Санитарно-гигиеническая и микробиологическая характеристика новых пробиотических препаратов "Соя-бифидум" и "Соя-лактум" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.07, кандидат медицинских наук Денисова, Ирина Вячеславовна

• Денисова, Ирина Вячеславовна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Денисова, Ирина Вячеславовна

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ-.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Нормальная микрофлора организма человека, последствия се нарушений под влиянием внешних факторов. ,.„.,.„.

12. Представители нормальной микрофлоры (бифндобактернн н лактобактернн) - источники пробнотнческих БАД н их роль в коррекции дисбиотических состояний

1.3. Особенности саннтарно-гнгисннчсской экспертизы и регистрация БАД (ipynna пробнотнков}.,, „.„,.

Глава 2- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Методы изучения пробиотических БАД по микробиологическим показателям

2.2. Методы изучения качества пробиотнческих БАД по санитарно-гигиеническим показателям

2.3. Методы статистической обработки результатов исследования,. „.„.„, .„.„.♦♦„„

Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТОВ BIFIDOBACTERIUM И LACTOBACILLUS, ПОЛУЧЕННЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГТЩРОЛИЗАТНО-МОЛОЧНОЙ И ГИДРОЛИЗАТНО-СОЕВОЙ СРЕД.

3.1 Ростовые свойства Bifidobacterium и Lactobacillus при культивировании на ГМС н ГСС.♦♦♦,.♦♦♦„,.

3.2 Морфологические свойства Bifidobacterium и Lactobacillus прн культивировании на ГМС и ГСС.

3-3- Биологические характеристики препаратов Bifidobacterium н Lactobacillus, полученных с использованием ГМС и ГСС.

3,4. Анализ основных факторов, оказывающих влияние на микробиологические характеристики препаратов Bifidobacterium н жго^осШш. . „„„„,„,„,. „

Глава 4. САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ЭКСПЕРТИЗА НОВЫХ ПРОБНОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ «СОЯ-БИФИДУМ» И «СОЯ-ЛАКТУМ»

4Л. Подготовка нормативной базы для проведения санитарно-гигиенической экспертизы новых пробнотических препаратов (БАД).

4.2. Санитар ио-гитменнчеежм характеристика БАД «Соя~ бифидум» и «Соя-лактуы».,,,,,.,,

4.3. Прохождение этапов санитарно-гигиенической экспертизы БАД нСоя-бнфмдум» и «Соя-лактум».

4.4. Гигиенические мероприятия по организации производственного контроля и технологического процесса БАД «Соябнфндум». «Соя-лаетум».,.

Глава 5. ОПЫТ ВНЕДРЕНИЯ НОВЫХ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ «СОЯ-БИФНДУМ» И «СОЯ-ЛАКТУМ» В ПРАКТИКУ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ.

5.1. Проведение маркетинговых исследований грутгпы пробнотических препаратов .„

5:2. Проведение клинической апробации БАД «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» как заключительный этап гигиенической регистрации

5,3. Внедрение БАД «Соя-бнфилум» и «Соя-лахтум» в практическое здравоохранение.Л

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Санитарно-гигиеническая и микробиологическая характеристика новых пробиотических препаратов "Соя-бифидум" и "Соя-лактум"»

В условиях интенсивной техногенной нагрузки из экосистем}' возрастает необходимость совершенствования пробиоткков, содержащих живые апатогениые бесспоровые анаэробы родов Bifidobacterium и Lactobacillus, что определяется все более широким использованием при коррекции дисбиотнческнх состояний открытых полостей организма человека {Бондарен коВЛГ, Шендеров Б .А., Соколова К.Я. Степаненко СЖ, Маянская И.В., Белова ИВ. 2004). Гигиенические требования к безопасности н эффективности подобных препаратов, относящихся к биологически активным добавкам к пи те, определяются Федеральными и территориальными органами Роспотребнадзора РФ.

Традиционный способ получения пробиотиков заключается а культивировании специально отобранных производственных штаммов лактобацнлл и бифидобакгерий на гндролнзатно-молочной среде (Синельников Б.М. и др. Казаков А.В., 2004, Bouvier М. et а)„200]. Damiani P., Cossignrtani L. 2000), приготовляемой на панкреатическом гндролизате коровьего молока. В то же время существование определенной прослойки лиц, проявляющих непереносимость молока и молочных продуктов» в некоторых популяциях составляющих до 10% населения, значительно сужает сферу применения данных препаратов, «по делает актуальным поиск альтернативных трофических субстратов для культивирования пробнотическнх штаммов микроорганизмов (Бархатова Т.В., Храмцова А-Г-, 2004),

С другой стороны, выращивание бактериальной биомассы на немолочных трофических субстратах предположительно может вести к получению пробнотнчееккх препаратов с измененными свойствами (Алешкин В.А. Амерханова A.M., Грачева Н.М. и др., 2004). что является альтернативой поиску оригинальных производственных штаммов пробиотиков, обладающих особенными биологическими характеристиками и за счет этого более эффективно укрепляющих экдоэкоиошческне барьеры организма человека (Новик Г.И., Аетапонич IU1. Кюбляр Й., 2004, Babinska I, Roikiewicz Т, Otrocka-Domagala L, 2005),

Кроме того, модификация среды культивирования может благоприятно сказаться на иных санитарно-гигиенических характеристиках пробиотических препаратов, определяемых особенностями мнкроэлементиого состава сырья для их производства {^Сборник рекомендаций по использованию сосвых белков, пищеных ингредиентов для пищевой промышленности», 1999, Крючин С.В., Назарснко С.В., 2000),

Перечисленный круг нерешенных вопросов позволил констатировать актуальность и определил цель и задачи настоящего исследования.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью работы явилось изучение возможности изготовления новых пробиотических препаратов Bifidobacterium и Lactobacillus с использованием соевого сырья, л также их санитарно-гигиеническая и микробиологическая характеристика.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

I. Провести сравнительный анализ ростовых характеристик производственных пламмов Bifidobacterium и Lactobacillus при их культивировании на гндролнзатно*молочной (ГМС) н гидролизатио-соевой средах (ГСС) с параллельной оценкой морфологических характеристик полненных бактериальных клеток.

2. Изучить комплекс биологических характеристик, значимых дня формирования лечебно-профилактического действия препаратов Bifidobacterium и Lactobacillus, полученных с использованием ГМС и ГСС

3- Дать санитарно-гигиеническую характеристику препаратов Bifidobacterium и Lactobacillus, полученных с использованием гидролизатоа молочного и соевого сырья.

4. Осуществить санитарно-гигиеническую экспертизу и регистрацию препаратов «Соя-бнфкдум», «Соя-лактум», сформировать нормативно-техническую базу для их серийного производства, организовать производственный процесс.

НАУЧНАЯ НОВ ЮНА

Впервые обоснована возможность использования гндроянзата соевого сырья в качестве питательной среды для культивирования пробиотическнх микроорганизмов Bifidobacterium и iMctobacillus, что подтерждается получением двух патентов России на изобретение № 2169472 м №2177691.

Впервые установлен факт стимуляции роста микроорганизмов рода Bifidobacterium на гидролкзатно-соевой среде, что может быть объяснено присутствием в ней специфических бнфндогенных факторов - соевых олнгосахзрнлов.

На фоне относительной стабильности морфологических характеристик клеток Bifidobacterium и Lactobacillus, определяемой их родовой принадлежностью, показана меньшая ригидность клеточной стенки микроорганизмов, выращенных на гидролизатно-соевой среде, что нашла сдое отражение в росте их адгезивной способное!и.

Продемонстрирован рост антагонистической активности препаратов Bifidobacterium и Lactobacillus в отношении ряда условнопатогенных микроорганизмов», что было связано со стимуляцией продукции отличных от лнэоцима антибиотических субстанций.

