Роль цитогенетических и молекулярных исследований в диагностике и терапии миелоидных неоплазий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, доктор биологических наук Мартынкевич, Ирина Степановна

• Мартынкевич, Ирина Степановна
• доктор биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации доктор биологических наук Мартынкевич, Ирина Степановна

ВВЕДЕНИЕ------------------------------------------------------------------------- 7-

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Современное представление о роли генетических исследований в диагностике и терапии больных гемобластозами

1.1. История развития генетики------------------------------------------- стр. 16

1.2. Генетические методы исследования, используемые в диагностике и мониторинге минимальной резидуальной болезни у пациентов с опухолевыми заболеваниями кроветворной ткани----------------- стр. 18

1.3. Генетические основы гематологических неоплазий----------- стр. 22

1.4. Диагностическая и прогностическая значимость генетических маркеров, определяемых при миелоидных неоплазмах

1.4.1. Значимость генетических методов исследования при целенаправленной (таргетной) терапии хронического миелолейкоза ингибиторами тирозинкиназ-------------------------------------------стр. 25

1.4.2. Роль мутации У617Р в гене МК-2, обнаруженной при РЬ-отрицательных хронических миелопролиферативных заболеваниях ---------------------------------------------------------------------------------стр. 38

1.4.3. Хромосомные и молекулярные маркеры в диагностике и определении прогностических особенностей заболевания при миелодиспластическом синдроме-------------------------------------стр. 50

1.4.4. Диагностическая и прогностическая роль генетических аномалий у больных острыми миелоидными лейкозами---------------------стр. 61

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика больных-------------------------------стр. 75пациентов -----------------------------------------------------------------стр. 128

4.3. Результаты цитогенетических исследований у больных Ріі-отрицательными хроническими миелопролиферативными заболеваниями

--------------------------------------------------------------------------------стр. 132

ГЛАВА 5. ЗНАЧИМОСТЬ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ТЕРАПИИ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОГО СИНДРОМА (МДС)

5.1. Клинико-морфологическая характеристика больных МДС стр. 136

5.2.Результаты цитогенетических исследований пациентов с МДС ------------------------------------------------------------------- стр. 137

5.3. Изучение мутационного статуса больных МДС--------- стр. 144

ГЛАВА 6. РОЛЬ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ДИАГНОСТИКЕ И ТЕРАПИИ ОСТРОГО МИЕЛОИДНОГО ЛЕЙКОЗА (ОМЛ)

6.1. Общая характеристика группы пациентов с ОМЛ .стр. 154

6.2. Кариотип больных ОМЛ - важный прогностический маркер ------------------------------------------------------------------- стр. 155

6.3. Возрастные особенности распределения кариотипа у больных ОМЛ -----------------------------------------------------------------------стр. 159

6.4. Клинико-морфологическая характеристика группы пациентов с ОМЛ, подвергшихся мутационному анализу ----------------------------- стр. 171

6.5. Результаты изучения мутационного статуса больных ОМЛ-стр.176-

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ — стр. 183

ВЫВОДЫ -----------------------------------------------------------------------стр. 218

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль цитогенетических и молекулярных исследований в диагностике и терапии миелоидных неоплазий»

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

В основе развития гемобластозов лежат генетические изменения в клетке - предшественнице гемопоэза, приводящие к торможению дифференцировки кроветворной клетки, нарушению механизмов регуляции клеточного цикла и неконтролируемой пролиферации клеток. Все потомки такой клетки-предшественницы несут одни и те же генетические изменения, иногда приобретая и новые в процессе опухолевой прогрессии.

Генетические изменения при заболеваниях системы крови обычно представлены мутациями хромосомного типа (транслокациями, инверсиями, делециями, наличием дополнительных хромосом и другими) и могут быть выявлены методами стандартной цитогенетики и молекулярной генетики. В последние годы было показано, что генетические изменения (тандемные повторы и мутации генов р53, NPM1, FLT3, Ras) можно обнаружить только с помощью молекулярно-биологических методов [Mrozek К., 2007, Czibere А., 2009].

