Регенерация растений колонновидных слаборослых генотипов яблони из эксплантов различного происхождения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат наук Ван-Ункан, Надежда Юрьевна

• Ван-Ункан, Надежда Юрьевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Ван-Ункан, Надежда Юрьевна

СОДЕРЖАНИЕ стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Использование методов культуры in vitro органов и тканей для селекционно-генетических целей

1.2. Андрогенез in vitro сельскохозяйственных культур

1.3. Влияние ряда факторов на андрогенез in vitro

1.3.1 .Влияние генотипа

1.3.2. Стадии развития пыльцы и влияние состава питательных

сред

1.4. Культура in vitro листовых эксплантов

1.5. Клональное микроразмножение растений

1.6. Методы адаптации пробирочных растений к нестерильным

почвенным условиям

1.6. Биологические особенности колонновидных форм яблони

ГЛАВА 2. ЦЕЛЬ, ЗАДАЧИ, ОБЪЕКТЫ, МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Цель и задачи исследования

2.2. Материалы и методы исследования

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА ПРОЦЕСС КУЛЬТИВИРОВАНИЯ IN VITRO ПЫЛЬНИКОВ ЯБЛОНИ

3.1. Генотип растений-доноров

3.2. Влияние условий формирования пыльников in vivo донорных растений яблони на индукцию андрогенеза in vitro

3.3. Стадии развития пыльцы

3.4. Инфицированность пыльников яблони в условиях in vitro

3.5. Холодовая предобработка пыльников

3.6. Подбор питательных сред для индукции каллусогенеза

3.7. Морфологические особенности андрогенных каллусов

ГЛАВА 4. ИНДУКЦИЯ ПРОЦЕССОВ МОРФОГЕНЕЗА В КУЛЬТУРЕ ЛИСТОВЫХ ЭКСПЛАНТОВ ЯБЛОНИ

4.1. Разработка приемов стерилизации листовых эксплантов и введение их в культуру

4.2. Индукция каллусо- и морфогенеза у различных генотипов

яблони

ГЛАВА 5. МИКРОКЛОНАЛЬНОЕ РАЗМНОЖЕНИЕ КОЛОННОВИДНЫХ СЛАБОРОСЛЫХ ГЕНОТИПОВ ЯБЛОНИ

5.1. Возраст и состояние маточных растений, сроки изоляции,

размер инициальных эксплантов

5.2. Введение в культуру in vitro апикальных меристем

ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА ПРИЕМОВ РАЗМНОЖЕНИЯ ПОБЕГОВ-РЕГЕНЕРАНТОВ КОЛОННОВИДНЫХ ФОРМ ЯБЛОНИ В УСЛОВИЯХ IN VITRO

6.1. Собственно микроразмножение

ГЛАВА 7. УКОРЕНЕНИЕ МИКРОПОБЕГОВ IN VITRO

КОЛОННОВИДНЫХ ФОРМ ЯБЛОНИ

7.1. Адаптация микрорастений к условиям открытого грунта

ГЛАВА 8. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЫРАЩИ-ВАНИЯ ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА КОЛОННОВИДНЫХ СЛАБОРОСЛЫХ ГЕНОТИПОВ ЯБЛОНИ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Регенерация растений колонновидных слаборослых генотипов яблони из эксплантов различного происхождения»

ВВЕДЕНИЕ

В селекционно-генетических исследованиях, проводимых в настоящее время с плодовыми и ягодными растениями, все шире применятся современные биотехнологические методы и приемы, в том числе и такие, как культура in vitro изолированных пыльников, листовых эксплантов, меристем. Их использование позволяет успешнее решать многие как фундаментальные, так и прикладные задачи. Культура изолированных пыльников (метод андрогенеза in vitro) является самым быстрым и эффективным методом получения гаплоидных, а на их основе гомозиготных растений. Использование таких растений в селекционно-генетической практике ускоряет процесс получения новых сортов, повышает эффективность генетических исследований, расширяет существующий генофонд. Это показано на ряде овощных и зерновых культур, у которых с использованием метода культуры пыльников уже получены новые высокоэффективные сорта. Однако у плодовых культур, в частности яблони, метод андрогенеза in vitro разработан недостаточно. Лишь у отдельных генотипов получены андрогенные каллусы, эмбриоиды и растения-регенеранты с небольшой частотой.

Метод культуры пыльников (андрогенез) позволяет быстро получать гаплоидные, а на их основе и гомозиготные растения и линии. Разработка таких методов важна для плодовых культур, особенно для яблони, в связи с тем, что она имеет сложную гетерозиготную природу, многолетний цикл развития и не может репродуцироваться из семян. Однако исследования по культуре изолированных органов и тканей в частности пыльников яблони не многочисленны (Hofer М., 1994,1999., Савельев, Олейникова и др., 2009). Остаются недостаточно изученными вопросы, связанные с индукцией морфогенеза, как прямого, так и непрямого.

Интерес к явлению гаплоидии все более возрастает, особенно в последнее время, когда с особой остротой встал вопрос сокращения сроков выведения новых сортов и гибридов, наиболее полно отвечающих современным требованиям производства. Управление явлением гаплоидии открывает перспективы не только в совершенствовании существующих, но и в разработке новых путей и методов генетики, в коренной реконструкции культурных растений.

В связи с этим исследование андрогенеза in vitro у плодовых растений, в частности у колоновидных форм яблони, является актуальным.

В настоящее время в биотехнологической работе используется также культура in vitro листовых эксплантов. Этот метод применяется в области генной инженерии, для выделения изолированных протопластов из мезофилла и гибридизации соматических клеток, для изучения действия физиологически активных веществ, механизма перехода клеток к дедифференциации, в системах микроразмножения и оздоровления ценных генотипов. Для этого необходимо наличие надежных методов регенерации растений из листовых эксплантов. Однако у колонновидных форм яблони такие методы недостаточно разработаны.

Метод клонального микроразмножения служит для оздоровления и быстрого размножения ценных генотипов растений (Рыбалко, 1991; Коршун, Муратова, Иванов, Тугарев, 1996; Дорошенко, 1998; Орлова, Юшев, 2000; Ломовская, 2003). Основными преимуществами данного метода является возможность получения необходимого числа растений из небольшого количества исходного материала и сокращение сроков его получения до одного года, в то время, как при использовании традиционных вегетативных способов размножения у плодовых растений требуется обычно более 3 лет. Имеется ряд исследований по клональному микроразмножению яблони (Верзилин, Иванов и др 1998 г,. Самусь., Семенас 2006 г, Матушкина, Пронина автореферат 2008 г) Однако условия культивирования,

разработанные для одних генотипов, часто оказываются неэффективными для других и требуют дополнительных исследований. Воспроизводимость результатов часто бывает весьма низкой.

Особое место в современном плодоводстве занимают колонновидные формы яблони, которые имеют несомненные биологические преимущества по сравнению с обычными сортами. Они отличаются небольшой, не более 2,5 метров высотой, особым типом кроны - без бокового ветвления, ранним, уже с первого-второго года посадки, вступлением в плодоношение, необычно высокой продуктивностью в 5-6 раз превышающей обычные сорта. (Кичина, 2006) Все это делает данные формы яблони ценными для селекционно-генетических и биотехнологических исследований. Однако многие вопросы, связанные с культурой in vitro пыльников, листовых эксплантов, меристем изучены у них недостаточно, в первую очередь - возможности индукции процессов морфогенеза с учетом их биологических особенностей.

Положения, выносимые на защиту:

1. Приемы индукции каллусо- и морфогенеза в культуре in vitro изолированных пыльников колонновидных слаборослых генотипов яблони.

2. Условия получения регенерантов в культуре листовых эксплантов колонновидных форм яблони.

3. Микроклональное размножение, укоренение и адаптация к условиям in vivo.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Использование методов культуры in vitro органов и тканей для селекционно-генетических целей

Использование современных биотехнологических методов, таких как культура in vitro пыльников, листовых эксплантов, верхушечных меристем позволяет решать важные селекционно-генетические задачи такие, как ускорение селекционного процесса, создание нового ценного для генетики и селекции исходного материала.

В настоящее время для совершенствования традиционного селекционного процесса, важное значение приобретает использование биотехнологических методов и приемов, в частности, таких, как культивирование в системе in vitro клеток, тканей и органов растений, направленных на сокращение сроков создания ценных генотипов. Клеточные технологии в селекционной работе можно разделить на две группы: 1) облегчающие и ускоряющие традиционные процессы; 2) создающие генетическое разнообразие и скрининг генотипов с ценными признаками (Бутенко, 1986; Расторгуев, 2009). Одним из таких методов является культивирование in vitro изолированных пыльников и пыльцы (андрогенез in vitro). Основы этого метода заложены Гуха и Магешвари в 1964 г., когда впервые была достигнута индукция гаплоидных эмбриоидов, а затем и целых растений из пыльцы у Datara innoxia (Maheshwari S. С., Rashid A., Gyagi A., 1982). Было установлено, что в условиях in vitro микроспора может отклониться от нормального, гаметофитного пути развития и перейти к спорофитному. Андрогенез in vitro - процесс образования гаплоидного растения (спорофита) из микроспоры или клеток пыльцевого зерна (гаметофита высших растений) - можно охарактеризовать как одно из самых значительных открытий в биологии растений второй половины XX века (Круглова, Горбунова, 1997).

Основной интерес к культуре пыльников связан с тем, что это эффективный способ получения гаплоидов. Гаплоидия - процесс, приводящий к получению растений, у которых в хромосомном наборе представлена только одна из гомологичных хромосом, в результате чего общее количество хромосом уменьшено вдвое (п) по сравнению с исходной родительской формой (2п). В пыльнике содержатся тысячи микроспор, каждая из которых потенциально может дать целое гаплоидное растение (Атанасов, 1993).

Метод культуры пыльников (андрогенез in vitro) позволяет быстро получать гаплоидные, а на их основе гомозиготные растения и линии. Интерес к явлению гаплоидии все более возрастает, особенно в последнее время, когда с особой остротой встал вопрос сокращения сроков выведения новых сортов и гибридов, наиболее полно отвечающих современным требованиям производства. Управление явлением гаплоидии открывает перспективы не только в совершенствовании существующих, но и в разработке новых путей и методов генетики, в коренной реконструкции культурных растений.

Применение гаплоидных растений в селекции позволяет решать многие проблемы. 1 Прежде всего, получать константные, нерасщепляющиеся гомозиготные формы, для получения которых традиционными методами гибридизации и отбора требуется длительный инбридинг; с помощью же культуры пыльников от гибридных растений первого поколения, родители которых различались по ряду признаков, можно получать гомозиготные растения в первой генерации и, таким образом, сократить селекционный процесс на 3-4 генерации, необходимые для обычной схемы селекции (Касаева, 1988).