В препаратах пробиотнко», изготовленных на основе соевого сырья (по сравнению с тралиннонным молочным сырьем), впервые установлено снижение содержания ряда тяжелых металлов, что благоприятно сказывается на санитарно-гигиенических свойствах получаемого продукта.

Впервые разработаны и реализованы санитарно-гигиенические технические документы, организован технологический процесс приготовления новых пробнотиков.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Проведенные исследования позволили обеспечить прохождение всех этапов гигиенической экспертизы от регионального до Федерального уровней: ЦГСЭН Оренбургской области, НИИ питания РАМН. ФЦ ГСЭН Минздрава РФ. Департамент Минздрава РФ, федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Впервые организовано производство и начат выпуск новой группы пробнотнческнх препаратов (БАД) под названиями «Соя-бифндум» и «Соя-лактумж Основанием для производств подобных препаратов явились их успешная экспертиза н улучшенная технологичность соевой среды, позволяющей обеспечить более быстрый и высокий вычел биомассы (ТУ 9197-002-11908694-04). На данные препараты в Федеральной службе по надзору в сфере защиты пряв потребителей н благополучия человека получены «Свидетельства о государственной регистрации» (№77-99. П.З.У,5249.10.04 и № 77.99.11-З.У.5246.10.04) с включением в Федеральный реестр БАД.

Кроме того, пробиотнчсскне препараты, полученные на основе соевого сырья, обладали более выраженными биологическими характеристиками, значимыми дли формирования их лечебно-профилактического эффекта. Проведена клиническая апробация с получением актов внедрения и актов испытаний.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ

Всего за время производства (с 2001 г) БАД «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» с целью коррекции нарушенной микрофлоры при различных дисбиотических состояниях в возрастных категориях от новорожденных детей до взрослых пациентов» было проведено около 23000 курсов их применения. Признанием эффективности БАД «Соя-бифнлум», «Соя-лактум» стал и тот факт, что распоряжением главы администрации Оренбургской области Кг 84-р, от 18,01,2001г. данные биопрепараты были включены в государственную программу «Здоровое питание населения Оренбургской области на 2001-2005 годы».

Положительный результат применения препаратов «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» был продемонстрирован в педиатрической практике (Акт внедрения ГУЗ «Муниципальный перинатальный центр г, Оренбург»), при днсбиотических состояниях у лиц группы риска (Акт внедрения МДОУ «Детский сад К* 69» при ММ УЗ «Муниципальная городская клиническая больница им. НИПнрогоаа» г.Оренбург), при сальмонелле» у л стен раннего возрасга (Акт клинических испытаний ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия МЗ РФ»), а также при купировании днсбиотических сдвигов после перенесенной острой кишечной инфекции (Акт клинических испытаний ММУ «Муниципальная городская клиническая инфекционная больница» г.Оренбург), Организована систематическая и разовые поставки препаратов «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» населению Оренбургской области. гг.Москва, Екатеринбург, Самара, Ульяновск,

Уфа, Салават. Для населения г.Оренбург задействовано 5 ЛТТУ, 25 аптек, а также торговый отдел фирмы «Экобиос».

В 2004г. органами ГОССТАНДАРТА РФ препараты «Соя-бифндум» и «Соя-лактум» признаны продукцией высокого качества н удостоены «Золотого диплома» на Общероссийской программе-конкурсе «100 лучших товаров России».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Отдельные фрагменты работы доложены и обсуждены на пяти Международных научно-практических конференциях: Москва, 2004; Пенза, 2002; Саратов. 2002; Сочи, 2002; Оренбург, 2003; двух Всероссийских научно-практических конференциях: Оренбург, 2003, Международном Конгрессе Euromedica-Ganiiover (г.Ганвювер, Германия, 2004), где конкурсная работа по теме диссертации отмечена дипломом «За лучшую научно-практическую работу в области разработки новых лсчсбно-профилахтнческих продуктов* и награждена серебряной медалью ЕАЕН им, Р.Внрхова, Работа была признана победителем областных конкурсов: «Лучший инновационный проект. 2001», «Изобретатель-2003*>, лауреатом конкурса научных работ молодых ученых и специалистов (Оренбург, 2002), а также лауреатом премии администрации Оренбургской области в сфере науки и техники (2003). Инновационный проект но внедрению новых БАД на фармрынок награжден золотой медалью за первое место па конкурсе «Фабрика ннношший~2004», проводимом Советом Федерации РФ. Препараты были экспонированы на региональных выставках (Оренбург. 1999, 200], 2002, г. Нижний Новгород. 2002, г, Уфа, 2005) где эа создание ноэейшнх технологий производства БАД «Соя-бнфндум», «Соя-лактум» и нх внедрение в народное хозяйство их разработчики были удостоены дипломов победителей.

По теме диссертации опубликовано 22 научных работ (га ннх 4 статьи в журналах рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов диссертационных исследований и 2 патентов на изобретение).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Использование гидролнзата сои в качестве питательной среды для культивирования производственные штаммов Bifidobacterium и Lactobacillus.

2, Влияние гидролщатно-соевой питательной среды на ростовые, морфологические и биологические характеристики препаратов Bifidobacterium и Lactobacillus.

3, Улучшение санитарно-гигиенических характеристик препаратов Bifidobacterium и Lactobacillus, полученных с использованием соевого сырья,

4. Прохождение санитарно-гигиенической регистрации на региональном и федеральном этапах экспертизы новых препаратов «Соя-бифндум», «Соя-лактум* - «источников пробнотической микрофлоры».

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 152 страницах машинописного теста и состоит нз введения, обзора литературы, глав собственных исследований, заключения, выводов, Диссертация иллюстрирована 14 таблицами и 15 рисунками, Указатель литературы содержит 269 источников, из них 204 работы отечественных и 65 иностранных авторов. Материалы приложения включают 20 документов. подтверждающие значимость работы.

Работа выполнена на базе ООО «Научно-производственная фирма «Экобнос».

Заключение диссертации по теме «Гигиена», Денисова, Ирина Вячеславовна

выводы

1. Впервые показана возможность использования нового трофического субстрата - пептического гидролизата соевого сырья (ГСС) для культивирования известных производственных штаммов Bifidobacterium и Lactobacillus с получением на их основе оригинальных препаратов пробиотиков.

2. Установлен факт стимуляции роста использованных производственных штаммов при их культивировании на ГСС по сравнению с ГМС, что проявляется в укорочении log- и lag- фаз роста периодических культур, ведет к более быстрому выходу биомассы и преимущественно выражено в отношении представителей рода бифидобактерий.

3. При культивировании на ГСС выявлено снижение ригидности клеточной стенки бактериальных клеток по сравнению с ГМС, которое имеет положительную корреляционную зависимость со стимуляцией важного биологического свойства - адгезивной способности бактериальных клеток, что наиболее выражено у представителей рода Bifidobacterium по сравнению с Lactobacillus

4. Культивирование бифидобактерий и лактобацилл на ГСС в сравнении с ГМС ведет к повышению антагонистической активности получаемых препаратов в отношении ряда условно-патогенных микроорганизмов, не связанной со сдвигом их рН в кислую сторону или изменением содержания в культуральной жидкости бактериолитического фермента - лизоцима.

5. Использование ГСС позволяет получать пробиотические препараты, по содержанию токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов и санитарно-значимых групп микроорганизмов полностью отвечающие нормативам СанПиН 2.3.2.1078-01, а по содержанию некоторых тяжелых металлов оказывающиеся лучше аналогичных препаратов, полученных с использованием ГМС.

6. Полученные результаты позволили разработать технические документы на новые БАД - «Соя-бифидум» и «Соя-лактум», получить на них «Свидетельства о государственной регистрации» и необходимые согласования в НИИ питания при РАМН, ГУ «Центр санитарно-эпидемиологического нормирования, гигиенической сертификации и экспертизы Минздрава РФ» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека».

