Регенерационный потенциал слизистой оболочки трахеи при действии низких температур и на фоне применения природных антиоксидантов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, кандидат биологических наук Горбунов, Михаил Михайлович

• Горбунов, Михаил Михайлович
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Горбунов, Михаил Михайлович

СОДЕРЖАНИЕ

Краткий указатель использованных в диссертации условных сокращений

1 ВВЕДЕНИЕ

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи интактных крыс

2.1.1 Эпителий слизистой оболочки трахеи интактных крыс

2.1.2 Физиологическая регенерация эпителиальной выстилки слизистой оболочки воздухоносных путей

2.1.3 Базальная мембрана

2.1.4 Собственная пластинка слизистой

2.2 Морфологическая характеристика подслизистой основы

2.3 Кровоснабжение трахеи

2.4 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи в патологии

2.5 Слизистая оболочка трахеи при охлаждении

2.6 Процессы перекисного окисления липидов в норме и патологии

2.7 Антиоксиданты природного происхождения и их применение в медицине

2.7.1 Дигидрокверцетин его характеристика и применение в медицине

2.7.2 Арабиногалактан его характеристика и применение в медицине

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Материал и методы исследования

3.2 Гистологическая и ультраструктурная характеристика слизистой

и подслизистой оболочки трахеи интактных крыс

3.3 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи крыс при общем охлаждении организма (Т° - 15°С) в течение

28 дней по 3 часа ежедневно

3.4 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи крыс при общем охлаждении организма (Т° - 15°С) в течение

28 дней на фоне введения дигидрокверцетина

3.5 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи крыс при общем охлаждении организма (Т° - 15°С) в течение

28 дней по 3 часа на фоне введения арабиногалактана

3.6 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи крыс при общем охлаждении организма (Т° - 15°С) в течение

28 дней по 3 часа на фоне введения дигидрокверцетина и арабиногалактана

3.7 Анализ показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы в тканях крыс при общем охлаждении

и на фоне методов коррекции

4 Обсуждение полученных результатов

4.1 Морфологическая характеристика слизистой оболочки краниального и каудального отделов трахеи интактных крыс

4.2 Морфологическая характеристика слизистой оболочки краниального и каудального отделов трахеи при общем охлаждении

в течение 28 дней

4.3 Морфологическая характеристика слизистой оболочки краниального и каудального отделов трахеи при общем охлаждении

в течение 28 дней на фоне введения дигидрокверцетина

4.4 Морфологическая характеристика слизистой оболочки краниального и каудального отделов трахеи при общем охлаждении

в течение 28 дней на фоне введения арабиногалактана

4.5 Морфологическая характеристика слизистой оболочки краниального и каудального отделов трахеи при общем охлаждении

в течение 28 дней на фоне введения арабиногалактана

и дигидрокверцетина

4.6 Анализ показателей реакции перекисного окисления липидов и антиоксидантой системы в крови интактных

и экспериментальных крыс

5 ВЫВОДЫ

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

8 ПРЕДЛОЖНИЯ

Краткий указатель использованных в диссертации условных сокращений

АЛТ - аланинаминотрансфераза ACT - аспартатаминотрансфераза АФК - активная форма кислорода БАД - биологически активная добавка ДКВ - дигидрокверцетин ЖКТ - желудочно - кишечный тракт МДА - малоновый диальдегид ПОЛ - перекисное окисление липидов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Регенерационный потенциал слизистой оболочки трахеи при действии низких температур и на фоне применения природных антиоксидантов»

1 ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Организм постоянно приспосабливается к стрессовым факторам окружающей среды [48]. Одним из них является низкая температура [66, 71, 146]. В связи с деятельностью человека по освоению территорий с суровыми климатогеографическими условиями. Эта проблема заслуживает пристального внимания [4,8,9,66,70,101, 137, 171]. Неблагоприятные факторы воздушной среды оказывают отрицательное влияние в первую очередь на эпителий воздухоносных путей [89, 96]. Особенно это проявляется при длительном пребывании организма в условиях низкой температуры воздуха, а также влияния на организм таких показателей как относительная влажность, скорость воздуха [55, 96, 98]. Под действием неблагоприятных факторов наступает поражение воздухоносных отделов дыхательной системы [79, 125, 136, 149]. Поражение, возникает тогда, когда все механизмы защиты и адаптации задействованы, а резервы использованы [88, 130]. Многими исследователями, как Дальневосточного региона, так и Сибири активно изучается действие холода на живой организм [4, 9, 23, 38, 39, 40, 55, 103, 125, 123, 127, 130]. При воздействии на организм неблагоприятных факторов окружающей среды происходит мобилизация его функциональных и метаболических резервов [77]. На начальных этапах адаптации защитно-компенсаторные процессы протекают на субклеточном уровне и клеточном уровнях и могут приостановить развитие, если их функциональные резервы достаточны [8, 137]. Известно, что почти каждая ткань в организме имеет запас стволовых клеток, которые пополняют ее клеточный состав, постоянно уменьшающийся в ходе функциональных перегрузок или болезней [2, 30, 61, 62, 65, 93, 128, 182]. Состояния, в результате которого, организм справляется с воздействием неблагоприятных факторов окружающей среды за счет вовлечения базальных клеток, рассматривается как одна из стадий адаптации [131, 126, 129, 165].

Кроме этого при длительном действии на организм низких температур, наблюдается активизация перекисного окисления липидов и депрессия

антиоксидантных систем [25, 26, 28]. При повреждении образуются клеточные факторы роста, которые регулируют пролиферацию и дифференцировку клеток в организме способствующих восстановлению дефекта [128, 133, 149]. В результате отмечается повышение доли экспрессии факторов пролиферации, а также повышение доли коммитированных форм стволовых клеток костного мозга [11, 86, 113, 121]. При этом стволовые клетки восполняют потерю специализированных клеток. Стволовые клетки выделены во многих органах и тканях, но их количество незначительно. Из стволовой клетки возникают разные тканевые производные [30, 62, 122, 134, 156]. Иными словами, стволовые клетки являются недифференцированными, присутствуют в дифференцированной ткани, обладают способностью к размножению и дальнейшему развитию [86, 126, 131]. Клеточные факторы, при повреждении ткани постоянно повышаясь, стимулируют пролиферацию стволовых клеток, дифференцирующихся в новый тип эпителия [108, 132]. Хронические заболевания воздухоносных отделов легких в большинстве северных регионов Сибири и Дальнего Востока характеризуются торпидностью течения, вялотекущими обострениями, отсутствием параллелизма между клиническими и морфологическими данными [81, 124, 135]. С учетом специфики патогенеза становится очевидной необходимость индивидуализации лечения, подбор оптимальных лекарств. Комплекс терапевтических мероприятий должен предупредить действие повреждающих факторов, усилить механизмы адаптации, сохраняя на оптимальном уровне процессы саморегуляции. Анализ литературных данных позволяет предположить, что интенсивность перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантных систем, являются наиболее важными механизмами, при формировании хронического воспалительного процесса в органах дыхательной системы [57]. Одно из ведущих мест в области профилактики и лечения заболеваний занимают препараты природного происхождения, среди которых выделяют препараты, полученные на основе растительного сырья [41, 63, 115]. В древесине и коре лиственницы сибирской и лиственницы Гмелина содержаться значительное

количество флавонойдов-дигидрокверцетина, арабиногалактана и дигидрокемпферола [19, 47]. Одной из главных характеристик этой группы соединений является выраженная антиоксидантная активность [39, 41]. Дигидрокверцетин и арабиногалактан активирует процессы регенерации [111]. Таким образом, биофлавонойд дигидрокверцетин и полисахарид арабиногалактан, имеют ценное пищевое и медицинское назначение.

Изучение препаратов стимулирующих дифференциацию клеток на фоне холодового воздействия может помочь найти пути контроля за дифференцировкой клеток и возможность применения их для терапии заболеваний легких.

Настоящая работа выполнена самостоятельно и является составной частью комплексной программы исследований кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии ГБОУ ВПО Амурская ГМА Минздрава Российской Федерации.

Цель исследования. Целью предоставленной работы является изучение регенерационного потенциала эпителия слизистой оболочки трахеи у экспериментальных животных на фоне воздействия холода и применение в ходе эксперимента медикаментозной коррекции природными антиоксидантами.

Задачи исследования:

1. Выявить морфологические проявления повреждающего действия низких температур в каудальном и краниальном отделах трахеи у экспериментальных животных. Определить критерии оценки регенерационного потенциала эпителия слизистой оболочки трахеи у экспериментальных животных (крыс) на фоне длительного холодового воздействия.

2. Дать сравнительную оценку морфологических показателей структур эпителия различных отделов трахеи у экспериментальных животных при общем охлаждении организма на фоне введения дигидрокверцетина и арабиногалактана, а также их комбинированного применения.

3. Сопоставить результаты биохимических показателей перекисного окисления липидов и морфологических изменений различных отделов трахеи,

полученных при воздействии на организм низких температур на фоне введения арабиногалактана и дигидрокверцетина.

Научная новизна и ценность полученных результатов. На основании полученных морфологических и морфометрических данных исследования расширенны представления о строении эпителия слизистой оболочки трахеи в частности камбиальных клеток трахеи. Разработаны морфологические критерии для оценки структурной организации регенерационного потенциала трахеи лабораторных животных при охлаждении и критерии оценки воздействия дигидрокверцетина и арабиногалактана на слизистую оболочку трахеи. Изучено комплексное исследование по выявлению базальных клеток эпителия в экспериментах методом щелочной фосфатазы. Впервые приведена гистологическая характеристика регенерационного потенциала эпителия слизистой оболочки трахеи на фоне длительного охлаждения при совместном применении дигидрокверцетина и арабиногалактана. Проведено изучение эпителия трахеи на светооптическом, электронномикроскопическом, растровом уровнях при воздействии на организм низких температур на фоне введения дигидрокверцетина и арабиногалактана и сочетанном применении.

Теоретическая и практическая значимость работы. Экспериментальные исследования служат теоретической основой для применения в клинической практике дигидрокверцетина и арабиногалактана. В частности даны рекомендации по использованию дигидрокверцетина и арабиногалактана для лечебной коррекции нарушений, возникающих в воздухоносных путях при патологии, особенно в осеннее - зимний период. Фактические данные и теоретические обобщения могут использоваться в научной и педагогической работе ряда лабораторий и кафедр медицинских и ветеринарных вузов, биологических отделений университетов. Опубликованные материалы работы используются в учебном процессе и научных исследований кафедр гистологии, эмбриологии, цитологии; госпитальной терапии; фармакологии; ЦНИЛа Амурской ГМА; в научно-исследовательской работе отдела инновационные методы диагностики и терапии, морфологии и патологии ГНУ

Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии.

Апробация работы. Основные положения исследования и материалы диссертации представлены и обсуждены на научных конференциях и форумах регионального и международного уровнях: материалы второго съезда врачей пульмонологов Сибири и Дальнего Востока (Благовещенск, 2007); на 4-ом русско-китайском медицинском форуме (Благовещенск, 2007); региональной научно-практической конференции «Молодежь XXI века: шаг в будущее» (Благовещенск, 2008); на 6-ом российско-китайском фармацевтическом форуме (Благовещенск, 2009); региональной научно-практической конференции «Молодежь XXI века: шаг в будущее» (Благовещенск, 2010); 9-ом китайско-российском биомедицинском форуме (Харбин, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных статей, из них 3 статьи в издательствах, рекомендуемых ВАК.

Структура и объем диссертации. Общий объем диссертации составляет 149 страниц компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждения полученных результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения. Список литературы включает 195 источников, в том числе 57 зарубежных и 138 отечественных. Диссертационная работа содержит 67 рисунков, 10 таблиц.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Выявлены особенности морфологических изменений базальных клеток эпителия трахеи в регенерации каудальных и краниальных участков слизистой оболочки трахеи при действии низких температур на организм крыс.

2. Данные морфологического, морфометрического и биохимического исследований доказывают целесообразность применения дигидрокверцетина и арабиногалактана с целью коррекции регенерационного потенциала слизистой оболочки трахеи крыс связанных с действием низких температур.

3. Установлено, что наибольшим эффектом, позволяющим сохранить структуру воздухоносных путей при длительном действии низких температур, обладает дигидрокверцетин. Сочетанное применение арабиногалактана и дигидрокверцетина усиливают регенерацию в воздухоносных путях и нормализуют интенсивность перекисного окисления липидов и уровень антиоксидантной защиты.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи

интактных крыс

Стенка трахеи представлена: слизистой оболочкой с эпителиальным покрытием, расположенным на базальной мембране и собственным слоем подслизистой основы, включающей в себя железы, хрящевые полукольца с трахеальной связкой, снаружи окруженные соединительной тканью, которая связывает трахеобронхиальное дерево со структурами средостения.

2.1.1 Эпителий слизистой оболочки трахеи интактных крыс

Эпителий, выстилающий поверхность слизистой оболочки, является однослойным, многорядным, мерцательным и включает в себя различные клеточные элементы [157, 177]. В настоящее время в составе эпителия выделяют следующие типы клеток: 1) базальные, 2) промежуточные, 3) бокаловидные, 4) реснитчатые, 5) клетки Кульчицкого, 6) щеточные [91]. Базальные клетки являются основным источником клеточной пролиферации в интактном эпителии воздухоносных путей [89]. Базальные клетки располагаются на базальной мембране, имеют многоугольную или продолговатую форму. У них округлое, богатое ДНК ядро, занимающее большую часть клетки. Часто они находятся в состоянии митоза [153, 177]. Митохондрии этих клеток мелкие, разбросаны по всей цитоплазме. Канальцы эндоплазматической сети не имеют зернистости. Редко встречаются элементы комплекса Гольджи. Эти клетки имеют многочисленные соединения, снабжены тонофибриллами, за счет которых усиливается контакты между всеми элементами эпителия, расположенными на базальной мембране. Они относятся к малодифференцированным клеткам эпителия [148, 177]. Базальные клетки благодаря своей способности к пролиферации являются

стволовыми и служат своеобразным резервом для пополнения других клеточных популяций эпителиальной выстилки воздухоносных путей [22].

Базальные клетки являются основным источником клеточной пролиферации в интактном эпителии воздухоносных путей и представляют фракцию активно пролиферирующих клеток, так как на долю меченных Н-тимидином ядер приходится 70-95% от всех базальных клеток [149]. Органы и тканевые системы, обновляющиеся с участием стволовых клеток, некоторые исследователи относят к категории мультипотентных камбиальных клеток [131]. Стволовые клетки представляют собой самовоспроизводящуюся популяцию клеток, находящихся в обычных условиях вне пролиферативного пула в Оо-периоде. Эти клетки находятся в организме на всем протяжении жизни и служат резервом для пополнения дифференцированных клеток той или иной тканевой принадлежности. Митозом делится лишь часть стволовых клеток [183].

Очень близки по строению к базальным - промежуточные клетки, имеющие вытянутую форму и расположенные в промежутках между более поверхностно лежащими элементами. Ядро их округлой формы, цитоплазма уплотнена [87]. Форма клеток коническая, с широким основанием. Они близко прилежат к базальной мембране. Верхушка промежуточных клеток не соприкасается с внешней поверхностью и не доходит до просвета трахеи. Количество этих элементов в каудальном отделе трахеи почти в два раза больше, чем в краниальном [95]. В структуре эпителия слизистой оболочки трахеи значительное место занимают бокаловидные клетки. Соотношение бокаловидных клеток к реснитчатым составляет 1:4. Количество их уменьшается в каудальном направлении, а также количество реснитчатых и бокаловидных клеток по направлению от крупных бронхов к бронхам малого калибра прогрессивно снижается [84]. Активное участие в секреторном процессе принимает бокаловидные клетки, они неравномерно распределены по поверхности эпителия (в среднем приходится 5600-8500 клеток на 1 мм ) [138, 158]. Форма клетки и уровень расположения ядра зависят от ее

функционального состояния. В бокаловидной клетке обычно над ядром находиться комплекс Гольджи. Комплекс Гольджи - наиболее развитый органоид клетки и локализуется в около ядерной зоне. Он обнаруживается в окружении секреторных гранул. Последние в начале мелкие, а затем собираются группами и заполняют верхушку клетки, заставляя ее подниматься над уровнем клеточных элементов. Накапливая секрет, клетка приобретает форму бокала. Секреция осуществляется по мерокриновому типу [87, 177]. В бокаловидных клетках хорошо развит гранулярный эндоплазматический ретикулум, встречается множество рибосом. Митохондрии довольно редки. Лизосомы располагаются по всей цитоплазме, количество их нарастает к концу секреторного цикла. Цитолемма на свободной поверхности секреторных клеток образует большое количество микроворсинок, их особенно много в фазе заполнения, а по мере экскреции число их значительно уменьшается. Микроворсинки могут образовывать множественные разветвления, для того чтобы скорее удалить часть синтезированного материала. В некоторых случаях секреторные клетки не содержат гранул. Наконец, возможны варианты, когда немногочисленные гранулы располагаются по всей цитоплазме или в базальной части клетки.

