Роль эндолизосомальных двупоровых кальциевых каналов в альфа1-адренергической регуляции обмена ионов кальция в гладкомышечных клетках и сократимости кровеносных сосудов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Труфанов Сергей Константинович

• Труфанов Сергей Константинович
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Труфанов Сергей Константинович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Морфология сосудов

1.2 Гладкомышечные клетки

1.3 Механизмы сокращения сосудов

1.4 Обмен кальция в ГМК

1.5 Рецептор-зависимое высвобождение [Са2+]цит

1.6 Краткая характеристика рецепторов агонистов кальциевого обмена в клетках кровеносных сосудов

1.6.1 Норадреналин

1.6.2 Ангиотензин II

1.6.3 Серотонин

1.6.4 Вазопрессин

1.6.5 Гистамин

1.7 Каналы, кальциевые насосы и обменники сарко-, эндоплазматического ретикулума и плазматической мембраны

1.7.1 АТРаза ретикулума

1.7.2 Каналы TRP

1.7.3 ^+/Са2+ обменник

1.7.4 ATФазы плазматической мембраны

1.8 Характеристика и общие свойства двупоровых кальциевых каналов (ТРС)

1.9 Биологические функции NAADP

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Реактивы

2.2 Животные

2.3 Выделение аорты крысы

2.4 Выделение гладкомышечных клеток

2.5 Выделение эндотелиальных клеток человека

2.6 Трансфекция siRNA

2.7 ПЦР-РВ

2.8 Измерение концентрации цитоплазматического кальция в эндотелиальных и гладкомышечных клетках

2.9 Измерение концентрации цитоплазматического кальция в отдельных клетках

2.9 Статистика

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Особенности культуры ГМК

3.2 Аорта крысы как модель для исследований

3.3 Влияние агонистов на уровень ионов кальция

3.3.1 Норадреналин

3.3.2 Ангиотензин

3.3.3 Серотонин

3.3.4 Вазопрессин

3.3.5 Гистамин

3.4 Оценка экспрессии и локализации ТРС в ГМК

3.5 Антагонист NAADP NED19

3.6 Ингибитор фосфолипазы C

3.7 Бафиломицин А1

3.8 Подавление экспрессии генов 1рсп1 и 1реп2

3.9 Исследование роли двупоровых кальциевых каналов в а1-адренернической регуляции сократимости кровеносных сосудов

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

4.1 Экспрессия и локализация двупоровых каналов в ГМК

4.2 Регуляция [Са2+]цит в культивируемых гладкомышечных и эндотелиальных клетках кровеносных сосудов

4.3 Оценка влияния различных систем на регуляцию внутриклеточного кальция

4.4 Предполагаемый механизм активации а1-рецепторами кальциевого сигнала в ГМК

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль эндолизосомальных двупоровых кальциевых каналов в альфа1-адренергической регуляции обмена ионов кальция в гладкомышечных клетках и сократимости кровеносных сосудов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность и современное состояние проблемы. Кальций выполняет множество функций в организме человека. Кальций участвует в сокращении мышц, передаче нервного импульса, передаче внутриклеточных сигналов, является одним из факторов свертывания крови, а также структурным компонентом костной ткани. В гладкомышечных клетках (ГМК) сосудов кальций играет решающую роль в регуляции сердечно-сосудистых сокращений: повышенный приток кальция в цитоплазму клеток сосудов приводит к увеличению мышечного тонуса и, следовательно, к росту сосудистого сопротивления и повышению артериального давления. Активаторы сокращения сосудов, такие как норадреналин и ангиотензин II, вызывают сокращение сосудов за счет повышения концентрации ионов кальция в цитоплазме [Ca2+]w (внутриклеточной концентрации свободного кальция) гладкомышечных клеток [Ross, 2011]. В клетках существует несколько систем, регулирующих обмен кальция. Наиболее известным и изученным механизмом повышения [Ca2+]w является его высвобождение из эндо/саркоплазматического ретикулума через инозитол-3-фосфатные (InsP3R)_ и рианодин-чувствительные каналы (RyR) - последние активируются циклической АДФ-рибозой (cADPR) [Galione, Lee et al., 1991]. Другим мессенджером является NAADP (Nicotinic Acid Adenine Dinucleotide Phosphate) [Lee and Aarhus, 1995], который вызывает высвобождение Ca2+ из ранее неизвестных внутриклеточных хранилищ (депо) кальция - органелл с умеренно кислой интралюминальной средой - эндолизосом [Churchill, Okada et al., 2002]. Ca2+-мобилизующее действие NAADP было показано практически во всех исследованных типах клеток [Guse and Lee, 2008]. Мишенью, активируемой NAADP, являются двупоровые каналы (two-pore channels, TPC), которые представлены в лизосомах гладкомышечных клеток человека и крысы двумя формами, TPC1 и TPC2. Функция этих каналов как мишени NAADP была установлена почти через 10 лет после их клонирования. Несколько позднее было установлено, что помимо и NAADP каналы TPC может стимулировать фосфатидилинозитол-3,5 бисфосфат - PI-3,5-P2 [Jha, Ahuja et al., 2014].

Ранее было показано значение NAADP индуцированного Са2+ ответа в эндотелиальных клетках (ЭК) человека [Naylor, Ап^оиаш et а1., 2009]. В нашей лаборатории было показано, что антагонист NAADP trans-NED19 уменьшает индуцированное гистамином расслабление аорты крыс [7ЬагкюИ, Nadeev et а!., 2016]. Известно, что действие гистамина на сосудистый тонус опосредовано Н1-рецепторами эндотелиальных клеток. Однако оставалось неясно, реализуются ли эффекты вазоконстрикторов на тонус сосудов и [Са2+]щт в гладкомышечных клетках с участием NAADP-чувствительных каналов. В связи с этим настоящая работа посвящена изучению обмена ионов кальция в гладкомышечных клетках сосудов. Было исследовано участие ТРС в реализации действия основных вазоконстрикторных агонистов - норадреналина, ангиотензина II, вазопрессина. Также было проведено изучение данного механизма кальциевой сигнализации в эндотелиальных клетках. Введение этого раздела было необходимо для того, чтобы оценить, насколько универсальны фармакологические характеристики изучаемых в этой работе кальциевых каналов, есть ли клеточная или тканевая специфичность у каналов ТРС по этому параметру.

