Роль биологических ритмов в реализации токсических эффектов химических веществ у млекопитающих в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.14, кандидат биологических наук Мелешин, Марат Игоревич

• Мелешин, Марат Игоревич
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мелешин, Марат Игоревич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. БИОРИТМЫ КАК ОСНОВА ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ЖИВЫХ ОРГАНИЗМОВ (состояние вопроса).

1.1. Адаптивное значение биологических ритмов.

1.2. Научно-методические проблемы оценки риска биоресурсам (млекопитающим) с позиций биоритмологии.

1.3. Теоретико-методологические проблемы изучения растительных ресурсов с целью поиска новых фитоадаптогенов.

Выводы.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Планирование эксперимента с позиций временной организации биосистем.

2.2. Приготовление экстрактов.

2.3. Экспериментальная модель токсического гепатита.

2.4. Оптимизированные методики определения биохимических показателей печени на фоне острых патологий.

2.4.1. Алании- и аспартаттрансаминазы.

2.4.2. Холестерин.

2.4.3 Прямой и общий билирубин.

2.5. Стандартные методики биохимического контроля.

2.5.1. Методика анализа активности щелочной фосфатазы.

2.5.2. Определение концентрации общего гемоглобина в крови.

2.5.3. Определение гидроперекисей по Гаврилову.

2.5.4. Определение малонового диальдегида в эритроцитах.

2.5.5. Методика анализа активности супероксиддисмутазы.

2.5.6. Методика анализа активности каталазы.

2.5.7. Методика анализа активности церулоплазмина.

2.5.8. Определение метгемоглобина.

2.6. Гистологические исследования.

Глава 3. БИОЛОГИЧЕСКИЕ РИТМЫ - ОСНОВА МЕТОДОЛОГИИ ОЦЕНКИ РИСКА БИОРЕСУРСАМ ОТ АНТРОПОГЕННЫХ ЗАГРЯЗНИТЕЛЕЙ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ.

3.1.1 Годовая динамика гепатотоксичности тетрахлорметана у крыс в эксперименте: биохимический аспект.

3.1.2 Годовая динамика гепатотоксичности тетрахлорметана у крыс в эксперименте: гистологический аспект.

3.2. Модель оксидативного стресса у животных (циклофосфамид, метотрексат, 5-фторурацил — СМР): комплексные исследования биологического действия.

3.3. Сезонные колебания гематотоксичности соединений СМБ.

Выводы.

Глава 4. ХРОНОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ПОДХОД В МЕТОДИКАХ ИСПЫТАНИЙ НОВЫХ ГЕПАТОПРОТЕКТОРОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ.

4.1. Изменения гепатозащитных свойств экстракта плодов расторопши пятнистой («Карсила») в течение года.

4.2. Опыт изучения новых гепатопротекторов, выделенных из флоры

Центрального Кавказа.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль биологических ритмов в реализации токсических эффектов химических веществ у млекопитающих в эксперименте»

Актуальность исследования. В условиях масштабного антропогенного загрязнения окружающей среды проблема сохранения биологических ресурсов приобретает первостепенную значимость. В настоящее время активно пересматривается государственная природоохранная политика: в ее основу закладывается концепция экологического риска. Базис новой методологии оценки экотоксикантов должны составить принципы, учитывающие биоритмологический профиль живых существ, поскольку процессы, протекающие в организме, в разные временные периоды могут быть как на подъеме, так и на спаде. Это обстоятельство определяет чувствительность (резистентность) биосистем к стрессору в зависимости от суммарной составляющей ритмических процессов, протекающих на всех уровнях организации живой материи.

С другой стороны, при решении теоретических и прикладных проблем поиска, изучения и рационального использования новых растительных и животных ресурсов также необходимо учитывать биоритмологические феномены. Использование существующих стандартных технологий и методик не всегда позволяет корректно оценить свойства изучаемого объекта. Применение животных (в частности, лабораторных) при изучении биологической активности тестируемых соединений, выделенных из растительных или животных источников, без учета воздействия циркадианных, сезонных, годовых и др. биоритмов может дать весьма искаженные результаты.

Актуальность настоящей работы определяется недостаточной изученностью воздействия сезонных биоритмов на изменения токсичности химических веществ у млекопитающих, необходимостью научного обоснования практических рекомендаций и решений, направленных на снижение экологического риска.

Цель работы заключается в изучении влияния сезонных биоритмов на функциональную активность печени и кроветворной системы у крыс и как следствие — обусловленные ими изменения токсичности ряда химических веществ.

Идея работы состоит в разработке научных основ оценки и прогнозирования биотоксичности химических веществ (загрязнителей окружающей среды) у млекопитающих с учетом хронобиологического подхода, расширении географии использования новых растительных ресурсов флоры Центрального Кавказа.

Задачи исследования:

1. Изучить годовую динамику гепатотоксичности тетрахлорметана у крыс в эксперименте.

2. Создать модель оксидативного стресса у животных, адекватно воспроизводящую механизм действия химических экотоксикантов.

3. Выявить вариабельность гемотоксичности химических веществ (циклофосфамид, натриевая соль 4-дезокси-4-амино-М-10-метилфолиевой кислоты (метотрексат), 5-фторурацил) у крыс в условиях смены сезонов.