Использование гаплоидных растений упрощает и делает более эффективными исследования в области экспериментального мутагенеза. Это связано с тем, что у гаплоидов гены находятся в гемизиготном состоянии,

отсутствует доминирование и все гены имеют фенотипическое проявление, поэтому отбор мутантов возможен уже в первом поколении. Гемизиготное состояние гаплоидов способствует проявлению также летальных генов, которые у диплоидных форм обычно находятся в рецессиве. Такие гаплоиды, как правило, погибают на ранних этапах развития, а те, которые выживают и растут, имеют хороший внутренний генный баланс и поэтому являются ценным материалом для селекции (Lespinasse, Yves, 1987).

От гаплоидов можно получать моносомные линии и использовать их в хромосомной инженерии и цитогенетике. Гаплоидные ткани и клетки используются в клеточной селекции для получения протопластов, их слияния и образования гибридных клеток и растений (Гапоненко, 1987).

Многие виды при культивировании пыльников образуют каллусную ткань, в которой затем индуцируется органогенез, и формируются растения. Каллусная ткань может содержать, наряду с гаплоидными клетки других уровней плоидности (анеуплоидные, диплоидные, полиплоидные), что служит дополнительным источником генетической изменчивости в селекции (Савельев, Олейникова, 2009).

Разработка метода андрогенеза in vitro важна для плодовых культур, которые имеют сложную гетерозиготную природу, многолетний цикл развития и не могут репродуцироваться из семян, и поэтому являются очень трудными объектами для селекционно-генетической работы. Однако исследования по культуре in vitro пыльников плодовых не многочисленны (Савельев, Олейникова и др., 1999; Hôfer M., 1999, 2004). Остаются недостаточно изученными вопросы, связанные с индукцией первичных андрогенных образований (каллусов, эмбриоидов), а также морфогенеза, как прямого, так и непрямого.

Создание такого метода явилось бы поистине огромным достижением, позволившим значительно ускорить селекционную работу с этими культурами и повысить результативность генетических исследований.

Работы по культуре пыльников плодовых растений проводятся в Германии, Франции, Китае и других странах, но достигнутые результаты весьма ограничены: только у отдельных генотипов получены с небольшой частотой андрогенные новообразования - каллусы, эмбриоиды различного уровня плоидности и побеги-регенеранты, среди которых обнаружены удвоенные гаплоиды (Hôfer M., 1994, 1999). Определенные положительные результаты получены при культивировании in vitro пыльников земляники (Хамукова, 1994; Высоцкий, 1998, 2005). Более значительные успехи по получению гаплоидов методом культуры пыльников достигнуты у зерновых и овощных культур. У них с помощью данного метода уже получены новые высокоэффективные сорта (Graig, 1974; Выскот, Новак, 1975; Шамина, 1981; Кучко, Маруненко, 1983; Кучеренко и др., 1986; Dayuan Wang, 1988; Соколов, Шумный, 1989; Hanre, Viola, 1990; Орлов, 1998; Анапиляев, 2000; Бобков С. В., 2002; Шмыкова Н. А., 2006; Муравлев, 2007).

Изучение вопросов гаплоидии и гомозиготности имеет особенно важное значение для такой плодовой культуры как яблоня, так как эти растения - сложные гетерозиготы, они не могут репродуцироваться из семян, имеют многолетний цикл развития и, в связи с этим, представляют трудный материал в генетических исследованиях и селекции.

Однако у плодовых растений, в том числе и у колонновидных форм яблони, еще не разработаны на основе андрогенеза in vitro массовые и надежные способы получения гаплоидов, которые обеспечили бы их применение в практической селекции и генетики. Это обусловлено тем, что у данной группы растений морфогенетические процессы индуцируются с большим трудом, характеризуются нестабильностью и плохой воспроизводимостью. У многих генотипов трудно бывает получить даже первичные андрогенные образования - каллусы, эмбриоиды. Условия получения регенерантов, разработанные для одного вида или сорта, как

правило, бывают неэффективными для другого и требуют значительных модификаций.

Метод клонального микроразмножения служит для быстрого размножения селекционно и генетически ценного материала важных сельскохозяйственных культур, в том числе плодовых и ягодных. Установлено, что на процесс клонального микроразмножения оказывают влияние генетические, физиологические, гормональные и физические факторы (Калашникова, 2003). Их необходимо учитывать при разработке оптимальных приемов более полной реализации морфогенетического потенциала эксплантов при микроразмножении растений. Однако для ряда плодовых культур, в том числе колонновидных форм яблони, метод клонального микроразмножения разработан недостаточно. Данная группа растений представляет особый интерес в связи с тем, что ее сорта наиболее полно отвечают современным требованиям интенсивного садоводства, их использование позволяет увеличить продуктивность производственных насаждений до 4000 ц/г (Watkins, Alston, 1973; Tobutt, 1985, 1994).

Культура in vitro листовых эксплантов используется как метод для размножения определенных видов растений. Большое значение культура изолированных листьев имеет для выделения изолированных протопластов из мезофилла и последующей их гибридизации с целью получения новых генотипов. Культура сегментов листьев, в том числе яблони, используется для разработки эффективных систем трансформации. Известны работы по культуре in vitro листовых эксплантов плодовых и ягодных культур (Высоцкий, 2008; Соловых, 2009). Однако у гибридов, полученных от скрещивания колонновидных форм и слаборослых генотипов, такие исследования не проводились.

Одним из важных этапов получения растений-регенерантов из эксплантов различного происхождения плодовых и ягодных культур является оптимизация условий индукции каллусогенеза. Известно, что

способность к каллусообразованию зависит от целого ряда факторов, основными из которых являются генотип исходных растений-доноров и состав культуральных питательных сред - минеральный и гормональный. Минеральная основа включает макро- и микросоли. Существует множество прописей сред, разработанных для различных групп растений, однако, чаще всего, у большинства культур, в том числе плодовых и ягодных используют среду Мурасиге-Скуга. В качестве гормональных компонентов в питательные среды включают преимущественно различные типы ауксинов и цитокининов в определенных концентрациях и соотношениях. В большинстве известных работ для получения каллусных культур используется эмпирический подбор питательных сред по гормональному составу, основным недостатком которого является несистемность используемых вариантов, что может приводить к некорректной оценке полученных результатов. Одним из подходов к оптимизации питательных сред является использование методов планирования эксперимента. Как правило, питательные среды, разработанные для одних культур, оказываются малоэффективными для других, поэтому требуется индивидуальный подход к каждой группе растений (Катаева, Бутенко, 1983).

В связи с этим необходимо выяснить закономерности индукции каллусообразования на питательных средах, содержащих экзогенные регуляторы роста в различном диапазоне концентраций. Поэтому одной из целей настоящего исследования было - изучить особенности каллусогенеза in vitro в эксплантах различного происхождения плодовых растений на питательных средах различного состава и установить оптимальные концентрации и соотношения регуляторов роста для индукции этого процесса.

Индукция процессов морфогенеза является ключевым, наиболее трудным и не всегда осуществимым этапом во всех биотехнологических исследованиях, проводимых на различных тканях и органах. Особенно

актуальна эта проблема у плодовых и ягодных культур. Это обусловлено тем, что данные растения являются трудными объектами для биотехнологических исследований. В процессе их изучения возникают проблемы с получением даже первичных новообразований (каллусов, эмбриоидов), а процессы морфогенеза вообще индуцируются с очень большим трудом и не у всех генотипов. Поэтому данная проблема является очень актуальной. Ее решение позволило бы сделать биотехнологическую работу с этими культурами более успешной, перспективной и практически значимой для генетики и селекции. К настоящему времени регенерация in vitro в каллусах различного происхождения достигнута лишь у отдельных генотипов яблони, вишни, земляники (Hófer, 2004; Высоцкий, 2008; Савельев, Олейникова и др., 2010).

1.2. Андрогенез in vitro сельскохозяйственных культур

Согласно определению андрогенез in vitro - процесс образования гаплоидного растения (спорофита) из микроспоры и клеток пыльцевого зерна (гаметофита высших растений). Это связано с тем, что в определенных условиях спорогенные клетки могут переключаться с характерного им гаметофитного на принципиально иной - спорофитный путь развития (Круглова, Горбунова 1997). Это явление было открыто в 1964 году Гуха и Махешвари, которые, изучая физиологию мейоза у пыльников Datura innoxsia, наблюдали образование эмбриоидов а затем и целых растений на искусственных питательных средах (Гуха, Магешвари, 1964). В последующем было доказано, что они возникли из пыльцевых зерен и имели гаплоидный набор хромосом. С этого времени данное направление развивалось очень активно. Открытие андрогенеза in vitro относят к самым значительным в биологии второй половины прошлого столетия (Горбунова, Круглова, Батыгина 1993).

У целого ряда одно- и двулетних культур андрогенез in vitro довольно хорошо изучен. При культивировании пыльников были получены эмбриоиды, каллусы, растения-регенеранты (Maheshwari et al., 1982; Шамина, 1981; Батыгина с соавт., 1992; Круглова, Горбунова, 1997; Тюкавин, 2006; Шмыкова, 2006; Муравлев, 2007). В результате проведенных исследований было установлено, что в условиях in vitro репродуктивные клетки пыльников могут развиваться по одному из следующих путей:

1. Прямой андрогенез (эмбриоидогенез) - репродуктивные клетки (микроспоры или клетки пыльцевого зерна) делятся и образуют зародышеподобные структуры - эмбриоиды, которые могут развиваються в гаплоидные растения.

2. Косвенный (непрямой) андрогенез - репродуктивные клетки дедифферинцируются, делятся и образуют недифферинцированный каллус, в котором после переноса на дифференцирующую среду возможна индукция растении-регенрантов. Часто такие растения бывают разной степени плоидности, что обусловлено невозможностью полного исключения размножения диплоидных клеток соматических тканей пыльника (Шамина, 1981; Маруненко, 1988; Горбунова, 1993; Konieczhy, Czaplicki, 2003).

1.3. Влияние ряда факторов на андрогенез in vitro

Установлено, что на частоту каллусо-, эмбриогенеза и регенерацию растений из пыльников и пыльцы, влияют многие факторы, основными из которых являются: генотип растений-доноров, состав культуральных питательных сред, стадия развития пыльцы в момент инокуляции пыльников, предварительная подготовка бутонов, физические условия культивирования и условия внешней среды, в которых произрастали растения-доноры пыльников.

