“Роль альфа-синуклеина в формировании популяций дофаминергических нейронов ядер среднего мозга, дифференциально поражаемых при болезни Паркинсона” (экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Тарасова Татьяна Владимировна

• Тарасова Татьяна Владимировна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Тарасова Татьяна Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Болезнь Паркинсона, общая информация

1.1.1 История изучения БП

1.2 Альфа-синуклеин

1.2.1 Альфа-синуклеин в дофаминовой нейротрансмиссии

1.2.2 Альфа-синуклеинопатии

1.2.3 Болезнь Паркинсона - форма альфа-синуклеинопатии

1.2.4 Деменция с рассеянными тельцами Леви

1.2.5 Мультисистемная атрофия

1.2.6 Болезнь Галевронда-Шпатца

1.3 Моделирование альфа-синуклеинопатий в генетически модифицированных животных

1.4 Формирование популяций дофаминергических нейронов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Экспериментальные животные

2.2 Генотипирование животных

2.2.1 Конвенционная полимеразная цепная реакция

2.2.2 Электрофорез ДНК в агарозном геле

2.2.3 ПЦР в реальном времени

2.2.4 Анализ уровня экспрессии РНК

2.2.5 Анализ белков. Приготовление образцов для анализа тотального белка

2.2.6 Денатурирующим гель-электрофорез

2.2.7 Иммуноблоттинг

2.2.8 Антитела.

66

2.3 Исследование пролиферативной активности

2.3.1 Введение 5-бром-2'-дезоксиуридина

2.3.2 Идентификация BrdU-положительных клеток

2.4 Приготовление гистологических препаратов

2.4.1 Фиксация эмбрионов мыши

2.4.2 Фиксация тканей мозга мышей раннего постнатального возраста

2.4.3 Фиксация тканей мозга взрослых мышей

2.5 Имммуногистохимическое окрашивание

2.6 Морфометрический анализ дофаминергических нейронов в ядрах среднего мозга

2.7 Статистическая обработка данных

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Морфометрический анализ дофаминергических нейронов у мышей с конститутивной инактивацией гена альфа-синуклеина

3.1.1 Анализ развивающихся дофаминергических нейронов Чёрной субстанции (ЧС) и Вентральной области покрышки (ВОП) в эмбриогенезе

3.1.2 Анализ дофаминергических нейронов чурной субстанции и вентральной области покрышки в раннем постнатальном периоде

3.2 Разработка линии мышей для регулируемого тканеспецифичного нокаута гена альфа-синуклеина

3.2.1 Характеристика исходной линии [SNCAflox/flox _neoFRT/+]

3.2.1.1 Анализ уровня альфа-синуклеина в тканях мышей линии

[SNCAflox/flox _neoFRT/+]

3.2.1.2 Удаление гена neo из генома [SNCAflox/flox _neoFRT/+ ] мышей с помощью FRT рекомбинации

3.2.1.3 Новый генетический нокаут. Конститутивное удаление

второго экзона гена альфа-синуклеина из генома

8ЫСАПох псо/Пох пео мышей с помощью Сге-рекомбинации

3.3 Анализ формирования популяций дофаминергических нейронов у мышей новой линии зТчГСАППох/-йох

3.3.1 Морфометрический анализ дофаминергических нейронов у 8Ж:АППох/ППох мышей в эмбриогенезе

3.3.2 Морфометрический анализ дофаминергических нейронов у БЫСА |1ох/ |1ох мышей в раннем постнатальном развитии

3.3.3 Морфометрический анализ дофаминергических нейронов у взрослых 8Ж:АШох/=Пох мышей

3.4 Анализ уровня экспрессии гена мультимерина-1, располагающегося в промоторной области альфа-синуклеина106

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БА - болезнь Альцгеймера БП - болезнь Паркинсона ДА - дофаминергические нейроны кД - килоДальтон

НДЗ - нейродегенеративные заболевания п. н. - пары нуклеотидов ПААГ - полиакриламидный гель ПЦР - полимеразная цепная реакция

ДСН (SDS) (англ. sodium dodecyl sulfate) - додецил сульфат натрия МФТП - 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин ТГ (TH) - тирозингидроксилаза BrdU - 5-бром-2'-дезоксиуридин

CSP-a (англ. cysteine-string protein alpha) - цистеиновая последовательность протеина альфа

GAPDH (англ. glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) -глицеральдегидфосфатдегидрогеназа KO (англ. knock out) - нокаут Mmrn-1 - мультимерин-1

SNARE (англ. soluble NSF attachment protein receptor proteins) -растворимый белковый рецептор WT (англ. wild type) - дикий тип

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «“Роль альфа-синуклеина в формировании популяций дофаминергических нейронов ядер среднего мозга, дифференциально поражаемых при болезни Паркинсона” (экспериментальное исследование)»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Болезнь Паркинсона (БП) - второе по распространенности после болезни Альцгеймера социально значимое нейродегенеративное заболевание, частота встречаемости которого составляет 0,5-1 % среди населения в возрастной группе 60-65 лет и от 2 до 4% в возрастной группе старше 80 лет в популяциях развитых стран. Прогрессирующий нейродегенеративный процесс специфического поражения дофаминергических нейронов нигростриарной системы является причиной тяжелой инвалидизации больных. Эффективных методов ранней диагностики БП не существует, лечение же развитых и терминальных стадий заболевания в основном симптоматическое, поскольку непосредственные механизмы избирательной гибели определенных групп нейронов остаются неизвестными, что затрудняет разработку патогенетической терапии. Поэтому исключительно актуальными представляются исследования молекулярных механизмов патологических процессов, приводящих к развитию болезни.

Основным компонентом патогистологических включений, специфичных для БП - телец Леви, является агрегированный белок альфа-синуклеин. Согласно общепринятой в настоящее время теории нарушение метаболизма и функции этого белка в ДА-нейронах играет важную роль в формировании и прогрессии патологического каскада, заканчивающегося гибелью ДА-нейронов. Изучение роли белка альфа-синуклеина в патогенезе БП может быть существенно оптимизировано применением адекватных животных моделей нарушения его функции, что, в свою очередь, поможет выявить и охарактеризовать потенциальные мишени для выработки стратегии создания

специфических таргетных препаратов, необходимых для патогенетической терапии БП, чем и определяется актуальность данного исследования.

Цель и основные задачи исследования.

Целью данной работы являлось выявление роли альфа-синуклеина в формировании различных популяций ДА-нейронов на примере двух анатомических структур, дифференциально поражающихся при БП.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать эффект альфа-синуклеина на формирование популяций ДА нейронов в ЧС и вентральной области покрышки (ВОП) головного мозга мышей с конститутивной инактивацией гена альфа-синуклеина ддя выявления возможной роли кодируемого им белка в патогенетических механизмах БП.

2. Получить новую независимую модель конститутивного нокаута гена альфа-синуклеина с минимальными модификациями генома.

3. Провести сравнительное морфометрическое исследование популяций ДА нейронов в ЧС и ВОП на двух независимых линиях мышей с конститутивной инактивацией гена альфа-синуклеина.

4. Исследовать уровень экспрессии гена мультимерина-1 (Мшдг-1), регуляторные элементы которого расположены в локусе, затронутом генетической модификацией, использованной для конститутивной инактивации гена альфа-синуклеина.

Научная новизна исследования.

Многолетние исследования патофизиологических аспектов БП показали, что основной анатомической структурой, подвергающейся нейродегенерации при БП, является черная субстанция среднего мозга, в которой у больных отмечается массированная потеря дофаминэргических нейронов, приводящая к патологии всей нигростриарной системы. Изучению же другой анатомической структуры, также содержащей дофаминергические нейроны, однако в меньшей степени подверженной дегенеративному процессу при БП вентральной области покрышки среднего мозга (ВОП), посвящено гораздо меньше работ. В данном исследовании был использован новый подход для выявления роли альфа-синуклеина в процессах дифференциального поражения двух популяций дофаминергических нейронов при БП: использование линий генетически модифицированных мышей с конститутивной инактивацией гена альфа-синуклеина. Результатом такого исследования явились впервые полученные данные о различном участии альфа-синуклеина в процессах эмбрионального формирования популяций дофаминергических нейронов черной субстанции и вентральной области покрышки головного мозга нокаутных мышей. Впервые проведен анализ экспрессии гена мультимерина-1, регуляторные элементы которого оказались затронутыми генетическими модификациями локуса альфа-синуклеина. Поскольку в широко используемой мышиной модели конвенционного нокаута гена альфа-синуклеина уровень мультимерина-1 оказался существенно повышенным, была создана новая линия мышей с минимальными на сегодняшний день модификациями локуса альфа-синуклеина, обеспечивающими конститутивную инактивацию альфа-синуклеина. Использование этой линии позволило получить

оригинальные данные по влиянию альфа-синуклеина на формирование двух популяций дофаминергических нейронов черной субстанции и вентральной области покрышки головного мозга, которые дифференциально поражающихся у больных с БП, что позволило существенно расширить наши знания о роли альфа-синуклеина в патогенезе заболевания.

Tеоретическая и практическая значимость работы.

Подавляющее число работ посвящено исследованию выраженных патологических изменений, характерных для развитых стадий БП. Исследование досимптоматических стадий затруднено крайней ограниченностью адекватных моделей, созданию которых в последнее время придается все большее практическое значение. Значимость данного исследования заключается в получении набора новых данных и, в первую очередь, связанных с функцией и дисфункцией альфа-синуклеина, что стало возможным благодаря использованию комбинации оригинальных животных моделей, воспроизводящих ранние события, обусловленные нарушением метаболизма альфа-синуклеина и ассоциированные с последующими патологическими изменениями в нигростриарной системе. Полученные в рамках данного исследования экспериментальные доказательства роли альфа-синуклеина в формировании популяции дофаминергических нейронов черной субстанции - именно той популяции, которая будет подвергаться выраженным дегенеративным изменениям на поздних стадиях БП, в отличие от практически не затрагиваемых патологическим процессом дофаминергических нейронов вентральной области покрышки, формирование которых практически не зависит от альфа-синуклеина, позволяют рассматривать альфа-синуклеин в качестве

потенциальной мишени для разработки методов ранней патогенетической терапии БП и ее наследственных форм.