Хромосомные и/или молекулярно-генетические перестройки, играя важную роль в патогенезе гематологических неоплазий, определяют биологические свойства лейкозных клеток и, соответственно, морфологические, иммунологические и клинические особенности заболевания. Большинство наиболее распространенных хромосомных перестроек имеют самостоятельное прогностическое значение, как при миелоидных, так и при лимфоидных вариантах опухолевых заболеваний. Кроме того, данные цитогенетических и молекулярно-биологических исследований при ряде заболеваний системы крови являются одним из главных критериев при выборе адекватной терапии.

Генетическая диагностика опухолевых заболеваний системы крови в настоящее время является одним из основных методов, определяющих прогностические и диагностические особенности заболевания. Высокоспецифичные хромосомные аберрации изучены достаточно хорошо, однако вариабельность течения и прогрессии заболевания неоднородны у больных в пределах одинаковых цитогенетических нарушений. В то же время, согласно сообщениям различных авторов, информационная ценность мутаций ряда генов остается неопределенной [Thiede С., 2006, Falini В., 2005].

Вместе с тем изменение тактики терапевтических режимов при опухолевых заболеваниях кроветворной системы и введением в практику новых препаратов направленного действия («таргетной» терапии), мишенью для которых являются химерные гены (BCR/ABL, PML/RARa) привели к повышению роли молекулярно-генетических исследований. В связи с этим становится актуальной необходимость разработки алгоритма генетической диагностики гемобластозов, который позволит получить наиболее полную картину заболевания. Следовательно, алгоритм диагностики поможет адекватно верифицировать вариант заболевания, определить прогностические особенности генетических маркеров и тем самым выбрать рациональную терапию, что, в свою очередь, позволит получать у больных длительную безрецидивную выживаемость.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Определить значимость и место цитогенетических и молекулярных аберраций в верификации форм, оценке прогностических особенностей течения и в алгоритме генетической диагностики миелоидных неоплазий.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Разработать алгоритм генетической диагностики больных различными вариантами миелоидных неоплазий.

2. Оценить прогностическую значимость дополнительных клональных хромосомных аберраций у пациентов с хроническим миелолейкозом на различных этапах целенаправленной терапии.

3. Выявить механизмы и природу происхождения клональной эволюции у больных хроническим миелолейкозом, получающих ингибиторы тирозинкиназ.

4. Определить частоту встречаемости мутации ¥617Г в гене 1АК2 и прогностические особенности течения заболевания в зависимости от типа цитогенетических аберраций у пациентов с РЬ-отрицательными хроническими миелопролиферативными заболеваниями.

5. Исследовать прогностическую значимость кариотипа с учетом возраста больных миелодиспластическим синдромом и острыми миелобластными лейкозами, обнаруженными в дебюте заболевания.

6. Изучить влияние на прогноз мутаций генов ЫРМ1, РЬТЗ у пациентов с миелодиспластическим синдромом и острыми миелобластными лейкозами.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Разработанный алгоритм генетической диагностики позволяет эффективно верифицировать формы заболевания и проводить адекватную терапию пациентов с миелоидными неоплазиями.

2. Возраст и кариотип являются самостоятельными прогностическими маркерами у больных миелодиспластическим синдромом и острыми миелобластными лейкозами.

3. Детекция мутаций генов NPM1, FLT3 у пациентов с миелодиспластическим синдромом и острыми миелобластными лейкозами способствуют определению прогностических особенностей заболевания.

4. Клональная эволюция в Ph-положительных клетках у больных хроническим миелолейкозом, обнаруженная до и на фоне терапии ингибиторами тирозинкиназ, является прогностически неблагоприятным фактором. В то время, как дополнительные клональные хромосомные аберрации, выявляемые в Ph-отрицательных клетках, значимы только для бессобытийной выживаемости пациентов.

5. Мутация V617F в гене JAK2 является высокоспецифичным маркером Ph-отрицательных хронических миелопролиферативных заболеваний и включение данного теста в алгоритм диагностики делает распознавание этих заболеваний более достоверным.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

В настоящем исследовании впервые:

- разработан алгоритм генетической диагностики различных вариантов миелоидных неоплазий.

