Реакции клеточных систем зерновых культур in vitro и биотестирование селекционного материала на устойчивость к неблагоприятным абиотическим факторам среды тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат сельскохозяйственных наук Россеев, Владимир Михайлович

• Россеев, Владимир Михайлович
• кандидат сельскохозяйственных наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат сельскохозяйственных наук Россеев, Владимир Михайлович

Введение

1 Метод культуры клеток и тканей in vitro и некоторые аспекты использования его в селекции растений (аналитический обзор)

2 Материал и методика исследований

3 Реакции клеточных систем при культивировании in vitro каллусо- и морфогенез)

3.1 Изучение реакций клеточных систем на каллусогенной среде

3.2 Получение растений - регенерантов

4 Изменчивость растений-регенерантов и их потомства

4.1 Изменчивость растений-регенерантов по продуктивности и ее элементам

4.2 Изучение потомства растений-регенерантов

5 Биотестирование и отбор in vitro зерновых культур (пшеницы, ячменя и овса) на устойчивость(толерантность) к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе

5.1 Связь реакций клеточных систем на каллусогенной среде с устойчивостью (толерантностью) растений к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе

5.2 Селекционные образцы пшеницы ячменя и овса, характеризующиеся повышенной устойчивостью к неблагоприятным абиотическим факторам среды

5.3 Анализ связи реакций клеточных систем на каллусогенной среде с устойчивостью (толерантностью) растений к неблагоприятным факторам среды

5.4 Биотестирование и отбор in vitro как элементы селекционного процесса.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Реакции клеточных систем зерновых культур in vitro и биотестирование селекционного материала на устойчивость к неблагоприятным абиотическим факторам среды»

Актуальность проблемы. Разработка новых, более совершенных способов получения, оценки и отбора растений, в частности на основе достижений физиологии, генетики и биотехнологии, является одним из условий повышения эффективности селекции.

Успех при использовании метода культуры клеток и тканей в селекционном процессе во многом определяется дальнейшим познанием морфогенетических реакций клеточных систем при культивировании in vitro и возможностью более эффективно управлять процессами морфогенеза. Исследования по этим проблемам являются базовыми для последующих работ.

Как показывают результаты опытов, для получения форм с новыми хозяйственно-ценными свойствами возможно использование сомаклональной изменчивости, которая генерируется в культуре соматических клеток in vitro. Однако для более объективной оценки значимости сомаклональной изменчивости в селекции необходимы дополнительные исследования.

В настоящее время существует множество способов оценки растений на устойчивость к различным неблагоприятным факторам среды, в том числе и засухе. Однако известные методы или требуют больших затрат времени и средств, или недостаточно точны. Имеются работы, в которых для оценки и отбора форм на устойчивость используются культуры клеток и тканей на селективных средах. Но при этом устойчивость клеток и тканей in vitro и устойчивость растений в полевых условиях могут быть обусловлены разными механизмами, вследствие чего оценки и отборы на основе прямого переноса результатов по устойчивости клеток и тканей на устойчивость целых растений недостаточно эффективны, поэтому необходимы новые подходы для решения данной проблемы.

Цель работы - разработка способа биотестирования in vitro селекционного материала зерновых культур на устойчивость к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе, и выделение форм с повышенной устойчивостью. Задачи исследований:

1)изучение процессов каллусо- и органогенеза у зерновых при культивировании in vitro и получение каллусных культур с высокой регенерационной способностью;

2)изучение изменчивости у растений-регенерантов и их потомства, анализ сомаклонапьной изменчивости;

3)исследование связи реакций клеточных систем in vitro с устойчивостью (толерантностью) растений к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе;

4) биотестирование in vitro селекционного материала зерновых культур (пшеницы, ячменя и овса) для выделения форм с повышенной устойчивостью.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований установлена связь между реакциями клеточных систем при культивировании in vitro и устойчивостью (толерантностью) растений к неблагоприятным факторам среды. Обоснование сущности этой связи заключается в том, что сохранение клеточными системами высокой регенерационной способности in vitro на среде, подавляющей эту способность, показывает надежность морфогенетических механизмов, а потеря этой способности указывает на слабую защищенность их; способность клеточных систем активно функционировать на аномальной среде без существенных необратимых нарушений является показателем их физиологической устойчивости (толерантности). Новизна работы подтверждена авторским свидетельством и патентом на изобретение.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Разработанный способ биотестирования и отбора по реакциям клеточных систем in vitro дает возможность в лабораторных условиях получить информацию об устойчивости (толерантности) селекционных образцов и провести отбор из гетерогенного материала форм с повышенной устойчивостью к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе.