7. Новые биологически активные добавки к пище «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» успешно внедрены в практику здравоохранения как «источники пробиотической микрофлоры».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Рост антропогенной нагрузки на экосистему одним из своих важных следствий имеет формирование широкого круга дисбиотических состояний организма человека, подвергающегося подобному воздействию (Барри Фокс. 1997, Онищенко Г.Г., 2001, Сидоренко Г.И., Новиков С.М., 1999). В этих условиях совершенствование пробиотиков, содержащих живые апатогенные бесспоровые анаэробы родов Bifidobacterium и Lactobacillus, и находящих все более широкое использование при коррекции дисбиотических состояний (Бондаренко В.М., Воробьев А.А., Гершанович М.Л., Мельникова И.Ю., Петров Л.Н, 2004, Madden JA, Plummer SF, Tang J, Garaiova I, Plummer NT, Herbison M, Hunter JO, Shimada T, ChengL, Shirakawa Т.,2005) становится одним из важных направлений современной профилактической медицины. Регулярное употребление подобных продуктов, выпускаемых в виде фармакологических препаратов, биологически активных добавок к пище и продуктов функционального питания (Ильина P.M., Молокеев А.В. и др., 2000, Reid G, Anukam К, -James VI, van der Mei НС, Heineman С, Busscher HJ, Bruce AW., 2005) становится одним из важных составляющих здорового образа жизни современного человека.

В этой связи закономерным оказывается и рост внимания к качеству, безопасности и эффективности подобных препаратов, проявляемый со стороны органов Роспотребнадзора РФ. При этом основными нормативными документами, регламентирующими их производство и оборот являются СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов» и СанПиН 2.3.2.1290-03 «Гигиенические требования к организации производства и оборота БАД».

Оговоренные в них требования как раз и определили основные направления настоящего исследования, целью которого явилось изучение возможности изготовления пробнотиков Bifidobacterium и Lactobacillus на основе соевого сырья, предлагаемого в качестве альтернативы традиционно используемому для этой цели животному (молочному) сырью.

Начало подобных исследований было сопряжено с получением доказательств о самой возможности получения биомассы существующих производственных штаммов Bifidobacterium и Lactobacillus на предложенной нами гидролизатно-соевой среде (ГСС). При этом сравнительное изучение данных микроорганизмов при их культивировании на ГСС и традиционно используемой гидролизатно-молочной среде (ГМС) позволило нам зафиксировать ряд достоверных различий, заключающихся как в особенностях кинетики роста, так и некоторых нюансах реагирования со стороны отдельных производственных штаммов.

Наиболее выраженные из них заключались в преимущественной стимуляции роста бифидобактерий на гидролизатно-соевой среде, в то время как лактобациллы реагировали на подобное изменение условий культивирования в значительно меньшей степени. При этом для отдельных производственных штаммов B.adolescentis и В.bifidum было показано почти двукратное укорочение длительности /ag-фазы и сокращение продолжительность фазы логарифмического роста, что результировалось в достоверном уменьшении времени достижения М-концентрации. Особенностью же роста В. longum на ГСС по сравнению с ГМС стала ее более высокая удельная скорость роста, ведущая к увеличению итоговых значений достигаемых М-концентраций данного микроорганизма.

Полученные результаты были интерпретированы нами как свидетельства в пользу адекватности гидролизатно-соевой среды для культивирования производственных штаммов бнфидобактернй, заключающуюся в обеспечении их высоких динамических характеристик с быстрым выходом значительного количества биомассы, При этом возможные причины данного явления предположительно могут быть связаны с присутствием в соевом сырье помимо высококачественных белков, приравниваемых по аминокислотному составу к белкам животного происхождения, дополнительных бнфнлогенных факторов - олигосахаридов (Манвелова МЛ. и др., 1991, БархатоваТ.В., 2004), проявляющих «о отношению к представителям рода Bifidobacterium элективные свойства, Прикладные же аспекты проведенного исследования выразились в разработке технологии культивирования пробиотнческих микроорганизмов Bifidobacterium н Lactobacillus на питательных средах на основе соевого сырья, приоритет которых закреплен Патентами НФ №2169472 «>2177691

Морфометрня бактериальных клеток, проведенная методом контактной атомно-силовой микроскопии (Ямине кий, И.В., Вондаренко В.М., (998), позволила констатировать близость форм, полученных с использованием ГСС и ГМС. При этом вне зависимости от условий культивирования размер всех лактобэинлл существенно превосходил таковой у бнфидобактернй, что проявлялось в их почт трехкратном превосходстве по длине и в совокупности с достоверно большими значениями по высоте/ширине результировалось в более чем пятикратном превосходстве по объему бактериальных клеток, Выявленные же различия при культивировании на ГМС и ГСС были минимальны и проявлялись в изменении соотношения шнрнн&''высота бактериальной клетки, отражающем процесс ее «распластывания» на твердой подложке.

В то же время полученные результаты о меньшей «ригидности» и большей «пластичности» клеточной стенки бактерий, выращенных на

ГСС по сравнению с ГМС, нашли свое отражение в изменении их адгезивности, в значительной степени определяющей способность данных микроорганизмов к закреплению в колонизируемой экологической нише. При этом если при культивировании на ГМС все изученные производственные штаммы достоверно не отличались по данному признаку и должны были оценены как низкоадгезивные, то при культивировании на ГСС основной тенденцией стало повышение их адгезивного потенциала, наиболее выраженное у представителей рода Bifidobacterium.

Продолжение анализа биологических свойств полученных пробиотических препаратов, значимых для реализации их лечебно-профилактического действия позволил охарактеризовать дополнительные особенности использования ГСС по сравнению с ГМС. Так при тестировании их антагонистического действия в отношении типичных представителей условно-патогенных грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов был продемонстрирован двукратный рост бактерицидное™ препаратов бифидобактерий на ГСС по отаошению к E.coli К12 в сравнении с таковой, зафиксированной при использованием ГМС. При использовании в качестве тест-объекта S.aureus 209Р был продемонстрирован еще более значительный (десятикратный) рост бактерицидности при использовании препаратов на ГСС по сравнению с ГМС.

С целью поиска причин подобных изменений в изучаемых препаратах нами было проанализировано значение активности протонов водорода и концентрации бактериолитического фермента лизоцима, каждому из которых приписывается в развитии бактерицидного действия Bifidobacterium и Lactobacillus (Вахитов Т. Я., Добролеж О. В., Петров JI. Н. и др., 2001). Однако проведенные исследования заставили признать, что бактерицидность препаратов ГСС в отношении S.aureus 209Р достоверно не коррелировала с их кислотностью, а расчетные значения коэффициента детерминации свидетельствовали не более чем о 10% вкладе активности ионов водорода в формирование подобной антагонистической активности. Не была установлена связь бактерицидности и с содержанием лизоцима, продукция которого при культивировании на ГСС у пяти из шести изученных производственных штаммов отнюдь не повышалась, но снижалась, что было наиболее значимым у представителей рода Lactobacillus С этих позиций разнонаправленность эффектов при использовании ГСС, проявляющихся в отсутствии достоверного роста значений рН и снижении концентрации свободного лизоцима на фоне многократного роста бактерицидное™, вероятно, должна быть объяснена стимуляцией выработки отличных от лизоцима антибиотических субстанций -микроцинов (Лахтин В.М., Поспелова В.В., Лахтин М.В., Медведкова Н.А., Бовин Н.В., Астапович Н.И., Головнева Н.А., Щепко В.А. 2004), проявляющих свою активность преимущественно против грамположительных микроорганизмов.