Теоретическую значимость работы определяют полученные данные по анализу используемых животных моделей для изучения нарушения функции альфа-синуклеина, которые показали, что результатом генетических модификаций в локусе альфа-синуклеина является не только генетический нокаут этого гена, но и существенные изменения в уровне экспресии другого гена мультимерина-1, регуляторные элементы которого также оказались затронутыми генетической модификацией. Этот факт должен учитываться при интерпретации данных, получаемых лабораториями, использующими соответствующие линии альфа-синуклеин нокаутных мышей. Научно-практический интерес представляет созданная нами новая линия мышей с конститутивным нокаутом альфа-синуклеина, выполненная с минимальными на сегодняшний день модификациями генетического локуса, которые не влияют на уровень экспрессии мультимерина-1. Линия может быть использована для изучения механизма специфического нейродегенеративного процесса в ДА-нейронах при нарушении функции синуклеина, для разработки методов ранней диагностики начальных стадий патологии ДА-нейронов и для выявления потенциальных молекулярных мишеней, на основе которых может быть разработана стратегия создания патогенетической терапии БА и других альфа-синуклеинопатий.

Положения, выносимые на защиту.

1. Показана модулирующая роль альфа-синуклеина в формировании популяций ДА нейронов ЧС у генетически модифицированных мышей.

2. Нарушение функции альфа-синуклеина не влияет на процессы формирования популяции ДА нейронов ВОП - анатомической структуры среднего мозга, в гораздо меньшей степени, чем ЧС, поражаемой при БП.

3. Создана новая линия мышей с конститутивным нокаутом альфа-синуклеина, имеющая минимальные модификации в локусе этого гена, и позволяющая изучать молекулярные механизмы патогенеза БП.

4. Показано, что генетическая инактивация альфа-синуклеина у мышей ведет к статистически значимой потере части популяции ДА нейронов ЧС с последующей компенсацией у взрослых животных.

Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы были представлены на: VII Международной Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых учёных (Москва, Россия, 2012), III Eвропейской конференции по медицинским и биологическим наукам (Вена, Австрия, 2014), II Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины» (Екатеринбург, Россия, 2015), X Юбилейной Международной научно-практической конференции молодых учёных-медиков (Курск, Россия, 2016), Всероссийской конференции молодых учёных, с международным участием «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, Россия, 2016).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 1 1 печатных работ, в том числе 6 статей (из них 4 в списке ВАК) и 5 сообщений в сборниках докладов

11

научных конференций. Личное участие автора состоит в выработке научного плана исследований и выполнении экспериментальных работ, вошедших в совместные публикации. Все основные экспериментальные данные диссертационного исследования получены автором лично.

Структура и объем работы.

Диссертация содержит: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы и библиографический указатель, включающий работы на русском (12) и иностранных языках (163). Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и содержит 1 таблицу и 31 рисунок.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Болезнь Паркинсона, общая информация

Альфа-синуклеопатии - это группа нейродегенеративных заболеваний, характеризующихся аккумуляцией и агрегацией потенциально амилоидогенного белка альфа-синуклеина с формированием характерных патогистологических включений. Работы последних лет показали важную роль этого белка в патогенезе целого ряда нейродегенеративных заболеваниий, особое место среди которых отводится болезни Паркинсона в силу ее социальной значимости.

Болезнь Паркинсона (БП) - распространенное нейродегенеративное заболевание, частота встречаемости которого прямо коррелирует с возрастом. Так, частота встречаемости по данным мировых популяционных исследований составляет от 0,5 до 1 % среди населения в возрасте старше 65 лет (Диагностика и коррекция когнитивных нарушений при болезни Паркинсона и синдромах паркинсонизма тема диссертации и автореферата по ВАК 14.00.13, Чухловин Борис Алексеевич). В возрастной группе старше 65 лет эти показатели выше и составляют 2-4% [Rinne J.O. et al., 2002]; [Schapira A.H., 2003]; [de Lau L.M. et al., 2006]. В подавляющем большинстве случаев диагностируются идиопатические формы БП и лишь 5-10 % являются семейными формами [Lesage S. et al., 2009].

1.1.1 История изучения БП

В истории исследования БП можно выделить несколько четко выраженных этапов, которые качественно развивали наши знания об этиологии и патогенезе этого заболевания. Джеймс Паркинсон первым

описал клинические симптомы БП в 1817 году. Он выделил четыре группы патологических изменений: тремор покоя, брадикинезию, ригидность и постуральную неустойчивость как основные симптоматические признаки данной нозологической формы [ЬееБ Л.Х, 2007]. По мере прогрессирования заболевания к моторной дисфункции часто присоединяются и немоторные нарушения нервной системы, включающие депрессию, тревожное состояние и когнитивную дисфункцию вплоть до деменции [Гусев Е.И. et а1., 2004]; [Яхно Н.Н. et а1., 2006]. Вторым событием, ознаменовавшим новый этап в изучении патогенеза БП, явились работы Фрица Генриха Леви, который в лаборатории Алоиса Альцгеймера проводил гистологические исследования аутопсийного материала больных, умерших от дрожательного паралича [Ооеёей М. е1 а1., 2013]. В третьем томе справочника по неврологии за 1912 год им были опубликованы первые результаты патогистологического анализа головного мозга 25 пациентов с БП, в которых Леви описывал обнаруженные им новые патогистологические структуры. [Ооеёег! М. е1 а1., 2013]. Леви обнаружил специфические внутриклеточные тельца в стволе мозга у больных с БП - большие эозинофильные структуры, состоящие из плотно уложенных белковых филаментов, находящихся в цитоплазме. Позже Леви были модифицированы методики приготовления и анализа гистологических срезов и существенно увеличен размер выборки. В ходе дальнейших исследований им были описаны характерные включения (тельца) в различных анатомических структурах мозга: в клетках двигательных ядер блуждающего нерва, базального ядра Мейнерта, бледного шара, бокового и перивентрикулярного ядер таламуса. Действительно, обнаружение телец Леви было подтверждено современными методами у больных с БП в этих и других структурах,

например, в голубом пятне (locus coeruleus) и дорзальном ядре блуждающего нерва [Wakabayashi K. et al., 1999a] и в коре мозжечка [Ikeda K. et al., 1978] . В 1923 году Леви опубликовал объемную монографию на 673 страницы, посвященную исследованиям дрожательного паралича. Однако и при анализе экспериментального материала, и в сделанных выводах он не придавал принципиально важного значения описанным им включениям и не нашел им соответствующего места в патогенезе дрожательного паралича. И что особенно следует подчеркнуть - Леви практически не исследовал область черной субстанции. Это сделал русский невропатолог Константин Николаевич Третьяков.

Исследования К.Н. Третьякова ознаменовали третий, наиболее значимый этап в изучении патогенеза БП. К.Н. Третьяков вплоть до 1923 года возглавлял лабораторию мозга знаменитой кафедры Шарко на медицинском факультете Сорбонны в Париже, где он изучал патофизиологические аспекты паркинсонального тремора. Однако объектом его исследований был постэнцефалитический паркинсонизм. К.Н. Третьяков изучал препараты мозга больных, погибших от летаргического энцефалита Экономо, эпидемия которого распространилась по Европе в период Первой мировой войны [Lees A.J., 2007; Lees A.J. et al., 2008; Tselis A.C. et al., 2014]. Сравнительный патологоанатомический и патогистологический анализ головного мозга пациентов, имевших в анамнезе болезни симптоматику паркинсонизма, характерную для летаргического энцефалита Экономо, и мозга больных, в анамнезе которых отсутствовал данный диагноз, позволил выявить связь развития симптомов паркинсонизма с дегенеративными процессами в очень ограниченной анатомической зоне - в черной субстанции (substancia nigra) [Юдина В.В. et al., 2009].

К.Н.Третьяков доказал, что именно деструктивные изменения и потеря клеточных элементов исключительно в черной субстанции приводят к ригидности и тремору. Далее он провел патологоанатомическое исследование мозга уже больных с болезнью Паркинсона (БП) и подтвердил у них ожидаемые дегенеративные изменения в черной субстанции. Эти данные хорошо согласовывались с наблюдениями Г. Маринеско, также работавшим в то время на кафедре Шарко. Г.Маринеско установил, что новообразования в черной субстанции могут вызывать паркинсональный тремор [Goedert M. et al., 2013]. Эти данные, указывающие на то, что различные заболевания с характерными общими расстройствами движений, тремором и ригидностью, характеризуются общей анатомической локализацией патологического процесса в черной субстанции, позволили К.Н.Третьякову в 1919 году сформулировать нигерную теорию паркинсонизма, которая обеспечила стремительный прогресс в исследованиях патогенеза БП [Юдина В.В. et al., 2009]. В последующих работах К.Н.Третьяковым был выполнен направленный анализ аутопсийного материала мозга больных с БП, результатом которого явилось выявление в черной субстанции внутриклеточных патогистологических включений, ранее описанных Ф.Г. Леви. К.Н.Третьяков подробно охарактеризовал эти патогистологические включения и предложил называть их тельцами Леви [Braak H. et al., 2006]. Позже, в 1938 году Рольф Хасслер подтвердил выводы К.Н.Третьякова о том, что именно дегенеративный процесс в черной субстанции является причиной паркинсонизма. Он также продемонстрировал фокусное распределение патологии и выявил наиболее выраженную потерю нервных клеток в каудальных и вентролатеральных отделах (pars ventrolateralis) черной субстанции,

существенно развив, таким образом, знания о патогенезе БП [Goedert M. et al., 2013]. Выявление телец Леви в компактной области черной субстанции у пациентов с БП при post mortum анализе является основным патогистологическим признаком данного заболевания и сопровождается выраженной гибелью значительного числа катехоламинергических нейронов, а потеря дофаминергических (ДА) нейронов в черной субстанции у больных с БП может достигать более 85%. При этом в значительной части все еще функционирующих ДА нейронов наблюдаются признаки нейродегенеративного процесса. В телах таких нейронов часто выявляются тельца Леви, а в их отростках - различного рода патологические структуры, такие как, например, Леви нейриты. Поскольку в вентролатеральной части компактного вещества черной субстанции располагаются нейроны, проецирующие отростки в основном в дорзальную скорлупу полосатого тела (стриатума), то именно там и детектируется наиболее выраженный дефицит дофамина у больных с БП. Черная субстанция не является единственной анатомической структурой, поражающейся при БП.