При использовании разработанного способа для оценки селекционного материала выделены сортообразцы пшеницы, ячменя и овса, характеризующиеся как формы с повышенной физиологической устойчивостью (толерантностью). Рекомендации по результатам биотестирования in vitro учитывались при передаче новых сортов на Государственное сортоиспытание, в частности, овса Памяти Богачкова (Мутика 766) и ячменя Омский 91 (Нутанс 4262).

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на Всесоюзной конференции по биотехнологии злаковых культур (Алма-Ата, 1988), Международной конференции «Биология культивируемых клеток и биотехнология» (Новосибирск, 1988), научно-методическом совещании «Методы комплексной оценки продуктивности и устойчивости сельскохозяйственных растений» (Москва, 1994).

Работа отмечена Дипломом первой степени Сибирским отделением Россельхозакадемии (Новосибирск, 1999). 6

По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ общим объемом 19 страниц, включая авторское свидетельство и патент на изобретение.

Автор выражает благодарность всем сотрудникам, которые оказывали помощь при выполнении данной работы. Это сотрудничество отражено в соответствующих разделах диссертации.

Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Россеев, Владимир Михайлович

выводы

1. При культивировании эксплантатов из зрелых зародышей зерновых культур на каллусогенной среде in vitro возможно образование каллусов разных типов и форм, которые являются отражением морфогенетических реакций клеточных систем.

2. Для сохранения высокой регенерационной способности культуры in vitro при пересадках необходимо по маркерному признаку проводить отбор форм, обладающих такой способностью.

3. Каллусогенная среда может индуцировать в клетках различные обратимые и необратимые изменения, проявление которых на растениях-регенерантах и их потомстве аналогично эффекту от мутагенного фактора.

4. Реакции клеточных систем на каллусогенной среде in vitro имеют связь с устойчивостью растений к неблагоприятным абиотическим факторам среды. Сущность этой связи заключается в том, что сохранение клеточными системами высокой регенерационной способности in vitro на среде, подавляющей эту способность, показывает надежность морфогенетических механизмов, а потеря этой способности указывает на слабую защищенность их; способность клеточных систем активно функционировать на аномальной среде без существенных необратимых нарушений является показателем их физиологической устойчивости (толерантности).

5. Разработанный способ биотестирования растений по реакциям клеточных систем in vitro дает возможность в лабораторных условиях получить информацию об устойчивости (толерантности) селекционного материала к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе.

6. Биотестирование с последующим получением растений-регенерантов можно использовать для отбора из гетерогенного материала форм с

67 повышенной устойчивостью.

7. Результаты, полученные в данной работе, указывают на перспективность использования биотестирования и отбора in vitro как элементов селекции на устойчивость.

68

РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанный способ биотестирования растений (пшеницы, ячменя и овса) по реакциям клеточных систем in vitro рекомендуется использовать для лабораторной оценки селекционного материала на устойчивость к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе и повышенному содержанию солей в почве.

2. Биотестирование in vitro с последующим получением растений-регенерантов предлагается использовать для отбора из гетерогенного материала форм с повышенной устойчивостью к неблагоприятным абиотическим факторам среды.

3. В селекции на засухоустойчивость в качестве исходного материала рекомендуется использовать формы, полученные путем отбора in vitro, в частности, линию ячменя Т851, линию яровой мягкой пшеницы ТЗ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработка новых, более совершенных способов получения, оценки и отбора растений является одним из условий повышения эффективности селекции.

Успех использования метода культуры клеток и тканей в селекционном процессе, в частности в оценке и отборе форм с повышенной устойчивостью к неблагоприятным абиотическим факторам среды, во многом определяется дальнейшим познанием морфогенетических реакций клеточных систем при культивировании in vitro и возможностью более эффективно управлять процессами морфогенеза.

Исследования по каллусо- и морфогенезу, проведенные нами на зерновых культурах, в частности на ячмене, показали, что при культивировании эксплантатов из зрелых зародышей на каллусогенной среде возможно образование каллусных культур разных типов и форм, которые являются отражением морфогенетических реакций клеточных систем.

Тип каллусов - это определенная клеточная система, выделяющаяся спецификой своей организации, ее уровнем.

Формы типа каллуса - это каллусы одного и того же типа, отличающиеся свойствами, характеризующими изменчивость в пределах данной клеточной системы (организации).

