическую обработку полученных данных.

Результаты диссертационной работы были представлены в материалах второй международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты медицинской приматологии» (Сочи 2011г.), в материалах IV и VI Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням (Москва 2012 и 2014 гг.), на научно-практической конференции, посвященной 60-летию Института полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П. Чумакова РАМН (Москва 2015 г.), на III международной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты медицинской приматологии» (Сочи 8-10 августа 2016 г.), а также на международной научно-практической конференции «Молодые ученые в биологии и медицине» (Сочи 18-19 апреля 2019 год).

По теме диссертации опубликовано 5 научных статей, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ и 2 в зарубежных журналах, индексируемых в международных системах цитирования (библиографических базах - Web of Science, Scopus, PubMed); 9 публикаций в материалах научно-практических конференций.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ Диссертационная работа изложена на 119 страницах и состоит из введения, 2 глав обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка сокращений, 2 приложений и списка литературы. Список литературы включает 25

отечественных и 111 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 15 рисунками.

Представленная диссертация выполнена в соответствии с научно-исследовательским планом ФГБНУ «НИИ медицинской приматологии» и фрагменты вошли в содержание следующих тем, получивших номера регистрации:

1. 01.2.007.01.671. «Кишечные вирусы лабораторных приматов» (2011 - 2012).

2. 115033040022 «Молекулярно-генетическая характеристика кишечных вирусов, циркулирующих среди обезьян Адлерского приматологического центра» (2015-2017 гг.).

3. 0522-2018-0012 «Сравнительное изучение генотипов вируса гепатита А (ВГА), циркулирующих среди различных видов лабораторных приматов» (2018 - 2020 гг.).

Часть 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. ГЕПАТИТ А

1.1. Общая характеристика и таксономия гепатита А

Гепатит А (ГА) - широко распространенная, высококонтагиозная антропонозная вирусная инфекция, вызываемая вирусом гепатита А (ВГА), описанная многими авторами у людей [55, 89, 97, 104] и различных видов обезьян [1, 2, 3, 4, 9, 24, 31, 50, 73, 93, 108, 110, 123]. Вирус гепатита А - это небольшой икосаэдрический вирус, геном которого состоит из одноцепочечной РНК позитивной полярности. ВГА классифицирован в семейство Picornaviridae, порядка Picornavirales [72]. Семейство Picornaviridae включает важные патогены, классифицированные в 12 родов (рис.1) на основе генотипических и серологических характеристик. Отличия ВГА от других представителей семейства Picornoviridae заключаются в следующем:

1. Устойчивостью к высоким температурам (при температуре 60°С он полностью сохраняется в течение часа и лишь частично инактивируется за 10 - 12 часов), низким рН (на выживаемость ВГА не сказывается реакция среды в пределах рН 3,0 - 10,0) и лекарствам, которые инактивируют многие пикорнавирусы.

2. ВГА очень медленно и без цитопатического эффекта растет в клеточной культуре.

3. Длина участков нуклеотидных и аминокислотных последовательностей, кодирующих некоторые белки ВГА, отличается от других пикорновирусов.

4. Все генотипы ВГА принадлежат к одному серотипу [81].

Эти отличия позволили классифицировать ВГА в отдельный род Hepatovirus, в котором он до последнего времени являлся единственным представителем [71]. Однако недавно были описаны новые гепатовирусы, выделенные от тюленей и сурков [28, 135], а также

высокодиверсифицированные вирусы от летучих мышей, грызунов, ежей и землероек, которые составляют 13 новых видов гепатовирусов [51].

1шЕ

— PV-I Mahoney {|02281)

— CV-A2I Сое (D00538) ■CV-B5 I954_85_UK (Х67706)

— HRV-2 HGP (Х02316) —• Н RV-14 1059 (К02121)

-• EV-70J670_71 (D00820)

-• CV-A16 G10 (U05876)

-• BEV VG-5-27 (D00214)

—■ DPV TW90A (AY563023) - PEVB DPV VI 3 (AF40681 3) ■ SV2 2383 (AY064708) --PTV-I F65 (NC_0039B5)

>EMCVR(M8IB6I) -•TMEV GD7 (М20562) — SW sw-001 (DQ64I 257)

-■ ERBV-1 P1436_71 (X96871)

-• ERAV T3 (DQ268580)

-• FMDV AI0-6I (X00429)

-• BRV-2 EC-11 (EU236594)

„г-• AiV (ABO 10145)

- BKV U-1 (AB084788)

,jrHAVHM-l75 (M 14707) t HAV CF53_Berne (AY644676)

f SHAV AGM-27 (D00924) 1— 5

■SHAVCYI45 (M59286) • AEV Calnek (NC 003990) -• DHAV-1 d03 (DQ249299)

"E

■HPeV-l Harris (L0297I) •LV 87-012 (NC_003976)

Enterovirus

Sapelovirus

Teschovirus Cardiovirus Senecavirus Erbovirus

Aphtovirus Kobuvirus

Hepatovirus

Tremovirus Avihepatovirus

Parechorirus

0.700

Рис. 1. Филогенетические связи вируса гепатита А человека и обезьян с репрезентативными видами других родов семейства Picornaviridae [72].

Вирион ВГА представляет собой безоболочечную РНК-содержащую вирусную частицу 27 нм в диаметре [28, 54]. Капсид ВГА имеет икосаэдрическую симметрию и состоит из 60 субъединиц. Зрелые вирионы имеют плавучую плотность в СбС1 1,32 - 1,34 г/см3 и константу седиментации в растворе сахарозы около 156 - 160 Б. Кроме того, встречаются и дефектные вирионы, не содержащие РНК и имеющие более низкую плотность (1,27 г/см3 в СбС1) и константу седиментации (70 Б - 80Б). Также существуют незрелые или дефектные вирусные частицы, окруженные предшественником капсидного белка, которые обнаруживаются в большом количестве на ранних этапах инфекции [36, 112].