Интегральная оценка полученных данных с использованием процедуры факторного анализа позволила констатировать, что на ростовые, морфологические и биологические характеристики производственных штаммов Bifidobacterium и Lactobacillus выраженное влияние оказывают как их исходная родовая принадлежность, так и особенности среды культивирования (ГМС или ГСС). При этом было установлено, что наибольшее влияние использование соевого сырья в качестве основы для культивирования производственных штаммов Bifidobacterium и Lactobacillus оказывает на их ростовые свойства, в то время как морфологические характеристики бактериальных клеток в этих условиях оказываются относительно стабильными и в первую очередь определяются родовой принадлежностью микроорганизма. На этом фоне значимые для формирования лечебно-профилактического эффекта биологические характеристики препаратов Bifidobacterium и

Lactobacillus в различной степени определяются как исходными свойствами каждого из производственных штаммов, так и особенностями среды его культивирования. В частности, значимыми особенностями использования ГСС по сравнению с ГМС являлись увеличение антагонистической и адгезивной способностей получаемых препаратов при ингибирующем эффекте в отношении признака лизоцимпродукции.

Полученные позитивные результаты, доказывающие возможность использования нового трофического субстрата - гидролизата соевого сырья (ГСС) для культивирования производственных штаммов Bifidobacterium и Lactobacillus явились предпосылкой для создания новой группы пробиотических препаратов - биологически активных добавок к пище (БАД) под патентованными названиями «Соя-бифидум» и «Соя-лактум», что потребовало прохождения санитарно-гигиенической экспертизы и сертификации.

В соответствии с действующими нормативными актами в разрабатываемых препаратах было тестировано присутствие ряда токсических компонентов по большинству которых (мышьяк, ртуть, афлатоксин В|, гексахлорциклогексан (сумма изомеров), ДЦТ и его метаболиты, андрин, гептахлор, кельтан) было продемонстрировано их полное отсутствие. На этом фоне содержание тяжелых металлов -свинца и кадмия - также было ниже нормативных пороговых величин, однако использование ГСС позволило на порядок снизить их содержание по сравнению с препаратами, полученными с использованием ГМС. Предполагаемым объяснением же этого факта является различное исходное присутствие данных веществ в соевом и молочном сырье, последнее из которых характеризуется большей концентрацией ионов свинца и кадмия, мигрирующих по пищевым цепочкам и аккумулирующихся в организме животных (Голденко Г.Б., Агеева Е.В., 1996).

В соответствии с МУК 2.3.2.970-00 «Медико-биологическая оценка пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников» образцы БАД «Соя-бифидум», «Соя-лактум» были также исследованы на наличие в них рекомбинантной ДНК сои, во всех случаях давшей отрицательный результат.

На основе полученных результатов были разработаны технические документы (Технические условия и Технологическая инструкция 9146-001-119008694-01 на БАД «Соя-бифидум», «Соя-лактум»), которые вместе с образцами продукции были представлены и успешно прошли гигиеническую экспертизу в ГУ НИИ питания РАМН и Федеральном центре ГСЭН, по результатам которой были получены 2 регистрационных удостоверения (РУ № 003416.Р.643.11.2001, РУ № 003415.Р.643.11.2001). При этом препараты «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» были регламентированы Минздравом РФ как БАД - источники пробиотической микрофлоры и внесены в соответствующий Федеральный Реестр. В соответствии с «Экспертным заключением НИИ питания РАМН МЗ РФ» (№ 72/9-1694-01 и № 72/9-1693-01) предлагаемая продукция рекомендована при дисбактериозе и других нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта.

С целью перевода выпуска БАД «Соя-бифидум», «Соя-лактум» от пробных «пилотных» партий до серийного производства одновременно с прохождением всех этапов экспертизы на базе Медико-экологического центра «НПФ «Экобиос» была выполнена работа по организации технологического процесса и производственного контроля, последний из которых создавался в соответствии с СанПиН 2.3.2.1290-03 «Гигиенические требования к организации производства и оборота БАД к пище», а также СП 1.1.1058-01 «Организация и проведение производственного контроля за соблюдением санитарных правил и выполнением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий». Организованный производственный контроль включал контроль сырья, материалов, компонентов, наличия сертификатов, удостоверений качества в соответствии со всеми нормативными показателями безопасности; технологический производственный контроль; приемно-выходной контроль готовой продукции; контроль санитарного состояния производства; контроль упаковки тары; контроль санитарного содержания транспорта, предназначенного для транспортировки готовой продукции. Результатом этого явился тот факт, что за пять лет серийного производства БАД «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» на более чем 150 партий готовой продукции не было получено ни единой рекламации со стороны контролирующих органов.

Важной задачей при внедрении препаратов «Соя-бифидум», «Соя-лактум» в производство явилось также выполнение маркетинговых исследований на рынке препаратов пробиотиков с оценкой их потребительских и иных свойств. Было установлено, что, несмотря на отсутствие дефицита пробиотиков, представленных более чем сорока аналогами, подавляющее большинство подобных препаратов имели лиофилизированную форму, прямыми же аналогами, имеющими жидкую форму, являлись только бифидосодержащий и лактосодержащий молочные пробиотики. Заключение о целесообразности производства жидких форм пробиотиков было сделано и из ценовых соображений, так как стоимость таких препаратов для потребителя при полной рентабельности производства в 1,3 раза, а в некоторых случаях (импортные препараты) в 10-15 раз оказывалась ниже существующих аналогов.

Последующий опыт подтвердил спрос именно на жидкие пробиотики. При этом основными потребителями предлагаемой продукции стали лечебные учреждения (до 47% общего объема), а оставшуюся половину примерно в наибольшей степени сформировали аптечная (до 13%) и собственная торговая (до 18%) сеть. При этом работа по реализации проекта в течение 2001-2005гг. позволила продемонстрировать его полную рентабельность, сопровождающуюся ежегодным 15-20% увеличением объемов продаж. В целом же за 5 лет выпуска БАД «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» с целью коррекции нарушенной микрофлоры, при различных клинических состояниях было реализовано около 23000 курсов их применения.

Клинические наблюдения за применением новых препаратов с получением отзывов, актов внедрения, актов клинических испытаний, выполненные в ЛПУ г.Оренбурга, куда поставлялись препараты «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» позволили продемонстрировать их лечебно-профилактическую эффективность, оцениваемую по совокупности клинико-лабораторных показателей при различных дисбиотических состояниях.

Таким образом, вся совокупность полученных данных позволяет констатировать, что использование предлагаемой автором настоящей работы гидролизатно-соевой среды (ГСС) позволяет получать препараты, по своим санитарно-гигиеническим характеристикам полностью отвечающие действующим нормативам, а по некоторым биологическим характеристикам превышающие существующие аналоги на основе ГМС, что нашло свое отражение в их высокой клинической эффективности.

На данной основе в 2004 году НПФ «Экобиос» была повторно пройдена экспертиза технических документов (ТИ и ТУ 9197-00211908694-04) и образцов препаратов в ГУ НИИ питания РАМН и ГУ «Центр санитарно-эпидемиологического нормирования, гигиенической сертификации и экспертизы Минздрава России» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Результатом этого стали Свидетельства о государственной регистрации №77.99.11.3.У.5249.10.04 на препарат «Соя-лактум» и №77.99.11.3.У.5246.10.04 на препарат «Соя-бифидум», срок действия которых установлен на весь период промышленного производства.

Признанием эффективности БАД «Соя-бифидум», «Соя-лактум» стал и тот факт, что органами ГОССТАНДАРТА РФ препараты «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» в 2004 г. были признаны продукцией высокого качества и удостоены «Золотого диплома» на Общероссийской программе-конкурсе «100 лучших товаров России».

Одним из значительных научных и маркетинговых результатов стало представление конкурсной работы «Проведение исследования и разработка пробиотиков «Соя-бифидум» «Соя-лактум» на международном Конгрессе Euromedica-Gannover (г.Ганновер, Германия, 2004). и награждение серебряной медалью ЕАЕН им. Р.Вирхова и дипломом «За лучшую научно-практическую работу в области разработки новых лечебно-профилактических продуктов».

116

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Денисова, Ирина Вячеславовна, 2006 год

1. Алешкин В.А. Комбинированные пробиотические препараты -оптимизация профилактики / В.А. Алешкин и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 23-24.

2. Алешкин В.А. Пробиотики и интерферон в поддержании здоровья населения / В.А. Алешкин и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 28-29.