Цель и задачи работы. Целью данной работы было исследование функциональной роли двупоровых кальциевых каналов в рецепторной регуляции обмена Са2+ в ГМК и в сократимости кровеносных сосудов.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1) Охарактеризовать регуляцию обмена Са2+ в ГМК, выделенных из аорты крысы, под действием норадреналина и агонистов других рецепторов.

2) Исследовать механизмы подъёма [Са2+]цит в ГМК аорты крысы, вызванного активацией а1-адренорецепторов, оценить вклад каналов ТРС.

3) Определить уровни экспрессии отдельных видов ТРС и охарактеризовать их локализацию в ГМК аорты крысы.

4) Провести избирательное подавление экспрессии с помощью siRNA каналов ТРС1 и ТРС2 для определения функциональной роли каждого из них в а1-адренергинческой регуляции обмена Са2+ в ГМК аорты крысы.

5) Исследовать фармакологическую регуляцию чувствительных к норадреналину ТРС в ГМК аорты крысы и выделить наиболее эффективные блокаторы каналов с целью их применения для коррекции а1-адренергической регуляции сосудистого тонуса.

6) Определить эффективность действия блокаторов ТРС на другой модели - гистаминергической регуляции [Са2+]цит в эндотелиальных клетках из пупочной вены человека.

Научная новизна и практическая значимость работы. В данной работе впервые определена экспрессия и исследованы функциональные свойства каналов ТРС в гладкомышечных клетках аорты крысы. Продемонстрирована экспрессия ТРС1 и ТРС2 и показано, что в изучаемых клетках ТРС1 является преобладающей формой данных каналов. Установлено, что в гладкомышечных клетках ТРС локализованы в мембранах лизосом и эндолизосомальных везикул. Доказано участие каналов ТРС в а1-адренергическом механизме регуляции внутриклеточного Са2+. Охарактеризовано влияние фармакологических препаратов на каналы ТРС в гладкомышечных и эндотелиальных клетках сосудов. В настоящей работе более детально было описано влияние фармакологических препаратов (NED19) на ТРС эндотелиальных клеток.

Норадреналин является ключевым регулятором артериального давления. Выяснение роли каналов ТРС в а1-адренергической регуляции обмена ионов кальция в ГМК и тонуса кровеносных сосудов способствует более глубокому пониманию патогенеза артериальной гипертензии и открывает перспективы как для поиска новых антигипертензивных фармакологических препаратов, так и для эффективного применения уже известных лекарственных препаратов.

Объект и предмет исследования. Объектом исследования является NAADP-зависимая регуляция обмена внутриклеточного кальция в гладкомышечных клетках, выделенных из аорты крысы. Предметом исследования являлись двупоровые каналы, входящие в систему рецептор-зависимой регуляции внутриклеточного Са2+.

Методы исследования. Для оценки экспрессии и её подавления использовали следующие методы: выделение тотальной РНК из культур клеток ß-меркаптоэтанолом, ПЦР с обратной транскрипцией, ПЦР в реальном времени. Для детектирования выхода кальция использовали флуоресцентные зонды Fura-2 и Calcium Green™-1. Сокращение изолированных сосудов регистрировали в изометрическом режиме с помощью 4-канального миографа Radnoti (Panlab, Испания), усилителя и программы LabChart (ADInstruments, Австралия).

Положения, выносимые на защиту.

1) В ГМК существует два механизма al-адренергической регуляции обмена Са2+: запуск фосфолипазой C фосфотидилинозитол-4,5 бисфосфата с последующим открытием 1шР3-чувствительных каналов эндоплазматического ретикулума и активация эндолизосомальных двупоровых Ca-каналов.

2) В ГМК экспрессируются двупоровые кальциевые каналы 1 и 2 типа, локализованные в кислых эндолизосомальных везикулах. В активации норадреналином подъема [Са2+]цит участвуют каналы 1-го типа.

3) Каналы ТРС, активируемые норадреналином в гладкомышечных клетках, более эффективно ингибируются cis-изомером NED19 по сравнению с trans-изомером в отличие от каналов ТРС в эндотелиальных клетках, которые одинаково чувствительны к обоим стереоизомерам NED19.

4) Двупоровые кальциевые каналы участвуют в альфа1 -адренергической регуляции сосудистого тонуса.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них статей в журналах, соответствующих Перечню ВАК 2, тезисов докладов и материалов конференций 8.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы докладывались на VI Съезде физиологов СНГ, VI Съезде биохимиков России и IX Российском симпозиуме «Белки и пептиды» (Дагомыс, 2019), на XVIII конференции-школе с международным участием «Актуальные проблемы биологии развития» (Москва, 2019), на международной конференции «Рецепторы и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2019).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследования, их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Текст изложен на 102 страницах машинописного текста и содержит 1 таблицу и 22 рисунка. Список литературы включает 101 источник.

Данная работа финансировалась из следующих грантов:

РФФИ № 14-04-00951 Роль двупоровых кальциевых каналов в активации сокращений сердца и в регуляции тонуса кровеносных сосудов, 2014-2016;

РНФ № 14-15-01004 Роль пероксида водорода в регуляции обмена ионов кальция в эндотелиальных клетках и в регуляции сократимости кровеносных сосудов, 2014-2016.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Морфология сосудов

Морфология сосудов соответствует функциям, которые они выполняют в организме. Особенностью строения крупных и средних сосудов является три слоя стенок. Адвентициальная оболочка, представляет собой наружный слой стенки сосуда. Она отвечает за целостность сосуда и сопротивляемость физическому напряжению стенки. На внешней стороне находятся vasa vasorum и nervi vasorum, представляющие собой мелкие сосуды и нервы, которые, соответственно, снабжают кислородом и питательными веществами клетки сосудистой стенки и осуществляют нервную регуляцию сосудистого тонуса. Основой внешней оболочки является коллаген, он способствует прикреплению сосуда к близлежащим структурам и тканям. Медия (tunica media) — это средний слой стенки сосуда. Средняя оболочка толще на артериальной стороне сосудистой системы, и содержит поперечно расположенные гладкомышечные клетки, способные изменять диаметр просвета сосуда. Толщина медии сильно различается в зависимости от типа сосудов: она довольно толстая в некоторых артериях и практически не заметна в некоторых венах. Средняя оболочка также содержит эластические пластинки и окружена внешней эластической мембраной, слоем эластических волокон, отделяющим внутреннюю среду от внешней оболочки. Интима представляет собой внутренний слой стенки сосуда, который контактирует с содержимым просвета и взаимодействует с ним. Интима образована одним слоем плоскоклеточных эндотелиальных клеток, который является внутренней поверхностью любого сосуда. Эндотелий поддерживается базальной пластинкой, представляющей собой, внеклеточный матрикс. Иногда интима окружена субэндотелиальным слоем, который может состоять из гладкомышечных, коллагеновых и эластических волокон и может различаться по толщине. Внутренний слой сосудов отделён от медии эластической мембраной, слоем

эластических волокон. Она наиболее толстая в артериальной системе, особенно в мышечных артериях, и тонкая во всей венозной системе [Taylor and Bordoni, 2022].