Дегенеративный процесс с гибелью нейрональных клеток был выявлен, как уже отмечалось выше, и в голубом пятне (locus coeruleus), в ядрах шва мозга [Halliday G.M. et al., 1990] и в коре мозжечка [Ikeda K. et al., 1978]. Однако, центральная роль в патогенезе БП все же отводится повреждению нигростриатной системы.

Функциональная недостаточность ДА нейронов черной субстанции, в первую очередь ее компактной области (pars compacta), лежит в основе патофизиологических процессов, результатом которых является клиническая симптоматика моторной дисфункции у больных с БП.

Рисунок 1. Нигростриатная система при БП. Из доклада академика М.В.Угрюмова:

Научная сессия, Отделение нанотехнологий и информационных

технологий РАН «НЕЙРОНАУКИ И НЕЙРОТЕХНОЛОГИИ»

24 апреля 2015 г., Москва. Новые подходы к разработке доклинической диагностики и превентивного лечения нейродегенеративных заболеваний.

Так, например, в классических работах Ehringer and Hornykiewicz был проведен подробный анализ уровней катехоламинов в хвостатом ядре (caudate nucleus) и скорлупе (putamen) головного мозга больных с постэнцефалитной или идиопатической формами БП. В этих исследованиях было выявлено снижение уровня дофамина в этих анатомических областях на 70-95% от нормального его количества [Ehringer H. et al., 1960]. В этой же работе было показано, что уровни катехоламинов, к которым помимо дофамина относятся адреналин и норадреналин, также снижены в исследованных анатомических областях мозга, как у болъных с постэнцефалитной, так и с идиопатической формами БП. Многочисленные биохимические исследования аутопсийного материала мозга больных с БП показали, что нарушение статуса дофамина сопровождается патологическими изменениями в уровнях и других аминов.

Нейроны компактной области черной субстанции и области

хвостатого ядра и скорлупы, обозначаемые также дорзальным

стриатумом, содержат ядра базальных ганглиев и являются частью

нигростриарного пути - главного тракта, контролирующего

произвольные движения [Kandel E.R. et al., 2000]. Преимущественно в

стриатуме располагаются тела ГАМК-ергических нейронов, которые

модулируют активацию движения сразу по двум путям. Прямой путь

представляет движение посредством ингибирования внутреннего

бледного шара. Снижение ингибирующего эффекта приводит к

активации таламо-кортикального пути. Непрямое ингибирование

субталамических ядер, например, наружного бледного шара, приводит к

торможению таламо-кортикального движения [Kandel E.R. et al., 2000].

Таким образом, выброс в синаптическую щель дорзального стриатума

дофамина, синтезированного в области черной субстанции, модулирует

19

активацию прямого и непрямого стриарного путей. Активация дофамином прямого пути происходит через посредство D1 рецепторов, в то время как активация D2 рецепторов ингибирует непрямой возможный для ингибирования движения путь [Kandel E.R. et al., 2000] . Поэтому изучение роли D1 и D2 рецепторов в патогенезе БП является самостоятельным важным направлением в современных биомедицинских исследованиях патофизиологии паркинсонизма.

Долгое время на этих трех основных положениях базировалось представление о патогенезе БП, и все патофизиологические теории формулировались на знании анатомической локализации нейродегенеративного процесса, биохимических свойств нейронов, расположенных в поражаемых структурах, проводящих путей, в которых задействованы эти нейроны, и динамики развития специфической двигательной дисфункции у больных с БП. Однако непосредственная роль телец Леви оставалась необъясненной, хотя их наличие в аутопсийном материале считалось одним из важнейших патогистологических диагностических признаков БП. Не ясным был и механизм формирования телец Леви, хотя в результате многочисленных исследований была подробно описана их морфология, разработаны и оптимизированы методы гистологической окраски, анализировался белковый состав этих патогистологических включений, велись исследования динамики накопления и распределения включений в отделах мозга. Однако все полученные знания не приблизили исследователей к пониманию роли телец Леви в патогенезе БП.

Четвертым этапом в изучении патогенеза БП, выведшим исследования на принципиально новый уровень, явилось выявление в конце прошлого столетия роли белка альфа-синуклеина в механизме формирования телец Леви.

1.2 Альфа-синуклеин

В 1997 году в лаборатории РоНтешро1ш была описана первая мутация в гене альфа-синуклеина, ассоциированная с наследственной формой БП [Polymeropoulos M.H. et б1., 1997]. Авторы объемного молекулярно-генетического исследования показали, что единичная нуклеотидная замена в гене альфа-синуклеина (SNCA) приводит к замене в кодируемом белке аминокислоты аланина на треонин в 53-м положении и это связано с развитием наследственной формы БП, характеризующейся ранним дебютом.

Рисунок 2. Иммуногистохимическое окрашивание телец Леви и

Леви нейритов антителами против альфа-синуклеина в Чёрной

субстанции больного с идиопатической формой БП.

SpillantiniM.G., SchmidtM.L., Lee V.M., Trojanowski .JQ., JakesR., Goedert M. Alpha-synuclein in Lewy bodies

Nature (1997) Aug 28; 388 (6645) : 839-840.

Более того, практически сразу же после этого сообщения было показано, что альфа-синуклеин является одним из основных компонентов телец Леви, причем находится в них в агрегированном состоянии [БрШапйш М.О. е1 а1., 1997]. Проведенный в лаборатории М. О. БрШапйш иммуногистохимический анализ показал, что тельца Леви и нейриты Леви в препаратах, полученных из аутопсийного материала больных не только с наследственными, но и с идеопатическими формами БП, оказались иммунореактивны к альфа-синуклеину (Рисунок 2). Более того, было показано, что и при других НДЗ, характеризующихся присутствием телец Леви в пораженных отделах нервной системы, эти патогистологические структуры окрашивались антителами против альфа-синуклеина, например, при деменции с рассеянными тельцами Леви [БрШапйш М.О. е1 а1., 1998а]; [1еШп§ег К.А., 2003с]. Филаментные включения альфа-синуклеина были обнаружены не только в нейронах в составе телец Леви, но в клетках глии - олигодендроцитах и шванновских клетках при анализе гистологических препаратов материала больных с мультисистемной атрофией ^акаЬауаБЫ К. е1 а1., 1998]; [Ти Р.Н. е1 а1., 1998]; [Рарр М.1. е1 а1., 1989].

Полученные данные открыли возможности для развития нового направления в исследованиях патогенеза БП и поиска новых потенциальных мишеней для разработки методов патогенетической терапии данного заболевания и других нейродегенеративных заболеваний, характеризующихся нарушением метаболизма и функции белка альфа-синуклеина.

Таким образом, два ключевых открытия конца прошлого столетия положили начало новому, четвертому этапу в исследованиях этиологии и патогенеза БП и других нейродегенеративных заболеваний,

объединенных позднее в группу альфа-синуклеинопатий [Skovronsky D.M. et al., 2006], [Alafuzoff I. et al., 2008], [Smith C.U., 2010].

Впервые белок альфа-синуклеин был обнаружен в холинергических пресинаптических терминалях электрического ската Torpedo californica [Maroteaux L. et al., 1988], а затем и у других позвоночных [Goedert M., 1997]. В ДНК человека белок альфа-синуклеин кодирован уникальным SNCA геном, который картирован на четвертой хромосоме (4q21.3-q22) [Spillantini M.G. et al., 1995]; [Touchman J.W. et al., 2001]. Альфа-синуклеин относится к высококонсервативным белкам. Так, например, у грызунов и рыб на аминокислотном уровне гомология с белком человека составляет 95% и 86 % соответственно [Goedert M., 1997]. При этом стоит отметить, что альфа-синуклеин возник в эволюции достаточно поздно и обнаруживается только в геноме позвоночных. Функциональный белок преимущественно нейроспецифический и в центральной нервной системе ассоциирован с пресинаптическими терминалями и их визикулами [Iwai A. et al., 1995; Jakes R. et al., 1994]. Семейство синуклеинов, к которому принадлежит альфа-синуклеин, включает еще два сходных по размеру и по доменной структуре белка: бета- и гамма-синуклен [Нинкина Н.Н. et al., 2000a]. Все три белка имеют достаточно высокую степень гомологии между собой.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тарасова Татьяна Владимировна, 2016 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Consensus statement on the definition of orthostatic hypotension, pure autonomic failure, and multiple system atrophy. The Consensus Committee of the American Autonomic Society and the American Academy of Neurology // Neurology. - 1996. - V. 46. - №2 5. - P. 1470.

2. Aarsland D., Andersen K., Larsen J.P., Lolk A., Kragh-Sorensen P. Prevalence and characteristics of dementia in Parkinson disease: an 8-year prospective study // Arch Neurol. - 2003. - V. 60. - №2 3. - P. 38792.

3. Aarsland D., Zaccai J., Brayne C. A systematic review of prevalence studies of dementia in Parkinson's disease // Mov Disord. - 2005. - V. 20. - № 10. - P. 1255-63.

4. Abeliovich A., Hammond R. Midbrain dopamine neuron differentiation: factors and fates // Dev Biol. - 2007. - V. 304. - № 2. - P. 447-54.

5. Abeliovich A., Schmitz Y., Farinas I., Choi-Lundberg D., Ho W.H., Castillo P.E., Shinsky N., Verdugo J.M., Armanini M., Ryan A., Hynes M., Phillips H., Sulzer D., Rosenthal A. Mice lacking alpha-synuclein display functional deficits in the nigrostriatal dopamine system // Neuron. - 2000. - V. 25. - № 1. - P. 239-52.

6. Abercrombie M. Estimation of nuclear population from microtome sections // Anat Rec. - 1946. - V. 94. - P. 239-47.

7. Abercrombie M., Johnson M.L. The effect of reinnervation on collagen formation in degenerating sciatic nerves of rabbits // J Neurol Neurosurg Psychiatry. - 1947. - V. 10. - № 2. - P. 89-92.

8. Aitken-Rogers H., Singleton C., Lewin A., Taylor-Gee A., Moore G.R., Le Brun N.E. Effect of phosphate on bacterioferritin-catalysed iron(II) oxidation // J Biol Inorg Chem. - 2004. - V. 9. - № 2. - P. 161-70.

