Роль трансформирующего ростового фактора (TGF)β в прогрессии гепатокарцином тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Макарова, Мария Викторовна

• Макарова, Мария Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2009

Заключение диссертации по теме «Онкология», Макарова, Мария Викторовна

Выводы

В клетках гепатомы человека НерС2 воздействие цитокинов ТСррі и ТОРР2 вызывает подавление экспрессии факторов, контролирующих дифференцировку гепатоцитов (С/ЕВРа, НИР 1а), и активацию генов, продукты которых ассоциированы с прогрессией ГК (остеопонтин, фибронектин и аЗ субъединица интегрина).

При обработке ТвРрі и ТОРР2 в клетках гепатомы человека Нер02 происходит координированное изменение активности двух альтернативных промоторов гена Н№4а: активация альтернативного Р2 промотора и подавление основного промотора Р1. ТвРР-зависимое подавление промотора Р1 гена РПЧР4а опосредованно активацией МАР-киназного сигнального пути. Экспрессия экзогенного ТСРР2 в клетках НерС2 снижает экспрессию ключевых регуляторов гепатоцитарной дифференцировки С/ЕВРа и РЮТ4а. При гиперэкспрессии ТОРР2 происходит ускорение пролиферации и повышение клоногенной активности клеток гепатомы НерС2. При подавлении продукции ТОРР2 в клетках дедифференцированной гепатомы НЗЗ происходит реактивация эндогенной экспрессии факторов РЮТ4а и С/ЕВРа.

Подавление продукции Тврр2 в клетках НЗЗ вызывает снижение подвижности и скорости пролиферации этих клеток.

Тврр2 способен влиять на дифференцировочные, пролиферативные и миграционные свойства опухолевых клеток при прогрессии гепатоцеллюлярных карцином.

Заключение

Цитокины семейства TGFp оказывают двойственное влияние на клетки различного происхождения. С одной стороны они способны подавлять пролиферацию и индуцировать апоптоз, с другой — на множестве моделей показано, что TGFp, наоборот, активирует клеточный цикл, способствует уклонению от апоптоза, индуцирует ЭМП, усиливает инвазивный фенотип и способствует метастазированию опухолевых клеток.

При действии TGFpi на нормальные гепатоциты происходит индукция апоптоза и подавление пролиферации. Однако трансформация гепатоцитов приводит к тому, что механизмы действия TGFpi изменяются, и часть клеток выживает и претерпевает ЭМП. Кроме того, у пациентов с ГК уровень TGFpi в плазме и моче повышен. Практически все литературные данные о роли TGFp в гепатоканцерогенезе и его функциональной активности в нормальных гепатоцитах сводится к исследованиям свойств TGFpl. Возможная роль TGFP2 в канцерогенезе этого типа тканей практически не исследована.

Целью настоящей работы стало изучение роли TGFP2 в прогрессии ГК. Для этого были использованы две экспериментальные системы: линия дифференцированной гепатомы человека HepG2, в которой не экспрессируются цитокины семейства TGFp, и полученная из низ ко дифференцированной быстрорастущей ГК мыши культура НЗЗ, в которой нами выявлена гиперэкспрессия TGFP2. Таким образом, обрабатывая цитокином TGFP2 или индуцируя его экзогенную экспрессию в гепатоме HepG2, и, наоборот, подавляя его продукцию в дедифференцированной гепатоме НЗЗ, мы предполагали выяснить вклад TGFP2 в прогрессию ГК.

В клетках дифференцированной гепатомы HepG2 обработка как TGFpi, так и TGFP2 привела к повышению экспрессии генов аЗ субъединицы интегрина, остеопонтина, фибронектина и pig-h3, для которых показана активация в ходе прогрессии ГК. Кроме того, произошло снижение экспрессии генов, кодирующих ГЯФ, которые определяют дифференцировку гепатоцитов. Одним из таких факторов является HNF4a - центральное звено гепато-специфической регуляторной сети. При обработке TGFpi и TGFp2 произошло координированное изменение экспрессии двух групп изоформ этого гена: снижение экспрессии группы, характерной для дифференцированных гепатоцитов, и повышение экспрессии «эмбриональных» изоформ. Мы также показали, что внутриклеточные механизмы этих изменений различны: снижение HNF4aPl происходит за счет TGFp-зависимой активации МЕК - Erk сигнального пути, при этом повышение HNF4aP2 опосредовано другим механизмом.

Ранее в нашей лаборатории было показано, что большая часть TGFP, который продуцируют клетки дедифференцированной гепатомы мыши НЗЗ, находится в латентной (непроцессированной) форме. Для исследования вклада активной и латентной форм TGFP2 в регуляцию процессов, ассоциированных с прогрессией ГК, а также для изучения эффектов долговременного действия TGFP2 нами были получены две клеточные линии HepG2, гиперэкспрессирующие нормальную и мутантную формы TGFP2. Мутация в гене TGFP2 приводила к нарушению процессинга, и в среду секретировался конститутивно латентный белок.

