Разработка высокоочищенного препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Ситник, Наталья Павловна

• Ситник, Наталья Павловна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ситник, Наталья Павловна

Список сокращений и условных обозначений.

Введение.

Обзор литературы.

Глава 1 Иммунологические особенности получения гетерологичной антирабической плазмы.

1.1 Характеристика вирусного антигена и субстрата для репродукции вируса бешенства.

1.2 Применение адъювантов для получения специфичной плазмы.

1.3 Зависимость антительного ответа от дозы, интервалов и методов введения вирусного антигена.

Глава 2 Технологические особенности получения препаратов гетерологичных иммуноглобулинов и их характеристика.

2.1 Методы получения гетерологичных иммуноглобулинов.

2.2 Состав и характеристика препаратов гетерологичных иммуноглобулинов.

Собственные исследования.

Глава 3 Материалы и методы исследований.

3.1 Материалы исследования.

3.2 Методы исследования.

Глава 4 Разработка способа получения высокоспецифичной лошадиной антирабической плазмы.

4.1 Изучение влияния степени очистки вирусного антигена на качественные характеристики гетерологичного антирабического иммуноглобулина.

4.2 Разработка метода истощения антител к антигенам клеток почек сирийского хомяка из реактогенной антирабической плазмы.

4.3 Изучение влияния дозы вирусного антигена на специфическую активность антирабической плазмы.

4.4 Разработка количественного метода определения антигенов клеток почек сирийского хомяка.

4.5 Изучение влияния различных адъювантов на специфическую активность антирабической плазмы.

4.6 Определение оптимальной концентрации алюминия фосфата.

4.7 Изучение зависимости титра специфических антител от дозы вируса бешенства, сорбированного на алюминия фосфате.

4.8 Оценка влияния субстрата репродукции вируса бешенства на специфическую активность антирабической плазмы.

Глава 5 Разработка технологии получения высокоочищенного препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади.

5.1 Изучение различных методов получения препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади.

5.1.1 Получение иммуноглобулина с использованием ионообменной хроматографии на DEAE-Toyopearl.

5.1.2Получение иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади с использованием аммония сульфата.

5.1.3Получение иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади с использованием риванола.

5.1.4Получение иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади с использованием каприловой кислоты.

5.1.5Сравнение качества иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади, полученного разными методами.

5.2 Изучение влияния концентрации натрия хлорида и стабилизаторов -мальтозы и глицина на качество конечного препарата иммуноглобулина антирабического.

5.3 Сравнение качества и стабильности разработанного иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади с коммерческими аналогами.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка высокоочищенного препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади»

Актуальность проблемы

По данным ВОЗ (2005), в мире ежегодно регистрируется от 35000 до 55000 случаев смерти людей от бешенства и около 500000 случаев активно-пассивной иммунизации [Connelly К.Р., 2004; Goudsmit J. et al., 2006]. При этом 99 % смертности от гидрофобии приходится на развивающиеся государства [WHO, 2005; Sriaroon С. et al., 2006; Sudarshan M.K. et al., 2007], где в числе погибших находятся лица, которым отказано в лечении из-за дефицита антирабических препаратов, в особенности антирабического иммуноглобулина [Рахимова Ф.И. и др., 1995]. Случаи человеческого бешенства имеют место даже в благополучных странах Европы и Америки [Krebs J.W. et al., 2005; Sadkowska-Todys M., Labunska E., 2005; O'Bell S.A. et al., 2006; Tomasiewicz K. et al., 2006]. Проблема гидрофобии актуальна и для РФ, где эпидемиологическая обстановка по бешенству характеризуется как неблагоприятная [Мовсесянц А.А., 2003; Онищенко Г.Г., 2003; Медуницын Н.В., 2004].

Во всем мире эпизоотологическая ситуация по бешенству обусловлена наличием постоянно действующих природных очагов рабической инфекции, из которых нереально искоренить вирус бешенства [Joshi D.D., Bogel К., 1988; Wunderli P.S. et al., 2006; Sudarshan M.K. et al., 2007], особенно среди летучих мышей [Warrell М.J., Warrell D.A., 2004; Morris J., Crowcroft N.S., 2006; Tordo N. et al., 2006], что представляет постоянную угрозу заражения людей вирусом бешенства [Ведерников В.А. и др., 2002; Макаров В.В., 2002].