Несмотря на то, что все три описанных общих слоя присутствуют в крупных и средних сосудах системы, толщина и выраженность различных оболочек отличается, что соответствует их роли в сосудистой системе; и носит название сегментарной дифференциации [Williams and Heistad, 1996].

Внутренняя оболочка крупных артерий, таких как эластичные артерии или аорта, довольно толстая с преобладанием гладких мышц в субэндотелиальном слое интимы. Гладкая мускулатура является основным типом клеток и отвечает за миграцию макрофагов и изменение просвета сосудов. Адвентиция крупных артерий тоньше, относительно общей толщины. Как правило, она составляет менее половины общей ширины стенки сосуда.

Мелкие артерии и артериолы содержат один или два слоя гладкомышечных клеток, которые обеспечивают сокращение и необходимы для поддержания давления в периферических сосудах. Наружная эластическая мембрана в артериолах отсутствует. Артериолы разделяются на капилляры. Капилляры имеют наименьший диаметр из всех сосудов, который колеблется от 4 до 10 мкМ. Они имеют редуцированную стенку, состоящую из эндотелия, окруженного соединительной тканью. Капилляры также являются узкоспециализированными сосудами с различными особенностями оболочек. Существует три типа капилляров с узкоспециализированными функциями. Первый тип капилляров - т.н. непрерывные капилляры. Они имеют непрерывный эндотелий и непрерывную базальную пластинку. Непрерывные капилляры осуществляют трансцитоз -перенос больших молекул из просвета в окружающую соединительную ткань и наоборот. Они присутствуют во всех трех типах мышц, соединительной ткани, коже, легких и центральной нервной системе. Второй тип капилляров -фенестрированные капилляры. Они имеют круглые фенестрации (отверстия) в стенке капилляра с непрерывной базальной пластинкой. Находится в эндокринных

органах и местах метаболического всасывания. К ним относятся почки, поджелудочная железа, кишечный тракт. Третий тип капилляров - прерывистые или синусоидные капилляры. В стенке этих капилляров содержатся щели (синусы), величина которых достаточна для выхода вне просвета капилляра эритроцитов и крупных молекул белка. Прерывистые Капилляры присутствуют в печени, селезенке и костном мозге.

Венулы имеют диаметр до 0,1 мм и непосредственно переходят в капиллярное русло. Венулы также содержат перициты в базальной мембране, которые участвуют в передаче клеточных сигналов. По мере того, как эти венулы начинают развивать заметную среднюю оболочку выше по течению, они становятся известными как «мышечные венулы». Также в мышечных венулах в некоторых случаях присутствует наружная оболочка. Затем поток крови течет в мелкие вены. Мелкие вены имеют диаметр от 0,1 мм до 1 мм; это первый класс вен, которые содержат все три оболочки. В этот момент перициты обычно уже не наблюдаются. Следующим сосудом в венозной сети являются средние вены. Они имеют диаметр до 1 см и составляют многие из известных «именных» вен. Наличие клапанов определяет средние вены. Эти односторонние клапаны особенно преобладают в нижних конечностях и блокируют ретроградный поток. Средние вены имеют гораздо более тонкую оболочку, чем параллельные артерии. Адвентиция представляет собой самый толстый слой в средних венах и содержит коллагеновые и эластиновые волокна. Наконец, кровь направляется в последние сосуды - крупные вены, прежде чем вернуться в сердце. Крупные вены имеют диаметр более 1 см, к ним относятся воротная вена, нижняя полая вена и верхняя полая вена. Крупные вены не имеют четкой границы между интимой и средней оболочкой без явной внутренней эластической мембраны, и, как и средние вены, они содержат толстую наружную оболочку. Наружная часть также содержит продольные гладкие мышцы. Отдельные слои не так четко оцениваются, как в артериях, и могут сильно различаться у разных людей [Taylor and Bordoni, 2022].

Рис. 1. Строение артерии и вены. На данном рисунке показано строение стенок артерии (слева) и вены (справа).

1.2 Гладкомышечные клетки

Гладкомышечные клетки обеспечивают основную поддержку структуры стенки сосуда и регулируют сосудистый тонус для поддержания внутрисосудистого давления и тканевой перфузии. Известно, что ГМК сохраняют значительно большую пластичность, чем другие типы клеток, для выполнения различных функций, включая сокращение, пролиферацию и синтез внеклеточного матрикса [Alexander and Owens, 2012]. ГМК могут претерпевать глубокие изменения между двумя фенотипами: сократительным и пролиферативным [Salmon, Gomez et al., 2012]. Первый тип ГМК экспрессирует набор маркеров гладких мышц, таких как: белки цитоскелета и сократительные белки, которые включают а-актин гладких мышц (SMaA), тяжелую цепь миозина гладких мышц (SMMHC), кальпонин и белок SM22a. Все они необходимы для основной функции ГМК — сокращения стенки сосуда. Экспрессия этих маркеров обычно отсутствует во втором типе ГМК. При нормальных условиях ГМК существуют в сократительном фенотипе. Однако под действием тромбоцитарного фактора роста

(PDGF, platelet-derived growth factor), эндотелина-1 (ЕТ-1), тромбина, фактора роста фибробластов (FGF), интерлейкина-1 (IL-1), гепарин сульфата, оксида азота (NO), трансформирующего фактора роста (TGF-ß) а также матричных металлопротеиназ (MMPs) ГМК способны мигрировать и затем пролиферировать, что приводит к их накоплению в интиме [Луста К. А., 2015]. ГМК также могут синтезировать внеклеточный матрикс, за счет которого происходит т.н. адаптивное утолщение интимы [Alexander and Owens, 2012].