В клетках HepG2, гиперэкспрессирующих нормальный и мутантный вариант TGFP2, произошло снижение экспрессии гена Е-кадхерина и активация транскрипции гена, кодирующего его репрессор - Snail. Кроме того, произошло снижение экспрессии двух групп изоформ гена HNF4a и мишени HNF4aP 1 - ApoAIV. Одновременно произошло снижение экспрессии гена, кодирующего важный регулятор дифференцировки и пролиферации гепатоцитов - С/ЕВРа. Необходимо отметить, что гиперэкспрессия TGFp2 привела к ускорению пролиферации и к повышению клоногенной активности этих клеток.

Для подтверждения роли TGFP2 в прогрессии ГК необходимо было наряду с моделями, на которых изучались эффекты, индуцируемые TGFP2, рассмотреть модель, в которой можно было наблюдать эффекты, обусловленные подавлением активности TGFP2. В качестве такой модельной системы была выбрана клеточная линия ГК мыши НЗЗ, в которой с помощью малых интерферирующих РНК мы подавили продукцию TGFp2.

При подавлении продукции TGFP2 в клетках НЗЗ произошла реактивация транскрипции двух генов, экспрессия которых критична для поддержания дифференцировки гепатоцитов и нарушение функции которых описано для ГК - HNF4a и С/ЕВРа. Более того, снижение синтеза TGFP2 привело к снижению таких ключевых для опухолевых клеток характеристик, как скорость пролиферации и подвижность. Все это свидетельствует в пользу того, что при подавлении продукции TGFP2 в культуре НЗЗ произошла частичная реверсия злокачественного фенотипа опухолевых клеток.

Таким образом, мы показали, что TGFP2 регулирует экспрессию генов, продукты которых контролируют дифференцировку гепатоцитов, и влияет на такие важные свойства клеток, как пролиферация и подвижность. Разработка методов эффективного подавления продукции этого цитокина как in vitro, так и in vivo представляется перспективным направлением в развитии методов противоопухолевой терапии.

Однако необходимо также определить, какие именно внутриклеточные сигнальные пути активируются под действием ТвР(3. Так как, например, исследование активации Бтас! сигнального каскада в описанных системах показало, что этот сигнальный путь функционально активен при обработке клеток НерС2 рекомбинантным цитокином. При этом ни при гиперэкспрессии ТОРр2 в Нер02, ни в клетках НЗЗ активность Бтас! сигнального каскада не детектировалась. Поэтому использование в этих системах низкомолекулярных ингибиторов киназного домена Три, предотвращающих фосфорилирование 8ша<1, вряд ли может оказаться эффективным инструментом для подавления действия ТОРр.

В дальнейшем мы планируем подробно исследовать механизмы активации ТОРр -индуцируемых внутриклеточных сигнальных каскадов в клетках дедифференцированных опухолей, а также детально исследовать механизмы ТОРР - зависимой регуляции гена Н№4а в описанных системах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Макарова, Мария Викторовна, 2009 год

1. Канцерогенез. Под редакцией Заридзе Д.Г. (2004). М.: Медицина.

2. Кудрявцева Е.И., Морозова О.В., Рудинская Т.Д., Энгельгардт Н.В. (2001). Нарушение межклеточных контактов и взаимодействия клеток с внеклеточным матриксом в быстрорастущей гепатокарциноме мышей. Архив патологии, 4: 33-37.

3. Лазаревич H.JI. (2004). Молекулярные механизмы прогрессии опухолей печени. Успехи биохимии, 44: 365-418.

4. Лазаревич Н.Л. (2003). Изменения спектров экспрессии генов при гепатоканцерогенезе и прогрессии опухолей печени. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук, Москва, МГУ.

5. Лазаревич Н.Л., Флейшман Д.И. (2008). Ткане-специфические транскрипционные факторы в прогрессии эпителиальных опухолей. Биохимия, 73: 713-734.

6. Лазаревич Н.Л., Альперн Д.В. (2008). Гепатоцитарный ядерный фактор 4 в развитии и канцерогенезе эпителиальных тканей. Молекулярная биология, 42 (5): 763-781.

7. Abou-Shady M., Baer H.U., Friess H., Berberat P., Zimmermann A., Graber H., Gold L.I., Korc M., Buchler M.W. (1999). Transforming growth factor betas and their signaling receptors in human hepatocellular carcinoma. Am. J. Surg., 177(3): 209-215.

8. Annes J.P., Munger J.S., Rifkin D.B. (2003). Making sense of latent TGFbeta activation. J. Cell Sci., 116 (Pt 2): 217-224.

9. Bakin A.V., Rinehart C., Tomlinson A.K., Arteaga C.L. (2002). p38 mitogen-activated protein kinase is required for TGFbeta-mediated fibroblastic transdifferentiation and cell migration. J. Cell Sci., 115(Pt 15): 3193-3206.

10. Bakin A.V., Safina A., Rinehart C., Daroqui C., Darbary H., Helfman D.M. (2004). A critical role of tropomyosins in TGF-beta regulation of the actin cytoskeleton and cell motility in epithelial cells. Mol. Biol. Cell, 15(10): 4682-4694.

11. Barcellos-HoffM.H., Dix T.A. (1996). Redox-mediated activation of latent transforming growth factor-beta 1. Mol. Endocrinol., 10(9): 1077-1083.

12. Bates R.C., Mercurio A.M. (2005). The epithelial-mesenchymal transition (EMT) and colorectal cancer progression. Cancer Biol. Ther., 4(4):365-370.