РНК ВГА состоит примерно из 7500 нуклеотидов (нт) (рис. 2) [28, 34, 44, 112]. Подобно геному всех пикорновирусов, геном ВГА представляет собой одноцепочечную РНК положительной полярности, которая разделена на 3 части: относительно длинную некэпированную 5НКО (некодируемая

область), к которой ковалентно присоединен белок VPg (вирус-кодируемый белок); единственную рамку считывания, которая кодирует полипротеин длиной 2227 аминокислот и который протеолитически расщепляется на структурные и неструктурные вирусные белки; короткую 3лНКО, которая состоит из 63 нуклеотидов, после которой идет полиаденилированный конец переменной длины (40-80 нуклеотидов) [44, 46, 100].

proteins replication proteins

Рис.2. Организация генома ВГА [69] Нуклеотидная последовательность генома ВГА начинается с 5лконца двумя остатками уридина, типичными для пикорновирусов. 5НКО составляет примерно 729-749 нуклеотидов в длину и среди всех штаммов ВГА является наиболее консервативной [39, 111]. Далее идет область генома, кодирующая полипротеин, который расщепляется протеолитически на два сегмента P1-2A и 2BCP3. Сегмент P1-2A состоит из 4 структурных полипептидов: VP4 (1A), VP2 (1B), VP3 (1C) и VP1 (1D), причем VP1 является самым большим. Эти белки содержат по 23, 222, 246 и 274 аминокислот, соответственно (табл. 1) [43, 57, 82]. В то время как VP2, VP3 и VP1 являются капсидными белками, VP4 никогда не был экспериментально определен как часть капсида ВГА. Неструктурный белок 2А ВГА не обладает функцией первичного расщепления, характерной для белков 2А большинства других пикорновирусов и не задействован в репликации генома, а участвует в сборке его капсида [56, 81].

Неструктурные белки, полученные из сегмента 2BC-P3 полипротеина, вероятно, все участвуют в вирусной репликации. Белки 2B и 2C участвуют в закреплении вируса на клеточной мембране, что необходимо для его сборки и репликации [121]. Среди неструктурных белков P3 белок 3D

предположительно является РНК-зависимой РНК-полимеразой, хотя прямых доказательств этому нет [26, 133].

Таблица 1. Структурные и неструктурные белки ВГА

Вирусный Число Функции Свойства

белок аминокислот

VP4 (1А) 21-23 Капсидный белок Найден как предшественник 1АВ у незрелых частиц. Присутствие в зрелых частицах не подтверждено.

VP2 (1В) 222 Капсидный белок Предшественник 1В

VP3 (1С) 246 Капсидный белок Способствует основному антигенному сайту нейтрализации

VP1 (1Б) 272-274 Капсидный белок Гетерогенный С-конец; также обнаружен как предшественник Ш-2А у незрелых частиц.

2А 71 Участвует в сборке капсида Предшественник Р1-2А и Ш-2А.

2В 251 Закрепление на клеточной мембране для вирусной репликации Предшественник 2ВС.

2С 335 Активация НТФазы и хеликазы Предшественник 2ВС.

ЗА 74 Мембранный якорь для белка 3В 3АВС-предшественник, ассоциирующийся с митохондриальными мембранами.

ЗВ (VPg) 23 Инициация РНК репликации Ковалентно связан с 5Л концом генома.

ЗС 219 Химотрипсин подобная цистеиновая протеаза Расщепляет все белковые соединения, за исключением 1Б/2А и 1А/1В, 3АВС и предшественников 3СБ.

3Б 489 РНК-зависимая РНК-полимераза Катализирует репликацию РНК вируса.

Белок 3С представляет собой химотрипсин подобную цистеиновую протеазу, которая является единственной протеазой ВГА и отвечает за все события посттрансляционного расщепления внутри полипептида ВГА, за исключением тех, которые находятся на границах VP4/VP2 и VP1-2A [46]. Кроме того, Р3 также генерирует белок 3В (VPg), который прикреплен к 5Лконцу как положительных, так и отрицательных цепей РНК. После открытой рамки считывания, кодирующей полипротеин, располагается 3НКО - которая менее изучена, чем 5НКО, однако известно, что ее последовательность значительно различается между штаммами ВГА (до 20%) [48].

Весь жизненный цикл ВГА происходит в цитоплазме клетки. Было показано, что ВГА связывается с широким спектром культивируемых клеток, включая непермиссивные. Зрелые вирионы проникают в клетку относительно быстро кальций-зависимым способом, но декапсидация происходит относительно медленно с высвобождением вирусной РНК в цитоплазму примерно через 4 часа после заражения [33]. Репликация генома ВГА, по-видимому, происходит в трубчато-визикулярной мембранной сети, специфически перегруппированной из цитозольных мембран белками 2В и 2С или 2ВС в ВГА-инфицированных клетках, как и у других пикорновирусов [56, 121]. Упаковывается РНК уже в сформированные капсиды, которые образуются белками УР1, VP2, VP3 и У4. Выход зрелого вириона из цитоплазмы происходит при лизисе клетки [36, 37]. 1.2. Серологические маркеры ВГА-инфекции обезьян

Лабораторная диагностика ВГА проводится серологическим и молекулярно-биологическим методами исследования. Серологическим методом в сыворотке крови определяют наличие иммуноглобулинов классов М и G к вирусу гепатита А (апй-НАУ ^М и адй-НАУ IgG), а также Ag-ВГА в фекальных образцах. Молекулярно-биологическим методом в сыворотке крови или фекальных образцах определяют наличие РНК вируса гепатита А.

Диагноз "острый гепатит А" (ОГА) устанавливается при выявлении в сыворотке крови пациента с подозрением на гепатит А иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А (адй-НАУ ^М) или РНК ВГА (табл. 2) [23].

Таблица 2. Соответствие серологических маркеров НАУ иммунному статусу обследуемого [24]

Серологические маркеры НАУ Иммунный статус

апй-ИАУ ^М ОГА

апй-ИАУ ^М ± anti-HAV ДО Недавно перенесённый гепатит А

Отсутствие апй-НАУ ^М и anti-HAV ^О Отсутствие иммунитета к HAV

anti-HAV ДО Иммунитет к НАУ

РНК НАУ ОГА

В 50-60-е годы появились первые данные о вспышках ВГА-инфекции среди шимпанзе и заражении обслуживающего персонала, работающего с ними. Эти вспышки стали первым доказательством того, что люди и обезьяны могут инфицировать друг друга ВГА. Первоначально эти инфекции были описаны как «инфекционный гепатит», позже, ретроспективно было показано, что эти вспышки были вызваны ВГА, распространенным среди детенышей шимпанзе и инфекционным для людей [61, 91, 107, 108, 109].

В 80-е годы, после разработки ИФА-тестов для выявления анти-ВГА, было показано, что у многих обезьян Старого Света имеются антитела к ВГА. Также были описаны вспышки среди низших обезьян Старого Света, пойманных в местах естественного обитания. По течению инфекции они напоминали вспышки среди шимпанзе, однако случаев заболевания гепатитом А среди обслуживающего персонала зарегистрировано не было [41, 45, 108, 115]. Впоследствии было показано, что во многих приматологических центрах мира среди большинства видов обезьян Старого и Нового света наблюдается высокая частота распространения анти-ВГА (табл.3,4) [7, 50, 69, 73, 101, 108].

Как видно из табл. 3 и 4, все виды человекообразных и низших обезьян Старого Света восприимчивы к ВГА. Позитивные особи наблюдались как среди животных, постоянно содержащихся в неволе, так и среди диких и импортированных обезьян. Анти-ВГА не были обнаружены только среди БРБ животных.