1.3.1. Влияние генотипа

Важным фактором, который обуславливает переключение гаметофитной программы развития микроспор или пыльцевых зерен на спорофитную является генотип исходных растений доноров пыльников (Burbulis, Blinstrubiene, 2009; Круглова и др., 1999; Анапияев, 2002; Муравлев, 2008). Установлено, что не только виды внутри рода, но также сорта одного и того же вида, межвидовые и межсортовые гибриды, как правило, при культивировании in vitro пыльников дают существенные различия по выходу андрогенных новообразований - каллусов, эмбриоидов, растений-регенерантов (Maheshwari et al., 1982; Prakash, Giles, 1987; Атанасов, 1993; Шмыкова, 2006; Гончарова, 2008; Хомякова, 2009).

Еще T. W. Оуянг с соавторами (1983) детально исследовали влияние генотипа на индукцию гаплоидного каллуса и регенерацию растений in vitro. Они показали, что андрогенетический потенциал не зависит от материнской цитоплазмы и определяется большим числом генов. В модельном опыте с использованием двух родительских генотипов пшеницы с различной способностью к регенерации через культуру пыльников была выявлена наследуемость показателей интенсивности каллусообразования, регенерации проростков и зеленых растений. Установлено, что интенсивность регенерации проростков из зеленых растений контролировалась двумя доминантными генами (Wang Yu et al., 2007). Показано наличие эффекта материнского растения и комплементарный характер наследования способности к андрогенезу in vitro мягкой пшеницы (Данилова, 2000). В культуре in vitro пыльников риса степень индукции каллуса варьировала по видам от 0 до 11,8% (Ding-Ye-mei et al., 2003).

По отзывчивости пыльников на культуру in vitro, то есть по их способности образовывать андроклинные структуры (эмбриоиды, каллусы) исследователи, работавшие с яровой мягкой пшеницей, выделили сорта с высокой, средней и низкой отзывчивостью (Плотников, 1994; Анапияев,

2000; Золотов, 2003). Е. В. Белинская (2007) в коллекции ячменя по способности к андрогенезу in vitro выделила 5 групп генотипов.

Так же выделены генотипы, как не образующие зеленые растения при культивировании пыльников, так и с высокой способностью к этому процессу (Masoje et al., 1993).

В исследованиях, проведенных на целом ряде сельскохозяйственных культур, таких как пшеница (Горбунова, 2000; Данилова, 2000; Круглова и др., 2001; Дьячук и др., 2004; Сельдимирова и др., 2004; Лаврова 2006; Сельдьмирова, Титова, 2008), рис (Bishnoi, 2000), ячмень (Белинская, 2007); просо (Бобков, 2000, 2002), рожь (Flehing-Haus et al., 1995), кукуруза (Сатарова, 2001), огурец (Xie Miao et al., 2005), горох (Бобков, 2008), капуста (Roulund et al., 1990; Rudolf et al., 1999; Грищенко, 2001; Давыдова, 2008) томат и перец (Zagorska et al., 1998, Кучковская, Молканова, 2002), морковь (Тюкавин, 2006), рапс (Ferrie et al., 1995; Муравлев, 2007), люцерна (Асадова, 2005), земляника (Протасова, 2010) показаны значительные различия между генотипами по способности их пыльников к формированию андрогенных новообразований (каллусов, эмбриоидов, регенерантов).

Установлен эффект материнского растения и комплиментарный характер наследования способности к андрогенезу in vitro мягкой пшеницы. Показано, что цитоплазма материнского растения влияет на способность гибрида к андрогенезу in vitro (Данилова, Коновалов 2000). Генотип ячменя сильно влиял на способность пыльников к культуре in vitro, реакция пыльников на культивирование контролировалось доминантным и аддитивным эффектами, второй - был более значим (Не Yu-Chi, Ge Ju et al., 2007). Китайские исследователи выделили три типа каллусов, полученных из пыльников земляники (Li Wei-dong, Ge Hui-do et al., 2004). Среди них наиболее ценным был эмбриогенный тип, в котором индуцировали эмбриоиды. Однако данный этап у плодовых растений, в частности яблони, изучен недостаточно. В

результате чего нами были изучены факторы, оказывающие влияние на процесс каллусообразования.

1.3.2. Стадии развития пыльцы и влияние состава питательных сред

На результаты культивирования пыльников in vitro влияет стадия развития пыльцы. Иногда этот фактор может быть даже решающим. В основном исследователи культивировали пыльники на трех стадиях развития пыльцы - тетрады, одноядерная и двуядерная. Большинство авторов считают, что лучшей для культивирования in vitro пыльников является одноядерная (сильновакуолизированная микроспора) стадия развития пыльцы. На этой стадии у многих растений показатели эмбрио- и каллусогенеза наиболее высокие (Куксо, 2004; Зарянова, Горбунова, 2005;Тюкавин, Наумова, 2006; Протасова, 2010). Но так же хорошие результаты могут давать пыльники с 2-3 ядерной пыльцой (Шамина, 1981; А. Атанасов, 1993).

Установлено, что перед посадкой пыльников на культуральные среды бутоны необходимо выдержать при низких положительных температурах 3-5°С в течение определенного времени (Бугара и др., 1985; Горбунова, Круглова, 1995; Sunderland et al., 1997; Xynias et al., 2000, 2001; Абрамов, 2001; Trejo-Tapia Gabriela et al., 2002; Размахин, Чекуров, 2004; Галиева и др., 2005; Лозариду и др., 2005). Продолжительность обработки зависит от вида растения и может варьировать от 1 до 15 дней. Считают, что холодовая предобработка уменьшает гибель микроспор, замедляет нормальное развитие, вызывает изменение оси деления в микроспоре, задерживает дегенерацию тапетума и среднего слоя и, как следствие этого, увеличение эмбрио- и каллусогенеза (Шамина, 1981; Бугара, 1985).

Состав питательных сред является главным фактором для индукции и развития новообразований из пыльников и пыльцевых зерен. Он включает

минеральную основу, которая состоит из макро- и микроэлементов, и гормональный состав, который представлен, в основном, ауксинами и цитокининами. Существуют различные модификации питательных сред, состав которых указан в методической и справочной литературе (Бутенко, 1964; Гродзинский, 1973; Калинин и др. 1980), но в большинстве случаев для культивирования изолированной пыльцы и пыльников в качестве минеральной основы используют среду Мурасиге-Скуга (1962), дополненную биологически активными веществами в различных концентрациях и соотношениях. Эту среду рекомендуют большинство исследователей (Хамукова, 1994; Высоцкий, Алексеенко, 2005, 2008; Матушкина, Пронина, 2008).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ван-Ункан, Надежда Юрьевна, 2014 год

Список литературы

1. Абрамов, С. Н. Статусы пыльника пшеницы при холодовом стрессе: Докл. [Годичное собрание Всерос. общ-ва физиологов раст. (ВОФР) Уфа, 19-22 июня, 2001] / С. Н. Абрамов // Вестн. Башк. Ун-та. - 2001. - №2. -С. 100-102.

2. Александрова, Л. Г., Лукьянюк, С. Ф. : Мат. научной конф. по с.-х. биотехнологии. - Целиноград, 1991.

3. Алексеенко, Л. В. Регенерация растений плодовых и ягодных растений из эксплантов различного происхождения / Л. В. Алексеенко // Биоресурсы, биотехнологии, экологически безопасное развитие агропромышленного комплекса : Сб. науч. тр. ГНУ ВНИИЦиСК. - Сочи, 2007. - Вып. 40. - С. 376-380.

4. Ананьина, Н. Н. Влияние размера бутонов и питательной среды в культуре пыльников / Н. Н. Ананьина, А. В. Поляков, И. И. Тарасенков, И. Н. Боровикова // Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов : матер. 3 Российской науч.-практ. конф. (Москва, 6-7 июня 2005г.). - М., 2005. - С. 57-58.

5. Анапияев, Б.Б. Влияние генотипа на частоту регенерации растений в культуре микроспор ТгШсит авБИуит Ь. / Б.Б. Анапиляев // Генетика. -2000. - Т. 36, № 4. - С. 505-509.

6. Анапияев, Б. Б. Культура микроспор отдаленных гибридов пшеницы / Б. Б. Анапияев, К. М. Искакова, И. Р. Рахимбаев // Актуальные проблемы генетики: Мат. 2-й конф. Московского общества гентиков и селекционеров им. Н. И. Вавилова: 20-21 февраля, 2003. Т.2. - М., С. 103-104

7. Асадова, С. Т. Влияние различных комбинаций фитогормонов на каллусо- и морфогенез некоторых генотипов люцерны / С. Т. Асадова // Изв. Азербайджана Сер. Биол. - 2002. - №1-6. - С. 355-364.

8. Атанасов, А. Биотехнология в растениеводстве / А. Атанасов. -Новосибирск, 1993. - 242 с.

9. Барсукова, Е. Н. Микроклонирование in vitro морозостойких подвоев яблони / Е. Н. Барсукова, Р. П. Фисенко, Н. Н. Андриевская, С. Г. Сморкалова // Генофонд растений Дальнего Востока России : матер, конф., посвящ. 70-летию ДВОС ВИР «Итоги и перспективы использования мировой коллекции ВИР и развития с.-х. производства Дальнего Востока». - Владивосток, 1999.-С. 132-133.

Ю.Бартиш, И. В. Оптимизация методов культивирования in vitro различных сортов и клоновых подвоев яблони (Malus domestica Borkh.) / И. В. Бартиш, В. И. Корховой, С. М. Меркулов, В. П. Копань // Физиология и биохимия культурных растений. - 1994. - Т.26, №6. - С. 587-594.

11 .Батыгина, Т. Б. Культура изолированных пыльцевых злаков с позиции эмбриологии растений (Методологические разработки) / Т. Б. Батыгина, Н. Н. Круглова, В. Ю. Горбунова. - Уфа: БНЦ УрО РАН, 1992. - 32 с.

12.Батыргожин, Б. А. Генетические механизмы устойчивости растений к неблагоприятным условиям среды / Б. А. Батыргожин, Б. Б. Анапияев, Н. JI. Богуслаев : Тез. сообщ. (Иркутск, 8-12 июля, 1991). - Иркутск, 1991. - С. 86.

1 З.Белинская, Е. В. Признаковая коллекция ячменя по способности к андрогенезу in vitro / Е. В. Белинская // Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке. Тез. докл., Санкт-Петербург, 26-30 ноября, 2007.-С. 239-241.