Наиболее многочисленную группу эпителиального покрова составляют реснитчатые клетки. Приблизительно 5 из них приходится на бокаловидную клетку [84]. Реснитчатые клетки призматической формы, на апикальной поверхности они имеют реснички, которые формируют своеобразный рельеф слизистой оболочки трахеи и бронхов. Ядро реснитчатых клеток с четко очерченными контурами находится у основания. Цитоплазма - светлая, содержит большое количество рибосом. Встречаются лизосомы различного вида. Отмечено скопление митохондрий на участке, прилегающем к базальной мембране. Митохондрии, преимущественно, обнаруживаются в апикальной части клетки, имеют плотный матрикс, и много параллельных внутренних крист, идущих перпендикулярно их длинной оси. Около ядра митохондрии встречается в небольшом количестве. На апикальной поверхности

располагаются реснички, на одну клетку их приходится до 300 штук. Однако в клетках величина их может иметь существенные индивидуальные различия [100]. Длина ресничек лежит в пределах 4,5 - 5 мкм. В матриксе ресничек обнаруживаются трубочки по типу (9+2) , хотя такой принцип построения филаментов может варьировать. Встречаются реснички с увеличенным или уменьшенным количеством филаментов (9+1; 8+2;9+0) в зависимости от уровня среза по высоте реснички. Каждая ресничка опирается на базальное тельце, находящееся в апикальной части цитоплазмы клетки. Базальное тельце является существенной частью двигательного аппарата реснички. По-видимому, оно регулирует процесс поставляющей ресничке АТФ [106, 162]. На электронномикроскопическом уровне изучение реснички показало следующие данные: она состоит из оболочки, которая является продолжением утолщенной клеточной мембраны, внутри которой располагаются центральные и периферические фибриллы. Такой план строения они имеют на продольном срезе. На поперечном срезе в центре реснички располагаются две фибриллы, а по периферии девять пар. Между ресничками обнаружены мелкие цитоплазматические выросты - микроворсинки. В зависимости от функционального состояния клетки количество микроворсинок может значительно варьировать [94]. Поверхность ресничек играет роль каркаса, на котором укреплены молекулы ферментов. Так как АТФ - азная активность приходится в основном на наружные фибриллы, это позволяет предполагать, что движение ресничек в целом обусловлено именно ими. Между ресничками обнаружены мелкие цитоплазматические выросты - микроворсинки. Длина микроворсинок различна, но в области межклеточных контактов они самые длинные. Количество микроворсинок может значительно варьировать в зависимости от функционального состояния клетки [81]. Элементы мерцательного эпителия не соприкасаются непосредственно друг с другом. Образующиеся между ними щели обеспечивают циркуляцию тканевой жидкости и в связи с этим играют важную роль в поддержании клеточного питания. Помимо истинных мерцательных клеток, в эпителии имеются

элементы, у которых, значительно, уменьшено количество ресничек и увеличено число микроворсинок, эти клетки носят названия щеточных. Наличие большого количества микроворсинок помогает клетке обеспечить регуляцию постоянного двигающегося жидкого надреснитчатого слоя мукоциллиарного клиренса [87]. Клетки Кульчитского относятся к нейросекреторным элементам слизистой оболочки дыхательных путей, продуцирующих серотонин [91]. Эти клетки, выявляемые микроскопически по их аргирофилии располагаются поодиночке или группами в слое эпителия, выстилающие трахею и бронхи. Нейросекреторные клетки находятся на базальной мембране, к которой подходит в данном участке большое количество кровеносных капилляров и нервных окончаний [111, 135]. Электронномикроскопически в клетках Кульчитского обнаружены характерные внутрицитоплазматические гранулы, дающие положительные гистохимические и спектрофлоуметрические реакции на серотонин. Клетки Кульчитского в трахее крысы напоминают те же элементы, что у человека [98].

2.1.2 Физиологическая регенерация эпителиальной выстилки слизистой

оболочки воздухоносных путей.

Физиологическая регенерация эпителиальной выстилки слизистой оболочки воздухоносных путей изучена недостаточно полно. При определении интенсивности физиологической регенерации используется, как правило, два критерия: уровень митотической активности и интенсивность синтеза ДНК в популяции эпителиальных клеток. Оба этих показателя указывают на число клеток, принимающих участие в пролиферации [42, 144].

Эпителиальные элементы - недолговечны. Авторадиографические исследования с Н3- с тимидином показали, что митотически делятся только базальные клетки и из них вначале образуются бокаловидные, а позднее появляются реснитчатые [148, 157, 184]. В связи с этим можно считать, что базальные клетки представляют собой фракцию активно пролиферирующих

стволовых клеток и являются основным источником пополнения популяции бокаловидных и реснитчатых клеток многорядного мерцательного эпителия воздухоносных путей. Цитоплазма базальных клеток бедна органеллами и не имеет какой-либо функциональной специализации. В эпителии трахеи взрослых крыс до 90 - 95% всех митозов приходится на долю базальных клеток. Остальные 5-10% митозов располагаются в переходных клетках. Пролиферация клеток эпителия воздухоносных путей подвержена суточным колебаниям. Максимальные показатели митотического деления эпителиальных клеток трахеи крыс приходятся на утренние часы (от 4 до 8 ч), а минимальные - на дневные и вечерние (от 14 до 24 ч). Максимальное количество ДНК - синтезирующих клеток наблюдается также в утренний период [108]. Таким образом, согласно современным представлениям, в обновлении эпителиальной выстилки слизистой оболочки бронхов легких млекопитающих одновременно участвуют несколько фракции клеток: базальные (малодифференцированные); переходные с более высокой степенью дифференцировки; бокаловидные с высокой степенью дифференцировки и функциональной специализации [97].

Следовательно, пополнение состава многорядного мерцательного эпителия бронхов протекает двумя путями: за счет пролиферации базальных клеток, часто называемых камбиальными или стволовыми, и в меньшей степени в результате митотического деления высокодифференцированных клеток [65]. По мере уменьшение калибра бронхов и относительного увеличения в их эпителиальной выстилке клеток с высокой функциональной специализацией доля участия пролиферации дифференцированных клеток в ее физиологической регенерации возрастает [79]. Сравнительно низкий уровень пролиферативной активности и продолжительное время обновления отдельных фракций клеток позволяет отнести эпителиальную выстилку слизистой оболочки воздухоносных путей к медленно обновляющимся тканевым системам [96].

2.1.3 Базальная мембрана

Все клетки эпителия прикреплены к базальной мембране. Контактируя или с телами соседних клеток или с их отростками. Базальная мембрана почти полностью покрыта эпителиальными клетками [50, 148, 157, 177, 184].

Под эпителием находится базальная мембрана толщиной около 60-100 мкм [84, 87]. Эпителий располагается на базальной мембране, которая состоит из аморфного вещества, поэтому при окраске гематоксилин эозином структура ее не выявляется. Она состоит из мельчайшей сети ретикулярных волокон, погруженных в аморфное вещество, придающее этому участку однородную плотность. Базальная мембрана хорошо различима лишь в электронном микроскопе. Поверхность базальной мембраны, обращенная к эпителию, неровная и имеет нитевидные углубления, с которыми в основном контактируют базальные клетки. Это обеспечивает более прочную связь базальных клеток и мембраны, по сравнению с остальными элементами эпителия [150].

2.1.4 Собственная пластинка слизистой

Собственная пластинка (lamina propria) образованна рыхлой волокнистой соединительной тканью. Волокнистые структуры, представлены аргирофильными, нежными коллагеновыми и эластическими волокнами. Последние образуют продольные пучки в субэпителиальной зоне. Клеточные элементы, представленные в основном фибробластами, макрофагами, лимфоцитами, реже встречаются тучные клетки, плазматические эозинофильные и нейтрофильные лейкоциты. Количественный и качественный состав элементов слизистой в значительной степени зависит от функционального дыхательного тракта. Часто у взрослых в слизистой встречаются лимфоцитарные фолликулы. Сосуды лимфоэпителиального узелка часто в значительной степени инфильтрированы лимфоцитами. Под

эпителием, покрывающем лимфоидный фолликул, располагаются клетки, сходные по строению с базофилами [100, 108].

Зона лимфоидного образования обладает выраженной реабсорбцией белковых веществ, что позволяет рассматривать ее как структуру, способную к захвату и транспорту через базальную мембрану чужеродного материала [110].

2.2 Морфологическая характеристика подслизистой основы

Подслизистая основа, которую составляет рыхлая соединительная ткань, располагается под собственной пластинкой слизистой. Клеточные элементы представлены фибробластами, макрофагами, гранулоцитами, лимфоцитами, тучными и плазматическими клетками. Встречаются зоны лимфоидной инфильтрации. Особое внимание привлекают слизисто - серозные железы, концевые отделы которых расположены в глубине подслизистой основы. У человека и некоторых других животных железы сложные, трубчато-альвеолярные [102, 158, 166].

Топография и форма желез неодинаковы и находятся в определенных взаимоотношениях со структурными особенностями строения разных уровней трахеобронхиального дерева. Наибольшая концентрация желез отмечается на задней поверхности трахей, особенно в месте ее бифуркации, а также в межхрящевых промежутках боковых стенок [167]. У человека в перепончатой части трахеи железы располагаются в несколько рядов [52].

Ряд авторов выделяют следующие отделы желез: проток, выстланный мерцательным эпителием, непосредственно открывающийся на поверхность слизистой оболочки. Собирательный проток построен из высоких призматических эозинофильных клеток, содержащих многочисленные крупные митохондрии. Такая структура эпителия собирательного протока позволяет предположить, что этот отдел регулирует концентрацию ионов и воды [138].

Из собирательных протоков выходят секреторные трубки, выстланные слизистыми клетками, от которых терминально отходят серозные [174].

Согласно классификации В. Meyrich, L. Sturgess, (1975) в составе желез выделяют следующие типы клеток: 1) серозные, 2) слизистые, 3) клетки выводных протоков, 4) миоэпителиальные, 5) лимфоциты и макрофаги. Концевые отделы желез образованные эпителиальными клетками, выделяют соответственно слизистый и белковый секрет. Межклеточные пространства между железистыми клетками на ранних этапах секреции широкие, что связано, по- видимому с активной абсорбцией воды [169].

Количественное взаимоотношение серозных и слизистых отделов желез зависит от возраста и влияния различных факторов внешней и внутренней среды [118, 138].

2.3 Кровоснабжение трахеи

Наиболее богата снабжена сосудами область бифуркации трахеи [104]. Артерии в стенке трахеи располагаются в перибронхиальной соединительной ткани и, отдавая ветви, образуют две капиллярные сети: глубокую в подслизистой оболочке и поверхностную, достигающую собственного слоя слизистой, где капилляры находятся рядом с базальной мембраной и иногда отделены от нее только тонким слоем коллагеновых волокон. Базальная мембрана этих капилляров очень тонкая [111].

В слизистой оболочке трахеи встречается большое количество артериовенозных анастомозов. Артериолы и венулы в собственной пластинке слизистой часто имеют направление перпендикулярно капиллярному руслу и располагаются в межхрящевых промежутках [172]. Венозное русло представлено тремя сплетениями: 1) субэпителиальное, 2) подслизистое, 3) перибронхиальное [104]. Мелкие вены, отходят от капилляров располагаются под эпителием, анастомозируют между собой и образуют субэпителиальные сплетения, которые, сливаясь в более крупные стволики, следуют кнаружи и впадают в вены подслизистого слоя, образуя подслизистое сплетение. Вены, проникая в адвентицию и соединяясь здесь с венами перибронхиального сплетения, впадают в систему бронхиальных вен [108].

На основании обзора литературы по гистофизиологии слизистой и подслизистой основы трахеи и главных бронхов можно сделать заключение, что в современной литературе недостаточно освещены вопросы морфологии регенерационного потенциала эпителиального пласта, процентное соотношение клеток эпителия, характер дифференцировки, секреторная активность железистого аппарата - бокаловидные клетки и трахеальные железы, особенности строения рыхлой соединительной ткани слизистой собственной пластики слизистой и сосудов микроциркуляторного русла по всему периметру трахеи в зависимости от изучаемого уровня этого органа.

2.4 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи в

патологии

Воспалительный процесс затрагивает многие структуры стенки бронха: покровный эпителий, базальный слой, мышцы, смешанные экзоэпителиальные железы, хрящи, волокнистые структуры соединительной ткани [81]. При воспалительных процессах в стенке бронха поврежденный эпителий интенсивно регенерирует; он приобретает большую толщину, выглядит многослойным, характеризуется полиморфностью ядер и клеток [84]. При хроническом катаральном воспалении все слои стенки бронха различимы. Количество бокаловидных клеток увеличено, цитоплазма секретирующих клеток окрашивается светлее, чем обычно. В базальном слое, эпителий выглядит неравномерно утолщенным, в собственном слое слизистой оболочки увеличено число коллагеновых волокон, пучки их утолщены, местами они теряют четкие очертания, формируя поля гиалиноза [60, 97].

Клеточная инфильтрация чаще бывает при хроническом катаральном воспалении затрагивающая все слои стенки бронха. Количество бокаловидных клеток увеличено, цитоплазма секретирующих клеток окрашивается светлее, чем обычно и образует узкую полоску в подэпителиальной зоне. Она может быть умеренной или выраженной и диффузно распространяться на всю слизистую оболочку с переходом на подслизистую основу. Характер

инфильтрата может быть различным, чаще преобладают лимфоциты, в отдельных случаях могут преобладать плазматические клетки [82, 150]. В процессе воспаления отмечается ультраструктурная перестройка реснитчатых и бокаловидных клеток, отражающая состояние их специфической функции. У реснитчатых клеток при хронических формах бронхита нарушается регулярное расположение ресничек, последние нередко полностью исчезают. В бокаловидных клетках в ранние сроки воспаления преобладают признаки гиперсекреции, соответственно гиперплазируются структуры, ответственные за синтез секрета - эндоплазматический ретикулум и пластинчатый комплекс, изменяются структуры обеспечивающиеся энергией транспорт секрета -митохондрии [83]. Согласно мнению большинства исследователей, патологические изменения затрагивают в той или иной степени все элементы бронхиального эпителия и прежде всего мерцательные клетки. Нарушение ресничек считают одним из наиболее важных элементов в патогенезе хронического бронхита [43, 173]. При том, что структура фибриллярного аппарата ресничек меняется, поверхностная мембрана претерпевает некоторые изменения: она становится волнистой, и местами теряет четкость. Иногда на ресничках возникают боковые выпячивания, благодаря которым поперечные срезы таких ресничек приобретают вид теннисных розеток [83, 81]. Также отмечают при хроническом бронхите среди ресничек большое количество миэлиноподобных структур. При изучении бронхиального эпителия многие авторы обращают внимание на большие цитоплазматические выросты на апикальной поверхности мерцательных клеток [139]. В клетках с расширенными микроворсинками часто заметно изменены внутриклеточные цитоплазматические структуры. В таких клетках слегка расширены элементы эндоплазматического ретикулума, митохондрии имеют просветленный матрикс и расширенные кристы, значительно увеличено количество осмиофильных телец, ограниченных мембраной. При раздражении слизистой оболочки бронха в эпителии наблюдается гиперплазия бокаловидных клеток [173]. Количество бокаловидных клеток может уменьшаться, их цитоплазма

уплотняется, ядра пикнотизируются. При хроническом бронхите реснитчатый эпителий часто приобретает признаки плоскоклеточного. Морфогенез регенераторного процесса складывается из двух фаз - пролиферации и дифференцировки. В фазу пролиферации размножаются молодые, недифференцированные клетки. Эти клетки называются камбиальными, стволовыми клетками или клетками - предшественниками. Деление клеток продолжается до тех пор, пока не будет заполнен дефект ткани. В фазу дифференцировки молодые клетки созревают, происходит их структурно-функциональная специализация. В легких, камбиальные клетки дифференцируются в базальные и слизистые секреторные клетки бронхов и клетки II типа альвеол. Возможным механизмом восстановления альвеолярного эпителия, после повреждения легких, является способность к делению альвеолоцитов II типа. Кроме того, многими исследователями была показана миграция и участие в репаративной регенерации ткани прогениторных клеток костного мозга [152, 169, 189].