При изучении клеточных систем разных типов и форм in vitro выявлено, что в процессе культивирования форма каллусов может воспроизводить не только себя. Она может быть источником других форм того же или другого типа. Этот переход осуществляется преимущественно от форм с большими морфогенегическими способностями к формам, у которых их меньше. Для сохранения высокой регенерационной способности культуры при пересадках необходимо проводить отбор форм, обладающих этой способностью. Отбор проводится по маркерному признаку. Таким маркерным признаком, например у каллусов Ci - формы, является наличие у них зеленых зон с хлорофиллсодержащими клетками.

Следует отметить, что несмотря на наличие в питательной среде каллусогенного фактора (например, 2,4 - Д) в количестве достаточном, чтобы у эксплантатов большинства сортов индуцировать те или иные типы каллусогенеза, из эксплантатов некоторых сортов на этой же среде возможно образование и побегов (растений-регенерантов).

Использование каллусных культур с высокой регенерационной способностью значительно увеличивает выход растений-регенерантов.

Изучение сомаклональной изменчивости показало, что изменчивость в популяции растений-регенерантов существенно выше в сравнении с изменчивостью контрольных растений исходной линии, причем, она значительно повышается с увеличением возраста культуры тканей, из которой регенерированы растения. При этом средние значения продуктивности и ее элементов значительно снижаются из-за увеличения среди растений-регенерантов доли аномальных форм. Однако среди них возможно появление и плюс-отклонений.

На основе данных по изучению потомства растений-регенерантов можно заключить, что подавляющее большинство изменений, которые создают первичный эффект сомаклональной изменчивости, имеют модификационный характер, а небольшая их часть наследуется потомству. Отмечены изменен ш и по хромосомному набору. Наследственные изменения, возникающие в культуре тканей in vitro, в основном с минус-эффектами и только иногда с плюс-эффектами. Это не может быть причиной того, чтобы полностью исключить использование сомаклональной изменчивости в селекционном процессе, но существенно снижает эффективность применения ее. Показана возможность проведения позитивного отбора по продуктивности из популяции растений-регенерантов.

Исследования показывают, что эффективным может быть применение метода культуры тканей для решения иных задач, в частности, как показано в данной работе, для биотестирования и отбора in vitro селекционного материала.

Эксплантаты сортов, культивируемые in vitro, могут в разных соотношениях давать каллусы с высокой и низкой регенерационной способностью, а также побеги. Исследования показывают, что, используя метод культуры клеток и тканей, по реакциям клеточных систем при определенных условиях культивирования in vitro можно осуществить биотестирование растительного материала на физиологическую устойчивость (толерантность) к неблагоприятным абиотическим факторам среды, в частности засухе.

По реакциям эксплантатов на каллусогенной среде можно определить индексы устойчивости изучаемого образца.

Показателем устойчивости на ранних этапах развития растений (i2l) является доля культур (культуральных пробирок) с зелеными проростками через 30 - 35 дней культивирования эксплантатов на каллусогенной среде.

Показателями устойчивости (толерантности) образца в целом за период развития являются доля культур, содержащих каллусы с высокой регенерационной способностью (ii), и доля культур с растениями-регенерантами (i2). Значения этих показателей определяют через 80 - 90 дней культивирования эксплантатов.

Следует отметить, что режим биотестирования устанавливается опытным путем. Например, можно установить такой режим, когда наблюдается следующая зависимость: устойчивость повышенная или высокая, если ii+ i2>0,50; устойчивость высокая , если i2>0,50.

При анализе связи реакций клеточных систем на каллусогенной среде с устойчивостью растений к неблагоприятным абиотическим факторам среды в качестве основного соединительного звена рассматривается фитогормональная система. При этом просматривается следующая цепь связей: генотип - гормональный статус -спектр реакций клеточных систем in vitro — устойчивость растений.

Разработанный способ биотестирования in vitro, по-видимому, является тестом на «общую» физиологическую устойчивость (толерантность) растений. Это подтверждается опытами, в которых выделенные in vitro по устойчивости формы при полевых испытаниях показывают повышенную устойчивость к разным неблагоприятным факторам, например, засухе и повышенному содержанию солей в почве.

Возможность получения объективной информации об устойчивости образца путем биотестирования in vitro обуславливается природой связи реакций клеточных систем на каллусогенной среде с устойчивостью генотипа. Сущность этой связи заключается в том, что сохранение культивируемыми клетками высокой регенерационной способности на среде, подавляющей эту способность, показывает надежность морфогенетических механизмов, а потеря этой способности указывает на слабую защищенность их; способность биологической системы активно функционировать на аномальной среде без существенных необратимых нарушений является показателем физиологической устойчивости (толерантности) системы.