Таблица 3. Частота выявления маркеров ВГА-инфекции среди различных видов человекообразных обезьян к ВГА.

^Маркеры ВГА IgG (%) Источник

Виды обезьян ^

Шимпанзе 20/30 (67) Kalter 1997 [69]

Pan troglodytes 14/24 (58)* Purcell 2001 [101]

0/127 (0) Purcell 2001 [101]

138/276 (50) Purcell 2001 [101]

Горилла Gorilla gorilla 6/18 (33) Kalter 1997 [69]

Орангутан 3/11 (27) Kalter 1997 [69]

Pongo pygmaeus

Гиббон 4/8 (50) Kalter 1997 [69]

Hylobates 1/3 (33) Purcell 2001 [101]

* обитающие в естественных условиях

Среди человекообразных обезьян частота распространения 1§0-антител варьировала от 27 до 67%. Среди низших обезьян Старого Света этот показатель находился в пределах от 7 до 98%. Наиболее высокой (более 80%) частота распространения анти-ВГА наблюдалась среди макак резусов, макак яванских, зеленых мартышек и павианов анубисов.

Кроме того, у многих видов макак, павианов и зеленых мартышек были обнаружены анти-ВГА класса 1§М, свидетельствующие о текущей или недавно перенесенной инфекции. Наиболее высокой (78%) частота распространения анти-ВГА наблюдалась среди импортированных

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Догадов Дмитрий Игоревич, 2020 год

- 51 с.

16.Лапин Б.А. Проблемы инфекционной патологии обезьян. / Б.А. Лапин, Э.К. Джикидзе, Р.И. Крылова - М.: РАМН, 2004. - 140 с.

17.Михайлов М.И. Вирус гепатита Е птиц / М.И. Михайлов, К.К. Кюрегян, К.Н. Груздева // Мир вирусных гепатитов 2005. - №10. - С. 8 - 11

18.Михайлов М.И. Вирусный гепатит Е. Проблемы изучения / М.И. Михайлов, Н.А. Замятина, В.Ф. Полещук // Вопросы вирусологии 2005.

- № 3. - С. 20-22

19. Михайлов М.И. Случай завоза вируса гепатита Е 4 генотипа в Россию / М.И. Михайлов, Е.Ю. Малинникова, К.К. Кюрегян, О.В. Исаева // ЖМЭИ 2016. - № 3. - С. 64-69.

20. Пакторис Е.Л. Заболеваемость эпидемическим гепатитом и его исходы у беременных / Е.Л. Пакторис // Труды 8-го Республиканского съезда медработников Киргизской ССР. - Фрунзе, 1959. - С. 126 - 133.

21.Полещук В.Ф. Моделирование гепатита А и энтерально передающгося гепатита ни А ни В (гепатит Е) на тамаринах (За^пш шуБ1ах) / В.Ф. Полищук, М.С. Балаян, А.Г. Анджапаридзе, А.В. Соболь, В.П. Докин, Т.В. Гуляева, И.П. Титова // Вопросы вирусологии 1990. - № 5. - С. 379

- 382

22. Полещук В.Ф. Приматные модели вирусных гепатитов человека / В.Ф. Полещук, М.И. Михайлов, Н.А. Замятина // Вопросы вирусологии 2006.

- № 4. - С. 6 - 13

23. Сокурова А.М. Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов / А.М. Сокурова // Педиатр - 2014. - №3. - С. 96 - 100

24.Шевцова З.В. Вспышка гепатита А у импортированных макак резусов / З.В. Шевцова, Л.И. Корзая, И.В. Ломовская, Н.В. Дорошенко, Г.К. Заиров // Вопросы вирусологии 1989. - № 3. - С. 346-351

25.Шевцова З.В. Спонтанный гепатит А со смертельным исходом у макак резусов / З.В. Шевцова, Р.И. Крылова, Е.Г. Белова, Л.И. Корзая, А.Г. Анджапаридзе // Вопросы вирусологии 1987. - № 6. - С. 686-690

26. Allaire M. Picornaviral 3C cysteine proteinases have a fold similar to chymotrypsin-like serine proteinases / M. Allaire, M.M. Chernaia, B.A. Malcolm, M.N. James // Nature 1994. - V. 369 - Issue 6475 - P. 72-76.

27.Anthony S.J. Discovery of a Novel Hepatovirus (Phopivirus of Seals) Related to Human Hepatitis A Virus / S.J. Anthony, J.A. St. Leger, E. Liang, A.L. Hicks, M.D. Sanchez-Leon, K. Jain, J.H. Lefkowitch, I. Navarrete-Macias, N. Knowles, T. Goldstein, K. Pugliares, H.S. Ip, T. Rowles, W.I. Lipkin // mBio. - 2015. - V. 6 - Issue 1 - P. 11

28.Arankalle V. A. Simian hepatitis A virus derived from a captive rhesus monkey in India is similar to the strain isolated from wild African green monkeys in Kenya / V.A. Arankalle and J. Ramakrishnan // J. Viral. Hepat. -2009. - V. 16 - Issue 3 - P. 214 - 218

29.Balayan M.S. Brief report: experimental hepatitis E infection in domestic pigs / M.S. Balayan, R.K. Usmanov, D.I. Zamyatina, F.R. Karas // J. Med. Virol. - 1990. - V. - 32 Issue 1 - P. 58-59

30.Balayan M.S. Evidence for a virus in non-A, non-B hepatitis transmitted via the fecal-oral route / M.S. Balayan, A.G. Andjaparidze, S.S. Savinskaya, E.S. Ketiladze, D.M. Braginsky, A.P. Savinov, V.F. Poleschuk // Intervirology -1983. - V.20 - Issue 1 - P. 23 - 31

31.Balayan M.S. Natural hosts of hepatitis A virus / M.S. Balayan // Vaccine. -1992. - V.10 - Issue 1 - P. S27-31

32. Balayan M.S. Variations in genome fragments coding for RNA polymerase in human and simian hepatitis A viruses / M.S. Balayan, Yu.Yu. Kusov, A.G.

Andjaparidze, S.A. Tsarev, E.D. Sverdlov, V.E. Chizhikov, V.M. Blinov, S.K. Vasilenko // FEBS Lett 1989; V. 247 - Issue 2 - P. 425 - 428.

33.Batts W. A novel member of the family Hepeviridae from cutthroat trout (Oncorhynchus clarkii) / W. Batts, S. Yun, R. Hedrick, J. Winton // Virus Res. - 2011. - V. 158 - Issue 1-2 - P. 116-123.

