Роль эпителиально-бактериальных взаимодействий в ассоциативном симбиозе репродуктивного тракта женщин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Кремлева, Елена Александровна

• Кремлева, Елена Александровна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Кремлева, Елена Александровна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Микроэкология нижних отделов женского репродуктивного тракта (Обзор литературы)

1.1. Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин с позиции кон- 14 цепции ассоциативного симбиоза

1.1.1. Микросимбиоценоз женского репродуктивного тракта

1.1.2. Доминантные вагинальные микросимбионты

1.1.3. Ассоциативные вагинальные микросимбионты

1.1.4. Макропартнер в ассоциативном симбиозе женского репродук- 39 тивного тракта

1.2. Факторы, оказывающие влияние на состояние микроэкологии нижних отделов репродуктивного тракта женщин

1.3. Микроэкологические нарушения и инфекционные состояния ре- 57 продуктивного тракта женщин

1.4. Способы коррекции микроэкологического состояния женского репродуктивного тракта

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Общие данные

2.2. Характеристика штаммов микроорганизмов, методы выделения, 68 идентификации и культивирования

2.3. Методы диагностики инфекций, передаваемых половым путем

2.4. Характеристика состояния микросимбиоценоза репродуктивного 73 тракта женщин

2.5. Методы изучения свойств микросимбионтов

2.5.1. Метод определения продукции лактобациллами перекиси 74 водорода

2.5.2. Метод определения ростовых свойств микроорганизмов

2.5.3. Метод определения антагонистической активности микроор 76 ганизмов

2.5.4 Метод изучения способности бактерий образовывать биопленки

2.5.5. Методы изучения влияния вагинальных эпителиоцитов на 79 функциональную активность микросимбионтов

2.6. Методы изучения вагинальных эпителиоцитов

2.6.1. Методы получения вагинальных эпителиоцитов

2.6.2. Методы оценки количества и жизнеспособности первичных ва- 82 гинальных эпителиоцитов

2.6.3. Методы получения эпителиальных экзометаболитов и инакти-вированных эпителиоцитов

2.6.4. Изучение функциональной активности вагинальных эпителио- 83 цитов

2.6.5. Методы изучения влияния микросимбионтов на функциональную активность вагинальных эпителиоцитов

2.7. Методы количественного определения цитокинов, рецепторного 85 антагониста интерлейкина 1 и трансформирующего ростового фактора Р1, Э^А, СЗ компонента комплемента и лактоферрина.

2.8. Способ изучения влияния цитокинов на свойства бактерий

2.9. Методика изучения связи состояния микробиоценоза с цитокино-

вым профилем влагалища

2.10. Методика изучения связи исходов экстрокорпорального оплодо- 89 творения с микроэкологическим состоянием биотопов репродуктивного тракта женщин

2.11. Методика изучения взаимодействия мукозальных эпителиоцитов 90 влагалища с ауто- и гетероштаммами лактобацилл

2.12. Методика изучения интравагинальной пробиотической терапии

2.13. Методы статистической обработки полученных результатов

ГЛАВА 3. Характеристика эпителиально-бактериальных взаимодействий в вагинальном биотопе в норме и при патологии

3.1. Влияние эпителиально-бактериальных взаимодействий на свойства вагинальных микросимбионтов

3.1.1 .Способ определения влияния вагинальных эпителиоцитов на 97 биологические свойства бактерий

3.1.2. Влияние эпителиально-бактериальных взаимодействий на свой- 100 ства вагинальных микросимбионтов (в условиях нормоценоза)

3.1.3. Влияние эпителиально-бактериальных взаимодействий на свой- 110 ства вагинальных микросимбионтов (в условиях бактериального вагиноза)

3.2. Влияние эпителиально-бактериальных взаимодействий на функциональную активность вагинальных эпителиоцитов

3.2.1. Влияние эпителиально-бактериальных взаимодействий на 121 функциональную активность вагинальных эпителиоцитов, сформировавшихся в условиях нормоценоза

3.2.2. Влияние эпителиально-бактериальных взаимодействий на 128 функциональную активность вагинальных эпителиоцитов, сформировавшихся в условиях бактериального вагиноза

3.3. Влияние цитокинов на свойства вагинальных микросимбион- 134 тов

3.4. Исход эпителиально-бактериальных взаимодействий - как критерий дифференциации автохтонной и аллохтонной микрофлоры

3.5. Сравнительная характеристика эпителиально-бактериальных 152 взаимодействий в разных типах вагинального микробиоценоза

ГЛАВА 4. Влияние микроэкологического состояния нижних отделов репродуктивного тракта на функцию женской репродуктивной системы

4.1. Характеристика микроэкологического состояния биотопов репро- 158 дуктивного тракта женщин с оппозитными исходами экстракорпорального оплодотворения

4.2. Микроэкологические подходы к прогнозированию успешности 166 реализации репродуктивной функции

4.3. Связь состояния микробиоценоза и цитокинового статуса нижних 176 отделов женского репродуктивного тракта

ГЛАВА 5. Интравагинальная пробиотическая терапия с позиции эпи-

телиально-бактериальных взаимодействий

5.1. Эпителиально-бактериальные взаимодействия как основа для индивидуального подбора пробиотика

5.2. Состояние параметров мукозального иммунитета влагалища при интравагинальной пробиотической терапии

7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

8. ВЫВОДЫ

9. ЛИТЕРАТУРА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль эпителиально-бактериальных взаимодействий в ассоциативном симбиозе репродуктивного тракта женщин»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Интерес к изучению эпителиально-микробных взаимодействий, возросший в последние годы, определяется стратегически важным положением мукозальных эпителиоцитов - на границе внутренней и внешней сред, а также их способностью реагируя на внешние стимулы, участвовать в развитии защитных реакций врожденного и адаптивного иммунитета, в формировании толерантности к комменсалам, а также в развитии патологических процессов.

Большинство исследований в этой области посвящены взаимодействию эпителиоцитов с патогенными микроорганизмами. Накоплены данные о бактериальных модулинах, эпителиальных TLR и NLR рецепторах (Yu L et all, 2009), внутриклеточных сигнальных путях, изменении экспрессии цитокинов, антибактериальных пептидах (McCormick В.А, 2006), способных регулировать локальную иммунную реакцию, обеспечивая защиту от патогенных микроорганизмов.

Изучению эпителиально-микробного взаимодействия с нормофло-рой уделяется значительно меньшее внимание, в основном на примере мукозального иммунитета кишечника. Однако специфичность функций репродуктивного тракта, требующая обеспечения эффективной защиты от потенциальных патогенов, при сохранении толерантности к генетически чужеродной сперме и плоду, не позволяет распространить на него данные, полученные в иных биотопах.

Имеющиеся данные об эпителиально-бактериальных взаимодействиях в женском репродуктивном тракте ограничиваются сведениями о роли эпителиального гликогена в поддержании популяции лактобакте-рий и синтезе эпителиальными клетками отдельных антибактериальных пептидов и цитокинов при взаимодействии с патогенами.

Комплексного изучения взаимодействия вагинальных эпителиоци-тов с представителями доминантной и ассоциативной микрофлоры влагалища не проводилось, поэтому вопрос о роли эпителиально-бактериальных взаимодействий в формировании микробиоценозов и поддержании мукозального иммунитета репродуктивного тракта женщин остается открытым.

Поставленные вопросы лежат в области инфекционной симбиоло-гии, с опорой на концепцию ассоциативного симбиоза с его трехзвенье-вой структурой, включающей хозяина и микрофлору, как доминантную, так и ассоциативную (Бухарин О.В. с соавт., 2007). Если к этому добавить, что инфекция в настоящее время рассматривается как модельная система ассоциативного симбиоза (Бухарин О.В. с соавт., 2009), то становится очевидным, что решение задач по изучению микробно-эпителиальных взаимодействий полностью укладывается в концепцию первых двух векторов хозяин-доминант и хозяин-ассоциант, что актуализирует постановку цели и задач нашей работы.

Цель и задачи исследования

Цель: Изучить механизмы эпителиально-бактериальных взаимодействий в вагинальном биотопе в условиях нормо- и патоценозов и оценить их роль в ассоциативном симбиозе репродуктивного тракта женщин.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1.Изучить влияние микробно-эпителиальных взаимодействий на численность и функциональную активность представителей доминантной и ассоциативной микрофлоры влагалища.

2. Определить изменение функциональной активности вагинальных эпителиоцитов (синтез бактерицидных и регуляторных веществ) в ре-

зультате взаимодействия с различными вагинальными микросимбионтами.

3.Дать сравнительную характеристику эпителиально-бактериаль-ных взаимодействий в разных типах вагинальных микробиоценозов.

4. Оценить значение микроэкологического статуса вагинального биотопа для функционального состояния женской репродуктивной системы.

5. Охарактеризовать взаимосвязь мукозального иммунитета с характером микрофлоры влагалища и оценить возможность направленной модуляции параметров мукозального иммунитета пробиотиками.

6.На основе анализа исходов эпителиально-бактериальных взаимодействий обосновать подходы к оценке и коррекции микроэкологического состояния репродуктивного тракта женщин.

Научная новизна

Эпителиально-бактериальные взаимодействия в женском репродуктивном тракте - модельная система ассоциативного симбиоза, являющаяся основой поддержания микроэкологического гомеостаза, механизмы регуляции в которой строятся на закономерностях цитокиновой реакции вагинальных эпителиоцитов на взаимодействие с вагинальной микрофлорой, а также дифференцированном дозозависимом влиянии цитокинов провоспалительной направленности на свойства вагинальных микросимбионтов.

Установлено, что вагинальные эпителиоциты способны дифференцировано влиять на свойства микросимбионтов, формируя определенный тип микробиоценоза. В условиях нормоценоза эпителиоциты оказывают преимущественно стимулирующее влияние на ростовые свойства и антагонизм нормофлоры (лактобактерий и коринебактерий), одновременно подавляя прирост биомассы, способность к биопленкооб-

разованию и антагонистическую активность ассоциативной микрофлоры (S. aureus и Е. coli).

Особенностями эпителиально-бактериальных взаимодействий при бактериальном вагинозе, по сравнению с нормоценозом являются: стимуляция способности к биопленкообразованию ассоциативных микросимбионтов, сопровождающаяся ослаблением подавляющего воздействия на их ростовые свойства, и резкое угнетение прироста биомассы "Н202+" биоваров лактобактерий.

Изучение экспрессии цитокинов вагинальными эпителиоцитами при контакте с вагинальными микросимбионтами выявило выраженное усиление экспрессии провоспалительных цитокинов при взаимодействии с Е. coli и S. aureus, тогда как лактобациллы и коринебактерии вызывали умеренную стимуляцию их продукции.

Выявлено дифференцированное дозозависимое влиянии цитокинов провоспалительной направленности на ростовые свойства вагинальных микросимбионтов. В концентрациях, характерных для нормоценоза, происходит стимуляция свойств лактобацилл и коринебактерий, и подавлении роста S.aureus и E.coli. Концентрации, свойственные БВ, напротив, угнетают прирост биомассы лактобацилл, стимулируя (в случае с IL-lß и IL-8) свойства S.aureus и E.coli.

Установлено, что результирующая эпителиально-бактериаль-ных взаимодействий, выражающаяся в изменении функционального состояния эпителиоцитов и микросимбионтов, может быть использована в качестве критерия дифференциации автохтонной от аллохтонной микрофлоры в условиях женского репродуктивного тракта.

Установлен синергидный характер взаимодействий доминантной микрофлоры с мукозальными эпителиоцитами влагалища, проявляющийся в стимуляции прироста биомассы и антагонизма лактобактерий, и усилении синтеза эпителиоцитами веществ антимикробной направлен-

ности, что в совокупности служит основой поддержания колонизационной резистентности биотопа.