14.Бобков, С. В. Получение корнесобственных регенерантов в культуре --------------пыльников проса? С7В: Бобков"77 Вестник PÁCXH. - 2000. - №5. - С. 41.

15.Бобков, С. В. Культуры изолированных пыльников и микроспор гороха Pisum sativum L. / С. В. Бобков // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: тезисы X Междунар. конф. (Звенигород, 8-12 сент. 2008 г.).-М., 2008.-С. 48.

16.Бобков, C.B. Использование улучшенных вариантов среды № 6 для получения регенерантов в культуре пыльников проса / C.B. Бобков // Вестник РАСХН. - 2002. - № 5. - С. 39-42.

17. Бохорова, Н. Семена межвидовых гибридов подсолнечника в культуре in vitro и их морфогенетические способности / Н. Бохорова, А. Петров, Ю. Георгиева // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. - М.: Наука, 1991. - С. 114-116.

18.Бугара, А. М. Влияние холодовой предобработки на индукцию андрогенного развития в пыльниках кориандра / А. М. Бугара, JI. А. Егорова, С. А. Резников // Физиология растений. - 1985. - Том 32, вып. З.-С. 558-564.

19.Бургутин, А. Б. Микроклональное размножение винограда /

A.Б. Бургутин // Биология культуры клеток и биотехнология растений. -М.: Наука, 1991,-С. 216-220.

20.Бурдасов, В. М. Особенности микроклонального размножения яблони /

B. М. Бурдасов, Е. И. Ильина, Н. В. Кононова // Биология культивируемых клеток и биотехнология : Тез. докл. междунар. конф. (Новосибирск, 2-6 августа 1988). - Новосибирск: Ин-т цитологии и генетики, ИФР им. К. А. Тимирязева, 1988. - С. 360.

21. Бутенко, Р. Г. Применение метода культуры изолированных верхушечных почек для изучения процесса роста и органогенеза растений / Р.Г.Бутенко // Физиология растений. - 1960. -Т.7, вып. 6. - С. 715-723.

22.Бутенко, Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология ----------------морфогенеза растений / Р.Г.Бутенко. - М.: Наука, 1964. - 272 с.

23.Бутенко, Р. Г. Экспериментальный морфогенез и дифференциация в культуре клеток растений / Р. Г. Бутенко. - М.: Наука, 1975. - 51 с.

24.Бутенко, Р. Г. Клеточные технологии в селекционном процессе / Р. Г. Бутенко // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Мат. Всес. конф. - Ленинград, 1986. - С. 29-38.

25.Бутенко, Р. Г. Клеточные технологии в сельскохозяйственной науке и практике / Р. Г. Бутенко // Основы сельскохозяйственной биотехнологии. - М.: Агропромиздат, 1990. - С. 154-235.

26.Бутенко, Р. Г. 1-е Чайлахянское чтение. - Пущино: Пущинск. науч. центр РАН, 1994. - С. 7.

27.Верзилин, А. В. Использование биотехнологии для усовершенствования селекционного процесса клоновых подвоев яблони с целью его ускорения / А. В. Верзилин, Д. В. Иванов, Ю. В. Трунов // Использование биотехнол. методов для решения генет.-селекционных проблем. -Мичуринск, 1998. - С. 63-66.

28.Вечернина, Н. А. Адаптация растений-регенерантов к условиям выращивания ex vitro / Н. А. Вечернина, О. К. Таварткиладзе, И.Д. Бородулина, А. А. Эрст // Современные тенденции развития промышленного садоводства: Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 75-летию образования НИИ садоводства Сибири имени М. А. Лисавенко (Барнаул, 18-23 августа 2008 г.). - Барнаул, 2008. - С. 355-360.

29.Вершкова, Л. П. Получение регенерантов земляники в культуре пыльников и листовых эксплантов / Л. П. Вершкова // Молодые ученые -садоводству России: Тез. докл. Всерос. совещ.-М., 1995.-С. 154-156.

30.Вигоров, Л. И. Сад лечебных культур / Л. И. Вигоров. - Свердловск: Среднеурал. кн. изд-во, 1979. - 175 с.

31.Внучкова, В. К. Получение гаплоидов и фертильных антрогенетических линий пшеницы при посадке пыльников in vitro / В. А. Внучкова, Т.М. Чеботарева, Г. И. Глушенко // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Материалы Всесоюз. конф. -Ленинград, 1986. - С. 74-79.

32.Выскот, Б. М. Индуцированный андрогенез in vitro - новый метод получения гаплоидных растений / Б. М. Выскот, Ф. И. Новак // Генетика. - 1975.-Вып.11. -№1.-С. 136-145.

33.Высоцкий, В. А. Клоиальиое микроразмножение плодовых растений и декоративных кустарников / В. А. Высоцкий // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве. -Мичуринск, 1989. - С. 3-8.

34.Высоцкий, В. А. Клональное микроразмножение и получение растений-регенерантов ремонтантных и нейтральнодневных сортов земляники / В. А. Высоцкий, JI. В. Алексеенко // Биол. клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда: тез. докл. VII Междунар. конф. -М„ 1997.-С. 405-406.

35.Высоцкий, В. А. Регенерация растений земляники нейтральнодневных и ремонтантных сортов в культуре листовых дисков и пыльников [Текст] / В. А. Высоцкий, JI. В. Алексеенко // Плодоводство и ягодоводство России: сб. науч. работ. - М„ 2005. - Т. XII. - С. 330-336.

36.Высоцкий, В. А. Регенерация плодовых и ягодных растений в культуре каллусной ткани, пыльников, листовых и стеблевых эксплантов / В.А. Высоцкий, Л. В. Алексеенко // Садоводство и виноградарство. -2008. - №2. -С. 17-20.

37.Высоцкий, В. А. Клональное микроразмножение малины / В. А. Высоцкий, Н. В. Герасимова : Информ. листок. - МОСОБЛЦНТИ, 1987. - 3 с.

38.Высоцкий, В. А. Методические указания по выращиванию сеянцев вишни из зародышей, изолированных на ранних стадиях развития / В.А. Высоцкий, Г. А. Плотникова // НИЗИСНП. - М., 1988. - 14 с.

39.Галиева, Э. Р. Влияние низких положительных температур на индукцию " эмбрйо'идбгенёза и формирование регенерантов в культуре in vitro

пыльников пшеницы / Э. Р. Галиева, Н. Н. Круглова, С. Н. Абрамов // Физиол. и биохимия культ, рас. - 2005. - Вып. 37, №2. - С. 132-138.

40.Гамбург, К.З. Ауксины в культурах тканей и клеток растений / К.З. Гамбург, Н.И. Рекославская, С.Г. Швецов. - Новосибирск : Наука, 1990.-240 с.

41 .Гапоненко, A.K. Перспективы использования культуры клеток растений в селекции // Успехи современной генетики. - М., 1987. - Т. 4. - С. 64-68.

42.Геринг, X. Преодоление витрификации и улучшение акклиматизации растений при клональном микроразмножении / X. Геринг // Биология культуры клеток и биотехнология растений. - М.: Наука, 1991. - С. 197-200.

43.Гиголашвили, Т. С. Условия микроклонирования формируют специфический культуральный фенотип / Т. С. Гиголашвили, О.Н. Родькин, В. Г. Реуцкий // Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда : тез. докл. VII Междунар. конф. (25-28 ноября 1997г., Москва). -М, 1997.-С. 130-134.

44.Гончарова, Ю. К. Наследование признака «отзывчивость на культуру пыльников» у риса [Текст] // Вестник РАСХН. - 2008. - № 2. - С. 40-42.

45.Горбунова, В. Ю. Андрогенез in vitro яровой пшеницы : Автореф. дис.. .докт. биол. наук / В. Ю. Горбунова. - Уфа, 2000. - 48 с.

46.Горбунова, В.Ю. Андрогенез в культуре изолированных пыльников злаков: цитолого-эмбриологические аспекты / В.Ю. Горбунова, H.H. Круглова, Т.Б. Батыгина // Успехи современной биологии. - 1993. -Т. 113, № 1. -С. 19-35.

47.Горбунова, В. Ю. Эмбриоидогенез в культуре пыльников пшеницы: цитолого-гистологические аспекты / В. Ю. Горбунова, Н. Н. Круглова, H.H. Потапова. - Уфа: БНЦ УрО РАН, 1992. - Ч. 1. - 63 с.

48. Гришенко, Е. В. Эмбриогенная детерминация развития in vitro пыльцы Brassica napus / Е. В. Гришенко // Ботан. журн. - 2001. - 86, №11. - С. 1-9.

49. Гродзинский, Ä. М. Краткий справочник по физиологии растений / A.M. Гродзинский, Д. М. Гродзинский. - Киев: Наукова думка, 1973. - 590 с.

50.Гудвин, Т. Введение в биохимию растений / Т. Гудвин, Э. Мерсер. - М.: Мир, 1986.-С. 203-267.

51 .Гудковский, В. А. Проблемы и перспективы обеспечения свежими фруктами и повышение здоровья людей / В. А. Гудковский // История,

современность и перспективы развития садоводства России: Мат. Междунар. конф. - М., 2000. - С 38-45.

52.Давыдова Н. Н. Усовершенствование метода культуры пыльников для использования в селекционном процессе капусты {Brassica oleraceae L.) : Автореф. дис. ...канд. с.-х. наук / Н. Н. Давыдова. - М., 2008. - 25 с.

53.Данвелл, Дж. М. Культуры гаплоидных клеток / Дж. М. Данвелл // Биотехнология растений: культура клеток. - М.: Агропромиздат, 1989. -С. 33-51.

54.Данилова, Т. В. Оптимизация методики получения гаплоидов мягкой пшеницы в культуре пыльников in vitro и возможности их использования в селекции: автореф. дис...канд. биол. наук / Т. В. Данилова. - Москва, 2000.-16 с.

55. Данилова, Т. В. Оптимизация условий культивирования in vitro пыльников яровой пшеницы, оценка агрономических свойств линий удвоенных гаплоидов / Т. В. Данилова, Ю. Б. Коновалов // 2 Съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров, 1-5 февр.: Тез. докл. Т.1.-СП6, 2000.-С. 101-102.

56.Деменко, В. И. Проблемы и возможности микроклонального размножения садовых растений //Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. - М.: Москва Издательство МСХА, 2005. - С. 48-58.

57.Джонс, О. П. Размножение хозяйственно важных древесных растений in vitro II Биотехнология сельскохозяйственных растений. - М.: Агропромиздат, 1987.-С. 134-152.