2.5 Слизистая оболочка трахеи при охлаждении

В ответ на холодовое воздействие и гипоксию усиливается секреторная активность бокаловидных клеток и желез подслизистого слоя при одновременном повреждении апикальной поверхности реснитчатых клеток [173, 175]. Эти изменения с одной стороны, обусловлены согреванием поступающего через дыхательные пути воздуха, а с другой - приводят к нарушению мукоциллиарного клиренса, что может явиться причиной возникновения бронхопневмонии [4, 48, 71, 79, 95].

Стереоструктурные изменения слизистой оболочки трахеи и бронхов при ступенчатом охлаждении характеризуют три основных адаптогенеза, описанные в ряде работ [48, 65].

Первый период - период адаптационного напряжения (первые три недели) характеризуются повреждением реснитчатого аппарата

эпителиальных клеток, вплоть до его частичной гибели, и увеличением числа секретирующих бокаловидных клеток.

Второй период - период стабилизации (третья четвертая неделя охлаждения) - характеризуется частичным восстановлением реснитчатых клеток, снижением числа и уровня секреции бокаловидных клеток.

Для третьего периода - периода адаптированности (пятая неделя эксперимента) - характерно полное восстановление реснитчатого аппарата трахеи и бронхов и резкое уменьшение секретирующих бокаловидных клеток.

Таким образом, представленные ультраструктурные изменения трахеи и бронхов при ступенчатом охлаждении животных носят компенсаторно-приспособительный характер, что позволяет достичь состояния адаптированности слизистой оболочки дыхательных путей.

Полная пролиферация эпителия воздухоносных путей была определена в работах [148] и составила 0,83±0,47%, за счет клеток Клара - 9%.

Установлено, что клетки Клара служат источником для пополнения их собственной популяции, а также популяции реснитчатых клеток. Клетки Клара обновляют клетки бронхиального эпителия у хомяка в нормальном состоянии. Пролиферативный ответ бронхиолярного эпителия у крыс, подвергшихся воздействию газов, происходит преимущественно из-за деления клеток Клара. В легких взрослых животных в обычных условиях клетки Клара обновляются очень медленно. Поскольку клетки Клара играют вероятную, если не определенную роль в заболеваниях легких, опухолевой и неопухолевой природы, знание клеток Клара и их пролиферации в нормальном человеческом легком важны, когда заболевание диагностируется морфологически [174]. Таким образом, клетки Клара играют существенную роль в пролиферации нормального трахеобронхиального эпителия у человека, а также в нормальном функционировании эпителия дистальных воздухоносных путей.

2.6 Процессы перекисного окисления липидов в норме и патологии

Перекисное окисление липидов (ПОЛ) существует в нормально функционирующих клетках, где постоянно содержатся липидные гидроперекиси в невысокой концентрации [16, 51,161, 186]. Активация гидроперекисных процессов происходит либо в результате чрезмерно усиленной генерации активных радикалов кислорода, либо вследствие недостаточности антиоксидантных механизмов, либо при сочетании двух этих явлений [14, 32]. Так известно, что избыточная пероксидация приводит к нарушению клеточных и субклеточных мембранных структур, к поражению мембраносвязанных ферментов [25, 33]. Интенсификация перекисного

окисления липидов имеет особое значение для функционирования системы органов дыхания. Внешняя поверхность слизистой оболочки трахеи постоянно контактирует с кислородом, а также такими активными инициаторами перекисного окисления, как озон и двуокись азота [33, 85, 166]. Свободнорадикальное повреждение эпителия трахеи характеризуется повышенной секрецией биологически активных веществ, что ведёт к воспалительной клеточной инфильтрации, повышению сосудистой проницаемости, отёку тканей, местной гипоксии [26]. Есть много данных, свидетельствующих об усилении перекисного окисления липидов при гипоксическом и ишемическом повреждении [29, 90]. При остром воспалении свободнорадикальные процессы вызывают разрушение межклеточного матрикса соединительной ткани, но могут также стимулировать синтез её волокон и оказывать повреждающее действие на фибробласты, в то же время участвуют в пролиферации и созревании клеток фибробластического ряда [25, 28, 72, 77]. Радикалы кислорода, образуемые активированными гранулоцитами и макрофагами, служат фактором вторичного свободнорадикального повреждения, что обусловливает длительность воспалительного процесса [ 16, 27,28,31,53, 117].

Активность системы перекисного окисления липидов в тканях контролируется антиоксидантной системой, которая в трахеи обеспечивает не

только защиту от повреждающего действия свободных радикалов, но и влияет на адаптационные реакции [1, 17, 54, 85, 142, 159, 179]. Однако следует отметить, что отрицательные последствия от липидной пероксидации возникают лишь при истощении резервов системы эндогенных антиоксидантов [14, 31, 36, 148, 161]. Рядом авторов показано, что увеличение в крови токоферола служит, очевидно, защитной реакцией организма в условиях избыточного накопления гидроперекисей липидов и направлено на поддержание реакцией ПОЛ в изменённой ткани лёгкого на стационарном уровне [16, 26, 28, 129, 179]. В отсутствии антиоксидантной коррекции уровень функционирования защитных систем прогрессивно снижается, содержание продуктов ПОЛ достигает максимума, причём в их структуре преобладают трудно утилизируемые вторичные соединения (малоновый диальдегид). Уменьшение на этих этапах первичных продуктов ПОЛ, таких как диеновые коньюгаты, гидроперекиси, вследствие некомпенсируемого "выгорания" субстратов для их образования может приводить к ошибочному заключению о благополучии в системе ПОЛ - антиоксиданты [18, 29, 33, 31, 168]. В динамике охлаждения установлен фазовый характер течения перекисного окисления липидов у экспериментальных животных. Воздействие низких температур приводило в экспериментах на животных к достоверному увеличению в тканях содержания начальных и конечных продуктов ПОЛ [38, 39, 40, 41, 53, 70 77, 124, 125, 131]. Повышение уровня антиоксидантов путем их дополнительного введения всегда дает выраженное возрастание устойчивости организма к различным воздействиям, стимулирующим процессы перекисного окисления в биомембранах [15, 38, 90, 117, 119].

2.7 Антиоксиданты природного происхождения и их применение в

медицине

Многочисленные экспериментальные и клинические наблюдения свидетельствуют, что повышение уровня антиоксидантов путем их дополнительного введения всегда дает выраженное возрастание устойчивости

организма к различным воздействиям, стимулирующим процессы перекисного окисления в биомембранах. Лекарственные препараты, способные предотвращать избыточный синтез АФК, снижать интенсивность ПОЛ и способствовать повышению содержания и активности эндогенных антиоксидантов, входят в группу антиоксидантных средств [39, 57, 67, 110, 163]. Флавонойды относятся к группе природных антиоксидантов, которые обладают прямым антиоксидантным действием. Флавонойды представляют собой широкий класс природных полифенольных соединений, структурно содержащих 2 ароматических кольца, соединенных через пирановый или пироновый цикл. Структура большинства флавоноидов соответствует структуре ядра токоферолов, но в отличие от последнего содержит фенольный фрагмент, определяющий в большинстве случаев его антиоксидантные свойства. Одно из наиболее известных свойств флавоноидов - их превосходная антирадикальная активность, используемая при инактивации АФК на фоне инфекции, воспалительных процессов, ожогов, лучевых поражений [34, 39]. Флавонойды считают одними из наиболее значимых антиоксидантов, антиокислительная активность которых возрастает в присутствии аскорбиновой кислоты. Другой причиной высокой антиоксидантной активности флавоноидов является их способность ингибировать ряд ферментов, включая гидролазы, фосфолипазы, оксидоредуктазы, циклооксигеназы, ДНК-синтетазы, РНК-полимеразы, фосфатазы, фосфокиназы, оксигеназы, оксидазы аминокислот [20, 31, 39, 139, 140, 187]. Основным механизмом антиоксидантного действия веществ этой группы является взаимодействие с образующимися в ходе ПОЛ перокси и алкокси радикалами за счет легко подвижного атома водорода одной или нескольких фенольных групп в составе молекулы антиоксиданта. Другой возможный антиоксидантный механизм связан с их хеллатирующими металл свойствами с помощью фенольных ОН групп. Флавоноид хеллатируя металл, может изолировать эти ионы и, таким образом, предотвратить формирование

свободных радикалов [140, 149, 162]. В качестве лекарственных субстанций практическое применение имеют дигидрокверцетин и арабиногалактан.

2.7.1 Дигидрокверцетин его характеристика и применение в медицине

Флавоноиды, полифенолы растительного происхождения, положительно влияющие на здоровье человека, широко используются в медицине [15]. Флавоноид дигидрокверцетин относится к группе природных полифенолов, широко представленных в продуктах растительного происхождения [34, 111]. Дигидрокверцетин входит в состав целого ряда БАД (Капилляр, Дигидрокверцетин в таблетках по 10 мг), в частности, производителями г. Благовещенска (предприятием «Аметис») выпускаются БАДы на основе дигидрокверцетина Лавиокард и Виталаг [39]. Впервые ДКВ был обнаружен в древесине дугласовой пихты в конце 40-х годов XX века [145]. ДКВ, как вещество, близко по строению молекулы к рутину и кверцетиту, обладает выраженной Р-витаминной активностью [80]. Это дает возможность использовать содержащие его продукты как в лечение заболеваний, сопровождающихся подобными реакциями, так и в профилактических целях, снижая вредное воздействие самых разных неблагоприятных факторов внешней среды - от промышленных загрязнений и инфекционных агентов, до бытовых аллергенов. Одной из главных характеристик этой группы соединений является выраженная антиоксидантная активность [12, 34]. В результате экспериментального доклинического изучения ДКВ было показано, что препарат оказывает благоприятное воздействие на сосуды, замедляет прогрессирование атеросклероза, уменьшает вязкость крови, снижает риск тромбообразованию, улучшает микроциркуляцию, а также обладает антиоксидантными свойствами, капилляропротекторной и противоотечной активностью, превосходящей активность кверцетина [33, 39 58]. ДКВ активирует процессы регенерации слизистой желудка, оказывает гепатопротекторное (антитоксическое) действие, проявляет радио протекторные, гиполипидемические и диуретичесике свойства [78, 114, 162,

191]. Вместе с тем, нельзя исключить взаимодействия ДКВ с супероксидными анионами. Результаты исследований свидетельствуют о том, что ДКВ тормозит тетрациклин и тетрахлорметан - индуцированную липидную пероксидацию микросом печени, приводящую к интенсивному выходу из поврежденных печеночных клеток трансаминаз (AJIT, ACT и др.) [148]. Изучено влияние дигидрокверцетина на процесс перекисного окисления липосомальных мембран из яичных фосфолипидов, индуцированный сульфатом железа или системой Fe - аскорбат. Показано, что антиокислительная активность дигидрокверцетина сравнима с антиокислительной активностью альфа - токоферола [39]. Предполагается, что механизм антиокислительного действия дигидрокверцетина заключается в перехвате липидных радикалов [76]. Уже упомянутые ранее свободные радикалы обладают ярко выраженным токсическим воздействием на сердечную мышцу, и ДКВ, как мощный антиоксид ант, обладающий отмеченным выше сосудоукрепляющим действием, способен стать эффективнейшим средством профилактики широкого круга сердечнососудистых заболеваний, а также поддерживающим фактором для людей, уже подверженных этим патологиям [20, 45, 161, 193, 195].

Препарат ДКВ вызывает существенное снижение липопротеидов в сыворотке крови. Его способность снижать в крови липопротеиды высокой плотности [64, 172,180,] вызывающих накопление холестерина, позволяет рассматривать производные ДКВ как профилактические и лечебные средства против атеросклероза [31, 46, 185, 192, 193]. Уменьшая отрицательный заряд стенки кровеносных сосудов, они препятствуют тромбообразованию. Флавоноиды уменьшают сосудистую проницаемость, чем объясняется их противоотечное, противовоспалительное и противоаллергическое действие [141, 163, 193]. ДКВ, обладая антитоксическим эффектом, способен выводить токсины из печени [58, 118]. Весьма важно, что ДКВ обладает чрезвычайно низкой мутагенной активностью [118, 195]. Имеются работы говорящие о том, что дигидрокверцетин обладает способностью ускорять процессы образования

фибрилл и способствовать стабилизации фибриллярной формы коллагена которая может найти применение в медицине [112]. Антирадикальную и антиоксидантную активности можно считать основным биологическим эффектом флавоноидов. Механизм действия дигидрокверцетина весьма разнообразен и действует на нескольких уровнях организации. Важным является установление адекватных клинико-биохимических маркеров оценки влияния флавоноидов на организм. Эти и другие вопросы требуют своего дальнейшего изучения.

2.7.2 Арабиногалактан его характеристика и применение в медицине

Арабиногалактан относится к группе полисахаридов хвойных видов древесины [194]. Арабиногалактаны, присутствуют практически во всех хвойных видах древесины, имеют общее свойство - они обладают галактановым кором и имеют боковые цепи, представленные преимущественно галактозой и арабинозой, в некоторых случаях еще галактуроновой и глюкуроновой кислотами [13, 14, 154, 158, 177]. Арабиногалактан получают за счет сорбции примесей на твердых носителях, а также с использованием флокулянта и коагулянта, который позволяет получить арабиногалактан высокой степени чистоты [47, 73, 75, 118]. С 1965 года в США арабиногалактан используется как пищевая добавка [13, 19, 118]. Арабиногалактан представляет собой аморфный, сухой порошок белого, или бледно-серого, или бледно кремового цвета, без вкуса и запаха. Благодаря идеальной растворимости и мягкому вкусу, порошок легко растворяется в воде и соках и легко принимается даже детьми [37, 39]. Обладает способностью удерживать большое количество молекул воды с образованием вязких растворов [74, 140, 181]. Широкий спектр биологической активности арабиногалактанов связывают с широким диапазоном молекулярных масс, констатируя, что физиологическая активность хорошо коррелирует с величинами молекулярных масс, так низко молекулярный арабиногалактан (5000-15000) имеет тенденцию к проявлению антикомплементарной

активности, в то время как высокомолекулярный полисахарид (75000-25000) стимулирует ретикулоэндотелиальную систему [178, 192]. Арабиногалактаны средней массы (15000-50000), как правило, усиливают активность макрофагов [75, 73]. Недавно показана противоопухолевая активность арабиногалактана лиственницы западной. Он ингибирует рост и способствует разрушению клеток некоторых видов злокачественных опухолей. Виталаг содержит арабиногалактан (260 мг) - полисахарид, источник растворимых пищевых волокон, необходимых для функционирования иммунной системы, и дигидрокверцетин (30 мг) - биофлавоноид, мощнейший антиоксидант. Улучшает состояние ЖКТ, укрепляет иммунную систему, улучшает микроциркуляцию крови, нормализует состояние сосудистой системы, препятствует образованию тромбов. Арабиногалактан оказывает антимикробное действие в отношении некоторых бактерий in vitro, проявляет гастропротекторное действие in vivo в условиях этаноловой и индометациновой моделей, активирует метаболизм клеток, усиливает бактерицидный эффект в отношении поглощенных микроорганизмов. Стимулирует антиинфекционную устойчивость организма, за счет, повышения функциональной активности клеток фагоцитарной системы организма при инфицировании. Выступает целенаправленным носителем для доставки диагностических и терапевтических агентов, ферментов, нуклеиновых кислот, витаминов, гормонов к клеткам [143]. Арабиногалактан повышает синтез жирных кислот с короткой цепью, главным образом, бутиратов и проприонатов. Эти специфические жирные кислоты имеют крайне важное значение для здоровья кишечника, так как делает клетки толстой кишки более устойчивыми к опухолевому росту, и различным заболеваниям кишечника. Арабиногалактан можно использовать в качестве пищевого волокна, добавки с низкой сладостью, улучшающей пищеварение и оказывающей защитное действие на организм. В частности показано, что арабиногалактан обладает свойством пребиотика. Молекулы арабиногалактана оказывают антиаллергический эффект, стимулируют натуральные киллеры и

эндотелиальные клетки [75, 76, 154]. Обнаружена антимутагенная активности арабиногалактана [37, 74, 180]. В результате хронических заболеваний таких как вирусный гепатит С, наблюдалось уменьшение количества натуральных киллеров. В исследованиях показано, что употребление в рацион арабиногалактана вызывает увеличение натуральных киллеров [39]. Таким образом, арабиногалактан представляет собой уникальный природный полисахарид, имеющий ценное техническое, пищевое и медицинское назначение [168]. Стратегия модификаций арабиногалактана заключается в использовании его как синтона для создания лекарственных препаратов полифункционального действия [158]. Общей особенностью действия биоантиоксидантов в антиоксидантной системе являются сложные многостадийные механизмы, включающие аддитивные и синергические взаимодействия, которые и обеспечивающие высокую эффективность и сбалансированность функционирование антиоксидантов в организме.