Выявлено, что нарушения микроэкологического состояния вагинального биотопа, проявляющиеся в дефиците доминантных микросимбионтов и повышении уровня провоспалительных цитокинов - одна из причин женской инфертильности, что свидетельствует о роли микробного фактора в регуляции гомеостаза хозяина и функционировании репродуктивной системы

В условиях in vivo продемонстрирована значимость нормофлоры влагалища для состояния цитокинового профиля вагинального содержимого. Дефицит лактофлоры сопровождается повышением уровня провоспалительных цитокинов, сопоставимым, а в отношении IL-1(3 даже превышающем уровень, наблюдаемый при И111111.

Показана возможность модуляции параметров мукозального иммунитета влагалища пробиотиками. Интравагинальная пробиотическая терапия оказывает влияние на состояние мукозального иммунитета нижних отделов женского репродуктивного тракта, выражающееся в противовоспалительном тренде баланса цитокинов.

Установлено стимулирующее влияние экзометаболитов вагинальных эпителиоцитов женщин на ростовые свойства пробиотического штамма как необходимое условие восстановления нормофлоры влагалища, что положено в основу разработки способа индивидуального подбора пробиотика для эффективной интравагинальной терапии (Положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке №2012136487).

Теоретическая и практическая значимость

В теоретическом плане получены новые данные о механизмах симбиотических взаимодействий макроорганизма с доминантной и ассоциативной микрофлорой вагинального биотопа, лежащие в основе

10

формирования микробиоценоза и определяющие состояние мукозально-го иммунитета.

Выявленная в ходе исследования связь микроэкологического состояния вагинального биотопа с фертильностью, расширяет патогенетические представления о причинах женского бесплодия, обосновывая роль микробного фактора в качестве регулятора гомеостаза организма и функционирования репродуктивной системы.

Практическую значимость работы определяют:

- Новые критерии дифференциации автохтонной и аллохтонной вагинальной микрофлоры, позволяющие осуществлять диагностику микроэкологических нарушений репродуктивного тракта женщин.

-Выявление связи состояния микробиоценоза с цитокиновым профилем вагинального биотопа позволило предложить определение уровня 1Ь-1|3 вагинальной жидкости в качестве маркера дисбиотических состояний женского репродуктивного тракта.

-Разработан способ оценки влияния вагинальных эпителиоцитов на биологические свойства бактерий, который по изменению свойств микроорганизмов позволяет оценивать влияние как эпителиальных эк-зометаболитов, так и непосредственного контакта с эпителиальными клетками (Патент РФ№2458135).

-Предложен новый способ индивидуального подбора пробиотика для эффективной интравагинальной пробиотической терапии, основанный на оценке результатов взаимодействия вагинальных эпителиоцитов пациентки с пробиотическими штаммами (Положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке №2012136487).

Основные положения, выносимые на защиту

Эпителиально-бактериальные взаимодействия - модельная система ассоциативного симбиоза, являющаяся основой поддержания микроэкологического гомеостаза биотопов женского репродуктивного тракта.

Результирующая бактериально-эпителиальных взаимодействий, выражающаяся в изменении функционального состояния эпителиоцитов и микросимбионтов, - дифференциальный критерий отличия автохтонной и аллохтонной микрофлоры вагинального биотопа.

Эпителиально-бактериальные взаимодействия определяют колонизационную резистентность биотопов репродуктивного тракта, регулируя численность и функциональное состояние доминантной микрофлоры и напряженность факторов мукозального иммунитета.

Дефицит доминантных микросимбионтов и высокий уровень про-воспалительных цитокинов, сопряженные с неудачными попытками ЭКО, характеризуют связь репродуктивной функции женского организма с микроэкологическим состоянием биотопов нижних отделов репродуктивного тракта.

Апробация работы

Основные положения работы доложены на У-УП Российских научных конференциях «Персистенция микроорганизмов», г. Оренбург, 2006, 2009, 2012; Российской научной конференции «Репродуктивное здоровье населения», г.Оренбург, 2005; 2 Международного конгресса по пробиотикам «Санкт-Петербург-Пробиотики-2009»; IV Региональном научном форуме «Мать и Дитя».г. Екатеринбург, 2010; Международной конференции «Развитие научных исследований и надзор за инфекционными заболеваниями», г. Санкт-Петербург, 2010.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 15 работ, из них 11 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, и 2 патента на изобретение.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 226 страницах и содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации и указатель литературы, включающий 55 отечественных и 254 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 21 таблицами и 23 рисунками.

Работа выполнена в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН в соответствии с планом научно-исследовательской работы: тема «Изучение симбиотических взаимоотношений в микробиоценозах тела человека», № гос. регистрации 01.2.00 104756; проект «Межбактериальные взаимодействия и их роль в формировании микробных биоценозов тела человека» по программе Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине»; тема «Изучение механизмов взаимоотношений симбионтов и их регуляции в различных биологических системах», № гос. регистрации 0120.0 600145; программа инициативных фундаментальных исследований УрО РАН, проект № 12-У-4-1023.

ГЛАВА 1. МИКРОЭКОЛОГИЯ НИЖНИХ ОТДЕЛОВ ЖЕНСКОГО РЕПРОДУКТИВНОГО ТРАКТА (Обзор литературы)

1.1. Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин с позиции

концепции ассоциативного симбиоза

Микробиоценоз - это устойчивое сообщество микроорганизмов в определенной среде обитания. Факт существования микробиоценоза во влагалище, как и в кишечнике, установлен довольно давно. Однако изучение этого вопроса по-прежнему актуально - условия существования, состав микробиоценоза являются предметом научно-медицинских исследований.

С позиции современной концепции ассоциативный симбиоз симбиоз представляет собой многокомпонентную надорганизменную интегральную систему, включающую хозяина в качестве макропартнера, стабильный доминантный микросимбионт и ассоциированные микросимбионты с разнонаправленными воздействиями, определяющими формирование, стабильность существования и продуктивность симбиоза в целом (Бухарин О.В. и др., 2007). Этой концепции соответствует ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта женщин, включающий клетки и факторы иммунитета хозяина, взаимодействующие с микроорганизмами, так и доминантные бактерии - лактобациллы и ассоциативные микроорганизмы, имеющие существенное значение, как в норме, так и при инфекционной патологии (Черкасов C.B., 2011).

1.1.1. Микросимбиоценоз женского репродуктивного тракта

Микрофлора репродуктивного тракта женщин представляет собой совокупность большого количества микроорганизмов различных таксонов, взаимодействующих между собой и оказывающих влияние на организм хозяина. В составе микрофлоры репродуктивного тракта присутствует множество видов микроорганизмов, однако одновременно могут встречаться 2-8 видов. Общепризнанными доминантными микроорга-

Ассоциативный симбиоз репродуктивного

тракта женщин

Макропартнер

Вагинальный эпителий

Факторы местного иммунитета

- лизоцим

-комплемент

-лактоферрин

-дефенсины

-иммуноглобулины (8 А) -фагоциты (нейтрофилы)

Рисунок 1.1 Схема ассоциативного симбиоза женского репродуктивного тракта

низмами являются лактобациллы, в таксономическом отношении характеризующиеся многочисленностью видов и антагонистической активностью. Отсутствие или дефицит лактобацилл свидетельствует о микроэкологических нарушениях и является критерием дисбиотических состояний. Другие же бактерий, колонизирующих биотопы репродуктивного тракта женщин, весьма разнообразны, представлены как анаэробами, так и аэробами, и, кроме того, разнородны по отношению к патоген-ности. Их значение до конца не определено. Некоторые виды ассоциированы с нормальным состоянием биотопа, а другие - этиологически значимые микроорганизмы различных инфекционно-воспалительных заболеваний. Рассмотрим подробнее, как в настоящее время исследователи характеризуют отдельных членов микробного сообщества репродуктивного тракта женщин, каково их значение по отдельности и микро-симбиоценоза в целом для здоровья организма женщины.

1.1.2. Доминантные вагинальные микросимбионты

Лактобациллы имеют исключительно важное значение для поддержания стабильности вагинальной экосистемы, являясь основным элементом бактериальной состовляющей колонизационной резистентности микробно обсемененных биотопов женского репродуктивного тракта против инфекций (Lepargneur J.-P., Rousseau V., 2002; Черкасов С.В.,2011).

Впервые в качестве вагинальной микрофлоры они были описаны в 1892 г. А. Додерлейн (Dóderlein А., 1982), который считал, что микрофлора влагалища гомогенна и образована грам-положительными, плео-морфными, аспорогенными палочками. Впоследствии эти микроорганизмы были названы в честь открывателя - палочки Додерлейна, их идентификационные и классификационные признаки были достаточно подробно описаны в 1901 г. Бейеринком, и затем они были классифицированы как род лактобацилл в 1960 г. (Rogosa A., Sharpe М., 1960). В на-

стоящее время для идентификации вагинальных лактобацилл используют молекулярно-генетические характеристики.

Видовой состав и идентификация вагинальных лактобацилл.

Идентификация лактобацилл является важным этапом в исследовании вагинальной лактофлоры, поскольку эти микроорганизмы, продуцируя перекись водорода и другие антибактериальные субстанции, снижают риск возникновения гонореи, бактериального вагиноза (Hawes S.E. et al., 1996) и передачи вируса иммунодефицита человека (Taha Е.Т. et al., 1999), что имеет важное клиническое значение. Традиционно, идентификация лактобацилл, колонизирующих вагинальный биотоп, была основана на ферментации Сахаров и других методах фенотипического анализа (Antonio M.A.D. et al., 1999). Исходя из данных этих методов идентификации, список вагинальных лактобацилл включал следующие виды: L. acidophilus, L. fermentum, L. plantarum, L. brevis, L. jensenii, L. casei, L. cellobiosus, L.leichmanii, L. delbrueckii, и L. salivarius (Rogosa M. et al., 1960; Levison M.E. et al., 1977; Nagy E. et al., 1991).

Для уточнения видового состава вагинальной лактофлоры Antonio M.A.D. et al. (1999) была проведена идентификация выделенных штаммов на основе их ДНК гомологии относительно штаммов лактобацилл из АТСС (American Type Culture Collection). По этим данным виды лактобацилл L. crispatus и L. jensenii являются доминирующими в вагинальном биотопе.

При определении видового состава лактофлоры женщин (Дели, Индия) с использованием видоспецифических праймеров были выделены 10 видов молочнокислых бактерий, принадлежавших к 4 группам (Garg К.В. et al., 2009). В результате оказалось, что 2 изолята классифицированные как L. plantarum с помощью определения последовательности нуклеотидов были идентифицированы как L. pentosus. Известно, что виды L. plantarum и L. pentosus генотипически тесно связаны и демонстрируют высокую фенотипическую схожесть. Более 99% объема их 16s

рДНК имеют идентичную последовательность нуклеотидов (Collins M.D. et al., 1991). Видоспецифические праймеры L. plantarum имеют сходство не только с L. pentosus, но и с другими тесно связанными видами, например, L. paraplantarum (Song Y.-L. et al., 2000).

Branco K.M.G.R. et al. (2010) провели исследование видового состава лактобацилл у здоровых женщин, женщин с различными инфекционными заболеваниями (папиллома, герпес, кандидоз), но без бактериального вагиноза (БВ) и у женщин с бактериальным вагинозом. Наиболее часто встречались L. crispatus (33,1% из всех изолятов лактобацилл), L. johnsonii (22,6%) и L. jensenii (17,3%). Авторы не обнаружили у здоровых женщин L. vaginalis и L. fermentum.

По результатам современных исследований L. acidophilus и L. fermentum являются основными видами колонизирующими влагалище взрослых здоровых женщин. Но эти данные получены с использованием методов фенотипической идентификации, таких как биохимический анализ (Alvarez-Olmos M.I. et al., 2004). В то же время известно, что группа микроорганизмов ранее известных как L. acidophilus оказалась высоко гетерогенной и впоследствии по ДНК гомологии была разделена на группы А и В с выделением видов: L. acidophilus (Al), L.crispatus {AT), L. amylovorus (A3), L. gallinarum (A4), L.gasseri (Bl), and L. johnsonii (B2) (Fujisawa T. et al., 1992; Johnson J.L. et al., 1980). Кроме указанных видов, среди основных представителей вагинальной лактофлоры были выделены L. jensenii и L.iners (Falsen Е. et al., 1999; Martin R. et al., 2008). Тесно связанные виды лактобацилл в комплексе L. acidophilus довольно сложно, а иногда невозможно дифференцировать с помощью фе-нотипических методов идентификации (Branco K.M.G.R. et al., 2010). Кроме того, некоторые виды лактобацилл, например L. iners, не растут на средах Rogosa или МРС, традиционно используемых для выделения лактобацилл (Falsen Е. et al., 1999). А этот вид принадлежит к доминант-

ным у женщин различных рас (черных и белых) (Väsquez А. et al., 2002; Anukam К.С. et al., 2006).