34.Bennett A.J. Naturally Circulating Hepatitis A Virus in Olive Baboons, Uganda / A.J. Bennett, S.D. Sibley, M. Lauck, G. Weny, D. Hyeroba, A. Tumukunde, T.C. Friedrich, D.H. O'Connor, C.A. Johnson, J.M. Rothman, T.L. Goldberg // Emerg. Infect. Dis. - 2016. - V. 22 - Issue 7 - P. 13081310.

35.Berto A. Hepatitis E in southern Vietnam: Seroepidemiology in humans and molecular epidemiology in pigs / A. Berto, H.A. Pham, T.T.N. Thao, N.H.T. Vy, S.L. Caddy, R. Hiraide, N.T. Tue, I. Goodfellow, J.J. Carrique-Mas, G.E. Thwaites, S. Baker, M.F. Boni, VIZIONS consortium // Zoonoses Public Health. - 2018. - V. 65 - Issue 1 - P. 43 - 50.

36. Bishop N.E. RNA-dependent cleavage of VP0 capsid protein in provirions of hepatitis A virus / N.E. Bishop, D.A. Anderson // Virology - 1993. - V. 197 - Issue 2 - P. 616-623.

37.Borovec S.V. Synthesis and assembly of hepatitis A virusspecific proteins in BS-C-1 cells / S.V. Borovec, D.A. Anderson // J. Virol. - 1993. - V. 67 -Issue 6 - P. 3095-3102.

38.Bose M. Molecular epidemiology of hepatitis A virus infection in Northeast India / M. Bose, S. Bose, A. Saikia, S. Medhi, M. Deka // J. Med. Virol. -2015. - V. 87 - Issue 7. - P. 1218-1224.

39.Bradley D.W. Enterically-transmitted non-A, non-B hepatitis / D.W. Bradley // Br. Med. Bull. - 1990. - V. 46 - Issue 2 - P. 442-61.

40. Brown E.A. The 5 nontranslated region of hepatitis A virus RNA: secondary structure and elements required for translation in vitro / E.A. Brown, S.P. Day, R.W. Jansen, S.M. Lemon // J. Virol. - 1991. - V. 65 - Issue 11 - P. 5828-5838

41. Burke D.S. Hepatitis A virus in primates outside captivity / D.S. Burke, R.R. Graham, G.B. Heisey // Lancet - 1981. - V. 2 - Issue 8252 - P. 928.

42. Casas M. Retrospective serological study on hepatitis E infection in pigs from 1985 to 1997 in Spain / M. Casas, J. Pujols, R. Rosell, N. de Deus, B. Peralta, S. Pina, J. Casal, M. Martín // Vet. Microbiol. - 2009. - V. 135 -Issue 3-4 - P. 248-252.

43. Cohen J.I. Complete nucleotide sequence of wild-type hepatitis A virus: comparison with different strains of hepatitis A virus and other picornaviruses / J.I. Cohen, J.R. Ticehurst, R.H. Purcell, A. Buckler-White, B.M. Baroudy // J. Virol. - 1987. - V. 61 - Issue 1 - P. 50-59.

44.Costa-Mattioli M. Genetic variability of hepatitis A virus / M. Costa-Mattioli,

A. Di Napoli, V. Ferre, S. Billaudel, R. Perez-Bercoff, J. Cristina // J. Gen. Virol. - 2003. - V. 84 - Issue 12 - P. 3191-3201.

45. Coursaget R. Hepatitis A virus in primates outside captivity / R. Coursaget,

B. Levesque, E. Gretillat, M. Eyraud, L. Ferrara, M. Germain // Lancet -1981. V. 2 - Issue 8252 - P. 928 - 929.

46.Cristina J. Genetic variability and molecular evolution of hepatitis A virus / J. Cristina, M. Costa-Mattioli // Virus Res. - 2007. - V. 127 - Issue 2 - P. 127157.

47. de Carvalho L.G. Infection by Brazilian and Dutch swine hepatitis E virus strains induces haematological changes in Macaca fascicularis / L.G. de Carvalho, R.S. Marchevsky, D.R. dos Santos, J.M. de Oliveira, V.S. de Paula, L.M. Lopes, W.H. Van der Poel, J.E. González, M.S. Munné, J. Moran, A.C. Cajaraville, M. Pelajo-Machado, O.G. Cruz, M.A. Pinto // BMC Infect Dis. -2013. - V. 13 - Issue 495 - P. 1 - 11

48. Dollenmaier G, Weitz M. Interaction of glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase with secondary and tertiary RNA structural elements of the hepatitis A virus 3' translated and nontranslated regions / G. Dollenmaier, M. Weitz // J. Gen. Virol. - 2003. - V. 84 - Issue 2 - P. 403-414.

49.Doerr H.W. Medizinische virologie / H.W. Doerr, W.H. Gerlich - Stuttgart: Thieme, 2002. - 440 pp.

50.Drewe J.A. Survey of infections transmissible between baboons and humans, Cape Town, South Africa / J.A. Drewe, M.J. O'Riain, E. Beamish, H. Currie, S. Parsons // Emerg. Infect. Dis. - 2012. - V. 18 - Issue 2 - P. 298-301.

51.Drexler J.F. The Hepatovirus Ecology Consortium. Evolutionary origins of hepatitis A virus in small mammals / J.F. Drexler, V.M. Corman, A.N. Lukashev, J.M.A. van den Brand, A.P. Gmyl, S. Brünink, A. Rasche, N. Seggewiß, H. Feng, L.M. Leijten, P. Vallo, T. Kuiken, A. Dotzauer, R.J. Ulrich, S.M. Lemon, C. Drosten // PNAS. - 2015. -V. 112 - Issue 49 - P. 15190-15195.

52.Drobeniuc J. Hepatitis E virus antibody prevalence among persons who work with swine / J. Drobeniuc, M.O. Favorov, C.N. Shapiro, B.P. Bell, E.E. Mast, A. Dadu, D. Culver, P. Iarovoi, B.H. Robertson, H.S. Margolis // J. Infect. Dis. - 2001. - V. 184 - Issue 12 - P. 1594-1597.

53.Emerson S.U. A simian strain of hepatitis A virus, AGM-27, functions as an attenuated vaccine for chimpanzees / S.U. Emerson, S.A. Tsarev, S. Govindarajan, M. Shapiro, R.H. Purcell // J. Infect. Dis. - 1996. - V.173 -Issue 3 - P. 592 - 597.

54.Feinstone S.M. Hepatitis A: detection by immune electron microscopy of a virus like antigen associated with acute illness / S.M. Feinstone, A.Z. Kapikian, R.H. Purcell // Science - 1973. - V. 182 - Issue 4116 - P. 10261028.

55.Gargouri S. Epidemiological and clinical analysis of hepatitis virus A infections during three successive outbreaks in Sfax (Tunisia) between 2007 and 2010 / S. Gargouri, L.F. Berrajah, I. Ayadi, E. Messedi, H. Jallouli, A. Hammami, H. Karray-Hakim // Med. Sante. Trop. - 2016. - V. 26 - Issue 2 -P. 159-164.