- установлено, что клональная хромосомная эволюция, обнаруженная на различных этапах терапии в Ph-положительных клетках, достоверно ухудшает прогноз заболевания у пациентов с хроническим миелолейкозом, в то время как дополнительные клональные хромосомные аберрации в Ph-отрицательных клетках являются статистически значимыми только для бессобытийной выживаемости больных.

- проведен ретроспективный FISH анализ клеток костного мозга пациентов с XMJI, получающих целенаправленную терапию, с выявленными дополнительными хромосомными аберрациями в Ph-отрицательных клетках, позволивший определить природу происхождения клональной эволюции.

- определены новые данные о прогностическом потенциале мутаций NPM1 и FLT3 у больных миелодиспластическим синдромом и острыми миелобластными лейкозами, свидетельствующие о благоприятном (NPM1) или агрессивном (.FLT3) течении этих процессов.

- выявлена частота встречаемости и распределение между вариантами заболевания мутации V617F в гене JAK2 у пациентов с Ph-отрицательными хроническими миелопролиферативными заболеваниями Северо-Западного региона РФ.

- показана необходимость проведения параллельного цитогенетического и молекулярно-генетического исследований у больных Ph-отрицательными хроническими миелопролиферативными заболеваниями с целью обнаружения прогностически значимых хромосомных аберраций.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ

- Разработанный алгоритм генетической диагностики миелоидных неоплазий помогает адекватно верифицировать их различные варианты и прогностические особенности.

- Обнаруженные комплексные нарушения кариотипа, аберрации 5 и 7 хромосом, перестройки 17 хромосомы являются неблагоприятными аномалиями кариотипа и позволяют прогнозировать агрессивное течение миелоидных неоплазий и раннее развитие рецидива.

- Наличие мутаций генов ЫРМ1 и ЕЬТЗ у больных миелодиспластическим синдромом и острыми миелобластными лейкозами свидетельствуют о благоприятном или агрессивном течении заболеваний.

- Высокая частота встречаемости мутации V617Е в гене у пациентов с РЬ-отрицательными хроническими миелопролиферативными заболеваниями убедительно доказывает целесообразность включения данного маркера в алгоритм диагностики заболевания.

- Обнаружение дополнительных хромосомных аберраций у больных хроническим миелолейкозом, получающих терапию ингибиторами тирозинкиназ, позволяет верифицировать терапию заболевания.

АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ

Полученные результаты докладывались на:

- 3 Всероссийском съезде гематологов, Санкт-Петербург, 1996;

- 6 конференции молодых ученых «Вопросы клинической и трансфузионной медицины» Киров, 1999; научно-практической конференции «Гематологический диагноз в лаборатории» Санкт-Петербург, 1999;

- Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 70-летию института "Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии", Санкт-Петербург, 2002г.;

- Всероссийской научно-практической "Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии", Санкт-Петербург, 2004г.

- Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Актуальные вопросы клинической гематологии", Москва, 2005 г.;

Международной конференции «Молекулярно-генетические аспекты современной терапии гемобластозов», Кисловодск, 2006;

- Международной конференции «Современная терапия ХМЛ», Киев, 2008;

- Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов», Санкт-Петербург, 2008г.;

- IV съезде медицинских генетиков Украины с международным участием, г. Львов, 2009;

- Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», Санкт, Петербург, 2009г.;

- VI симпозиуме «Биологические основы терапии онкологических и гематологических заболеваний», Москва, 2009 г.;

- Международной конференции «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов», Санкт-Петербург, 2009г.;

- Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии», Санкт, Петербург, 2010г.;

- 15th Congress of the European Hematology Association, Barcelona, Spain, 2010;

Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов», Санкт-Петербург, 2010г.;

- VI съезде Российского общества медицинских генетиков, Ростов-на-Дону, 2010г.

- V Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в гематологии» - Новосибирск, 18-19 ноября 2010 г.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

Результаты исследования широко используются в диагностике и оценке прогноза заболевания у больных гематологическими неоплазиями, находящимися на лечении в ФГУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии», Санкт-Петербургском государственном медицинском университете им. Павлова, ФГУ «Федеральный центр сердца, крови, эндокринологии» им. Алмазова, Городской больнице №15, Городской больнице №17, Детской городской больнице №1, Ленинградской клинической областной больнице, в ряде областных клинических больниц Северо-Западного региона Российской Федерации. Полученные данные используются при чтении лекций и проведения семинаров на кафедре медицинской генетики в Медицинской академии последипломного образования (г.Санкт-Петербург). Полученные результаты исследования легли в основу изданных 2 методических рекомендаций для врачей гематологов.