58.Джигадло, Е. Н. Методические рекомендации по использованию биотехнологических методов в работе с плодовыми, ягодными и декоративными культурами / Е. Н. Джигадло, М. И. Джигадло, Л.В. Голышкина. - Орел: ГНУ ВНИИСПК, 2005. - 51 с.

;59.Долгов, С. В. Разработка методов регенерации и генетической трансформации вишни (Cerasus vulgaris) / С. В. Долгов, А. П. Фирсов,

Я.И. Бурьянов // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. II Российского симпозиума. - Пущино, 1993. - С. 38-40.

60.Дорошенко, Н. П. Биотехнологические методы в селекции винограда / Н.П. Дорошенко // Использование биотехнологических методов для решения генетико-селекционных проблем : Сб. докл. XVII Мичуринских чтений 27-29 октября 1997. - Мичуринск: ВНИИГиСПР, 1998. - С. 42-46.

61.Дьячук, Т. И. Биотехнологические методы в селекции пшеницы, ячменя и тритикале в НИИСХ Юго-Востока / Т. И. Дьячук, С. В. Тучин, С. В. Столяров, Ю. В. Итальянская, Н. Ф. Сафронова, Л. П. Медведева, Е. А. Блюднева // Стратегия адаптивной селекции полевых культур в связи с глобальным изменением климата: Сборник науч. трудов по материалам науч. практ. конф., Саратов, 2004, С. 237-278.

62.Жуков, О. С. Методические рекомендации по получению растений-регенерантов плодовых пород в культуре пыльников / О. С. Жуков, О.Я. Олейникова, Н. И. Савельев. - Мичуринск, 1984. - 36 с.

63.Зайцев, Д. Ю. Потенциально морфогенные андроклинные каллусы как дополнительный источник дигаплоидов / Д. Ю. Зайцев // Материалы 4 съезда Общества биотехнологов России им. Ю. А. Овчинникова (Пущино, 6-7 дек. 2006 г.). - М., 2006. - С. 77-78.

64.3арянова, Л. Д. Оптимальная фаза развития микроспор изолированных пыльников яровой мягкой пшеницы при индукции эмбриодогенеза in vitro / Л. Д. Зарянова, В. Ю. Горбунова // Сургут, гос. ун-т. Сб. научных трудов. 2005, №22, - С. 3-8.

65.3олотова, Т. М. Оценка гибридов яровой мягкой пшеницы по отзывчивости пыльников на условия культуры in vitro / Т. М. Золотова, Н. Н. Круглова // Мат. науч. практ. конф., Москва, 26-27 февраля. 2002. -С. 121-122

66.Золотое, Л. А. Оценка сортов яровой мягкой пшеницы по отзывчивочти пыльников на условия культуры in vitro / Л. А. Золотов // Биология-наука XXI века, 14-18 апреля, Сборник тезисов. - Пущино, 2003. - С. 173

67.Катаева, Н. В. Клональное микроразмножение растений / Н. В. Катаева, Р. Г. Бутенко. - М.: Наука, 1983. - 96 с.

68.Казаков, И. В. Перспективы селекции ремонтантной малины / И.В. Казаков // Вестник РАСХН. - 2004. - №4. - С. 42-45.

69. Калинин, Ф. Л. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений / Ф. Л. Калинин, В. Е. Полищук. - Киев: Наукова думка, 1980. - 399 с.

70.Касаева, К.А. Использование гаплоидии в селекции зерновых культур / К.А. Касаева // Агропромышленное производство: опыт, проблемы и тенденции развития. - 1988. - № 2. - С. 23 - 30.

71 .Кастрицкая, М. С. История культуры зародышей in vitro / М.С. Кастрицкая // Плодоводство : Науч. тр. / Институт Плод. ПАН Беларуси. - Самохваловичи, 2002. - Т.14 - С. 161-166.

72.Качалкин, М. В. Использование колонновидной яблони в суперинтенсивных насаждениях / М. В. Качалкин // Состояние и перспективы селекции плодовых культур : Материалы междунар. науч.-практ. конф. (пос. Самохваловичи, 21-24 авг. 2001 г.) / Белорус. НИИ плодоводства. - Минск, 2001. - С. 78-80.

73.Кефели, В. И. Рост растений / В. И. Кефели. - М.: Колос, 1984. - 175 с.

74. Кичина, В. В. Доноры компактной колоннообразной кроны яблони // Садоводство. - 1985. - №4. - С.24-25.

75.Кичина, В. В. Особенности гибридов яблони с колонновидной кроной // Плодоовощное хозяйство. - 1987. - № 10. - С. 19-21.

76.Кичина, В. В. Яблони колонновидного типа. - М.: ВСТИСП, 2006. - 162с.

77.Кичина, В. В. Яблоки на колоннах // Приусадебное хозяйство. - 1993. - №1. - С.44-46.

78. Кичина, В. В. Яблоки без веток // Наука и жизнь. - 1994. - №9. - С. 104-106.

79.Клоконос, Н. П. Культура изолированных тканей ежевики // Промышленное производство оздоровленного посадочного материала плодовых, ягодных и цветочно-декоративных культур: Материалы междунар. науч.-практ. конф., 20-22 ноября 2001 г. - М., 2001. - С. 105-107.

80.Ковалева, И. С., Данилова, Т. В., Молканова, О. И. Усовершенствование методики микроклонального размножения малино-ежевичного гибрида Тайберри//Бюл. Гл. бот. сада. - 2000. - Вып. 179. - С. 136-143.

81 .Кондратенко, О. В. Влияние рН питательной среды на рост и развитие миниатюрных роз (Rosa minima L.) in vitro / О. В. Кондратенко, И. В. Митрофанова // Современные проблемы генетики, биотехнологии и селекции растений. Сб. тез. 2-й межд. конф. молодых ученых (19-23 мая 2003 г.). - Харьков: Ин-т растениеводства им. В. Я. Юрьева, УААН, 2003.-С.10-11.

82.Коршун, Н. Д. Клональное микроразмножение клоновых подвоев яблони / Н. Д. Коршун, С. А. Муратова, Д. В. Иванов, Р. В. Тугарев // Сельскохозяйственное производство и высшая школа на переломном этапе реформирования. Мат. обл. науч.-пр. конф. 21-22 марта 1996 г., сборник 2., Плодоводство, ч. 1.-Мичуринск, 1996. - С.40-41.

83.Круглова, Н. Н. каллусогенез как путь морфогенеза в культуре пыльников злаков / Н. Н. Круглова, В. Ю. Горбунова // Успехи современной биологии. - 1997. - Т. 117,№ 1. - С. 83-94.

84.Круглова, Н. Н. Морфогенез в культуре изолированных пыльников: роль фитогормонов / Н. Н. Круглова, В. Ю. Горбунова, В. А. Куксо // успехи современной биологии. - 1999. - Т. 119, №6. - С. 567-577.

85. Круглова, Н. Н. Культура изолированных пыльников злаков: точка зрения эмбриолога. 4 пути развития спорогенных клеток in vitro / Н. Н. Круглова, П. А. Куско, Т. М. Золотова, О. А. Сельдьмирова // Инф. Бюллетень / Ин-т цитол. РАН.-2001. -№16.-С.17-19.

86. Куклина, Е. В. Опыт клонального размножения голубых жимолостей / А. Г. Куклина, Е. А. Семерикова, О. И. Молканова // Бюл. гл. бот. сада., Вып. 128.-М.: Наука, 2003. - С.160-167.

87. Куксо, П. А. Пути развития микроспор при культивировании in vitro изолированных пыльников пшеницы. Материалы 2 Съезда Общества биотехнологов России, Москва, 13-15 окт., 2004. -М., 2003 С. 68-69

88. Куликов, И. М. Рентабельность клонального микроразмножения винограда и ягодных кустарников / И. М. Куликов, В. А. Высоцкий, А. А. Шипунова // Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях сельского хозяйства: материалы конф., 29-30 июня 2005 г. г. Новочеркасск 2005 г., С. 162-168.

89. Кухарчик, Н. В. Адаптация регенерантов ex vitro / Н. В. Кухарчик, Т. А. Красинская, С. Э. Семенас, Е. В. Колобанова // Плодоводство: науч. тр.; Ч. 2: методическое обеспечение устойчивого развития современного плодоводства: материалы междунар. науч. конф., Самохваловичи Минской обл., 6-8 сент. 2006 г. / Ин-т плодоводства HAH Беларуси. -Самохваловичи, 2006. -Т.18, ч. 2. -С.174-181.

90.Кучеренко, Л. А. Использование методов биотехнологии в селекции риса / Л. А. Кучеренко, П. Н. Харченко, Е. Н. Ковалева // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии : Мат. Всесоюз. конф. - Ленинград, 1986. - С. 92-96.

91.Кучко, А. А. Культура изолированных пыльников картофеля / A.A. Кучко, И. М. Маруненко // Сельскохозяйственная биотехнология. -1983,-№5.-С. 16-19.

92.Кучковская, Е. В. Проблема получения гаплоидных растений томата в культуре пыльников / Е. В. Кучковская, О. И. Молканова, О. В. Бахеева // Мат. науч. гент. конф., Москва, 26-27 февр., 2002. - С. 198-200

93.Лаврова, Н. В. Технологические аспекты создания андрогенных гаплоидов озимой мягкой пшеницы / Н. В. Лаврова. - М.: МСХА, 2006. - 124 с.

94.Лебедев, В. А. Потенциальные возможности адвентивного органогенеза у различных сортов груши / В. А. Лебедев, В. И. Деменко, С. В. Долгов // Известия ТСХА - 2004. - Вып. 4. - С. 81-87.

95.Лебедев В. Г. Оптимизация этапов клонального микроразиножения при массовом производстве растений / В. Г. Лебедев, А. Б. Азарова, A.A. Алпатова, М. А. Салмова, Л. А. Шестибратов // Плодоводство и ягодоводство России. - Москва, 2011.— Том XXVI.- С. 307-314.

96.Лозариду, Т. В. Влияние холодовой предобработки на культивируемые пыльники ячменя разных генотипов / Т. В. Лозариду, А. С. Литургидис, С. Т. Котцаманидис, Д. Г. Рупакиас // Физиология растений. - 2005. - 52, №2.-С. 781-785.

97.Ломовская, Л. В. Особенности клонального микроразмножения сортов и перспективных форм груши / Л. В. Ломовская // Роль сортов и новых технологий в интенсивном садоводстве : Матер, к междунар. науч.-метод. конф. (Орел, 28-31 июля 2003 г.). - Орел, ГНУ ВНИИСПК, 2003. -С. 204-205.