Следствием этой связи является возможность отбора in vitro из

65 гетерогенного материала форм с повышенной устойчивостью, в частности засухе.

Анализ эффективности отбора in vitro позволяет заключить, что данный отбор однозначно положительного результата не гарантирует, но увеличивает вероятность выделения форм с повышенной и высокой устойчивостью.

Результаты, полученные в данной работе, указывают на перспективность использования разработанного способа биотестирования и отбора in vitro в селекционном процессе.

Список литературы диссертационного исследования кандидат сельскохозяйственных наук Россеев, Владимир Михайлович, 2001 год

1. Shimada Т., Sasakuma Т., Tsunewaki K. In vitro culture of wheat tissue. I. Callus formation, organ redifferentiation and singl cell culture. // Can. J. Genet. Cytol. 1969. - V. 11, № 2. - P.294-304.

2. Nakano M., Maeda E. Shoot differentiation in callus of Oryza sativa L./ Z. Pflanzenphysiol. 1979. - V. 93, № 5. - P.449-458.

3. Кучеренко Л.А., Мамаев Г.Г. Каллусогенез и органогенез в культуре ткани различных сортов риса // С.-х. биология. 1980. - Т15, № 3. - С.384-386.

4. Давоян Э.И. Культура каллуса и регенерация растений риса как один из методов создания нового исходного материала в селекции // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М., 1979. - С.23-31.

5. Cheng T.Y., Smith Н.Н. Organogenesis from callus culture of Hordeum vulgare // Planta. 1975. - V. 123, № 3. - P.307.

6. Першина Л.А., Исаева H.A. Каллусообразование и особенности органогенеза в культуре тканей межвидовых гибридов ячменя // Физиология растений. 1982. - Т.29, 3. - С.557-563.

7. Исаева Н.А., Першина Л.А., Шумной В.К. Образование побегов и корнеобразных структур в каллусной ткани межвидовых гибридов ячменя и исходных сортов и видов // Культура клеток растений и биотехнология.

8. М.: Наука, 1986. С.178-181.9,Orton T.J. A quantitative analysis of growth and regeneration from tissue cultures of Hordeum vulgare, H. jubatum and their interspecific hybrid // Environ and Exp. Bot. 1979. - V. 19, № 4. - P.319-335.

9. Sears R.G., Deckard E.L. Tissue culture variability in wheat: callus induction and regeneration I I Crop Sci. 1982. - V. 22, № 3. - P.546-550.

10. Beckert M., Pollacsek M. Expression de variability genetique du Mais (Zea mays L.) en differentes conditions de culture de tissus // Ann. amelior. plant. 1979. V. 29, № 5. - P.563-581.

11. Фадеева T.C., Лутова Л.А., Козырева О.Г. Изучение процесса регенерации как генетического признака с использованием метода культуры изолированных органов // Исследования по генетике. 1974. -№5.-С.63-71.

12. Карабаев М. Культивируемые клетки пшеницы и кукурузы: физиологические и биотехнологические аспекты. Автореф. докт. дисс. -М., 1994.-С.3-8.

13. Дмитриева Н.Н. Проблема регуляции морфогенеза и дифференциации в культуре клеток и тканей растений // Культура клеток растений. М., 1981. - С.113-123.

14. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М., 1964. - 272 с.

15. Диксон Р.А. Изолирование и поддержание каллусных и суспензионных культур клеток // Биотехнология растений: культура клеток. М., 1989. - С.8-32.

16. Способ получения растений регенерантов риса: А.с. 986345, СССР/ Кучеренко Л.А. - № 3339019/30-15; Заявл. 22.09.81; Опубл. 1983, Бюл. №1.

17. Kohler К.- Н., Le Tran В., Kahl М. Wechselwirkungen von Licht und Phytohormonen bei der Gewebekultur // Potsdam Forsch. B. 1988. - № 57. - S.128-132.

18. Murashige Т., Scoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture // Physiol, plant. 1962. V. 15, № 13.1. Р.473-497.

19. Gamborg O.L., Eveleigh D.E. Culture methods and detection of gluconases in cultures of wheat and barley // Can. J. Biochem. 1968. - V. 46, № 5. - P.417-421.

20. Shenk R.J., Hildebrandt A.C. Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous cell cultures // Can. J. Bot. -1972. V. 50, № 1. - P. 199-204.