4. Изучить гепатозащитное действие экстракта плодов расторопши пятнистой (Silybum marianum L., «Карсила») в различное время года.

5. С учетом биоритмологического профиля лабораторных животных (крыс линии Wis tar) изучить гепатопротекторные свойства некоторых представителей флоры Центрального Кавказа.

На защиту выносятся:

- результаты изучения изменений гепатотоксичности тетрахлорметана у крыс в течение года с периодами в 2-3 недели; созданная на основе ряда фармакологических препаратов (циклофосфан, метотрексат, 5-фторурацил) модель, отражающая комплексное воздействие химических веществ на организм млекопитающих в аспекте цитогенетических, биохимических и гематологических изменений;

- данные об изменении гемотоксичности ряда химических веществ (CMF) в различные сезоны года; результаты изменения (обращения) гепатозащитных свойств экстракта плодов расторопши пятнистой («Карсила») в модели экспериментального токсического гепатита в различное время года;

- результаты испытаний новых (нефармакопейных) видов флоры Центрального Кавказа (манжетка шелковая (Alchemilla sericata R.), василек Фишера {Centaurea fischeri S.), клевер золотистый (Trifolium aureum Р.), обладающих гепатозащитными свойствами.

Методы исследования включают цитогенетический и биохимический анализ (автоматический биохимический анализатор ChemWell, США), гистологические исследования, гематологические исследования (автоматический гематологический анализатор Erma, Япония), спектрофотометрию (PC UV-спектрофотометр Shimadzu, Япония), математический анализ (программный пакет Excel).

Объектами исследования служили половозрелые крысы линии Wistar (410 самцов и 100 самок), растения, собранные в условиях высокогорья РСО-А: манжетка шелковая, василек Фишера, клевер золотистый.

Научная новизна: изучена вариабельность гепатотоксического действия тетрахлорметана у крыс в течение года, оцениваемая биохимически (в плазме: аланин- и аспартаттрансаминазы, прямой и общий билирубин, холестерин, щелочная фосфатаза) и морфологически (окраска азур-эозином);

- с помощью ряда доступных веществ (циклофосфан, метотрексат, 5-фторурацил) создана модель, адекватно имитирующая изменения в организме млекопитающих, обусловленные химическими загрязнителями окружающей среды; при этом у крыс в комплексе изучены следующие параметры: система «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» (ПОЛ-АОЗ), цитогенетические эффекты, функциональное состояние печени, гематологические показатели;

- выявлены различия в цитостатических эффектах препаратов CMF, оцениваемых количественными и качественными изменениями в популяциях клеток крови, в условиях смены сезонов года;

- показана возможность обращения гепатозащитного действия экстракта плодов расторопши пятнистой («Карсила») в модели СС14-индуциторванного гепатита в различное время года; экспериментально доказана перспективность использования экстрактов на основе манжетки шелковой {А1скетШа яег1сШа И.), выделенной из флоры Центрального Кавказа, в качестве гепатозащитного средства.

Научное значение работы состоит в создании теоретико-методологической базы для оценки риска биологическим ресурсам (млекопитающим) от химических загрязнителей окружающей среды с позиций хронобиологии. Экспериментально доказано, что в течение года токсичность одного и того же вещества, взятого в одной и той же концентрации, может значительно варьировать - в пределах одного порядка. Выявленная закономерность носит общий характер: изменения в функциональной активности печени животных могут приводить к резкому ослаблению (обращению) гепатозащитных свойств БАВ, выделенных из растительных источников. Данное обстоятельство должно явиться базисом современных методов изучения новых растительных ресурсов.

Практическая значимость:

1. Полученные в ходе экспериментальных исследований результаты о значительной вариабельности токсичности химических агентов под воздействием сезонных биоритмов лягут в основу концепции оценки и прогнозирования негативного воздействия на организм млекопитающих антропогенных загрязнителей и продуктов их химических трансформаций.

2. Внедрение в практику Центральной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (СОГМА, г. Владикавказ) разработанных методик оценки функционального состояния печени (АлТ, АсТ, прямой и общий билирубин) в условиях ССЦ- индуцированного токсического гепатита позволило реализовать скрининговые исследования по поиску новых гепатопротекторов, выделенных из флоры Центрального Кавказа.

3. Выявленные закономерности об изменении гемато- и гепатотропности веществ в течение года у лабораторных животных (крыс) найдут отражение в методических рекомендациях по изучению и поиску новых БАВ, выделенных из растительных источников.

4. Сравнительный анализ гепатопротекторной активности извлечений из манжетки шелковой, василька Фишера и клевера золотистого в модели СС14-индуцированного токсического гепатита у крыс показал высокую биологическую активность манжетки шелковой (А1скетШа яепсШа Я.), что является научно обоснованной рекомендацией для дальнейших исследований этого вида с целью создания нового гепатозащитного средства.

Обоснованность и достоверность научных положений, выводов и рекомендаций подтверждается высокой сходимостью экспериментальных данных, полученных различными (независимыми) методами анализа; результатами лабораторных исследований и испытаний, обработанными с применением методов математической статистики и теории ошибок.