13. Bernard G., Mion F., Henry L., Plauchu H., Paliard P.(1993). Hepatic involvement in hereditary hemorrhagic telangiectasia: clinical, radiological, and hemodynamic studies of 11 cases. Gastroenterology, 105(2): 482-487.

14. Bhowmick N.A., Moses H.L. (2005). Tumor-stroma interactions. Curr Opin Genet Dev., 15(1): 97-101.

15. Birkey Reffey S., Wurthner J.U., Parks W.T., Roberts A.B., Duckett C.S. (2001). X-linked inhibitor of apoptosis protein functions as a cofactor in transforming growth factor-p signaling. J. Biol. Chem., 276: 26542-26549.

16. Bissell D.M., Roulot D., George J. (2001). Transforming growth factor beta and the Iiver.Hepatology, 34(5): 859-867.

17. Bissell D.M.,Wang S.S., Jarnagin W.R., Roll F.J. (1995). Cell-specific expression of transforming growth factor-beta in rat liver. Evidence for autocrine regulation of hepatocyte proliferation. J. Clin. Invest., 96: 447-455.

18. Derynck R., Zhang Y.E. (2003). Smad-dependent and Smad-independent pathways in TGF-beta family signalling. Nature, 425(6958): 577-584.

19. Dickson M.C., Martin J.S., Cousins F.M., Kulkarni A.B., Karlsson S., Akhurst R.J. (1995). Defective haematopoiesis and vasculogenesis in transforming growth factor-pi knock out mice. Development, 121(6): 1845-1854.

20. Dong M., How T., Kirkbride K.C., Gordon K.J., Lee J.D., Hempel N., Kelly P., Moeller B.J., Marks J.R., Bio be G.C. (2007). The type III TGF-beta receptor suppresses breast cancer progression. J. Clin. Invest., 117(1): 206-217.

21. Drewes T., Senkel S., Holewa B., Ryffel G.U. (1996). Human hepatocyte nuclear factor 4 isoforms are encoded by distinct and differentially expressed genes. Mol. Cell Biol., 16(3): 925-931.

22. Duncan S.A., Nagy A., Chan W. (1997). Murine gastrulation requires HNF-4 regulated gene expression in the visceral endoderm: tetraploid rescue of Hnf-4(-/-) embryos. Development, 124(2): 279-287.

23. Dunn N.R., Koonce C.H., Anderson D.C., Islam A., Bikoff E.K. Robertson E.J. (2005). Mice exclusively expressing the short isoform of Smad2 develop normally and are viable and fertile. Genes. Dev., 19: 152-163.

24. Engel M.E., McDonnell M.A., Law B.K., Moses H.L. (1999). Interdependent SMAD and JNK signaling in transforming growth factor-beta-mediated transcription. J. Biol. Chem., 274(52): 37413-37420.

25. Giannelli G., Fransvea E., Marinosci F., Bergamini C., Colucci S., Schiraldi O., Antonaci S. (2002). Transforming growth factor-beta 1 triggers hepatocellular carcinoma invasiveness via alpha3betal integrin. Am. J. Pathol. 161(1): 183-193.

26. Gong J., Ammanamanchi S., Ko T.C., Brattain M.G. (2003). Transforming growth factor beta 1 increases the stability of p21/WAFl/CIPl protein and inhibits CDK2 kinase activity in human colon carcinoma FET cells. Cancer Res., 63(12): 3340-3346.

27. Gorelik L., Flavell R.A. (2001). Immune-mediated eradication of tumors through the blockade of transforming growth factor-p signaling in T cells, Nat. Med., 7: 1118-1122.

28. Gotoh M., Sakamoto M., Kanetaka K., Chuuma M., Hirohashi S. (2002). Overexpression of osteopontin in hepatocellular carcinoma. Pathol. Int., 52(1): 19-24.

29. Gotzmann J., Fischer A.N., Zojer M., Mikula M., Proell V., Huber H., Jechlinger M., Waerner T., Weith A., Beug H„ Mikulits W. (2006). A crucial function of PDGF in TGF-beta-mediated cancer progression ofhepatocytes. Oncogene, 25(22): 3170-3185.

30. Hahn S.A., Schutte M., Hoque A.T., Moskaluk C.A., da Costa L.T., Rozenblum E., Weinstein C.L., Fischer À., Yeo C.J., Hruban R.H., Kern S.E. (1996) DPC4, a candidate tumor suppressor gene at human chromosome 18q21.1. Science, 271: 350-353.

31. Han G., Lu S.L., Li A.G., He W., Corless C.L., Kulesz-Martin M., Wang X.J. (2005). Distinct mechanisms of TGF-betal-mediated epithelial-to-mesenchymal transition and metastasis during skin carcinogenesis. J. Clin. Invest., 115(7): 1714-1723.

32. Hanahan D., Weinberg RA. (2000). The hallmarks of cancer. Cell., 100(1): 57-70.

33. Hempel N., How T., Cooper S.J., Green T.R., Dong M., Copland J.A., Wood C.G., Blobe G.C. (2008). Expression of the Type III TGF-{beta} Receptor is negatively regulated by TGF-{beta}. Carcinogenesis, 29(5): 905-912.