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликованы 87 печатных работ, утверждено 3 пособия для врачей.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 241 странице и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 70 рисунками, 23 таблицами. Список литературы включает 213 источников отечественной и зарубежной литературы.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Мартынкевич, Ирина Степановна

ВЫВОДЫ.

1. Генетические методы исследования должны быть включены в алгоритм диагностики и мониторинга терапии миелоидных заболеваний, что позволит не только верифицировать вариант и прогнозировать течение заболевания, но и достоверно отслеживать минимальную резидуальную болезнь.

2. Установлено, что мутация V617F в гене JAK2 является высокоспецифичным диагностическим маркером пациентов с Ph-отрицательными хроническими миелопролиферативными заболеваниями и встречается у 83,6% больных истинной полицитемией, у 46,4% - эссенциальной тромбоцитемией и у 47,7% - первичным миелофиброзом. Обнаружение у пациентов комплексного кариотипа, аномалий 5 и/или 7 хромосом и перестройки 17 хромосомы свидетельствует о риске трансформации этих заболеваний в острый миелобластный лейкоз.

3. Вариантные транслокации t(9;22) у больных хроническим миелолейкозом, получающих целенаправленную терапию ингибиторами тирозинкиназ, не ухудшают прогноз заболевания.

4. Клональная хромосомная эволюция в Ph-положительных клетках обуславливает у пациентов с хроническим миелолейкозом неблагоприятный исход заболевания.

5. Дополнительные хромосомные аномалии в Ph-отрицательных клетках, обнаруженные на фоне терапии ингибиторами тирозинкиназ у больных хроническим миелолейкозом, не влияют на достижение пациентами большого цитогенетического ответа к 6 месяцам, полного цитогенетического ответа к 12 месяцам и не отражаются на общей их выживаемости, тогда как для бессобытийной выживаемости пациентов они статистически значимы, что обосновывает необходимость

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Генетические методы исследования у больных опухолевыми заболеваниями миелоидной ткани рекомендуются проводить как в дебюте, так и на различных стадиях его развития с целью установления диагноза, определения прогноза заболевания и мониторинга минимальной остаточной болезни.

2. У больных хроническим миелолейкозом, получающих терапию ингибиторами тирозинкиназ, с выявленными клональными хромосомными аберрациями в РЬ-отрицательных клетках, цитогенетический мониторинг необходимо проводить каждые 6 месяцев.

3. С целью верификации диагноза РЬ-отрицательных хронических миелопролиферативных заболеваний рекомендуется включить в алгоритм обследования больных определение мутации У617Р в гене МК2.

4. Детекцию мутаций в генах РЬТЗ и ЫРМ1 у больных миелодиспластическим синдромом и острыми миелоидными лейкозами необходимо проводить с целью определения прогноза заболевания.

27. Bacher U., Kern W., Schnittger S. et al. Populattion-based age-specific incidences of cytogenetic subgroups of acute myeloid leukemia. Haematologica 2005; 90: 1502 -1510.

28. Bacher U., Haferlach T., Kern W. et al. A comparative study of molecular mutations in 381 patients with myelodysplastic syndrome and in 4130 patients with acute myeloid leukemia // Haematologica. - 2007. - Vol. 92. - P. 744 -752.

29. Bain BJ. Classification of acute leukaemia: the need to incoiporate cytogenetic and molecular genetic information. //J Clin Pathol. - 1998 -51:420-3.

30. Baldus CD, Mrozek K, Marcucci G, Bloomfield CD. Clinical outcome of de novo acute myeloid leukaemia patients with normal cytogenetics is affected by molecular genetic alterations: a concise review. // Br J Haematol. - 2007 -137:387-400.

31. Barosi J., Bergamaschi C., Marchetti M. et al. JAK2V617F mutational status predicts progression to large splenomegaly and leukemic transformation in primary myelofibrosis. Blood 2007; 110: 4030-4036.

