Роль иммунологических механизмов в развитии противоопухолевого эффекта антител против белка р53 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Тендлер, Евгений Вольфович

• Тендлер, Евгений Вольфович
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Тендлер, Евгений Вольфович

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Иммунологические механизмы противоопухолевой защиты.

1.2. Иммунотерапия опухолей.

1.3. Роль р53 в процессе канцерогенеза.

Глава.2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты экспериментальных исследований.

3.1. Особенности экспрессии разных типов антигена р53 в опухолях, индуцированных химическими канцерогенами и в нормальной ткани толстого кишечника.

3.2. Влияние введения р53-антиген-липосомного комплекса на канцерогенез и состояние иммунной системы.

3.3. Влияние введения анти-р53-антител на процесс канцерогенеза в толстом кишечнике крыс.

3.3.1. Оценка способности антител предотвращать индукцию опухолей.

3.3.2. Оценка противоопухолевой активности антител, направленных против белков р53 и р64.

3.3.3. Влияние введения антител против белка р53 на состояние иммунной системы крыс при экспериментальном химическом канцерогенезе.

3.3.3.1. Влияние введения анги-р53-антител на клеточный состав селезенки на фоне канцерогенеза.

3.3.3.2. Влияние введения анти-р53-антител на морфологические признаки локальных иммунных реакций, в слизистой толстого кишечника и непосредственно в опухолях на разных стадиях малигнизации в процессе химического канцерогенеза.

3.4. Особенности экспрессии белка р53 у р53-трансгенных мышей и влияние введения анти-р5 3 -антител на иммуно-морфологические характеристики селезенки трансгенных мышей на фоне химически индуцированного канцерогенеза.

Глава 4. Обсуждение.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль иммунологических механизмов в развитии противоопухолевого эффекта антител против белка р53»

Актуальность темы. Белок р53 дикого типа (wtp53) содержится в нормальных клетках в латентном состоянии и не выявляется обычными методами, но оказывает противоопухолевое действие. Более половины всех случаев рака у человека сопровождаются мутациями р53-гена, во многих других случаях выявляется потеря функциональной активности р53-белком без мутации в гене. И в том, и в другом случае р53 накапливается в злокачественно трансформированной клетке в значительных количествах. р53 подходит для заместительной генной терапии, так как является мощным индуктором апоптоза раковой клетки. Однако терапия с использованием р53-гена имеет существенные ограничения. Учитывая это, для лечения опухолей, содержащих нормальный или мутантный р53-белок, становятся более актуальными иммунологические подходы. Возможно проведение иммунотерапии путем введения р53-белка. Однако, как аутоантиген, он слабо иммуногенен, даже в своей мутантной форме. Остается открытым вопрос о противоопухолевой эффективности введения самого белка р53 или анти-р53-антител, действие которых может быть опосредовано выработкой и противоопухолевым действием анти-идиотипических антител. Канцерогенез сопряжен с серьезными повреждениями иммунной системы, лимфоидной ткани с нарушениями функций Т- и В-лимфоцитов. Опухолевый рост, как правило, идет на фоне выраженного иммунодефицита. В связи с этим представляло интерес изучение влияния иммунизации белком р53 и введения антител против р53 на лимфоидную ткань в условиях химически индуцированного канцерогенеза. Актуальность настоящего экспериментального исследования связана с поиском новых путей иммунотерапии опухолей с использованием антител, направленных против белка р53, и изучением иммунологических механизмов их противоопухолевого действия.

Цель исследования. Изучить роль иммунологических механизмов в развитии противоопухолевого эффекта антител, направленных против белка р53.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить экспрессию белка р53 в кишечнике крыс в динамике химически индуцированного канцерогенеза.

2. Оценить влияние введения крысам р53-антиген-липосомного комплекса или анти-р53-иммуноглобулина на интенсивность химически индуцированного канцерогенеза.

3. Изучить иммуноморфологические изменения в селезенке животных, получивших р53-антиген-липосомный комплекс или анти-р53-иммуноглобулин на фоне химически индуцированного канцерогенеза.

4. Оценить влияние введения крысам р53-антиген-липосомного комплекса или анти-р53-иммуноглобулина на экспрессию белка р53 и показатели, косвенно отражающие активность канцерогенеза и противоопухолевого действия в органах-мишенях канцерогенного действия.

5. Изучить экспрессию промотора р53 у трансгенных мышей на фоне химически индуцированного канцерогенеза и введения анти-р53-антител.

Научная новизна.

Впервые было проведено комплексное изучение противоопухолевого действия анти-р53-антител. Впервые показано увеличение содержания белка р53 в эпителиальных клетках толстого кишечника крыс в процессе химически индуцированного канцерогенеза в ответ на введение анти-р53-иммуноглобулина. На модели трансгенных мышей впервые показано, что введение анти-р53-антител усиливает экспрессию промотора р53 и увеличивает содержание белка р53 в клетках кишечника. В экспериментах зарегистрирован выраженный противоопухолевый эффект введения крысам р53-антиген -липосомного комплекса или анти-р53-иммуноглобулина.

Теоретическая и практическая значимость результатов работы.

Выявленное в экспериментах резкое возрастание содержания белка р53 в злокачественных тканях при введении анти-р53-антител представляет интерес для обсуждения гипотезы о роли антиидитипических антител, соответствующих «внутреннему образу» антигена.

Зарегистрированное параллельное увеличение выраженности апоптоза, экспрессии р53-белка и количества Т-лимфоцитов в инфильтратах и примыкающих к опухолям тканях можно рассматривать как результат активации иммунной системы в ответ на введение р53 антиген-липосомного комплекса или анти-р53-антител.

Полученные экспериментальные данные могут служить основой для разработки принципиально новых методов иммунотерапии злокачественных опухолей.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Показано возрастание уровня экспрессии белка р53 в эпителиальных клетках толстого кишечника крыс в процессе химически индуцированного канцерогенеза.

2. В ответ на введение анти-р53-антител на фоне химически индуцированного канцерогенеза усиливается экспрессия промотора р53 и повышается содержание белка р53 в эпителиальных клетках кишечника.