34. Hempel N., How T, Dong M., Murphy S.K., Fields T.A., Blobe G.C. (2007). Loss of betaglycan expression in ovarian cancer: role in motility and invasion. Cancer Res. 52315238.

35. Heyer J., Escalante-Alcalde D., Lia M., Boettinger E., Edelmann W., Stewart C.L., Kucherlapati R. (1999). Postgastrulation Smad2-deficient embryos show defects inembryo turning and anterior morphogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 1259512600.

36. Hood J.D., Cheresh D.A. (2002). Role of integrins in cell invasion and migration. Nat. Rev. Cancer., 2(2): 91-100.

37. Huang S.S., Huang J.S. (2005). TGF-beta control of cell proliferation. J. Cell Biochem., 96(3): 447-462.

38. Huang S.S., Ling T.Y., Tseng W.F., Huang Y.H., Tang F.M., Leal S.M., Huang J.S. (2003). Cellular growth inhibition by IGFBP-3 and TGF-bl requires LRP-1. FASEB J., 17:2068-2081.

39. Hwang-Verslues W.W., Sladek F.M. (2008). Nuclear receptor hepatocyte nuclear factor 4alphal competes with oncoprotein c-Myc for control of the p21/WAFl promoter. Mol. Endocrinol. 22(1): 78-90.

40. Igarashi A., Okochi H., Bradham D.M., Grotendorst G.R. (1993). Regulation of connective tissue growth factor gene expression in human skin fibroblasts and during wound repair. Mol. Biol. Cell, 4: 637-645.

41. Ihara A., Yamagata K., Nammo T., Miura A., Yuan M., Tanaka T., Sladek F.M., Matsuzawa Y., Miyagawa J.-I., Shimomura I. (2005). Functional characterization of the HNF4a isoform (HNF4a8) expressed in pancreatic P-cells. BBRC, 329: 984-990.

42. Ishikawa F, Nose K, Shibanuma M. Downregulation of hepatocyte nuclear factor-4alpha and its role in regulation of gene expression by TGF-beta in mammary epithelial cells. (2008). Exp. Cell Res., 314(10): 2131-2140.

43. Ishikawa O., LeRoy E.C., Trojanowska M. (1990). Mitogenic effect of transforming growth factor p 1 on human fibroblasts involves the induction of platelet-derived growth factor a receptors, J. Cell. Physiol., 145: 181-186.

44. Ito N., Kawata S., Tamura S., Shirai Y., Kiso S., Tsushima H., Matsuzawa Y. (1995). Positive correlation of plasma transforming growth factor-beta 1 levels with tumor vascularity in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett., 89(1): 45-48.

45. Ivanovic V., Melman A., Davis-Joseph B., Valcic M., Geliebter J. (1995). Elevated plasma levels of TGF-beta 1 in patients with invasive prostate cancer. Nat. Med., 1(4): 282-284.

46. Janda E., Lehmann K., Killisch I., Jechlinger M., Herzig M., Downward J., Beug H., Griinert S. (2002). Ras and TGF-b cooperatively regulate epithelial cell plasticity and metastasis: dissection of Ras signaling pathways. J. Cell Biol., 156: 299-313.

47. Jang C.W., Chen C.H., Chen C.C., Chen J.Y., Su Y.H., Chen R.H. (2002). TGF-beta induces apoptosis through Smad-mediated expression of DAP-kinase. Nat. Cell Biol, 4(1): 51-58.

48. Ju W., Ogawa A., Heyer J., Nierhof D., Yu L., Kucherlapati R., Shafritz D.A., Bottinger E.P. (2006). Deletion of Smad2 in mouse liver reveals novel functions in hepatocyte growth and differentiation. Mol. Cell Biol., 26(2): 654-667.

49. Kaartinen V., Voncken J.W., Shuler C., Warburton D., Bu D., Heisterkamp N., Groffen J. (1995). Abnormal lung development and cleft palate in mice lacking TGF(33 indicates defects of epithelial-mesenchymal interaction. Nat. Genet., 11(4): 415-421.

50. Kalkuhl A., Kaestner K., Buchmann A., Schwarz M. (1996). Expression of hepatocyte-enriched nuclear transcription factors in mouse liver tumours. Carcinogenesis, 17(3): 609-612.

51. Kang Y., Siegel P.M., Shu W., Drobnjak M., Kakonen S.M., Cordon-Cardo C., Guise T.A., Massague J. (2003). A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell, 3: 537-549.

52. Kardassis D., Pardali K., Zannis V.I. (2000). SMAD proteins transactivate the human ApoCIII promoter by interacting physically and functionally with hepatocyte nuclear factor 4. J. Biol. Chem., 275(52): 41405-41414.

53. Koli K., Saharinen J., Hyytiàinen M., Penttinen C., Keski-Oja J.Latency (2001). activation, and binding proteins of TGF-beta. Microsc. Res. Tech., 52(4): 354-362.

54. Korchynskyi O., ten Dijke P. (2002). Identification and functional characterization of distinct critically important bone morphogenetic protein-specific response elements in the Idl promoter. J. Biol. Chem., 277: 4883-4891.

55. Krasagakis K., Thôlke D., Farthmann B., Eberle J., Mansmann U., Orfanos C.E. (1998) Elevated plasma levels of transforming growth factor (TGF)-betal and TGF-beta2 in patients with disseminated malignant melanoma. Br. J. Cancer., 77(9): 1492-1494.