98. Мазур, А. М. Клональное микроразмножение восточных гибридов лилий / А. М. Мазур, Е. А. Калашникова // Сельскохозяйственная биотехнология : Матер, междунар. науч.-практ. конф. - Горки, 1998. - С. 93-96.

99.Маруненко, И. М. Физиологические аспекты получения гаплоидров картофеля методом культуры пыльников / И. М. Маруненко, A.A. Кучко, Р. Г. Бутенко // Физиология растений,- 1988.- Т.35, в.1. - С. 136-143.

100. Матушнина, О. В. Технология клонального микроразмножения яблони и груши / О. В. Матушнина, И. Н. Пронина / Методические рекомендации. - Мичуринск-наукоград РФ, 2008,- 32 с.

101. Медведева, Н. И. Особенности клонального микроразмножения клоновых подвоев косточковых плодовых культур / Н. И. Медведева, Н. В. Поливара, В. Н. Подорожный // Плодоводство и ягодоводство России. - Москва, 2011.- Т. XXVI,- С. 322-327.

102. Метлицкий, Л. В. Основы биохимии плодов и овощей / Л. В. Метлицкий. - М.: Экономика, 1976. - 349 с.

103. Мишуткина, Л. В. Изучение влияния состава питательной среды, типа экспланта и генотипа на частоту регенерации растений сахарной свеклы {Beta vulgaris L.) in vitro / Л. В. Мишуткина, А. К. Гапоненко // Генетика. - 2006. - 42, №2. - С. 210-218.

104. Молканова, О И. Выход гаплоидных растений яровой пшеницы (Triticum aestivum L.) в культуре пыльников in vitro в зависимости от состава Сахаров питательной среды / О. И. Молканова, Т. В. Данилова // Известия Тимирязевской с.-х. акад. -1994. - №4. - С. 69-75.

105. Муравлев, A.A. Культура пыльников в селекции ярового рапса : автореф. дис. ... канд. биол. наук / A.A. Муравлев. - Саратов, 2007. - 24 с.

106. Муратова, С. А. Культивирование in vitro и регенерация из соматических тканей сливы домашней / С. А. Муратова // Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях сельского хозяйства : Матер, конф. - Новочеркасск, 2005. - С. 107-116.

107. Муратова, С. А. Размножение садовых культур in vitro / Методические рекомендации / С. А. Муратова, Д. Г. Шорников, М. Б. Янковская.-Мичуринск, 2008 - 69 с.

108. Муратова, С. А. Оптимизация методов клонального микроразмножения садовых культур / С. А. Муратова, М. Б. Янковская, Н. В. Соловых, Д.Г. Шорников, А. В. Будаговский, Р. В. Папихин // Плодоводство и ягодоводство России. - Москва, 2011.- Т. XXVI.- С. 375-382.

109. Муратова, С. А. Повышение эффективности клонального микроразмножения плодовых, ягодных и декоративных культур / С.А. Муратова, М. Б. Янковская, В. М. Тюленев, Н. В. Соловых // Экология человека: Концепция факторов риска и управления рисками : Сб. матер. VII Всерос. науч.-практ. конф. - Пенза, 2003. - С. 166-168.

110. Муромцев, Г. С. Основы сельскохозяйственной биологии / Г. С. Муромцев, Р. Г. Бутенко, Т. И. Тихоненко, М. И. Прокофьев. - М.: Агропромиздат, 1990. - 384 с.

Ш.Муханин, В. Г. Достижения ВНИИС им. И. В. Мичурина в области создания и возделывания интенсивных садов / В. Г. Муханин // Основные итоги и перспективы научных исследований ВНИИС им. И.В. Мичурина (1931-2001гг.) : Сб. науч. работ / ТГТУ. - Тамбов, 2001. — Т. 1. - С. 29-35.

112. Орлов, П. А. Темпы развития морфогенных структур в культуре пыльников пшеницы в зависимости от генотипа сорта / П. А. Орлов // Сельскохозяйственная биотехнология : Матер, междунар. науч. - практ. конф.-Горки, 1998.-С. 124-128.

113. Орлова, С. Ю. Особенности размножения сортов вишни различного происхождения в культуре in vitro / С. Ю. Орлова, А. А. Юшев // Плодоводство на рубеже XXI века : Матер, междунар. конф., посвящ. 75-летию со дня образования Белорусского НИИ плодоводства (Беларусь, пос. Самохваловичи, 9-13 октября 2000 г.). - Минск, 2000. - С. 27-28.

114. Петренко, Н. С. газета "Волшебная грядка" 2011 года № 9.

115. Петрова, А. Д. Хемотерапия и размножение садовых культур на питательных средах с фенолкарбоновыми кислотами / А. Д. Петрова, М.Т. Упадышев // Плодоводство и ягодоводство России : Сб. науч. раб. -М.: ВСТИСП, 2000. - Т.VII- С. 67-72.

116. Плотников, J1. Я. Интенсификация метода культуры пыльников пшеницы с использованием данных о влиянии генотипа растений-доноров на выход гаплоидов / JI. Я. Плотников : Тез. докл. пробл. совещ. по растениеводству, селекции, биотехнол. и семеновод, с.-х. культур Сибири (Барнаул, 26-27 июля, 1994). - Новосибирск, 1994. - С. 24-25.

117. Попов, Ю. Г. Применение метода культуры меристематических верхушек в селекционной работе с земляникой / Ю. Г. Попов,

A.C. Равкин // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. -М.: Колос, 1979.-С. 115-123.

118. Причко, Т. Г. Биохимические и технологические основы интенсификации производства, хранения и переработки плодов: автореф. дис...д-ра с.-х. наук / Т. Г. Причко. - Краснодар, 2002. - 53 с.

119. Протасова, Е. С. Совершенствование метода андрогенеза in vitro у земляники (Fragaria ananassa Duch.): дис...канд. с.-х. наук 06.01.05 защищена 29.10.2010 -М., Мичуринск-наукоград РФ, 2010. - 123 с.

120. Размахин, Е. П. Влияние продолжительности холодовой предобработки на стимуляцию андрогенеза у пырея сизого / Е. П. Размахин,

B.М. Чекуров // Стрессовые белки растений : Матер. Всерос. науч. конф. (Иркутск, 6-10 сент., 2004 г.). - Иркутск, 2004. - С. 88-90.

121. Райков, И. А. Особенности клонального микроразмножения смородины черной в зависимости от генотипа и применяемого цитокинина / И. А. Райков // Плодоводство и ягодоводство России. - Москва, 2011.- Т. XXVI-С. 368-374.

122. Расторгуев, С. JI. Регенерация растений из изолированных соматических тканей земляники и малины / С. JI. Расторгуев // Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур : Метод, рекоменд. - Мичуринск, 1996. - С. 40-61.

123. Расторгуев, С. Л. Культура изолированных тканей и органов в селекции плодовых растений - Мичуринск : изд-во МичГАУ, 2009. - 170с.

124. Роньжина, Е. С. 6-бензиламинопурин - высокоэффективный экологически безопасный регулятор роста растений / Е. С. Роньжина // Вопросы сельского хозяйства : Междунар. сб. науч. тр. / Калинингр. Гос. тех. ун-т. - Калининград, 2003. - С. 119-127.

125. Рыбалко, А. Е. Экономическая характеристика производства безвирусных мериклонов цветочных культур / А. Е. Рыбалко // Биология

культивируемых клеток и биотехнология растений. - М.: Наука, 1991. -С. 227-232.

126. Савельев, Н. И. Генетические основы селекции яблони / Н.И. Савельев. - М.: ВНИИГиСПР им. И. В. Мичурина, 1998. - 304 с.

127. Савельев, Н. И. Андрогенез in vitro у плодовых и ягодных культур [Текст] / Н. И. Савельев, О. Я. Олейникова // Инновационные подходы в селекции цветочно-декоративных субтропических и плодовых культур : Матер, науч.-практ. конф. (Сочи, 21-24 сентября 2005 г.). - Сочи, 2005. -С. 196-200.

128. Савельев, Н. В. Андрогенез плодовых и ягодных растений в культуре in vitro / Н. В. Савельев, О. Я. Олейникова // Методические рекомендации. -Мичуринск-наукоград РФ, 2008.- 52 с.

129. Самусь, В. А. Методика микроразмножения подвоев яблони in vitro. /

B. А. Самусь, С. Э. Семенас, Н. В. Кухарчик, А. А. Зимушко // Плодоводство : науч. тр. / Институт плодоводства HAH Беларуси. -Самохваловичи, 2006. - Т. 18, ч. 2. - С. 146-155.

130. Сатарова, Т. Н. Использование культуры пыльников для получения гаплоидов у кукурузы [Текст] / Т. Н. Сатарова // Кукуруза и сорго. -2001. №4. -С. 21 -23.

131. Сельдимирова, О. А. Влияние 2,4-Д на формирование микроспориальных эмбриоидов яровой мягкой пшеницы in vitro / O.A. Сельдимирова, Г. Е. Титова // Биология клеток растений in vitro и биотехнология : тез. IX Междунар. конф. (Звенигород, 8-12 сент. 2008 г.). -М., 2008.-С. 338.

132. Сельдимирова, О. А. Развитие микроспориальных эмбриоидов в культуре in vitro пыльников пшеницы / О. А. Сельдимирова,

C.Н. Абрамов, Н. Н. Круглова // Физиол. и биохимия культ, раст. - 2004. -36, №4.-С. 320-326.

133. Сизенко, Е. И. Проблемы сельскохозяйственного сырья, продовольствия и продуктов питания / Е. И. Сизенко // Хранение и переработка сельхоз сырья. - 2004.- №6. - С. 11-17.

134. Соколов, В. А. Технология гаплоидов в генетике и селекции растений /

B. А. Соколов, В. К. Шумный // Вавиловское наследие в современной биологии. - М., 1989. - С. 247-269

135. Солдатов, В. С. Ионитные почвы / В. С. Солдатов, Н. Г. Перышкина, Р.П. Хорошко. - Минск: Наука и техника, 1978. - 172 с.

136. Сорока, А. И. Влияние состава среды каллусогенеза и регенерации в культуре пыльников льна / А. И. Сорока // Цит. и генетика. - 2004. -Т.38, №2. - С. 20-25.

137. Спивак, В. А. Влияние физиологически активных веществ на морфогенез пыльников пшеницы в культуре in vitro / В. А. Спивак, О.Н. Головинская, Б. Г. Быховцев // Вопр. биохимии и физиол. раст. и микроорганизмов. - 1991. - №12. - С. 66-73.