56. Gosert R. A cytopathic and a cell culture adapted hepatitis A virus strain differ in cell killing but not in intracellular membrane rearrangements / R.

Gosert, D. Egger, K. Bienz // Virology - 2000. - V. 266 - Issue 1 - P. 157169.

57. Graff J. Hepatitis A virus capsid protein VP1 has a heterogeneous C terminus / J. Graff, O.C. Richards, K.M. Swiderek, M.T. Davis, F. Rusnak, S.A. Harmon, X.Y. Jia, D.F. Summers, E. Ehrenfeld // J. Virol. - 1999. - V. 73 - Issue 3 - P. 6015-6023.

58. Gust I. D. The origin of the HM175 strain of hepatitis A virus / I.D. Gust, N.I. Lehmann, S. Crowe, M. McCrorie, S.A. Locarnini, C.R. Lucas // J. Infect. Dis. - 1985. - V. 151 - Issue 2 - P. 365-367.

59.Guu T.S.Y. Structure of the hepatitis E virus-like particle suggests mechanisms for virus assembly and receptor binding / T.S.Y. Guu, Z. Liub, Q. Ye, D.A. Mata, K. Li, C. Yin, J. Zhang, Y.J. Tao // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 2009. - V. 106 - Issue 31 - P. 12992-7.

60.Haqshenas G. Genetic identification and characterization of a novel virus related to human hepatitis E virus from chickens with hepatitis-splenomegaly syndrome in the United States / G. Haqshenas, H.L. Shivaprasad, P.R. Woolcock, D.H. Read, X.J. Meng // J. Gen. Virol. - 2001. - V. 82 - Issue 10

- P. 2449-2462.

61. Hillis W.D. An outbreak of infectious hepatitis among chimpanzee handlers at a United States Air Force base / W.D. Hillis // Am. J. Hyg. - 1961. - Issue 73 - P. 316 - 328.

62.Hirano M. Evidence for widespread infection of hepatitis E virus among wild rats in Japan / M. Hirano, X. Ding, T.C. Li, N. Takeda, H. Kawabata, N. Koizumi, T. Kadosaka, I. Goto, T. Masuzawa, M. Nakamura, K. Taira, T. Kuroki, T. Tanikawa, H. Watanabe, K. Abe // Hepatol. Res. - 2003. - V. 27

- Issue 1 - P. 1-5.

63. Hoofnagle J.H. Hepatitis E. / J.H. Hoofnagle, K.E. Nelson, R.H. Purcell // N. Engl. J. Med. - 2012. - V.367 - Issue 13 - P. 1237 - 44.

64.Huang F. Seroepidemiology and Molecular Characterization of Hepatitis E Virus in Macaca Mulatta from a Village in Yunnan, China, where Infection

with this Virus Is Endemic / F. Huang, W. Yu, X. Hua, S. Jing, W. Zeng, Z. He // Hepat. Mon. - 2011. - V. 11 - Issue 9 - P. 745 - 749.

65.Huang F.F. Determination and analysis of the complete genomic sequence of avian hepatitis E virus (avian HEV) and attempts to infect rhesus monkeys with avian HEV / F.F. Huang, Z. F. Sun, S. U. Emerson, R. H. Purcell // J. Gen. Virol. - 2004. - V. 85 - Issue 6 - P. 1609-1618.

66. Jansen R. W. Molecular epidemiology of human hepatitis A virus defined by an antigencapture polymerase chain reaction method / R.W. Jansen, G. Siegl, S.M. Lemon // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1990. - V. 87 - Issue 8 - P. 2867-2871.

67. Jeblaoui A. Genotype 4 hepatitis E virus in France: an autochthonous infection with a more severe presentation / A. Jeblaoui, S. Haim-Boukobza, E. Marchadier, C. Mokhtari, A. Roque-Afonso // Clin. Infect. Dis. - 2013. -V. 57 - Issue 4 - P. 122-126.

68. Johne R. Detection of a novel hepatitis E-like virus in faeces of wild rats using a nested broad-spectrum RT-PCR / R. Johne, A. Plenge-Bonig, M. Hess, R.G. Ulrich, J. Reetz, A. Schielke // J. Gen. Virol. - 2009. - V. 91 -Issue 3 - P. 750-758.

69.Kalter S.S. Viral infections of nonhuman primates / S.S. Kalter, R.L. Heberling, A.W. Cooke // Lab. Anim. Sci. - 1997. - V. 47 - Issue 5 - P. 461 - 468.

70. Kanai Y. Hepatitis E virus in Norway rats (Rattus norvegicus) captured around pig farm / Y. Kanai, S. Miyasaka, S. Uyama, S. Kawami, Y. Kato-Mori, M. Tsujikawa, M. Yunoki, S. Nishiyama, K. Ikuta, K. Hagiwara // BMC Res. Notes - 2012. - V.5 - Issue 4 - P. 1 - 15

71.Khanna B. Characterization of a genetic variant of human hepatitis A virus / B. Khanna, J.E. Spelbring, B.L. Innis, B.H. Robertson // J. Med. Virol. -1992. - V. 36 - Issue 2 - P. 118-124

72.Knipe M.D. Fields Virology / M.D. Knipe, M.P. Howley - Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2013. - 2456 pp.

73.Korzaya L.I. Spontaneous and experimental hepatitis A in Old World monkeys are the models of human hepatitis A / L.I. Korzaya, B.A. Lapin, Z.V. Shevtsova, R.I. Krilova // Baltic J. Lab. Animal. Sci. - 2001. - Issue 11

- P. 135-141.

74.Lapa D. Epidemiology of Hepatitis E Virus in European Countries / D. Lapa, M.R. Capobianchi, A.R. Garbuglia // Int. J. Mol. Sci. - 2015. - V. 16 - Issue 10 - P. 25711-25743

75.Lapin B.A. An enzootic outbreak of acute disease associated with pathogenic E. coli in Adler monkey colony / B.A. Lapin, L.A. Yakovleva, E.K. Dzhikidze, T.E. Gvozdik, A.A. Agumava, Z.K. Stasilevich, I.G. Danilova // J. Med. Primatol. - 2015 - V.44 - Issue 6 - P. 355-363

76.Lemon S.M. Transmission of hepatitis A virus among recently captured Panamanian owl monkeys / S.M. Lemon, J.W. LeDuc, L.N. Binn, A. Escajadillo, K.G. Ishak // J. Med. Virol. - 1982. - V.10 - Issue 1 - P. 25-36