3. При введении крысам р53-антиген-липосомного комплекса или анти-р53-антител на фоне химически индуцированного канцерогенеза зарегистрирован выраженный противоопухолевый эффект.

4. При введении крысам анти-р53-антител на фоне химически индуцированного канцерогенеза предотвращалось развитие В-иммунодефицита, характерного для крыс-опухоленосителей, и возрастало количество дендритных клеток и макрофагов в селезенке.

5. При введении крысам анти-р53-антител на фоне химически индуцированного канцерогенеза отмечено усиление локальной инфильтрации опухолей CD25+-клетками и процесса апоптоза в опухолях.

Личный вклад автора в проведенное исследование. Личным вкладом автора в выполненную работу является самостоятельное выполнение всех иммунологических и молекулярно-биологических исследований, интерпретация полученных результатов. Вклад соавторов ограничивается предоставлением в его распоряжение ряда оригинальных моноклональных антител и трансгенных мышей.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на 15 международных научных конференциях и доложены на научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2002г.). Диссертационная работа апробирована на научной конференции отдела иммунологии НИИЭМ РАМН 05 октября 2004 г.

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 16 печатных работ, в том числе 14 статей в научных журналах и 2 тезисов конференций.

Объем и структура диссертации. Объем работы составляет 121 страницу машинописного текста, включая 22 таблицы и 12 рисунков. Список литературы состоит из 168 наименований, из них 20 работ принадлежат отечественным авторам и 148 - зарубежным.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Тендлер, Евгений Вольфович

выводы

1. Уровень экспрессии р53 белка в ядрах и цитоплазме клеток коррелирует с прогрессией развития злокачественных опухолей толстой кишки, индуцированных канцерогенами у крыс.

2. Введение липосомного комплекса с р53-антигеном оказывает выраженный противоопухолевый эффект при химически индуцированном раке толстой кишки крыс.

3. Введение крысам антител, направленных против белка р53, способствует повышению экспрессии белка р53 в клетках слизистой толстой кишки и в клетках опухолей, индуцированных канцерогенами.

4. Введение крысам антител против р53 белка, выделенного от крыс с доброкачественными опухолями, оказывает сильный противоопухолевый эффект, предотвращая развитие опухолей и злокачественную трансформацию доброкачественных опухолей.

5. Введение крысам анти-р53-антител предотвращает развитие В-иммунодефицита, характерного для крыс-опухоленосителей, и вызывает повышение количества дендритных клеток и макрофагов в селезенке.

6. Введение крысам анти-р53-антител вызывает усиление инфильтрации опухолей СD25^клетками и активизацию процессов апоптоза в опухолях, индуцированных канцерогенами.

7. У р53 трансгенных мышей экспрессия промотора р53 под действием канцерогена снижается как в слизистой тонкой, так и в слизистой толстой кишки. Введение трансгенным мышам анти-р53-антител приводит к увеличению экспрессии р53 промотора и к уменьшению иммуносупрессивного влияния канцерогенов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Белок р53 дикого типа (wtp53) содержится в нормальных клетках в латентном состоянии и не выявляется обычными методами, но оказывает противоопухолевое действие. Более половины всех случаев рака у человека сопровождаются мутациями р53-гена, во многих других случаях выявляется потеря функциональной активности р53-белком без мутации в гене. И в том, и в другом случае р53 накапливается в злокачественно трансформированной клетке в значительных количествах. р53 подходит для заместительной генной терапии, так как он является мощным индуктором апоптоза раковой клетки. Однако терапия с использованием р53-гена имеет существенные ограничения. Учитывая это, для лечения опухолей, содержащих нормальный или мутантный р53-белок, становятся более актуальными иммунологические подходы. Так как в нормальных неопухолевых клетках содержится необнаружимо малое количество р53-белка, а в опухолевых — очень большое, то возможно проведение иммунотерапии путем введения р53-белка, однако, как собственный антиген, он слабо иммуногенен, даже в своей му-тантной форме. По этой причине мы попытались исследовать не только иммунизацию самим р53-белком, но и введение антител против р53 и изучить возможные иммуно-тропные эффекты. Канцерогенез сопряжен с серьезными повреждениями иммунной системы, с нарушениями функций Т- и В-лимфоцитов. Канцерогены оказывают повреждающее действие на лимфоидную ткань. Опухолевый рост, как правило, идет на фоне выраженного иммунодефицита. В связи с этим изучался вопрос о возможном влиянии иммунизации белком р53 и введения антител против р53 на лимфоидную ткань в условиях химического канцерогенеза. Наши данные свидетельствуют о том, что увеличение апоптоза, экспрессии р53-белка и числа CD25+ Т-лимфоцигов в инфильтратах и примыкающих к опухолям тканях можно рассматривать как результат активации иммунной системы в ответ на введение анти-р53 IgG или р53-антиген-липосомного комплекса.

Обработанные канцерогеном крысы без опухоли имели существенные изменения пролиферативной активности лимфоидных компонентов селезенки, макрофагов и дендритных клеток. Онкогенез толстой кишки вызвал глубокие изменения в селезенке. Елатрансформация снизилась по сравнению с крысами, у которых не появилась опухоль в результате канцерогенной обработки. Некоторые из зародышевых центров и слой мантии были опустошены. Количество плазматических клеток в красной пульпе резко уменьшилось. Уменьшение апоптоза было замечено в ткани ТК и в ПАЛМ селезенки. Все эти изменения отражают состояние супрессии как Т, так и В-систем иммунитета. Резкое увеличение количества дендритных клеток, CD25+ Т-клеток, макрофагов и ней-трофилов может рассматриваться как компенсаторная реакция селезенки на сильное антигенное воздействие.

Выраженность этих изменений снижалась как при введении анти-р53 IgG, так и при иммунизации р53-антиген-липосомным комплексом. Морфологически противоопухолевые эффекты выражались в повышении пролиферативной активности лимфоидной ткани в пределах опухолей и в окружающих их тканях. Апоптотический индекс имел тенденцию к повышению в ткани ТК и опухолях.