Апробация работы. Основные положения и результаты докладывались на II, III Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы экологии и сохранения биоразнообразия», Владикавказ 2008, 2009 г.; X Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке», Москва, 2009 г.; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики», Владикавказ, 2009 г.

Внедрение результатов исследования. В практику Центральной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО СОГМА внедрены оптимизированные методики определения аланин- и аспартаттрансаминаз, прямого и общего билирубина в плазме животных с модельным токсическим гепатитом.

Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 6 печатных работ, отражающих основные результаты. В их числе 2 в журнале, рекомендованном ВАК, одна в материалах международной конференции, остальные - во всероссийских.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав, заключения, списка литературы, включающего 128 источников, в том числе 69 на иностранных языках, и приложения. Основное содержание изложено на 120 страницах машинописного текста, иллюстрированного 10 таблицами и 16 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Биологические ресурсы», Мелешин, Марат Игоревич

ВЫВОДЫ ОБЩИЕ

В диссертации на базе теоретических и экспериментальных работ с использованием биохимического, гематологического, цитогенетического, гистологического анализов, экотоксикологических исследований, построенных на принципах хронобиологии, физико-химических методов анализа растительного сырья, предложены перспективные решения актуальной проблемы защиты ресурсов биосферы. Основные научные выводы и практические результаты работы заключаются в следующем.

1. В модели СС14-индуцированного токсического гепатита у крыс показано, что гепатотропность химических соединений в течение года может резко варьировать: в пределах одного порядка, что закладывает теоретико-методологические принципы оценки экологического риска с позиций хронобиологии.

2. Установлено, что наибольшая гепатотоксичность тетрахлорметана, выявляемая биохимически, проявляется в весенне-летний период года (март-август) с острым максимумом, приходящимся на июнь.

3. Показано, что применение ряда фармакологических препаратов: циклофосфана, метотрексата и 5-фторурацила ведет к формированию патологических состояний, схожих по картине с действием широкого класса экотоксикантов, что явилось удобной моделью изучения цитогенетических, биохимических и гематологических изменений в организме экспериментальных животных во взаимосвязи.

4. Изучены особенности воздействия сезонных биоритмов на проявления гематотоксичности модельных препаратов (циклофосфан, метотрексат, 5-фторурацил). Депрессивный эффект проявился сезонными флуктуациями качественных и количественных характеристик в системах лейкона и эритрона.

5. Жесткий биоритмологический каркас в виде эстральных циклов делает обоснованным использование рандомизированных групп самок крыс линии Wistar при изучении (поиске) новых гепатопротекторов в моделях токсического гепатита, предполагающих введение токсина в течение не менее 4-5 дней.

5. Высокое содержание биологически активных веществ - флавоноидов в манжетке шелковой (Alchemilla sericata R.), васильке Фишера (Centaurea fischeri S.), клевере золотистом (Trifolium aureum Р.) - 2,51; 2,13, и 0,31% (соответственно) доказывает целесообразность широкого изучения состава и свойств флоры Центрального Кавказа.

7. Показано, что среди изученных видов наибольшей гепатопротекторной активностью (сопоставимой с оффицинальным видом -расторопшей пятнистой (Silybum marianum L.)) обладает манжетка шелковая.

8. Экспериментально доказана возможность изменения (вплоть до обращения) гепатопротекторнного действия экстракта плодов расторопши пятнистой в модели токсического гепатита, вызванного введением тетрахлорметана, в различное время года.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема охраны ресурсов биосферы может быть решена лишь с использованием интегрального подхода, объединяющего различные научные дисциплины, включая, прежде всего, экологию, генетику, биохимию, токсикологию и новое научное направление - хронобиологию. Необходимость использования комплексного подхода в решении отдельных задач охраны биоресурсов диктуется с одной стороны непрерывным ростом (как в качественном, так и в количественном аспекте) различных химических поллютантов, между которыми возможны синергетические эффекты, а с другой - сложной организацией самих биообъектов, в том числе, используемых в качестве модельных для изучения и прогнозирования негативных эффектов ксенобиотиков. Таким малоизученным аспектом, в частности, является временная организация биосистем, пронизывающая все уровни живой материи: от субклеточного (молекулярного) до популяционного и биосферного.

В работе отражены три направления, имеющих существенное научно-практическое значение в решении проблем охраны и изучения свойств биоресурсов.

Первое направление посвящено изучению роли сезонных биологических ритмов в реализации токсического эффекта модельного гепатотоксина - тетрахлорметана. Экспериментально доказано, что токсический эффект (при неизменной дозировке) является функцией от времени. В весенне-летний период гепатотоксичность тетрахлорметана резко возрастает. Пик максимальных повреждающих эффектов, оцениваемых биохимически и морфологически, приходится на июнь. Это обстоятельство определяет необходимость введения в методологию токсикологических исследований, являющихся основой для разработки нормативных природоохранных актов, новых хронобиологических принципов. Тетрахлорметан, используемый в качестве модели, имитирующей воздействие на живые организмы полихлорированных углеводородов, представляющих серьезную экологическую опасность, широко используется также в работах по изучению (поиску) новых гепатопротекторов, преимущественно на растительной основе. В этом ключе знания об особенностях механизмов гепатотропности тетрахлорметана являются важным условием корректной оценки свойств растительных объектов.