3. Артюхова С.И. Разработка биотехнологических основ производства продуктов синбиотиков / С.И. Артюхова // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 166167.

4. П.Байракова А.Л. Антибактериальная активность фитопрепарата «Тонзинал» / А.Л. Байракова и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 155156.

5. Бакиров А.Б. Нарушения микроэкологии кишечника в условиях техногенного воздействия и пути их коррекции: Методические рекомендации / А.Б. Бакиров и др.. Уфа, 2002. - 14 с.

6. Барановский А.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника /

7. Бикбов Т.М. 25 грамм здоровья из сои / Т.М. Бикбов. М., 2000. — 77 с.

8. Блинкова Л.П. Адгезивные свойства клеток и спор B.subtils / Л.П. Блинкова и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питание. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. — С. 104-105.

9. Бляхер М.С. Разные аспекты иммуномодулирующего действия препарата «Ацилакт» / М.С. Бляхер и др. // Пробиотики. пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 91.

10. Боев В.М. Гигиеническая оценка качества продуктов питания в центральном регионе Оренбургской области/ Боев В.М. Быстрых

11. B.В., Мозгов С.М., Тиньков А.Н. и др.// Здоровое питание XXI.

12. Проблемы рационального питания и использования БАД в практическом здравоохранении: сб.мат. межрег. научн.-практ. конф. -Оренбург, 2003. С.73-75.

13. Боев В.М. Урбанизированная среда обитания и здоровье человека / В.М. Боев и др.. Оренбург: Печатный дом «Димур», 2004. - 240 с.

14. Бондаренко В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич. М.,2003. - С. 220.

15. Буланова И.А. Фармакотоерапия инфекционных болезней / И.А. Буланова, И.В. Щепина, JI.B. Титова. М., 2001. - С. 124.

16. Бухарин О.В. Лизоцим микроорганизмов /О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, Б.Я. Усвяцов. Издательство Томского Университета. Томск., 1985-С. 177.

17. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий /О.В. Бухарин. -Медицина. М., 1999. С. 86-186.

18. Вилсон Л.А. Продукты питания из сои / Л.А. Вилсон // Из кн.: Руководство по переработке сои: пер.с англ. М.: Колос. 1998.

19. Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: в 3 т. К.: Здоров'я, 2000. - Т.1. - С. 382-400.

20. Высоцкий В.Г. Медико-биологические аспекты пищевого использования соевых белковых продуктов / В.Г. Высоцкий // Сб.док. форума «Пищевые ингредиенты». М., 2001. - С. 48-49.

21. Ганина В.И. Научные и практические основы биотехнологии кисломолочных продуктов и препаратов с пробиотическими свойствами: автореф. дис.: д-ра техн.наук / В.И. Ганина. М. 2001. -С.48 .

22. Гебеш В.В. Диагностика и лечение сальмонеллезов / В.В. Гебеш // Врачебное дело. 1994. - № 1. - С. 47-51.

23. Гебеш В.В. Современные эффективные методы в лечении больных острыми кишечными инфекциями / В.В. Гебеш // Кишечные инфекции. 1991. - Вып. 22. - С. 46-50.

24. Глаголева Л.Э. Фитобелковый продукт функционального назначения / Л.Э. Глаголева // Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М„ 2004. С. 26-27.

25. Глушанова Н.А. О биосовместимости пробиотиков с индигенной микрофлорой хозяина / Н.А. Глушанова II Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 18-19.

26. ГОСТ 10444.11. Определение лактобактерий.

27. Гусева Л.Р. Спрос на соевый белок растет / Л.Р. Гусева // Пищевые ингредиенты, сырье и добавки. 2000. - № 1. - С. 56-57.

28. Давыдкин В.Ю. Выживаемость бифидобактерий после распылительного обезвоживания / В.Ю. Давыдкин и др. //

29. Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. J 8-20.

30. Давыдкин В.Ю. Сохраняемость микроорганизмов в готовых формах пробиотиков / В.Ю. Давыдкин и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 37-38.

31. Демьяненко Г.Ф. Создание технологии получения пищевых соевых дисперсий: автореф.дис. / Г.Ф. Демьяненко. С.Пб., 1997. - 26 с.

32. Евдокимов И.А. К вопросу о новых функциональных продуктах / И.А. Евдокимов, Л.Р. Алиева, Н.Р. Анайко // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 114-115.

33. Евлашкина В.Ф. Стабильность лактобактерина / В.Ф. Евлашкина, Р.П. Чупринина, И.Г. Осипова // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 41-42.

34. Ельцова О.П. Мировой рынок сои. Обзор литерату ры / О.П. Ельцова // Пищевая и перерабатывающая промышленность Казахстана. -1999.-№4.-С. 31-33.

35. Ерюхин И.А. Псевдомембранозный колит и «кишечный сепсис» -следствие дисбактериоза, вызванного антибиотиками / И.А. Ерюхин и др. // Вестник хирургии им.И.И.Грекова.- 1997 Том 156,- № 2.-С. 108-111.

36. Ильина P.M. Использование бифидосодержащих лечебно-диетических продуктов питания для профилактики дисбактериозов / P.M. Ильина и др. // Гигиена питания. 2000. - № 6. - С. 35-38.

37. Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности от 28.12.1987 г.

38. Инструкция по санитарному режиму аптечных организаций, утвержденная Приказом МЗ РФ № 309 от 21.10.1997 г.

39. Инструкция по техническому контролю на предприятиях молочной промышленности от 30.12.1988 г.

40. Казаков А.В. Эуфлорины ® истоки жидких форм БАД микробного происхождения / А.В. Казаков // Пробиотики. пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. - С. 54-55.

41. Кириллова Л.Г. Обогащение молочного десерта биологически активными добавками растительного происхождения / Л.Г.

42. Кириллова, JI.B. Батищева // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М , 2004. С. 111-112.

43. Ковалев В.В. Анализ хозяйственной деятельности предприятия / В.В. Ковалев, О.Н. Волкова. М.: ООО «ТК Велби», 2002. - 424 с.

44. Козько В. Н. Клинико-адаптационные механизмы и возможности их коррекции у больных разного возраста, больных дизентерией: автореф. дис.: д-ра мед. наук / В.Н. Козько. К., 1995. - 25 с.

45. Коршунов В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника / В.М.Коршунов, Б.А.Ефимов, А.П.Пикина // Микробиология. 2000. - № 3. - С. 86-91.

46. Крючин С.В. Производство отечественного соевого белкового концентрата / С.В. Крючин. С.В. Назаренко // Пищевая промышленность. 2001. - № 9. - С. 58-59.

47. Кудрявцева А. А. Пищевые добавки и продовольственная безопасность / АЛ. Кудрявцева, Л.И. Шокина // Пищевые ингредиенты: сырье и добавки. 2000. - № 1. - С. 4-8.

48. Кудряшова О.А. «ИПСО-МРД» уникальные свойства соевого белка / О.А. Кудряшова, Е.В. Танаева // Пищевые ингредиенты: сырье и добавки. - 2001. - № 2. - С. 64-65.

49. Кузьминский Р.В. Соя в пищевых продуктах / Р.В. Кузьминский, В.Н. Мыриков // Пищевая промышленность. 1997. - № 6. - С. 64-65.

50. Кушугулова А.Р. Методы генотипического анализа лактобацилл / А.Р. Кушугулова и др. // Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М„ 2004. С. 84-85.

51. Ладодо К.С. О новых продуктах на основе изолята белка сои / К.С. Ладодо. М., 2002. - 12 с.

52. Левицкий А.В. Выделение и биологические свойства соевых изофлавонов / А.В. Левицкий и др. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2001. - № 9. - С. 38-41.

53. Леонтьева О.Ю. Клинико-микробиологическая оценка применения аципола и бифацида при лечении ОКИ у детей раннего возраста: автореф. дис.: канд.мед.наук / О.Ю. Леонтьева. М., 1998. - 28 с.