56. Laiho M., DeCaprio J.A., Ludlow J.W., Livingston D.M., Massagué J. (1990). Growth inhibition by TGF-beta linked to suppression of retinoblastoma protein phosphorylation. Cell, 62(1): 175-185.

57. Lastres P., Letamendia A., Zhang H., Rius C., Almendro N., Raab U., Lôpez L.A., Langa C., Fabra A., Letarte M., Bernabéu C. (1996). Endoglin modulates cellular responses to TGF-beta 1. J. Cell Biol., 133(5): 1109-1121.

58. Leal S.M., Liu Q., Huang S.S., Huang J.S. (1997). The type V transforming growth factor b receptor is the putative insulin-like growth factor-binding protein 3 receptor. J. Biol. Chem., 272(33): 20572-20576.

59. Li M.O., Wan Y.Y., Sanjabi S., Robertson A.K., Flavell R.A. (2006). Transforming growth factor-(3 regulation of immune responses, Annu. Rev. Immunol., 24: 99-146.

60. Li Y„ Yang J, Dai C., Wu C., Liu Y. (2004). Role for integrin-linked kinase in mediating tubular epithelial to mesenchymal transition and renal interstitial fibrogenesis. J. Clin. Invest., 112(4): 503-516.

61. Locker J. (2001). Tissue-specific regulation by transcription factors. BIOS Scientific Publishers, chapter 10.

62. Lu M., Lin S.C., Huang Y., Kang Y.J., Rich R., Lo Y.C., Myszka D., Han J., Wu H. (2007). XIAP induces NF-kappaB activation via the BIR1/TAB1 interaction and BIR1 dimerization. Mol. Cell, 26(5): 689-702.

63. Lucas B., Grigo K., Erdmann S., Lausen J., Klein-Hitpass L., Ryffel G.U. (2005). HNF4alpha reduces proliferation of kidney cells and affects genes deregulated in renal cell carcinoma. Oncogene, 42: 6418-6431.

64. Lucke C.D., Philpott A., Metcalfe J.C., Thompson A.M., Hughes- Davies L., Kemp P.R., Hesketh R. (2001). Inhibiting mutations in the transforming growth factor p type 2 receptor in recurrent human breast cancer. Cancer Res., 61(2): 482-^85.

65. Luo K., Lodish H.F. (1997). Positive negative regulation of type II TGF-beta receptor signal transduction by autophosphorylation on multiple serine residues. EMBO J. 16(8): 1970-1981.

66. Lynch M.A., Nakashima R., Song H., DeGroff V.L., Wang D., Enomoto T., Weghorst C.M. (1998). Mutational analysis of the transforming growth factor P receptor type II gene in human ovarian carcinoma, Cancer Res., 58(19): 4227-4232.

67. Lyons R.M., Keski-Oja J., Moses H.L. (1988). Proteolytic activation of latent transforming growth factor-beta from fibroblast-conditioned medium. J. Cell Biol., 106(5):1659-1665.

68. Massague J. (2004). G1 cell-cycle control and cancer. Nature, 432(7015): 298306.

69. Massague J., Wotton D. (2000). Transcriptional control by the TGF-P/Smad signaling system. EMBO J., 19: 1745-1754.

70. Massague J., Seoane J., Wotton D. (2005). Smad transcription factors.Genes Dev., 19(23): 2783-2810.

71. Massague, J. (1998). TGF-beta signal transduction. Annu. Rev. Biochem., 67: 753-791.

72. Micke P., Ostman A. (2005). Exploring the tumour environment: cancer-associated fibroblasts as targets in cancer therapy. Expert. Opin. Ther. Targets, 9(6): 1217-1233.

73. Miettinen P.J., Ebner R., Lopez A.R., Derynck R. (1994). TGF-beta induced transdifferentiation of mammary epithelial cells to mesenchymal cells: involvement of type I receptors. J. Cell Biol., 127(6 Pt 2): 2021-2036.

74. Moren A., Itoh S., Moustakas A., ten Dijke P., Heldin C.- H. (2000). Functional consequences of tumorigenic missense mutations in the amino-terminal domain of Smad4. Oncogene, 19(38): 4396-4404.

75. Moses H.L., Branum E.L., Proper J.A., Robinson R.A. (1981). Transforming growth factor production by chemically transformed cells, Cancer Res., 41: 2842-2848.

76. Moustakas A., Heldin C.H. (2005). Non-Smad TGF-beta signals. J. Cell Sci., 118(Pt 16): 3573-3584.

77. Moustakas A., Souchelnytskyi S., Heldin C.H. (2001). Smad regulation in TGF-beta signal transduction. J. Cell Sci., 114(Pt 24): 4359-4369.

78. Okuda K. (2000). Hepatocellular carcinoma. J. Hepatol., 32: 225-237.

79. Ott M.O., Rey-Campos J., Cereghini S., Yaniv M. (1991). vHNFl is expressed in epithelial cells of distinct embryonic origin during development and precedes HNF1 expression. Mech. Dev., 36(1-2): 47-58.

80. Ozdamar B., Bose R., Barrios-Rodiles M., Wang H.R., Zhang Y., Wrana J.L.2005). Regulation of the polarity protein Par6 by TGFfS receptors controls epithelial cell plasticity. Science, 307: 1603-1609.