9. Al-Wandi A., Ninkina N., Millership S., Williamson S.J., Jones P.A., Buchman V.L. Absence of alpha-synuclein affects dopamine metabolism and synaptic markers in the striatum of aging mice // Neurobiol Aging. - 2010. - V. 31. - № 5. - P. 796-804.

10. Alafuzoff I., Parkkinen L., Al-Sarraj S., Arzberger T., Bell J., Bodi I., Bogdanovic N., Budka H., Ferrer I., Gelpi E., Gentleman S., Giaccone G., Kamphorst W., King A., Korkolopoulou P., Kovacs G.G., Larionov S., Meyronet D., Monoranu C., Morris J., Parchi P., Patsouris E., Roggendorf W., Seilhean D., Streichenberger N., Thal D.R., Kretzschmar H., BrainNet Europe C. Assessment of alpha-synuclein pathology: a study of the BrainNet Europe Consortium // J Neuropathol Exp Neurol. - 2008. - V. 67. - № 2. - P. 125-43.

11. Anwar S., Peters O., Millership S., Ninkina N., Doig N., Connor-Robson N., Threlfell S., Kooner G., Deacon R.M., Bannerman D.M., Bolam J.P., Chandra S.S., Cragg S.J., Wade-Martins R., Buchman V.L. Functional alterations to the nigrostriatal system in mice lacking all three members of the synuclein family // J Neurosci. - 2011. - V. 31. -№ 20. - P. 7264-74.

12. Appel-Cresswell S., Vilarino-Guell C., Encarnacion M., Sherman H., Yu I., Shah B., Weir D., Thompson C., Szu-Tu C., Trinh J., Aasly J.O., Rajput A., Rajput A.H., Jon Stoessl A., Farrer M.J. Alpha-synuclein p.H50Q, a novel pathogenic mutation for Parkinson's disease // Mov Disord. - 2013. - V. 28. - № 6. - P. 811-3.

13. Arima K., Ueda K., Sunohara N., Arakawa K., Hirai S., Nakamura M., Tonozuka-Uehara H., Kawai M. NACP/alpha-synuclein immunoreactivity in fibrillary components of neuronal and oligodendroglial cytoplasmic inclusions in the pontine nuclei in multiple

system atrophy // Acta Neuropathol. - 1998. - V. 96. - № 5. - P. 43944.

14. Bennett M.C. The role of alpha-synuclein in neurodegenerative diseases // Pharmacol Ther. - 2005. - V. 105. - № 3. - P. 311-31.

15. Braak H., Bohl J.R., Muller C.M., Rub U., de Vos R.A., Del Tredici K. Stanley Fahn Lecture 2005: The staging procedure for the inclusion body pathology associated with sporadic Parkinson's disease reconsidered // Mov Disord. - 2006. - V. 21. - № 12. - P. 2042-51.

16. Braak H., Sandmann-Keil D., Gai W., Braak E. Extensive axonal Lewy neurites in Parkinson's disease: a novel pathological feature revealed by alpha-synuclein immunocytochemistry // Neurosci Lett. - 1999. - V. 265. - № 1. - P. 67-9.

17. Buchman V.L., Ninkina N. Modulation of alpha-synuclein expression in transgenic animals for modelling synucleinopathies--is the juice worth the squeeze? // Neurotox Res. - 2008. - V. 14. - № 4. - P. 32941.

18. Burn D.J., Jaros E. Multiple system atrophy: cellular and molecular pathology // Mol Pathol. - 2001. - V. 54. - № 6. - P. 419-26.

19. Burre J., Sharma M., Tsetsenis T., Buchman V., Etherton M.R., Sudhof T.C. Alpha-synuclein promotes SNARE-complex assembly in vivo and in vitro // Science. - 2010. - V. 329. - № 5999. - P. 1663-7.

20. Cabin D.E., Shimazu K., Murphy D., Cole N.B., Gottschalk W., Mcllwain K.L., Orrison B., Chen A., Ellis C.E., Paylor R., Lu B., Nussbaum R.L. Synaptic vesicle depletion correlates with attenuated synaptic responses to prolonged repetitive stimulation in mice lacking alpha-synuclein // J Neurosci. - 2002. - V. 22. - № 20. - P. 8797-807.

21. Chartier-Harlin M.C., Kachergus J., Roumier C., Mouroux V., Douay X., Lincoln S., Levecque C., Larvor L., Andrieux J., Hulihan M.,

Waucquier N., Defebvre L., Amouyel P., Farrer M., Destee A. Alpha-synuclein locus duplication as a cause of familial Parkinson's disease // Lancet. - 2004. - V. 364. - № 9440. - P. 1167-9.

22. Conway K.A., Harper J.D., Lansbury P.T. Accelerated in vitro fibril formation by a mutant alpha-synuclein linked to early-onset Parkinson disease // Nat Med. - 1998. - V. 4. - № 11. - P. 1318-20.

23. Conway K.A., Lee S.J., Rochet J.C., Ding T.T., Harper J.D., Williamson R.E., Lansbury P.T., Jr. Accelerated oligomerization by Parkinson's disease linked alpha-synuclein mutants // Ann N Y Acad Sci. - 2000. -V. 920. - P. 42-5.

24. Crystal H.A., Dickson D.W., Lizardi J.E., Davies P., Wolfson L.I. Antemortem diagnosis of diffuse Lewy body disease // Neurology. -1990. - V. 40. - № 10. - P. 1523-8.

25. Dauer W., Kholodilov N., Vila M., Trillat A.C., Goodchild R., Larsen K.E., Staal R., Tieu K., Schmitz Y., Yuan C.A., Rocha M., JacksonLewis V., Hersch S., Sulzer D., Przedborski S., Burke R., Hen R. Resistance of alpha -synuclein null mice to the parkinsonian neurotoxin MPTP // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2002. - V. 99. - № 22. - P. 145249.

26. de Lau L.M., Breteler M.M. Epidemiology of Parkinson's disease // Lancet Neurol. - 2006. - V. 5. - № 6. - P. 525-35.

27. Dickson D.W., Braak H., Duda J.E., Duyckaerts C., Gasser T., Halliday G.M., Hardy J., Leverenz J.B., Del Tredici K., Wszolek Z.K., Litvan I. Neuropathological assessment of Parkinson's disease: refining the diagnostic criteria // Lancet Neurol. - 2009. - V. 8. - № 12. - P. 11507.

28. Dodel R., Csoti I., Ebersbach G., Fuchs G., Hahne M., Kuhn W., Oechsner M., Jost W., Reichmann H., Schulz J.B. Lewy body dementia

and Parkinson's disease with dementia // J Neurol. - 2008. - V. 255 Suppl 5. - P. 39-47.

29. Doi H., Koyano S., Miyatake S., Matsumoto N., Kameda T., Tomita A., Miyaji Y., Suzuki Y., Sawaishi Y., Kuroiwa Y. Siblings with the adult-onset slowly progressive type of pantothenate kinase-associated neurodegeneration and a novel mutation, Ile346Ser, in PANK2: clinical features and (99m)Tc-ECD brain perfusion SPECT findings // J Neurol Sci. - 2010. - V. 290. - № 1-2. - P. 172-6.

30. Drolet R.E., Behrouz B., Lookingland K.J., Goudreau J.L. Mice lacking alpha-synuclein have an attenuated loss of striatal dopamine following prolonged chronic MPTP administration // Neurotoxicology. - 2004. -V. 25. - № 5. - P. 761-9.

31. Ehringer H., Hornykiewicz O. [Distribution of noradrenaline and dopamine (3-hydroxytyramine) in the human brain and their behavior in diseases of the extrapyramidal system] // Klin Wochenschr. - 1960. -V. 38. - P. 1236-9.

32. El-Agnaf O.M., Jakes R., Curran M.D., Middleton D., Ingenito R., Bianchi E., Pessi A., Neill D., Wallace A. Aggregates from mutant and wild-type alpha-synuclein proteins and NAC peptide induce apoptotic cell death in human neuroblastoma cells by formation of beta-sheet and amyloid-like filaments // FEBS Lett. - 1998. - V. 440. - № 1-2. - P. 715.

33. El-Agnaf O.M., Salem S.A., Paleologou K.E., Curran M.D., Gibson M.J., Court J.A., Schlossmacher M.G., Allsop D. Detection of oligomeric forms of alpha-synuclein protein in human plasma as a potential biomarker for Parkinson's disease // FASEB J. - 2006. - V. 20. - № 3. - P. 419-25.

34. Eliezer D., Kutluay E., Bussell R., Jr., Browne G. Conformational properties of alpha-synuclein in its free and lipid-associated states // J Mol Biol. - 2001. - V. 307. - № 4. - P. 1061-73.

35. Farrer M., Kachergus J., Forno L., Lincoln S., Wang D.S., Hulihan M., Maraganore D., Gwinn-Hardy K., Wszolek Z., Dickson D., Langston J.W. Comparison of kindreds with parkinsonism and alpha-synuclein genomic multiplications // Ann Neurol. - 2004. - V. 55. - №2 2. - P. 1749.

36. Fornai F., Schluter O.M., Lenzi P., Gesi M., Ruffoli R., Ferrucci M., Lazzeri G., Busceti C.L., Pontarelli F., Battaglia G., Pellegrini A., Nicoletti F., Ruggieri S., Paparelli A., Sudhof T.C. Parkinson-like syndrome induced by continuous MPTP infusion: convergent roles of the ubiquitin-proteasome system and alpha-synuclein // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2005. - V. 102. - № 9. - P. 3413-8.

37. Fraklin K.B.J., Paxinos G. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates.Third Edition. / ред. - USA. Academic Press is an imprint of Elsevier, 2007.

38. Fujishiro H., Ferman T.J., Boeve B.F., Smith G.E., Graff-Radford N.R., Uitti R.J., Wszolek Z.K., Knopman D.S., Petersen R.C., Parisi J.E., Dickson D.W. Validation of the neuropathologic criteria of the third consortium for dementia with Lewy bodies for prospectively diagnosed cases // J Neuropathol Exp Neurol. - 2008. - V. 67. - № 7. - P. 649-56.

39. Galvin J.E. Neurodegenerative diseases: pathology and the advantage of single-cell profiling // Neurochem Res. - 2004. - V. 29. - № 6. - P. 1041-51.