Бешенство - острая нейроинфекция теплокровных животных, вызываемая рабдовирусом. Инкубационный период заболевания длится от двух недель до шести месяцев [Sudarshan М.К. et al., 2007]. Клиническая картина заболевания бешенством характеризуется тяжелым поражением нервной системы и без специфического лечения неизменно приводит к летальному исходу. Комитет

ВОЗ по бешенству рекомендовал применение АРИГ во всех случаях возможного заражения людей бешенством, так как профилактика бешенства одной антирабической вакциной не всегда эффективна [Suwansrinon К. et al., 2006; Tomasiewicz К. et al., 2006]. Препарат АРИГ входит в состав перечня ВОЗ (2000) основных лекарственных средств. Кроме того, длительная вакцинация часто сопровождается аллергическими реакциями на примесные компоненты антирабической вакцины [Медуницин Н.В., 2004; Sudarshan М.К. et al., 2005].

Гомологичный АРИГ из сыворотки крови человека отличается хорошей переносимостью [Suwansrinon К. et al., 2005]. Однако он почти недоступен из-за высокой стоимости и небольшого объема производства, которые обусловлены трудностями иммунизации волонтеров и недостаточностью сырьевой базы [Wilde Н., Chutivongse S., 1990; Pancharoen С. et al., 2001]. Кроме того, заготовка донорской крови все больше ограничивается расширением противопоказаний к сдаче крови из-за низких физиологических показателей доноров и роста инфекций, передающихся через кровь [Райхер Л.И., Райхер И.И., 1995].

Экономичнее (приблизительно в пять раз по сравнению с ЧАИГ) профилактика бешенства АРИГ из плазмы крови лошадей [Wilde Н et al., 1991; Pancharoen С. et al., 2001; Goudsmit J. et al., 2006]. Использование последнего поколения очищенного ксеногенного АРИГ намного безопаснее применения лошадиной антирабической сыворотки: частота побочных реакций уменьшилась до 1-2 % [WHO, 2005]. Высокоочищенный препарат АРИГ из плазмы крови лошади является эффективной, доступной, экономичной и относительно безопасной альтернативой гомологичному препарату антирабического иммуноглобулина [WHO, 2005; Sudarshan М.К. et al., 2007].

В настоящее время многие мировые производители из-за давления, которое оказывают на них защитники прав животных, отказались от производства препаратов гетерологичного антирабического иммуноглобулина [Wilde Н. et al., 2002]. В развивающихся странах производством ксеногенного

АРИГ занимаются национальные фармацевтические компании, препараты которых плохо очищены и характеризуются высокой реактогенностью, и не удовлетворяют национальные потребности [Wilde Н. et al., 1996, 2002; Sriaroon С. et al., 2006].

В России зарегистрированы два препарата иммуноглобулина антирабического из сыворотки крови лошади - производства ЗАО «Биолек» (Украина) и РосНИПЧИ «Микроб» (Россия), получаемые при иммунизации продуцентов штаммом фиксированного вируса бешенства «Москва» и обладающие достаточно высокой специфической активностью. Однако, согласно нормативно-технической документации, в этих препаратах допускается содержание примесных а- и р-глобулинов до 20 %, у-глобулинов -не менее 80 % [ФСП 42-412ВС-93; ФСП 42-0020441303], что свидетельствует о недостаточно высокой степени очистки препаратов и возможности дальнейшего совершенствования технологии получения иммуноглобулина. Кроме того, они не контролируются на степень агрегации и фрагментации иммуноглобулина, а также на осмолярность, которые являются показателями безопасности иммуноглобулиновых препаратов и могут быть причиной побочных реакций.

Существующие методы фракционирования не позволяют получить гетерологичный препарат АРИГ с высокой степенью концентрации AT, поэтому большое значение имеет разработка способов получения исходной высокоспецифичной антирабической плазмы. Трудности, связанные со способом получения специфической плазмы, таких как: невысокие иммуногенность и качество используемого для иммунизации вируса бешенства, невысокая специфическая активность гипериммунной плазмы, и проблемы фракционирования гетерологичных иммуноглобулинов [Sriprapat S. et al., 2003], ведут к ограниченному производству и высокой стоимости гетерологичных препаратов антирабического иммуноглобулина. Таким образом, оптимизация технологии получения высокоочищенного АРИГ из плазмы крови лошади остается актуальной. На основании вышеизложенного была сформулирована цель и определены задачи настоящего исследования.

Цель исследования

Разработка иммунологических критериев качества и безопасности вирусного антигена и антирабической плазмы и оптимизация технологии получения высокоспецифичного и высокоочищенного препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади.

Задачи исследования

1 Определить причинность реактогенности гетерологичного антирабического иммуноглобулина в отношении иммунореактивных примесных компонентов антигена вируса бешенства: бычьего сывороточного альбумина, антигенов клеток почек сирийского хомяка и желатозы.

2 Разработать способ удаления из реактогенной антирабической плазмы антител к антигенам клеток почек сирийского хомяка - субстрату репродукции вируса бешенства.