138. Стрыгина, О. В. Использование метода культуры тканей для ускоренного размножения сортов малины / О. В. Стрыгина // Биология культивируемых клеток и биотехнология : Тез. докл. междунар. конф. (Новосибирск, 2-6 августа 1988). - Новосибирск, Ин-т цитологии и генетики, ИФР им. К. А. Тимирязева, 1988. - С. 342.

139. Судейная, С. В. Вегетативное размножение Peperomia caperata, Ficus benjamina на ионитных субстратах / С. В. Судейная, В. А. Тимофеева // Изучение биоразнообразия флоры Беларуси и обогащение генофонда культурных растений : Матер, межвуз. сем. ботан. кафедр по проблемам биоразнообразия флоры и селекции культурных растений (Минск, 24-26 апреля 2002 г.) / БГПУ им. М. Танка. - Мн., 2003. - С. 80-83.

140. Судейная, С. В. Испытание ионообменных смол в качестве субстратов при вегетативном размножении перспективных сортов Ribes nigrum L. /

C. В. Судейная, JI. Б. Утыро // Обогащение и сохранение генофонда на

основе повышения биологического потенциала растительных ресурсов : Сб. науч. тр. / БГПУ им. М. Танка. - Мн, 2000. - С. 89-92.

141.Тивари, Ш. Цитогенетическая гетерогенность андрогенных каллусов ячменя / Ш. Тивари, С. Колумбаева, И. Р. Рихимбаев // Цитология и генетика. - 1990.-С. 12-15.

142. Ткаченко, О. В. Оптимизация метода микроклонального размножения стевии / О. В. Ткаченко // Нетрадиционные и редкие растения, природные соединения и перспективы их использования : VII межд. симп., 24-27 мая 2006 г.- Белгород, 2006. - Т.2. - С. 112-114.

143. Тулаева, М. И. Микроклональное размножение винограда на ионитных субстратах / М. И. Тулаева, С. А. Стыцко, 3. Н. Белякова и др. // Садоводство и виноградарство. - 1990. - №9. - С. 14-16.

144. Туровская Н. И. Регулирование процесса ризогенеза при микроразмножении яблони / Н. И. Туровская // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве. -Мичуринск, 1989. - С. 8-13.

145. Туровская, Н. И. Микроклональное размножение малины / Н.И. Туровская, О. В. Стрыгина // Садоводство и виноградарство. - 1990. - №8. - С. 26-29.

146. Тюкавин, Г. Б. Основы метода андрогенеза моркови in vitro путем каллусогенеза / Г. Б. Тюкавин. - ГАВРИШ, 2006. - №4. - С. 28-32.

147. Тюкавин, Г. Б. Адаптация андрогенных растений регенерантов моркови in vitro / Г. Б. Тюкавин // Культурные растения для устойчивого с.х. в XXI веке (поиск, интродукция, создание, сохранение и использование в селекции): Научн. труды,. M - 2008. С. 151-155.

148. Тюкавин, Г.Б. Корреляция между морфологическими показателями генеративных органов растений моркови и стадиями развития микроспорогенеза / Г. Б. Тюкавин, C.B. Наумова // Инновационные технологии в селекции и семеноводстве сельскохозяйственных культур :

Матер, междунар. науч.-практ. конф. (Москва, 7-9 авг., 2006). - М., 2006- С. 287-295.

149. Тюленев, В. М. Получение растений-регенерантов из изолированных тканей земляники / В. М. Тюленев, С. Л. Расторгуев, И. И. Туровский // Бюл. Центр, генет. лаб. им. И. В. Мичурина. - Мичуринск, 1991. -Вып. 50.-С. 21-27.

150. Уоддингтон К. Морфогенез и генетика / К. Уоддингтон. - М.: Мир, 1964.-259 с.

151. Фролова, JI. В. Оптимизация некоторых этапов клонального микроразмножения яблони / J1. В. Фролова // Плодоводство и ягодоводство России. - Москва, 2011.- Т. XXVI,- С. 250-254.

152. Хамукова, Ф. Н. Регенерация растений земляники и малины из эксплантов различного происхождения : автореф. дис. ...канд. с.-х. наук / Ф. Н. Хамукова. - М., 1994. - 22 с.

153. Хасси, Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro / Г. Хасси // Биотехнология сельскохозяйственных растений. - М.: Агропромиздат, 1987.-С. 105-133.

154. Чайлахян, М. X. Каллусная модель цветения и перспективы ее изучения / М. X. Чайлахян, Н. П. Аксенова, Т. В. Баврина // Журнал общей биологии. - 1972. - 33, №5. - С.2 53-538.

155. Шамина, З.Б. Андрогенез и получение гаплоидов в культуре пыльников и микроспор / З.Б. Шамина // Культура клеток растений. - М., 1981. -С.124-136.

156. Шмыкова, H.A. Разработка системы биотехнологических методов, направленных на ускорение селекционного процесса овощных культур : автореф. дис. ... д-ра с.-х. наук / H.A. Шмыкова. - М., 2006. - 48 с.

157. Шорников, Д. Г. Совершенствование технологии размножения редких садовых растений в культуре in vitro и оценка их потенциала

устойчивости к абиотическим стрессорам, дис. ... канд. с.-х. наук / Д. Г. Шорников. - М., 2008. - 192 с

158. Alston, F., Watkins, R. Apple breeding at East Mailing // Proc. Eucarp. Fruit. Breed. Sump., 1973. - P. 14-29.

159. Angiboust, A. La multiplication vegetative «in vitro» - une nouvelle technique de point au service de l'arboriculture / A. Angiboust // Arb. Fruit.An. - 1980. - V.27(322). - P. 39-46.

160. Arnison, P. G. Genotype - specific response of cultured broccoli (Brassica oleracea var. italica) anthers to cytokinins / P. G. Arnison, P. Donaldson, A. Jackson, C. Semple, W. A. Keller // Plant Cell Tiss, Org. Cult. - 1990. -V. 20.-P.217-222.

161. Bishnoi U. S. High frequency androgenesis in indica x Basmati rice hybrids using liquid culture media / U. S. Bishnoi, R. K. Jain, K. R. Gupta, V. K. Chowdhury, J. B. Chowdhury // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. - 2000. -61, №2. C. 153-159.

162. Bryser, S. Wheat: production of haploids, performance of doubled haploids and trials / S. Bryser, Y. Henry // Crops B. - 1986. - V. 1. - P. 73-88.

163. Calamar Ana, de Klerk (Физиология и биохимия растений №3 2004 г) реферат №04.03-04В3.223. стр. 207-212.

164. Cresswell, R., Organ culture of Eucalyptus grandis L. / R. Cresswell, C. Nitsch. - Planta, 1975.- 125, №1,-P. 87-90.

165. David, H., Isemukali, K., David, A. Obtention de plants de Pin maritime (Pinus pinaster Sol.) a partir de brachyblastes ou d apex caulinaires de très jeunes sujets cultives in vitro. - C. r. Acad. Sci. 1978, N 4, p. 245-248.

166. Daynan, Wang. Tissue Culture of Fruit Crops in Cina / Wang Daynan, Gui Yao-lin, Sun Jiang-San. - Hortsciehce. - 1988. -V.23, №6. - P. 962-965.

167. DingYu-mei, Cheng Zai-quan, Hiang Xing-qi, Wang Ling-xian, Wu Cheng-jun / Xibei Zhiwu xuebao // Acta Bot. Boreali - Occident. Sin. - 2003. -23, №11.-С. 1922-1926.

168. Dodds, J.H. Experiments in plant tissue culture / J.H. Dodds, L. W. Roberts. - Cambridge: Cambridge Univ. press, 1985. -P. 157.

169. D'Onofrio, C. Simultaneous regeneration of different morphogenic structures from quince leaves as affected by growth regulator combination and treatment length / C. D'Onofri, S. Morini // Biol. Plant. - 2003. - V. 47, №3. -P. 321-325.

170. Fang Shu-Gui, Zend Xiao-Ling, Zhu Chao-Hui, Lin Bi-Ying, Chen Wen-Hui, Liao Xiao-Zhen. Wuhan Zhiwuxue yanjiu // S. Wuhan Bot. Res. - 2005. -23, №6.-P. 530-534.

171. Fasolo, F. Adventitious shoot formation on excised leaves of in vitro grown shoots of apple cultivars / F.Fasolo, R. H. Zimmerman, I. Fordham // Plant Cell, Tissus Organ Cult. - 1989. - V. 16, № 2. - P. 75-87.

172. Ferrie, A. M. Evalnation of Brassica rapa L., genotypes from for microspore culture response and identification of a highly embryogenic line / A. M. Ferrie, L. S. Epp, W. A. Keller // Plant Cell Repts. - 1995.- 14, №9. - P. 580-584.

173. Flehing-Haus, Roux T. Anther - culture ability in Secale cereals L. / Roux T. Flehing-Haus, S. Leimling, H. H. Veiger // Plant Breed. - 1995. - 114, №3. -P. 259-261.

174. Fridborg, G., Pedersen, M., Landstrom, L., Eriksson, T. The effect of activated charcoal on tissue cultures: adsorption of metabolites inhibiting morphogenesis. - Physiol. Plant., 1978, N 2. p. 104-106.

175. Gou Shu-qiao, Fang Hai-juan, Wang Zhou-fei, Zhang Hong-sheng. Nanjing nongue daxue xuebao // S. Nanjing Agr. Uniw. - 2006. - 29, №2. - P. 1-5.

176. Graig, I. Haloid Plants (2n = 21) fromin in vitro Anther culture of Triticum aestivum /1. Graig // Can. J. Genet. Cytol. - 1974. - V. 16. - P. 697-700.

177. Hempel, M. Application of drowth regulators for in vitro propagation of ornamental plants. - Acta hort., 1979, 91, p. 247-260.

178. Höfer, M. In vitro androgenesis in apple: Induction regeneration and ploidy level / M. Höfer // Progress in Temperate fruit Breeding. Kluwer Acad. Publ., 1994.-S. 399-402.

179. Höfer, M. Erzeugung von haploiden und DH-Material bei Apfel / M. Höfer // Erwerbs-Obstbau. - 1999. - 41, V. 3-4. - S. 143-148.

180. Hogue, E. J. Rapid production method for Ottawa-3 rootstock and branched apple nursery stock / E. J. Hogue, D. Neilsen // Hort. Sei. - 1991. - V.26(l 1). - P.1416-1419.

181. Hussey, G. In vitro method of plant propagation. - Sei. Hort., 1975, 27, N 1, p. 16-20.

182. James, D. J. Factors affecting high frequency plant regeneration from apple leaf tissues cultured in vitro / D. J. James, A. J. Passey, E. Rugini // J. Plant Physiol. - 1988.-V. 132, №2.-P. 148-154.