Морфология ГМК была проанализирована с помощью электронной микроскопии. Клетки с сократительным фенотипом имеют гетерохроматическое ядро и обильные актиновые и миозиновые филаменты, по сравнению с пролиферативными ГМК с эухроматическим ядром и заметным саркоплазматическим ретикулумом, и комплексом Гольджи. Гетерогенность ГМК наблюдается в кровеносных сосудах in vivo в разных сосудистых руслах в субинтимальном слое, в разных слоях медии, а также в атеросклеротических бляшках. ГМК в культуре могут быть гетерогенными, включая различную форму клеток, размер, экспрессию белков и характер роста. Например, ГМК, выделенные из молодых артерий, содержат популяции клеток с более высокой пролиферативной скоростью, чем ГМК из взрослых артерий. ГМК, культивированные из интимы сосуда, демонстрируют более высокую естественную скорость апоптоза в культуре по сравнению с клетками, полученными из нормального медиального слоя того же кровеносного сосуда [Newby and Zaltsman, 2000]. ГМК, культивированные в нормальных средах, могут существовать в разных формах, судя по морфологии. При низкой плотности культуры ГМК имеют веретенообразную форму, при достижении монослоя клетки образуют классическую морфологию «холмов и долин», которая может в дальнейшем развиваться в сферические многоклеточные узелки; крупные округлые, стареющие клетки; мелкие, относительно быстро растущие клетки; и клетки, которые контактируют, уменьшаются, приобретают округлую форму и хорошо заметны в проходящем свете. Некоторые из перечисленных

морфологических типов ГМК могут сосуществовать в культурах, полученных из одного и того же тканевого эксплантата, что свидетельствует о гетерогенности этих клеток [Berridge, 2008].

1.3 Механизмы сокращения сосудов

Сокращение сосудов происходит под действием ряда гормонов и паракринных факторов. Кроме того, сокращение вызывает норадреналин, который секретируют нервы симпатической системы, иннервирующей сосуды. Известно два механизма сокращения гладких мышц сосудов: Са2+-зависимый и Ca2+-независимый.

Первый механизм запускается активацией рецепторов, связанных с G-белком, что приводит к активации фосфолипазы С (ФЛС), и образованию вторичных мессенджеров инозитолтрисфосфата (InsP3) и диацилглицерина (DAG) [Birnbaumer, 2007]. InsP3 стимулирует высвобождение внутриклеточного Ca2+ из саркоплазматического ретикулума, а DAG вызывает активацию протеинкиназы C (PKC). Кроме того, различные входные каналы Ca2+, такие как потенциал-управляемые (VOC), рецептор-управляемые (ROC) и депо-управляемые (SOC) Са2+-каналы, а также неселективные катионные каналы (NSCC), участвуют в повышение внутриклеточной концентрации Са2+. Повышение внутриклеточного Са2+ носит временный характер и инициирует сократительную активность за счет взаимодействия Ca2+ с кальмодулином, который, в свою очередь, активирует киназу легкой цепи миозина. Этот фермент отвечает за фосфорилирование легкой цепи миозина (MLC), стимулируя образование циклических поперечных мостиков (сшивок) между актином и миозином [Wynne, Chiao et al., 2009]. После повышения внутриклеточная концентрация кальция возвращается к своей нормальной концентрации с помощью белковых насосов и кальциевых обменников, расположенных на плазматической мембране и саркоплазматической сети, что, в свою очередь, приводит к расслаблению ГМК [Frelin, 1991].

Второй механизм сокращения ГМК запускается через активацию Rho-киназы. Ряд агонистов активируют Rho-киназу через определенные рецепторы, связанные с белком G12,13. Активированная Rho-киназа впоследствии фосфорилирует актин связывающую субъединицу миозина и ингибирует активность фосфатазы легкой цепи миозина. Одновременно Rho-киназа фосфорилирует миозин непосредственно в том же самом сайте, который фосфорилирует киназа лёгкой цепи миозина. Добавление конститутивно активной Rho-киназы к пермеабилизированным гладкомышечным клеткам вызывает мышечное сокращение посредством фосфорилирования миозина, которое нечувствительно к ингибитору киназы лёгкой цепи миозина - вортманнину. Таким образом, Rho-киназа может регулировать фосфорилирование миозина и сокращение, посредством двух механизмов (инактивации миозинфосфатазы и прямого фосфорилирования миозина) [Fukata, Amano et al., 2001].

i

Рис. 2. Механизмы сокращения гладкомышечных клеток. Активация сокращения происходит за счёт фосфорилирования лёгкой цепи миозина (MLC) киназой лёгкой цепи миозина (MLKC), которая активируется Ca2+-кальмодулином (CaM). Rho-киназа, активируемая факторами обмена гуаниновых нуклеотидов (GEFs), фосфорилирует MLC, также инактивирует фосфорилированием фосфатазу легких цепей миозина (MLCP) [Fukata, Amano et al., 2001].

1.4 Обмен кальция в гладкомышечных клетках

Концентрация ионизированного кальция является важным показателем состояния клеток, и определяется суммарным эффектом всех процессов, которые доставляют в цитозоль или удаляют из него кальций. Кальций может сохранять функции мессенджера только тогда, когда свободный внутриклеточный Ca2+ поддерживается в покое на уровне приблизительно 0.1 мкм/л [Phair and Hai, 1986]. Если происходит неконтролируемый приток кальция, например из-за повреждения мембраны или отсутствия источника энергии, клетки могут повреждаться перегрузкой кальцием с обширной деградацией клеточной структуры протеолитическими или липолитическими ферментами. Согласно кальциевой гипотезе гибели клеток, неблагоприятные условия вызывают повышение концентрации внутриклеточного кальция [Smith, 1996].