32. Barosi J., Bordessoule D., Briere J. et al. Response criteria for myelofibrosis with myeloid metaplasia: results of an initiative of the European Myelofibrosis Network (EUMNET). Blood 2005; 106: 2849-2853.

33. Bartram C., de Klein A., Hagemeijer A. Translocation of c-abl oncogene correlates with the presence of the Philadelphia chromosome in chronic myelocytic leukaemia. //Nature. - 1983 - 306: 277-80.

34. Baxter E.J., Scott L.M., Campbell P.J. et al. Acquired mutation of the tyrosine kinase JAK2 in human myeloproliferative disorders // Lancet - 2005. Vol. 365. P.1054-1061.

35. Bench AJ, Cross NC, Huntly BJ, Nacheva EP, Green AR. Myeloproliferative disorders. // Best Pract Res Clin Haematol. - 2001 - 14:531-51.

36. Bennett J.M., Catovsky D., Daniel M.T. et al. Proposals for the classification associations, and role in leukemic transformation. // Blood. - 2006 - 108:354855.

48. Cervantes F., Dupriez B., Pereira A. et al. New prognostic scoring system for primary myelofibrosis based on a study of the International Working Group for Myelofibrosis Research and Treatment. Blood 2009; 113: 2895-2901.

49. Cortes J., Jabbour E., Kantarjian H., et al. Dynamics of BCR-ABL kinase domain mutations in chronic myeloid leukemia after sequential treatment with multiple tyrosine kinase inhibitors. // Blood — 110:4005-4011 — 2007.

50. Cragie D. Case of disease of the spleen, in wich death took place in consequence of the presence of purulent matter in the blood. // Edinburg Medical and Surgical Journal - 1845 - 64: 400-413.

51. Cutler C.S., Lee S.J., Greenberg P. et al. A decision analysis of allogeneic bone marrow transplantation for the myelodysplastic syndromes: delayed transplantation for low-risk myelodysplasia is associated with improved, outcome // Blood. - 2004. - Vol. 104. - P. 579 - 585.

52. Czibere A., Bruns I., Junge B. et al Low RPS14 expression is common in myelodysplastic syndromes without 5q- aberration and defines a subgroup of patients with prolong survival // Haematologica. - 2009. - Vol. 94. - P. 1453 -1455.

53. Dameshek W. Some speculations on the myeloproliferative syndromes // Blood. - 1951 - Vol. 6. P. 372-375.

54. Deininger M. W. Nilotinib. I I Clin Cancer Res — 14:4027-4031 — 2008

55. Deininger M.W., Cortes J., et al. The prognosis for patients with chronic myeloid leukemia who have clonal cytogenetic abnormalities in Philadelphia chromosome-negative cells. // Cancer- 110:1509-1519 -2007.

56. Derolf A.R., Kristinsson S.Y., Andersson T.M.L. et al. Improved patient survival for acute myeloid leukemia: a population-based study of 9729 patients diagnosed I Sweden between 1973 and 2005. Blood 2009; 113: 3666 - 3673.

57. Deschler B., de Witte T., Mrtelsmann R., Lubbert M. Treatment decisionpatients 60 years of age or older with acute myeloid leukemia: results from Cancer and Leukemia Group B 8461. // Blood - 2006 - 108:63-73.

68. Fenaux P. Myelodysplasia syndromes. 11 Hematol Cell Ther. 1996;38:363-80.

69. Fernandez H.F., Sun, Z., Yao X. et al. Anthracycline dose intensification in acute myeloid leukemia. // N. Engl. J. Med. - 2009 - 361: 1249 - 1259.

70. Fidler C., Watkins F„ Bowen D. et al. NRAS, FLT3 and TP53 mutations in patients with myelodysplastic syndrome and a del(5q) // Haematologica. -2004. - Vol. 89. - P. 865 - 866.

71. Finazzi G, Caruso V, Marchioli R et al. Acute leukemia in Polycythemia vera: an analysis of 1638 patients enrolled in a prospective observational study. // Blood. - 2005 - 105:2664-70.