21. Staudt G. The effect of myo-inositol on the growth of callus tissue in Vitis// J. Plant Physiol. 1984. - V. 116, № 2. - P. 161-166.

22. Никитина Е.Д. Оптимизация регенерационных процессов в культуре незрелых зародышей Triticum aestivum// Современные проблемы сельского хозяйства и пути их решения: Юбилейный сборник научных трудов. Барнаул, 2000. - С. 149-165.

23. Shimada Т. Plant regeneration from stem-derived callusses of wheat// Wheat Inform. Serv. 1979. - № 50. - P.59-60.

24. Heyser J.W., Nabors M.W. Long term plant regeneration, somatic embryogenesis and green spot formation on secondaiy oat (Avena sativa) callus// Pflanzenphysiol. 1982. - V. 107, № 2. - P.153-160.

25. Nabors M.W., Heyser J.W., Dykes T.A., De Mott K.J. Long-duration, high frequncy plant regeneration from cereal tissue cultures// Planta. -1983. V. 157, № 5, - P.385-391.

26. Ozias-Akins P., Vasil I.K. Plant regeneration from cultured immature embryos and inflorescence of Triticum aestivum L. (Wheat), evidence for somatic embryogesis// Protoplasma. 1982. - V. 110, № 2. - P.95-105.

27. Способ получения растений: A.c. 1054941, СССР/ Папазян Н.Д., Суханов В.М., Тырнов B.C. № 3273679/30-15. - 1981.

28. Хурдук Н., Палада-Николау М. Явления морфогенеза ирегенерации растений из каллуса у пшеницы// Теоретические и прикладные аспекты селекции и семеноводства пшеницы, ржи, ячменя и тритикале. Одесса, ВСГИ. -1981. - С.60-61.

29. Larkin P.J., Scowcroft W.R. Somaclonal variation a novel source of variability from cell cultures for plant improvement// Theor. and Appl. Genet. - 1981. - V. 60, № 4. - P. 197-214.

30. Larkin P.J., Ryan S.A., Brettell R.I., Scowcroft W.R. Heritable somaclonal variation in wheat// Theor. and Appl. Genet. 1984. - V. 67, № 2. -P.443-445.

31. Orton T.J. Somaclonal variation: theoretical and practical considerations// Gene Manipul. Plant Improv. 16-th Stadler Genet. Simp., 1984. N.-Y.; L, 1984. - P.427-468.

32. Кучеренко JI.А. Индуцированный морфогенез в культуре тканей риса и его использование для создания исходного селекционного материала// Культура клеток растений и биотехнология. М., 1986. -С.211-213.

33. Кучеренко JI.A. Сомаклональные варианты и клеточная селекция риса// Биология культивируемых клеток и биотехнология. -Новосибирск, 1988. С.5-6.

34. Искаков А.Р. Генотипическая изменчивость растений ячменя Hordeum vulgare L., полученных из культуры соматических клеток: Автореф. дис. биолог, наук. Киев, 1988. - 19с.

35. Касаева К.А. применение биотехнологических методов в селекции растений: Обзор М.С. Агропроминформ. 1.1.1., 1989. 56с.

36. Scowcroft W.R.// Genetic flux in plants. 1985. - P.217-245.

37. Roth E.J., Frazier B.L., Apuya N.R., Lark K.G. Genetic variation in tissue cultures of soybean Glycine max (L) Merrill.// Genetics. 1989. - V. 121, № 2. - Р.359-368/

38. Герасимова Т.И. "Транспозиционные взрывы" при дестабилизации генома у Drosophila melanogaster// Молекулярные механизмы генетических процессов: Молекулярная генетика, эволюция и молекулярно-генетические основы селекции. М.: Наука. 1985. С.13-20.

39. Peschke V.M., Phillips R.L., Gegenbach B.G. Discovery of transposable element activity among progeny of tissue culture-derived maize plants// Science. 1987. V. 238, № 4828. P.804-807.

40. Сидорова H.B., Моргун B.B., Логвиненко В.Ф, Банникова В.П. Изучение сомаклональной изменчивости растений регенерантов озимой пшеницы// биология культивируемых клеток и биотехнология. -Новосибирск, 1988. - Т. 2. - С.264.

41. Evans D.A. Practical use of genetic variation derived from in vitro culture// Nucl. Tech. and in vitro Cult. Plant Improv. Proc. Int. Symp., Vienna, 19-23 Aug., 1985. Vienna, 1986. - P.331-337.

42. Использование клеточных технологий в селекции картофеля/ Отв. за выпуск Л.М. Хромова. М., 1987. - 125с.