Использование RAPD ПЦР и секвенса 16s рибосомальной ДНК (Väsquez А. et al., 2002), мультиплексной ПЦР (Kiss Н. et al., 2007) и полного анализа ДНК (Antonio M.A.D. et al., 1999) позволяет достаточно точно идентифицировать лактобациллы, определить гомологию штаммов выделенных от одного индивидуума или гомологию в пределах одного вида.

Охарактеризована вагинальная лактофлора у здоровых женщин в первом триместре беременности (Kiss Н. et al., 2007). Наиболее часто встречались виды/,, gasseri (26.4%) и L. crispatus (23.6%), у 4.2% женщин эти виды были выделены совместно. L. jensenii был определен у 19,4% женщин, a L. rhamnosus - 9,7%. Виды L. acidophilus, L. plantarum и L. salivarius не были выделены. В работах Väsquez А. et al. (2002) and Antonio M.A.D. et al. (1999) также приведены данные, указывающие на то, что лидирующее положение по частоте выделения принадлежит видам L. jensenii, L. crispatus и L. gasseri. По данным других авторов доминантными являются виды L. acidophilus и L. fermentum, а затем следуют L. brevis, L. jensenii, L. casei (Reid G. et al, 1996). Использование молекулярно-генетических методов идентификации микроорганизмов позволило выявить доминирование таких видов, как L. crispatus, L. jensenii и L. iners (Reid G. et al, 1996; Burton J.P. et al., 2003). Частота обнаружения вагинальных лактобацилл у женщин в 1 триместре беременности может соотноситься с распространенностью этих бактерий в популяции небеременных женщин (Kiss Н. et al., 2007).

Wilks М. et al. (2004) определили видовой состав лактофлоры в вагинальном биотопе у 73 женщин в сроке гестации 20 недель. Для идентификации до вида проводили секвенирование 16s рДНК. После идентификации выделенных штаммов было установлено, что 27 из них принадлежали к виду L. gassei, 21 - L. crispatus, 16 - L. vaginalis, 15 - L.jen-

senii, 2 - L. oris и по 1 штамму принадлежали к видам L. casei, L. rham-nosus, L. fermentum, L. delbrueckii, L. reuteri, L. acidophilus. Таким образом, по результатам данного исследования основными видами вагинального биотопа у женщин при сроке гестации 20 недель являлись L. gassei, L. crispatus, L. vaginalis, L.jensenii.

Антагонистическая активность лактобацилл и их роль в колонизационной резистентности. Известно, что лактобациллы продуцируют большое количество различных веществ, которые ингибируют рост и размножение других микроорганизмов и, таким образом, регулируют численность популяции обитателей некоторых экологических ниш тела человека: рта, кишечника, кожи, влагалища. Благодаря наличию таких характеристик, как поддержание кислой среды (рН<4,5) за счет продукции лактата (Skarin A., Sylwan J., 1986), секреция Н202 (Klebanoff S.J. et al., 1991), бактериоцинов (Ocana V.S. et al., 1999), лактобациллы осуществляют локальное антимикробное действие против патогенов.

Такие вещества как молочная, уксусная, пироглютаминовая кислоты (Niku-Paavola M.L. et al., 1999; Strom К. et al., 2002), бактериоци-ны (Jimenez-Diaz R. et al., 1995) и перекись водорода являются биологически активными веществами с высокой потенциальной возможностью реагировать с липидами, протеинами, нуклеиновыми кислотами и другими молекулярными структурами клетки, вызывая окислительное повреждение клетки (Imlay J.А., 2002).

Лактобациллы образуют биоплёнку, покрывающую слизистую влагалища и защищающую таким образом от внедрения микроорганизмов благодаря реализации различных антибактериальных механизмов (Lepargneur J.-P., Rousseau V., 2002).

Ингибирование роста патогенов. Органические кислоты. Гликоген - важный источник углерода в вагинальном биотопе, он образуется вагинальным эпителием под действием эстрогенов и в течение менструального цикла его количество изменяется. Вагинальные лактобациллы

утилизируют гликоген или глюкозу (являющуюся продуктом гидролиза гликогена под действием эпителия, лактобацилл или других микроорганизмов) до образования органических кислот, преимущественно молочной кислоты и поддерживают рН среды около 4,0 (Boskey Е. et al., 1999; Berrebi A., Ayoubi J.M., 1999). Клетки вагинального эпителия также гид-ролизуют гликоген до молочной кислоты. Исследованиями последних лет показано, что более 50% лактата, обнаруживаемого в вагинальной жидкости, принадлежит к D-изомерам. Известно, что клетки человека не способны синтезировать L-формы молочной кислоты, тогда как бактерии продуцируют L- или D-изомеры, или смесь L-D-изомеров. Таким образом, лактобациллы являются основным продуцентом молочной кислоты в вагинальном биотопе (Boskey Е. et al., 2001).

Лактобациллы являются кислототолерантными микроорганизмами, тогда как большинство патогенов чувствительны к кислой среде влагалища, за исключением Candida albicans. Поэтому рН вагинальной жидкости является хорошим индикатором нормального баланса микрофлоры биотопа (McGroarty J., 1993; Sobel J., 1997; Berrebi A., Ayoubi J.M., 1999):

- без инфекций рН вагинальной среды около 4 (исключая период менструации);

- при бактериальном вагинозе, трихомонадном вагините показатель рН больше или равен 4,5;

- при кандидозном вагините рН ниже или равно 4 (Lepargneur J.-Р., Rousseau V., 2002).

Большинство исследователей полагают, что продукция молочной кислоты является важнейшим механизмом поддержания микроэкологического баланса влагалища здоровых женщин. Низкий показатель рН влагалища определяет неблагоприятные условия для роста G. vaginalis (оптимум рН 6,0-6,5) или различных облигатных анаэробов, таких как Р. bivia и Peptostreptococcus spp. (оптимум рН 5,5-6,0) (Biswas М.К., 1993).

Arutcheva A. et al. (2001) описали значительные видовые различия лактобацилл по росту и продукции кислоты in vitro. Эти свойства присущи L. crispatus, что может объяснять присутствие этих микроорганизмов в вагинальном биотопе здоровых женщин.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кремлева, Елена Александровна, 2013 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Абдумаликов РА. Комплексный способ терапии больных мочеполовым трихомониазом/Автореф. дисс. ... канд. мед.наук. -М., 1995. - 16 с.

2. Акопян Т.Э. Бактериальный вагиноз и беременность / Акуш. и гин. 1996. 6: 3-6.

3. Анкирская A.C. Бактериальный вагиноз. / Акуш. и гин. 1995. 6: 13-16.

4. Баев O.P., Стрижаков А.Н. Резидентная флора генитального тракта и этиология инфекционных осложнений беременности и послеродового периода// Акуш. и гин. 1997. 5:3-7.

5. Бойцов А.Г., Рищук C.B., Ильясов Ю.Ю., Гречанинова Т.А. Адгезия лактобактерий к клеткам вагинального и буккального эпителия / Вестник Санкт-Петербургской Медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2004. 4 (5):191-193.

6. Болотова A.A. Урогенитальный трихомониаз у женщин репродуктивного возраста (клиника, диагностика, лечение) /Автореф. дисс. ... канд. мед. наук., Пермь, 2004 - 28 с.

7. Бондаренко В.И., Ференц А.И., Колесников В.Г., Бурая Т.А. Вирулентность и антибиотикорезистентность эшерихий, выделенных от человека /Микробиол. журн. 1990. 52 (3): 66-69.

8. Боровиков В.П., Боровиков И.П. STATISTIC А - Статистический анализ и обработка данных в среде Windows. M: Информационно-издательский дом "Филинъ", 1997. - 608 с.

9. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер A.A. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов /Лаб. дело. 1986. 4: 210212.

10. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий: Автореф. дис.канд.мед.наук. Челябинск, 1992. — 20 с.

11. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.; Медицина; Екатеринбург: УрО РАН. 1999 - 367 с.

12. Бухарин О.В., Валышев A.B., Валышева И.В. Роль лактоферрина в противоинфекционной защите /Успехи современной биологии. 2011. 2: 135-144.

13. Бухарин О. В., Карташова О. Л., Киргизова С. Б., Валышева И. В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов /Журн. микробиол. 2005. 6: 7-10.

14. Гончар Н.В., Березина Л.В., Тихомирова О.В. Выбор пробиотика для рациональной терапии клебсиеллезной инфекции у детей / Журн. микробиол.2009. 2: 85-89.

15. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л.: Медицина, 1973. 141 с.

16. Гуртовой Б. Л., Кулаков В.И., Воропаева С.Д. Применение антибиотиков в акушерстве и гинекологии. - М.: Медицина, 1996.- 140с.

17. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогени-тальных инфекций. - Москва: Мед. книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003. 336 с.

18. Долгушин И. И., Андреева Ю. С. Роль нейтрофилов в регуляции микробиоценоза репродуктивного тракта женщин /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. 5: 84-87.

19. Долгушин И.И., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз. Екатеринбург: УрО РАН, 2001. 284 с.

20. Долгушин И.И., Долгушина В.Ф., Телешева Л.Ф. Дифференцированная коррекция местного иммунитета репродуктивного тракта с помощью лизоцима и иммуноглобулинов у беременных с генитальной инфекцией /Журн. Микробиол. 1997. 4: 111 - 115.

21. Долгушин И.И., Телешева В.Ф., Долгушина В.Ф. Местная проти-воинфекционная защита репродуктивного тракта женщин различного возраста /Журн. микробиол. 2002. 2: 86-89.

22. Долгушина В.Ф., Смольникова JI.A., Долгушин И.И. Состояние факторов местной иммунной защиты репродуктивного тракта при ваги-нозе у беременных /Журн. микробиол. 2001. 4: 89-93.

23. Егоров Н.С., Баранова И.П. Бактериоцины. Образование, свойства, применение/Антибиотики и химиотер. 1999. 44(6): 33-40.

24. Каграманова К.А., Ермольева З.В. Сравнительная характеристика методов определения активности лизоцима/Антибиотики. 1966. 10: С. 917919.

25. Карки Т.В, Ленцнер Х.П., Ленцнер A.A. Количественный состав лак-тофлоры и методика его определения / Журн. микробиол. 1994. 2: 16-18.

26. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. - СПб.: ООО «Нева-Люкс», 2001. - 364 с.

27. Клименко Б.В., Авазов Э.Р., Барановская В.Б. Степанова М.С. Три-хомониаз мужчин, женщин и детей. СПб., ООО «Сюжет», 2001. 192 с.

28. Константинова О.Д. Микробиологические подходы к диагностике и лечению воспалительных заболеваний придатков матки неспецифической этиологии: Автореф. дис. ... доктор, мед.наук. - Оренбург, 2004. 48с.

29. Костюковская О Н, Гладкая Е А Идентификация недифтерийных бактерий рода Corynebactenum и определение их антибиотикочувстви-тельности/ /Журн. микробиол, эпидемиол, иммунобиол. 1992. 9-10: 2931.

30. Краснопольский В.И., Буянова С.Н., Щукина H.A. Гнойная гинекология. М.: «МЕДпресс», 2001.- 282 с.

31. Кремлева Е.А. Характеристика микрофлоры репродуктивного тракта женщин при внутриматочных вмешательствах: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Челябинск, 2000. - 22с.

32. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммунохимия: пер. с англ. В.И. Левенсона; под ред. Н.В. Холчева. - М.: Медицина, 1968. - 684 с.

33. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высш. шк., 1990. - 352 с.