Второе направление в работе посвящено комплексной оценке на организм ряда доступных фармакологических препаратов СМР (циклофосфамид, натриевая соль 4-дезокси-4-амино-1чГ-10-метилфолиевой кислоты (метотрексат), 5-фторурацил), обладающих депрессивным эффектом в отношении системы гемопоэза, что явилось удобной моделью для оценки гематотропных ксенобиотиков. В исследованиях показано, что гематотоксический эффект регистрируется на фоне широкого спектра патологических изменений, затрагивающих различные системы организма. Прежде всего, это дисбаланс в ферментных системах, в частности, антиоксидантной защиты, что приводит к активации перекисно-направленных процессов. Наряду с этим фиксируются мутационные события в клетках организма. Высокая степень отмеченных кластогенных эффектов от препаратов может объясняться вкладом свободнорадикального мутагенеза. Отмеченные негативные изменения затрагивают также и функциональную активность важнейшего детоксикационного органа -печени.

Предложенная модель (циклофосфамид, натриевая соль 4-дезокси-4-амино-Ы-Ю-метилфолиевой кислоты (метотрексат), 5-фторурацил) использована для изучения роли биологических ритмов в реализации гематотоксических эффектов химических веществ. Доказана универсальность сезонных биоритмов: токсические эффекты в значительной степени оказываются подверженными модифицирующему действию длиннопериодичных ритмов, что должно войти в практические рекомендации по оценке гематотропных загрязнителей окружающей среды.

Третье направление — изучение состава и свойств растительных ресурсов Республики Северная Осетия - Алания. Теоретическим базисом к поиску биологически активных веществ флоры Центрального Кавказа явилось то обстоятельство, что изучаемые виды (манжетка шелковая (Alchemilla sericata R.), василек Фишера (Centaurea fischeri S.), клевер золотистый (Trifolium aureum Р.)) содержат в своем составе большое количество флавоноидов. Указанные вещества обладают не только выраженными антиоксидантными, антимутагенными свойствами, но также являются весьма эффективными гепатозащитными средствами, что широко используется в современной медицине. Применение хронобиологического подхода позволило не только рекомендовать к широкому использованию в практике по экспериментальному изучению (поиску) новых гепатопротекторных средств самок лабораторных крыс с обоснованием методических особенностей эксперимента, но и помогло корректно выявить наиболее перспективный вид — манжетку шелковую, внедрение которой в практику явится существенным вкладом в расширение географии растительных биоресурсов Северной Осетии.

Таким образом, использование комплексного междисциплинарного подхода позволило обосновать ряд прогрессивных теоретико-методологических рекомендаций и решений, направленных на сохранение качества биоресурсов и изучение их состава и свойств. К числу важнейших выводов следует отнести факт о существенном модифицирующем действии сезонных биоритмов в реализации токсических эффектов химических веществ, представляющих наибольший риск устойчивому развитию биосферы. Данное направление подлежит дальнейшему углубленному изучению и анализу.

107

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мелешин, Марат Игоревич, 2010 год

1. Кремянский, В.И. Структурные уровни живой материи: теоретические и методологические проблемы / В.И. Кремянский. -М. : Наука, 1969. -295 с.

2. Хетагурова, Л.Г. Хронопатофизиология доклинических нарушений здоровья / Л.Г. Хетагурова, К.Д. Салбиев. Владикавказ : Проект-пресс, 2000. - 176 с.

3. Халберг, Ф. Временная координация физиологических функций / Ф. Халберг // Биологические часы. М. : Мир, 1964. - С. 475-509.

4. Алякринский, Б.С. Адаптация в аспекте биоритмологии / Б.С. Алякринский // Проблемы временной организации живых систем. М. : Наука, 1979. - С. 9-36.

5. Алякринский, Б.С. По закону ритма / Б.С. Алякринский, С.И. Степанова. -М. : Наука, 1985. 176 с.

6. Шульман, Г.Е. Физиолого-биохимические особенности годовых циклов рыб / Г.Е. Шульман. -М. : Пищевая промышленность, 1972. -369 с.

7. Ашофф, Ю. Биологические ритмы. В 2 т. Т. 1. / Ю. Ашофф. М. : Мир, 1984.-414 с.

8. Арушанян, Э.Б. Хронофармакология / Э.Б. Арушанян. Ставрополь : СГМА, 2000. - 422 с.

9. Агаджанян, H.A. Хронофизиология, хронофармакология и хрономедицина / H.A. Агаджанян, В.И. Петров, И.В. Радыш. М.Волгоград : МосГМУ, 2005. - 336 с.

10. Романов, Ю.А. Проблемы хронобиологии / Ю.А. Романов. М. : Знание, 1989.-64 с.

11. Комаров, Ф.И. Хронобиология и хрономедицина / Ф.И. Комаров. М. : Медицина, 1989. - 400 с.

12. Хильдебранд, Г. Хронобиология и хрономедицина / Г. Хильдебранд, М. Мозер, М. Лехофер. М. : Арнебия, 2006. - 144 с.