3 Разработать требования к антигену вируса бешенства, предназначенного для иммунизации животных, и к гетерологичной антирабической плазме - сырью для получения препарата антирабического иммуноглобулина.

4 Оптимизировать технологию производства антирабического иммуноглобулина из плазмы крови лошади для получения высокоспецифичного и высокоочищенного F(ab)2-npenapaTa с физиологичной осмолярностью.

5 Сравнить разработанный препарат антирабического иммуноглобулина из плазмы крови лошади с коммерческими аналогами на соответствие требованиям, предъявляемым к иммунобиологическим препаратам, и изучить стабильность качественных характеристик разработанного препарата во время хранения и транспортировки.

Научная новизна

Впервые показано, что реактогенность гетерологичного антирабического иммуноглобулина обусловлена присутствием в нем антител к антигенам клеток почек сирийского хомяка - субстрату репродукции вируса бешенства.

Впервые разработан способ удаления реактогенных антител к антигенам клеток почек сирийского хомяка, присутствующих в антирабической плазме, путем ее истощения нерастворимым антигеном клеток почек сирийского хомяка.

Установлены иммунологические критерии качества и безопасности антигена вируса бешенства, предназначенного для иммунизации лошадей, и антирабической плазмы - исходного сырья для получения препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади.

Впервые предложен контроль антигена вируса бешенства, предназначенного для иммунизации животных - продуцентов антирабической плазмы, на остаточное содержание в нем антигенов клеток почек сирийского хомяка методом ракетного иммуноэлектрофореза.

Впервые показано, что антиген вируса бешенства полученный на перевиваемой культуре клеток Vero, при равной иммуногенности с вирусом, репродуцированном на первичной культуре клеток почек сирийского хомяка, позволяет получать более высокий титр вируснейтрализующих антител.

Предложен оптимизированный способ получения ареактогенной высокоспецифичной гетерологичной антирабической плазмы (получен патент РФ).

Разработана технология производства стабильного высокоочищенного препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади, в котором содержание Р(аЬ)2-фрагментов иммуноглобулина G составляет не менее 90 %, фракция у-глобулинов - более 90 %, а- и Р-глобулинов -менее 10%, специфическая активность - не менее 400 МЕ/мл, содержание натрия хлорида - не более 0,45 %, физиологичная осмолярность - в пределах 250-350 мОсм/кг (приоритетная справка по заявке на изобретение РФ).

Научно-практическая значимость работы

Для антигена вируса бешенства, предназначенного для иммунизации животных - продуцентов антирабической плазмы, установлены пороговые значения качественных характеристик: по остаточному содержанию антигенов клеток почек сирийского хомяка, иммуногенности вирусного антигена и концентрации адъюванта алюминия фосфата при сорбции вируса бешенства, что в производственных условиях позволяет получать ареактогенную высокоспецифичную лошадиную антирабическую плазму.

Метод ракетного иммуноэлектрофореза для контроля остаточного содержания антигенов клеток почек сирийского хомяка рекомендуется внести в фармакопейную статью предприятия на антирабическую вакцину, при получении которой в качестве субстрата репродукции вируса используется первичная культура клеток почек сирийского хомяка, что позволит повысить безопасность вакцин и получаемых с их помощью специфических иммуноглобулиновых препаратов.

Для получения антирабической вакцины рекомендована замена субстрата репродукции вируса бешенства с первичной культуры клеток почек сирийского хомяка на перевиваемую культуру клеток Vero, так как вирусный антиген, полученный на культуре клеток Vero, позволяет получать более высокий титр вируснейтрализующих антител.

Гипериммунизация лошадей низкими дозами сорбированного на алюминия фосфате вируса бешенства позволяет получить антирабическую плазму с высокой специфичной активностью и снизить затраты на вирусный антиген.

Контроль антирабической плазмы на реактогенность - внутривенное введение кроликам гипериммунной плазмы в дозе 10 мл/кг массы тела позволяет оценить качество исходного сырья.

Разработанный способ удаления антител к антигенам клеток почек сирийского хомяка путем истощения пула реактогенной антирабической плазмы нерастворимым антигеном клеток почек сирийского хомяка позволяет сохранить исходное сырье от выбраковки.

Модифицированная технология получения иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади, с использованием комбинированного каприлатно-спиртового метода фракционирования с протеолизом, внесением натрия хлорида и стабилизаторов с учетом физиологичной осмолярности, позволяет получить высокоочищенный F(ab)2-npenapaT, который соответствует требованиям Европейской фармакопеи.