Каждому типу клеток требуются различные концентрации Ca2+ для выполнения своих физиологических функций. Регуляция Ca2+ обмена может варьировать: от поддержания низкой внутриклеточной концентрации Ca2+ для предотвращения активации Ca2+- опосредованной гибели клеток, до динамического контроля уровней Ca2+ в кардиомиоцитах для сокращения и расслабления мышц. В невозбудимых клетках, где уровни внутриклеточного свободного Ca2+ остаются низкими, PMCA, как правило, является основной системой удаления Ca2+. Однако, возбудимые клетки, такие как миоциты и нейроны с их более сложными потребностями в экструзии Ca2+, требуют более мощных систем для обмена внутриклеточного Ca2+. В возбудимых клетках три основных пути удаления цитозольного Ca2+: SERCA (кальциевая атфаза сарко-эндоплазматического ретикулума), РМСА (кальциевая атфаза плазматической мембраны) и NCX (натрий-кальциевый обменник) [Tsoukias, 2011]. Относительный вклад этих трех насосов в Ca2+ клиренс варьирует, в зависимости от типа клеток. В ГМК мочевого пузыря, например, это примерно 2: 1: 1 в пользу NCX, тогда как в кардиомиоцитах 70-92% Ca2+ (в зависимости от вида) возвращается во внутренние депо, через

SERCA. Остальная часть, в значительной степени входит через NCX, остальная -входит через PMCA, путем митохондриального обратного захвата, образуя вместе «медленные системы», которые регулируют более 1% глобального обмена Ca2+ [Tsoukias, 2011]. PMCA участвует не только в глобальном гомеостазе Ca2+, но и в регуляции местной внутриклеточной динамике Ca2+ [Stafford, Wilson et al., 2017].

Выполнение основной функции гладкомышечных клеток - сокращения обусловлено притоком Са2+ через два типа Са2+-каналов: потенциал-зависимые Са2+-каналы и рецептор-зависимые Са2+-каналы клеточной мембраны. Сокращение ГКМ также может быть достигнуто за счет высвобождения Ca2+ из клеточных хранилищ, в первую очередь саркоплазматического ретикулума. Работа рецептор-зависимых Са2+-каналов, а также каналов СР будет рассмотрена ниже.

У млекопитающих насчитывается десять членов семейства потенциал-зависимых Ca2+ каналов (Cav), и они играют различные роли в передаче клеточных сигналов. Подсемейство Cav1 инициирует сокращение, секрецию, регуляцию экспрессии генов, интеграцию синаптического входа в нейроны и синаптическую передачу в ленточных синапсах в специализированных сенсорных клетках [Catterall, 2011]. Пора Cav образована сегментами S5 и S6 в центре квадратного массива из четырех субъединиц, а датчик потенциала образован пучком четырех трансмембранных альфа-спиралей (S1-S4), присоединенных к поре с помощью линкера S4-S5. Активация Cav управляется трансмембранным перемещением остатков Arg в сегментах S4, расположенных с интервалом в три остатка, и охватывающих мембрану. После деполяризации сегмент S4 перемещается наружу, обмениваясь партнерами по ионной паре и транспортируя Arg через гидрофобный сайт сужения (HCS) в соответствии с моделью скользящей спирали. Наличие в большой боковой цепи Arg служит для герметизации датчика потенциала и предотвращения трансмембранного движения воды и ионов. Изменения мембранного потенциала направляют сегмент S4 внутрь и наружу в ответ на гиперполяризацию и деполяризацию соответственно [Catterall, Lenaeus et al., 2020]. В ответ на продолжительную одиночную деполяризацию или череду

повторяющихся деполяризаций, Cav-каналы переходят в четко выраженное медленно инактивируемое состояние, которое является очень стабильным, и этот процесс модулируется рецепторами нейротрансмиттеров и сигнальными путями вторичных мессенджеров через фосфорилирование белка. Восстановление после медленной инактивации требует длительной реполяризации. Медленная потенциал-зависимая инактивация характерна для всех Cav, от бактерий до человека. Медленная инактивация Cav вызвана асимметричным коллапсом поры, вовлекающим аминокислотные остатки в фильтр ионной селективности и сегменты S6, выстилающие поры. Быстрая инактивация является важным эволюционным дополнением к основной функции кальциевых каналов, поскольку она наблюдается в эукариотических кальциевых каналах, но не в прокариотических кальциевых каналах. Каналы быстрой инактивации Cav образованы внутриклеточным линкером между доменами S3 и S4, которого нет в структуре бактериальных кальциевых каналов. Ряд ключевых аминокислотных остатков во внутриклеточном линкере, соединяющем домены S3 и S4, Ile-Phe-Met-Thr, служат инактивирующей частицей, которая сворачивается во внутреннее устье поры и блокирует проводимость кальция. Во время быстрой инактивации эти ключевые аминокислотные остатки проецируются во внутриклеточное устье поры, где они связываются и блокируют проникновение ионов [Catterall, Lenaeus et al., 2020].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Труфанов Сергей Константинович, 2023 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Adderley SP, Zhang XE and Breslin JW. 2015. Involvement of the H1 Histamine Receptor, p38 MAP Kinase, Myosin Light Chains Kinase, and Rho/ROCK in Histamine-Induced Endothelial Barrier Dysfunction. Microcirculation. 22: 237-248.

2. Alexander MR and Owens GK. 2012. Epigenetic control of smooth muscle cell differentiation and phenotypic switching in vascular development and disease. Annu Rev Physiol. 74: 13-40.

3. Aley PK, Mikolajczyk AM, Munz B, Churchill GC, Galione A and Berger F. 2010. Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate regulates skeletal muscle differentiation via action at two-pore channels. Proc Natl Acad Sci U S A. 107: 1992719932.

4. Bankir L, Bichet DG and Morgenthaler NG. 2017. Vasopressin: physiology, assessment and osmosensation. J Intern Med. 282: 284-297.

5. Berridge MJ. 2008. Smooth muscle cell calcium activation mechanisms. J Physiol. 586: 5047-5061.

6. Berrout J, Mamenko M, Zaika OL, Chen L, Zhang W, Pochynyuk O and O'Neil RG. 2014. Emerging role of the calcium-activated, small conductance, SK3 K+ channel in distal tubule function: regulation by TRPV4. PLoS One. 9.

7. Birnbaumer L. 2007. Expansion of signal transduction by G proteins. The second 15 years or so: from 3 to 16 alpha subunits plus betagamma dimers. Biochim Biophys Acta. 1768: 772-793.

8. Boittin FX, Galione A and Evans AM. 2002. Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate mediates Ca2+ signals and contraction in arterial smooth muscle via a two-pool mechanism. Circ Res. 91: 1168-1175.