Мы обнаружили некоторые различия в селезеночном ответе на иммунизацию р53-антигеном по сравнению с введением антител против р53. Эти различия проявлялись, главным образом, в области, занятой различными составляющими белой пульпы. В целом, области белой и красной пульп, ПАЛМ и маргинальной зоны крыс, обработанных канцерогенными веществами, изменялись сходным образом после иммунизации р53-антигеном или введения анти-р53-антител. С другой стороны, фолликулы и их главные составляющие, зародышевый центр и слой мантии, реагировали различным образом.

Таким образом, недостаточность иммунной системы отмечалась в основном у несущих опухоли неиммунизированных крыс, это выражалось в значительном уменьшении областей белой пульпы, мантии, ПАЛМ и маргинальной зоны. В то же время, у иммунизированных крыс отмечена высокая активность В-клеточной системы селезенки. Т-система этих крыс была менее защищена, чем Т-система крыс, получивших антитела против р53 и имевших большие области ПАЛМ и значительное количество CD25+ Т-клеток.

Возможность супрессии онкогенеза через иммунную систему организма была проверена нами путем введения крысам анти-р53 IgG уже после индукции опухолей. Морфологическое исследование показало, что животные без опухоли, получившие канцероген и, впоследствии, антитела, развивают более мощную иммунную реакцию, чем те, которые получили только канцероген. Это проявлялось в расширении фолликулов и слоя мантии, в повышенном количестве дендритных клеток в фолликулах, макрофагов в маргинальных зонах, и плазматических клеток и лимфобластов в красной пульпе. Признаки недостаточности иммунной системы отсутствовали.

Недостаточность иммунной системы была найдена у получивших антитела крыс-опухоленосителей. Симптомы недостаточности были, однако, более слабо выражены, чем у крыс опухоленосителей, не пролучивших антител. Таким образом, обработка канцерогеном, сопровождаемая введением поликлональных анти-р53-антител, приводила к стимуляции селезеночной В-системы. Кроме того, введение антител также активизировало продукцию макрофагов и дендритных клеток. Активация Т-клеточной системы обнаруживалась только иммуногистохимическими методами.

Мы нашли, что канцерогенные вещества, даже в низких дозах, не приводящих к возникновению опухолей, вызывали существенные изменения структуры селезенки. Это проявлялось, главным образом, в увеличении бластгрансформации лимфоцитов.

Уменьшение общего количества лимфоидных клеток в фолликулах (В-зона) и ПАЛМ (Т-зона) отражает умеренную недостаточность лимфоидной системы селезенки, как ответ на действие низких доз канцерогенного вещества.

Введение трансгенным мышам антител против р53 (анти-р53 IgG) вызывало интенсивную бласттрансформацию и существенную экспансию белой пульпы и фолликулярных зародышевых центров, но уменьшало бласттрансформацию в ПАЛМ и в маргинальной зоне. Это указывает на то, что антитела к р53, вызывают, главным образом, ответ В-клеточной системы и, в меньшей степени, реакцию Т-клеточной системы. Введение мышам различных антител с последующей DMH-обработкой приводило к изменениям в селезенке, которые были подобны тем, что описаны после одного DMH и несколько изменялись под влиянием антител.

Введение р53-трансгенным мышам анти-р53 IgG, или моноклональных антител D01 и Pab 421 стимулировало селезеночную Т-систему, и поэтому могло уменьшить он-когенный эффект канцерогенных веществ.

Мы предполагаем, что введение анти-р53 IgG стимулирует продукцию антиидио-типических антител (АЬ2). Эти антитела - иммуноглобулины со специфичностью к детерминантам, расположенным в пределах переменной области специфичных к антигену антител (АЫ). Некоторые АЬ2 распознают идиотип в пределах участка объединения антигена и АЫ и могут имитировать пространственную структуру антигена, против которого АЫ были получены [102, 10, 11, 12]. Связанные с опухолью антигены (ОАА) часто экспрессируются в течение нормального эмбрионального развития и, возможно, представлены в нормальных тканях [34]. Как следствие, организм обычно толерантен к ОАА и эффективного антиопухолевого иммунного ответа не наблюдается. На основании полученных результатов нами был предложен новый подход для стимулирования противоопухолевого иммунного ответа к ОАА с использованием иммуномиметических молекул - антиидиотипических антител - АЬ2 [129, 10, 11, 12]. АЬ2 вступают в реакцию с участком антител, направленных против ТАА, и могут воспроизводить «внутренний образ» антигена [39]. Недавние эксперименты показали, что АЬ2 могут вызывать антиопухолевый эффект, непосредственно подавляя рост ОАА-экспрессирующих раковых клеток, или активируя иммунный противоопухолевый ответ через индукцию следующего поколения антител (АЬЗ) [30].

Можно предположить, что анти-р53 IgG стимулирует генерацию антиидиотипических антител по пути, подобному описанному в литературе [129, 39 , 30, 10, 11, 12]. Аналогичный эффект эндогенных антиидиотипических антител был найден (Ter-Grigorov, 1992) в экспериментах с иммунизацией мышей, инфицированных вирусом (Rauscher) лейкоза, аутоантителами против Н-20Ь антигена [142]. Были получены антиидиотипиче-ские человеческие антимышиные антитела, индуцированные при иммуносцинтиографии с мышиными Анти-СА 125-моноклональными антителами, которые продлевали жизнь пациентам с карциномой яичника [30].

Хотя р53 не относится к поверхностным антигенам клетки, олигопептидные фрагменты этого белка, в комплексе с антигеном гистосовместимости первого типа, пре-зентируются на клеточной поверхности и становяться мишенью для атаки CD25+T-лимфоцитов [44, 144]. В нормальных условиях концентрация белка р53 в тканях ничтожна, и его распад по убиквитиновому пути приводит к полной элиминации. При ма-лигнизации происходит нарастание уровня р53 за счет большей устойчивости мутантного р53, при этом его синтез снижается. Ситуация резко меняется при введении антител к белку р53. Возрастает экспрессия промотора, что является показателем усиления транскрипции специфической мРНК с последующим ускорением трасляции белка р53. Это, в свою очередь, приводит к образованию избыточного количества олигопептидов и их презентации в комплексе с МНС-1, по общепризнанным механизмам. Хотя в нашем распоряжении нет фактов, непосредственно подтверждающих противоопухолевое действие таких лимфоцитов, обнаружение массивной инфильтрации CD254 Т-лимфоцитами может косвенно свидетельствовать об этом.