81. Pardali K., Kurisaki A., Morén A., ten Dijke P., Kardassis D., Moustakas A. (2000) Role of Smad proteins and transcription factor Spl in p21(Wafl/Cipl) regulation by transforming growth factor-beta. J. Biol. Chem., 275(38): 29244-29256.

82. Pardali K., Moustakas A. (2007). Actions of TGF-p as tumor suppressor and pro-metastatic factor in human cancer. Biochimica et Biophysica Acta, 1775: 21-62.

83. Parikh S., Hyman D. (2007). Hepatocellular cancer: a guide for the internist. Am. J. Med., 120: 194-202.

84. Peinado H, Quintanilla M, Cano A. (2003). Transforming growth factor beta-1 induces Snail transcription factor in epithelial cell lines: implications for epithelial mesenchymal transitions. J. Biol. Chem. 23: 21113-21123.

85. Perlman R, Schiemann W.P, Brooks M.W, Lodish H.F, Weinberg R.A. (2001). TGF-beta-induced apoptosis is mediated by the adapter protein Daxx that facilitates JNK activation. Nat. Cell Biol, 3(8): 708-714.

86. Petersen O.W, Nielsen H.L, Gudjonsson T, Villadsen R, Rank F, Niebuhr E, Bissell M.J, Ronnov-Jessen L. (2003). Epithelial to mesenchymal transition in human breast cancer can provide a nonmalignant stroma. Am J Pathol, 162(2): 391-402.

87. Petritsch C, Beug H, Balmain A, Oft M. (2000). TGFp inhibits p70 S6 kinase via protein phosphatase 2A to induce G1 arrest. Genes Dev., 14; 3093-3101.

88. Pierce D.F. Jr, Gorska A.E, Chytil A, Meise K.S, Page D.L, Coffey R.J. Jr, Moses H.L. (1995). Mammary tumor suppression by transforming growth factor beta 1 transgene expression. Proc Natl Acad Sci USA, 92(10): 4254-4258.

89. Pietenpol J.A, Holt J.T, Stein R.W, Moses H.L. (1990) Transforming growth factor beta 1 suppression of c-myc gene transcription: role in inhibition of keratinocyte proliferation. Proc Natl. Acad. Sci. USA, 87(10): 3758-3762.

90. Pitot H.C., Dragan Y.P. (1991). Facts and theories concerning the mechanisms of carcinogenesis. FASEB J., 5(9): 2280-2286.

91. Ponce-Castaneda M.V., Esparza-Lopez J., Vilchis-Landeros M.M., Mendoza V., Lopez-Casillas F. (1998). Murine betaglycan primary structure, expression and glycosaminoglycan attachment sites. Biochim. Biophys. Acta, 1384: 189-196.

92. Prunier C., Ferrand N., Frottier B., Pessah M., Atfi A. (2001). Mechanism for mutational inactivation of the tumor suppressor Smad2. Mol. Cell. Biol., 21(10): 33023313.

93. Puchner M.J., Koppen J.A., Zapf S., Knabbe C., Westphal M. (2002). The influence of tamoxifen on the secretion of transforming growth factor-beta2 (TGF-beta2) in glioblastomas: in vitro and in vivo findings. Anticancer Res., 22(1A): 45-51.

94. Raftery L.A., Sutherland D.J. (1999). TGF-J3 family signal transduction in Drosophila development: From Mad to Smads. Dev. Biol., 210: 251-268.

95. Reynisdóttir I., Polyak K., Iavarone A., Massagué J. (1995). Kip/Cip and Ink4 Cdk inhibitors cooperate to induce cell cycle arrest in response to TGF-beta. Genes Dev., 9(15): 1831-1845.

96. Rifkin D.B. (2005). Latent transforming growth factor-beta (TGF-beta) binding proteins: orchestrators of TGF-beta availability. J Biol Chem., 280(9): 7409-7412.

97. Riggins G.J., Kinzler K.W., Vogelstein B., Thiagalingam S. (1997). Frequency of Smad gene mutations in human cancers. Cancer Res., 57(13): 2578-2580.

98. Roberts A.B., Anzano M.A., Wakefield L.M., Roche N.S., Stern D.F., Sporn M.B. (1985). Type p transforming growth factor: a Afunctional regulator of cellular growth. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 82: 119-123.

99. Sánchez A., Alvarez A.M., López Pedrosa J.M., Roncero C., Benito M., Fabregat I. (1999). Apoptotic response to TGF-beta in fetal hepatocytes depends upon their state of differentiation. Exp Cell Res., 252(2): 281-291.

100. Schuster M.B., Porse B.T. (2006). C/EBPalpha: a tumour suppressor in multiple tissues. Biochim. Biophys. Acta, 1766: 88-103.

101. Selvamurugan N., Kwok S., Patridge N.C. (2004). Smad3 interacts with JunB and Cbfal/Runx2 for transforming growth factor-bl-stimulated collagenase-3 expression in human breast cancer cells. J. Biol. Chem., 279: 27764-27773.

102. Seoane J., Le H.V., Shen L., Anderson S.A., Massague J. (2004). Integration of Smad and forkhead pathways in the control of neuroepithelial and glioblastoma cell proliferation. Cell, 117(2): 211-223.