9. Brailoiu E, Churamani D, Pandey V, Brailoiu GC, Tuluc F, Patel S and Dun NJ. 2006. Messenger-specific role for nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate in neuronal differentiation. J Biol Chem. 281: 15923-15928.

10. Brown BM, Nguyen HM and Wulff H. 2019. Recent advances in our understanding of the structure and function of more unusual cation channels. F1000Res. 8.

11. Calcraft PJ, Ruas M, Pan Z, Cheng X, Arredouani A, Hao X, Tang J, Rietdorf K, Teboul L, Chuang KT, Lin P, Xiao R, Wang C, Zhu Y, Lin Y, Wyatt CN, Parrington J, Ma J, Evans AM, Galione A and Zhu MX. 2009. NAADP mobilizes calcium from acidic organelles through two-pore channels. Nature. 459: 596-600.

12. Catterall WA. 2011. Voltage-gated calcium channels. Cold Spring Harb Perspect Biol. 3.

13. Catterall WA, Lenaeus MJ and Gamal El-Din TM. 2020. Structure and Pharmacology of Voltage-Gated Sodium and Calcium Channels. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 60: 133-154.

14. Chow BS and Allen TJ. 2016. Angiotensin II type 2 receptor (AT2R) in renal and cardiovascular disease. Clin Sci (Lond). 130: 1307-1326.

15. Churchill GC, Okada Y, Thomas JM, Genazzani AA, Patel S and Galione A. 2002. NAADP mobilizes Ca(2+) from reserve granules, lysosome-related organelles, in sea urchin eggs. Cell. 111: 703-708.

16. Clapper DL, Walseth TF, Dargie PJ and Lee HC. 1987. Pyridine nucleotide metabolites stimulate calcium release from sea urchin egg microsomes desensitized to inositol trisphosphate. J Biol Chem. 262: 9561-9568.

17. Cosens DJ and Manning A. 1969. Abnormal electroretinogram from a Drosophila mutant. Nature. 224: 285-287.

18. Drutel G, Peitsaro N, Karlstedt K, Wieland K, Smit MJ, Timmerman H, Panula P and Leurs R. 2001. Identification of rat H3 receptor isoforms with different brain expression and signaling properties. Mol Pharmacol. 59: 1-8.

19. Duchen MR. 2000. Mitochondria and calcium: from cell signalling to cell death. J Physiol. 529 Pt 1: 57-68.

20. Falasca L, Agrati C, Petrosillo N, Di Caro A, Capobianchi MR, Ippolito G and Piacentini M. 2015. Molecular mechanisms of Ebola virus pathogenesis: focus on cell death. Cell Death Differ. 22: 1250-1259.

21. Favia A, Desideri M, Gambara G, D'Alessio A, Ruas M, Esposito B, Del Bufalo D, Parrington J, Ziparo E, Palombi F, Galione A and Filippini A. 2014. VEGF-induced neoangiogenesis is mediated by NAADP and two-pore channel-2-dependent Ca2+ signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 111: 4706-4715.

22. Feijoo-Bandin S, Garcia-Vence M, Garcia-Rua V, Rosello-Lleti E, Portoles M, Rivera M, Gonzalez-Juanatey JR and Lago F. 2017. Two-pore channels (TPCs): Novel voltage-gated ion channels with pleiotropic functions. Channels (Austin). 11: 20-33.

23. Fleig A and Penner R. 2004. The TRPM ion channel subfamily: molecular, biophysical and functional features. Trends Pharmacol Sci. 25: 633-639.

24. Frelin C. 1991. Mechanisms of vasoconstriction. Am Heart J. 121: 958-960.

25. Fukata Y, Amano M and Kaibuchi K. 2001. Rho-Rho-kinase pathway in smooth muscle contraction and cytoskeletal reorganization of non-muscle cells. Trends Pharmacol Sci. 22: 32-39.

26. Galione A. 2011. NAADP receptors. Cold Spring Harb Perspect Biol. 3.

27. Galione A, Lee HC and Busa WB. 1991. Ca(2+)-induced Ca2+ release in sea urchin egg homogenates: modulation by cyclic ADP-ribose. Science. 253: 1143-1146.

28. Grimm C, Chen CC, Wahl-Schott C and Biel M. 2017. Two-Pore Channels: Catalyzers of Endolysosomal Transport and Function. Front Pharmacol. 8: 45.

29. Grimm C, Holdt LM, Chen CC, Hassan S, Muller C, Jors S, Cuny H, Kissing S, Schroder B, Butz E, Northoff B, Castonguay J, Luber CA, Moser M, Spahn S, Lullmann-Rauch R, Fendel C, Klugbauer N, Griesbeck O, Haas A, Mann M, Bracher F, Teupser D, Saftig P, Biel M and Wahl-Schott C. 2014. High susceptibility to fatty liver disease in two-pore channel 2-deficient mice. Nat Commun. 5: 4699.

30. Guse AH and Lee HC. 2008. NAADP: a universal Ca2+ trigger. Sci Signal. 1.

31. Gustavsson M, Verardi R, Mullen DG, Mote KR, Traaseth NJ, Gopinath T and Veglia G. 2013. Allosteric regulation of SERCA by phosphorylation-mediated conformational shift of phospholamban. Proc Natl Acad Sci U S A. 110: 17338-17343.

32. Hardie RC. 2011. A brief history of trp: commentary and personal perspective. Pflugers Arch. 461: 493-498.

33. Hassan GS, Jacques D, D'Orleans-Juste P, Magder S and Bkaily G. 2018. Physical contact between human vascular endothelial and smooth muscle cells modulates cytosolic and nuclear calcium homeostasis. Can J Physiol Pharmacol. 96: 655-661.

34. Hays W. 1994. Statistics.

35. Hill SJ. 1990. Distribution, properties, and functional characteristics of three classes of histamine receptor. Pharmacol Rev. 42: 45-83.

36. Holmes CL, Landry DW and Granton JT. 2003. Science review: Vasopressin and the cardiovascular system part 1--receptor physiology. Crit Care. 7: 427-434.

37. Holwerda DA. 1972. A glycopeptide from the posterior lobe of pig pituitaries. I. Isolation and characterization. Eur J Biochem. 28: 334-339.

38. Huang Y, Fliegert R, Guse AH, Lu W and Du J. 2020. A structural overview of the ion channels of the TRPM family. Cell Calcium. 85: 102111.