40. Galvin J.E., Giasson B., Hurtig H.I., Lee V.M., Trojanowski J.Q. Neurodegeneration with brain iron accumulation, type 1 is characterized

by alpha-, beta-, and gamma-synuclein neuropathology // Am J Pathol. - 2000. - V. 157. - № 2. - P. 361-8.

41. Garcia-Reitboeck P., Anichtchik O., Dalley J.W., Ninkina N., Tofaris G.K., Buchman V.L., Spillantini M.G. Endogenous alpha-synuclein influences the number of dopaminergic neurons in mouse substantia nigra // Exp Neurol. - 2013. - V. 248. - P. 541-5.

42. Gearing M., Lynn M., Mirra S.S. Neurofibrillary pathology in Alzheimer disease with Lewy bodies: two subgroups // Arch Neurol. -1999. - V. 56. - № 2. - P. 203-8.

43. Gilman S., Wenning G.K., Low P.A., Brooks D.J., Mathias C.J., Trojanowski J.Q., Wood N.W., Colosimo C., Durr A., Fowler C.J., Kaufmann H., Klockgether T., Lees A., Poewe W., Quinn N., Revesz T., Robertson D., Sandroni P., Seppi K., Vidailhet M. Second consensus statement on the diagnosis of multiple system atrophy // Neurology. -2008. - V. 71. - № 9. - P. 670-6.

44. Goedert M. Familial Parkinson's disease. The awakening of alpha-synuclein // Nature. - 1997. - V. 388. - № 6639. - P. 232-3.

45. Goedert M. NEURODEGENERATION. Alzheimer's and Parkinson's diseases: The prion concept in relation to assembled Abeta, tau, and alpha-synuclein // Science. - 2015. - V. 349. - № 6248. - P. 1255555.

46. Goedert M., Spillantini M.G., Del Tredici K., Braak H. 100 years of Lewy pathology // Nat Rev Neurol. - 2013. - V. 9. - № 1. - P. 13-24.

47. Goldberg M.S., Lansbury P.T., Jr. Is there a cause-and-effect relationship between alpha-synuclein fibrillization and Parkinson's disease? // Nat Cell Biol. - 2000. - V. 2. - № 7. - P. E115-9.

48. Gomez-Tortosa E., Newell K., Irizarry M.C., Sanders J.L., Hyman B.T. alpha-Synuclein immunoreactivity in dementia with Lewy bodies:

morphological staging and comparison with ubiquitin immunostaining // Acta Neuropathol. - 2000. - V. 99. - № 4. - P. 352-7.

49. Gorbatyuk O.S., Li S., Nash K., Gorbatyuk M., Lewin A.S., Sullivan L.F., Mandel R.J., Chen W., Meyers C., Manfredsson F.P., Muzyczka N. In vivo RNAi-mediated alpha-synuclein silencing induces nigrostriatal degeneration // Mol Ther. - 2010. - V. 18. - №№ 8. - P. 14507.

50. Gregory A., Polster B.J., Hayflick S.J. Clinical and genetic delineation of neurodegeneration with brain iron accumulation // J Med Genet. -2009. - V. 46. - № 2. - P. 73-80.

51. Greten-Harrison B., Polydoro M., Morimoto-Tomita M., Diao L., Williams A.M., Nie E.H., Makani S., Tian N., Castillo P.E., Buchman V.L., Chandra S.S. alphabetagamma-Synuclein triple knockout mice reveal age-dependent neuronal dysfunction // Proc Natl Acad Sci U S A.

- 2010. - V. 107. - № 45. - P. 19573-8.

52. Gupta R., Kumar A., Sharma M.C., Sarkar C., Goyal V., Bihari M. Autopsy always teach and tell: neurodegeneration with brain iron accumulation: a case report // Indian J Pathol Microbiol. - 2007. - V. 50. - № 4. - P. 792-4.

53. Gwinn-Hardy K., Mehta N.D., Farrer M., Maraganore D., Muenter M., Yen S.H., Hardy J., Dickson D.W. Distinctive neuropathology revealed by alpha-synuclein antibodies in hereditary parkinsonism and dementia linked to chromosome 4p // Acta Neuropathol. - 2000. - V. 99. - № 6.

- P. 663-72.

54. Halliday G.M., Li Y.W., Blumbergs P.C., Joh T.H., Cotton R.G., Howe P.R., Blessing W.W., Geffen L.B. Neuropathology of immunohistochemically identified brainstem neurons in Parkinson's disease // Ann Neurol. - 1990. - V. 27. - № 4. - P. 373-85.

55. Hara K., Momose Y., Tokiguchi S., Shimohata M., Terajima K., Onodera O., Kakita A., Yamada M., Takahashi H., Hirasawa M., Mizuno Y., Ogata K., Goto J., Kanazawa I., Nishizawa M., Tsuji S. Multiplex families with multiple system atrophy // Arch Neurol. - 2007. - V. 64. - № 4. - P. 545-51.

56. Hardy J. Neurological diagnoses identify molecular processes // Arch Neurol. - 2010. - V. 67. - № 4. - P. 400-1.

57. Hayward C.P., Bainton D.F., Smith J.W., Horsewood P., Stead R.H., Podor T.J., Warkentin T.E., Kelton J.G. Multimerin is found in the alpha-granules of resting platelets and is synthesized by a megakaryocytic cell line // J Clin Invest. - 1993. - V. 91. - № 6. - P. 2630-9.

58. Ibanez P., Bonnet A.M., Debarges B., Lohmann E., Tison F., Pollak P., Agid Y., Durr A., Brice A. Causal relation between alpha-synuclein gene duplication and familial Parkinson's disease // Lancet. - 2004. - V. 364. - № 9440. - P. 1169-71.

59. Ikeda K., Ikeda S., Yoshimura T., Kato H., Namba M. Idiopathic Parkinsonism with Lewy-type inclusions in cerebral cortex. A case report // Acta Neuropathol. - 1978. - V. 41. - № 2. - P. 165-8.

60. Irwin D.J., Lee V.M., Trojanowski J.Q. Parkinson's disease dementia: convergence of alpha-synuclein, tau and amyloid-beta pathologies // Nat Rev Neurosci. - 2013. - V. 14. - № 9. - P. 626-36.

61. Irwin D.J., White M.T., Toledo J.B., Xie S.X., Robinson J.L., Van Deerlin V., Lee V.M., Leverenz J.B., Montine T.J., Duda J.E., Hurtig H.I., Trojanowski J.Q. Neuropathologic substrates of Parkinson disease dementia // Ann Neurol. - 2012. - V. 72. - № 4. - P. 587-98.

62. Ishizawa T., Mattila P., Davies P., Wang D., Dickson D.W. Colocalization of tau and alpha-synuclein epitopes in Lewy bodies // J Neuropathol Exp Neurol. - 2003. - V. 62. - № 4. - P. 389-97.

63. Iwai A., Masliah E., Yoshimoto M., Ge N., Flanagan L., de Silva H.A., Kittel A., Saitoh T. The precursor protein of non-A beta component of Alzheimer's disease amyloid is a presynaptic protein of the central nervous system // Neuron. - 1995. - V. 14. - № 2. - P. 467-75.

64. Jakes R., Spillantini M.G., Goedert M. Identification of two distinct synucleins from human brain // FEBS Lett. - 1994. - V. 345. - № 1. -P. 27-32.

65. Jeimy S.B., Tasneem S., Cramer E.M., Hayward C.P. Multimerin 1 // Platelets. - 2008. - V. 19. - № 2. - P. 83-95.

66. Jellinger K.A. Alpha-synuclein pathology in Parkinson's and Alzheimer's disease brain: incidence and topographic distribution-- a pilot study // Acta Neuropathol. - 2003a. - V. 106. - №№ 3. - P. 191-201.

67. Jellinger K.A. Formation and development of Lewy pathology: a critical update // J Neurol. - 2009. - V. 256 Suppl 3. - P. 270-9.

68. Jellinger K.A. More frequent Lewy bodies but less frequent Alzheimertype lesions in multiple system atrophy as compared to age-matched control brains // Acta Neuropathol. - 2007. - V. 114. - № 3. - P. 299303.

69. Jellinger K.A. Parkinson disease with old-age onset // Arch Neurol. -2003b. - V. 60. - № 12. - P. 1814-5.

70. Jellinger K.A. Prevalence of vascular lesions in dementia with Lewy bodies. A postmortem study // J Neural Transm (Vienna). - 2003c. - V. 110. - № 7. - P. 771-8.

71. Jensen P.H., Islam K., Kenney J., Nielsen M.S., Power J., Gai W.P. Microtubule-associated protein 1B is a component of cortical Lewy

bodies and binds alpha-synuclein filaments // J Biol Chem. - 2000. - V. 275. - № 28. - P. 21500-7.

72. Kandel E.R., Squire L.R. Neuroscience: breaking down scientific barriers to the study of brain and mind // Science. - 2000. - V. 290. - № 5494. - P. 1113-20.

73. Kaufmann H. Consensus statement on the definition of orthostatic hypotension, pure autonomic failure and multiple system atrophy // Clin Auton Res. - 1996. - V. 6. - № 2. - P. 125-6.

74. Kawahara M., Kuroda Y. Molecular mechanism of neurodegeneration induced by Alzheimer's beta-amyloid protein: channel formation and disruption of calcium homeostasis // Brain Res Bull. - 2000. - V. 53. -№ 4. - P. 389-97.

75. Klivenyi P., Siwek D., Gardian G., Yang L., Starkov A., Cleren C., Ferrante R.J., Kowall N.W., Abeliovich A., Beal M.F. Mice lacking alpha-synuclein are resistant to mitochondrial toxins // Neurobiol Dis. -2006. - V. 21. - № 3. - P. 541-8.

76. Kostka M., Hogen T., Danzer K.M., Levin J., Habeck M., Wirth A., Wagner R., Glabe C.G., Finger S., Heinzelmann U., Garidel P., Duan W., Ross C.A., Kretzschmar H., Giese A. Single particle characterization of iron-induced pore-forming alpha-synuclein oligomers // J Biol Chem. - 2008. - V. 283. - № 16. - P. 10992-1003.

77. Kotzbauer P.T., Trojanowsk J.Q., Lee V.M. Lewy body pathology in Alzheimer's disease // J Mol Neurosci. - 2001. - V. 17. - № 2. - P. 22532.