13. Комаров, Ф.И. Хронобиология и хрономедицина / Ф.И. Комаров. М. : Медицина, 1989.-400 с.

14. Бродский, В.Я. Ритм синтеза белка и возможность его модификации в клетках / В.Я. Бродский // Тез. всесоюзн. симп. «Биологические ритмы в механизмах компенсации нарушенных функций». М., 1973. - С. 47-49.

15. Klaassen, Curtis D. Casarett and Doull's Toxicology The Basic Science of Poisons (7th Edition) / Curtis D, Klaassen. - New York : McGraw-Hill Companies, 2008. - 1309 p.

16. Risk Management Handbook / Edit, by R. Carroll. San Francisco : Jossey-Bass, 2000. - 940 p.

17. Risk Management Handbook for Health Care Organization / Edit, by R.L. Carroll. San Francisco : Jossey-Bass, 2009. - 642 p.

18. Frank, C. Lu. Lu's Basic Toxicogy: Fundamentals, target organs and risk assessment / C. Lu Frank, K. Sam. London, New-York: Informa Healthcare, 2002. 394 p.

19. Корбакова А.И. Методы исследования функций нервной системы / А.И. Корбакова, И.П. Уланова // Методы определения токсичности и опасности химических веществ: сб. ст. М. : Медицина, 1970. - С. 142-166.

20. Evans, G.O. Animal Clinical Chemistry. A Primer for Toxicologist / G.O. Evans. New York : Taylor & Francis Group, 2005. - 224 p.

21. Evans, G.O. Animal Hematotoxicology. A Practical Guide for toxicologists And Biomedical Researchers / G. O. Evans. New York : Taylor & Francis Group, 2005. - 206 p.

22. Shayne, C.G. Animal Models in Toxicology / C. G. Shayne. New York : Taylor & Francis Group, 2007. - 934 p.

23. Ming-Ho, Yu. Environmental Toxicology. Biological and Health Effects of Pollutants / Yu. Ming-Ho. New York : CRC Press, 2005. - 339 p.

24. Елизарова, O.H. Пособие по токсикологии для лаборантов / O.H. Елизарова, JI.B. Жидкова, Т.А. Кочеткова. — М. : Медицина, 1974. -169 с.

25. In Silico Technologies in Drug Target Identification and Validation / Edit, by Andrew Carmen. Taylor and Francis Group, LLC, 2006. - 482 p.

26. In Silico: 3D Animation and Simulation of Cell Biology with Maya and MEL / Edit, by J. Sharpe et all. Morgan Kaufman Publishers. 2008. - 625 P

27. Target Discovery and Validation Reviews and Protocols: Emerging Strategies for Targets and Biomarker Discovery / Edit, by Mouldy Sioud. V. 1. Humana Press Inc., 2007. 346 p.

28. Target Discovery and Validation Reviews and Protocols: Emerging Molecular Targets and Treatment Options / Edit, by Mouldy Sioud. V. 2. Humana Press Inc., 2007.

29. Tumor Models in Cancer Research (Cancer Drug Discovery and Development) / Edit, by Beverly A. Teicher. Humana Press, 2001. - 7081. P

30. Langdon, S.P. Cancer Cell Culture: Methods and Protocols (Methods in Molecular Medicine) / S.P. Langdon. Totowa : Humana Press, 2004. -368 p.

31. Camacho, J.P.M. В Chromosomes In The Eukaryote Genome (Cytogenetic & Genome Research) / J.P.M. Camacho. Switzerland : S. Karger AG, 2004. - 269 p.

32. Obe, G. Chromosome Aberrations / G. Obe, A. T. Natarajan. Switzerland : S. Karger AG, 2004. - 394 p.

33. High Content Screening / Edit, by D. Lansing Taylor et all. Humana Press Inc., 2007. 444 p.

34. Quantitative Structure Activity Relationships of Analgesics, Narcotic Antagonists, and Hallucinogens / Edit, by Gene Barnett et al.. NIDA Research Monograph. - 1978. - № 22. - 487 p.

35. Burns, E. R. Biological Time and In Vivo Research: A Field Guide to Piffals / E. R. Burns // The Anatomical Record (New Anat.). 2000. - V. 261.-P. 141-152.

36. Gareth, T. Medical Chemistry / T. Gareth. Chichester : Wiley&Sons, 2007. - 622 p.

37. Камышников, B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: справочник в 2 т. Т. 1 / В. С. Камышников. Минск : Интепрессервис, 2003. - 495 с.

38. Громова, Г.К. О некоторых недостатках унифицированного метода определения активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови / Г.К. Громова // Экспериментальная патология печени Рига : Зинатне, 1985.-С. 79-83.

39. Гаврилов, В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.И. Мешкорудная // Лаб. дело. 1983. - № 3. - С. 33-36.

40. Сирота, Т.В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы / Т.В.Сирота // Вопросы медицинской химии. -1999.-№31.-С. 3-14.

41. Beutler, Е. Red cell metabolism. A manual of biohemical methods / E. Beutler. Orlando : Grune and Stratton, 1984. - 188 p.

42. Zimmerman, H.J. Hepatotoxicity / HJ. Zimmerman. Philadelphia : Lippincott Williams&Wilkins, 1999. - 789 p.

43. Liver Immunology: principles and practice / Edit, by M. E. Gershwin, J.M. Vierling, M. Manns. Humana Press, 2007. - 488 p.