34. Лебедева О. П., Калуцкий П. В. Антиинфекционная защита влагалища на фоне применения низкодозированных монофазных контрацептивов /Журнал микробиол. 2007. 1: 67-70.

35. Ленцнер A.A., Ленцнер Х.П., Тоом М.А. О способности лактобацилл микрофлоры человека продуцировать лизоцим. Журн. микробиол. 1975. 8:77-81.

36. Мавров Г.И., Никитенко И.Н. Особенности микробных ассоциаций при трихомониазе. Ультраструктурное исследование /Дерматолопя та венеролопя. 2005. №3 (29). С. 16-20.

37. Мальцева Л.И., Миннуллина Ф.Ф. Применение гексикона при бактериальном вагинозе у женщин /Гинекология. 2003. 5(3): 92-94.

38. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.

- Новосибирск: Наука, 1989. 340 с.

39. Маянский, А.Н. Патогенетическая микробиология. Н. Новгород: НГМА, 2006. 520 с.

40. Митрохин С.Д., Иванов A.A. Значимость отдельных карбоновых кислот фекалий в диагностике дисбаткриоза /Журн. Микробиол. 1995. 4: 99-101.

41. Муравьева В.В., Анкирская A.C. Особенности микроэкологии влагалища при бактериальном вагинозе и вагинальном кандидозе // Акуш. и гинек. 1996. 6: 27 - 30.

42. Овчинников Н.М., Беднова В.М., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. - М.: Медицина, 1987. - 304 с.

43. Окунь Я. Факторный анализ: Пер. с польск. - М.: Статистика, 1974.

- 200 с.

44. Первушина Л.А. Антилизоцимный признак микроорганизмов в бактериологической диагностике и лечении воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов: Автореф. дис. ... канд.мед.наук. -Челябинск, 1989. - 20с.

45. Репродуктивное здоровье /Под ред. Л.Г.Кейта, Г.С.Бергера, Д.А.Эдельмана: в 2-х т.: Пер с англ.- М.: Медицина, 1988. - 400с.

46. Семенов А. В. Характеристика отношений между пробиотически-ми и автохтонными микроорганизмами и алгоритм индивидуального подбора пробиотиков / Казанский медицинский журнал. 2011. 6(2):792-795.

47. Смирнова Г.В., Музыка Н.Г., Глуховченко М.Н., Октябрьский О.Н. Перекись водорода модулирует внутриклеточные уровни тиолов и калия в клетках Escherichia coli /Микробиология. 1998. Т. 67. №5: 594-600.

48. Соколов В.Ю., Луда А.П. К вопросу о механизме антилизоцимной активности бактерий. : О.В. Бухарин (ред.). Персистенция микроорганизмов. Куйбышев, КМИ, 1987, с. 24-26.

49. Соколова К.Я., Савельева И.В., Попова И.В. и др. Аутофлора человека в норме и патологии и её коррекция /Под. Ред. Блохиной И.Н., Горький, 1998. С. 144-148.

50. Стрижаков А.Н., Подзолкова Н.М. Гнойные воспалительные заболевания придатков матки. М.: «Медицина», 1996. - 360 с.

51. Усвяцов Б.Я. Бактериоцины стрептококков /Афтореф. дис. ... канд. мед. наук. Оренбург. 1967. - 48 с.

52. Усвяцов Б.Я. Лизоцимная и антилизоцимная активность патогенных кокков /Дис. ... докт. мед. наук. Оренбург, 1986. - 328 с.

53. Чайникова И.Н. Инфектологическая характеристика сальмонеллеза / Автореф. дис. ... докт. мед. наук. Оренбург, 2006. - 48 с.

54.Черкасов С.В. Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина/Автореф. дисс. ... доктор, мед.наук. - Оренбур., 2011. - 48 с.

55. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и её функции.- М.: Грантъ, 1998, 288 с.

56. Aflatoonian R., Fazeli A. Toll-like receptors in female reproductive tract and their menstrual cycle dependent expression / J Reprod Immunol. 2008. 77(1):7-13.

57. Alderete J. F., O'Brien J.L., Arroyo R., et al. Cloning and molecular characterization of two genes encoding adhesion proteins involved in Trichomonas vaginalis cytoadherence/Mol. Microbiol. 1995. 17: 69-83.

58. Al-Harti L., Roebuck K., dinger G., Landay A., Sha B., Hashemi F., Spear G. Bacterial vaginisis-associeted microflo isolated from the female genital tract activates HIV-1 expression /JAIDS. 1999. 21: 194-202.

59. Altrichter T., Heizmann W.R. Gardnerella vaginalis: transport, microscopy, testing resistance (in German). Geburtshilfe Frauenheilkd. 1994. 54: 606-611.

60. Alvarez-Olmos M.I., Barousse M.M., Rajan L., Van Der Pol B.J., Forten-berry D., Orr D. et al. Vaginal lactobacilli in adolescents: presence and relationship to local and systemic immunity, and to bacterial vaginosis /Sex TransmDis. 2004. 31: 393-400.

61. Amsel R., Totten P.A., Spiegel C.A., Chen K.C., Eschenbach D., Holmes K.K. Nonspecific vaginitis: diagnostic criteria and microbial and epidemiological association /Am J Med. 1983. 74: 14-22.

62. Andersen J.M., Al-Khairy D., Ingalls R.R. Innate immunity at the mucosal surface: role of toll-like receptor 3 and toll-like receptor 9 in cervical epithelial cell responses to microbial pathogens / Biol.Repod. 2006. 74(5):824-31

63. Antonio M.A.D., Hawes S.E., Hillier S.L. The identification of vaginal Lactobacillus species and the demographic and microbiologic characteristics of women colonized by these species /J Infect Dis. 1999. 180: 1950-1956.

64. Anukam K.C., Osazuwa E.O., Ahonkhai I., Reid G. Lactobacillus vaginal microbiota of women attending a reproductive health care service in Benin city, Nigeria /Sex Transm Dis. 2006a. 33: 59-62.

65. Anukam K.C., Osazuwa E., Osemene G.I., Ehigiagbe F., Bruce A.W., Reid G. Clinical study comparing probiotics Lactobacillus GR-1 and RC-14 with metronidasol vaginal gel to treat symptomatic bacterial vaginosis /Microbes and Infections. 2006b. 8(12-13): 2772-2776.

66. Anukam K., Osazuwa E., Ahonkhai I., Nqwu M., Osemene G., Bruce A.W., Reid G. Augmentation of antimicrobial metronidazole therapy of bacterial vaginosis with oral probiotics Lactobacillus rhamnosus GR-1 and Lactobacillus reuteri RC-14 randomized, double-blind, placebo controlled trial / Microbes and Infections. 2006c. 8(6): 1450-1454.

67. Armstrong N.R., Wilson J.D. Tinidazole in the treatment of bacterial vaginosis /Int J Womens Health. 2010.1: 59-65.

68. Aroutcheva A., Gariti D, Simon M., Shott S., Faro J., et al. Defense factors of vaginal lactobacilli /Am J Obstet Gynecol. 2001. 185: 375-379.

69. Azargoon A., Darvishzadeh S. Association of bacterial vaginosis, trichomonas vaginalis, and vaginal acidity with outcome of pregnancy /Arch Iran Med. 2006. 9 (3): 213-217.

70. Bannatyne R., Smith A. Recurrent bacterial vaginosis and metronidazol resistance in Gardnerella vaginalis /Sex Transm Infect. 1998. 74: 455-456.

71. Bard E., Laibe S., Bettinger D., et al. New sensitive method for the measurement of lysozyme and lactoferrin for the assessment of innate mucosal immunity. part I: time-resolved immunofluorometric assay in serum and mucosal secretions /Clin Chem Lab Med. 2003. 41(2): 127-33.

72. Barousse M.M., Steele C., Dunlap K., Espinosa T., Boikov D., Sobel J.D., Fidel P.L Jr. Growth inhibition of Candida albicans by human vaginal epithelial cells/J Infect Dis. 2001.184(11): 1489-93.

73. Barousse M.M., Espinosa T., Dunlap K., Fidel P.L. Jr. Vaginal epithelial cell anti-Candida albicans activity is associated with protection against symptomatic vaginal candidiasis / Infect Immun. 2005. 73(11):7765-7.

74. Berkhout B., Floris R., Recio I., Visser S. The antiviral activity of the milk protein lactoferrin against the human immunodeficiency virus type 1 /Biometals. 2004. 17: 291-294.

75. Berrebi A., Ayoubi J.M. Le déséquilibre de la flore vaginale /Gynecol Obstet Endocrinol. 1999. 44: 1-4.

76. Biron C.A., Brossay L. NK cells and NKT cells in innate defense against viral infections /Curr Opin Immunol. 2001. 13: 458^4-64.

77. Biron C.A., Nguyen K.B., Pien G.C., Cousens L.P., Salazar-Mather T.P. Natural killer cells in antiviral defense: function and regulation by innate cytokines/Annu Rev Immunol. 1999. 17: 189-220.

78. Bjercke S., Brandtzaeg P. Glandular distribution of immunoglobulin, j chain, secretory component, and HLA-DR in the human endometrium throughout the menstrual cycle /Hum Reprod. 1993. 8: 1420-1425.

79. Boris S., Suarez J., Barbes C. Characterization of the aggregation promoting factor from Lactobacillus gasseri, a vaginal isolate /J Appl Microbiol. 1997. 83: 413-420.

80. Boris S., Suarez J., Vazques F., Barbes C. Adherence of human vaginal lactobacilli to vaginal epithelial cell and interaction with uropathogenes /Infect Immun. 1998.66: 1985-1989.

81. Boskey E., Cone R., Whaley K., Moench T. Origins of vaginal acidity: high D/L lactate ratio is consistent with bacteria being the primary source /Human Reprod. 2001. 16: 1809-1813.

82. Boskey E., Telsch K., Moench T., Cone R. Acid production by vaginal flora in vitro is consistent with the rate and extent of vaginal acidification /Infect Immun. 1999. 67: 5170-5175.

83. Bourlioux P. Écologie microbienne du tractus digestif humain. In: DeRoissart H., Luquet F., Les bactéries lactiques II. Uriage, Lorica, 1994: 657-661.

84. Branco K.M.G.R., Nardi R.M.D., Moreira J.L.S. et al. Identification and in vitro production of Lactobacillus antagonists from women with or without

bacterial vaginisis /Brasilian Journal of Medical and Biological Research. 2010. 43: 338-344.

85. Brandtzaeg P. Mucosal immunity in the female genital tract /J Reprod Immunol. 1997. 36: 23-50.

86. Burton J.P., Cadieux P.A., Reid G. Improved understanding of the bacterial vaginal microbiota of women before and after probiotic instillation /Appl Environ Microbiol. 2003. 69: 97-101.

87. Cadieux P., Burton J., Gardiner G., Braunstein I., Bruce A.W., Kang C.Y., Reid G. Lactobacillus strains and vaginal ecology /JAMA. 2002. 287: 1940-1941.

88. Caillouette J.C., Sharp C.F., Zimmerman G.J., Subir R. Vaginal pH as a marker for bacterial pathogens and menopausal status /Am. J. Obstet. Gynecol. 1997. 176: 1270-1277.

89. Canny G., Levy O., Furuta G.T., et al. Lipid mediator - induced expression of bactericidal/ permeability - increasing protein (BPI) in human mucosal epithelia / Proc Natl Acad Sci USA. 2002.99:3902-7.

90. Canny G.O., Trifonova R.T., Kindelberger D.W., et al. Expression and Function of Bactericidal/Permeability - Increasing Protein in Human Genital Tract Epithelial Cells /The Journal of Infectious Diseases. 2006.194:498-502.

91. Catlin B.W. Gardnerella vaginalis: characteristics, clinical consideration, and controversies /Clin Microbiol Rev. 1992. 5: 213-237.

92. Cauci S., Culhane J.F., Di Santolo M., McCollum K. Among pregnant women with bacterial vaginosis, the hydrolytic enzymes sialidase and prolidase are positively associated with interleukin-lbeta /Am J Obstet Gynecol. 2008. 198, 132.e 1-7.