54. Литницкий В.И. Соевые продукты в лечебном питании. (Рекомендации диетолога, диеты, рецептуры блюд) / В.И. Литницкий.- М.: Прометей, 1999. 38 с.

55. Лишаева Л.Н. Экономические аспекты производства и переработки сои в России / Л.Н. Лишаева, Т.Н. Турчина // Масложировая промышленность. 2000. - № 4. - С. 11-13.

56. Лобзин Ю.В. Клиника, диагностика и лечение актуальных кишечных инфекций / Ю.В. Лобзин, В.М. Волжанин, С.Н. Захаренко.- С.Пб.: ИКФ «Фолиант», 1999. 122 с.

57. Лунев A.M. Разработка рациональной технологии использования соевой сыворотки: автореф.дис. (05.18.01; 05.18.04) / A.M. Лунев. -Краснодар, 2002. 24 с.

58. Лусас Э. Производство и использование соевых белков / Э. Лусас. Ки Чун Ри. М.: Колос, 1998. - 54 с.

59. Любчанский З.А. Продукты из сои решение проблемы дефицита белка / З.А. Любчанский // Пищевая и перерабатывающая промышленность Казахстана. - 1999.- № 4. - С. 29-30.

60. Лянная A.M. Биологические и экологические особенности микробов рода Bifidobacterium / A.M. Лянная, М.М. Интизаров. Е.Е. Донских // Сб.науч.тр. М., 1986. - С. 32-28.

61. Матеров И. Факторы развития «новой экономики» в России / И. Матеров // Экономист. 2003. - № 2. - С. 3-11.

62. Мельникова И.Ю. Витафлор пробиотик выбора в педиатрической практике / И.Ю. Мельникова, Л.П. Петров // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. - С. 59-60.

63. Мечников И.И. Этюды оптимизма / И.И. Мечников. М. 1888. -327 с.

64. Мироненко И.М. Производство заменителей молока на соевой основе / И.М. Мироненко, О.А. Куи // В кн.: Низкотемпературные и пищевые технологии XXI века. Материалы международной научно-технической конференции. 6-7 июня 2001 г. С.Пб. - С. 291.

65. Михайлова Н.А. Иммуномоделирующее влияние культур Bacillus subtilis / Н.А. Михайлова и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 66-67.

66. МУ 4.2.727-99. Гигиеническая оценка сроков годности пищевых продуктов.

67. МУК 2.3.2.721-98. Определение безопасности и эффективности БАД.

68. МУК 2.3.2.971-00. Порядок санитарно-эпидемиологической экспертизы технических документов на пищевые продукты.

69. МУК 4.2.577-96. Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.

70. МУК 4.2.999-00. Определение количества бифидобактерий в кисломолочных продуктах.

71. МУК 4.2.999-00. Определение количества бифидобактерий в кисломолочных продуктах.

72. Несчисляев В.А. Модуляция бактериальных культур в производстве пробиотиков / В.А. Несчисляев // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания.

73. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 41-42.

74. Новик Г.И. Биологическая активность микроорганизмов-пробиотиков / Г.И. Новик и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М. 2004. С. 194195.

75. Онищенко Г.Г. Современные подходы к оценке безопасности генетически модифицированных источников пищи, опыт изучения соевых бобов линии 40-3-2 / Г.Г. Онищенко и др. // Вопросы питания. 1999. - № 5/6. - С. 3-8.

76. Осипов Г.А. Вариации состава жирных кислот пробиотических видов микроорганизмов и их использование для контроля производственных штаммов и готовой продукции / Г.А. Осипов //

77. Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 90-91

78. Осипов Г.А. К вопросу о нозологической специфичности дисбактериоза / Г.А. Осипов и др. // Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 51-52.

79. Пайков B.J1. Хронические энтериты и колиты у детей / B.JI. Пайков. -С.Пб, 1998.-327 с.

80. Пелих А.С. Экономика предприятия / А.С. Пелих, В.М. Джуха и др.. Ростов н/Д.: «Феникс», 2002. - 416 с.

81. Першин Б.Б. Иммунологический прогноз эффективности соевого питания / Б.Б. Першин, С.Н. Кузьмин, А.Н. Чередеев // Вопросы питания. 1999. - № 4. - С. 14-20.

82. Першин И.Б. Иммунологический прогноз эффективности соевого питания / И.Б. Першин и др. // Вопросы питания. 1999. - № 4. - С. 19-20.

83. Поберий И.А. Биоспорин: новые аспекты в механизме его действия и применения /И.А. Поберий и др. // Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 63-64.

84. Подобедов А.В. Уникальные свойства продуктов питания с соевыми белковыми компонентами / А.В. Подобедов. В.И. Тарушкин // Хранение и переработка сельхозсырья. 1999. - № 6. - С. 22-26.

85. Покровский В.И. Сальмонеллезы / В.И. Покровский, Б.Л. Черкасский. М., 1995. - 224 с.

86. Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании. Постановление Правительства РФ № 554 от 24.07.2000 г.

87. Полторак А. Основы интеллектуальной собственности / А. Полторак. М.: ИД «Вильяме», 2004. - 208 с.

88. Поспелова В.В. Результаты доклинического изучения пробиотика «Бифидин» / В.В. Поспелова и др. // Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. — С. 76-77.

89. Поспелова В.В. Теоретическое обоснование и экспериментальные данные к проблеме конструирования комплексных биологическихпрепаратов с живыми бифидобактериями / В.В. Поспелова и др. // Сб.науч.тр. М., 1986. - С. 60.

90. Приказ Минздрава РФ № 325 от 15.08.2001 г. «О санитарно-эпидемиологической экспертизе продукции».

91. Приказ Минздрава РФ № 326 от 15.08.2001 г. «О порядке проведения санитарно-эпидемиологических экспертиз, расследований, обследований, исследований, испытаний и токсикологических, гигиенических и иных видов оценок».

92. Рудавская А.Б. Использование сои в биологически полноценных сырьевых компонентах / А.Б. Рудавская, Н.В. Притульская // Пищевая промышленность. -2001. № 4. - С. 18.

93. Рябцева С.А. О классификации бифидогенных факторов / С.А. Рябцева // Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 38.

94. Савкин Н.Н. Производство напитков из сои / Н.Н. Савкин // Молочная промышленность. 2000. - № 10. - С. 23.

95. Санитарные правила СП 1.1.1058-01. Организация и проведение производственного контроля за соблюдением санитарных правил и выполнением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий.

96. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов.

97. СанПиН 2.3.2.1290-03. Гигиенические требования к организации производства и оборота БАД.

98. Сборник рекомендаций по использованию соевых белков, пищевых ингредиентов для пищевой промышленности. М., 1999. - 77 с.

99. Середина Е.Ю. Клинико-лабораторное обоснование применения нового пробиотика у детей раннего возраста при диареях: автореф.дис.: канд. мед. наук / Е.Ю. Середина. М., 2002. - 42 с.

100. Серов А.В. Особенности получения пребиотика сиропа лактулозы из высококонцентрированных растворов лактозы / А.В.

101. Серов и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 27-28.

102. Сетко Н.П. О реакциях иммунной системы организма при комбинированном действии химических агентов / Н.П.Сетко, Г.Н.Желудева, С.Г.Мазаева // Гигиена и санитария . 1989. - № 3. -С. 24-26.

103. Сидоренко Г.И. Экология человека и гигиены окружающей среды на пороге XXI века / Г.И.Сидоренко, С.М.Новиков // Гигиена и санитария. 1999. - № 5. - С. 3-6.

104. Синявский Ю.А. Перспективы использования сои в питании человека / Ю.А. Синявский // Пищевая и перерабатывающая промышленность Казахстана. 2000. - № 1. - С. 44-46.

105. Соевые продукты пища нового тысячелетия // Пищевая промышленность. 1997. - № 12. - С. 18.