Таким образом, природные антиоксиданты, входящие в состав растений, представляют собой многокомпонентные системы со сложным и разноплановым характером взаимодействия между компонентами, которые встраиваются в физиологическую антиоксидантную систему клетки, интегрируясь с нею и формируя новые соотношения и взаимодействия между всеми компонентами системы, результатом чего является нормализация гомеостаза и повышение эффективности адаптивных механизмов в теплокровном организме [39].

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1 Материал и методы исследования

Объект исследования. Экспериментальная часть выполнена на беспородных белых крысах (Rattus norvegicus) отряда Rodencia, которые являются наиболее распространенными лабораторными животными и удобной моделью для изучения влияния охлаждения на организм [46]. Исследование проведено на 90 белых беспородных половозрелых крысах-самцах с массой тела 150-200 г. Пол животных был выбран во избежание влияния астрального цикла на результаты эксперимента и, в частности, для исключения влияния эстрогенов на показатели перекисного окисления липидов и антиокислительной системы [36]. Объектом исследования служила стенка трахеи. Содержание животных и их питьевой режим были одинаковы. Убой животных производили в утренние часы (9 - 9,30), крысе вводили внутримышечно 1% раствор калипсола в соответствии с требованиями приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.77г. «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использование экспериментальных животных». В 1975 году в Благовещенском мединституте была создана и внедрена модель, позволяющая изучить действие низких температур на организм животных. Учитывая, что охлаждение в течение 28 дней вызывает в структурах органов изменения, которые соответствуют стадии адаптивного напряжения [36]. Манипуляции, не связанные с охлаждением животных проводили при нейтральной температуре 20 - 22°С [46]. Воздействие низких температур. Животных данной группы охлаждали в климатокамере "ILKA" (Feutron, ГДР) при температуре - 15°С с соблюдением адекватных условий влажности и вентиляции. Охлаждение проводилось в течение 28 дней по 3 часа ежедневно. Все животные содержались в виварии в соответствии с «Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник» (от 6.04.1993г.), получали питание в соответствии с нормами, утверждёнными приказом № 163 МЗ СССР от

10.03.1986. Все эксперименты выполнялись согласно правилам бережного обращения с лабораторными животными (Приложение 4 к приказу № 755 МЗ СССР).

Объектом нашего исследования были краниальные и каудальные отделы слизистой и подслизистой оболочек трахеи крыс, возрастом 6-8 месяцев, весом 150 - 200 грамм. Краниальный отдел трахеи - участок в области 2-7 полукольца, расположен ниже гортани. Каудальный отдел трахеи участок в области 1-5 полукольца выше зоны бифуркации. Экспериментальные животные подвергались воздействию низкой температуры (-15°С) в климатической камере (тип - 3001 «ILKA»), по 3 часа ежедневно в течение 28 дней. Режим охлаждения выбирался с учетом возникновения в таких условиях у подопытных животных, выраженных биохимических и морфологических изменений [46]. При исследовании животные были разбиты на следующие группы (табл.1). Объектом гистологического исследования являлись кусочки трахеи, подвергшиеся общему холодовому воздействию. Кровь из полости сердца отбиралась на биохимическое исследование. Взятые образцы тканей фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина, затем были дегидратированны, залиты парафином и микротомированы. Делались продольные и поперечные срезы толщиной 3-4 мкм и были окрашены гематоксилином и эозином [109]. Полученные гистологические препараты подвергались световой и электронной микроскопии для установления морфологических критериев изменения структуры трахеи у экспериментальных животных.

Для электронной микроскопии из краниального и каудального отдела трахеи острой бритвой вырезали кусочки ткани размером 1x1мм. Материал фиксировался 1 час в 2,5% растворе глютаральдегида на 0,1 M фосфатном буфере (рН 7,4). Затем образцы ткани помещали в 1% раствор осмиевой кислоты на 0,1 M фосфатном буфере (рН 7,4) на 1,5 часа.

Таблица 1 - Экспериментальные группы животных

№ группы Краткая характеристика групп Кол-во животных

1 Контрольная. Животные содержались в условиях вивария в течение всего эксперимента, Т - 22 °С 15

2 Животные подвергались общему холодовому воздействию в течение 28 дней при Т- 15°С 20

3 В течение двух недель предшествующих охлаждению животным перорально вводили дигидрокверцетин из расчета 5мг/100г. Затем животных подвергали общему холодовому воздействию в течение 28 дней по 3 часа ежедневно при Т - 15°С на фоне перорального введения препарата в течение всего эксперимента 18

4 В течение двух недель предшествующих охлаждению животным перорально вводили арабиногалактан из расчета 5мг/100г. Затем животных подвергали общему холодовому воздействию в течение 28 дней по 3 часа ежедневно при Т - 15°С на фоне перорального введения препарата в течение всего эксперимента 18

5 В течение двух недель предшествующих охлаждению животным перорально вводили дигидрокверцетин и арабиногалактан из расчета по 5мг/100г. Затем животных подвергали общему холодовому воздействию в течение 28 дней по 3 часа ежедневно при Т - 15°С на фоне перорального введения препарата в течение всего эксперимента 19

Обезвоживание материала осуществлялось в спиртах восходящей

концентрации: 50%, 60%, 70%, 80%, 96% по 10 минут и в двух сменах абсолютного спирта по 10 минут. После проводки образцы ткани заливали в смесь эпона и аралдита. Полимеризация проводилась при температуре +60° С на протяжении 72 часов [35]. Полутонкие и ультратонкие срезы получали на ультрамикротоме «LKB-NOVA 8800» (Швеция). С каждого блока сначала готовили полутонкие срезы, которые окрашивали метиленовым синим по методу Sato [69]. На полутонких срезах выбирался участок для ультратонких срезов. Ультратонкие срезы контрастировались насыщенным спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца. Исследование и фотографирование ультратонких срезов проводили на электронном микроскопе просвечивающего типа «Technai G2 Spirit Twin» - Голландия. Фотосъемка парафиновых и полутонких срезов проводилась на микроскопе

«Microphot FXA» (Nikon, Япония). Обработка материала для растровой электронной микроскопии проводили по методу Ю.А. Ровенского (1979), просмотр препаратов осуществлялся на микроскопе S3400 Япония. С целью изучения локализации и активности щелочной фосфомоноэстеразы применяли метод электронной гистохимии [35, 93].

Морфометрический анализ проводили на тканевом уровне организации [6, 7]. Измерения осуществлялись непосредственно на полутонких срезах, окрашенных метиленовым синим, измерения площади и ядра осуществлялось на электронограммах. Для стандартизации процедуры на продольных срезах использовался световой микроскоп «Microphot FXA» (Nikon, Япония) и цифровая камера окуляр модель DCM500 (5 МПикс., USB2.0) при помощи которого в поле зрения одновременно виден микроскопируемый объект. Контуры измеряемых объектов очерчивались изображением светящегося маркера манипулятора "мышь", вводящего метки изображения в компьютер. При помощи специальной программы количественного анализа «Image Scope Color», результаты сохранялись в базе данных компьютера для последующей работы с ними. Морфометрическая программа «Image Scope Color» придерживается компьютерного стандарта кодировки размерности, который соотносит между собой пиксели минимальные элементы изображения на экране компьютерного дисплея и единицы длины. С целью оценки уровня количественного соотношения различных элементов эпителия, а также миграции тучных клеток через эпителий, проведен подсчет этих элементов на 100 мкм длины эпителиального пласта краниального и каудального отделов трахеи. Для получения изображения, окрашенные парафиновые срезы слизистой оболочке трахеи фотографируются, после проявки плёнки кадры сканируются, изображения сохраняются в формате jpg. Для оценки процессов перекисного окисления липидов в ходе эксперимента определяли содержание диеновых коньюгатов, гидроперекисей липидов, малонового диальдегида. Состояние антиоксидантной системы оценивали по содержанию витамина Е и церулоплазмина. Биохимическому исследованию подвергалась кровь

животного. Для определения продуктов ПОЛ и витамина Е, липиды из крови экстрагировали по методу Блайя-Дайера (1975). Диеновые коньюгаты определяли методом И.Д. Стальной [107], гидроперекиси липидов - методом Л.А. Романова и И.Д.Стальной [99], содержание малонового диальдегида - по методу Е.А. Бородина и А.И. Арчакова (1987). Антиоксидантный статус оценивали по активности церулоплазмина по методу В.Г. Колб и B.C. Камышникова [56] и количество витамина Е по методу Р.Ж. Киселевича и С.И. Скварко [52]. Сгашсшческую обработку проводили при помощи статистического пакета STATISTICA v. 6.0 for Windows (StatSoft Inc., 1984-2001). Полученные цифровые данные обработаны статистически стандартными параметрическими методами с использованием t-критерия Стьюдента [3].

3.2 Гистологическая и ультраструктурная характеристика слизистой оболочки и подслизистой основы трахеи интактных крыс

У человека и большинства, млекопитающих существенно не отличается гистологическое, строение слизистой и подслизистой основы трахеи. В слизистой оболочке, на базальной мембране располагается однослойный, многорядный мерцательный эпителий. Высота эпителия и число рядов в различных отделах трахеи примерно одинакова и составляет соответственно в краниальном отделе 26,0±0,15мкм и 3,1±0,14мкм; каудальном отделе 25,0±0,14мкм и 3,2±0,10мкм. Собственная пластинка слизистой является следующим элементом слизистой, состоит из рыхлой соединительной ткани, в которой находятся сосуды микроциркуляторного русла и такие клеточные элементы как фибробласты, фиброциты, макрофаги, плазмоциты - клетки соединительной ткани. Подслизистая основа состоит из соединительной ткани, в которой имеются такие же клеточные элементы, что и в собственной пластинке слизистой. Как правило, кровеносные и лимфатические сосуды этого участка, крупного диаметра. В подслизистой основе имеются концевые отделы трахеобронхиальных желез, выделяющих секрет на поверхность эпителия слизистой оболочки. Наиболее многочисленными среди всех

клеточных элементов являются реснитчатые клетки (рис. 1). Подсчет количества показал, что в краниальном отделе трахеи они составляют 32,5±1,30, в каудальном - 25,9±0,48. Данные представлены в таблице 2 Таблица 2 - Морфометрические показатели эпителиального пласта и его клеточных

элементов различных отделов трахеи в контрольной группе, М±ш, п=15

Показатели Краниальный отдел трахеи Каудальный отдел трахеи

Высота эпителиального пласта (мкм) 26,0±0,15 25,0±0,14

Число рядов в эпителии 3,1±0,14 3,2±0,Ю

Реснитчатые клетки 32,5±1,30 25,9±0,48

Бокаловидные клетки 14,1±0,23 8,6±0,42

Промежуточные клетки 6,2±0,20 10,5±0,42

Базальные клетки 12,4±0,37 13,3±0,26

Площадь базальной клетки (мкм2) 33,0±0,15 31,0±0,24

Площадь ядра базальной клетки (мкм2) 22,6±0,18 23,1±0,07

Число тучных клеток на 100 мкм длины эпителия 1,2±0Д4 1,3±0,12

При окраске метиленовым синим на апикальной поверхности выявляются реснички (рис. 2). В структуре ядра при электронной микроскопии хорошо выражены ядрышко, кариоплазма, хроматин ядерная оболочка и реснички. Ядра клеток расположены на различных уровнях (рис. 3, 4). При изучении реснички в электронный микроскоп выявлена оболочка, являющаяся продолжением утолщенной клеточной мембраны, внутри которой располагается центральная и периферические фибриллы. Каждая ресничка опирается на базальное тельце, расположенное в апикальной зоне клетки. На апикальной поверхности мерцательных клеток между ресничками находятся микроворсинки, представленные выростами цитоплазмы. Митохондрии

реснитчатых клеток имеют вытянутую форму и небольшие размеры. В апикальной зоне реснитчатых клеток отмечено скопление секреторных пузырьков различного размера. На поверхности ресничек и бокаловидных клеток выявляется мелкопористый материал, входящий в состав гликокаликса и состоящий из мукополисахаридов (рис. 5, 6). На поперечном срезе в центре реснички располагаются две фибриллы, а по периферии девять пар (рис. 7). Бокаловидные клетки трахеи занимают значительное место в структуре эпителия слизистой оболочки. Для оценки характера активности секреторного процесса на различных уровнях трахеи был произведен подсчет числа бокаловидных клеток. Это позволило выявить, что в краниальном отделе секреторная активность выше, здесь число бокаловидных клеток - 14,1 ±0,23, тогда как в каудальном - 8,6±0,42. Бокаловидные клетки у интактных крыс обычно располагаются небольшими группами. Внешний вид бокаловидных клеток изменчив и зависит от функционального напряжения, но чаще всего они имеют форму бокала. Наиболее крупные гранулы расположены в апикальной зоне клетки, которая несколько выступает в просвет трахеи. Базальная часть бокаловидной клетки узкая, здесь располагается небольшое, вытянутое, овальное ядро. Апикальная часть цитоплазмы бокаловидной клетки обычно расширена и содержит гранулы различного диаметра. Гранулы между собой разделены тонкими прослойками цитоплазмы и заполнены секретом средней элекгроннооптаческой плотности. На верхушке бокаловидной клетки, обращенной в просвет трахеи, обычно располагаются небольшие микроворсинки (рис. 8). Эти клетки имеют многоугольную или продолговатую форму и располагаются своим широким основанием на базальной мембране. Ядро базальных клеток занимает большую часть цитоплазмы и имеет округлую форму. В цитоплазме клетки выявляются канальцы эндоплазматического ретикулума с большим количеством рибосом. Базальные клетки располагаются на базальной мембране и не достигают поверхности эпителия, полудесмосомы обеспечивающие плотное соединение между базальными клетками и базальной мембраной.

Рис. 1. Эпителий трахеи интактной крысы. Каудальный отдел: 1-реснитчатые клетки; 2-реснички; 3-базальные клетки. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение: ок. 10, об. 40

Рис. 2. Эпителий трахеи интактной крысы. Каудальный отдел трахеи: 1-реснитчатые клетки; 2-бокаловидные клетки; 3-базальные клетки. Полутонкий срез. Окраска метиленовым синим. Увеличение: ок. 10, об. 100

Рис. 3. Участок слизистой оболочки трахеи интактной крысы: 1-реснитчатые клетки; 2-бокаловидная клетка; 3-базальная мембрана; 4-базальные клетки.

а - полутонкий срез, окраска метиленовым синим. Увеличение: ок. 10, об. 100 б - трансмиссионная электронограмма. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 15000

Рис. 4. Электронограмма участка слизистой оболочки трахеи крысы: 1-реснитчатые клетки; 2-бокаловидные клетки; 3-базальные клетки. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 3000

Рис. 5. Электронограмма апикальной поверхности реснитчатой клетки: 1 - реснички; 2 - базальные тельца; 3 - микроворсинки; 4 - митохондрии. Заливка в аралдит, эпон. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 84000

Рис. 6. Электронограмма ресничек и микроворсинок реснитчатой клетки: 1-реснички; 2-микроворсинки; 3-гликокаликс. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 100000

Рис. 7. Электронограмма поперечного среза ресничек и микроворсинок:

1-ресничка 2 центральные и 9 периферических сдвоенных микротрубочек;

2-микроворсинки. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 160000

Количественное содержание этих клеток эпителия в обоих отделах трахеи примерно одинаково - краниальный - 12,4±0,37, каудальный - 13,3±0,26. Площадь базальной клетки и ее ядра в обоих отделах трахеи примерно одинакова (табл2). Форма промежуточных клеток коническая, с широким основанием, тесно прилежат к базальной мембране, располагается между реснитчатыми и бокаловидными клетками. Ядро округлое, располагается в базальном полюсе клеток. Контакты между соседними клетками осуществляются при помощи десмосом. Верхушка промежуточных клеток никогда не доходит до просвета трахеи. Количество этих элементов в каудальном отделе трахеи почти в два раза больше, чем в краниальном. Краниальный отдел - 6,2±0,20, каудальный отдел - 10,5±0,42. Клетки располагается на базальной мембране, состоящий из тонкого слоя аморфного вещества, поэтому структура ее при окраске гематоксилином и эозином не выявляется. Щелочная фосфатаза хорошо выявляется в зоне расположения базальных клеток эпителия трахеи. Гранулы конечного продукта интенсивно маркируют боковые и апикальные поверхности камбиальных клеток, в то время как базальный полюс, прилегающий к базальной мембране лишен гранул конечного продукта гистохимической реакции на щелочную фосфатазу. Одновременно в зоне базальной мембраны фермент выявляется в виде мелких гранул разбросанных между тонкими коллагеновыми и эластическими фибриллами (рис. 11). Базальный слой, отделяющий эпителиальный пласт эпителия от подлежащей соединительной ткани, представлен базальной мембраной и рыхло упакованными эластическими и ретикулиновыми волокнами. Собственная пластинка слизистой представлена рыхлой соединительной тканью, состоящей из коллагеновых эластических и ретикулиновых волокон. Коллагеновые волокна располагаются в продольном, и в поперечном направлениях имеют характерную поперечную исчерченность. Расположение волокон - рыхлое, между ними находятся значительные пространства, заполненные основным веществом.