72. Frohling S., Schlenk R.F., Kayser S. et al. Cytogenetics and age are major determinants of outcome in intensively treated acute myeloid leukemia patients older than 60 years: results from AMLSG trial AML HD98-B. // Blood - 2006- 108: 3280-3288.

73. Fruchtman SM, Petitt RM, Gilbert HS, Fiddler G, Lyne A. Anagrelide: analysis of long-term efficacy, safety and leukemogenic potential in myeloproliferative disorders. // Leuk Res. - 2005 - 29:481-91.

74. Gangat N, Wolanskyj AP, McClure RF et al. Risk stratification for survival and leukemic transformation in essential thrombocythemia: a single institutional study of 605 patients. // Leukemia. - 2007- 21:270-6.

75. Garipidou V. and Seeker-Walker L. M. The use of fluorodeoxyuridine synchronization for cytogenetic mvestigatron of acute lymphobiasttc leukemia.//Cancer Genet. Cytogenet- 1991 - 52, 107-111

76. Georgii A, Buesche G, Kreft A. The histopathology of chronic myeloproliferative diseases. // Baillieres Clin Haematol. - 1998 - 11:721-49.

77. Goldman J.M. How I treat chronic myeloid leukemia in the imatinib era. // Blood - 110: 2828-2837 - 2007.

78. Goldman JM, Melo JV. Chronic myeloid leukemia - advances in biology and with acute myeloblasts leukemia in the early 21st century. // Haematologica -2008 -93:594-600.

161. Quintas-Cardama A., Cortes J. Molecular biology of BCR-ABL1-positive chronic myeloid leukemia. // Blood - 113: 1619-1630 - 2009.

162. Rane S. G., Reddy E. P. Janus kinases: components of multiple signaling pathways. // Oncogene. - 2005 - Vol. 19. P. 5662-5679.

163. Razelle Kurzrock, Hagor M. Kantarjian et al. Philadelphia Chromosome-Positive Leukemias: From Basic Mechanisms to Molecular Therapeutics. // Annals of Internal Medicine - 2003 - Vol. 138. P. 819-831.

164. Rege-Cambrin G, Mecucci C, Tricot G et al. A chromosomal profile of Polycythemia vera. // Cancer Genet Cytogenet. - 2007 - 25:233-45.

165. Rowley JD, Testa JR. Chromosome abnormalities in malignant hematologic diseases. // Adv Cancer Res — 1982 - 36:103^18.

166. Saharinen P., Vihinen M., Silvennoinen O. Autoinhibition of Jak2 tyrosine kinase is dependent on specific region in its pseudokinase domain. // Mol. Biol. Cell-2003- 14: 1448-1459.

167. Sandberg A.A. The chromosomes in human cancer and leukemia. // Elsevier North Holland. - 1995 - New York.

168. Sanz G., Nomdedeu B., Such E. et al. Independent impact of iron overload and transfusion dependency on survival and leukemic evolution in patients with myelodysplastic syndrome // Blood. - 2008. - Vol. 112. - Abstr. 640.

169. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosome. // Lancet - 1971 —2:970-975.

170. Sekeres M., Elson P., Kalaycio M. E et al. Time from diagnosis to treatment initiation predict survival in younger, but not older, acute myeloid leukemia patients // Blood. 2009. V. 113. P. 28 - 36.

171. Sekeres M. Treatment of MDS: something old, something new, something borrowed. // Hematology (Am.Soc.Hematol.Educ.Program.) - 2009 - 656 -663.

172. Shah N.P., Kantarjian H.M., Kim D.W., et al. Intermittent target ingibition with dasatinib 100 mg once daily preserves efficacy and improves tolerability in imatinib-resistant and -intolerant chronic-phase chronic myeloid leukemia. // J Clin Oncol —26:3204-3212- 2008.

173. Sherbenou D.W., Wong M.J., Humayun A., et al. Mutations of the Bcr-Abl kinase domain occur in a minority of patients with stable complete cytogenetic response to imatinib. // Leukemia — 21:489-493 — 2007.

174. S hi h L.Y., Lin T.L., Wang P.N. et al. Internal tandem duplication of fms-like tyrosine kinase 3 is associated with poor outcome in patients with myelodysplasia syndrome // Cancer. - 2004. - Vol. 101. - P. 989 - 998.