39. Ishibashi K, Suzuki M and Imai M. 2000. Molecular cloning of a novel form (two-repeat) protein related to voltage-gated sodium and calcium channels. Biochem Biophys Res Commun. 270: 370-376.

40. Jammes F, Hu HC, Villiers F, Bouten R and Kwak JM. 2011. Calcium-permeable channels in plant cells. FEBS J. 278: 4262-4276.

41. Jha A, Ahuja M, Patel S, Brailoiu E and Muallem S. 2014. Convergent regulation of the lysosomal two-pore channel-2 by Mg(2)(+), NAADP, PI(3,5)P(2) and multiple protein kinases. EMBO J. 33: 501-511.

42. Jiang X, Rowitch DH, Soriano P, McMahon AP and Sucov HM. 2000. Fate of the mammalian cardiac neural crest. Development. 127: 1607-1616.

43. Jiang YL, Lin AH, Xia Y, Lee S, Paudel O, Sun H, Yang XR, Ran P and Sham JS. 2013. Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate (NAADP) activates global and heterogeneous local Ca2+ signals from NAADP- and ryanodine receptor-gated Ca2+ stores in pulmonary arterial myocytes. J Biol Chem. 288: 10381-10394.

44. Jin N, Lang MJ and Weisman LS. 2016. Phosphatidylinositol 3,5-bisphosphate: regulation of cellular events in space and time. Biochem Soc Trans. 44: 177-184.

45. Johnson JL. 2014. Emerging regulators of vascular smooth muscle cell function in the development and progression of atherosclerosis. Cardiovasc Res. 103: 452-460.

46. Karaki H and Weiss GB. 1988. Calcium release in smooth muscle. Life Sci. 42: 111-122.

47. Karlstedt K, Jin C and Panula P. 2013. Expression of histamine receptor genes Hrh3 and Hrh4 in rat brain endothelial cells. Br J Pharmacol. 170: 58-66.

48. Khananshvili D. 2014. Sodium-calcium exchangers (NCX): molecular hallmarks underlying the tissue-specific and systemic functions. Pflugers Arch. 466: 4360.

49. Kintzer AF and Stroud RM. 2016. Structure, inhibition and regulation of two-pore channel TPC1 from Arabidopsis thaliana. Nature. 531: 258-262.

50. Kushnir A, Wajsberg B and Marks AR. 2018. Ryanodine receptor dysfunction in human disorders. Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1865: 1687-1697.

51. Lagostena L, Festa M, Pusch M and Carpaneto A. 2017. The human two-pore channel 1 is modulated by cytosolic and luminal calcium. Sci Rep. 7.

52. Lee HC and Aarhus R. 1995. A derivative of NADP mobilizes calcium stores insensitive to inositol trisphosphate and cyclic ADP-ribose. J Biol Chem. 270: 2152-2157.

53. Livak KJ and Schmittgen TD. 2001. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25: 402408.

54. Lloyd-Evans E, Waller-Evans H, Peterneva K and Platt FM. 2010. Endolysosomal calcium regulation and disease. Biochem Soc Trans. 38: 1458-1464.

55. Lu Y, Hao B, Graeff R and Yue J. 2013. NAADP/TPC2/Ca(2+) Signaling Inhibits Autophagy. Commun Integr Biol. 6.

56. Maciag T, Cerundolo J, Ilsley S, Kelley PR and Forand R. 1979. An endothelial cell growth factor from bovine hypothalamus: identification and partial characterization. Proc Natl Acad Sci U S A. 76: 5674-5678.

57. Majesky MW. 2007. Developmental basis of vascular smooth muscle diversity. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27: 1248-1258.

58. Marchant JS and Patel S. 2015. Two-pore channels at the intersection of endolysosomal membrane traffic. Biochem Soc Trans. 43: 434-441.

59. McCorvy JD and Roth BL. 2015. Structure and function of serotonin G proteincoupled receptors. Pharmacol Ther. 150: 129-142.

60. Mehta PK and Griendling KK. 2007. Angiotensin II cell signaling: physiological and pathological effects in the cardiovascular system. Am J Physiol Cell Physiol. 292: 82-97.

61. Montell C. 2005. The TRP superfamily of cation channels. Sci STKE. 2005.

62. Moreau A, Gosselin-Badaroudine P and Chahine M. 2014. Biophysics, pathophysiology, and pharmacology of ion channel gating pores. Front Pharmacol. 5: 53.

63. Naylor E, Arredouani A, Vasudevan SR, Lewis AM, Parkesh R, Mizote A, Rosen D, Thomas JM, Izumi M, Ganesan A, Galione A and Churchill GC. 2009. Identification of a chemical probe for NAADP by virtual screening. Nat Chem Biol. 5: 220-226.

64. Newby AC and Zaltsman AB. 2000. Molecular mechanisms in intimal hyperplasia. J Pathol. 190: 300-309.

65. Patel S. 2015. Function and dysfunction of two-pore channels. Sci Signal. 8.

66. Peiter E, Maathuis FJ, Mills LN, Knight H, Pelloux J, Hetherington AM and Sanders D. 2005. The vacuolar Ca2+-activated channel TPC1 regulates germination and stomatal movement. Nature. 434: 404-408.

67. Penny CJ, Kilpatrick BS, Eden ER and Patel S. 2015. Coupling acidic organelles with the ER through Ca(2)(+) microdomains at membrane contact sites. Cell Calcium. 58: 387-396.

68. Pereira GJ, Antonioli M, Hirata H, Ureshino RP, Nascimento AR, Bincoletto C, Vescovo T, Piacentini M, Fimia GM and Smaili SS. 2017. Glutamate induces autophagy via the two-pore channels in neural cells. Oncotarget. 8: 1273-1274.

69. Periasamy M and Kalyanasundaram A. 2007. SERCA pump isoforms: their role in calcium transport and disease. Muscle Nerve. 35: 430-442.

70. Phair RD and Hai CM. 1986. Resolution of intracellular calcium metabolism in intact segments of rabbit aorta. Circ Res. 59: 74-84.

71. Popugaeva E and Bezprozvanny I. 2013. Role of endoplasmic reticulum Ca2+ signaling in the pathogenesis of Alzheimer disease. Front Mol Neurosci. 6: 29.