77. Li T.C. Hepatitis E virus transmission from wild boar meat / T.C. Li, K. Chijiwa, N. Sera, T. Ishibashi, Y. Etoh, Y. Shinohara, Y. Kurata, M. Ishida, S. Sakamoto, N. Takeda, T. Miyamura // Emerg. Infect. Dis. - 2005. - V. 11 -Issue 12 - P. 1958-1960

78. Longer C.F. Experimental hepatitis E: pathogenesis in cynomolgus macaques (Macaca fascicularis) / C.F. Longer, S.L. Denny, J.D. Caudill, T.A. Miele, L.V. Asher, K.S. Myint, C.C. Huang, W.F. Engler, J.W. LeDuc, L.N. Binn, J.R. Ticehurst // J. Infect. Dis. - 1993. - V. 168 - Issue 3 - P. 602-609

79.Lu L. Characterization of the complete genomic sequence of genotype II hepatitis A virus (CF53/Berne isolate) / L. Lu, K.Z. Ching, V.S. de Paula, T. Nakano, G. Siegl, M. Weitz, B.H. Robertson // J. Gen. Virol. - 2004. - V. 85

- Issue 10 - P. 2943-2952

80.Lu L. Complete sequence of a Kyrgyzstan swine hepatitis E virus (HEV) isolated from a piglet thought to be experimentally infected with human HEV / L. Lu, J. Drobeniuc, N. Kobylnikov, R.K. Usmanov, B.H. Robertson, M.O.

Favorov, H.S. Margolis // J. Med. Virol. 2004. - V. 74 - Issue 4 - P. 556562

81. Martin A. Hepatitis A virus: from discovery to vaccines / A. Martin, S.M. Lemon // Hepatology - 2006. - V. 43 - Issue 1 - P. S164-S172

82. Martin A. Maturation of the hepatitis A virus capsid protein VP1 is not dependent on processing by the 3Cpro proteinase / Martin A, Benichou D, Chao SF, Cohen LM, Lemon SM // J. Virol. - 1999. - V. 73 - Issue 8 P. 6220-6227

83. Masuda J. Acute hepatitis E of a man who consumed wild boar meat prior to the onset of illness in Nagasaki, Japan / J. Masuda, K. Yano, Y. Tamada, Y. Takii, M. Ito, K. Omagari, S. Kohno // Hepatol. Res. - 2005. - V. 31 -Issue 3 - P. 178-183

84. Matsuda H. Severe hepatitis E virus infection after ingestion of uncooked liver from a wild boar / H. Matsuda, K. Okada, K. Takahashi, S. Mishiro // J. Infect. Dis. - 2003. - V. 188 - Issue 6 - P. 944.

85.Meng X.J. A novel virus in swine is closely related to the human hepatitis E virus / R.H. Purcell, P.G. Halbur, J.R. Lehman, D.M. Webb, T.S. Tsareva, J.S. Haynes, B.J. Thacker, S.U. Emerson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1997. - V. 94 - Issue 18 - 9860-9865.

86.Meng X.J. Genetic and experimental evidence for cross-species infection by swine hepatitis E virus / X. J. Meng, P.G. Halbur, M.S. Shapiro, S. Govindarajan, J.D. Bruna, I.K. Mushahwar, R.H. Purcell, S.U. Emerson // J. Virol. - 1998. - V.72 - Issue 12 - P. 9714-9721.

87.Meng X.J. Hepatitis E virus: animal reservoirs and zoonotic risk / X.J. Meng // Vet. Microbiol. - 2010. - V. 140 - Issue 3-4 - P. 256 - 265.

88.Meng X.J. Swine hepatitis E virus: cross-species infection and risk in xenotransplantation / X.J. Meng // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 2003. -V. 278 - P. - 185-216.

89.Michaelis K. Hepatitis A virus infections and outbreaks in asylum seekers arriving in Germany, September 2015 to March 2016 / K. Michaelis, J.J.

Wenzel, K. Stark, M. Faber // Emerg. Microbes. Infect. - 2017. - V. 6 -Issue 4 - P. 1-8.

90. Michitaka K. Prevalence of hepatitis E virus among wild boar in the Ehime area of western Japan / K. Michitaka, K. Takahashi, S. Furukawa, G. Inoue, Y. Hiasa, N. Horiike, M. Onji, N. Abe, S. Mishiro // Hepatol. Res. - 2007. -V. 37 - Issue 3 - P. 214-220.

91. Mosely J.W. Chimpanzee-associated hepatitis: an outbreak in Oklahoma / J.W. Mosely, H.P. Reinhardt, F.R. Hassler // JAMA 1967. - V. 199 - Issue 10 - P. 105 - 107.

92. Mushahwar I.K. Hepatitis E Virus: Molecular Virology, Clinical Features, Diagnosis, Transmission, Epidemiology, and Prevention / Mushahwar I.K. // J. Med. Virol. - 2008. - V. 80 - Issue 4 - P. 646-658.

93.Nainan O.V. Sequence analysis of a new hepatitis A virus naturally infecting cynomolgus macaques (Macaca fascicularis) / O.V. Nainan, H.S. Margolis, B.H. Robertson, M. Balayan and M.A. Brinton // J. Gen. Virol. - 1991. - V. 72. - Issue 7 - P. 1685-1689.

94. Nakamura S. Epidemiology of hepatitis E virus in indoor-captive cynomolgus monkey colony / S. Nakamura, H. Tsuchiya, N. Okahara, T. Nakagawa, N. Ohara, H. Yamamoto, T.C. Li, N. Takeda, K. Ogasawara, R. Torii // J. Vet. Med. Sci. - 2012. - V. 74 - Issue 3 - P. 279-83.

95.Nakamura M. Hepatitis E virus infection in wild mongooses of Okinawa, Japan: demonstration of anti-HEV antibodies and a full-genome nucleotide sequence / M. Nakamura, K. Takahashi, K. Taira, M. Taira, A. Ohno, H. Sakugawa, M. Arai, S. Mishiro // Hepatol. Res. - 2006. - V. 34 - Issue 3 - P. 137-140.

96.Nan Y. Molecular Biology and Infection of Hepatitis E Virus / Y. Nan, Y.J. Zhang // Front. Microbiol. - 2016 - V. 7 - Issue 1419 - P. 1 - 21

97.Pal S. An outbreak of hepatitis A virus among children in a flood rescue camp: A post-disaster catastrophe / S. Pal, D. Juyal, M. Sharma, S. Kotian, V.

Negi, N. Sharma // Indian J. Med. Microbiol. - 2016. - V. 34 - Issue 2 - P. 233-236.

98.Pavio N. Zoonotic hepatitis E: animal reservoirs and emerging risks / N. Pavio, X.J. Meng, C. Renou // Veterinary Research. - 2010. - V. 41 - Issue 46 - P. 1 - 20

99.Payne C.J. Sequence data suggests big liver and spleen disease virus (BLSV) is genetically related to hepatitis E virus / T.M. Ellis, S.L. Plant, A.R. Gregory, G.E. Wilcox // Vet. Microbiol. - 1999. - V. 68 - Issue 1-2 - P. 119-125.