44. Watkins, P.B. Role of Cytochromes P450 in Drug Metabolism and Hepatotoxicity / P.B. Watkins // Seminars in Liver Disease. 1990. - V. 10. - №4. - P. 235-250.

45. Куценко, С. А. Основы токсикологии / С. А. Куценко. СПб. : ВМедА, 2002. - 569 с.

46. Гичев, Ю.П. Печень: адаптация, экология / Ю.П. Гичев. Новосибирск : Наука, 1993.- 152 с.

47. Колеснеченко, JI.C. Глутатионтрансферазы / JLC. Колеснеченко, В.И. Кулинский // Успехи современной биологии. 2000. - Т. 107. - № 2. -С. 179-194.

48. Deleve, L.D. Importance and Regulation of Hepatic Glutathione / L.D. Deleve, N. Kaplowitz // Seminars in Liver Desease. 1990. - V. 10. - № 4. -P. 251-266.

49. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М. : Медицина, 1972. -252 с.

50. Блюгер, А.Ф. Вирусный гепатит и его исходы / А.Ф. Блюгер. Рига : Зинатне, 1970.-545 с.

51. Шерлок, Ш. Заболевания печени и желчных путей / Ш. Шерлок, Дж. Дули. М. : Гэотар, 1999. - 864 с.

52. Smith, М.Т. The Role of Peroxidation in the Toxicity of Foreign Compounds to Liver Cells / M.T. Smith, H. Thor, S. Orrenius. // Biochemical Pharmacology. 1983. - V. 32. - №5. - P. 763-764.

53. Гепатоцит: функционально-метаболические свойства / П.В. Гулак и др.. М. : Наука, 1985. - 272 с.

54. Williams, А.Т. Carbon Tetrachloride Hepatotoxicity: An Example of Free Radical-Mediated Injury / A.T. Williams et al. // Seminars in Liver Diseases. 1990. - V. 10. - №4. - P. 279-283.

55. Костюк, B.A. Роль ковалентного связывания и перекисного окисления липидов в повреждении печени четыреххлористым углеродом / В.А. Костюк//Биохимия.-1991.-Т. 56.Ю.-С. 1878-1885.

56. Ming-Ho, Yu. Environmental Toxicology. Biological and Health Effects of Pollutants / Yu. Ming-Ho. New York : CRC Press, 2005. - 339 p.

57. Health effects of transport-related air pollution / M. Krzyzanovsky et al. -WHO, 2005.- 192 p.

58. Hodgson, E. A Textbook of Modern Toxicology / E. Hodgson. Hoboken, New Jersey : John Wiley & Sons, 2004. - 559 p.

59. Younes, M. Effect of Iron Overload of Spontaneous and Xenobiotic-induced Lipid Peroxidation in vivo / M. Younes, I. Eberhard, R. Lemoine // Journal of Applied Toxicology. 1989. - V. 9. - №2. - P. 103-108.

60. Блюгер, А.Ф. Моделирование патологических процессов в печени / А.Ф. Блюгер, О. Я. Карташева // Экспериментальная патология печени Рига : Зинатне, 1983. - С. 7-16.

61. Tsukamoto, Н. Experimental Models of Hepatic Fibrosis: A Review / H. Tsukamoto, M. Matsuoka, S.W. French // Seminars in Liver Desease. -1990.-V. 10. —№1. -P. 56-65.

62. Weber, L.W.D. Hepatotoxicity and Mechanism of Action of Haloalkanes: Carbon Tetrachloride as a Toxicological Model / L.W.D. Weber, M. Boll, A. Stampf// Critical Reviews in Toxicology. 2003. - V. 33. - №2. - P. 105-136.

63. Hepatotoxicity from Genomics to in vitro and in vivo Models / Edit, by S.C. Sahu. John Wiley & Sons, 2008. - 684 p.

64. Geerts, A.M. Comparison of three research models of portal hypertension in mice: macroscopic, histological, and portal pressure evaluation / A.M. Geerts et al. // International Journal of Experimental Pathology. 2008. -V. 89.-P. 251-263.

65. Preventive effect of neutropenia on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in rats / Y. Ohta et al.. // Journal of Applied Toxicology. -2006.-V. 26.-P. 178-186.

66. Seawright A.A., Steele D.P., Menrath R.E. Seasonal Variations in Hepatic Microsomal Oxidative Metabolism in vitro and Susceptibility to Carbon Tetrachloride in a Flock Sheep // Australian Veterinary Journal. 1972. V. 48.-P. 488-494.

67. Хабриев, Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р.У. Хабриев. М. : Медицина, 2005. - 832 с.

68. Reichling, J.J. Clinical Use of Serum Enzymes in Liver Disease / J.J. Reichling, M.M. Kaplan // Digestive Diseases and Sciences. 1988. - V. 33.-№ 12. - P. 1601-1614.

69. Ленинджер, А. Основы биохимии в 2 т. Т. 2. / А. Ленинджер. М. : Мир, 1985.-368 с.