183. Keller, W. A. Einige morphologische Aspekte bei der Kulture von Antheren / W. A. Keller, E. Klocke, H. B. Schmidt // Biol. Rundsch. - 1986. - V.24, № 6.-P. 367-381.

184. Kohlenbach, H. W. Comparative somatic embryogenesis. - In: Frontiers of plant tissue culture: Proc. 4th Intern. Congr. Plant, Tissue, Cell Cult. Calgary, 1978. P. 59-66.

185. Konieczhy, R. Two pathways of plant regeneration in wheat anther culture / R. Konieczhy, A. Z. Czaplicki, H. Golczyk, L. Przywara // Plant Cell, Tissue and Organ Cult.-2003. -73, №2.-P. 177-187.

186. Limasset, P., Cornuet, P. Recherche de virus de la mosaique du tabac (Marmor Tabaci, Holmes) dans les meristemes des plantees infectees. - C. r. Acad. Sei. D, 1949, 228, p. 1971-1972.

187. Li Wei-dong. Hebei nongye daxue xuebao / Li Wei-dong, Ge Hui-bo, Zhou Chun-jiang, Zhang Jie // J. Agr. Hebei. - 2004. -V. 27, №2. - P. 59-63.

188. Lin Gang, He Yonggang, Liu Yong, He Guangyuan. Huazhong keji daxue xu-ebao. Ziran Kexue ban // J. Hualhong Univ Sci. and Techol. Natur. Sci. -

2004.-32, №9.-P. 111-113.

189. Lee, H. In vitro propagation of Muscanide grape by axillary shoot proliferation / H. Lee, H. Y. Wetstein // J. of American society Hortic. Sci. -1990.-V.115,№2.-P. 324-329.

190. Lopez-Perez, A. J. High embryogenic ability and plant regeneration of table grapevine cultivars (Vitis vinifera L.) induced by activated charcoal / A.J. Lopez-Perez, J. Carreno, A. Matrinez-Cutillas, M. Dabauza // Vitis. -

2005.-44, №2.-P. 79-85.

191. Maheshwari, S.C. Haploids from pollen grains - retrospect and prospect / S.C. Maheshwari, A. Rashid, A.K. Gyagi // Amer. J. Bot. - 1982. - V. 69, № 5.-P. 865-879.

192. Masoje, R. Responsiveness to another culture in cultivars and F, cros ses of spring wheat / R. Masoje, O. M. Lukow, R. S. H. McKenzie, N. K. Howes // Can. S. Plant Sci. - 1993. - 73, №3. - P. 777-783.

193. Meyer, M. M. Propagation of tall bearded irises by tissue culture / M.M.Meyer, L. H. Fuchigami, A. N. Roberts. - HortScience.- 1975.- 10, №5 - P. 479-480.

194. Monaco, L. C., Sondahl, M. R., Carvalho, A. et al. Application of tissue culture in the improvement of Coffee. - In: Apple. And fundam. Aspects plant cell, tissue and organ cult. B. etc.: Spring. - Verl., 1977, p. 109-130.

195. Morel, G. M. La culture in vitro du meristeme apical de certaines Orchidees. - C. r. Acad. Sci., 1963, 256, N 23, p. 4955-4957.

196. Murashige, T. Plant propagation through tissue cultures / T. Murashige // Plant Physiol. - 1974.-V.25.-P. 135-166.

197. Pedieri, S. High - frequency shoot regeneration from leaves of the apple rootstock M26 (Malus pumila Mill) / S. Pedieri, F. F. F. Malavasi // Plant Cell, Tissus Organ Cult. - 1989. - V. 17, №2. - P. 133-142.

198. Pierik, R. L. M. In vitro culture of higher plants / R.L.M. Pierik. -Dordrecht: M. Nijhoff Publ., 1987. - P. 344.

199. Prakash, S. Indaction and growth of androgenic haploids / S. Prakash, Z. Giles // Int. Rev. Cytol. - 1987. - V. 107. - P. 273-292.

200. Pundir, N. S. Experimental embryology of Gossypium arboretum L. and G. hirsutum L. and their reciprocal crosses / N. S. Pundir // Bot. Gaz. - 1972. -V. 133, №1,- P. 7-26.

201. Rosati, P. Another culture of strawberry / P. Rosati, M. Devreux, U. Laneri //Hortscience. - 1975.-V. 10.-P. 119-120.

202. Rose Ju. B.,Dunwell J. M., Sunderland N. Plant Cell and Tissue Organ Culture - 1986-V. 6,№1.- P. 15.

203. Roulund, N. Effect of genotype, environment and carbohydrate on another culture response in head cabbage (Brassica oleraceae L. Convar. capitata L.) Alef. / N. Roulund, L. Hansted, S. B. Andersen et al - 1990. - 49, №3. -P. 237-242.

204. Rudolf, K. Microspore culture of white cabbage, Brassica oleraceae var. capitata L.: Genetic improvement of non-responsive cultivars and effect of genome doubling agents / K. Rudolf, B. Bohanes, M. Hansen // Plant Breeed. - 1999. - 118, №3,-P. 237-241.

205. Shi Li-li Tiajin nongxueyuan xuebao / Shi Li-li, Zhang Lei, Zhang Xin, Shi Yeng-Xin, Li Ming, Wang Son-wen // J. Tianjin Agr. Coll. 2007. 14 №2/ - C. 1-4

206. Steeves, T. A. A atudy of the development potentialities of excised leaf primordial in sterile culture. - Phytomorphology, 1961, N 4, p. 346-359.

207. Steeves, T. A., Sussex, I. M. Studies on the development of excised leaves in sterile culture. Amer. J. Bot., 1957, N 8, p. 665-673.

208. Stewart, J. In ovuloe embryo culture and seedling development of cotton (G. hirsutum L.) / J. Syewart, D. Mc, C. L. Hsu // Planta. - 1977. - V.137, №2.-P. 113-117.

209. Sunderland, N. Multicellular pollen formation in cultured barley anther. Independent division of the generative and vegetative cells // N. Sunderland, M. Roberts, L. Y. Evans, D. C. Wildon // S. Exp. Bot. - 1979. - V. 30, w. 119. -P. 1133-1144.

210. Sussex, I. M., Clutter, M. E. A study of the effect of externally supplied sucrose on the morphology of excised fern leaves in vitro. -Phytomorphology, 1960, N 1, p. 87-99.

211. Tobutt, K. Breeding columnar apples // Graving today, 1985, Vol. 2, № 4. -P. 14-15.

212. Trejo-Tapia Gabriela, Amaya Uriel Maldonado, Morales Guadalupe Solcedo, Sancher Antonia De Jesus, Bonfil Blanca Martinez, Rodrigues -Monroy Mario, Jimenez - Apariceo Antonio // Plant Cell, Tissue and Organ Cult.-2002.-71, №1,-P. 41-46.

213. Tretyakova, Sraida N. Induction of androgenic cultures of Siberian larch (Larix sibirica Ledeb) / Sraida N. Tretyakova, Alonya S. Vyazovetskova, Anna S. Svanova // Eurasion S. Forest Res. - 2006. - 9, №1. - P. 37-44.

214. Vaithiyalingan, M. Effect of 2,4-D casein - hydrolysate on callus induction and differentiation in Pigeon pea (Cajanus cajan) / M. Vaithiyalingan, N. Nadarajan // J. Ecobiol. - 2004. - 16, №2. - P. 119-122.

215. Vegvari G., Vertesy J. Further information to acclimatization of «in vitro» // International Journal of Horticultural Science. - 1999. - V. 5, № 3-4. - P. 54-58.

216. Wang Yu. Mailei zuowu xuebao / Wang Yu, Fan Qing-qi, Zhaug Li, Sui Xin-xia, Li Yen-ying, Chi Xiu-sheng, Zhang Xian-sheng, Hiang Cheng-yan // Acta Tritical Crops. 2007 №5, - C. 755-760.

217. Watkins, R. Breeding apple cultivars for the Future / R. Watkins, F. H. Alston // Fruit-Present and Future. - 1973. - V. 2. - P 65-74.

218. Welander, M. R. Plant regeneration from leaf and stem segments of shoots raised in vitro from mature apple trees / M. R. Welander // J. Plant Physiol. -1988. - V. 132, №6. - P. 738-744.

219. Xie Miao, Qin Li - ying, Pan Sun - song, He Huan - le, Wu Ai - zhong, Cai Run. Xibei zhiwu xuebao // Acta bot. boreali - occident, sin. - 2005. - 25, №6.-P. 1096-1100.

220. Xynias, I. N. Lov temperature pretreatment effect on embryoid induction in bread wheat (Triticum aestivum) anther culture / I. N. Xynias, I. A. Zamani, E. Gouli-Vavdinoudi, D. G. Roupakias // Юбилеен собрник научни доклада «75 годани висше лесотехническо образование в България». Секц. Ветеринарна медицина. Агрономство / Лесотехн. Ун-т. - София, 2000. -Р. 270-275.

221. Yae, В. W. Influence of photoperiod, apical meristem and expiants orientation on axillary shoot proliferation of apple cultivars in vitro / B. W. Yae, R. H. Zimmerman, I. Fordham, K. S. Ko // J. Amer. Soc. Hort. Sci. -1987.-V.112,№3.-P. 588-592.

222. Yan Li-Xia. Yunnan zhiwu yanjin / Yan Li-Xia, Hu Chun-Gen, Yaojia-Ling // Acta bot. yunnanica. 2007. 29, №1, P. 33-37.

223. Zagorska, Nedialka. In vitro androgenesis in sonre economically important species: [Pop] / Nedialka Zagorska, Roumiana Pundeva // Collog Impost, biotechnol. dans secteur veg. agro - aliment. Amiens 10-12 July, 1989: Bull, Soc. bot. Fr. Actual, bot. - 1990. - 137, № 3-4. - P. 144-145.

224. Zagorska, N. A. Induced androgenesis in tomato: J. Influence of genotype on androgenetic ability / N. A. Zagorska, A. Shtereva, B. D. Dimitrov, M. M Kruleva//Plant Celle Repts. - 1998. - 17, № 12.-P. 968-973.

225. Zenkteler, M. Induction of androgenetic embryoids in the in vitro cultured anthers of several species / M. Zenkteler, E. Misiura, E. Ponitka // Experientia. - 1975,-V.31.-P. 289-291.

226. Zhao Sing, Sun Meng-Xiang. Wuhan Zhiwuxue yanjiu // J. Wuhan Bot. Res. -2005. -23, №6. P. 519-523.