100. Pina S. Genetic analysis of hepatitis A virus strains recovered from the environment and from patients with acute hepatitis / S. Pina, M. Buti, R. Jardi, P. Clemente-Casares, J. Jofre, R. Girones // J. Gen. Virol. - 2001. - V. 82 - Issue 12 - P. 2955-2963.

101. Purcell R.H. Animal models of hepatitis A and E / R.H. Purcell, S.U. Emerson // ILAR J. 2001. - V. 42 - Issue 2 - P. 161-77

102. Purcell R.H. Hepatitis E Virus in Rats, Los Angeles, California, USA / R.H. Purcell, R.E. Engle, M.P. Rood, Y. Kabrane-Lazizi, H.T. Nguyen, S. Govindarajan, M. St Claire, S.U. Emerson // Emerg. Infect. Dis. - 2011. - V. 17 - Issue 12 - P. 2216 - 2222

103. Purdy M.A. Evolutionary History and Population Dynamics of Hepatitis E Virus / M.A. Purdy, Y.E. Khudyakov // PLoS ONE - 2010. - V. 5 - Issue 12 - P. 1 - 9

104. Raveendran S. Investigation of an Outbreak of Hepatitis A in a Coastal Area, Kerala, Southern India / S. Raveendran, P.S. Rakesh, S. Dev, N. Vijayakumar, P. Prasannakumar // J. Prim. Care. Community Health 2016. - V. 7 - Issue 4 - P. 288-290

105. Raychaudhuri G, Govindarajan S, Shapiro M, Purcell RH, Emerson SU. Utilization of Chimeras between Human (HM-175) and Simian (AGM-27) Strains of Hepatitis A Virus To Study the Molecular Basis of Virulence /

Raychaudhuri G, Govindarajan S, Shapiro M, Purcell RH, Emerson SU. // J Virol. - 1998. - V. 7 - Issue 4 - P. 7467-7475

106. Robertson B. H. Epidemiologic patterns of wild-type hepatitis A virus determined by genetic variation / B.H. Robertson, B. Khanna, O.V. Nainan, H.S. Margolis // J. Infect. Dis. - 1991. - 163 - Issue 2 - P. 286-292

107. Robertson B.H. Genetic relatedness of hepatitis A virus strains recovered from different geographical regions / B.H. Robertson, R.W. Jansen, B. Khanna, A. Totsuka, O.V. Nainan, G. Siegl, A. Widell, H.S. Margolis, S. Isomura, K. lto, T. lshizu, Y. Moritsugu, S.M. Lemon // J. Gen. Virol. - 1992.

- V.73 - Issue 6 - P. 1365-1377

108. Robertson B.H. Viral hepatitis and primates: historical and molecular analysis of human and nonhuman primate hepatitis A, B, and the GB-related viruses / B.H. Robertson // J. Viral. Hepat. - 2001 - V. 8 - Issue 4 - P. 233242

109. Ruddy S.J. Chimpanzee-associated viral hepatitis in 1963 / S.J. Ruddy, J.W. Mosley, J.R. Held // Am. J. Epidemiol. - 1967. - 86 - Issue 3 - P. 634

- 640

110. Shaffer D.R. Large deletion mutations involving the irst pyrimidine-rich tract of the 5 nontranslated RNA of human hepatitis A virus deine two adjacent domains associated with distinct replication phenotypes / D.R. Shaffer, E.A. Brown, S.M. Lemon // J. Virol. - 1994. - V. 68 - Issue 9 - P. 5568-5578.

111. Shevtsova Z.V. Spontaneous and experimental hepatitis A in Old World monkeys / Z.V. Shevtsova, B.A. Lapin, N.V. Doroshenko, R.I. Krilova, L.I. Korzaja, I.B. Lomovskaya, Z.N. Dzhelieva, G.K. Zairov, V. M. Stakhanova, E.G. Belova, L.A. Sazhchenko // J. Med. Primatol. 1988. - V. 17 - Issue 4 - P. 177-94.

112. Siegl G. The physicochemical properties of infectious hepatitis A virions / G. Siegl, G.G. Frosner, V. Gauss-Muller, J.D. Tratschin, F. Deinhardt // J. Gen. Virol. - 1981. - V. 57 - Issue 2 - P. 331-341

113. Singh M.P. Molecular characterization of hepatitis A virus strains in a tertiary care health set up in north western India / M.P. Singh, M. Majumdar, B.R. Thapa, P.K. Gupta, J. Khurana, B. Budhathoki, R.K. Ratho // Indian J. Med. Res. - 2015. - V.141 - Issue 2 - P. 213-220

114. Smith D.B. Proposed reference sequences for hepatitis E virus subtypes / D.B. Smith, P. Simmonds, J. Izopet, E.F. Oliveira-Filho, R.G. Ulrich, R. Johne, M. Koenig, S. Jameel, T.J. Harrison, X.J. Meng, H. Okamoto, V.H.M. Van der Poel, M.A. Purdy // J. of Gen. Virol. - 2016. -V.97 - Issue 3 - P. 537 - 542

115. Smith M.S. Hepatitis A in nonhuman primates in nature. Lancet / M.S. Smith, P.J. Swanepoel, M. Bootsma // 1980 - V. 2 - Issue 8206 - P. 1241 -1242

116. Sonoda H. Prevalence of hepatitis E virus (HEV) Infection in wild boars and deer and genetic identification of a genotype 3 HEV from a boar in Japan / H. Sonoda, M. Abe, T. Sugimoto, Y. Sato, M. Bando, E. Fukui, H. Mizuo, M. Takahashi, T. Nishizawa, H. Okamoto // J. Clin. Microbiol. - 2004. -V.42 - Issue 11 - P. 5371-5374

117. Spina A. A large outbreak of Hepatitis E virus genotype 1 infection in an urban setting in Chad likely linked to household level transmission factors, 2016-2017 / A. Spina, A. Lenglet, D. Beversluis, M. de Jong, L. Vernier, C. Spencer, F. Andayi, C. Kamau, S. Vollmer, B. Hogema, A. Irwin, R. Ngueremi Yary R, A. Mahamat Ali, A. Moussa, P. Alfani, S. Sang // PLoS One - 2017. - V.12 - Issue 11 - P. 1 - 12

118. Sridhar S. Hepatitis E virus genotypes andevolution: emergence of camel hepatitis E variants / S. Sridhar, J.L.L. Teng, T.H. Chiu, S.K.P. Lau, P.C.Y. Woo // Int. J. Mol. Sci. - 2017 - V.18 - Issue 4 - P. 1 - 19

119. Takahashi K. Complete or near-complete nucleotide sequences of hepatitis E virus genome recovered from a wild boar, a deer, and four patients who ate the deer / K. Takahashi, N. Kitajima, N. Abe, S. Mishiro // Virology - 2004. - V.330 - Issue 2 - P. 501-505

120. Tam A.W. Hepatitis E virus (HEV): molecular cloning and sequencing of the full-length viral genome / A.W. Tam, M.M. Smith, M.E. Guerra, C.C. Huang, D.W. Bradley, K.E. Fry, G.R. Reyes // Virology - 1991.