70. Справочник по лабораторным методам исследования / Под ред. Л.А. Даниловой. СПб. : Питер, 2003. - 736 с.

71. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods / Edit, by R.A. McPherson, M.R. Pincus. Philadelphia: W.B. Saunders, 2007. -1472 p.

72. Evans, G.O. Animal Clinical Chemistry. A Primer for Toxicologist / G.O. Evans. New York : Taylor & Francis Group, 2005. - 224 p.

73. Камышников, B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: справочник в 2 т. Т. 1 / В. С. Камышников. Минск : Интепрессервис, 2003. - 495 с.

74. The Laboratory Rat / Edit, by M.A. Suckow et all. Academic Press, 2005. -912 p.

75. Shayne, C.G. Animal Models in Toxicology / C. G. Shayne. New York : Taylor & Francis Group, 2007. - 934 p.

76. The Laboratory Rat / Edit, by P.E. Sharp et all. CRC Press, 1998. - 206 p.

77. Zimmerman, T.J. Quantitative studies on fatty acid metabolism in isolated parenchymal cells from normal and cirrhotic livers in rats / T.J. Zimmerman et al. // Journal of Hepatology. 1992. - V. 15. - P. 10-16.

78. The Liver in Biology and Desease / Edit, by E.E. Bittar. V. 15. - Elsevier, 2004. - 609 p.

79. Caspary, W.F. Therapy von Leben- und Gallekrankheiten / W.F. Caspary, U. Leuschner, L.S. Zeuzem. Berlin : Springer Verlage, 2001. - 533 p.

80. Лопухин, Ю.М. Холестериноз / Ю.М. Лопухин, А.И. Арчаков, Ю.А. Владимиров, Э.М. Коган. -М. : Медицина, 1983. -352 с.

81. Oritz de Montellano, P.R. Cytochrome P450: Structure, Mechanism and Biochemistry / P.R. Oritz de Montellano. New York : Springer, 2005. -689 p.

82. Ioannides, C. Cytochromes P450: Role in the Metabolism and Toxicity of Drugs and other Xenobiotics / C. Ioannides. New York - Moskow : RCS Publishing, 2008. - 523 p.

83. Zbuzek, V.K. Seasonal variations in vasopressin secretion in rats / V.K. Zbuzek, W. Wu // Experientia. 1979. - №35. - P. 1523-1524.

84. Wolf, G.W. Annual Differences in Daily Variations in Hepatic Drug Metabolizing Enzyme Activity and Plasma Hormone Levels in the Rat / G.W. Wolf, R.C. Schnell // Pharmacology. 1979. - V. 19. - P. 116-120.

85. Скакун, Н.П. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе заболеваний печени / Н.П. Скакун // Врачебное дело. 1987. - № 10. -С. 86-91.

86. Скакун, Н.П. Сезонные особенности экскреторной функции печени при тетрациклиновых поражениях и коррекция нарушенийантиоксидантами / Н.П. Скакун, И.Т. Цилюрик, JI.A. Волкова, А.Т. Кудин // Антибиотики. 1983. - Т.28. - № 10. - С. 757-760.

87. Circaannual changes in antioxidants and oxidative stress in the heart and liver in rats / A. Bello-Klein et. al.. // Comparative Biochemistry and Physiology. 2000. - Part C. - №126. - P. 203-208.

88. Surekha, B. Seasonal Variations in Markers of Stress and Oxidative Stress in Rats / B. Surekha et al. // Indian Journal of Clinical Biochemistry. -2008.-V. 23.-№2.-P. 191-194.

89. Колесова, O.E. Перекисное окисление и методы определения продуктов липоперексидации в биологических средах / О.Е. Колесова, А.А. Маркин, Т.Н. Нефедова // Лабораторное дело. 1984. - №4. -540-546.

90. Reactive Oxygen Species in Biological Systems: An Interdisciplinary Approach / Edit, by Daniel L. Gilbert, Carol A. Colton. -New York Moscow : Academic Publishers, 2002. - 709 p.

91. Fridovich, I. Superoxide Anion Radical (02- ), Superoxide Dismutases, and Related Matters /1. Fridovich // The Journal of Biological Chemistry. -1997. V. 272. - № 30. - P. 18515-18517.

92. Plant Stress Tolerance: Methods and Protocols / Edit, by Ramanjulu Sunkarer. Humana Press, 2010.-365 p.

93. Minotti, G. The Role of Iron in Oxygen Radical Mediated Lipid Peroxidation / G. Minotti, S.D. Aust // Chemico-Biological Interactions. -1989.-V. 71.-P. 1-19.

94. Рогожин, B.B. Пероксидаза как компонент антиоксидантной системы живых организмов / В.В. Рогожин. СПб. : Гиорд, 2004. - 240 с.

95. Fruhwirth, G.O. Oxidized phospholipids: From molecular properties to disease / G.O. Fruhwirth, A. Loidl, A. Hermetter // Biochimica et Biophysica Acta. 2007. - V. 1772. - P. 718-736.

96. Арнхольд, Ю. Свойства, функции и секреция миелопероксидазы человека / Ю. Арнхольд // Биохимия. 2004. - Т. 69. - № 1. - С. 8-15.