72. Porrello ER, Delbridge LM and Thomas WG. 2009. The angiotensin II type 2 (AT2) receptor: an enigmatic seven transmembrane receptor. Front Biosci (Landmark Ed). 14: 958-972.

73. Rameshrad M, Babaei H, Azarmi Y and Fouladi DF. 2016. Rat aorta as a pharmacological tool for in vitro and in vivo studies. Life Sci. 145: 190-204.

74. Ranjbar-Slamloo Y and Fazlali Z. 2019. Dopamine and Noradrenaline in the Brain; Overlapping or Dissociate Functions? Front Mol Neurosci. 12: 334.

75. Ross AC. 2011. The 2011 report on dietary reference intakes for calcium and vitamin D. Public Health Nutr. 14: 938-939.

76. Ruas M, Galione A and Parrington J. 2015. Two-Pore Channels: Lessons from Mutant Mouse Models. Messenger (Los Angel). 4: 4-22.

77. Salmon M, Gomez D, Greene E, Shankman L and Owens GK. 2012. Cooperative binding of KLF4, pELK-1, and HDAC2 to a G/C repressor element in the SM22alpha promoter mediates transcriptional silencing during SMC phenotypic switching in vivo. Circ Res. 111: 685-696.

78. Samanta A, Hughes TET and Moiseenkova-Bell VY. 2018. Transient Receptor Potential (TRP) Channels. Subcell Biochem. 87: 141-165.

79. Selli C and Tosun M. 2016. Effects of cyclopiazonic acid and dexamethasone on serotonin-induced calcium responses in vascular smooth muscle cells. J Physiol Biochem. 72: 245-253.

80. Simons FE and Simons KJ. 2011. Histamine and H1-antihistamines: celebrating a century of progress. J Allergy Clin Immunol. 128: 1139-1150.

81. Smit MJ, Timmerman H, Alewijnse AE, Punin M, van den Nieuwenhof I, Blauw J, van Minnen J and Leurs R. 1995. Visualization of agonist-induced internalization of histamine H2 receptors. Biochem Biophys Res Commun. 214: 11381145.

82. Smith JB. 1996. Calcium homeostasis in smooth muscle cells. New Horiz. 4:

2-18.

83. Spalding EP and Harper JF. 2011. The ins and outs of cellular Ca(2+) transport. Curr Opin Plant Biol. 14: 715-720.

84. Stafford N, Wilson C, Oceandy D, Neyses L and Cartwright EJ. 2017. The Plasma Membrane Calcium ATPases and Their Role as Major New Players in Human Disease. Physiol Rev. 97: 1089-1125.

85. Taylor AM and Bordoni B. 2022. Histology, Blood Vascular System. StatPearls. Treasure Island (FL).

86. Taylor CW, Tovey SC, Rossi AM, Lopez Sanjurjo CI, Prole DL and Rahman T. 2014. Structural organization of signalling to and from IP3 receptors. Biochem Soc Trans. 42: 63-70.

87. Tsoukias NM. 2011. Calcium dynamics and signaling in vascular regulation: computational models. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 3: 93-106.

88. Tugba Durlu-Kandilci N, Ruas M, Chuang KT, Brading A, Parrington J and Galione A. 2010. TPC2 proteins mediate nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate (NAADP)- and agonist-evoked contractions of smooth muscle. J Biol Chem. 285: 2492524932.

89. Vargas E, Bezanilla F and Roux B. 2011. In search of a consensus model of the resting state of a voltage-sensing domain. Neuron. 72: 713-720.

90. Waldo KL, Hutson MR, Ward CC, Zdanowicz M, Stadt HA, Kumiski D, Abu-Issa R and Kirby ML. 2005. Secondary heart field contributes myocardium and smooth muscle to the arterial pole of the developing heart. Dev Biol. 281: 78-90.

91. Wang G, Jacquet L, Karamariti E and Xu Q. 2015. Origin and differentiation of vascular smooth muscle cells. J Physiol. 593: 3013-3030.

92. Wang X, Zhang X, Dong XP, Samie M, Li X, Cheng X, Goschka A, Shen D, Zhou Y, Harlow J, Zhu MX, Clapham DE, Ren D and Xu H. 2012. TPC proteins are phosphoinositide- activated sodium-selective ion channels in endosomes and lysosomes. Cell. 151: 372-383.

93. Wasteson P, Johansson BR, Jukkola T, Breuer S, Akyurek LM, Partanen J and Lindahl P. 2008. Developmental origin of smooth muscle cells in the descending aorta in mice. Development. 135: 1823-1832.

94. Williams JK and Heistad DD. 1996. Structure and function of vasa vasorum. Trends Cardiovasc Med. 6: 53-57.

95. Wynne BM, Chiao CW and Webb RC. 2009. Vascular Smooth Muscle Cell Signaling Mechanisms for Contraction to Angiotensin II and Endothelin-1. J Am Soc Hypertens. 3: 84-95.

96. Yu FH and Catterall WA. 2004. The VGL-chanome: a protein superfamily specialized for electrical signaling and ionic homeostasis. Sci STKE. 2004: re15.

97. Zhang AY and Li PL. 2006. Vascular physiology of a Ca2+ mobilizing second messenger - cyclic ADP-ribose. J Cell Mol Med. 10: 407-422.

98. Zharkich IL, Nadeev AD, Tsitrin EB, Goncharov NV and Avdonin PV. 2016. Suppression of Histamine-Induced Relaxation of Rat Aorta and Calcium Signaling in Endothelial Cells by Two-Pore Channel Blocker trans-NED19 and Hydrogen Peroxide. Izv Akad Nauk Ser Biol. 430-438.

99. Zhu MX, Ma J, Parrington J, Calcraft PJ, Galione A and Evans AM. 2010. Calcium signaling via two-pore channels: local or global, that is the question. Am J Physiol Cell Physiol. 298: 430-441.

100. Zong X, Schieder M, Cuny H, Fenske S, Gruner C, Rotzer K, Griesbeck O, Harz H, Biel M and Wahl-Schott C. 2009. The two-pore channel TPCN2 mediates NAADP-dependent Ca(2+)-release from lysosomal stores. Pflugers Arch. 458: 891-899.

101. Луста К. А. ОАН. 2015. Роль гладкомышечных клеток сосудистой стенки в атерогенезе. Клиническая и экспериментальная морфология. № 2(14): 50-62.