Теоретическая и практическая значимость результатов экспериментального исследования состоит в том, что впервые было проведено комплексное изучение противоопухолевого действия анти-р53-антител. Полученные данные о резком возрастании содержания белка р53 в злокачественных тканях при введении анти-р53-антител могут служить основой для разработки принципиально новых методов экспериментальной терапии злокачественных опухолей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Тендлер, Евгений Вольфович, 2005 год

1. Абелев Г.И. Иммунология рака. // Вестник Российской Академии медицинских наук. 1999. - №4. - с. 21-25.

2. Абрамов В.В., Короткова Н.А., Козлов В.А. Иммунотерапия рака легких у мышей линии Balb/c. // Вопросы онкологии. 2003. - т.49. - № 4. - с. 484-486.

3. Агол В.И. Вирусная инфекция и клеточная пролиферация. // Онтогенез. 2002. - т. 33,-№5. - с. 343-348

4. Анисимов В.Н., Алимова И.Н. Использование мутантных и трансгенных мышей для изучения механизмов старения и возрастной патологии. // Успехи геронтологии. -2001. -№ 7, с. 72-94.

5. Бондарчук ИА. Анализ роли репарации ДНК, регуляции клеточного цикла и апоптоза в индуцированном радиацией адаптивном ответе клеток млекопитающих. // Радиационная биология и радиоэкология. -2003,-т.43.-№ 1,- с. 19-28.

6. Бугров В.В. Абсалямова О.В. Корреляция вовлеченности лимфатических узлов при раке желудка с иммунологическими характеристиками хозяина и опухоли. // Вопросы онкологии. 2003,- т.49,- № 4,- с. 442-444.

7. Глушков А.Н., Аносова Т.Р., Аносов М.П., Небесная Н.Г., Железнова Л.И., Кирилов К.С. Новые методы определения противоопухолевого иммуного ответа при раке груди. // Вопросы онкологии. 1996,- т.42,- № б,- с. 33-36.

8. Дайхес Н.А., Давидов Х.Ш. Методы адоптивной иммунотерапии в ЛОР-онкологии. // Вестник оториноларингологии. 1996,- № 1.- с. 35-38.

9. Дубина М.В., Петрищев Н.Н., Панченко А.В., Федоров Е.С., Анисимов В.Н. Влияние суточного ритма на канцерогенез в толстом кишечнике крыс, индуцированный 1,2-диметилгидразином. // Вопросы онкологии. 2002.- т.48.- № 3,- с. 331-334.

10. Иоффе В.И., Косицкая JI.C. Анти-антитела. III. Сравнительные характеристики анти-антител, полученных различными методами. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1981.- № 8.- с. 33-36.

11. Иоффе В.И., Розенталь К.М. Анти-антитела. 11. Иммунологические характеристики продукции анти-антител, анти-антитела к аутологичным антителам. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1974,- т.51.- № 3.- с. 3-9.

12. Иоффе В.И., Розенталь К.М. Анти-антитела. I. Получение анти-антител и некоторые условия, необходимые для их формирования. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1974, № 1, с.5-12.

13. Кадагидзе З.Г. Иммунодиагностика и иммунотерапия опухолей. // Вестник Российской Академии медицинских наук. 1999,- .№ 5 - с. 19-22.

14. Киселева Е.П, Огурцов Р.П., Доценко Е.К. Влияние метаболических факторов на апоптоз тимоцитов при опухолевом росте. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003.- т. 135,- № 5,- с. 475-477.

15. Киселева Е.П, Суворов А.Н., Огурцов Р.П. Роль апоптоза в инволюции тимуса при росте трансплантированных сингенных опухолей у мышей. // Известия Академии наук. Серия биология. 1998,- № 2,- с. 172-9.

16. Киселевский М.В. Адоптивная иммуннотерапия при злокачественных опухолях. // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2003,- .№ 1.- с. 40-44.

17. Мазурик В.К., Михайлов В.Ф. Радиационно-индуцированная геномная нестабильность: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение. // Радиационная биология и радиоэкология. 2001.- т.41.- № 3,- с. 272 -289.

18. Мазурик В.К., Мороз В.В. Проблемы радиологии и белок р53. // Радиационная биология и радиоэкология. 2001 - т.41,- № 5,- с. 548-572.

19. Райхлин Н.Т., Райхлин А.Н. Регуляция и проявление апоптоза в нормальных и злокачественных тканях. // Вопросы онкологии. 2002.- т.48,- № 2.- с. 159-171.

20. Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы: развитие, активация, эффекторные функции. // Российский иммунологический журнал. 1999.-т.4.-№ 3,- с. 220-223.

21. Ahnen DJ. Are animal models of colon cancer relevant to human disease. // Dig Dis Sci.- 1985. V. 30(12 Suppl). - P. 103S-106S.

22. Almon E., Goldfinger N., Kapon A., Schwartz D., Levine A.J., Rotter V. Testicular tissue-specific expression of the p53 suppressor gene. // Dev Biol. 1993. - V. 156. - P. 107-116.

23. Al-Sarireh В., Eremin O. Tumor-associated macrophages(TAMS): disordered function, immune suppression and progressive tumor growth. // J R Coll Surg Edinb 2000. V.45. -P. 1-16.

24. Ashcroft M., Kubbutat M. H. & Vousden К. H. Regulation of p53 function and stability by phosphorylation. // Mol Cell Biol. 1999. - V. 19. - P. 1751-1758.

25. Atadja, P., Wong H., Garkavtsev I.,. Veillette C. & Riabowol K. Increased activity of p53 in senescing fibroblasts. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1995. V. 92. - P. 83488352.

26. Attardi L. D., Jacks T. The role of p53 in tumour suppression: lessons from mouse models. // Cell Mol Life Sci. 1999. - V. 55. - P. 48-63.