93. Cherpes T.L., Meyn L.A., Krohn M.A., Lurie JG, Hillier S.L. Association between acquisition of herpes simplex virus type 2 in women and bacterial vaginosis /Clin Infect Dis. 2003. 37: 319-325.

94. Chimura T., Hirayama T., Takase M. Lysozyme in cervical mucus of patients with chorioamnionitis /Jpn J Antibiot. 1993.46 (8): 726-9.

95. Cohen C.R., Duerr A., Pruithithada N.. Rugpao S., Hiller S., Garcia P., Nelson K. Bacterial vaginosis and HIV seroprevalence among female commercial sex workers in Chiang Mai, Thailand /AIDS. 1995. 9: 1093-1097.

96. Collins E.B., Aramaki K. Production of hydrogen peroxide by Lactobacillus acidophilus //J. Dairy Sci. 1980. 63: 353-357.

97. Collins M.D., Rodrigues U.M., Ash C., Aguirre M., Farrow J.A.E., Martinez-Murcia A. et al. Phylogenetic analysis of the genus Lactobacillus and related lactic acid bacteria as determined by reverse transcriptase sequencing of 16S rRNA /FEMS Microbiol Lett. 1991. 77: 5-12.

98. Coolen M. J. L., Post E., Davis C.C., Forney L.J. Characterization of microbial communities found in the human vagina by analys is of terminal restriction fragment length polymorphisms of 16S rRNA genes /Appl. Environ. Microbiol. 2005. 71: 8729-8737.

99. Cowland J.B., Johnsen A.H., Borregaard N. hCAP-18, a cathelin/pro-bactenecin-like protein of human neutrophil specific granules /FEBS Lett 1995. 368: 173-176.

100. Cribby S., Taylor M., Reid G. Vaginal microbiota and the use probiotics /Interdisciplinary Perspectives on Infectious Diseases. 2008. 2008: 256490.

101. Cristiano L., Coffetti N., Dalvai G., Lorusso L., Lorenzi M. Bacterial vaginosis: prevalence in outpatients, association with some micro-organisms and laboratory indices /Genitourin Med. 1989. 65: 382-387.

102. Darville T., O'Neill J.M., Andrews C.W.J., Nagarajan U.M., Stahl L., Ojcius D.M. Toll-like receptor-2, but not Toll-like receptor-4, is essential for development of oviduct pathology in chlamydial genital tract infection /J Immunol. 2003. 171: 6187-6197.

103. Devillard E., Burton J. P., Reid G. Complexity of vaginal microflora as analyzed by PCR denaturing gradient gel electrophoresis in a patient with recurrent bacterial vaginosis /Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2005. 13: 25-31.

104. Doderlein A. Das Scheidensekret und seine Bedeutung für das Puerperal-fieber. Leipzig: Verlag von E. Besold. 1892. 95 p.

105. Donders G.G. The prevalence of bacterial vaginosis and aerobic vaginitis in young Finish women /APMIS. 2011. 119(3): 224-225.

106. Donders G.G.G. Definition and classification of abnormal vaginal flora /Best Practice & Reserch Clinical Obstetrics and Gynaecology. 2007. 21(3): 355-373.

107. Donders G.G.G., Bosmans E., Dekkersmaecker A., Vereecken A., Bulck B.V., Spitz B. Pathogenesis of abnormal vaginal bacterial flora / Am J Obstet Gynecol. 2000. 182: 872-878.

108. Donders G.G., Van Bulck B., Van de Walle P., Kaiser R.R., Pohlig G., Gonser S., Graf F. Effect of lyophilized lactobacilli and 0,03 mg estriol (Gynoflor®) on vaginitis and vaginosis with disrupted vaginal microflora: a multicenter, randomized, single-blind, active controlled pilot study /Gynecol Obstet Invest. 2010. 70(4): 264-272.

109. Donders G.G.G., Vereecken A., Bosmans E., Dekeersmaecker A., Sa-lembier G., Spitz B. Definition of a type of abnormal vaginal flora that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis /Br J Obstet Gynaecol. 2002. 109: 34-43.

110. Dunbar J. Levels of bacterial community diversity in four arid soils compared by cultivation and 16S rRNA gene cloning /Appl. Environ. Microbiol. 1999. 65: 1662-1669.

111. Eggert-Kruse W., Botz I., Pohl S., Rohr G., Strowitzki T. Antimicrobial activity of human cervical mucus /Hum Reprod. 2000.15(4):778-84.

112. Eschenbach, D. A. History and review of bacterial vaginosis /Am. J. Obstet. Gynecol. 1993. 169: 441^145.

113. Eschenbach D.A., Hillier S., Critchlow C., Stevens C., DeRouen T., Holmes K.K. Diagnosis and clinical manifestation of bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 1988. 158: 819-828.

114. Eschenbach D., Davick P., Williams B., Klebanoff S., Young-Smith K., Critchlow C., Holmes K. Prevalenceof hydrogen peroxide-producing Lactoba-

cillus species in normal women and women with bacterial vaginisis /J Clin Microbiol. 1989.27: 151-156.

115. Evangelista A.T., Coppola K.M., Furness G. Relationship between group JK corynebacteria and the biotypes of Corynebacterium genitalium and Cory-nebacterium pseudogenitalium /Canadian Journal of Microbiolog. 1984. 30:(8) 1052-1057.

116. Fahey J.V., Schaefer T.M., Channon J.Y., Wira C.R. Secretion of cytokines and chemokines by polarized human epithelial cells from the female reproductive tract /Human Reproduction. 2005. 20: 1439-1446.

117. Falsen E., Pascual C., Sjoden B., Ohlen M., Collins M.D. Phenotypic and phylogenetic characterization of a novel Lactobacillus species from human sources: description of Lactobacillus iners sp. nov. /Int J Syst Bacteriol. 1999. 49 (Part 1): 217-221.

118. Famularo G., Pieluigi M., Coccia R., Mastroiacovo P., DeSimone C. Mi-croecology, bacterial vaginosis, and probiotics: perspectives for bacteriother-apy /Med Hypotheses. 2001. 56: 421-430.

119. Farrelly V., Rainey F.A., Stackebrandt E. Effect of genome size and rrn gene copy numbers on PCR amplification of 16S rRNA genes from a mixture of bacterial species /Appl. Environ. Microbiol. 1995. 61: 2798-2801.

120. Fazeli A., Bruce C., Anumba D.O. Characterization of Toll-like receptors in the female reproductive tract in humans / Human Reproduction. 2005. 20(5):1372-1378.

121. Faurschou M., Sorensen O.E., Johnsen A.H., Askaa J., Borregaard N. De-fensin-rich granules of human neutrophils: characterization of secretory properties /Biochim Biophys Acta. 2002. 1591: 29-35.

122. Ferlazzo G., Morandi B., DAgostino A., Meazza R., Melioli G., Moretta A., Moretta L. NK cells and dendritic cells in bacterial infections results in rapid induction of NK cell activation and in the lysis of uninfected dendritic cells /Eur J Immunol. 2003. 33: 306-313.

123. Fichorova R.N., Desai P.J., Gibson F.C. 3rd, Genco C.A. Distinct proinflammatory host responses to Neisseria gonorrhoeae infection in immortalized human cervical and vaginal epithelial cells /Infect Immun. 2001. 69(9):5840-8.

124. Fichorova R.N., Cronin A.O., Lien E., Anderson D.J., Ingalls R.R. Response to Neisseria gonorrhoeae by cervicovaginal epithelial cells occurs in the absence of toll-like receptor 4-mediated signaling /J Immunol. 2002. 168: 2424-2432.

125. Fichorova R.N., Trifonova R.T., Gilbert R.O., Costello C.E., Hayes G.R., Lucas J.J., Singh B.N. Trichomonas vaginalis lipophosphoglycan triggers a selective upregulation of cytokines by human female reproductive tract epithelial cells / Infect Immun. 2006. 74(10):5773-9.

126. Robinson D. Comparison of quantitative and qualitative methods of detecting hydrogen peroxide produced by human vaginal strains of lactobacilli /J. Appl. Bacteriol. 1990. 69: 326-331.

127. Fredericks D. N., Fiedler T. L., Marrazzo J. M. Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis /N. Engl. J. Med. 2005. 353: 1899-1911.

128. Ganz T., Weiss J. Antimicrobial peptides of phagocytes and epithelia / Semin Hematol 1997.34:343-54.

129. Ganz T. Antimicrobial polypeptides /Journal of Leukocytes Biology. 2004. 75: 34-38.

130. Garg K.B., Ganguli I., Das R., Talwar G.P. Spectrum of Lactobacillus species present in healthy vagina of Indian women /Indian J Med Res. 2009. 129: 652-657.

131. Gelber S.E., Aguilar J.L., Lewis K.L., Ratner A.J. Functional and phy-logenetic characterization of vaginolysin, the human-specific cytolysin iron Gardnerella vaginalis /J Bacteriol. 2008. 190. 3896-3903.

132. Ghosh M, Shen Z., Fahey J.V., Cu-Uvin S., Mayer K., Wira C.R. Trap-pin-2/Elafin: a novel innate anti-human immunodeficiency virus-1 molecule of the human female reproductive tract/ Immunology. 2010.129(2):207-19

133. Giraldo P.C., Gonfalves A.K., Junior J.E. Secretory Immunoglobulin A: A Protective Factor in the Genital Mucosa / The Brazilian Journal of Infectious Diseases 2006;10(4):232-234.

134. Gupta K., Stapleton A.E., Hooton T.M. Inverse association of H202-producing lactobacilli and vaginal E. coli colonization in women with recurrent urinary tract infection /J Infect Dis. 1998. 178: 446-450.

135. Hallen A., Jarstrand C., Pahlson C. Treatment of bacterial vaginosis with Lactobacilli /Sexually Transmitted Diseases. 1992. 19(3): 146-148.

136. Hammill H.A. Normal vaginal flora in relation to vaginitis / Obstet. Gy-nec. Clin. N. Amer. 1989. 16 (2): 329 - 336.

137. Han J.H., Kim M.S., Lee M.Y., Kim T.H., Lee M.K., Kim H.R., Myung S.C. Modulation of human beta-defensin-2 expression by 17beta-estradiol and progesterone in vaginal epithelial cells / Cytokine. 2010. 49(2):209-14.

138. Hawes S.E., Hillier S.L., Benedetti J. et al. Hydrogen peroxide-producing lactobacilli and acquisition of vaginal infections /J Infect Dis. 1996. 174: 1058-1063.

139. Hay P. Recurrent bacterial vaginosis /Curr Infect Dis Rep. 2000. 2: 506512.

140. Hein M., Petersen A.C., Helmig R.B., Uldbjerg N., Reingoldt J. Immunoglobulin levels and phagocytes in the cervical mucus plug at term of pregnancy /Acta Obstet Gynecol Scand. 2005. 84: 734-742.

141. Hein M„ Valore E.V., Helmig R.B., Uldbjerg N.. Ganz T. Antimicrobial factors in the cervical mucus plug /Am J Obstet Gynecol. 2002. 187: 137-144.

142. Herbst-Kralovetz M.M., Quayle A.J., Ficarra M., Greene S., Rose W.A. 2nd, Chesson R., Spagnuolo R.A., Pyles R.B. Quantification and comparison of toll-like receptor expression and responsiveness in primary and immortalized human female lower genital tract epithelia/ Am J Reprod Immunol. 2008. 59(3):212-24.

143. Hillier S. Diagnostic microbiology of bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 1993. 169: 455-459.

144. Hillier S., Holloway M., Rabe L. Antimicribial agent susceptibility of Lactobacillus crispatus, L. jensenii, L. gasseri, and other Lactobacillus species. In 39th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, ASMDs Annual Meeting on Infectious Diseases. American Society for Microbiology, Washington, 1999.

145. Hillier S.L., Krohn M.A., Klebanoff S J., Eschenbach D.A. The relationship of hydrogen peroxide-producing lactobacilli to bacterial vaginosis and genital microflora in pregnant women /Obstet. Gynecol. 1992. 79(3): 369-373.