78. Kruger R., Kuhn W., Muller T., Woitalla D., Graeber M., Kosel S., Przuntek H., Epplen J.T., Schols L., Riess O. Ala30Pro mutation in the gene encoding alpha-synuclein in Parkinson's disease // Nat Genet. -1998. - V. 18. - № 2. - P. 106-8.

79. Lashuel H.A., Hartley D., Petre B.M., Walz T., Lansbury P.T., Jr. Neurodegenerative disease: amyloid pores from pathogenic mutations // Nature. - 2002a. - V. 418. - № 6895. - P. 291.

80. Lashuel H.A., Overk C.R., Oueslati A., Masliah E. The many faces of alpha-synuclein: from structure and toxicity to therapeutic target // Nat Rev Neurosci. - 2013. - V. 14. - № 1. - P. 38-48.

81. Lashuel H.A., Petre B.M., Wall J., Simon M., Nowak R.J., Walz T., Lansbury P.T., Jr. Alpha-synuclein, especially the Parkinson's disease-associated mutants, forms pore-like annular and tubular protofibrils // J Mol Biol. - 2002b. - V. 322. - № 5. - P. 1089-102.

82. Lees A.J. Unresolved issues relating to the shaking palsy on the celebration of James Parkinson's 250th birthday // Mov Disord. - 2007.

- V. 22 Suppl 17. - P. S327-34.

83. Lees A.J., Selikhova M., Andrade L.A., Duyckaerts C. The black stuff and Konstantin Nikolaevich Tretiakoff // Mov Disord. - 2008. - V. 23.

- № 6. - P. 777-83.

84. Lesage S., Anheim M., Letournel F., Bousset L., Honore A., Rozas N., Pieri L., Madiona K., Durr A., Melki R., Verny C., Brice A., French Parkinson's Disease Genetics Study G. G51D alpha-synuclein mutation causes a novel parkinsonian-pyramidal syndrome // Ann Neurol. - 2013.

- V. 73. - № 4. - P. 459-71.

85. Lesage S., Brice A. Parkinson's disease: from monogenic forms to genetic susceptibility factors // Hum Mol Genet. - 2009. - V. 18. - № R1. - P. R48-59.

86. Lin W.L., DeLucia M.W., Dickson D.W. Alpha-synuclein immunoreactivity in neuronal nuclear inclusions and neurites in multiple system atrophy // Neurosci Lett. - 2004. - V. 354. - № 2. - P. 99-102.

87. Lippa C.F., Duda J.E., Grossman M., Hurtig H.I., Aarsland D., Boeve B.F., Brooks D.J., Dickson D.W., Dubois B., Emre M., Fahn S., Farmer J.M., Galasko D., Galvin J.E., Goetz C.G., Growdon J.H., Gwinn-Hardy K.A., Hardy J., Heutink P., Iwatsubo T., Kosaka K., Lee V.M., Leverenz J.B., Masliah E., McKeith I.G., Nussbaum R.L., Olanow C.W., Ravina B.M., Singleton A.B., Tanner C.M., Trojanowski J.Q., Wszolek Z.K., Group D.P.W. DLB and PDD boundary issues: diagnosis, treatment, molecular pathology, and biomarkers // Neurology. - 2007. - V. 68. -№ 11. - P. 812-9.

88. Liu Q.S., Xu Q., Kang J., Nedergaard M. Astrocyte activation of presynaptic metabotropic glutamate receptors modulates hippocampal inhibitory synaptic transmission // Neuron Glia Biol. - 2004. - V. 1. -№ 4. - P. 307-16.

89. Love S. Neuropathological investigation of dementia: a guide for neurologists // J Neurol Neurosurg Psychiatry. - 2005. - V. 76 Suppl 5. - P. v8-14.

90. Lowe R., Pountney D.L., Jensen P.H., Gai W.P., Voelcker N.H. Calcium(II) selectively induces alpha-synuclein annular oligomers via interaction with the C-terminal domain // Protein Sci. - 2004. - V. 13. -№ 12. - P. 3245-52.

91. Luo S.X., Huang E.J. Dopaminergic Neurons and Brain Reward Pathways: From Neurogenesis to Circuit Assembly // Am J Pathol. -2016. - V. 186. - № 3. - P. 478-88.

92. Maroteaux L., Campanelli J.T., Scheller R.H. Synuclein: a neuron-specific protein localized to the nucleus and presynaptic nerve terminal // J Neurosci. - 1988. - V. 8. - № 8. - P. 2804-15.

93. Mash D.C., Ouyang Q., Pablo J., Basile M., Izenwasser S., Lieberman A., Perrin R.J. Cocaine abusers have an overexpression of alpha-

synuclein in dopamine neurons // J Neurosci. - 2003. - V. 23. - № 7. -P. 2564-71.

94. Masliah E., Rockenstein E., Veinbergs I., Mallory M., Hashimoto M., Takeda A., Sagara Y., Sisk A., Mucke L. Dopaminergic loss and inclusion body formation in alpha-synuclein mice: implications for neurodegenerative disorders // Science. - 2000. - V. 287. - № 5456. -P. 1265-9.

95. McKeith I.G., Dickson D.W., Lowe J., Emre M., O'Brien J.T., Feldman H., Cummings J., Duda J.E., Lippa C., Perry E.K., Aarsland D., Arai H., Ballard C.G., Boeve B., Burn D.J., Costa D., Del Ser T., Dubois B., Galasko D., Gauthier S., Goetz C.G., Gomez-Tortosa E., Halliday G., Hansen L.A., Hardy J., Iwatsubo T., Kalaria R.N., Kaufer D., Kenny R.A., Korczyn A., Kosaka K., Lee V.M., Lees A., Litvan I., Londos E., Lopez O.L., Minoshima S., Mizuno Y., Molina J.A., Mukaetova-Ladinska E.B., Pasquier F., Perry R.H., Schulz J.B., Trojanowski J.Q., Yamada M., Consortium on D.L.B. Diagnosis and management of dementia with Lewy bodies: third report of the DLB Consortium // Neurology. - 2005. - V. 65. - № 12. - P. 1863-72.

96. McKeith I.G., Galasko D., Wilcock G.K., Byrne E.J. Lewy body dementia--diagnosis and treatment // Br J Psychiatry. - 1995. - V. 167.

- № 6. - P. 709-17.

97. Miyazaki I., Asanuma M. Dopaminergic neuron-specific oxidative stress caused by dopamine itself // Acta Med Okayama. - 2008. - V. 62.

- № 3. - P. 141-50.

98. Narhi L., Wood S.J., Steavenson S., Jiang Y., Wu G.M., Anafi D., Kaufman S.A., Martin F., Sitney K., Denis P., Louis J.C., Wypych J., Biere A.L., Citron M. Both familial Parkinson's disease mutations

accelerate alpha-synuclein aggregation // J Biol Chem. - 1999. - V. 274.

- № 14. - P. 9843-6.

99. Nemani V.M., Lu W., Berge V., Nakamura K., Onoa B., Lee M.K., Chaudhry F.A., Nicoll R.A., Edwards R.H. Increased expression of alpha-synuclein reduces neurotransmitter release by inhibiting synaptic vesicle reclustering after endocytosis // Neuron. - 2010. - V. 65. - № 1.

- P. 66-79.

100. Ninkina N., Connor-Robson N., Ustyugov A.A., Tarasova T.V., Shelkovnikova T.A., Buchman V.L. A novel resource for studying function and dysfunction of alpha-synuclein: mouse lines for modulation of endogenous Snca gene expression // Sci Rep. - 2015. -V. 5. - P. 16615.

101. Ninkina N., Peters O.M., Connor-Robson N., Lytkina O., Sharfeddin E., Buchman V.L. Contrasting effects of alpha-synuclein and gamma-synuclein on the phenotype of cysteine string protein alpha (CSPalpha) null mutant mice suggest distinct function of these proteins in neuronal synapses // J Biol Chem. - 2012. - V. 287. - № 53. - P. 44471-7.

102. Orimo S., Uchihara T., Nakamura A., Mori F., Kakita A., Wakabayashi K., Takahashi H. Axonal alpha-synuclein aggregates herald centripetal degeneration of cardiac sympathetic nerve in Parkinson's disease // Brain. - 2008. - V. 131. - № Pt 3. - P. 642-50.

103. Overk C.R., Masliah E. Pathogenesis of synaptic degeneration in Alzheimer's disease and Lewy body disease // Biochem Pharmacol. -2014. - V. 88. - № 4. - P. 508-16.

104. Ozawa T., Takano H., Onodera O., Kobayashi H., Ikeuchi T., Koide R., Okuizumi K., Shimohata T., Wakabayashi K., Takahashi H., Tsuji S. No mutation in the entire coding region of the alpha-synuclein gene in

pathologically confirmed cases of multiple system atrophy // Neurosci Lett. - 1999. - V. 270. - № 2. - P. 110-2.

105. Pals P., Lincoln S., Manning J., Heckman M., Skipper L., Hulihan M., Van den Broeck M., De Pooter T., Cras P., Crook J., Van Broeckhoven C., Farrer M.J. alpha-Synuclein promoter confers susceptibility to Parkinson's disease // Ann Neurol. - 2004. - V. 56. - № 4. - P. 591-5.

106. Pankratz N., Wilk J.B., Latourelle J.C., DeStefano A.L., Halter C., Pugh E.W., Doheny K.F., Gusella J.F., Nichols W.C., Foroud T., Myers R.H., Psg P., GenePd Investigators C., Molecular Genetic L. Genomewide association study for susceptibility genes contributing to familial Parkinson disease // Hum Genet. - 2009. - V. 124. - № 6. - P. 593-605.

107. Papp M.I., Kahn J.E., Lantos P.L. Glial cytoplasmic inclusions in the CNS of patients with multiple system atrophy (striatonigral degeneration, olivopontocerebellar atrophy and Shy-Drager syndrome) // J Neurol Sci. - 1989. - V. 94. - № 1-3. - P. 79-100.

108. Pasanen P., Myllykangas L., Siitonen M., Raunio A., Kaakkola S., Lyytinen J., Tienari P.J., Poyhonen M., Paetau A. Novel alpha-synuclein mutation A53E associated with atypical multiple system atrophy and Parkinson's disease-type pathology // Neurobiol Aging. - 2014. - V. 35. - № 9. - P. 2180 e1-5.