27. Bates S., Vousden K. Mechanisms of p53-mediated apoptosis. // Cell Mol Life Sci. -1999.-V. 55(1).-P. 28-37.

28. Ben-Hur H., Gurevich P., Calmanovich S., Gershon S., Zusman I. Tumor-induced insufficiency in T cell activity and hyperproduction of interleukin-2 in rat giant hepatomas. // Int J Mol Med. 2001. - V. 7(3). - P. 269-72.

29. Ben-Hur H, Gurevich P, Calmanovich S, Gurevich E, Zusman I. Effect of giant hepatomas on lymphocyte production and secretion of apoptosis-related proteins in the rat spleen. // Oncol Rep. 2001. - V. 8(4). - P. 731 -5.

30. Bergers JJ, Otter WD and Crommelin DJA. Liposome-based cancer vaccines. // J Liposome Res. 1996. - V. 6. - P. 339-355,

31. Bodmer V. Fetal Antigens and Cancer. // Ciba Found Symp. Pitman. London. - P. 361.

32. Bos J.L., Fearon E.R., Hamilton S.R, Verlaan-de Vries M., van Boom J.H., van der Eb A. J., Vogelstein B. Prevalence of ras gene mutations in human colorectal cancers. // Nature. -1987. V. 327 (6120). - P. 293-7.

33. Braun I. and Stiehm E.R. The B-lymphocyte system. // In: Stiehm ER (ed), Immunologic Disorders in Infants and Children. Saunders, Philadelphia. -1995. P. 35-74.

34. Broaddus RR, Wargovich MJ, Castro GA: Early stages of 1,2-dimethylhydrazine -induced colon carcinogenesis suppress immune-regulated ion transport of mouse distal colon. // Cancer Res. -1994. V.54. - P. 5930-5936.

35. Brugarolas J., Chandrasekaran C., Gordon J. 1., Beach D. Jacks T. and Hannon G. J. Radiation-induced cell cycle arrest compromised by p21 deficiency. // Nature. 1995. -V.377.-P. 552-557.

36. Cheng H.L, Sood A. K., Ward R.E., Kieber-Emmons Т., Kohler H. Structural basis of stimulatory anti-idiotypic antibodies. // Mol Immunol. 1988. - V. 25(1). - P. 33-40.

37. Choi H.J., Jung I.K., Kim S.S. and Hong S.H. Proliferating cell nuclear antigen expression ant its relationship to malignancy potential in invasive colorectal carcinomas. // Dis Colon Rectum. 1997. - V. 40. - P. 51-58.

38. Choi J., Donehower L.A. p53 in embryonic development: maintaining a fine balance. // Cell Mol Life Sci. -1999. V. 55(1). - P. 38-47.

39. Chowdary D.R., Dermody J.J., Jha K.K. & Ozer H.L. Accumulation of p53 in a mutant cell line defective in the ubiquitin pathway. // Mol Cell Biol. 1994. - V. 14(3). - P. 1997-2003.

40. DeLeo A.B. p53-based immunotherapy of cancer. Approaches ro reversing unresponsiveness to T lymphocytes and preventing tumor escape. // Adv Otorhinolaryngol. -2005,-V. 62.-P. 134-150.

41. Deng C.X., Zhang P.M., Harper J.W., Elledge S.J. and Leder P. Mice lacking р21(С1Р1 AVAF1) undergo normal development, but are defective in G1 checkpoint control. // Cell. 1995. - V. 82. - P. 675-684.

42. Donehower L.A. Does p53 affect organismal aging? // J Cell Physiol. 2002. - V. 192(1).-P. 23-33.

43. Donehower L.A. & Bradley A. The tumor suppressor p53. // Biochem Biophys Acta 1993,-V. 155.-P. 181-205.

44. Donehower L.A., Harvey M., Slagle B.L., McArther M.J., Montgomery C.A.Jr., Butel

45. J.S, & Bradley A. Mice deficient for p53 are developmentally normal but susceptible to spontaneous tumours. //Nature. 1992. - V. 356(6366). - P. 215-21.

46. El-Deiry W.S., Tokino Т., Velculescu V.E., Levy DB., Parsons R., Trent J.M. WAF1, a potential mediator ofp53 tumour suppression. // Cell. 1993. - V. 75. - P. 817-825.

47. El-Deiry, W.S. Regulation of p53 downstream genes. // Seminars in Cancer Biol. -1998. V. 8. - P. 345-357.

48. Faries MB, Morton DL. Melanoma: is immunotherapy of benefit? // Adv Surg. 2003. -V. 37.-P. 139-69.

49. Fearon D.T., Locksley R.M. The instructive role of innate immunity in the acquired immune response. // Science. 1996. - V. 272. - P. 50-54.

50. Fiala E.S. Investigations into the metabolism and mode of action of the colon carcinogens 1,2-dimethylhydrazine and azoxymethane. // Cancer. 1977. - V. 40(5 Suppl). - P. 2436-2445.

51. Foley J.F., Dietrich D.R., Swenberg J.A., and Maronpot R.R. Detection and evaluation of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in rat tissue by improved immunohisto-chemical procedure. // J Histotechnol. 1991. - V. 14. - P. 237-241.

52. Freedman D.A., Levine A.J. Regulation of the p53 protein by the MDM2 oncoprotein. Thirty-eighth G.H.A.Clowes Memorial Award Lecture. // Cancer Res. 1999. - V. 59(1).-P. 1-7.

53. Gannon J.V., Greaves R., Iggo R., Lane D.P. Activating mutations in p53 produce a common conformational effect. A monoclonal antibody specific for the mutant form. // EMBO J. 1990. - V. 9. - P. 1595-1602.

54. Gavrieli Y., Sherman Y. and Ben-Sasson S.A. Identification of programmed cell death in situ via specific labelling of nuclear DNA fragmentation. // J Cell Biol. 1992. - V. 119,- P. 493-501.

55. Goldenberg D.M., Gaffar S.A., Bennet S.J. and Beach J.L. Experimental radio-imniunotherapy of a xenograft human colonic tumor (GW-39) producing carcinoem-bryonic antigen. // Cancer Res. 1981. - V. 41. - P. 4354-4360.iL t

56. Goligher J.C. Surgery of the anus, rectum and colon. // 4 edit., Baillere Tindall, London, 1980.-P. 375-378.

57. Gorman C.M., Moffat L.F., Howard B.H. Recombinant genomes which express chloramphenicol acetyl transferase in mammalian cells. // Mol Cell Biol. 1982. - V. 2. -P. 1044-1051.