146. Hillier S.L., Lau R.J. Vaginal microflora in postmenopausal women who have not received estrogen replacement therapy /Clin. Infect. Dis. 1997. 25(Suppl. 2): S123-S126.

147. Hillier S.L., Nugent R.P., Eschenbach D.A., Krohn M.A., Gibbs R.S., Martin D.H., Cotch M.F., Edelman R., Pastorek J.G., Rao A.V., McNellis D., Regan J.A., Carey J.C.,. Klebanoff M.A. Association between bacterial vaginosis and preterm delivery of a low-birth-weight infant /N. Engl. J. Med. 1995. 333: 1737-1742.

148. Hocini H., Barra A., Belec L., Iscaki S., Preudhomme J.L., Pillot J. et al. Systemic and secretory humoral immunity in the normal human vaginal tract /Scand J Immunol. 1995. 42: 269-274.

149. Home A.W., Stock S.J., King A.E. Innate immunity and disorders of the female reproductive tract /Reproduction. 2008. 135. 739-749.

150. Hyman R.W., Fukushima M., Diamond L., Kumm J., Giudice L.C., Davis R.W. Microbes on the human vaginal epithelium /Proc Natl Acad Sci. USA. 2005. 102: 7952-7957.

151. Imlay J.A. How oxygen damages microbes: oxygen tolerance and obligate anaerobiosis //Adv. Microb. Physiol. 2002. 46: 111-153.

152. Janeway C.A., Medzhitov R. Innate immune recognition /Annual Review of Immunology. 2002. 20: 197-216.

153. Jenssen H., Sandvik K., Andersen J.H., Hancock R.E., Gutteberg T.J. Inhibition of HSV cell-to-cell spread by lactoferrin and lactoferricin /Antiviral Res. 2008. 79: 192-198.

154. Jimenez-Diaz R., Ruiz-Barba J.L., Cathcart D.P., Holo H., Nes I.F., Slet-ten K.H., Warner P.J. Purification and partial amino acid sequence of plan-taricin S, a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum LPCOIO, the activity of which depends on the complementary action of two peptides /Appl. Environ. Microbiol. 1995. 61: 4459-4463.

155. Johnson J.L., Phelps C.F., Cummins C.S., London J., Gasser F. Taxonomy of the Lactobacillus acidophilus group /Int. J. Syst. Bacteriol. 1980. 30: 53-68.

156. Juliano C., Cappuccinelli P., Mattana A. In vitro phagocytic interaction between Trichomonas vaginalis isolates and bacteria /Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1991. 10 (6): 497-502.

157. Kawana K., Quayle A.J., Ficarra M., Ibana J.A., Shen L., Kawana Y., Yang H., Marrero L., Yavagal S., Greene S.J., Zhang Y.X., Pyles R.B., Blumberg R.S., Schust D.J. CDld degradation in Chlamydia trachomatis-infected epithelial cells is the result of both cellular and chlamydial proteasomal activity / J Biol Chem. 2007. 282(10):7368-75.

158. Kawana K, Matsumoto J, Miura S, Shen L, Kawana Y, Nagamatsu T, Yasugi T, Fujii T, Yang H, Quayle AJ, Taketani Y, Schust DJ. Expression of CDld and ligand-induced cytokine production are tissue specific in mucosal epithelia of the human lower reproductive tract / Infect Immun. 2008. 76(7):3011-8.

159. King A.E., Kritchley H.O., Kelly R.W. Innate immune defences in the human endometrium/2003a. 1: 116.

160. King A.E., Fleming D.C., Critchley H.O.D., Kelly R.W. Differential expression of the natural antimicrobials, beta-defensins 3 and 4, in human endometrium/Journal of Reproductive Immunology. 2003b. 59: 1-16.

161. King A.E., Paltoo A., Kelly R.W., Sallenave J.M., Booking A.D., Challis J.R. Expression of natural antimicrobials by human placenta and fetal membranes /Placenta. 2007. 28: 161-169.

162. Kiss H., Kogler B., Petricevic L. et al. Vaginal Lactobacillus microbiota of healthy women in the late first trimester of pregnancy /International Journal of Obstetrics & Gynaecology. 2007. 114(11): 1402-1407.

163. Klebanoff S., Belding M. Virucidal activity of H202-generating bacteria: requirement for peroxidase and a halide /J Infect Dis. 1974. 129: 345-348.

164. Klebanoff S.J., Hillier S.L., Eschenbach D.A., Waltersdorph A.M. Control of the microbial flora of the vagina by H202-generating lactobacilli //J. Infect. Dis. 1990. 164: 94-100.

165. Klotman M.E., Chang T.L. Defensins in innate antiviral immunity /Nature Reviews Immunology. 2006. 6: 447-456.

166. Kutteh W.H., Mestecky J. Secretory immunity in the female genital tract /Am J Reprod Immunol. 1994. 31: 40-46.

167. Kutteh W.H., Mestecky J., Wira C.R. Mucosal immunity in the human female reproductive tract. In: Mestecky J., Bienenstock J., Lamm M.E., Mayer L., McGhee J.R., Strober W., eds. Mucosal Immunology. New York: Academic Press, 2005:1631-1646.

168. Kutteh W.H., Prince S.J., Hammond K.R., Kutteh C.C., Mestecky J. Variations in immunoglobulins and IgA subclasses of human uterine cervical secretions around the time of ovulation /Clin Exp Immunol. 1996. 104: 538542.

169. Lamont R.F., Morgan D.J., Wilden S.D., Taylor-Robinson D.. Prevalence of bacterial vaginosis in women attending one of the three general practices for routine cervical cytology /Int. J. STD AIDS. 2000. 11: 495^98.

170. Larsen B., Monif G.R. Understanding the bacterial flora of the female genital tract /Clin Infect Dis. 2001. 32: e69-e77.

171. Lefevre J.C. La vaginose bactérienne /La letter de linfectiologue. 1993. 8: 386-390.

172. Lepargneur J.-P., Rousseau V. Role protecteur de la flore de Doderlein /J Gynecol Biol Reprod. 2002. 31: 485-494.

173. Levison M.E., Corman L.C., Carrington E.R., Kaye D. Quantitative microflora of the vagina /Am J Obstet Gynecol. 1977. 127: 80-85.

174. Linhares I. M., Giraldo P.C., Baracat E.C. New findings about vaginal bacterial flora / Rev. Assoc. Med. Bras. 2010. 56(3):370-4.

175. MacPhee R.A., Hummelen R., Bisanz J.E., Miller W.L., Reid G. Probi-otic strategies for the treatment and prevention of bacterial vaginosis /Expert Opin Pharmacother. 2010.11(18): 2985-2995.

176. Marchetti M., Ammendolia M.G., Superti F. Glycosaminoglycans are not indispensable for the anti-herpes simplex virus type 2 activity of lactoferrin /Biochimie. 2009. 91: 155-159.

177. Marchetti M., Trybala E., Superti F. Johansson M., Bergstrom T. Inhibition of herpes simplex virus infection by lactoferrin is dependent on interference with the virus binding to glycosaminoglycans /Virol. 2004. 318: 405-413.

178. Marrazzo J.M. Evolving issues in understanding and treating bacterial vaginosis //Expert. Rev. Anti Infect. Ther. 2004. 2: 913-922.

179. Marrazzo J.M., Koutsky L.A., Eschenbach D.A., Agnew K., Stine K., Hillier S.A. Characterization of vaginal flora and bacterial vaginosis in women who have sex with women /J Infect Dis. 2002. 185. 1307-1313.

180. Martin R., Soberon N., Vaneechoutte M., Florez A.B., Vazquez F., Suarez J.E. Characterization of indigenous vaginal lactobacilli from healthy women as probiotic candidates /Int Microbiol. 2008. 11: 261-266.

181. Mastromarino P., Brigidi P., Macchia S., Maggi L., Pirovano F., Trinch-ieri V. et al. Characterization and selection of vaginal Lactobacillus strains for the preparation of vaginal tablets /J. Appl. Microbiol. 2002. 93: 884-893.

182. Mestecky J., Fultz P.N. Mucosal immune system of the human genital tract/J Infect Dis. 1999. 179: S470-S474.

183. McGregor J.A., French J.I. Bacterial vaginosis in pregnancy /Obstet. Gynecol. Surv. 2000. 55: S1-S19.

184. McGroarty J. Probiotic use of lactobacilli in the human female urogenital tract /FEMS Immunol Med Microbiol. 1993. 6: 252-264.

185. McGroarty J., Reid G. Detection of a Lactobacillus substance that inhibits Escherichia coli /Can J Microbiol. 1988. 34: 974-978.

186. McGrory T., Garber G.E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection /Infect. Immun. 1992. 60: 2375-2379.

187. McGrory T., Meysick K., Lemchuk-Favel L.T., Garber G.E. The interaction of Lactobacillus acidophilus and Trichomonas vaginalis in vitro /J. Para-sitol. 1994. 80(1): 50-54.

188. Miller L., Patton D.L., Meier A., Thwin S.S., Hooton T.M., Eschenbach D.A. Depomedroxyprogesterone-induced hypoestrogenism and changes in vaginal flora and epithelium /Obstet Gynecol. 2000. 96(3): 431-439.

189. Milson I., Arvidsson L., Ekelund P., Molander U., Eriksson O. Factors influencing vaginal cytology, pH and bacterial flora in elderly women /Acta Obstet. Gynecol. Scand. 1993. 72: 286-291.

190. Modak T„ Arora P., Agnes C„ Ray R„ Goswami S., Ghosh P., Das N.K. Diagnosis of bacterial vaginosis in cases of abnormal vaginal discharge: comparison of clinical and microbiological criteria /The Journal of Infection in Developing Countries. 2011. 5(5): 353-60.

191. Moriuchi M., Moriuchi H. A milk protein lactoferrin enhances human T cell leukemia virus type 1 and suppresses HIV-1 infection /J. Immunol. 2001. 166: 4231-4236.

192. Morris M., Nicoll A., Simms I., Wilson J., Catchpole M. Bacterial vaginosis: a public health review /Br. J. Obstet. Gynaecol. 2001. 108: 439^150.

193. Nagy E., Froman G., Mardh P. Fibronectin binding of Lactobacillus species isolated from women with and without bacterial vaginosis /J Med Microbiol. 1992. 37: 38-42.

194. Murphy M., Condon S. Correlation of oxygen utilisation and hydrogen peroxide accumulation with oxygen induced enzymes in Lactobacillus planta-rum cultures /Arch Microbiol. 1984. 138: 44-48.

195. Nagy E., Petterson M., Mardh P.A. Antibiosis between bacteria isolated from the vagina of women with and without signs of bacterial vaginosis /AP MIS. 1991.99:739-744.

196. Ness R.B., Kip K.E., Hillier S.L., Soper D.E., Stamm C.A., Sweet R.L., Rice P., Richter H.E. A cluster analysis of bacterial vaginosis-associated microflora and pelvic inflammatory disease / Am J Epidemiol. 2005. 162(6): 585-590.

197. Niku-Paavola M.L., Laitila A., Mattila-Sandholm T. & Haikara A. New types of antimicrobial compounds produced by Lactobacillus plantarum /J. Appl Microbiol. 1999. 86: 29-35.

198. Norderhaug I., Johansen F., Schjerven H., Brandtzaeg P. Regulation of the formation and external transport of secretory immunoglobulins /Crit Rev Immunol. 1999., 19: 481-508.

199. Novak R.M., Donoval B.A., Graham P.J., et al. Cervicovaginal levels of lactoferrin, secretory leucoycte protease inhibitor, and RANTES and the effect of coexisting vaginoses in human immunideficiency virus (HTV)-seronegative women with a high risk of heterosexual acquisition of HIV infection /Clinical and Vaccine Immunology. 2007. 14(9): 1102-1107.

200. Nugent R.P., Krohn M.A., Hillier S.L. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation /J Clin Microbiol. 1991. 29: 297-301.