- V.185 - Issue 1 - P. 120-131.

121. Teterina NL, Bienz K, Egger D, Gorbalenya AE, Ehrenfeld E. Induction of intracellular membrane rearrangements by HAV proteins 2C and 2BC / N.L. Teterina, K. Bienz, D. Egger, A.E. Gorbalenya, E. Ehrenfeld // Virology - 1997. - V.237 - Issue 1 - P. 66-77.

122. Tsarev S.A. Experimental hepatitis E in pregnant rhesus monkeys: failure to transmit hepatitis E virus (HEV) to offspring and evidence of naturally acquired antibodies to HEV / S.A. Tsarev, T.S. Tsareva, S.U. Emerson, M.K. Rippy, P. Zack, M. Shapiro, R.H. Purcell // J. Infect. Dis. -1995. - V.172 - Issue 1 - P. 31 - 7

123. Tsarev S.A. Simian hepatitis A virus (HAV) strain AGM-27: comparison of genome structure and growth in cell culture with other HAV strains / S.A. Tsarev, S.U. Emerson, M.S. Balayan, J. Ticehurst, R.H. Purcel // J. of Gen. Virol. - 1991. - V.72 - Issue 7 - P. 1677 - 1683

124. Van Cuyck-Gandre H. Experimental African HEV infection in cynomolgus macaques (Macaca fascicularis) / H. Van Cuyck-Gandre, R. Cockman-Thomas, J.D. Caudill, L.S. Asher, K.L. Armstrong, B. Hauroeder, N.J. Clements, L.N. Binn, C.F. Longer CF // J. Med. Virol. - 1998 - V.55 - Issue 3 - P. 197 - 202

125. Vishwanathan R. Infectious hepatitis in Delhi (1955-56): A critical study: Epidemiology / R. Vishwanathan // Indian Journal of Medical Reseach. — 1957. — V. 45. — P. 1- 29.

126. Vivek C. Molecular biology and pathogenesis of hepatitis E virus / C. Vivek, T. Shikha, K. Manjula, J. Shahid // J. Biosci. - 2008. - V.33 - Issue 4

- P. 451-464

127. Wang Y. A divergent genotype of hepatitis E virus in Chinese patients with acute hepatitis / Y. Wang, R. Ling, J.C. Erker, H. Zhang, H. Li,

S. Desai, I.K. Mushahwar, T.J. Harrison // J. of Gen. Virol. - 1999. - V. 80. - Issue 1 - P. 169 -177.

128. Withers MR, Correa MT, Morrow M, Stebbins ME, Seriwatana J, Webster WD, Boak MB, Vaughn DW. Antibody levels to hepatitis E virus in North Carolina swine workers, non-swine workers, swine, and murids / M.R. Withers, M.T. Correa, M. Morrow, M.E. Stebbins, J. Seriwatana, W.D. Webster, M.B. Boak, D.W. Vaughn // Am. J. Trop. Med. Hyg. - 2002. -V.66 - Issue 4 - P. 384 - 388

129. Wong D.C. Epidemic and endemic hepatitis in India: evidence for a non-A, non-B hepatitis virus aetiology / D.C. Wong, R.H. Purcell, M.A. Sreenivasan, S.R. Prasad, K.M. Pavri // Lancet - 1980. - V.2 - Issue 8200 -P.876 - 879

130. Yamamoto H. Hepatitis E Virus Outbreak in Monkey Facility, Japan / H. Yamamoto, J. Suzuki, A. Matsuda, T. Ishida, Y. Ami, Y. Suzaki, I. Adachi, T. Wakita, N. Takeda, T. Li // Emerg. Infect. Dis. - 2012. - V.18 -Issue 12 - P. 2032 - 2034

131. Yamamoto H. Serological Evidence for Hepatitis E Virus Infection in Laboratory Monkeys and Pigs in Animal Facilities in Japan / H. Yamamoto, T.C. Li, C. Koshimoto, K. Ito, M. Kita, N. Miyashita, J. Arikawa, K. Yagami, M. Asano, H. Tezuka, N. Suzuki, T. Kurosawa, T. Shibahara, M. Furuya, S. Mohri, H. Sato, K. Ohsawa, K. Ibuki, N. Takeda // Exp. Anim. - 2008. - V. 57 - Issue 4 - P. 367-376.

132. Yang F. Current status of hepatitis E virus infection at a rhesus monkey farm in China / F. Yang, S. Duan, Y. Guo, Y. Li, S. Yoshizaki, N. Takeda, T. Wakita, M. Muramatsu, Y. Zhao, Z. He, T.C. Li // Veterinary Microbiology - 2019. - V. 230 - Issue - P. 244 - 248.

133. Yazaki Y. Sporadic acute or fulminant hepatitis E in Hokkaido, Japan, may be food-borne, as suggested by the presence of hepatitis E virus in pig liver as food / Y. Yazaki, H. Mizuo, M. Takahashi, T. Nishizawa, N. Sasaki,

Y. Gotanda, H. Okamoto // J Gen Virol. 2003. - V.84 - Issue - P. 2351 -2357

134. Yin J. An episulide cation (thiiranium ring) trapped in the active site of HAV 3C proteinase inactivated by peptide-based ketone inhibitors / J. Yin, M.M. Cherney, E.M. Bergmann, J. Zhang, C. Huitema, H. Pettersson, L.D. Eltis, J.C. Vederas, M.N. James // J. Mol. Biol. - 2006. - 361 - Issue 4 - P. 673 - 686

135. Yu J. A novel hepatovirus identified in wild woodchuck Marmota himalayana / J. Yu, L. Li, C. Zhang, S. Lu, Y. Ao, H. Gao, Z. Xie, G. Xie, X. Sun, L. Pang, J. Xu, W.I. Lipkin, Z. Duana // Sci. Rep. - 2016. - V.6 - Issue 22361 - P. 22361 P. 1 - 11

136. Zhao C. A novel genotype of hepatitis E virus prevalent among farmed rabbits in China. / C. Zhao, Z. Ma, T.J. Harrison, R. Feng, C. Zhang, Z. Qiao, J. Fan, H. Ma, M. Li, A. Song, Y. Wang // J. Med. Virol. - 2009. -V.81 - Issue 8 - P. 1371-1379.