58. Grewal I.S and Flavee R.A. A central role of CD40 ligand in the regulation of CD4+ T-cell responses. // Immunol Today. 1996. -V. 17. - P. 409-414.

59. Grouard G., Durand I., Filgueira L., Banchereau J. and Liu Y.J. Dendritic cells capable of stimulating T cells in germinal centres. // Nature. 1996. - V. 384. - P. 364367.

60. Gu W., Roeder R.G. Activation of p53 sequence-specific DNA binding by acetylation of the p53 C-terminal domain. // Cell. 1997. - V. 90(4). - P. 595-606.

61. Harlow E. and Lane D. Antibodies. In: A Laboratory Manual. 1988. - Cold Spring Harbor Lab. Publ, New York.

62. Harper J.W., Adami G.R., Wei N., Keyomarsi K. and Elledge S.J. The p21 CDK-interacting protein cipl is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent kinases. // Cell. -1993.-V.75.-P. 805-816.

63. Haupt Y., Maya R, Kaza A., & Oren M. Mdm2 promotes the rapid degradation of p53. //Nature. 1997. - V. 387. - P. 296-299.

64. Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein В., & Harris C.C. p53 mutations in human cancers. // Science. 1991. - V. 253. - P. 49-53.

65. Hollstein M., Rice K., Greenblatt M.S., Soussi Т., Fucks R., Sorlie Т., Hovig E., Smith-Sorensen В., Montesano R, & Harris С. C. p53 mutations in human tumors and cell lines. //Nucleic Acids Res. -1994. V. 22. - P. 3551-3555.

66. Hupp T.R., Sparks A. & Lane D.P. Small peptides activate the latent sequence-specific DNA binding function ofp53. // Cell. 1995. - V. 83(2). - P. 237-45.

67. Hupp. T.R. & Lane D.P. Two distinct signalling pathways activate the latent DNA-binding function of p53 in a casein kinase П-independent manner. // J Biol Chem. -1995. V. 270(30). - P. 18165-74.

68. Irving B.A., Weiss A. The cytoplasmic domain of the T cell receptor zeta chain is sufficient to couple to receptor-associated signal transduction pathways. // Cell. 1991. - V. 64,- P. 891-901.

69. Janus F., Albrechtsen N., Dornreiter I., Wiesmuller L., Grosse F., Deppert W. The dual role model for p53 in maintaining genomic integrity. // Cell Mol Life Sci. 1999, - V. 55(1).-P. 12-27.

70. Jayaraman L., Prives C. Covalent and noncovalent modifiers of the p53 protein. // Cell Mol Life Sci. -1999. V. 55(1). - P. 76-87.

71. Jones S. N., Roe A. E., Donehower L. A. and Bradley A. Rescue of embryonic lethality in mdm2-deficient mice by absence of p53. // Nature.- 1995. V. 378. - P. 206-208.

72. Kawakami Y, Rosenberg S.A. Human tumor antigens recognized by T-cells. // Immunol Res. 1997. - V. 16(4)-P. 313-39.

73. Kemp C.J, Wheldon Т., Balmain A. p53 deficient mice are extremely susceptible to radiation induced tumorigenesis. // Nature Genetics. -1994. V. 8. - P. 66-69.

74. Klein G., Sjogren H.O., Klein E., Hellstrom K.E. Demonstration of resistance againstmethylcholanthrene-induced sarcomas in the primary autochthonous host. // Cancer Res. -1960.-V. 20.-P. 1561-1572.

75. Ко L.J., Prives C. p53: puzzle and paradigm. // Genes Dev. 1996. - V. 10. - P. 10541072.

76. Kornstein M.J., Brooks J.S., Elder D.E. Immunoperoxidase localization of lymphocyte subsets in the host responses to melanoma and nevi. // Cancer Res. 1983. - V. 43. - P. 2749-2753.

77. Kress S., Sutter СStrickland P.T., Mukhtar H., Schweizer J., Schwartz M. Carcinogen-specific mutational pattern in the p53 gene in ultraviolet В radiation-induced squamous cell carcinomas of mouse skin. // Cancer Res 1992. - V. 52. - P. 6400-6403.

78. Kubbutat M.H G., Jones S.N. & Vousden K. Regulation of p53 stability by MDM2. // Nature. 1997. - V. 387. - P. 299-303.

79. Laman J.D., Claassen E., Noelle R. J. Functions of CD40 and its ligand, gp39 (CD40L). // Crit Rev Immtinol. 1996. - V. 16. - P. 59-108.

80. Lane D.P. p53, guardian of the genome. // Nature. 1992. - V. 358. - P. 15-16.

81. Lee S., Elenbaas В., Levine A. & Griffith J. p53 and its 14 kDa C-terminal domain recognize primary DNA damage in the form of insertion/deletion mismatches. // Cell. -1995.- V. 81(7).-P. 1013-1020.

82. Levine A.J., Momand J. & Finlay C.A. The p53 tumor suppressor gene. // Nature. 1991 -V. 351.-P. 453-456. 96.

83. Levine A.J. p53, the cellular gatekeeper for growth and division. // Cell. -1997 -V. 88(3).-P. 323-331.

84. Li Y.Q., Fan C.Y., O'Connor P. J., Winton D.J., Potten C.S. Target cells for the cytotoxic effects of carcinogens in the murine small bowel. // Carcinogenesis. 1992. - V. 13.-P. 361-367.

85. Lin J., Wu X., Chen J., Chang A. & Levine A.J. Functions of p53 protein in growth regulation and tumor suppression. // Cold Spring Harbor symposium on Quantitative

86. Biology LIX. 1995.-P. 215-223.

87. Lipkin M. Biomarkers of increased susceptibility to gastro-intestinal cancer: A new application to studies of cancer prevention in human subjects. // Cancer Res. 1988. - V. 48. - P. 235-245.