103. Sheahan S., Bellamy C.O., Dunbar D.R., Harrison D.J., Prost S. (2007). Deficiency of G1 regulators P53, P21Cipl and/or pRb decreases hepatocyte sensitivity to TGFbeta cell cycle arrest.BMC Cancer, 7: 215.

104. Shen X., Li J., Hu P.P., Waddell D„ Zhang J., Wang X.F. (2001). The activity of guanine exchange factor NET1 is essential for transforming growth factor-beta-mediated stress fiber formation. J. Biol Chem., 276(18): 15362-15368.

105. Shi Y., Massague J. (2003). Mechanisms of TGF-P signaling from cell membrane to the nucleus. Cell, 113: 685-700.

106. Shi Y., Wang Y.F., Jayaraman L., Yang H„ Massague J., Pavletich N.P. (1998). Crystal structure of a Smad MH1 domain bound to DNA: insights on DNA binding in TGF-beta signaling. Cell, 94(5): 585-594.

107. Shima Y, Nakao K, Nakashima T, Kawakami A, Nakata K, Hamasaki K, Kato Y. (1999). Activation of caspase-8 in transforming growth factor beta-induced apoptosis of human hepatoma cells. Hepatology, 30: 1215-1222.

108. Spath G.F., Weiss M.C. (1998). Hepatocyte nuclear factor 4 provokes expression of epithelial marker genes, acting as a morphogen in dedifferentiated hepatoma cells. J. Cell Biol., 140(4): 935-946.

109. Sternlicht M.D., Werb Z. (2001). How matrix metalloproteinases regulate cell behavior. Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 17: 463-516.

110. Strutz F., Zeisberg M., Renziehausen A., Raschke B., Becker V., van Kooten C., Muller G. (2001). TGFJ31 induces proliferation in human renal fibroblasts via induction of basic fibroblast growth factor (FGF-2). Kidney Int., 59(2): 579-592.

111. Takaku K., Miyoshi H., Matsunaga A., Oshima M., Sasaki N., Taketo M.M. (1999). Gastric and duodenal polyps in Smad4 (Dpc4) knockout mice. Cancer Res., 59(24): 6113-6117.

112. Takekawa M., Tatebayashi K., Itoh F„ Adachi M., Imai K., Saito H. (2002). Smad-dependent GADD45beta expression mediates delayed activation of p38 MAP kinase by TGF-beta. EMBO J., 21(23): 6473-6482.

113. Tang B., Bottinger E.P., Jakowlew S.B., Bagnall K.M., Mariano J., Anver M.R., Letterio J.J., Wakefield L.M. (1998). Transforming growth factor-pi is a new form of tumor suppressor with true haploid insufficiency. Nat. Med., 4(7): 802-807.

114. Tang J., Wu Y.M., Zhao P., Jiang J.L., Chen Z.N. (2009). {beta}ig-h3 Interacts with {alpha} 3{ beta} 1 Integrin to Promote Adhesion and Migration of Human Hepatoma Cells. Exp. Biol. Med., 234(1): 35-39.

115. Tang J., Zhou H.W., Jiang J.L., Yang X.M., Li Y., Zhang H.X., Chen Z.N., Guo W.P. (2007). pig-h3 is involved in HAbl8G/CD147 mediated metastasis process in human hepatoma cells. Exp. Biol. Med., 232(3): 344-352.

116. Tang Y., Katuri V., Dillner A., Mishra B., Deng C.X., Mishra L. (2003). Disruption of transforming growth factor-beta signaling in ELF beta-spectrin-deficient mice. Science, 299(5606): 574-577.

117. Tavian D., De Petro G., Colombi M., Portolani N., Giulini S.M., Gardella R., Barlati S. (1994). RT-PCR detection of fibronectin EDA+ and EDB+ mRNA isoforms: molecular markers for hepatocellular carcinoma. Int. J. Cancer, 56(6): 820-825.

118. Thiery J.P. (2003). Epithelial-mesenchymal transitions in development and pathologies. Curr. Opin. Cell Biol., 15(6): 740-746.

119. Thiery. J.P. (2002). Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression. Nature Rev. Cancer, 2(6): 442-454.

120. Tronche F., Ringeisen F., Blumenfeld M., Yaniv M„ Pontoglio M. (1997). Analysis of the distribution of binding sites for a tissue-specific transcription factor in the vertebrate genome. J. Mol. Biol., 266(2): 231-245.

121. Tsai J.F., Chuang L.Y., Jeng J.E., Yang M.L., Chang W.Y., Hsieh M.Y., Lin Z.Y., Tsai J.H. (1997). Clinical relevance of transforming growth factor-beta 1 in the urine of patients with hepatocellular carcinoma. Medicine, 76(3): 213-226.

122. Tsukazaki T., Chiang T.A., Davison A.F., Attisano L., Wrana J.L. (1998). SARA, a FYVE domain protein that recruits Smad2 to the TGFbeta receptor. Cell, 95(6): 779791.

123. Tucker R.F., Shipley G.D., Moses H.L., Holley R.W. (1984). Growth inhibitor from BSC-1 cells closely related to platelet type ß transforming growth factor. Science, 226: 705-707.