Рис. 8. Электронограмма апикального полюса бокаловидной клетки: 1-гранулы средней электронной плотности; 2-комплекс Гольджи; 3-микроворсинки. Заливка в аралдит, эпон. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 63000

Рис. 9. Электронограмма эпителия слизистой оболочки трахеи крыс: 1-базальная клетка; 2-базальная мембрана; 3-соединительная ткань. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 30000

Рис. 10. Электронограмма базальной клетки крысы: 1-митохондрии; 2-эндоплазматический ретикулум; 3-ядро базальной клетки; 4-цитоплазматические выросты; 5-базальная мембрана; 6-десмосомы. Заливка в аралдит, эпон. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение:73500

а б

Рис. 11 а,б. Электронограмма базального участка эпителия трахеи крысы. Реакция на щелочную фосфомоноэстеразу: 1-базальная клетка; 2-базальная мембрана; 3-гранулы сульфида свинца в мембране клетки; 4-гранулы реакции в базальной мембране. Реакция по Гомори. Заливка аралдит, эпон. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: а-45000, 6-60000

Рис. 12. Электронограмма подслизистой основы трахеи крысы: 1-фибробласт; 2-коллагеновыми волокнами; 3-аморфное вещество. Заливка в аралдит, эпон. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 35000

Рис. 13. Электронограмма стенки секреторного отдела трахеальной железы: 1-клетка; 2-ядро; 3-секреторные гранулы. Заливка в аралдит, эпон. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 28000

Особый интерес этот участок представляет как основное звено, в котором располагаются микроциркуляторное русло, обеспечивающее трофические процессы слизистой оболочки. Основу подслизистой составляет рыхлая соединительная ткань, с небольшим количеством волокон, расположенных более рыхло, чем в собственной пластинке слизистой оболочки (рис.12). В подслизистой оболочки кровеносное русло представлено сосудами крупного диаметра, преимущественно венозными. Строение кровеносных сосудов в краниальном отделе обычное. Кровеносные сосуды имеют тонкую стенку за счет слаборазвитой средней оболочки, в которой находятся единичные гладкомышечные клетки. Одним из основных структурных образований подслизистой являются серозно-слизистые железы. В области бифуркации расположено основное число желез. Секреторный отдел железы представлен клетками конической формы, с округлым ядром, расположенным на базальном полюсе. Клетки выводных протоков желез заполненные секретом средней электронной плотности. Строму желез образуют рыхлая волокнистая соединительная ткань. Основное количество желез находится на дорзальной поверхности, поэтому площадь слизистой и подслизистой оболочках трахеи на боковых поверхностях, как в краниальном, так и каудальном отделах имеет наиболее постоянный план строения для интактных животных. Клетки секреторного отдела трахеальных желез небольшие по размеру, конической формы. Ядра этих клеток округлые, находятся на базальной мембране (рис. 13).

На основании вышеизложенного материала можно сделать следующее заключение. В составе элементов эпителиального пласта слизистой оболочки как краниального, так и каудального отделов трахеи преобладает реснитчатые клетки с развитыми органеллами. Бокаловидные клетки содержат в основном гранулы секрета на апикальном полюсе. Число малодифференцированных (базальных и промежуточных) клеток в области бифуркации в полтора раза больше, чем в краниальном отделе трахеи. Базальные клетки слабо дифференцированы, располагаются на базальной мембране. Это подчеркивает

высокая активность щелочной фосфомоноэстеразы на мембране базальных клеток. Базальная мембрана, собственная пластинка слизистой и подслизистая основа представлена эластическими и ретикулиновыми волокнами. Строение кровеносных сосудов обычное.

3.3 Морфологическая характеристика слизистой оболочки трахеи у интактных крыс при общем охлаждении организма (-15°С) в течение 28 дней по 3 часа ежедневно

Воздействие низкой температуры на организм крысы в течение 28 дней на всех поверхностях слизистой оболочки трахеи вызывает значительную перестройку в структуре эпителия. Происходит увеличение высоты эпителиальных клеток (табл. 3). Появляются очаги метаплазии. Анализируя качественный состав элементов эпителия, мы отмечаем увеличение дифференцировки клеток, что приводит к уменьшению числа базальных и промежуточных клеток. Дифференцировка направлена в сторону увеличение бокаловидных клеток. Возрастает секреторная активность бокаловидных клеток и желез подслизистой оболочки. Значительной перестройке подвергается количественная и качественная характеристика эпителиальной выстилки слизистой оболочки трахеи. Изменяется строение реснитчатых клеток, некоторые из них увеличиваются в объеме, цитоплазма полностью вакуолизируется, крупное ядро локализуется в центре. Вокруг кровеносных сосудов слизистой оболочки и подслизистой основы трахеи возрастает число клеточных элементов, в основном лейкоцитов. Часто наблюдается миграция клеток через эпителий и появление их на поверхности слизистой оболочки трахеи. В эксперименте по всему периметру трахеи резко возрастает число зон инфильтрации в обоих отделах. Под воздействием холода в наших экспериментах уменьшилось количество промежуточных и базальных клеток и как следствие, увеличилось количество бокаловидных клеток. В краниальном отделе уменьшается количество базальных клеток - 10,3±0,33 (у интактных - 12,4±0,37) и, особенно, значительно снижается число

промежуточных до 0,6±0,16 (у интактных - 6,2±0,20). Площадь базальной клетки уменьшается и составляет в краниальном отделе 21,0±0,22мкм2 (у интактных - 33,0±0,15 мкм2) и каудальном 23,1±0,24 мкм2 (у интактных -31,0±0,24 мкм2). Площадь ядра в краниальном отделе 12,3±0,22 мкм2 (у интактных - 22,6±0,18 мкм2) и каудальном 14,1 ±0,21 мкм2 (у интактных -23,1 ±0,07 мкм2). Морфометрические данные по реакции эпителиального пласта трахеи на холодовый стресс представлен в таблице 3.

Таблица 3 - Морфометрические показатели эпителиального пласта и ¿го клеточных элементов различных отделов трахеи при охлаждении (Т°-15°) в течение 28 _дней, М±т, п=70_

Показатели Краниальный отдел трахеи Каудальный отдел трахеи

Интактные Охлаждение 28 дней Интактные Охлаждение 28 дней

Высота эпителиального пласта (мкм) 26,0±0,15 37,0±0,16** 25,0±0,14 35±0,30**

Число рядов в эпителии 3,1±0Д4 4,8±0,57** 3,2±0,10 4,9±0,07**

Реснитчатые клетки 32,5±1,30 30,4±1,03 25,9±0,48 26,5±0,58

Бокаловидные клетки 14,1±0,23 24,6±0.42** 8,6±0,42 16,0±0,57**

Промежуточные клетки 6,2±0,20 0,6±0,16** 10,5±0,42 4,7±0,15**

Базальные клетки 12,4±0,37 10,3±0,33** 13,3±0,26 10,5±0,16**

Площадь базальной клетки (мкм2) 33,0±0,15 21,0±0,22** 31,0±0,24 23,1±0,24**

Площадь ядра базальной клетки (мкм2) 22,6±0,18 12,3±0,22** 23,1 ±0,07 14Д±0,21**

Число тучных клеток на 100 мкм длины эпителия 1,2±0,14 3,2±0,12** 1,3±0,12 3,3±0,09**

*Р<0,05; ** Р<0,001 уровень доверительной вероятности при сравнении группы охлаждение

28 дней с интактной группой.

Число промежуточных клеток эпителия в каудальном отделе трахеи уменьшается до - 4,7±0,15 (у интактных - 10,5±0,42). Количество реснитчатых клеток в краниальном отделе снижается незначительно 30,4±1,03 (у интактных - 32,5±1,30). Значительно возрастает как в краниальном, так и в каудальном отделе число бокаловидных клеток (рис. 14). Наблюдается, увеличение количества секреторной активности бокаловидных клеток при подсчете составляет краниальный отдел 24,6±0,42 (у интактных - 14,1 ±0,23), каудальный отдел 16,0±0,57 (у интактных - 8,6±0,42). При электронной микроскопии реснитчатых клеток отмечено уменьшение числа ресничек, значительно варьирует их высота, поверхностная мембрана становится волнистой, появляются неравномерные утолщения. Микроворсинки у таких клеток отсутствуют. Бокаловидные клетки расширены особенно в апикальной зоне, где появляются многочисленные крупные светлые гранулы (рис. 15, 16, 17). На поверхности бокаловидной клетки отсутствуют микроворсинки. Видны участки выделения секрета. Апикальная поверхность выступает над ресничками, образуя купола, лишённые микроворсинок (рис. 18). Важным морфологическим признаком, отражающим действие холода, является увеличение количества слизи и клеточных элементов на поверхности эпителия. Гиперсекреция - это характерный признак реакции эпителия на холодовое воздействие. Это подтверждается и увеличением количества слизи на поверхности трахеи, и изменением соотношения реснитчатых и бокаловидных клеток. Происходит нарушение мукоциллиарного транспорта вследствие «склеивания» ресничек приводящих к нарушению поперечных волн движения ресничек (рис. 19). Характер слизи бывает различным. В ряде случаев это слизистый мелкопористый материал, располагающийся неравномерно на поверхности ресничек (рис. 20). По всей видимости - это жидкий секрет, передвигаемый ресничками. Однако в некоторых случаях этот секрет приобретает значительные размеры, образуя сложные полимеризованные структуры мукополисахаридов. Часто такие застойные компоненты слизи наполнены большим количеством клеточных элементов,

представленных эритроцитами, лейкоцитами, макрофагами, слущенными клетками эпителия, представляющими сложные морфологические картины. В слущенных клетках присутствуют вакуоли различного размера и электронной плотности (рис. 21). На апикальном полюсе реснитчатых клеток значительно увеличивается количество разветвлённых митохондрий. На фоне электронноплотной гиалоплазмы располагается увеличенное количество рибосом. Часть реснитчатых клеток имеет в апикальном полюсе расширенные каналы эндоплазматического ретикулума. Образующиеся вакуоли сливаются, формируя значительные белковые скопления секрета. Поэтому часть реснитчатых клеток на электроннограммах имеют «пустую» цитоплазму. В этих клетках обнаруживаются разбухшие митохондрии, расширенные цистерны эндоплазматического ретикулума. Матрикс митохондрий имеет значительную плотность, нередко маскируя кристы. Следует подчеркнуть, что на боковой поверхности часть реснитчатых клеток претерпевает выраженные дегенеративные перерождения. Это проявляется в значительном просветлении гиалоплазмы, появление многочисленных вакуолей в апикальной зоне, реснитчатых клеток в которой нередко наблюдаются набухшие митохондрии. Эти клетки теряют на поверхности реснички, а затем разрушаются (рис. 22). Довольно часто в месте расположения таких дегенерирующих клеток выявляются мигрирующие сюда тучные клетки с признаками дегрануляции гранул. Количество тучных клеток на 100 мкм эпителиального пласта увеличивается и составляет в краниальном отделе 3,2±0,12 (у интактных 1,2±0,14) и в каудальном 3,3±0,09 (у интактных 1,3±0,12). Значительное увеличение в слизистой оболочке трахеи крыс мигрирующих лейкоцитов и тучных клеток - второй признак реакции эпителия на холодовое воздействие. Мигрирующие тучные клетки содержат в цитоплазме электронноплотные гранулы биологически активных веществ, увеличивающих скорость обменных процессов в эпителии (рис. 23). Характерно нарастание активности щелочной фосфатазы в клеточной мембране тучных клетках, часть из которых мигрирует в эпителий трахеи. Этот механизм является универсальным и обеспечивает

регуляцию регенерации функционально отживших эпителиальных клеток. Остается неясным, что же влияет на повышение миграционной активности тучных клеток в условиях холодового воздействия. Другой момент, на который стоит обратить внимание это то, что по мере увеличения срока действия холодового фактора в составе эпителия трахеи появляются очаги метаплазии. Наблюдается, выраженная метаплазия эпителия, сопровождающаяся вакуолизацией цитоплазмы реснитчатых клеток и расширением межклеточных пространств. Вначале подобные изменения выявляются в каудальном отделе, а в дальнейшем и в краниальном, что можно расценить как нарушение дифференцировки камбиальных клеток в результате действия холода в период регенераторной пролиферации (рис. 24). Эпителиальные клетки имеют двойной потенциал, который заключается в том, что они могут претерпевать эпидермоидную дифференциацию и все же сохраняют способность вырабатывать мукоидные вещества. Эпидермоидная дифференциация является третьей типичной реакцией трахеобронхиального эпителия на холодовое повреждение. Как правило, такому перерождению предшествует увеличения межклеточных промежутков между базальными и промежуточными клетками. Базальная мембрана имеет неравномерную толщину, участки расширения чередуются с зонами сужения и уплотняются. В увеличенные пространства начинают мигрировать лейкоциты и тучные клетки (рис. 25, 26). Выраженная потеря экспрессии щелочной фосфатазы или ее снижение наблюдается при холодовом воздействии, что связано с низким уровнем дифференцировки камбиальных клеток трахеи. Электронно-микроскопическое выявление типичного маркера плюрипотентных незрелых клеток - щелочной фосфатазы при холодовых воздействиях выявил изменения ее распределения. Количество гранул конечного продукта на щелочную фосфатазу уменьшается в клеточных мембранах камбиальных клеток и в утолщенной базальной мембране. Базальная мембрана имеет разную толщину. На электроннограмме коллагеновые волокна имеют продольное и поперечное направление, располагаются пучками. В их

структуре выявляется характерная поперечная исчерченность (рис. 27). Изменяется строение и характер секреции трахеальных желез. Наблюдаются резкое расширение выводных протоков трахеальных желез (рис. 28). Нередко наблюдается миграция, преимущественно лимфоцитов из инфильтратов через эпителий в просвет трахеи (рис. 29). Анализ результатов морфометрического исследования эпителия трахеи показал, что при длительном вдыхании охлаждённого воздуха происходит перестройка эпителия. Это, прежде всего, выявляется при изучении поверхности эпителия - нарушается регулярное расположение ресничек. Увеличивается площадь подслизистой основы слизистой оболочки трахеи за счет количество коллагеновых и эластических элементов, различных по толщине и плотности.

На основании полученных данных можно сделать заключение, что действие низкой температуры в течение месяца, приводит к нарушениям количественного состава эпителиальной выстилки слизистой оболочки трахеи, и изменению активности мукоциллиарного аппарата. В эпителии каудального отдела трахеи преобладает число малодифференцированных клеток, а именно промежуточных, что свидетельствует о замедлении дифференцировки. Дифференцировка идет в сторону увеличение количества бокаловидных клеток, как в каудальном, так и в краниальном отделе трахеи. Это говорит об усиленном секреторном процессе в слизистой оболочке трахеи. Таким образом, весь комплекс морфологических изменений в трахее крыс при охлаждении характерен для стадии адаптивного напряжения, при котором возникают выраженные деструктивные изменения реснитчатых клеток, гипертрофия бокаловидных клеток и выраженная миграционная активность тучных клеток. Длительное холодовое воздействие на слизистую оболочку трахеи снижает скорость дифференцировки клеточных элементов и изменяет взаимосвязи с клеточным окружением стволовых клеток (нишей). Используя клеточные маркеры стволовых клеток (щелочную фосфомоноэстеразу) показано, что важным клеточным элементом «ниши» влияющим на дифференцировку стволовых клеток являются тучные клетки, мигрирующие при холодовых воздействиях в эпителий.

Рис. 14. Слизистая оболочка трахей. Краниальный отдел. Охлаждение организма в течение 28 дней: 1-бокаловидные клетки; 2-реснитчатые клетки; 3-базальные клетки; 4-базальная мембрана; 5-собственная пластинка слизистой; 6-кровеносный сосуд. Окраска метиленовым синим. Увеличение: ок.10, об. 100

Рис. 15. Стенка трахеи у крысы Краниальный отдел трахеи. Охлаждение организма в течение 28 дней: 1-эпителий; 2-собственная пластинка слизистой; 3-ядра эпителия. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение: ок.10, об. 40

Рис. 16. Слизистая оболочка трахеи. Каудальный отдел. Охлаждение организма в течение 28 дней: 1-бокаловидная клетка; 2-реснитчатая клетка; 3-базальная клетка. Окраска метиленовым синим. Увеличение: ок.15, об. 100

Рис. 17. Электронограмма эпителия трахеи: 1-апикальный полюс бокаловидной клетки; 2-гранулы секрета средней электронной плотности. Заливка в аралдит, эпон. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 82000

Рис. 18. Апикальный полюс бокаловидной клетки эпителия крыс. Охлаждение организма в течение 28 дней: 1-реснички; 2-зоны выделения секрета. Растровая электронограмма. Увеличение: 15000

Рис. 19. Электронограмма поверхности эпителия крыс. Охлаждение в течение 28 дней: 1-реснички; 2-зоны склеивания ресничек.