43. Яковлева Г.А., Дубинич В.Л., Гончарова Н.Н., Кожушко Н.В. Морфогенез в каллусной культуре картофеля и селекционная оценка регенерантов// Биология культивируемых клеток и биотехнология. -Новосибирск, 1988. Т. 2. - С.261.

44. Швидченко В.К., Созинова Л.Ф. Использование метода сомаклональной вариабельности при создании новых сортов яровой мягкой пшеницы// Проблемы развития аграрного сектора в XXI веке. -Кокшетау, 1999. Т. 1. - С.132-134.

45. Chaleff R.S. Genetics of higher plants application of cell culture. -N. Y.: Cambridge Univ. press. - 1981.

46. Meins F. Heritable variation in plant culture// Annu Rev. Plant Physiol., 1983. - V. 34. - P.327-346.

47. Сидоров B.A., Сидорова H.B. Сомаклональная изменчивость -источник генетического разнообразия у растений// Цитология и генетика.1987. Т. 21, № 3. - С.230-236.

48. Искаков А.Р., Гапоненко А.К. Генотипическая изменчивость растений ячменя, полученных из клеточных культур// Проблемы молекулярной и популяционной генетики. М., 1988. - С. 111-116.

49. Новосельская А.Ю, Упелниск В.П., Метаковский Е.В. Идентификация генотипа регенеративных растений, полученных из каллусной культуры пшеницы// Тезисы докладов Всесоюзной конференции по биотехнологии злаковых культур. Алма-Ата, 1988. -С.76.

50. Шмальгаузен И.И. Пути и закономерности эволюционного процесса. М.: Наука, 1983. - С.14-20.

51. Рапопорт И.А. Метод адаптивной селекции// Химический мутагенез в создании сортов с новыми свойствами. М.: Наука, 1986. -С.3-52.

52. Мезенцева О.Ю. Использование тканевых и клеточных культур в селекции на устойчивость к фитопатогенам// Селекция и семеноводство.1990. -№4. -С.59-62.

53. Ingram D.S., Brettell R.I.S., Thomas E. Production of toxin resistant maize plants through tissue culture// Active Def. Mech. Plants Proc. NATO Adv. Study Inst. Cape Sounion, 21 Apr. 3 May, 1980. New York; London, 1982. P.333-334.

54. Hartman C.L., Mc Coy T.J., Knous T.R. Selection of alfalfa (Medicago sativa) cell lines and regeneration of plants resistant to the toxin (s) produced by Fusarium oxisporum f. sp. medicaginis// Plant. Sci. Lett. 1984. -V. 34, № 1-2. - P. 183-194,

55. Ling D.H., Vidhyaseharan P., Borromeo E.S., Zapata F.J., Mew T.W. In vitro screening of rice germplast for resistance to brown spot disease using phytotoxin// Theor. and Appl. Genet. 1985. - V. 71, № 1. - P. 133-135.

56. Shahin E.A., Spivey R. A single dominant gene for Fusarium wilt resistance in protoplast derived tomato plants// Theor. and Appl. Genet. -1986. V. 73, №2. - PI64-169.

57. Сидоров В.А. Биотехнология растений. Клеточная селекция. -Киев: Наук, думка, 1990. 280с.

58. Zhou Rong-ren, Yang Shi-rong, Yu Shu-wen// Шиянь шэнъу сюэбао, Acta biol. exp. sin. 1986. - V. 19, № 3. - P.279-291.

59. Meredith C.P., Conner A.J., Schettini T.M. The use of cell selectionto obtain novel plant genotypes resistant to mineral stresses// Iowa State J. Res. 1988. - Y. 62, № 4. - P.523-535.

60. Мезенцев A.B., Голышкина H.A., Солодкая JI.A. Создание исходного селекционного материала клевера и люцерны методом культуры клеток и тканей// Сб. науч. тр. ВНИИ кормов. 1984. - № 31. -С.57-62.

61. Tian Shaohua, Liang Zhuging, Gao Mingwee, Xiang Youbin// Хэнун сюэбао, Acta agr. nucl. sin. 1988. - V. 2, № 2. - P.65-72.

62. Vajrabhaya M., Thanapaisal Т., Yajrabhaya T.// Plant Cell Repts. -1989,-V. 8, №7. -P.411-414.

63. Timm D.A., Waskom R.M., Miller D.R., Nabors M.W. Greenhouse evaluation of regeneration spring wheat for enhanced salt tolerance // Cereal Res. Commun. -1991. V. 19, № 4. - P.451-457.