175. Shi h LY, Lin TL, Wang PN et al. Internal tandem duplication of fms-like tyrosine kinase 3 is associated with pooroutcome in patients with myelodysplasia syndrome. Cancer. 2004;101:989-98.

176. Shtivelman E., Lifshits B., Gale R.P., Canaani E. Fused traskript of abl and bcr genes in chronic myelogenous leukemia. //Nature - 1985 - 315: 550-554.

177. Soverini S., Baccarani M., Iaccobucci I, et al. Resistance to tyrosine kinase inhibitor in Philadelphia chromosome-positive leukemias: Which mutations matter? // Clin Leukemia - 1:223-228 - 2007.

178. Soverini S., Grani A., Colarossi S., et al. Long-term mutation follow-up of Philadelphia chromosome-positive leukemia patients treated with second generation tyrosine kinase inhibitors after imatinib failure shows that newly acquired BCR-ABL kinase domain mutations leading to relapse are mainly detected during the first year. // Blood — 112:737-738 — 2008.

179. Staudt LM. Molecular diagnosis of the hematologic cancers. // N Engl J Med. -2003 -348:1777-85.

180. Steensma D.P., Dewald G.W., Lasho T.L. et al. The JAK2V617F activating tyrosine kinase mutation is an infrequent avent in both "atypical" myeloproliferative disorders and the myelodysplastic syndrome. // Blood -2005 - 106: 1207-1309

181. Strasser-Weippl K., Steurer M., Kees M. et al. Prognostic relevance of cytogenetics deteimined by fluorescent in situ hybridization in patients having myelofibrosis with myeloid metaplasia. Cancer 2006; 107: 2801-2806.

182. Sun G., Koeffier H.P., Gale R. P., Sparkes R. S., and Schreck R. R. Use of conditioned media in cell culture can mask cytogenetic abnormalities acute leukaemia. // Cancer Genet. Cyfogenet - 1990 - 46,107-113.

183. Swolin B, WeinfeldA, WestinJ. A prospective long-term cytogenetic study in Polycythemia vera in relation to treatment and clinical course. // Blood. - 1988 - 72:386-95.

184. Szczepanski T, Orfao A, van der Velden VH, San Miguel JF, van Dongen J J. Minimal residual disease in leukaemia patients. // Lancet Oncol. - 2001 -2:409-17

185. Tarn C.S., Nusssenzveig R.M., Popat TJ. et al. The natural history and treatment outcome of blast phase BCR-ABL" myeloproliferative neoplasms. Blood 2008; 112: 1628-1637.

186. Tam C.S., Abruzzo L. V., Lin K.I. et al. The role of cytogenetic abnormalities as a prognostic marker in primary myelofibrosis: applicability at the time of diagnosis and later during disease course. // Blood - 2009 - 113: 4171-4178.

187. Tefferi A., Lasho T.L., Schwager S.M. et al. The JAK2V617 tyrosine kinase mutation in myelofibrosis with myeloid metaplasia: lineage specificity and clinical correlates. Br. J. Haematol. 2005; 131: 320-328.

188. Tefferi A., Dingli D., Li C.-Y. et al. Prognostic diversity among cytogenetic abnormalities in myelofibrosis with myeloid metaplasia. // Cancer - 2005 -104: 1656-1660.

189. Tefferi A., Mesa R.A., Schroeder G. et al. Cytogenetic findings and their clinical relevance in myelofibrosis and myeloid metaplasia. // Br. J. Haematol. -2001 - 113: 763-771.

190. Tefferi A., Vardiman JW. Classification anddiagnosis of myeloproliferative neoplasms: The 2008 World Health Organization criteria and point-of-care iagnostic algorihm // Leukemia - 2008. Vol. 22. P. 14-22.

191. Tefferi A., Lasho T.L., Huang J. et al. Low JAK2V617F allele burden in primary myelofibrosis compared to either a higher allele burden or unmutated status, is associated with inferior overall and leukemia-free survival. Leukemia 2008; 22: 756-761.