88. Lores-Vazquez В., Pacheco-Carracedo M., Oliver-Morales J., Parada-Gonzalez P. and Gambon-Deza F. Lymphocyte subpopulations of regional lymph nodes in human colon and gastric adenocarcinomas. // Cancer Immunol Iminunother. 1996. -V. 42. - P. 339-342.

89. Losman M.J., Leung S., Shin L.B. Development and evaluation of the specificity of a rat monoclonal anti-idiotypic antibody WN, to an anti-B-cell lymphoma monoclonal antibody. // Cancer Res. 1995. - V. 55. - P. 5978S-5982S.

90. Lowe S. & Ruley H.E. Stabilization of the p53 tumor suppressor is induced by adenovirus 5 El A and accompanies apoptosis. // Genes Dev. -1993. V. 7(4). - P. 535-545.

91. Lu H. & Levine A. J. Human TAFTD1 protein is a transcriptional coactivator of the p53 protein. // Proc Natl Acad Sci USA. 1995 - V. 92(11). - P. 5154-5158.

92. Mao J.H., Lindsay K.A., Balmain A. and Wheldon Т.Е. Stochastic modelling oftumori-genesis in p53 deficient mice. // Br J Cancer. 1998. - V. 77. - P. 243-252.

93. Marland G., Bakker A.B., Adema GJ. and Figdor C.G. Dendritic cells in immune response induction. // Stem Cells -1996. V. 14. - P. 501-507.

94. Milner J., Cook A., Sheldon M. A new and p53 monoclonal antibody, previously reported to be directed against the large T antigen of simian virus-40. // Oncogene 1987. -V. 1(4).-P. 453-455.

95. Milner J. Forms and function of p53. // Cancer Biol. -1994. V. 5. - P. 211 -219.

96. Moll U.M., Rion G., Levine A,J. Two distinct mechanisms alter p53 in breast cancer: Mutation and nuclear exclusion. // Proc Natl Acad Sci, USA. 1992. - V. 89. - P. 72627266.

97. Montes de Oca Luna R., Wagner D.S. and Lozano G. Rescue of early embryonic lethality in mdm2-deficient mice by deletion of p53. //Nature. 1995. - V. 378. - P. 203-206.

98. Mosner J.T., Mummenbrauer Т., Bauer C., Sczakiel G., Grossee F. & Deppert W. Negative feedback regulation of wild-type p53 biosynthesis. // EMBO J. 1995 - V. 14(18).-P. 4442-4449.

99. Mueller H. and Eppenberger U. The dual role of mutant p53 protein in chemosensitivity of human cancers. // Anticancer Res. 1996. - V. 16. - P. 3845-3848.

100. Nieuwenhuis P. and Opstelten D. Functional anatomy of germinal centers. // Am J Anat. 1984. - V.70. - P. 421-435.

101. Noguchi Y., Richards E.C., Chen Y.T., Old L.J. Influence of interleukin 12 on p53 peptide vaccination against established Meth A sarcoma. // Proc Natl Acad Sci US A.-1995. V. 92(6). - P. 2219-2223.

102. Okamoto M., Ohtsu H., Kominami R., Yonekawa H. Mutational and LOH analyses of p53 alleles in colon tumors induced by 1,2-dimethylhydrazine in F1 hybrid mice. // Carcinogenesis. -1995. V. 16(11).- P. 2659-2666.

103. Ong S.T., Hackbarth M.L., Degenstein L.C., Baunoch D.A., Anastasi., McKeithan T.W. Lymphadenopathy, splenomegaly and altered immunoglobulin production in BCL3 transgenic mice. // Oncogene. 1998. - V. 16,- P. 2333-2343.

104. Oprea M. and Perelson A.S. Exploring the mechanisms of primary antibody responses to T cell-dependent antigens. // J Theor Biol. 1996. - V. 181. - P. 215-236.

105. Peterson G.L. Determination of total protein. Methods Enzymol. 1983. V.9. P. 95-119.

106. Pokroy R., Pollack A., Zinder O., Weisinger G. p53 expression in the normal murine eye. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2002. - V. 43. - P. 1736-1741.

107. Ragupathi G. Carbohydrate antigens as targets for active specific immunotherapy. // Cancer Immunol Immunother. 1996. - V. 43. - P. 152-157.

108. Reichert Т.Е., Rabinowich H., Johnson J.T., Whiteside T.L. Human immune cells in the tumor microenvironment: mechanisms responsible for signaling and functional defects. // J Immunother. 1998. - V. 21. - P. 295-306.

109. Renkvist N., Castelli C., Robbins P.F., Parmiani G. A listing of human tumor antigens recognized by T cells. // Cancer Immunol Immunother 2001. - V. 50. - P. 3-15.

110. Rodrigues N.R., Rowan A., Smith M.E., Kerr I.B., Bodmer W.F., Gannon J.V., Lane D.P. P53 mutations in colorectal cancer. // Proc Natl Acad Sci. USA. 1990. - V. 87. -P. 7555-7559.

111. Roitt I.M., Thanavala Y.M., Male D.K. Anti-idiotypes as surrogate antiens: structural considerations. // Immunol Today. 1985. - V. 6. - P. 265.

112. Scott A.M., Welt S. Antibody-based immunological therapies. // Curr Opin Immunol. -1997.-V. 9(5).-P. 717-722.

113. Scott N., Bell S.M., Sagar P., Blair G.E., Dixon M.F., Quirke P. p53 expression and K-ras mutation in colorectal adenomas. // Gut 1993. - V. 34. - P. 621-624.

114. Seliger В., Cabrera Т., Garrido F., Ferrone S. HLA class I antigen abnormalities and immune escape by malignant cells.// Semin Cancer Biol. 2002. - V. 12.-P.3-13.

115. Shaulian E., Zauberman A., Ginsberg D. & Oren M. Identification of a minimal transforming domain of p53: negative dominance through abrogation of specific DNA binding. //Mol Cell Biol. -1992. -V. 12. P. 5581-5592.

116. Shaulsky G., Goldfinger N., Tosky M.S., Levine A. J., Rotter V. Nuclear localization is essential for the activity ofp53 protein. // Oncogene. -1991. V. 6. - P. 2055-2065.