106. Сорокулова И.Б. Изучение безопасности пробиотических штаммов бацилл / И.Б. Сорокулова и др. // Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 25-26.

107. Соя пищевой продукт и лекарство // Пищевая и перерабатывающая промышленность Казахстана. - 2000. - № 4. - С. 3-5.

108. Технология и процессы пищевых производств / Кемеровский технологический институт пищевой промышленности. Кемерово. 1999.- 190 с.

109. Титов В.И. Анализ и диагностика финансово-хозяйственной деятельности предприятия / В.И. Титов. М.: Дашков и Ко, 2005. - С. 352.

110. Тутельян В. А. Медико-биологическая оценка безопасности белкового концентрата, полученного из генетически модифицированной сои. Биохимические исследования / В.А. Тутельян и др. // Вопросы питания. 1999. - № 5/6. - С. 9-12.

111. Федеральный закон от 2.01.2000 г. №-29-ФЗ «О качестве и безопасности пищевых продуктов».

112. Федеральный закон от 30.03.1999 г. №-52-ФЗ «О качестве санитарно-эпидемиологического благополучия населения».

113. Функциональная эффективность различных кисломолочных и пробиотических продуктов / С.А. Шевелева и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 54-55.

114. Функциональные свойства соевых белковых концентратов / О.С. Токаев и др. // Мясная индустрия. 2001. - № 8. - С. 29-30.

115. Цветкова JI.H. Результаты биокоррскционной поддержки у детей, получавших антигеликобактерную терапию / JT.H. Цветкова и др. // Детская гастроэнтерология. 2002. - С. 482-484.

116. Чупринина Р.П. Доклинические испытания новых пробнотиков / Р.П. Чупринина и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики ифункциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 4-5

117. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание / Б.А. Шендеров. М., 1998. - 285 с.

118. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание / Б.А. Шендеров // Пробиотики. пребиотики. синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 56-57.

119. Шерстобитов В.В. Линия производства кормового соевого молока / В.В. Шерстобитов, В.Н. Лысый, В.А. Ежелев // Молочная промышленность. 2001. - № 7. - С. 47-49.

120. Шершнев Е.С. Соевые бобы ключевое звено современного кормопроизводства и повышения качества питания человека / Е.С. Шершнев и др. // Пищевая промышленность. - 1998. - № 8. - С. 3638.

121. Шершнев Е.С. Соевые бобы ключевое звено современного кормопроизводства и повышения качества питания человека / Е.С. Шершнев. А.А. Коротких, В.Г. Ларионов // Пищевая промышленность. - 1998. - № 8. - С. 36-42.

122. Шопенко В.Д. Финансово-организационный механизм инновационного бизнеса / В.Д. Шопенко // Финансы и кредит. 2004. - № 5. - С. 68-72.

123. Шухова Т.П. Применение препарата «Бифиформ» для восстановления микрофлоры кишечника детей раннего возраста /

124. Т.П. Шухова и др. // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004. С. 64-65.

125. Щенников С.Ю. Реинжиниринг бизнес-процессов. Экспертное моделирование, управление, планирование и оценка / С.Ю. Щенников. М.: Ось-89, 2004. - 288 с.

126. Щербакова Э.Г. К механизмам действия пробиотиков, пребиотиков и их сочетаний / Э.Г. Щербакова // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб.мат.Междун.конф. М., 2004.-С. 200-201.

127. A heat labile soluble factor from Bacteroides thetaiotaomicron VPI-5482 specifically increases the galactosylation pattern of HT29-MTX cells / / M. Freitas et al. // Cell Microbiol 3(5):289-300. 2001.

128. Antonie J.M. Effect of a specific probiotic (Bifidobacterium sp. DN-173 010) on gut transit time in elderly / J.M. Antonie // The Faseb Journal, vol. 14, number 4: 160.11.-2000.

129. Antord J. P. Guide antimicrobial therapy / J. P. Antord, D.N. Gilbert, M.A. Sande. Vienna, VA (USA): Antimicrobial therapy, Inc., 1996. - 13 P

130. Aranda-Michel J. Acute diarrhea: a practical review / J. Aranda-Michel et al. // Amer J Med-1999. -Vol.106. P. 670-676.

131. Asperrilla M.O. Quinolone antibiotic inthe treatment of Salmonella infections / Asperrilla M.O. et al. // Rev. Infect. Dis. 1990. - Vol.12. -P. 873-889.

132. Babinska I. The effect of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. Administration on the morphology of the gastro-intestinal tract, liver and pancreas in piglets / Babinska I. et al. // Pol J Vet Sci.;8(l):29-35. -2005.

133. Banaszkiewicz A. Ineffectiveness of Lactobacillus GG as an adjunct to lactulose for the treatment of constipation in children: a double-blind, placebo-controlled randomized trial / A. Banaszkiewicz, H. Szajewska // Pediatr. 146(3):364-9.

134. Benno Y. The intestinal microflora of infants: composition of fecal flora in breast-fed and bottle-fed infants / Y. Benno et al. // Microbiol.Immunol. 1984. - Vol. 28.-№ 9. - P. 975-986.

135. Bongaerts G.P. . Preventive and curative effects of probiotics in atopic patients / G.P. Bongaerts, R.S. Severijnen // Med Hypotheses.64(6):1089-92.

136. Bouvier M. Effects of consumption of a milk fermented by the probiotic strain Bifidobacterium animalis DN-173 010 on colonic transit times in healthy humans / M. Bouvier et al. // Bioscience Microflora. Vol. 20 (2): 43-48.-2001.

137. Brazilian A. Probiotics reducing the risk of an onset of antibiotic-associated diarrhea / A Brazilian // Journal Yoghurts & fermented milks. -September 2005.

138. Clean recovery and HRGS-MS/HRGS-FTIR identification of volatiles from soybean / P. Damiani. L. Cossignnani // Ital.Journal of food Science. -2000.-Vol. 12,-№2.-P. 175-182.

139. Di Giacinto C. Probiotics ameliorate recurrent Thl-mediated murine colitis by inducing IL-10 and IL-10-dependent TGF-beta-bearing regulatory cells / C. Di Giacinto etal.// J Immunol. 15; 174(6):3237-46.

140. DNA-Extractionsmethode fur den nachweis gentechnischen veraderter Soja in Sojalecithin / A. Wuz, H. Ruggeberg // DLR.Deutche Lebensminel. "Rundschau" - 1998. - Bd 94. - № 5. - S. 159-161.

141. Dr. Jean Pierre Grill & Prof. Germain Trugnan. Of mice and men. and bacteria / Dr. Jean Pierre Grill & Prof. Germain Trugnan // UMR Universite Paris VI, INSERM Journal Yoghurts & fermented milks. September 2005 Letter №24/538

142. Duez H. A colony — immunobloting method for quantitative detection of a Bifidobacterium animalis probiotic strain in human faeces / H. Duez et al. // Journal of Applied Microbiology. 2000.88:1019-27.

143. DuPont H.L. et al. Guidelines on acute infectious diarrhea in adults / H.L. DuPont et al. // Amer J Gastro. 1997. - Vol. 92. - P. 1962-1975.

144. Edlund C. Effect on the human normal microflora of oral antibiotics for treatment of urinary tract infection / Edlund C. et al. // J.Antimicrob.Chemoter. 2000. - Vol. 46 Suppl.Sl. - P. 41^11.

145. Edlund С. Effect on the human normal microflora of oral antibiotics for treatment of urinary tract infection / C. Edlund, C.E. Nord // J.Antimicrob.Chemoter. 2000.- Vol.46 Suppl.Sl.- P.41-41.

146. Edlund C. Effect on the human normal microflora of oral antibiotics for treatment of urinary tract infection / C. Edlund, C.E Nord. // J.Antimicrob.Chemoter. 2000. - Vol.46 Suppl.Sl. - P.41-42.

147. Fanaro S. Intestinal microflora in early infancy: composition and development / S. Fanaro et al. // Acta Paediatr. 2003- Vol.91. Suppl-P.48-55.