201. Oakley B.B., Fiedler T.L., Marrazzo J.M., Fredricks D.M. Diversity of human vaginal bacterial communities and associations with clinically defined bacterial vaginosis /Applied and Environmental Microbiology. 2008. 74 (15): 4898-4909.

202. Ocana V.S., Holgado A.A.P.R., Nader-Macias M.E. Characterization of a bacteriocin like substance produced by a vaginal Lactobacillus salivarius strain /Appl Environ Microbiol. 1999. 65: 5631-5635.

203. Ocana V., Ruiz-Holgado A., Nader-Macias M. Growth inhibition of Staphylococcus aureus by H202-producing Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei isolated from the human vagina /FEMS Immun Med Microbiol. 1999. 23: 87-92.

204. Ocana V., Silva C., Nader-Macias M.E. Antibiotic susceptibility of potentially probiotic vaginal lactobacilli /Infect Dis Obstet Gynecol. 2006. 2006: 18182.

205. Ouwehand A.C., Kirjavainen P.V., Shortt C., Salminen S. Probiotics: mechanisms and established effects. International diary journal. 1999. 9: 4352.

206. Pahlson C., Larsson P.G. The ecologically wrong lactobacilli /Med. Hypotheses. 1991.36: 125-130.

207. Parente E., Ricciardi A. Production, recovery and purification of bacte-riocins from lactic acid bacteria /Appl.Microbiol. Biotechnol. 1999. 52(5): 628-638.

208. Pascual L.M., Daniele M.B., Pajaro C., Barberis L. Lactobacillus species isolated from the vagina: identification, hydrogen peroxide production and nonoxynol-9 resistance /Contraception. 2006. 73: 78- 81.

209. Patterson J.L., Stull-Lane A., Girerd P.H., Jefferson K.K. Analysis of adherence, biofilm formation and cytotoxicity suggests a greater virulence potential of Gardnerella vaginalis relative to other bacterial-vaginosis-associated anaerobes /Microbiology. 2010. 156: 392-399.

210. Peterson M.L., Ault K., Kremer M.J., Klingelhutz A.J., Davis C.C., Squier C.A., Schlievert P.M. The innate immune system is activated by stimulation of vaginal epithelial cells with Staphylococcus aureus and toxic shock syndrome toxin 1 / Infect Immun. 2005. 73(4):2164-74.

211. Pioli P.A., Amiel E., Schaefer T.M., Connolly J.E., Wira C.R. Differential expression of toll-like receptors 2 and 4 in tissues of the human female reproductive tract /Infection and Immunity. 2004. 72: 5799-5806.

212. Pivarcsi A., Nagy I., Koreck A., Kis K., Szell M., Dobozy A., Kemeny L. Microbial compounds induce the expression of pro-inflammatory cytokines, chemokines and human beta-defensin-2 in vaginal epithelial cells / Microbes Infect. 2005.7(9-10): 1117-27.

213. Poulouin L., Gallet O., Imhoff J. La fibronectin: propriétés et function de la molecule native et de ses fragment /Med Siences. 1997. 13: 657-661.

214. Pybus V., Onderdonk A.B. Microbial interactions in vaginal ecosystem, with emphasis on the pathogenesis of bacterial vaginosis /Microbes Infect. 1999., 1:285-292.

215. Quayle A.J., Porter E.M., Nussbaum A.A., Wang Y.M., Brabec C., Yip K.P., Mok S.C. Gene expression, immunilocalization, and secretion of human defensin-5 in human female reproductive tract /American Journal of Pathology. 1998. 152: 1247-1258.

216. Ravel J., Gajer P., Abdo Z., et al. Vaginal microbiome of reproductive-age women /2010. www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/ pnas. 1002611107

217. Redondo-Lopez V., Cook R.L., Sobel J.D. Emerging role of lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora /Rev Infect Dis. 1990. 12: 856-872.

218. Reid G. Probiotic agents to protect the urogenital tract against infection /Am J Clin Nutr. 2001. 73 (suppl): 437-443.

219. Reid G., Beuerman D., Heinemann C., Bruce A.W. Probiotic Lactobacillus dose required to restore and maintain a normal vaginal flora /FEMS Immunol Med Microbiol. 2001a. 32: 37-41.

220. Reid G., Bruce A.W. Urogenital infections in women: can probiotics help? / Postgrad Med J. 2003. 79: 428-432.

221. Reid G., Bruce A.W., Cook R.L., Llano M. Effect on urogenital flora of antibiotic therapy for urinary tract infection /Scand J Infect Dis. 1990. 22(1): 43-47.

222. Reid G., Bruce A.W., Fraser N., Heinemann C., Owen J., Henning B. Oral probiotics can resolve urogenital infections / FEMS Immunol Med Microbiol. 2001b. 30: 49-52.

223. Reid G., Charbonneau D., Erb J., et al. Oral use of Lactobacillus rham-nosus GR-1 and L. fermentum RC-14 significantly alters aginal flora: randomized, placebo-controlled trial in 64 healthy women / FEMS Immunol Med Microbiol. 2003a. 35: 131-134.

224. Reid G., Jass J., Sebulsky M.T., McCormick J.K. Potential uses of probiotics in clinical practice /Clinical Microbiology Reviews. 2003b. 16(4): 658672.

225. Reid G., McGroarty J.A., Tomeczek L., Bruce A.W. Identification and plasmid profiles of Lactobacillus species from the vagina of 100 healthy women /FEMS Immunol Med Microbiol. 1996. 15: 23-26.

226. Reid G. Millsap K., Bruce A.W. Implantation of Lactobacillus casei var rhamnosus into vagina /Lancet. 1994. 344: 1229.

227. Rein M.F., Shih L.M., Miller J.R., Guerrant R.L. Use of a lactoferrin assay in the differential diagnosis of female genital tract infections and implications for the pathophysiology of bacterial vaginosis /Sexually Transmitted Diseases. 1996. 23(6): 517-521.

228. Richardson A., Martin H.L., Stevens C.E., et al. Use of nonoxynol-9 and hanges in vaginal lactobacilli /J Infect Dis. 1998. 178: 441-445.

229. Rodriguez J.M., Collins M.D., Sjoden B., Falsen E. Characterization of a novel Atopobium isolate from the human vagina: description of Atopobium vaginae sp. nov. /Int J Syst Bacteriol. 1999. 49: 1573-1576.

230. Rogosa M., Sharpe M.E. Species differentiation of human vaginal lactobacilli /J Gen Microbiol. 1960. 23: 197-201.

231. Roques C., Rousseau V., Courrege K., Tarquis L., Paul F., Lepargneur J.P. Evaluation de lefficaeité de souches de lactobacilles sélectionnées pour la protection de la muqueuse vaginale. In: 1 Ie Réunion du Club de Bactéries Lactiques. Faculté dœnologie, Bordeaux. 2001.

232. Royce R.A., Thorp J., Granados J.L., Savitz D.A. Bacterial vaginosis associated with HIV infection in pregnant women from North Carolina /J. Ac-quir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retroviral. 1999. 20: 382-386.

233. Russell M.W. IgA as an anti-inflammatory regulator of immunity /Oral Dis. 1999. 5: 55-67.

234. Russell M.W., Mestecky J. Humoral immune responses to microbial infections in the genital tract /Microbes Infect /2002. 4(6): 667-77.

235. Sallenave J.M. The role of secretory leukocyte proteinase inhibitor and elafin (elastase-specific inhibitor/skin-derived antileucoprotease) as alarm an-tiproteinases in inflammatory lung disease /Respiratory Research. 2000. 1: 8792.

236. Sallenave J.M., Ryle A.P. Purification and characterization of elastase-specific inhibitor. Sequence homology with mucus proteinase inhibitor /Biological Chemistry Hoppe-Seyler. 1991. 372: 13-21.

237. Sallenave J.M., Shulmann J., Crossley J., Jordana M., Gauldie J. Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) and elastase-specific inhibitor (ESI/elafin) in human airway epithelial cells by cytokines and neutrophilic enzymes /American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 1994. 11: 733-741.

238. Sawada M., Otsuki K., Mitsukawa K., Yakuwa K., Nagatsuka M., Okai T. Cervical inflammatory cytokines and other markers in the cervical mucus of pregnant women with lower genital tract infection /Int J Gynaecol Obstet. 2006. 92(2): 117-21.

239. Schaefer T.M., Desouza K., Fahey J.V., Beagley K.W., Wira C.R. Tolllike receptor (TLR) expression and TLR-mediated cytokine/chemokine production by human uterine epithelial cells /Immunology. 2004. 112: 428-436.

240. Schaefer T.M., Fahey J.V., Wright J.A., Wira C.R. Innate immunity in the human female reproductive tract: antiviral response of uterine epithelial cells to the TLR3 agonist poly (I:C) /J Immunol. 2005. 174: 992-1002.

241. Schwebke J.R. Role of vaginal flora as a barrier to HTV acquisition /Curr Infect Dis Rep. 2001. 3: 152-155.

242. Schwebke J.R., Burgess D. Trichomoniasis /Clin. Microbiol. Reviews. 2004. 17 (4): 794-803.

243. Schwebke J.R., Desmond R.A. Tinidazole vs metronidazole for the treatment of bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 2011. 204(3): 211.1-6.

244. Sewankambo N., Gray R.H., Wawer M.J., et al. HIV-1 infection associated with abnormal vaginal flora morphology and bacterial vaginosis / Lancet. 1997. 350: 546-550.

245. Shust G.F., Cho S., Kim M., et al. Female genital tract secretions inhibit herpes simplex virus infection: correlation with soluble mucosal immune mediators and impact of hormonal contraception /American Journal of Reproductive Immunology. 2010. 63: 110-119.

246. Simoes J.A., Aroutcheva A.A., Shott S., Faro S. Effect of metronidazole on the growth of vaginal lactobacilli in vitro /Infectious Diseases in Obstetrics and Gynecology. 2001. 9(1): 41-45.

247. Simpson A.J., Maxwell A.I., Govan J.R., Haslett C., Sallenave J.M. Ela-fin (elastase-specific inhibitor) has anti-microbial activity against gram-psitive and gram-negative respiratory pathogens /FEBS Letters. 1999. 452: 309-313.

248. Skarin A., Sylwan J. Vaginal Lactobacilli inhibiting growth of Gardnerella vaginalis, Mobiluncus and other bacterial species cultured from vaginal content of women with bacterial vaginosis /Acta Pathol Microbiol Immunol Scand (B). 1986. 94: 475-500.

249. Sobel J. Vaginitis /New England J Med. 1997. 337: 1896-1903.

250. Sobel J.D. Is there a protective role for vaginal flora? /Curr Infect Dis Rep. 1999. 1: 379-383.

251. Song Y.-L., Kato N., Liu С.-Х., Matsumiya Y., Kato H„ Watanabe K. Rapid identifi cation of 11 human intestinal Lactobacillus species by multiplex PCR assays using group and species specifi с primers derived from the 16S-23S rRNA intergenic spacer region and its fl anking 23S rRNA /FEMS Microbiol Lett. 2000. 187: 167-73.

252. Sonnex C. Influence of ovarian hormones on urogenital infection /Sexually Transmitted Infection. 1998. 74: 11-19.

253. Soper D.E. Gynecologic complications of bacterial vaginosis: fact or fiction? /Curr. Infect. Dis. Rep. 1999. 1: 393-397.

254. Spiegel C.A. Bacterial vaginosis /Rev Med Microbiol. 2002. 13: 43-51.

255. Spiegel C.A., Amsel R., Eschenbach D., Schoenknecht F., Holmes K.K. Anaerobic bacteria in nonspecific vaginitis /N Engl J Med. 1980. 303: 601607.

256. Spitznagel J.K., Dalldorf F.G., Leffell M.S., Folds J.D., Welsh I.R., Cooney M.H., Character of azurophil and specific granules purified from human polymorphonuclear leukocytes /Lab Invest 1974. 30: 774-785.

257. Spurbeck R.R., Arvidson C.G. Inhibition of Neisseria gonorrhoeae epithelial cell interactions by vaginal lactobacillus species /Infection and Immunity. 2008. 76 (7): 3124-3130.