64. Smith R.H., Bhaskaran S., Miller F.R. Screening for drought tolerance in sorghum using cell culture// In Vitro. 1985. - V. 21, № 10. -P.541-545.

65. Smith R.H., Bhaskaran S. Sorghum cell culture: somaclonal variation/screening// Iowa State J. Res. 1988. - V. 62, № 4. - P.571-585.

66. Тучин C.B., Васильева Л.Н., Сахаджи Т.Н. Экспрессия засухоустойчивости у сомаклональных вариантов пшеницы, отселектированных in vitro// Всес. симп. Новые методы биотехнологии растений, Пущино, 20-22 нояб., 1991.: Тез. докл. Пущино, 1991. - С.82.

67. Созинова Л.Ф., Швидченко В.К. Биотехнологические методы в селекции мягкой пшеницы на засухоустойчивость// Проблемы развития аграрного сектора в XXI веке. Кокшетау, 1999. - Т. 1. - С.73-75.

68. American society of agronomy annual meeting// Agricell Report. -1988.-V. 10, № 1. P.4-5.

69. Mc Coy T.J. Tissue culture evaluation of NaCl tolerance in Medicago species: Cellular versus whole plant response// Plant Cell Repts. -1987.-V. 6, № 1. P.31-34.

70. Бутенко Р.Г. Клеточные технологии в селекционном процессе// Состояние и развитие сельскохозяйственной биотехнологии: Материалы Всесоюз. конф. Москва, июнь 1986 г. JL, 1986. - С.29-38.

71. Chandler Stephen F., Vasil Indra К. Selection and characterization of NaCl tolerant cells from embryogenic cultures of Pennisetum purpureum Schum. (Napier grass)// Plant Sci. Lett. 1984. - V. 37, № 1-2. - P.157-164.

72. Гродзинский Д.М. Надёжность растительных систем. Киев: Наукова думка, 1983. - 368с.

73. Гродзинский Д.М., Корогодин В.И., Кутлахметов Ю.А. Принципы анализа надёжности биологических систем// Надёжность клеток и тканей. Киев: Наукова думка, 1980. - С. 19-26.

74. Шмальгаузен И.И. Пути и закономерности эволюционного процесса. М.: Наука, 1983. - С.111-127.

75. Четвериков С.С. Проблемы общей биологии и генетики. -Новосибирск: Наука, 1983. С.210-215.

76. Веселова Т.В., Веселовский В.А., Чернавский Д.С. Стресс у растений (Биофизический подход). М.: Изд-во Моск. ун-та, 1993. - 144с.

77. Гудвин Б. Аналитическая физиология клеток и развивающихся организмов. М.: Мир, 1979. - С.236-242.

78. Конев С.В., Аксенцев СЛ., Черницкий Е.А. Кооперативные переходы белков в клетке. Минск: Наука и техника, 1970. - 204с.

79. Лархер В. Экология растений. М.: Мир, 1978. - С.347-348.

80. Кулаева О.Н. Цитокинины, их структура и функция. М.: Наука, 1973. - С т- ZW,

81. Хочочка П., Солеро Дж. Стратегия биохимической адаптации. -М.: Мир, 1977.-398с.

82. Батыгин Н.Ф. Онтогенез высших растений. М.: Агропромиздат, 1986. - 100с.

83. Ковалёв В.М., Курапов П.Б., Шевелуха B.C. Оценка продуктивности и устойчивости растений на ранних этапах онтогенеза по их гормональному статусу// Методы комплексной оценки продуктивности и устойчивости сельскохозяйственных растений. М., 1994. - С.23.

84. Ниловская Н.Т., Морозова Э.В., Лихолат Т.В., Помелов А.В. Цитокининовые вещества и устойчивость пшеницы к засухе// Устойчивость к неблагоприятным факторам среды и продуктивность растений. Иркутск, 1984. - С. 101.

85. Mothes К. Uber das Altern der Blatter und die Moglichkeit ihrer Wiederjungung//Naturwissenschaften. 1960. - V. 15. - S.337.

86. Engelbrecht L., Mothes K. Weitere Untersuchungen zur experimentellen Beeinflussung der Hitzewirkung bei Blatern von Nicotiana rustica// Flora. V. 154. - S.279.

87. Engelbrecht L., Nogai. Zur Frage der Kinetinwirkung gegenuber der Stoffwechselhemmung durch Chloramphenikol// Flora. V. 154. S.267.

88. Кулаева O.H., Воробьёва И.П. К вопросу о механизме действия кинетина на синтез белкаII Физиология растений. 1962. № 9. - С. 106.