124. Turley R.S., Finger E.C., Hempel N. How T., Fields T.A., Blobe G.C. (2007). The Type III Transforming Growth Factor-p Receptor as a Novel Tumor Suppressor Gene in Prostate Cancer. Cancer Res., 67(3): 1090-1098.

125. Ueno T., Hashimoto O., Kimura R., Torimura T., Kawaguchi T., Nakamura T., Sakata R., Koga H., Sata M. (2001). Relation of type II transforming growth factor-beta receptor to hepatic fibrosis and hepatocellular carcinoma. Int. J. Oncol., 18: 49-55.

126. Vagenas K., Spyropoulos C., Gavala V., Tsamandas A.C. (2007). TGFbetal, TGFbeta2, and TGFbeta3 protein expression in gastric carcinomas: correlation with prognostics factors and patient survival. J. Surg. Res., 139(2): 182-188.

127. Valcourt U., Kowanetz M., Niimi H., Heldin C.H., Moustakas A. (2005). TGF-beta and the Smad signaling pathway support transcriptomic reprogramming during epithelial-mesenchymal cell transition. Mol. Biol. Cell, 16(4): 1987-2002.

128. Valderrama-Carvajal H., Cocolakis E., Lacerte A., Lee E.H., Krystal G., Ali S., Lebrun J.J. (2002). Activin/TGF-beta induce apoptosis through Smad-dependent expression of the lipid phosphatase SHIP. Nat. Cell Biol., 4(12): 963-969.

129. Wai P.Y., Kuo P.C. (2008) Osteopontin: regulation in tumor metastasis. Cancer Metastasis Rev., 27(1): 103-118.

130. Watkins P.J., Condreay J.P., Huber B.E., Jacobs S.J., Adams D.J. (1996). Impaired proliferation and tumorigenicity induced by CCAAT/enhancer-binding protein. Cancer Res., 56(5): 1063-1067.

131. Wick W., Platten M., Weller M. (2001). Glioma cell invasion: regulation of metalloproteinase activity by TGF-beta. J. Neurooncol., 53(2): 177-185.

132. Wikstrôm P, Stattin P., Franck-Lissbrant I., Damber J.E., Bergh A. (1998). Transforming growth factor betal is associated with angiogenesis, metastasis, and poor clinical outcome in prostate cancer. Prostate, 37(1): 19-29.

133. Wrana J.L, Attisano L, Wieser R, Ventura F, Massagué J. (1994). Mechanism of activation of the TGF-beta receptor. Nature, 370(6488): 341-347.

134. Xie L, Law B.K, Chytil A.M., Brown K.A, Aakre M.E, Moses H.L. (2004). Activation of the Erk pathway is required for TGF-beta 1-induced EMT in vitro. Neoplasia, 6(5): 603-610.

135. Yagi K, Furuhashi M, Aoki H, Goto D, Kuwano H, Sugamura K, Miyazono K, Kato M. (2002). c-myc is a downstream target of the Smad pathway. J. Biol. Chem, 277(1): 854-861.

136. Yagi K, Goto D, Hamamoto T, Takenoshita S, Kato M, Miyazono K. (1999). Alternatively spliced variant of Smad2 lacking exon 3. Comparison with wild-type Smad2 and Smad3. J. Biol. Chem, 274: 703-709.

137. Yakicier M.C, Irmak M.B, Romano A, Kew M, Ozturk M. (1999). Smad2 and Smad4 gene mutations in hepatocellular carcinoma, Oncogene, 18(34): 4879-4883.

138. Yang X, Letterio J.J, Lechleider R.J, Chen L„ Hayman R, Gu H, Roberts A.B, Deng C. (1999). Targeted disruption of SMAD3 results in impaired mucosal immunity and diminished T cell responsiveness to TGFp. EMBO J, 18(5): 1280-1291.

139. Yi J. Y, Shin I, Arteaga C. L. (2005). Type I transforming growth factor p receptor binds to and activates phosphatidylinositol 3-kinase. J. Biol. Chem, 280: 1087010876.

140. Yu Q, Stamenkovic I. (2000). Cell surface-localized matrix metalloproteinase-9 proteolytically activates TGF-beta and promotes tumor invasion and angiogenesis Genes Dev., 14(2): 163-176.

141. Yue J, Mulder K.M. (2000). Requirement of Ras/MAPK pathway activation by transforming growth factor beta for transforming growth factor beta 1 production in a smad-dependent pathway. J Biol Chem, 275(45): 35656.

142. Zavadil J., Bitzer M., Liang D., Yang Y.C., Massimi A., Kneitz S., Piek E., Bottinger E.P. (2001). Genetic programs of epithelial cell plasticity directed by transforming growth factor-beta. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98(12): 6686-6691.

143. Zawel L., Dai J.L., Buckhaults P., Zhou S., Kinzler K.W., Vogelstein B., Kern S.E. (1998). Human Smad3 and Smad4 are sequence-specific transcription activators. Mo 1. Cell, 1: 611-617.

144. Zhang H.Y., Phan S.H. (1999). Inhibition of myofibroblast apoptosis by transforming growth factor beta (1). Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 21(6): 658-665.

145. Zhu Y„ Richardson J.A., Parada L.F., Graff J.M. (1998). Smad3 mutant mice develop metastatic colorectal cancer. Cell, 94(6): 703-14.