117. Shaulsky G., Goldfinger N., Rotter V. Alterations in tumor development in vivo mediated by expression of wild type or mutant p53 proteins. // Cancer Res. 1991. - V. 51 -P. 5232-5237,

118. Shohat-Foord O, Bhattacharya P, Reich P, Rotter V: A DNA binding domen is contained in the C-terminus of wild-type p53 protein. // Nucleic Acid Res. 1991. - V.19. -P. 5191-5198.

119. Steegenga W.T., van Laar Т., Riteco N., Mandarine A., Shvarts A., van der Eb A. & Jochensen A.G. Adenovirus El A proteins inhibit activation of transcription by p53. // Mol Cell Biol. 1996. - V. 16(5). - P. 2101-2109.

120. Sun X.F., Carstensen J.M., Zhang H., Arbman G. and Nordenskjold B. Prognostic significance of p53 nuclear and cytoplasmic overexpression in right and left colorectal adenocarcinomas. //Eur J Cancer. -1996. V. 32A. - P. 1963-1967.

121. Takei K., Watanabe H., Itoi T. and Saito T. p53 and Ki-67 immunoreactivity and nuclear morphometry of "carcinoma-in-adenoma" and adenoma of the gall-bladder. // Pathol Int. 1996. - V. 46. - P. 426-435.

122. Ter-Grigorov V. Autoimmunity and counter-autoimmunity in the mechanisms of retro-virus-induced leukemogenesis. Leukemia. 1992. V.6 (Suppl.3). P. 17IS-173S.

123. Timens W. The human spleen and immune system: Not just another lymphoid organ. //Res Immunol. -1991. V. 142. - P. 316-320.

124. Van de Berg E.M., Tigges A.J., Schipper M.E.T., Den Hartog-Jager F.C.A., Kroes W.G.M., Waiboomers J.M.M. Expression of the nuclear oncogene p53 colon tumours. // J Pathol. 1989. -V. 157. P. 193-199.

125. Vojtesek В., Bartek J., Midgley C.A., Lane D.P. An immunochemical analysis of human p53. // J.Immunol Methods. 1992. - V. 51. - P. 237-244.

126. Von Kleist S., Berling J., Bohle W., Wittekind C. Immunohistochemical analysis of lymphocyte subpopulationss infiltrating breast carcinoma and benign lesions. // Int J Cancer. 1987. - V. 40. - P. 18-23.

127. Wang J., Coltrera M.D. and Gown A.M. Abnormalities of p53 and pi 10 (RB) tumor suppressor gene expression in human soft tissue tumors: Correlations with cell proliferation and tumor grade. // Modern Pathol. 1995. - V. 8. - P. 837-842.

128. Wang Y., Reed M., Wang P., Stenger J.E., Mayr G., Anderson M.E., Schwedes M.E. & Tegtmeyer P. p53 domains: identification of autonomous DNA-binding regions. // Genes Dev. 1993. - V. 7. - P. 2575-2586.

129. Weinberg R. Oncogenes, and the molecular bases of multistep carcinogenesis. // Cancer Res. 1999. - V. 49. - P. 3713-3721.

130. Whiteside T.L. The role of Fas/FasL in immunosupression induced by human tumors. // Cancer Immunology Immunother. 1998. - V. 46. - P. 175-184.

131. Whiteside TL. 22. Immune responses to malignancies. // J Allergy Clin Immunol. -2003. V.l 11 (2 Suppl). - P. S677-86.

132. Whitheley L.O., Hudson L. and Pretlow T.P. Aberrant crypt foci in the colonic mucosa of rats treated with a genotoxic and nongenotoxic colon carcinogen. // Toxicol Pathol. -1996.-V. 24.-P. 681-689.

133. Wolkowicz R, Elkind N.B., Ronen D., Rotter V. The DNA binding activity of wild type p53 is modulated by blocking its various antigenic epitopes. // Oncogene. -1995. V. 10(6).- P.l 167-1174.

134. Wu L., Anaraki F., Morahan P.S., Leary K. Transient expression of virus-specific promoters in murine resident peritoneal macrophages. IIJ Leukocyte Biol. 1992. - V. 48. -P. 229-236.

135. Yamada K. and Wada R. Expression of apoptosis-related antigen Le(Y) in superficial colorectal adenoma and adenocarcinoma. // Int J Oncol. -1996. V. 9. - P. 653-658.

136. Zhang J. and Russell S.J. Vectors for cancer gene therapy. // Cancer Metast Rev.1996.-V. 15.-P. 385-401.

137. Zhang L., Zhou W., Velculescu V.E., Kem S.E., Hruban R.H., Hamilton S.R., Vogel-stein В., Kinzler K.W. Gene expression profiles in normal and cancer cells. // Science.1997. V. 276. - P. 1268-1272.

138. Zusman I., Zusman R., Korol D., Sandler В., Ben-Hur H., Bass D., Mashiah A., Lif-schitz-Mercer В., Smirnoff P. and Glick J. Isolation of p53 protein from the serum of colon cancer and non-cancer patients. II Oncol Rep. 1995. - V. 2. - P. 679-683.

139. Zusman I., Zusman R., Karol D., Isolation of tumor-associated antigens from sera of colon tumor-bearing rats using polyclonal antibodies entrapped in gel fiberglass columns. // Oncol Rep. 1994. -V. I. - P. 751-754.t

140. Zusman I., Zymber A. and Nyska A. Individual variability of pathological parameters in chemically induced rat colon tumors. // Acta Anat. 1991. - V. 142. - P. 351 -356.

141. Zusman R. and Zusman I. Gel fiberglass as a new support for affinity chromatography. // Biotechnol ApplBiochem. -1995. V. 21. -P. 161-172.

142. Zusman R, Bee km an D.A., Zusman I. and Brent R.L. Purification of sheep immunoglobulin G using protein A trapped in sol-gel glass. // Anal Biochem. -1992. V. 201. -P. 103-106.

143. Zusman I. Gel fiberglass membranes for affinity chromatography columns and their application to cancer detection. // J Chromatogr В Biomed Sci Appl. 1998. - V. 715(1). -P. 297-306.