89. Кулаева О.Н.// Цитокинины, их структура и функция. М.: Наука. - 1973. - С.131-133.

90. Skoog F., Miller С. Chemical regulation of growth and organformation in plant tissues cultured in vitro// Sympos. Soc. Exptl Biol. 1957. V. 11.-P.118.

91. Бутенко Р.Г., Яковлева З.М. Контролируемый органогенез и регенерация целого растения в культуре недифференцированной ткани// Известия АН СССР, серия биол. -1962. № 2. - С.230.

92. Клейн P.M., Клейн Д.Т. Методы исследования растений. М.: Колос, 1974. - 527с.

93. Паушева З.П. Практикум по цитологии растений. —М.: Колос, 1980. 304с.

94. Доспехов Б. А. Методы полевого опыта. М.: Колос, 1979. 416с.

95. Филипченко Ю.А. Изменчивость и методы ее изучения. М.: Наука, 1978. -240с.

96. Рокитский П.Ф. Введение в статистическую генетику. — Минск.: Вышайшая школа, 1974. 447с.

97. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 293с.

98. Россеев В.М. Изучение культуры тканей ячменя// Теоретические основы селекции и семеноводства сельскохозяйственных культур в Западной Сибири. Новосибирск, 1985. - С.105-108.

99. Сурин Н.А., Ляхова Н.Е. Селекция ячменя в Сибири. -Новосибирск, 1993. С. 107-134.

100. Роберте Е.Г. Цитологические, генетические и метаболические изменения, связанные с потерей жизнеспособности // Жизнеспособность семян. -М.: Колос, 1978. С. 244-288.

101. Мешкова Л.В., Россеева Л.П., Россеев В.М. Линия ТЗ -высокоэффективный донор устойчивости к бурой ржавчине // Селекция и семеноводство. 1995. - №1. - С. 20-21.

102. Жученко А.А. Экологическая генетика культурных растений. -Кишинев.: Штиинца, 1980. С.441-476.

103. Способ оценки растений in vitro к абиотическим факторам внешней среды: Пат. 2146865 Россия, МПК7 А01Н4/00, А01Н1/04/Россеев

104. B.М.; Сиб. НПО «Колос». №92002021/13; Заявл. 26.10.92; Опубл. 27.03.00, Бюл.№9.

105. Россеев В.М. Новый способ оценки растений на устойчивость к неблагоприятны факторам // Селекция и семеноводство. 1995. - №1. — С. 31-32.

106. Россеев В.М., Козлова Г.Я. Биотестирование in vitro зерновых культур на устойчивость к неблагоприятным абиотическим факторам среды // Проблемы развития аграрного сектора в XXI веке. Кокшетау, 1999.-Т.1. - С. 73-75.

107. Кефели В.И. Комплексный принцип оценки селекционного материала на ростовые параметры по реакции на стресс и уровень питания // Методы комплексной оценки продуктивности и устойчивости сельскохозяйственных растений. М., 1994. - С. 1-2.

108. Способ размножения растений ячменя in vitro: А.с. 1161024, СССР, МКИ А01НЗ/00/ Россеев В.М.; Сиб.НПО «Колос».- №3548330/30 -15; Заявл. 10.12.82; Опубл. 15.06. 85, Бюл. № 22.

109. Россеев В.М. Получение растений-регенерантов из каллусной культуры ячменя с высокой регенерационной способностью: Метод, рекомендации / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние, СибНИИСХ. Новосибирск, 1988.-7с.

110. Россеев В.М. Способ получения каллусной культуры ячменя с высокой регенерационной способностью // Тезисы докладов Всесоюзной конференции по биотехнологии злаковых культур. Алма-Ата, 1988.1. C.75-76.

111. Россеев В.М. Получение каллусной культуры ячменя с высокой регенерационной способностью и изучение растений-регенерантов // Тез.81докл. Международной конференции «Биология культивируемых клеток и биотехнология». Новосибирск, 1988. - Т.2. - С.268.

112. Россеев В.М., Козлова Г.Я. Биотестирование in vitro зерновых культур на устойчивость к неблагоприятным абиотическим факторам среды // Проблемы развития аграрного сектора в XXI веке.- Кокшетау, 1999. — Т.1. С.73-75.

113. Зыкин В.А., Белан И.А., Россеев В.М., Пашков С.В. Селекция яровой пшеницы на адаптивность // Докл. Рос. акад. с.-х. наук. 2000. -№2. - С. 5-7.