148. Fanaro S. Intestinal microflora in early infancy: composition and development / S. Fanaro et al. // Acta Paediatr. 2003- Vol.91. Suppl-P.48-55.

149. Floch M.H. Use of diet and probiotic therapy in the irritable bowel syndrome: analysis of the literature / M.H. Floch // Clin Gastroenterol. 39(5 Suppl):S243-6.

150. Gionchetti P. Prophylaxis of pouchitis onset with probiotic therapy: a double-blind, placebo-controlled trial / P. Gionchetti et al. // Gastroenterology. 124(5): 1202-9.

151. Goodman L.J. Empiric antimicrobial therapy of acquired acutr diarrhea in urban adults / L.J. Goodman et al. // Arch. Intern. Med. 1990. -Vol.150.-P. 541-546.

152. Han S.Y. Hepatoprotective effect of lactic acid bacteria, inhibitors of beta-glucuronidase production against intestinal microflora / S.Y. Han et al. // Arch Pharm Res. 28(3):325-9.

153. Ishida Y. Clinical effects of Lactobacillus acidophilus strain L-92 on perennial allergic rhinitis: a doubleblind, placebo-controlled study / Y. Ishida et al. // Dairy Sci. 88(2):527-33.

154. Ishikawa H. Randomized trial of dietary fiber and Lactobacillus casei administration for prevention of colorectal tumors / H. Ishikawa et al. // Int J Cancer.20;l 16(5):762-7.

155. Isolato protecio di soia per lfavorazione della came // Industria Alimentara. 1999. - Vol. 38. - № 382. - P. 726.

156. Isselbacher, Kurt J. Irritable bowel syndrome: the possible benefits of probiotics / Kurt J. // Post Graduate Medicine. Vol.117, no.5. - 2005.

157. Kliegman R.M. Oral probiotics reduce the incidence and severity of necrotizing enterocolitis in very low birth weight infants / R.M. Kliegman // Pediatr.l46(5):710.

158. Lewis S.J., Burmeister S. A double-blind placebo-controlled study of the effects of Lactobacillus acidophilus on plasma lipids / S.J. Lewis, S. Burmeister // Eur J Clin Nutr. 59(6):776-80.

159. Luyer M.D. Strain-Specific Effects of Probiotics on Gut Barrier Integrity following Hemorrhagic Shock / M.D. Luyer et al. // Infect Immun. 73(6):3686-92.

160. Madden J.A. Effect of probiotics on preventingdisruption of the intestinal microflora following antibiotic therapy: A double-blind, placebo-controlled pilot study / J.A. Madden // Int Immunopharmacol. 5:1091-7.

161. Marcone M.F. A comparative study of thermally induced conformational changes occuring in food-grade seed proteins / M.F. Marcone // Ital.Journal of Food Science. 1999. - Vol. 11. - № 3. - P. 193-206.

162. McFarland L.V. Risk factor for antibiotic-associated diarrhea / L.V. McFarland // Ann.Med.Intern. (Paris). 1998. - Vol. 149.- № 5. - P. 261266.

163. McFarland L.V. Risk factor for antibiotic-associated diarrhea / L.V. McFarland // Ann.Med.Intern. (Paris).- 1998.- Vol. 149,- № 5,- P.261-266.

164. Mead P.S. Escherichia coli 0157:H7 / P.S. Mead. P.M. Griffin // Lancet 1998.-Vol.352.-P. 1207-1212.

165. Meance S. A fermented milk with Bifidobacterium probiotic strain DN-173 010 shortened ого-fecal gut transit time in elderly / S. Meance et al. // Microb Ecol Health Dis. 2001. Accepted.

166. Medici M. Effect of fermented milk containing probiotic bacteria in the prevention of an enteroinvasive Escherichia coli infection in mice / M. Medici // J Dairy Res; 72(2):243-249.

167. Merk K. Lactobacilli bacteria-host interactions with special regard to the urogenital tract / K. Merk, C. Borelli. H.C. Korting // Int J Med Microbiol. 295(1):9-18.

168. Metchnikoff E. The Prolongation ot Life: Optimistic Studies / E. Metchnikoff. The English translation. Mitchell PC. ed. 1908; New York:GP Putnam's Sons. - 1908

169. Microbial-host interactions specifically control the glycosylation pattern in intestinal mouse mucosa / M. Freitas et al. // Histochem Cell Biol, 118(2): 149-61. 2002.

170. Milocco C. Evaluation of diosmectite in acute diarrhea in children / C. Milocco, A. Bolis. V. Rizzo. // Pediatr Med Chir. 1999. - Vol. 21. -P. 129-33.

171. Myllyluoma E. Probiotic supplementation improves tolerance to Helicobacter pylori eradication therapy a placebocontrolled, double-blind randomized pilot study / E. Myllyluoma // Aliment Pharmacol Ther. 15;21(10):1263-72.

172. Nava G.M. Effective probiotic therapy / G.M. Nava, M.P. Castaneda, M.A.J uarez // ClinNutr. 2005 24(3):478.

173. Nishijima K. Probiotics affects vaginal flora in pregnant women, suggesting the possibility of preventing preterm labor / К .Nishijima, K. Shukunami, F. Kotsuji // J Clin Gastroenterol. 39(5):447-8.

174. СШяЫлу L. Lactobacillus and Bifidobacterium in irritable bowel syndrome: Symptom responses and relationship to cytokine profiles / L. O'Mahony ct al. Gastroenterology 128:541. - 2005.

175. Pirkka V. Kirjavainen. The ability of parabiotic bacteria to bind to human intestinal mucus / Pirkka V. Kiijavaincn, Arthur C. Ouwehand, Erika Isolauri and Seppo J. H Salminen FEMS Microbiology Letters, 1998,167:2:185-189

176. Qin ILL. Effect of lactobacillus on the gut microflora and barrier function of the rats with abdominal infection i RL. Qin et al. // World J Gastroenterol. 11(17):2591 -6.

177. Reid B. Use of Lactobacillus to prevent infection by pathogenic bacteria t B. Reid & J. Burton // Microbes and Infection 4:319-324, -2002,

178. Reid G. Oral Probiotics for Maternal and Newborn Health / G. Reid // J Clin Gastroenterol. 39(5):353-354.

179. Saxclin M. Probiotic and other functional microbes: from markets to mechanisms/ M, Saxclin el al. // Curr Opin Biouchnol, 1б(2):204-11.

180. Spillcr R, Probiotics: An ideal anti-inflammatory treatment for IBS? / R. Spiller//Gastroenterology 128:783, 2005.

181. Sullivan A. Effect of antimicrobial agents on the ecological balance of human microflora / A. Sullivan |et al. // Lancet Infeci.Dts. 200L - Vol. 1-J62.-P, 101-114.

182. Sullivan A. Effect of antimicrobial agents on the ecological balance of human microflora / A, Sullivan, С Edlurad, C-E. Nord It Lancet Infcct-Dis.- 2001.-Vol.1.- Jfc 2,- P 101-114.

183. Sullivan A. Effect of antimicrobial agents on the ecological balance of human microflora i A. Sullivan, C. Edlund. C-E Nord // Lancet Infect.Dis,- 2001. Vol..-№2.-P. 101—114.

184. UFDA sui benefici della sosa per il euore И Industria Alimenuua, 1999. - Vol. 36. - № 377. - P. 70.

185. Van Der Werf MJ, Bifidobacteria: gcnelic modificalion and the study of «heir role in the colon / MJ, Van Per Werf // J Agric Food Chem 49<1):37Й-383.

186. Van Loo J. The SYNC AN project: goals, setup, first results and settings of the human intervention study / J. Van Loo let al. // Br J Nutr,93 Suppl l:S9bS.

187. Weston S, Effects of probiotics on atopic dermatitis: a randomised controlled trial / S, Weston el al) ft Arch Dis Child, 90(9)892-7.