Растровая электронограмма. Увеличение: 10000

Рис. 20. Электронограмма поверхности эпителия слизистой трахеи. Охлаждение в течение 28 дней: 1-реснички; 2-мелкопористая слизь на поверхности ресничек. Растровая электронограмма. Увеличение: 5000

Рис. 21. Электронограмма слущенного эпителия слизистой оболочки трахеи у крысы. Охлаждение в течение 28 дней: 1-ядра клетки; 2-вакуоли в цитоплазме. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 60000

Рис. 22. Электронограмма дегенеративных изменений в реснитчатых клетках. Охлаждение в течение 28 дней: 1-реснитчатая клетка; 2-вакуоли; 3-реснички; 4-митохондрии. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 55000

Рис. 23. Электронограмма эпителия трахеи крыс. Охлаждение в течение 28 дней: 1-эпителий; 2-ресничатые клетки; 3-тучные клетки; 4-гранулы тучных клеток. Трансмиссионная электронограмма. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 15000

Рис. 24. Слизистая оболочка трахеи крыс. Каудальный отдел. Охлаждение в течение 28 дней: 1-эпителий; 2-поверхностные клетки; 3-базальные клетки; 4-собственная пластика слизистой; 5-реснички. Окраска метиленовым синим. Увеличение: ок.10, об. 100

Рис. 25. Электронограмма слизистой оболочки трахеи крысы. Охлаждение в течение 28 дней: 1-базальная клетка; 2-промежуточная клетка; 3-ядро; 4-межклеточные пространства. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 38000

Рис. 26. Электронограмма базального участка эпителия слизистой оболочки трахеи крысы. Охлаждение в течение 28 дней: 1-базальная клетка; 2-промежуточная клетка; 3-межклеточные пространства. Окраска уранил ацетатом, цитратом свинца. Увеличение: 33500

' -лЛЖШ

-

ш

л*

л-

ЗГС

и

-

•V <

■■¿'ЯгЛ?

£->«- • Пй

" * л ' £

¡2

4 *

V Ш 0 ч г , : ^чь

г трЛР

г V' ; ..

л к

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Горбунов, Михаил Михайлович

1. Основные результаты комплексного морфологического, морфометрического и биохимического анализа слизистой оболочки трахеи с оценкой их состояния при действии низких температур и различных методах коррекции внедрены в программу преподавания на кафедрах медицинских и ветеринарных вузов, ЦНИЛа Амурской государственной медицинской академии.

2. Применение природных антиоксидантов при длительном воздействии холода показало эффективность использования их в качестве корригирующего метода, что подтверждается морфологическими и биохимическими результатами.

3. Внедрен метод определения камбиальных клеток путем выявления реакции щелочной фосфатазы. Позволяющий объективно анализировать регенерационный потенциал малодифференцированных клеток при различных патологических состояниях и коррекции этих нарушений.

4. Сочетанное применение природных антиоксидантов оказывает модулирующее влияние на регенерацию эпителия трахеи при длительном охлаждении, что дает основания рекомендовать их для дальнейшего изучения с возможным использованием в качестве средств, облегчающих адаптацию слизистой оболочки верхних дыхательных путях к экстремальным факторам внешней среды.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Горбунов, Михаил Михайлович, 2013 год

7 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Абрамова, Ж.П. Человек и противоокислительные вещества: монография / Ж.П. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер. - Л.: № - во «Наука», 1985. - 230с.

2. Абрахам, Е.Г. Стволовая кроветворная клетка: дифференцировочный и пролиферативный потенциал / Е.Г. Абрахам, Р.Д. Левир // Успехи современной биологии. - 1991. - Т. 111, №6. - С. 905 - 922.

3. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия: монография / Г.Г. Автандилов. - М.: Из-во «Медицина», 1990. - 384с.

4. Авцын, А.П. Патология мороза: монография / А.П. Авцын. - Н.: Из-во «Наука», 1985.-335с.

5. Авцын, А.П. Патология человека на Севере: монография / А.П. Авцын, A.A. Жаворонков, А.Г. Марачев, А.П. Милованов. - М.: Из-во «Медицина», 1985.-418с.

6. Автандилов, Г.Г. Морфометрия в патологии: монография / Г.Г. Авандилов. - М.: Из-во «Медицина», 1973. - 248с.

7. Автандилов, Г.Г. Морфометрическое изучение легких экспериментальных животных / Г.Г. Автандилов, Ю.Д. Бацура // Журнал экспериментальной биологии и медицины. -1974. - №6. - С. 123 - 125.

8. Агаджян, H.A. Адаптация и резервы организма: монография / H.A. Агаджян. -М.: ФИС, 1983. - 105с.

9. Акимов, Г.А. Общее охлаждение организма: монография / Г.А. Акимов, Н.В. Алишев, В.В. Бернштейн. - Л.: Из-во «Медицина», 1977- 184с.

10. Алейников, В.Ф. Эпидемиология и течение хронических неспецифических заболеваний легких в контрастных климатических зонах СССР: монография / В.Ф. Алейников, А.Н. Кокосов. - М.: Из-во «Медицина», 1982 - 168с.

11. Александров, А.Н. Влияние тяжелой политравмы на миграцию стволовых кроветворных клеток у мышей / А.Н. Александров, B.C. Сергеев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2006. - Т.2, №4. - С. 59 - 62.

12. Алексеева, О.С. Влияние кверцетина на развитие азотного наркоза и накопление белков теплового шока в клетках коры головного мозга крыс / О.С.

Алексеева, А.Н. Ветош, Д.Э. Коржевский, В.А. Косткин // Доклады Академии Наук. - 2010. - Т. 430, № 3. - С. 421 - 423.

13. Антонова, Г.Ф. Получение высокочистого арабиногалактана из древесины лиственницы / Г.Ф. Антонова, H.A. Тюкавкина // Химия древесины. -1976.-№4.-С. 60-62.

14. Арбузов, А.Г. Галактаны и галактансодержащие полисахариды высших растений / А.Г. Арбузов, A.B. Крылатов, JI.H. Маслов, В.Н. Буркова, Н.В. Нарыжная, А.О. Арифходжаев // Химия природных соединений. - 2000-№3. - С. 185- 197.

15. Араратян, Э.А. Перспективы изыскания антиокидантов-адаптогенов растительного происхождения / Э.А. Араратян, М.С. Мусаелян, М.А. Манучарян, C.JI. Мкртчян // Перекисное окисление липидов в норме и патогенезе различных заболеваний: сб. науч. тр. - Ереван, 1988. - Вып. 1. - С. 24 - 26.

16. Арчаков, А.И. Микросомальное окисление: монография / А.И. Арчаков. - М.: Из-во «Медицина», 1971. - 285с.

17. Афанасьев, И.Б. Кислородные радикалы в биологических процессах: монография / И.Б. Афанасьев // Успехи химии. -1979. - С. 48.

18. Ахалая, М.Я. Кратковременное охлаждение повышает антиоксидантный статус и общую устойчивость животных / МЛ. Ахалая, А.Г. Платонов, A.A. Байжуманов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - Т. 141, №1.-С. 31 -34.

19. Бабкин, В.А. Безотходная комплексная переработка биомасс лиственниц сибирской и даурской / В.А. Бабкин, JI.A. Остроумова, С.Г. Дьячкова, Ю.К. Святкин // Химия в интересах устойчивого развития. - 1997. - №5. - С. 105 -115.

20. Балаболкин, М.И. Применение антиоксидантов флавоноидного ряда в лечении диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 / М.И. Балаболкин, JI.B. Недосугова, И.А. Рудько, А.К. Волкова, М.С. Никишова // Проблемы эндокринологии. - 2003. - Т.49, №3. - С. 3 - 6.

21. Банкова, В.В. Роль малонового диальдегида в регуляции перекисного окисления липидов в норме и патологии / В.В. Банкова // Автореферат дисс. д.б.н. -Москва, 1990.-20с.

22. Бармина, Г.В. Морфология первичного хронического бронхита: гистохимическое, электронно - микроскопическое и морфометрическое исследование слизистой оболочки бронхов / Г.В. Бармина // Автореферат дисс. к.м.н. -Москва, 1991 -25с.

23. Бежаев, Г.А. Острые холодовые травмы на Крайнем Севере / Г.А. Бежаев // Автореферат дисс. д.м.н. - Москва, 1969. - 27с.

24. Бородин, Е.А. Медицинские аспекты клеточных мембран: монография / Е. А. Бородин. - Благовещенск: АГМА, 1989. - 148с.

25. Бородин, Е.А. Антиокислительный эффект фосфолипидов: монография / Е. А. Бородин // Нейрофармакология на рубеже двух тысячелетий. - 1992. -Т.1.-С. 68.

26. Бородин, Е.А. Перекисное окисление липидов в мембранах эритроцитов и микросом печени и антиокислительная система тканей крыс при длительном действии холода / Е. А. Бородин // Биологические мембраны. - 1992. - Т. 9, №6. - С. 622-627.

27. Бородин, Е.А. Стабилизация и реактивация цитохрома Р-450 фосфотидилхолином при перекисном окислении липидов / Е.А. Бородин, А.И. Арчаков // Биологические мембраны. - 1987. - №7. - С. 719 - 728.

28. Бурлакова, Е.Б. Перекисное окисление мембран и природные антиоксиданты / Е. Б. Бурлакова, Н. Г. Храпова // Успехи химии. -1985. - Т. 54, №9. -С. 1540-1558.

29. Васильева, О.В. Действие антиоксидантов на кинетику цепного окисления липидов в липосомах / О.В. Васильева, О.Б. Любицкий, Г.И. Клебанов, Ю.А. Владимиров // Биологические мембраны. - 1998. - Т.15, №2-С. 177-183.

30. Викторов, И.В. Медико-биологические аспекты применения стволовых клеток / И.В. Викторов, Г.В. Сухих // Вестник РАМН. - 2002. - №4. - С. 21 - 31.

31. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестник РАМН. - 1998. - №7.- С.43 - 51.

32. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах: монография / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. - М.: «Наука», 1972.-320с.

33. Владимиров, Ю.А. Механизмы перекисного окисления липидов и его действие на биологические мембраны / Ю.А. Владимиров, В.И. Оленьев, Т.Б. Суслова, А.И. Потапенко // Итоги науки и техники: Биофизика. - 1975. - Т. 5. -С. 56-117.

34. Владимиров, Ю.А. Дигидрокверцетин (таксифолин) и другие флавоноиды как ингибиторы образования свободных радикалов на ключевых стадиях апоптоза / Ю.А. Владимиров, Е.В. Проскурнина, Е.М. Демин, Н.С. Матвеева, О.Б. Любицкий, A.A. Новиков, Д.Ю. Измайлов, А.Н. Осипов, В.П. Тихонов, В.Е. Каган // Биохимия. - 2009. - Т.74, Вып. 3. - С. 372 - 379.

35. Гайер, Г. Электронная гистохимия / Г. Гайер. - М.: Из-во «Мир», 1974.-488с.

36. Гордиенко, E.H. Морфофункциональная оценка критериев риска репродуктивной системы при общем охлаждении организма / E.H. Гордиенко // Автореферат дисс. к.м.н. - Иркутск, 1998. - 52с.

37. Грищенко, JI.A. Гидродинамические и молекулярно-массовые характеристики железопроизводного арабиногалактана: монография / J1.A. Грищенко // Тез. докл. молодежи, науч. конф. по органич. химии «Байкальские чтения 2000». - Иркутск. - 2000. - С. 26.

38. Доровских, В.А. Антиоксидантные препараты в профилактике и коррекции холодового стресса: монография / В.А. Доровских, Е.А. Бородин, С.С. Целуйко. - Благовещенск: АГМА, 2001. - 183с.

39. Доровских, В.А. В мире антиоксидантов: учебное пособие / В.А. Доровских, С.С. Целуйко, Н.В. Симонова, P.A. Анохина. - Благовещенск: АГМА, 2012. - 106с.

40. Доровских, В.А. Морфологическая характеристика соединительной ткани органов дыхания при общем охлаждении организма: монография / В.А. Доровских, С.С. Целуйко, Н.П. Красавина. - Благовещенск: АГМА, 2000. - 256 с.

41. Дубровина, В.И. Иммуномодулирующие свойства арабиногалактана лиственницы сибирской (Larix sibirica L.) / В.И. Дубровина, С.А. Медведева, Г.П. Александрова, H.A. Тюкавкина, Е.П. Голубинский, Т.А. Иванова, Ж.А. Коновалова // Фармация. - 2001. - №5. - С. 26 - 27.

42. Ерохин, В.В. Функциональная морфология легких: монография / В.В. Ерохин. - М.: «Медицина», 1987. - 272с.

43. Есипова, И.К. Легкое в патологии: монография / И. К. Есипова. - Н.: Из-во «Наука», 1975. - 286с.

44. Есипова, Н.К. Патологическая анатомия легких: монография / Н.К. Есипова. - М.: «Медицина», 1987. - 272с.

45. Жанатаев, А.К. Изучение генотоксичности дигидрокверцетина in vivo / A.K. Жанатаев, A.B. Кулакова, В.В. Насонова, А.Д. Дурнев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - Т. 145, №3. - С. 309 - 312.

46. Западнюк, И.П. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте / И.П. Западнюк, В.И. Западнюк, Е.А. Захария -Киев: Из-во «Высшая школа», 1974. - С. 148-175.

47. Иванова, С.З. Флаванойдные соединения коры лиственницы сибирской и лиственницы Гмелина / С.З. Иванова, Т.Е. Федорова, Н.В. Иванова, C.B. Фелоров // Химия растительного сырья. - 2002. - №4. - С.5 - 13.

48. Исхаки, Ю.Б. Дыхательные пути и высокогорье: монография / Ю.Б. Исхаки, A.A. Жаворонков, A.C. Ростовщиков. - Д.: «Ифрон», 1989. - 128с.

49. Каменецкая, Т.В. Суточный ритм показателей пролиферативной активности эпителиальных клеток трахеи / Т.В. Каменецкая // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1974. - Т. 1. - С. 76 - 79.

50. Каменецкая, Т.В. Материалы к изучению физиологической и репаративной регенерации эпителия трахеи / Т.В. Каменецкая // Автореферат дисс. к.б.н. - Ленинград, 1977.

51. Киндеева, С.Г. Состояние окислительных процессов и протеолиза в легких при холодовом воздействии. Влияние производственного малоновой кислоты / С.Г. Киндеева // Фармакологическая регуляция холодовых воздействий. - Благовещенск. - 1990. - С. 14 - 19.

52. Киселевич, Р.Ж. Определение витамина Е в сыворотке крови / Р.Ж. Киселевич, С.И. Скварко // Лабораторное дело. - 1972. - №8. - С. 473 - 475.

53. Кожевников, Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии / Ю.Н. Кожевников // Вопросы медицинской химии. - 1985. - №5. -С. 2 - 6.

54. Козлов, Ю.П. Свободнорадикальное окисление липидов в биомембранах в норме и патологии. Биоантиокислители / Ю.П. Козлов. - М.: Из-во «Наука», 1975. -С.4-15.

55. Козырева, Т.В. Функциональные изменения при адаптации к холоду / Т.В. Козырева, Е.Я. Ткаченко, Т.Г. Симонова // Успехи физиологических наук. - 2003.- Т.34, №2. - С.74 - 84.

56. Колб, В.Г. Клиническая биохимия / В.Г. Колб, B.C. Камышников. -Минск, 1976.-312с.

57. Колесникова, Л.И. Свободно - радикальное окисление липидов и его коррекция антиоксидантами при пневмониях, вызванных длительным воздействием холода / Л.И. Колесникова, A.B. Семенюк, В.Ю. Куликов, С.С. Целуйко // Материалы 1-го Всесоюзного биофизического съезда. - М., 1989. -С. 82-83.

58. Колхир, В.К. Диквертин - новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство: монография / В.К. Колхир, H.A. Тюкавкина, В.А. Быков // Хим.-фарм журнал. - 1995. - №9. - С. 61.

59. Копьева, Т.Н. Местные механизмы защиты при хроническом воспалении в легких / Т.Н. Копьева, Г.В. Бармина, О.М. Гробова, Л.М. Воронина // Арх. Пат. - 1992. - №9. - С. 5 - 12.