97. Rio, D.D. A review of recent studies on malondialdehyde as toxic molecule and biological marker of oxidative stress / D.D. Rio, A J. Stewart, N. Pellegrini // Nutrition, Metabolism & Cardiovascular Diseases. 2005. - V. 15.-№4. -P. 316-328.

98. Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ. Гигиенические критерии состояния окружающей среды 51. Женева : ВОЗ ООН, 1989. - 212 с.

99. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте / И.П. Западнюк и др.. Киев : Вища школа, 1984. -383 с.

100. Владимиров Ю.А. Физико-химические основы патологии клетки. Курс лекций. / Ю.А. Владимиров. М: МГУ, 2007. - 100 с.

101. Lukyanenko, L.M. Activity of membrane-bound NADH-methemoglobin reductase and physical state of lipids in erythrocyte membranes / L.M KozlovaN.M., Slobozhanina E.I. // Bioelectrochemistry. 2004. - № 62. -P. 191- 193.

102. Бароненко, В. А. Эритроцит-мишень для стресса / В.А. Бароненко // Наука в СССР. 1988. - Т. 30. - № 1. - С. 95-97.

103. Шиффман, Ф. Дж. Патофизиология крови / Ф. Дж. Шиффман. М. : Бином, 2007. - 448 с.

104. Зюсс, Р. Рак: эксперименты и гипотезы / Р. Зюс, В. Кинцель, Дж. Д. Скрибнер. М. : Мир, 1977. - 360 с.

105. Fearon, E.R. A genetic model for colorectal tumorigenesis / E. R. Fearon, B. Vogelstein // Cell. 1990. - V. 61. - № 5. - P. 759-767

106. Lopez-Lazaro, M. A new view of carcinogenesis and an alternative approach to cancer therapy / M. Lopez-Lazaro // Molecular Medicine. -2010.-V. 16.-№3-4.-P. 144-53.

107. Атлас клеток крови и костного мозга / Под ред. Г.И. Козинца. М. : Триада-Х, 1998. - 168 с.

108. Marnett, L.J. Lipid peroxidation-DNA damage by malondialdehyde / L.J. Marnett // Mutation Research. 1999. - V. 424. - P. 83-95

109. Ревич, Б.А. Окружающая среда и здоровье населения / Б.А. Ревич, C.JI. Авалиани, Г.И. Тихонова. -М. : ЦЭПР, 2003. 149 с.

110. Evans, G.O. Animal hematotoxicology: a practical guide for toxicologist and biomedical researchers. CRC Press/Taylor & Francis, 2008. - 208 p.

111. Стожаров, A.H. Медицинская экология / A.H. Стожаров. Минск : Высшая школа, 2007. - 368 с.

112. Экологический мониторинг: шаг за шагом / Е.В. Веницианов и др.. -М. : РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2003. 252 с.

113. Klein, G. Farewell to the Internal Clock / G. Klein. Sprimger Science, 2007.- 118 p.

114. Заславская, P.M. Хронодиагностика и хронотерапия заболеваний сердечно-сосудистой системы / P.M. Заславская М. : Медицина, 1991.-320 с.

115. Комаров, Ф. И. Хронобиология и хрономедицина / Ф.И. Комаров, А. П. Раппопорт. М. : Триада-Х, 2000. - 488 с.

116. Заславская, P.M. Легочные синдромы и проблемы терапии / P.M. Заславская, Г.В. Векленко, С.А. Сейимагомбетова. М. : Медпрактика, 2007.-207 с.

117. Арушанян, Э.Б. Уникальный мелатонин / Э.Б. Арушанян. Ставрополь : СГМА, 2007. - 398 с.

118. Хронопатология / Л.Г. Хетагурова и др.. М. : Наука, 2004. - 355 с.

119. Nelson, R.J. Seasonal patterns of stress, immune function, and disease / R.J. Nelson, G.E. Demas, S.L. Klein, L.J. Kriegsfeld. New York : Cambridge University Press, 2002. - 293 p.

120. Комжа, А. Л. Природная флора. Сосудистые растения / А.Л. Комжа // Владикавказ : Проект-Пресс, 2000. Т. 18. - С. 109-187.

121. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hydrangeaceae-Haloragaceae. -Ленинград, 1987. 326 с.

122. Pradhan, S.C. Hepatoprotective herbal drug, silymarin from experimental pharmacology to clinical medicine / S.C. Pradhan, C. Girish // The Indian journal of medical research. 2006. -V. 124. -№ 5. - P. 491-504.

123. Effects of Quercetin on Liver Damage in Rats with Carbon Tetrachloride-Induced Cirrhosis / A. Pavanato et al. // Digestive Diseases and Sciences.- 2003. V. 48. - № 4. - P. 824-829.

124. Sheweita, S.A. Carbon tetrachloride-induced changes in the activity of phase II drug-metabolizing enzyme in the liver of male rats: role of antioxidants / S.A. Sheweita, M. A bd El-Gabar, M. Bastawy // Toxicology.- 2001. -№165. P. 217-224.

125. Антиоксидантная и гепатопротекторная активность комбинаций лохеина и эплира / А.С. Саратиков и др.. // Хим.-фарм. журн. 2001.- № 6. С. 48-50.а) Акт внедрения