109. Perez R.G., Waymire J.C., Lin E., Liu J.J., Guo F., Zigmond M.J. A role for alpha-synuclein in the regulation of dopamine biosynthesis // J Neurosci. - 2002. - V. 22. - № 8. - P. 3090-9.

110. Perrin R.J., Woods W.S., Clayton D.F., George J.M. Interaction of human alpha-Synuclein and Parkinson's disease variants with phospholipids. Structural analysis using site-directed mutagenesis // J Biol Chem. - 2000. - V. 275. - № 44. - P. 34393-8.

111. Pollanen M.S., Bergeron C., Weyer L. Detergent-insoluble cortical Lewy body fibrils share epitopes with neurofilament and tau // J Neurochem. - 1992. - V. 58. - № 5. - P. 1953-6.

112. Polymeropoulos M.H., Lavedan C., Leroy E., Ide S.E., Dehejia A., Dutra A., Pike B., Root H., Rubenstein J., Boyer R., Stenroos E.S., Chandrasekharappa S., Athanassiadou A., Papapetropoulos T., Johnson W.G., Lazzarini A.M., Duvoisin R.C., Di Iorio G., Golbe L.I., Nussbaum R.L. Mutation in the alpha-synuclein gene identified in families with Parkinson's disease // Science. - 1997. - V. 276. - № 5321.

- P. 2045-7.

113. Rideout H.J., Larsen K.E., Sulzer D., Stefanis L. Proteasomal inhibition leads to formation of ubiquitin/alpha-synuclein-immunoreactive inclusions in PC12 cells // J Neurochem. - 2001. - V. 78. - № 4. - P. 899-908.

114. Rinne J.O., Anichtchik O.V., Eriksson K.S., Kaslin J., Tuomisto L., Kalimo H., Roytta M., Panula P. Increased brain histamine levels in Parkinson's disease but not in multiple system atrophy // J Neurochem.

- 2002. - V. 81. - № 5. - P. 954-60.

115. Robertson D.C., Schmidt O., Ninkina N., Jones P.A., Sharkey J., Buchman V.L. Developmental loss and resistance to MPTP toxicity of dopaminergic neurones in substantia nigra pars compacta of gamma-synuclein, alpha-synuclein and double alpha/gamma-synuclein null mutant mice // J Neurochem. - 2004. - V. 89. - № 5. - P. 1126-36.

116. Ross O.A., Vilarino-Guell C., Wszolek Z.K., Farrer M.J., Dickson D.W. Reply to: SNCA variants are associated with increased risk of multiple system atrophy // Ann Neurol. - 2010. - V. 67. - № 3. - P. 414-5.

117. Saito Y., Kawai M., Inoue K., Sasaki R., Arai H., Nanba E., Kuzuhara S., Ihara Y., Kanazawa I., Murayama S. Widespread expression of

alpha-synuclein and tau immunoreactivity in Hallervorden-Spatz syndrome with protracted clinical course // J Neurol Sci. - 2000. - V. 177. - № 1. - P. 48-59.

118. Satake W., Nakabayashi Y., Mizuta I., Hirota Y., Ito C., Kubo M., Kawaguchi T., Tsunoda T., Watanabe M., Takeda A., Tomiyama H., Nakashima K., Hasegawa K., Obata F., Yoshikawa T., Kawakami H., Sakoda S., Yamamoto M., Hattori N., Murata M., Nakamura Y., Toda T. Genome-wide association study identifies common variants at four loci as genetic risk factors for Parkinson's disease // Nat Genet. - 2009. - V. 41. - № 12. - P. 1303-7.

119. Schapira A.H. Disease-modifying strategies and challenges in PD: interactive breakout sessions // Neurology. - 2003. - V. 61. - №2 6 Suppl 3. - P. S56-63.

120. Schluter O.M., Fornai F., Alessandri M.G., Takamori S., Geppert M., Jahn R., Sudhof T.C. Role of alpha-synuclein in 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced parkinsonism in mice // Neuroscience. - 2003. - V. 118. - № 4. - P. 985-1002.

121. Scholz S.W., Houlden H., Schulte C., Sharma M., Li A., Berg D., Melchers A., Paudel R., Gibbs J.R., Simon-Sanchez J., Paisan-Ruiz C., Bras J., Ding J., Chen H., Traynor B.J., Arepalli S., Zonozi R.R., Revesz T., Holton J., Wood N., Lees A., Oertel W., Wullner U., Goldwurm S., Pellecchia M.T., Illig T., Riess O., Fernandez H.H., Rodriguez R.L., Okun M.S., Poewe W., Wenning G.K., Hardy J.A., Singleton A.B., Del Sorbo F., Schneider S., Bhatia K.P., Gasser T. SNCA variants are associated with increased risk for multiple system atrophy // Ann Neurol. - 2009. - V. 65. - № 5. - P. 610-4.

122. Schwenk F., Baron U., Rajewsky K. A cre-transgenic mouse strain for the ubiquitous deletion of loxP-flanked gene segments including

deletion in germ cells // Nucleic Acids Res. - 1995. - V. 23. - № 24. -P. 5080-1.

123. Sharrad D.F., de Vries E., Brookes S.J. Selective expression of alpha-synuclein-immunoreactivity in vesicular acetylcholine transporter-immunoreactive axons in the guinea pig rectum and human colon // J Comp Neurol. - 2013. - V. 521. - № 3. - P. 657-76.

124. Sidhu A., Wersinger C., Moussa C.E., Vernier P. The role of alpha-synuclein in both neuroprotection and neurodegeneration // Ann N Y Acad Sci. - 2004. - V. 1035. - P. 250-70.

125. Sikorska B., Papierz W., Preusser M., Liberski P.P., Budka H. Synucleinopathy with features of both multiple system atrophy and dementia with Lewy bodies // Neuropathol Appl Neurobiol. - 2007. -V. 33. - № 1. - P. 126-9.

126. Simon-Sanchez J., Schulte C., Bras J.M., Sharma M., Gibbs J.R., Berg D., Paisan-Ruiz C., Lichtner P., Scholz S.W., Hernandez D.G., Kruger R., Federoff M., Klein C., Goate A., Perlmutter J., Bonin M., Nalls M.A., Illig T., Gieger C., Houlden H., Steffens M., Okun M.S., Racette B.A., Cookson M.R., Foote K.D., Fernandez H.H., Traynor B.J., Schreiber S., Arepalli S., Zonozi R., Gwinn K., van der Brug M., Lopez G., Chanock S.J., Schatzkin A., Park Y., Hollenbeck A., Gao J., Huang X., Wood N.W., Lorenz D., Deuschl G., Chen H., Riess O., Hardy J.A., Singleton A.B., Gasser T. Genome-wide association study reveals genetic risk underlying Parkinson's disease // Nat Genet. - 2009. - V. 41. - № 12. - P. 1308-12.

127. Singleton A., Gwinn-Hardy K. Parkinson's disease and dementia with Lewy bodies: a difference in dose? // Lancet. - 2004. - V. 364. - № 9440. - P. 1105-7.

128. Singleton A.B., Farrer M., Johnson J., Singleton A., Hague S., Kachergus J., Hulihan M., Peuralinna T., Dutra A., Nussbaum R., Lincoln S., Crawley A., Hanson M., Maraganore D., Adler C., Cookson M.R., Muenter M., Baptista M., Miller D., Blancato J., Hardy J., Gwinn-Hardy K. alpha-Synuclein locus triplication causes Parkinson's disease // Science. - 2003. - V. 302. - № 5646. - P. 841.

129. Skovronsky D.M., Lee V.M., Trojanowski J.Q. Neurodegenerative diseases: new concepts of pathogenesis and their therapeutic implications // Annu Rev Pathol. - 2006. - V. 1. - P. 151-70.

130. Smith C.U. Chapter 24: the coming of molecular biology and its impact on clinical neurology // Handb Clin Neurol. - 2010. - V. 95. - P. 36172.

131. Smits S.M., Burbach J.P., Smidt M.P. Developmental origin and fate of meso-diencephalic dopamine neurons // Prog Neurobiol. - 2006. - V. 78. - № 1. - P. 1-16.

132. Specht C.G., Schoepfer R. Deletion of the alpha-synuclein locus in a subpopulation of C57BL/6J inbred mice // BMC Neurosci. - 2001. - V. 2. - P. 11.

133. Spillantini M.G., Crowther R.A., Jakes R., Cairns N.J., Lantos P.L., Goedert M. Filamentous alpha-synuclein inclusions link multiple system atrophy with Parkinson's disease and dementia with Lewy bodies // Neurosci Lett. - 1998a. - V. 251. - № 3. - P. 205-8.

134. Spillantini M.G., Crowther R.A., Jakes R., Hasegawa M., Goedert M. alpha-Synuclein in filamentous inclusions of Lewy bodies from Parkinson's disease and dementia with lewy bodies // Proc Natl Acad Sci U S A. - 1998b. - V. 95. - № 11. - P. 6469-73.

135. Spillantini M.G., Divane A., Goedert M. Assignment of human alpha-synuclein (SNCA) and beta-synuclein (SNCB) genes to chromosomes 4q21 and 5q35 // Genomics. - 1995. - V. 27. - № 2. - P. 379-81.

136. Spillantini M.G., Schmidt M.L., Lee V.M., Trojanowski J.Q., Jakes R., Goedert M. Alpha-synuclein in Lewy bodies // Nature. - 1997. - V. 388.

- № 6645. - P. 839-40.

137. Stemberger S., Scholz S.W., Singleton A.B., Wenning G.K. Genetic players in multiple system atrophy: unfolding the nature of the beast // Neurobiol Aging. - 2011. - V. 32. - № 10. - P. 1924 e5-14.

138. Sung E.J., Yoo S.S., Yoon H.W., Oh S.S., Han Y., Park H.W. Brain activation related to affective dimension during thermal stimulation in humans: a functional magnetic resonance imaging study // Int J Neurosci. - 2007. - V. 117. - № 7. - P. 1011-27.

139. Sung Y.H., Eliezer D. Residual structure, backbone dynamics, and interactions within the synuclein family // J Mol Biol. - 2007. - V. 372.

- № 3. - P. 689-707.

140. Tanaka M., Kim Y.M., Lee G., Junn E., Iwatsubo T., Mouradian M.M. Aggresomes formed by alpha-synuclein and synphilin-1 are cytoprotective // J Biol Chem. - 2004. - V. 279. - № 6. - P. 4625-31.