60. Копьева, Т.Н. Морфология и патогенез хронического бронхита / Т.Н. Копьева, Г.В. Бармина, A.B. Свищев, О.В. Макарова // Арх. Пат. - 1989. - №7. -С. 83-87.

61. Корочкин, Л.И. Биология индивидуального развития: монография / Л.И. Корочкин. - М.: Из-во «Наука», 2002. - 263с.

62. Корочкин, Л.И. Стволовые клетки / Л.И. Корочкин // Онтогенез. - 2003. -Т.34, Вып.3.-С. 164-166.

63. Корулькин, Д.Ю. Природные флаванойды: монография / Д.Ю. Корулькин, Ж.А. Абилов, P.A. Музычкина, Г.А. Толстиков. - H.: Академическое из-во «Гео», 2007.-232с.

64. Кравченко, Л.В. Влияние флаванойдов на резистентность микросом к повреждающему действию ПОЛ in vitro и ex vivo / Л.В. Кравченко, C.B. Морозов, В. А. Тутелян // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2003. - Том 136, №12. - С. 648 - 652.

65. Красавина, Н.П. Стволовые клетки трахеи крыс при длительных холодовых воздействиях / Н.П. Красавина, М.М. Горбунов // Журнал «Клеточная транспланталогия». - 2010. - Т.5, №3. - С. 52.

66. Кривощеков, С.Г. Физиологические механизмы дыхания и терморегуляции на раннем этапе адаптации к холоду / С.Г. Кривощеков, P.C. Роуч, Г.М. Диверт // Физиология человека. - 1993. - Т. 19, №6. - С. 51 - 59.

67. Куликов, В.Ю. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор: монография / В.Ю. Куликов, A.B. Семенюк, Л.И. Колесникова. - Н.: Из-во «Наука», 1988. - 192с.

68. Куликов, В.Ю. Реакция перекиснош окисления липидов в процессах адаптации и патологии органов дыхания в регионах Крайнего Севера и центрального участка БАМа / В.Ю. Куликов // Современные проблемы патологии в аспекте адаптации. - Новосибирск. - 1980. - С. 39 - 51.

69. Луппа, X. Основы гистохимии / X. Луппа. - М.: Из-во «Мир», 1980. -

343с.

70. Луценко, М.Т. Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки трахеи крыс при действии холода на фоне введения производных тиобарбитуровой кислоты (изотиорбамил ТБ-6) / М.Т. Луценко // Фармакологическая коррекция стрессирующих воздействий в эксперименте. -Благовещенск. - 1982. - С. 14-16.

71. Луценко, М.Т. Особенности морфологических изменений органов дыхания к воздействию низких температур / М.Т. Луценко, С.С. Целуйко, Н.П. Красавина // Международный симпозиум по приполярной медицине, 4-й. -Новосибирск , 1978. - С. 99 - 100.

72. Макарова, М.Н. Антирадикальная активность флаванойдов и их комбинации с другими антиокидантами / М.Н. Макарова, В.Г. Макаров, И.Г. Зенкевич // Фармация. - 2004. - №2. - С. 30 - 32.

73. Медведев, Ю.В. Гипоксия и свободные радикалы в развитии патологических состояний организма: монография / Ю.В. Медведев, А.Д. Толстой. - М.: ООО «Терра-Календер и Промоушн», 2000. - 232с.

74. Медведева, С.А. Арабиногалактан лиственницы сибирской -природный иммуномодулятор / С.А. Медведева, Г.П. Александрова, М.Ю. Сайботалов // Материалы 5 Междунар. съезда « Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». -СПб.: Петродворец, 2001. - С. 104 - 105.

75. Медведева, С.А. Гельпроникающая хроматография арабиногалактана / С.А. Медведева, Г.П. Александрова, А.П. Танцырев // Изв. вузов. Лесной журнал. - 2002. -№6.-С. 108- 114.

76. Медведева, С.А. Арабиногалактан лиственницы при коррекции дефектов фагоцитоза / С.А. Медведева, Г.П. Александрова, H.A. Тюкавкина, В.И. Дубровина, Е.П. Голубицкий, Г.И. Борсук, Ж.А. Коновалова // Тез. докл. Всеросс. конф. «Химия и технология растительных веществ». 25-30 сент. 2000 г. - Сыктывкар. - 2000. - С. 103 - 105.

77. Меерсон, Ф.З. Основные закономерности индивидуальной адаптации. Срочный и долговременный этапы адаптации: руководство / Ф.З. Меерсон. - М.:Из-во «Наука», 1986. - С. 10 -19.

78. Мельникова, Н.Б. Биосовместимость дигидрокверцетина с липофильным и гидрофильным фрагментами биомембраны. Влияние ионов металлов и аскорбиновой кислоты / Н.Б. Мельникова, И.К. Иоффе // Химия растительного сырья. - 2002. - №2 -С. 93-103.

79. Милованов, А.П. Повреждение и адаптация бронхов легких у крыс в процессе длительного ступенчатого охлаждения / А.П. Милованов, А. Момадов // Биологические проблемы Севера. - Магадан. - 1983. - С. 111-112.

80. Недосугова, Л.В. Сравнительная оценка эффективности биофлавоноидов диквертина и танакана в комплексной терапии сахарного диабета 2 типа / Л.В. Недосугова, А.К. Волковой, И.А. Рудько, Д.А. Бегляров, А.А. Кубатиев, М.И. Балаболкин // Клиническая фармакология и терапия. - 2000. - №4 - С. 65 - 67.

81. Непомнящих, Г.И. Особенности патогенеза хронических воспалительных заболеваний легких в аспекте их адаптации / Г.И. Непомнящих // В кн.: « Современные проблемы хронических процессов в клинике и эксперименте». -Новосибирск: «Наука», 1977. - С. 34 - 47.

82. Непомнящих, Г.И. Прижизненная морфология крупных бронхов человека при хронических заболеваний легких: монография // Методические разработки к патогистологическому и ультраструктурному исследованию бронхиальной биопсий. - Новосибирск. - 1977. - 68с.

83. Непомнящих, Г.И. Морфологическая характеристика бронхов человека при хроническом воспалении легких различного генеза в аспекте их адаптации / Г.И. Непомнящих // Вестник Академии медицинских наук СССР. -1978.-№2.-С. 63-67.

84. Непомнящих, Г.И. Патологическая анатомия и ультраструктура бронхов: монография / Г.И. Непомнящих. - Н.: Из - во «Наука», 1979. - 294с.

85. Осипов, А.Н. Активные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, O.A. Азизова, Ю.В. Владимиров // Успехи биологической химии. - 1990. - Т.31. - С. 180-208.

86. Печерский, A.B. Некоторые аспекты процесса генерации, осуществляемой посредством мультипотентных стволовых клеток / A.B. Печерский, В.И. Печерский, М.В. Асеев, A.B. Дробленков, В.Ф. Семиглазов // Цитология. - 2008. - Т. 50, №6. - С. 511 - 519.

87. Поликар, А. Бронхолегочный аппарат. Структура и механизмы в норме и при патологии: монография / А.Поликар, П. Гали. - Н.: Из-во «Наука», 1972. - 333с.

88. Полякова, B.C. Структурная реорганизация воздухоносных и респираторных отделов легких при воздействии неблагоприятных факторов воздушной среды / B.C. Полякова, С.М. Завалеева, A.A. Стадников // Вестн. ОГУ. - 2003. - Т. 1. - С. 66 - 69.

89. Полякова, B.C. Структурная реорганизация покровного эпителия воздухоносных и респираторных отделов легких при воздействии сероводородсодержащей газовой смеси / B.C. Полякова // Морфология. - 2003. -Т. 124, №5. - С. 20-23.

90. Потапович, А.И. Сравнительное исследование антиоксидантных свойств и цитопротекторной активности флавоноидов / А.И. Потапович, В.А. Костюк // Биохимия. - 2003. - Т.68, №5. - С. 623 - 638.

91. Путов, Н.В. Руководство по пульмонологии: руководство / Н.В. Путов, Г.Б. Фелосеева. - Д.: Из - во «Медицина», 1978. - 504с.

92. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О. Ю. Реброва. - М.: Из-во «Медиа Сфера», 2002. - 312с.

93. Репин, B.C. Эмбриональные стволовые клетки: фундаментальная биология и медицина: монография / B.C. Репин, A.A. Ржанинова, Д.А. Шаменков. - М.: «Реметэкс», 2002. - 176с.

94. Романова, JI.K. Регуляция восстановительных процессов: монография / Л.К. Романова. - M.: Из - во «МГУ», 1984. - 175с.

95. Романова, Л.К. Органы дыхания. - В кн.: Атлас сканирующей электронной микроскопии клеток, тканей и органов / Ред. О.В. Волкова, В.А. Шахлямов, A.A. Миронов. - М.: Из - во «Медицина», 1987. - С. 288 - 293.

96. Романова Л.К. Дыхательная система. - В кн.: Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / Ред. Д.С. Саркисов. - М.: «Медицина», 1987. - С. 263 - 284.

97. Романова, Л.К. Выявление мукополисахаридного компонента надплазменного покрытия клеток альвеолярной выстилки легких крыс / Л.К. Романова, А.К. Бойко // Бюллетень экспериментальной медицины. - 1974. -№2.-С. 105-110.

98. Романова, Л.К. Реакция сурфактантной системы и воздушно-кровянного барьера легких на общую острую гипотермию / Л.К. Романова, М.С. Покровская // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1982.-№9.-С. 97-101.

99. Романова, Л.А. Метод определения гидроперекисей липидов с помощью тиоционата аммония / Л.А. Романова, Н.Д. Стальная // Современные методы в биохимии. - М.: Из - во «Медицина», 1977. - С. 64 - 66.

100. Сагалович, Б.М. Физиология и патофизиология верхних дыхательных путей: монография / Б.М. Сагалович. - М.: Из-во «Медицина», 1967.-328с.

101. Серов, В.В. Воспаление: руководство для врачей / В.В. Серов, B.C. Пауков. - М.: Из-во «Медицина», 1995. - 640с.

102. Серов, В.В. Соединительная ткань: монография / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. - М.: Из-во «Медицина», 1981. - 312с.

103. Сизоненко, В.А. Клиническая оценка и лечение местной холодовой травмы / В.А. Сизоненко // Автореферат дисс. д.м.н. - Ленинград, 1990. - 28с.

104. Славочинская, Jl.Б. О кровоснабжении трахео-бронхиального дерева у плодов и новорожденных / Л.Б. Славочинская // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1964, - Т.11, №5 - С.88 - 93.

105. Слоним А. Д. Физиологические адаптации и поддержание восстановленного гомеостазиса / А.Д. Слоним // Физиология человека. - 1982. - Т.8, №3. - С. 355-360.

106. Слуцкий, Л.И. Биохимия нормальной и патологической измененной соединительной ткани: монография / Л.И. Слуцкий. - Л.: Из-во «Медицина», 1969.-375с.

107. Стальная, Е.А. Метод определение диеновой конъюгаты ненасыщенных высших жирных кислот / Е.А. Стальная // Современные методы в биохимии. - М.: «Медицина», 1977. - С. 63 - 64.

108. Струков, А.И. Патологическая анатомия: руководство / А.И. Струков- М.: Из - во «Медицина», 1993. - 688с.

109. Субботин, М.Я. Гистологическая техника / М.Я. Субботин, С.С. Лагучев, Т.Г. Оганесян, Н.М. Алексеева, А.Ф. Суханов. - М.: Из-во «Медгиз», 1954.- 166с.

110. Сыромятникова, Н.В. Метаболическая активность легких: монография / Н.В. Сыромятникова, В.А. Гончарова, Т.В. Котенко. - Л.: Из-во «Медицина», 1987 - 168с.

111. Сюрков, О.Г. Кровоснабжение трахеи и бронхов крыс / О.Г. Сюрков, М.Т. Луценко // Архив АГЭ. - 1983. - №3. - С. 29 - 34.

112. Тараховский, Ю.С. Ускорение фибриллообразование и температурная стабилизация фибрилл коллагена в присутствии таксифоллина (дигидрокверцетина) / Ю.С. Тараховский, И.И. Селезнева, H.A. Васильева, М.А. Егорочкин, Ю.А. Ким // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007. - Т. 144, №12. - С. 640 - 643.

113. Тепляшин, A.C. Характеристика мезенхимальных стволовых клеток человека, выделенных из костного мозга и жировой ткани / A.C. Тепляшин, C.B.

Кожевников, С.З. Шарифуллина, Н.И. Чупикова, М.С. Ростовская, И.П. Савченко // Цитология. - 2005. - Т.47, №2. - С. 130 -135.

114. Теселкин, Ю.О. Антиоксидантное действие дигидрокверцетина / Ю.О. Теселкин, Б.А. Жамбалова, И.В. Бабенкова, Г.И. Клебанов, H.A. Тюкавкина // Биофизика. - 1996. - Т.41, №3. - С. 620 - 624.

115. Теселкин, Ю.О. Антиоксидантное действие дигидрокверцетина при общем у-облучении / Ю.О. Теселкин, И.В. Бабенкова, Г.И. Клебанов, A.B. Асачев, В.К. Колхир // Вопросы биол. мед. фарм. химии. - 1999 - №2. - С. 45 -48.

116. Теселкин, Ю.О. Антиокидантное действие дигидрокверцетина при тетрахлорметановом гепатите / Ю.О. Теселкин, И.В. Бабенкова, В.К. Колхир, А.И. Багинская, H.A. Тюкавкина, Ю.А. Колесник, И.А. Селиванова // Вопросы биол.мед.фарм. химии. - 1999. - №3. - С. 47 - 51.

117. Трубников, Г.А. Антиоксиданты в комплексной терапии больных хроническим бронхитом / Г.А. Трубников, Ю.И. Журавлев // Российский медицинский журнал. - 1998. - №2. - С. 38 - 41.

118. Тюкавкина, H.A. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки / H.A. Тюкавкина, И.А. Руленко, Ю.А. Колесник // Вопр. питания. - 1996. - №2 - С. 33 - 38.

119. Уклистая, Е.А. Антиоксиданты и антигипоксанты в комплексном лечении больных хроническим бронхитом / Е.А. Уклистая, Г.А. Трубникова, A.A. Панов, Ю.И. Журавлев // Российский медицинский журнал. - 1998. - №2. - С. 38 -41.

120. Федосова, Н.Ф. Механизмы дигидрокверцетиновой регуляции функции нейтрофилов у больных сахарным диабетом 2 типа /Н.Ф. Федосова, C.B. Алисиевич, К.В. Лядов, Е.П. Романова, И.А. Рудько, A.A. Кубатиев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004. - Т. 137, №2-С. 164- 167.

121. Фриденшейн, А.Я. Клонирование стромальных клеток-предшественников / А.Я. Фриденштейн // Методы культивирования клеток. -Л.: Из-во «Наука», 1987. - С. 257 - 265.

122. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы кроветворного микроокружения: монография / А.Я. Фриденштейн, Е.А. Лурия. - М.: Из-во «Медицина», 1980. - 216с.

123. Целуйко, С.С. Влияние экстремальных экологических факторов Северо-Востока СССР на строение легких / С. С. Целуйко // Заболевания органов дыхания в экстремальных экологических условиях Северо-Востока СССР. - Благовещенск, 1989. - С. 36 - 92.

124. Целуйко, С.С. Гистофизиология легкого при экспериментальной гипергликемии на фоне введения дигидрокверцетина / С.С. Целуйко, Н.П. Красавина, Л.С. Корнеева, В.А. Доровских // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. - 2011. - Вып.40. - С. 18 - 22.

125. Целуйко, С.С. Гистология дыхательной системы человека: монография / С.С. Целуйко. - Благовещенск: АГМА, 2007 - 36с.

126. Целуйко, С.С. Стволовые клетки трахеи крыс при холодовых воздействиях / С.С. Целуйко, М.М. Горбунов, Д.А. Семенов // Всероссийская научная конференция «Регенеративная биология и медицина»: сб. науч. тр. НИИМЧ РАМН. - Москва, 2011. - С. 161 - 162.

127. Целуйко, С.С. Новый метод изучения ультраструктурной пространственной организации покровного эпителия слизистой оболочки трахеи / С.С. Целуйко, H.A. Вислобоков, П.Р. Казанский, Н.В. Швындина, В.Я. Шкловер, Д.А. Семенов, М.М. Горбунов // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. - 2012. - Вып.45. - С. 52 - 53.

128. Целуйко, С.С. Стволовые клетки в тканях органов дыхания при холодовых воздействиях / С.С. Целуйко, Н.П. Красавина, М.М. Горбунов // Вопросы морфологии XXI века: сб. науч. тр. - Санкт - Петербург, 2010. -Вып.2. - С. 180-181.