258. Stadnyk A.W. Cytokine production by epithelial cells / FASEB. 1994. 8(13):1041-1047.

259. Steele C., Fidel P.L. Jr. Cytokine and chemokine production by human oral and vaginal epithelial cells in response to Candida albicans/ Infect Immun. 2002. 70(2):577-83.

260. Stock S.J (неопубликованные данные) no Home A.W., Stock S.J., King A.E. Innate immunity and disorders of the female reproductive tract /Reproduction. 2008. 135. 739-749.

261. Stock S.J., Kelly R.W., Riley S.C., Calder A.A. Natural antimicrobial production by the amnion /American Journal of Obstetrics and Gynecology. 2007. 255: el-e6.

262. Street D.A., Wells C., Taylor-Robinson D., Ackers J.P. Interaction between Ttrichomonas vaginalis and other pathogenic microorganisms of the human genital tract /Br. J. Vener. Dis. 1984. 60: 31-38.

263. Strom K., Sjogren J., Broberg A., Schnorer J. Lactobacillus plantarum MiLAB 393 produces the antifungal cyclic dipeptides cyclo (L-Phe-L-Pro) and cyclo (L-Phe-irafts-4-OH-L-Pro) and 3-phenyllactic acid //Appl. Environ. Microbiol. 2002. 68: 4322-4327.

264. Strus M., Brzychczy-Wloch M ., Gosiewski T. et al. The in vitro effect of hydrogen peroxide on vaginal microbial communities // FEMS Immunology & Medical Microbiology. 2006. 48(1): 56-63.

265. Sullivan A., Fianu-Jonasson A., Landgren B.-M., Nord C.E. Ecological effect of perorally administered pivmecillinam on the normal vaginal microflora /Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2005. 49(1): 170-175

266. Suzuki M.T., Giovannoni S.J. Bias caused by template annealing in the amplification of mixture of 16S rRNA genes by PCR /Appl. Environ. Microbiol. 1996. 62: 625-630.

267. Sweet R.L. Gynecologic conditions and bacterial vaginosis: implications for the non-pregnant patient /Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2000. 8: 184— 190.

268. Taha E.T., Gray R.H., et al. HIV infection and disturbances of vaginal flora during pregnancy /J AIDS Hum Retroviral. 1999. 20: 52-59.

269. Testore G.P., Sarrecchia C., Zupi E., Sordillo P., Valli E., Bove F., An-dreoni M. Antibiotic susceptibility of lactobacilli isolated from cervix of healthy women /Microbial Ecology in Health and Disease. 2002. 14: 14-18.

270. Thompson R.C., Ohlsson K. Isolation, properties, and complete amino acid sequence of human secretory leukocyte protease inhibitor, a potent inhibitor of leukocyte elastase /PNAS. 1986. 83: 6692-6696.

271. Thorsen P., Jensen I.P., Jeune B. et al. Few microorganisms associated with bacterial vaginosis may constitute the pathologic core: a population-based

microbiologic study among 3596 pregnant women /Am J Obstet Gynecol. 1998. 178: 580-587.

272. Tomas M.S., Bru E., Nader-Macias M.E. Comparison of the growth and hydrogen peroxide production by vaginal probiotic lactobacilli under different culture conditions /Am. J. Obstet. Gynecol. 2003. 188: 35-44.

273. Tosi M.F. Innate immune responses to infection /Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2005. 116: 241-249.

274. Totten P.A., Amsel R., Hale J., Piot P., Holmes K.K. Selective differential human blood bilayer media for isolation of Gardnerella (Heamophilus) vaginalis/J Clin Microbiol. 1982. 15: 141-147.

275. Valadkhan Z., Sharma S., Harjai K. et al. In vitro comparative kinetics of adhesive and haemolytic potential of T. vaginalis isolates from symptomatic and asymptomatic females /Indian J Pathol. Microbiol. 2003. 46 (4): 693-699.

276. Vallor A.C., Antonio M.A., Hawes S.E., Hillier S.L. Factors associated with acquisition of, or persistent colonization by, vaginal lactobacilli: role of hydrogen peroxide production /J Infect Dis. 2001. 184: 1431-1436.

277. Valore E.Y., Park C.H., Quayle A.J., Wiles K.R., McCray P.B. Jr., Ganz T. Human beta-defensin-1: an antimicrobial peptide in human urogenital tissues/Journal of Clinical Investigation. 1998. 101: 1633-1642.

278. van De Wijgert J.H., Masson P.R., Gwanzura L., Mbizvo M.T., Chirenje Z.M., Iliff V., Shiboski S., Padian N.S. Intravaginal practices, vaginal flora disturbances, and acquisition of sexually transmitted diseases in Zimbabwean women /J Infect Dis. 2000. 181: 587-594.

279. van Niel E.W., Hofvendahl K., Hahn-Hagerdal B. Formation and conversion of oxygen metabolites by Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 19435 under different growth conditions /Appl. Environ. Microbiol. 2002. 68: 4350^4-356.

280. Vasquez A., Jakobsson T., Ahrne S., et al. Vaginal Lactobacillus flora of healthy Swedish women /J Clin Microbiol. 2002. 40: 2746-2749.

281. Velraeds M., Van Der Mei H., Reid G., Busscher H. Inhibition of initial adhesion of uropathogenic Enterococus faecalis by biosurfactants from Lactobacillus isolates /Appl Environ Microbiol. 1996. 62: 1958-1963.

282. Velraeds M., Van Der Mei H., Reid G., Busscher H. Inhibition of initial adhesion of uropathogenic Enterococcus faecalis to solid subsrata by an absorbed biosurfactant layer from Lactobacillus acidophilus /Urology. 1997. 49: 790-794.

283. Velraeds M„ Van De Belt-GritterB., Van Der Mei H„ Reid G„ Busscher H. Interference in initial adhesion of uropathogenic bacteria and yeasts to silicon rubber by a Lactobacillus acidophilus biosurfactant /J Med Microbiol. 1998. 47: 1081-1085.

284. Verhelst R., Verstraelen H„ Claeys G., et al. Cloning of 16S rRNA genes amplified from normal and disturbed vaginal microflora suggests a strong association between Atopobium vaginae, Gardnerella vaginalis and bacterial vaginosis /BMC Microbiol. 2004. 4: 16.

285. Verstraelen H., Verhelst R., Claeys G., Temmerman M., Vaneechoutte M. Culture independent analysis of vaginal microflora: The unrecognized association of Atopobium vaginae with bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 2004. 191: 1130-1132.

286. Vitali B., Pugliese C., Biagi E., Candela M„ Turroni S., Bellen G., Donders G.G.G., Brigidil P. Dynamics of vaginal bacterial communities in women developing bacterial vaginosis, candidiasis, or no infection, analyzed by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis and real-time PCR /Applied and Environmental Microbiology. 2007. 73 (18): 5731-5741

287. Vollenbroich D., Ozel M., Vater J., Kamp R., Pauli G. Mechanism of inactivation of enveloped viruses by the biosurfactant surfactin from Bacillus subtilis /Biologicals. 1997. 25: 289-297.

288. Vollenbroich D., Pauli G. ,Ozel M., Vater J. Antimycoplasma propierties and application in cell culture of surfactin, a lipopetdide antibiotic from Bacillus subtilis /Appl Environ Microbiol. 1997b. 63: 44-49.

289. Wallace P.K., Yeaman G.R., Johnson K., Collins J.E., Guyre P.M., Wira C.R. MHC class II expression and antigen presentation by human endometrial cells /J Steroid Biochem Mol Biol. 2001. 76: 203-211.

290. Wang R.-F., Cao W.-W., Cerniglia C.E. PCR detection and quantitation of predominant anaerobic bacteria in human fecal samples /Appl. Environ. Microbiol. 1996. 62: 1242-1247.

291. Watts D.H., Fazzari M., Minkoff H., et al. Effects of bacterial vaginosis and other genital infections on the natural history of human papillomavirus infection in HIV-1-infected and high-risk HIV-1-uninfected women /J Infect Dis. 2005. 191:1129-1139.

292. Wiedow O., Luademann J., Utecht B. Elafin is a potent inhibitor of proteinase 3 /Biochemical and Biophysical Research Communications. 1991. 174: 6-10.

293. Wiesenfeld H.C., Hillier S.L., Krohn M.A., Landers D.V., Sweet R.L. Bacterial vaginosis is a strong predictor of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis infection /Clinical Infect Dis. 2003. 36: 663-668.

294. Wilks M., Wiggins R„ Whiley A., Hennessy E., Warwick S., Porter H., Corfield A., Millar M. Identification and H202 production of vaginal Lactobacilli from pregnant women at high risk of preterm birth and relation with outcome /Journal of Clinical Microbiology. 2004. 42(2): 713-717.

295. Wira C.R., Fahey J.V., Sentman C.L., Pioli P.A., Shen L. Innate and adaptive immunity in female genital tract: cellular responses and interactions /Immunological Reviews. 2005. 206: 306-335.

296. Wira C. R., Grant-Tschudy K.S., Crane-Godreau M.A. Epithelial Cells in the Female Reproductive Tract: a Central Role as Sentinels of Immune Protection / American Journal of Reproductive Immunology. 2005. 53 P)Z.65Wfra C.R., Fahey J.V., Ghosh M., et al. Sex hormone regulation of innate immunity in the female reproductive tract: the role of epithelial cells in balancing reproductive potential with protection against sexually transmitted pathogens/ Am J Reprod Immunol. 2010. 63(6):544-65.

298. Wira C.R., Ghosh M., Smith J.M., et al. Epithelial cell secretions from the human female reproductive tract inhibit sexually transmitted pathogens and Candida albicans but not Lactobacillus/ Mucosal Immunol. 2011.4(3):335-42.

299. Witkin S.S. Bacterial flora of the female genital tract: function and immune regulation /Best Practice & Research Clinical Obstetrics and Gynaecology. 2007. 21(3): 347-354.

300. Wolner-Hanssen P., Krieger J.N., Stevens C.E., et al. Clinical manifestations of vaginal trichomoniasis /JAMA. 1989. 261: 571-576.

301. Ya W., Reifer C., Miller L.E. Efficacy of vaginal probiotic capsules for recurrent bacterial vaginosis: a double-blind, randomized, placebo-controlled study /Am J Obstet Gynecol. 2010. 203(2): 120. el-e6.

302. Yao X.D., Fernandez S., Kelly M.M., Kaushic C., Rosenthal K.L. Expression of Toll-like receptors in murine vaginal epithelium is affected by the estrous cycle and stromal cells / J Reprod Immunol. 2007. 75(2): 106-19.

303. Zarember K.A., Godowski P.J. Tissue expression of human toll-like receptors and differential regulation of toll-like receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products, and cytokines /Journal of Immunology. 2002. 168: 554-561.

304. Zariffard M. R„ Saifuddin M„ Sha B. E„ Spear G. T. Detection of bacterial vaginosis-related organisms by real-time PCR for lactobacilli, Gardner ella vaginalis and Mycoplasma hominis /FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2002. 34: 277-281.

305. Zhao C.Q., Wang I., Lehrer R.I. Widespread expression of beta-defensin HBD-1 in human secretory glands and epithelial cells /FEBS Lett. 1996.396:319-22

306. Zheng H„ Alcorn T., Cohen M. Effect of H202-producing lactobacilli on Neisseria gonorrhoeae growth and catalase activity /J Infect Dis. 1994. 170: 1209-1215.

307. Zhou X., Bent S.J., Schneider M.G., Davis C.C., Islam M.R., Forney L.J. Characterization of vaginal microbial communities in adult healthy women using cultivation-independent methods /Microbiology. 2004. 150: 2565-2573.

308. Zhou X., Brown C.J., Abdo Z., Davis C.C., Hansmann M.A., Joyce P., Foster J.A., Forney L.J. Differences in the composition of vaginal microbial communities found in healthy Caucasian and black women /ISME Journal. 2007. 1: 121-133.

309. Zhou X., Hansmann M.A., Davis C.C., et al. The vaginal bacterial communities of Japanese women resemble those of women in other racial groups /FEMS Immunol Med Microbiol. 2010. 58(2): 169-81.