141. Tompkins M.M., Hill W.D. Contribution of somal Lewy bodies to neuronal death // Brain Res. - 1997. - V. 775. - № 1-2. - P. 24-9.

142. Touchman J.W., Dehejia A., Chiba-Falek O., Cabin D.E., Schwartz J.R., Orrison B.M., Polymeropoulos M.H., Nussbaum R.L. Human and mouse alpha-synuclein genes: comparative genomic sequence analysis and identification of a novel gene regulatory element // Genome Res. -2001. - V. 11. - № 1. - P. 78-86.

143. Tselis A.C., Booss J. Preface // Handb Clin Neurol. - 2014. - V. 123. -P. ix-x.

144. Tu P.H., Galvin J.E., Baba M., Giasson B., Tomita T., Leight S., Nakajo S., Iwatsubo T., Trojanowski J.Q., Lee V.M. Glial cytoplasmic inclusions in white matter oligodendrocytes of multiple system atrophy brains contain insoluble alpha-synuclein // Ann Neurol. - 1998. - V. 44.

- № 3. - P. 415-22.

145. Uchikado H., Lin W.L., DeLucia M.W., Dickson D.W. Alzheimer disease with amygdala Lewy bodies: a distinct form of alpha-synucleinopathy // J Neuropathol Exp Neurol. - 2006. - V. 65. - № 7. -P. 685-97.

146. Uversky V.N. Neuropathology, biochemistry, and biophysics of alpha-synuclein aggregation // J Neurochem. - 2007. - V. 103. - №2 1. - P. 1737.

147. Uversky V.N., Fink A.L. Amino acid determinants of alpha-synuclein aggregation: putting together pieces of the puzzle // FEBS Lett. - 2002.

- V. 522. - № 1-3. - P. 9-13.

148. Uversky V.N., Li J., Fink A.L. Pesticides directly accelerate the rate of alpha-synuclein fibril formation: a possible factor in Parkinson's disease // FEBS Lett. - 2001. - V. 500. - № 3. - P. 105-8.

149. van Raaij M.E., Segers-Nolten I.M., Subramaniam V. Quantitative morphological analysis reveals ultrastructural diversity of amyloid fibrils from alpha-synuclein mutants // Biophys J. - 2006. - V. 91. - № 11. - P. L96-8.

150. Vanacore N., Bonifati V., Fabbrini G., Colosimo C., De Michele G., Marconi R., Stocchi F., Nicholl D., Bonuccelli U., De Mari M., Vieregge P., Meco G., Consortium E. Case-control study of multiple system atrophy // Mov Disord. - 2005. - V. 20. - № 2. - P. 158-63.

151. Vincze A., Kapas I., Molnar M.J., Kovacs G.G. Clinicopathological variability in neurodegeneration with brain iron accumulation // Ideggyogy Sz. - 2010. - V. 63. - № 3-4. - P. 129-35.

152. Volles M.J., Lee S.J., Rochet J.C., Shtilerman M.D., Ding T.T., Kessler J.C., Lansbury P.T., Jr. Vesicle permeabilization by protofibrillar alpha-synuclein: implications for the pathogenesis and treatment of Parkinson's disease // Biochemistry. - 2001. - V. 40. - №2 26. - P. 78129.

153. Wakabayashi K., Takahashi H. Neuropathology of autonomic nervous system in Parkinson's disease // Eur Neurol. - 1997. - V. 38 Suppl 2. -P. 2-7.

154. Wakabayashi K., Toyoshima Y., Awamori K., Anezaki T., Yoshimoto M., Tsuji S., Takahashi H. Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism // J Neurol Sci. - 1999a. - V. 165. - № 2. - P. 188-91.

155. Wakabayashi K., Yoshimoto M., Fukushima T., Koide R., Horikawa Y., Morita T., Takahashi H. Widespread occurrence of alpha-synuclein/NACP-immunoreactive neuronal inclusions in juvenile and adult-onset Hallervorden-Spatz disease with Lewy bodies // Neuropathol Appl Neurobiol. - 1999b. - V. 25. - № 5. - P. 363-8.

156. Wakabayashi K., Yoshimoto M., Tsuji S., Takahashi H. Alpha-synuclein immunoreactivity in glial cytoplasmic inclusions in multiple system atrophy // Neurosci Lett. - 1998. - V. 249. - № 2-3. - P. 180-2.

157. Weinreb O., Dovrat A., Dunia I., Benedetti E.L., Bloemendal H. UV-A-related alterations of young and adult lens water-insoluble alpha-crystallin, plasma membranous and cytoskeletal proteins // Eur J Biochem. - 2001. - V. 268. - № 3. - P. 536-43.

158. Weinreb P.H., Zhen W., Poon A.W., Conway K.A., Lansbury P.T., Jr. NACP, a protein implicated in Alzheimer's disease and learning, is natively unfolded // Biochemistry. - 1996. - V. 35. - № 43. - P. 1370915.

159. Zarranz J.J., Alegre J., Gomez-Esteban J.C., Lezcano E., Ros R., Ampuero I., Vidal L., Hoenicka J., Rodriguez O., Atares B., Llorens V., Gomez Tortosa E., del Ser T., Munoz D.G., de Yebenes J.G. The new mutation, E46K, of alpha-synuclein causes Parkinson and Lewy body dementia // Ann Neurol. - 2004. - V. 55. - № 2. - P. 164-73.

160. Zolkipli Z., Dahmoush H., Saunders D.E., Chong W.K., Surtees R. Pantothenate kinase 2 mutation with classic pantothenate-kinase-associated neurodegeneration without 'eye-of-the-tiger' sign on MRI in a pair of siblings // Pediatr Radiol. - 2006. - V. 36. - № 8. - P. 884-6.

161. Гусев Е.И., Коновалов А.Н., Бурд Г.С. Неврология и нейрохирургия. // - 2004. - P. 420.

162. Евтушенко С.К. Неординарные (раритетные) синдромы и заболевания нервной системы у детей и взрослых / ред. - Донецк. Святогорск, 2003.

163. Левин О.С., Шиндряева Н.Н., Докадина Л.В. Клиническая эпидемиология болезни Паркинсона // Неврологический журнал. -2005. - V. 5. - P. 41-49.

164. Левин О.С., Юнищенко Н.А., Амосова Н.А. Болезнь Галлервордена

— Шпатца с поздним началом // Неврологический журнал. - 2004.

- V. 2. - P. 36-46.

165. Лыткина О.А. Сравнительный анализ функции альфа- и гамма-синуклеинов в синаптических везикулах / ред. - Москва, 2014.

166. Нинкина Н.Н., Бухман В.Л. Синуклеины - иметь или не иметь // Генетика. - 2000a. - V. 36. - P. 1487-1491.

167. Нинкина Н.Н., Бухман В.Л. Синуклеины: иметь или не иметь? // Генетика. - 2000b. - V. 36. - № 11. - P. 1487-1491.

168. Нинкина Н.Н., Устюгов А.А., Бухман В.Л. Моделирование синуклеинопатий в генетически модифицированных животных -успехи и неудачи. Протеинопатии - формы нейродегенеративных заболеваний, в основе которых лежит патологическая агрегация белков. // Молекулярная биология -2008. - V. 42. - № 5. - P. 840855.

169. Пономарев В.В. Редкие неврологические синдромы и болезни / ред.

- Санкт-Петербург. Фолиант, 2005.

170. Угрюмов М.В. Компенсаторные возможности мозга // Наука в России. - 2008. - V. 3. - P. 4-11.

171. Шелковникова Т.А., Куликова А.А., Цветков Ф.О., Peters O., Бачурин С.О., Бухман В.Л., Нинкина Н.Н. ПРОТЕИНОПАТИИ -ФОРМЫ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, В ОСНОВЕ КОТОРЫХ ЛЕЖИТ патологическая агрегация белков // МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ. - 2012. - V. 46. - № 3. - P. 402415.

172. Юдина В.В., Макаров Н.С., Юдина Г.К. 90 лет нигерной теории паркинсонизма // Саратовский научно- медицинский журнал. -2009. - V. 5. - № 2. - P. 279-282.

173. Юдина Г.К., Шоломов И.И. Семейный случай болезни Галлервордена — Шпатца // Журн неврол. и психиатр. . - 2003. -V. 1. - P. 49-50.

174. Яхно Н.Н. Болезни нервной системы. Руководство для врачей / ред.

- Москва. Медицина, 2005. - Т. 2.

175. Яхно Н.Н., Парфенов В.А. Общая неврология // - 2006. - P. 200.

Tarasova Tatiana Vladimirovna The role of alpha-synuclein in the development of populations dopaminergic neurons in the midbrain nuclei differentially affected in Parkinson's disease (

experimental study )

A physiological role of alpha-synuclein is still not entirely understood but its predominant localisation in presynaptic terminals suggests that its major function is connected with modulation of synaptic neurotransmission. Changes in protein homeostasis resulted in aggregation underlie pathological cascade that leads to the development proteinopathy with formation of histopathological inclusions where the major component is alpha-synuclein. Mutations in the alpha-synuclein-encoding gene (SNCA) are associated with familial forms of Parkinson's disease (PD). Altering the compartmentalisation of alpha-synuclein, namely redistribution the protein to the neuronal cell body and sequestering in pathological inclusions with consequent deprivation of synaptic terminals and loss of its synaptic function, is considered as an important factor in the pathogenesis of alpha-synucleinopathies.

This dissertation is devoted to study the role of alpha-synuclein in development and maturation of dopaminergic neurons in two different structures oh a mouse brain using knockout mouse lines to model the deficiency of alpha-synuclein function. A new SNCA knockout line with minimal genome modifications has been created. No regulatory sequences of other genes, including Multimerin-1, have been affected by manipulation of the alpha-synuclein locus. Therefore it is a convenient model for studying pathophysiologic aspects of selective impairment of DA neurons.

In the knockout and control mice the dynamics of the formation of two distinct populations of dopaminergic neurons differently affected in patients with PD was studied by the comparative morphometric analysis. Our data have shown a prominent modulating effect of alpha-synuclein on the developing DA neurons in substantia nigra (SN), that are most affected in PD patients, and have shown that alpha-synuclein has no effect on the formation of DA neurons in ventral tegmental area (VTA), which is much less susceptible to degeneration in PD patients.