192. Textbook of Malignant Haematology // 1999-188-225.

193. Temerinac S et al. Cloning of PRV-1, a novel member of the uPAR receptor superfamily, which is overexpressed in polycythemia rubra vera. // Blood -2000 - 95(8):2569-2576

194. Theocharides A., Boissinot M., Girodon F. et al. Leukemic blasts in transformed JAK2-V617F-positive myeloproliferative disorders are frequently negative for the JAK2-V617F mutation. Blood 2007; 110: 375-379.

195. Thiede C, Koch S., Creutzig E. et al. Prevalence and prognostic impact of NPM1 mutations in 1485 adult patients with acute myeloid leukemia // Blood. -2006. - Vol. 107. - P. 4011-4020.

196. Thiele J, Kvasnicka HM, Facchetti F, Franco V, van derWalt J, Orazi A. European consensus on grading bone marrow fibrosis and assessment of cellularity. // Haematologica. - 2005 - 90:1128-32.

197. Van Dongen JM, SzczepansJä, T. et al. Detection of minimal residual disease in lymphoid malignancies. In: Degos L, Linch, D. C., Lowenberg, B., eds. Textbook of Malignant Hematology, (2nd edn). // London and New York: Taylor & Francis - 2005 - 267-307.

198. Vannucchi A.M, Antonioli E., Guglielmelli P. et al. Clinical correlates of JAK2V617F presence or allele burden in myeloproliferative neoplasms: a critical reappraisal. Leukemia 2008; 22: 129-307.

199. Vardiman J.W., Harris N.L., Brunning R.D. The World Health Organization (WHO) classification of the myeloid neoplasms. // Blood - 2002 - 100: 2292 -2302.

200. Vardiman J.W., Thiele J., Arber D.A. et al. The 2008 revision of the World

Health Organisation (WHO) classification of myeloid neoplasms and acute leukemia: rationale and important changes // Blood. - 2009. - Vol. 114. - P. 937 -51.

201. Velazquez L et al. A protein tyrosine kinase in the interferon alpha/beta signaling pathway. // Cell - 1992 - 70:313-322.

202. Verma R„ Babu A. Human chromosomes manuel of basic techniques. // Pergamon Press - 1989 - 4-256

203. Virchow R. Weisses Blut. // Froriep's Notizen - 1845 -36: 151 -156.

204. Warlick E.D., Smith B.D. Myelodysplasia Syndromes: Review of Pathophysiology and Current Novel Treatment Approaches. // Current Cancer Drug Targets - 2007 - 7, 541-558 541.

205. Weisberg E., Griffin J. D. et al. Mechanism of resistance to the ABL tyrosine kinase inhibitor S TI-571 in BCR/ABL-transformed hematopoietic cells // Blood. - 2000. - Vol. 95. - P. 3498—3505.

206. Wolanskyj AP, Lasho TL, Schwager SM et al. JAK2 mutation in essential thrombocythaemia: clinical associations and long-term prognostic relevance. // Br J Haematol. - 2005 - 131:208-13.

207. World Health Organization Classification of Tumors. Pathology and Genetics of Tumors of Hematopoietic and Lymphoid Tissues. // Lyon: IARC Press -2001.

208. World Health Organization Classification of Tumors. Pathology and Genetics of Tumors of Hematopoietic and Lymphoid Tissues. // Lyon: IARC Press -2008

209. Yamaoka K et al. The Janus kinases (Jaks) // Genome Biol. - 2004 - 5(12): 253.

210. Yamamoto Y., Kiyoi H., Nakano Y. et al. Activating mutation of D835 within the activation loop of FLT3 in human hematologic malignancies. Blood 2001; 97(8): 2434-2439.

211 .Zaccaria A., Valenti A., Donti E., et al. Persistence of chromosomal abnormalities additional to the Philadelphia chromosome after Philadelphia chromosome disappearance during imatinib therapy for chronic myeloid leukemia. // Haematologica. - 2007 - 92 - P.564-565.

212. Zamora L, Espinet B, Florensa L et al. Is fluorescence in situ hybridization a useful method in diagnosis of Polycythemia vera patients? // Cancer Genet Cytogenet. - 2004 - 151:139-45.

213. Zhou Y.J. et al. Unexpected effects of FERM domain mutations on catalytic activity of Jak3: structural implication for Janus kinases. // Mol Cell - 2001 -8:959-969.