129. Целуйко, С.С. Современные взгляды на вопросы пролиферации и дифференцировки стволовых клеток органов дыхания в норме и при холодовых воздействиях / С.С. Целуйко, Н.П. Красавина, Д.А. Семенов, М.М. Горбунов, С.Д. Чжоу, Ц. Ли // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. -2012. - Вып.45. - С. 98 - 102.

130. Целуйко, С.С. Системный анализ компенсаторно-приспособительных реакций в легких: монография / С.С. Целуйко, A.B. Прокопенко. - Благовещенск, 2001.-124с.

131. Целуйко, С.С. Современные взгляды на вопросы дифференцировки камбиальных и стволовых клеток органов дыхания / С.С. Целуйко, Н.П. Красавина, К.В. Тимофеев, T.JI. Огородникова, М.М. Горбунов, JI.C. Корнеева // Материалы П съезда врачей-пульмонолошв Сибири и Дальнего востока 24-24 октября 2007. -Благовещенск, 2007. - С. 146 -149.

132. Чертков, И.Л. Стволовая кроветворная клетка: дифференцировочный и пролиферативный потенциал / И.Л. Чертков, E.H. Дерюгина, Е.Г. Абрахам, Р.Д Левир // Успехи современной биологии. -1991. - Т. 111, №6 - С. 905 - 922.

133. Шишкин, Г.С. Мобилизация функционального резерва респираторных отделов легких при адаптации к климатическим факторам Севера / Г.С. Шишкин, В.К. Преображенская, Д.В. Куличевский // Очерки по эколог, физиол. Под ред. В.А. Труфакина и К.А. Шошенко. - Новосибирск: Из - во СО РАМН, 1999. - С. 112 -125.

134. Шумаков, В.И. Костный мозг как источник получения мезенхимальных клеток для восстановительной терапии поврежденных органов / В.И. Шумаков, H.A. Онищенко, М.Е. Крашенинников, В.А. Зайденов, И.В. Потапов // Вестник трансплантологии и искусственных органов. - 2002. - №4. - С. 46 - 53.

135. Яглов, В.В. Эндокринный аппарат дыхательной системы и перспективы его изучения (обзор литературы) / В.В. Яглов, Ю.А. Лощилов // Гигиена труда и профессиональных заболеваний. - 1988. - №6. - С. 38 - 41.

136. Якименко, М.А. Влияние адаптации к холоду на показатели внешнего дыхания / М.А. Якименко, Т.Г. Симонова, A.M. Пичкуров // Физиол. человека. - 1989. - Т. 15, №5. _ с. 148 - 155.

137. Якименко, М.А. Критерии адаптации человека к холоду / М.А. Якименко // Бюл. СО РАМН. - 1981.- №6. - С. 43.

138. Яхница А.Г. Взаимодействие слизистых и серозных отделов желез трахеобронхиальной системы человека. - В сб.: Вопросы теор. и клинической медицины. - Киев: Из-во «Здоровье», 1969. - С. 160 - 163.

139. Ailsby, R.L. Atipical cilia in human bronchial mucosa / R.L. Ailsby, F. Chdially // Pathology. - 1973, Vol. 109. - P. 75-78.

140. Andersen, O.M. Flavanoids: chemistry, biochemistry, and applications / O.M. Andersen. - London: New York, - 2006. - 1212 p.

141. Areias, F.M. Antioxidant effect of flavonoids after ascorbate / Fe -induced oxidative stress in cultured retinal cells / F.M. Areias, A.C. Rego, C.R. Olivera, R.M. Seabra // J. Biochem. Pharmacology. - 2001. - Vol.62, №1. - P. 111118.

142. Aruoma, O.I. Characterization of drugs as antioxidant prophylactics / I.O. Aruma // Free Radical Biol. Med. - 1996. - Vol.20, №5. - P. 675 - 705.

143. Belicova, A. Antimutagenic effect of heteroxilans, arabinogalactan, pectins and mannas in the euglena assay / A. Belicova, L. Ebringer, J. Krajcovic, Z. Hromadkova, A. Ebringerova // Word Journal of Microbiology and Biotechnology. -2001.-Vol. 17, №3.-P. 293-299.

144. Bernhard, W. A new staining procedure for electron microscopically cytology / W. Bernhard // J. Ultrastruct. Res. - 1969. - № 27. - P. 250 - 256.

145. Bischoff, S.C. Quercetin: potentials in the prevention and therapy of disease / S.C. Bischoff // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. - 2008. - Vol. - P. 733 -740.

146. Bittel, J. The different types of general cold adaptation in man / A.J. Dunn // Neurochem. Int. - 1998. - Vol. 33, №6. - P. 551 - 557.

147. Blenkinsopp, W.K. Proliferation of respiratory tract epithelium in rat / W.K. Blenkinsopp // Extl cell Res. - 1967. - Vol. 46, №.1. - P. 114 - 154.

148. Boers, J.E. Thunnissen F.B. Number and proliferation of basal and parabasal cells in normal human airway epithelium / J.E. Boers, A.W. Ambergen, F.B. Thunnissen // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 1998. - Vol. 157 - P. 2000 - 2006.

149. Breinholt, V. Differentials effects of dietary flavanoids on drug metabolizing and antioxidant enzymes in female rat / V. Breinholt, S.T. Lauridsen, L.O. Dragsten // Xenobiotica. - 1999. - Vol. 29, №12. - P. 1227- 1240.

150. Breuer, R. Cell kinetics of normal adult hamster bronchial epithelium / R. Breurer, G. Zajicek, T.G. Cristensen et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. -1990.-№2.-P. 51-58.

151. Brunner, P. Die bronchiale basal membran / P. Brunner // Munch. Wschz., - 1980. - Vol. 122, №.7- S. 237 - 240.

152. Chilton, B.C. Isolation of basal and mucous cell populations from rabbit trachea / B.C. Chilton, J.R. Kennedy, S.V. Ricosa // Respiratory Disease. - 1981. -Vol. 124, №6,-P. 723-727.

153. Cos, P. Cytotoxicity and lipid peroxidation-inhibiting activity of flavanoids / P. Cos, M. Calomme, J.B. Sindambiwe, T. de Bruyne // Planta Med. -2001. - Vol. 67, №6. - P.515 - 519.

154. D' Adamo P. Larch arabinogalactan / P. D Adamo // J. Naturopath Med. -1996.-№6.-P. 33 -37.

155. Dominici, M. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement / M. Dominici, K. Le Blanc, I. Mueller et al. // Cytotherapy. - 2006. - Vol. 84. - P. 315 - 347.

156. Donnely, G.M. Tracheal epithelium kinetics and differentiation in normal rat tissue / G.M. Donnely, D.C. Haack, C. S. Heird // Cell. Tissue kinetics. - 1989. -Vol. 15, №2.-P. 119-130.

157. Ellefsen, P. Goblet cells in the human trachea. Quantitative studes of normal trachea / P. Ellefsen, M. Tos // Anat. Anz. Bd. - 1972. - Vol. 130, №.5. - P. 501 - 520.

158. Groman, E.V. Arabinogalactan for hepatic drug delivery / E.V. Groman, P.M. Enriquez, Chu Jung, L. Josephson // Bioconjugate Chem. - 1994. - №5. - P. 547-556.

159. Gutteridge, J.M. Biological origin of free radicals, and mechanism of antioxidant protection / J. M. Gutteridge // Chem. Biol. Interact. - 1994. - Vol. 91, №2-3.-P. 133- 140.

160. Hakansson, C.H. Studes on the physiology of the trachea. Cilliaiy activity indirectly recorded by a new light beam reflex method / C.H. Hakansson, N.C. Toremaim // Ann. Otol. Rhinol. And Laiyngol. - 1965. - Vol. 74, №.4. - P. 954 - 969.

161. Halliwell B. How to characterize a biological antioxidant / B. Halliwell // Free Radical Res. Comun. - 1990. - Vol. 9. - P.l - 32.

162. Han, R.M. Comparison of flavonoids and isoflavanoids as antioxidants / R.M. Han, Y.X. Tian, Y. Lui, C.H. Chen, X.C. Ai et al. // J. Agric Food. Chem. -2009. - Vol. 57, №9. - P.3780 - 3785.

163. Hernandez, V. Effects of naturally occurring dihydroflavonols from Inula on inflammation and enzymes involved in the arachidonic acid metabolism / V. Hernandez, M.C. Recio, S. Manes, R.M. Giner, J.L. Rios // Life Sci. - 2007. - Vol. 81,№6.-P. 480-488.

164. Hirpara, K.V. Quercetin and its derivatives: synthesis, pharmacological uses with special emphasis on anti-tumor properties and prodrug with enhanced bioavailability / K.V. Hirpara, P. Aggarwal, A.J. Mukherjee, N. Joshi, A.C. Burman // Anticancer. Agents Med. Chem. - 2009. - Vol. 9, №2. - P. 138 - 161.

165. Hong, K.U. Basal cells are a multipotent progenitor capable of renewing the bronchial epithelium / K.U. Hong, S.D. Reynolds, S. Watkins, E. Fuchs, B,R. Stripp // Am J. Pathol. - 2004. - Vol. 164. - P. 577- 588.

166. Huges, T. Microcirculation of the tracheobronchial tree / T. Huges // Nature. - 1965. - Vol. 206, №4982. - P. 425 - 426.

167. Ireenwood, M.F. The normal an respiratory tract surface a scanning electron microscopic study / F. Ireenwood, P. Holland // Lab. Invest. - 1972. - Vol. 27, №3.-P. 296-304.

168. Kaneo, Y. Pharmacokinetics and biodisposition of fluorescent - labeled arabinogalactans, pectins and mannans in the euglena assay / Y. Kaneo, T. Ueno, H. Twase, Y. Yamaguchi, T. Uemura // Word Jornal Microbiology and Biotechnology.

- 2001. - Vol. 17, №3. - P. 293 - 299.

169. Kotton, D.N. Bone marrow-derived cells as progenitors of lung alveolar epithelium / D.N. Kotton, B.Y. Ma, W.V. Cardoso et al. // Development. - 2001. -Vol. 128-P. 51-81.

170. LeBlanc, J. Mechanism of adaptation to cold / J. LeBlanc // int. J. Sports Med. - 1992. - Vol. 13, №1. - P. 169 - 72.

171. Lindstrom, J. Microcirculation in mucous membranes of respiratory airways / J. Lindstrom // - Acta oto-laiyngol. - 1967. - Vol. 64, №224. - P. 431 - 433.

172. Loke, W.M. Metabolic transformation has a profound effect on antiinflammatory activity of flavonoids such as quercetin: lack of association between antioxidant and lipoxygenase inhibitory activity / W.M. Loke, J.M. Proudfoot, S. Steward, A.J. McKinley // Biochem. Pharmacol. - 2008. - Vol. 75, №5. - P. 1045 -1053.

173. Lucther, D.L. The mucous laver of the trachea and major bronchi in the rat / D.L. Lucther // Scanning Electron Mucrosc. - 1978. - Vol. 2. - P. 1089 - 1095.

174. Meyrick, B.A reconstruction of the dust system and secretory tubules of the human bronchial submucosae gland / B. Meyrick, J.M. Sturgess, L. Reid // Thorax. - 1969. - Vol. 24, N6. - P. 729 - 736.

175. Rhodin, A. Ultrastructure and function of the human tracheal mucosa. The ciliated cell / A. Rhodin, E. Radford // Amer. Rev. Respiratory diseases. - 1966.

- Vol. 93, N3. - Pt. 2. - P.l - 14.

176. Polgar, G. The functional development of respiratory system / G. Polgar, I.R. Weng // Amer. Rev. Resp.Dis. - 1979. - Vol. 120. - P. 625 - 629.

177. Ponder, G.R. Arabinogalactan from Western larch. Part III. Alkaline degeneration revisited, with novel conclusions on molecular structure / G.R. Ponder // Carbohydrate Polymers. - 1997. - Vol. 34, №4. - P. 251 - 261.

178. Prescott, J.H. New molecular weight froms of arabinogalactan from Larix occidentalis / J.H. Prescott, E.V. Groman, G. Gyongyi // Carbohydrate Research. - 1997. - Vol. 301. - P. 89 - 93.

179. Pry or, W.A. The role of free radical reactions in biological system / W. A. Pryor // Free radicals in biology. - 1976. - Vol. 1. - P.41 - 50.

180. Ruiz, P.A. Quercetin inhibits TNF-induced NF-kappaB transcription factor recruitment to proinflammatory gene promoters in murine intestinal epithelial cells / P.A. Ruiz , A. Braune, G. Holzlwimmer, L. Quintanilla-Fend, D. Haller // J. Nutr.- 2007. -Vol. 137, №5.-P. 1208-1215.

181. Showalter, A.M. Arabinogalactan - proteins: Structure, expression and function / A.M. Showalter // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2001. - Vol. 58, №10.- P. 1399-1417.

182. Stern, M.M. Epidermal stem cells are resistant to cellular aging / M.M. Stern, J.R. Bickenbach // Agin. Cell. - 2007. - Vol. 64. - P. 439 - 452.

183. Stockinger, L. Ultrastructure and histophysiologies des respirationstractes / L. Stockinger // Mikroskope. - 1970. - Vol. 26. - P.83 - 98.

184. Sturgess, J.M. The mucous lining of major bronchi in the rabbit lung / J.M. Strurgess //Amer.Rev.RespiratDisease. - 1977. - Vol. 115, №5. - P. 819 - 827.

185. Suri, S. A comparative study of the effects of quercetin and its glucuronide and sulfate metabolites on human neutrophil function in vitro / S. Suri, M.A. Taylor, A. Verity, S. Tribolo, P.W. Needs et al. // Biochem. Pharmacol. -2008. - Vol. 76, №5. - P.645 - 653.

186. Takemura, G. Demonstration of hydroxy 1 radical and its role in hydrogen peroxide-induced myocardial injury: hydroxyl radical dependent and independent mechanisms / G. Takemura, T. Onodera, R. W. Millard, et al. // Free. Radic. Biol. Med. - 1993.-Vol. 15, №1. -P. 13-25.

187. Tarahovsky, Y.S. Rafts making and rafts breaking: how plan flavonoids may control membrane heterogeneity /Y.S. Tarahovsky, E. Muzafarov, Y.A. Kim // Mol. Cell Biochem. - 2008. -Vol. 314, №1-2. - P. 65 - 71.

188. Tos, M. Anatomy of the tracheal mucoses cilands in man / M. Tos // Arch. Otolaryng. - 1970. -Vol. 92, №2. - P.132 - 137.

189. Tseluyko, S.S. Revealing precancerous stem cell in lungs and mammary gland / S.S. Tseluyko, M.M. Gorbunov, K.V. Timofeev, T.E. Kochegarova, O.V. Lysenko // IV Russia and china «Medical-biological bases of drug therapy in traditional east and up-to-date medicine». - Blagoveshchensk, 2007. - P. 130 - 131.

190. Vince, A.J. The effect of lactulose, pectin, arabinogalactan, and cellulose on the production of organic acids and metabolism of ammonia by intestinal bacteria in a faecal incubation system / A.J. Vince, N.I. McNeil, J.D. Wagner, O.M. Wrong // Br. J. Nutr. - 1990. - Vol. 63 - P. 17 - 26.

191. Vladimirov, Y.A. Dihydroquercetin (taxifolin) and other flavonoids as inhibitors of free radical formation at key stages of apoptosis / Y.A. Vladimirov, E.V. Proskurina, E.M. Demin, N.S. Matveeva et al. // Biochemistry. - 2009. - Vol. 74, №3. - P.301 - 307.

192. Ueda, H.A hydroxyl group of flavonoids affect oral anti-inflammatory activity and inhibition of systemic tumor necrosis factor-alpha production / H. Ueda, C. Yamazaki, M. Yamazaki // Biosci. Biothechnol. Biochem. - 2004. - Vol. 68, №1. -P. 119-125.

193. Wang, Y.H. Taxifolin ameliorates cerebral ischemia-reperfusion injury in rats through its anti-oxidative effect and modulation of NF-kappa B activation / Y.H. Wang, C.C. Chang, K.T. Liou et al. // J. Biomed Sci. - 2006. - Vol. 13, №1. - P. 127 - 141.

194. Willfor, S. Isolation and characterization of water-soluble arabinogalactans from the heartwood of Norway spruce and Scots pine / S. Willfor, B. Holmbon // Proc. 10th Int. Symp. Wood Pulp. Chem., Yokohama, Japan. - 1999. -Vol. 2.-P. 32-34.

195. Zhanataev, A.K. In vivo study of dihydroquercetin genotoxicity / A.K. Zhanataev, A.V. Kulakova, V.V. Nasonova, A.D. Durnev // Bull. Exp. Biol. Med. -2008. - Vol. 145, №3. - P. 338 - 340.