Высокие качественные характеристики и их контроль в разработанном антирабическом иммуноглобулине повышают безопасность препарата и позволяют предупредить возникновение возможных побочных реакций.

Внедрение результатов исследования в практику

На базе иммуноклиники и сывороточного цеха филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ получены две экспериментально-производственные серии лошадиной антирабической плазмы и три экспериментально-производственные серии препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади, которые прошли контроль в отделе биологического и технологического контроля департамента качества филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ (г. Уфа). В проект фармакопейной статьи предприятия на разработанный препарат иммуноглобулина антирабического внесены методы контроля молекулярных параметров, стабилизаторов - мальтозы и глицина, каприловой кислоты и осмолярности. Проекты нормативно-технической документации (Фармакопейная статья предприятия и Инструкция по применению препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади) одобрены решением Ученого совета филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ (выписка из протокола № 4 заседания Ученого Совета от 19 сентября 2007 г). Метод ракетного иммуноэлектрофореза для контроля остаточного содержания антигена клеток почек сирийского хомяка был использован контрольно-аналитической лабораторией филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ для выбора серий концентрированной очищенной культуральной антирабической вакцины, предназначенных для иммунизации лошадей.

По материалам исследований в Федеральный институт промышленной собственности поданы две заявки на изобретение: № 2006126555 «Способ получения высокоспецифичной гетерологичной антирабической сыворотки» (получено положительное решение о выдаче патента РФ от 3 сентября 2007 г., приоритет от 21.07.2006 г.) и № 2006141874 «Препарат гетерологичного антирабического иммуноглобулина для внутривенного и внутримышечного введения и способ его получения» (приоритет от 28.11.2006 г.).

Основные положения, выносимые на защиту

1 Выявлена причинная связь между реактогенностью гетерологичного антирабического иммуноглобулина и содержанием в нем антител к антигенам первичной культуры клеток почек сирийского хомяка - субстрату репродукции вируса бешенства.

2 Разработаны иммунологические критерии качества и безопасности вирусного антигена, предназначенного для иммунизации животных -продуцентов, и гетерологичной антирабической плазмы, предназначенной для получения антирабического иммуноглобулина.

3 Оптимизирована технология получения высокоочищенного, высокоспецифичного и стабильного препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади, включающая получение ареактогенной высокоспецифичной антирабической плазмы, фракционирование каприлатно-спиртовым способом с протеолизом, позволившая получить F(ab)2-препарат с содержанием Р(аЬ)2-фрагментов иммуноглобулина не менее 90 %, электрофоретической чистотой не менее 90 %, со специфической активностью не менее 400 МЕ/мл, соответствующий требованиям Европейской фармакопеи.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на ряде научных форумов: Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов» (Уфа, 2000), VIII Международном конгрессе по иммунореабилитации «Аллергия, иммунология и глобальная сеть» (Канны, 2002), Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке» (Пермь, 2003), Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов» (Томск, 2004), XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004), Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (Санкт-Петербург, 2004), I Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии» (Уфа, 2004), Всероссийской научной конференции с международным участием «Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка, производство и применение» (Уфа, 2005).

Диссертация апробирована на заседании Ученого совета филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ (протокол от 19.09.2007 г. № 4) и на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан (протокол от 04.10.2007 г. №64).

Публикации

По материалам диссертации опубликованы 15 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 131 страницах, содержит 12 таблиц и 11 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы (2 главы), собственных исследований (3 главы), заключения и выводов. Список литературы включает 209 источников (60 отечественных и 149 зарубежных).

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Ситник, Наталья Павловна

106 Выводы

1 Выявлена причинная связь между реактогенностью гетерологичного антирабического иммуноглобулина и содержанием в нем антител к антигенам клеток почек сирийского хомяка, подтвержденная независимыми специфическими иммунологическими реакциями in vitro и in vivo.

2 Разработан способ удаления антител к антигенам клеток почек сирийского хомяка путем истощения реактогенной антирабической плазмы нерастворимым антигеном клеток почек сирийского хомяка, полученного обработкой осадочной части лизата клеток почек сирийского хомяка вначале 96 % этанолом, затем 0,3 М трис-буфером и 3,0 М мочевиной, при соотношении 1 к 25-30.

3 Разработаны требования к антигену вируса бешенства, предназначенного для иммунизации животных - продуцентов антирабической плазмы: остаточное содержание антигенов клеток почек сирийского хомяка - менее 0,5 мкг/мл, сорбция вируса бешенства на адъювант алюминия фосфат при концентрации ионов алюминия 0,5 мг/мл, индекс иммуногенности сорбированного вирусного антигена -не менее 10 МЕ/мл; требования к гетерологичной антирабической плазме -отсутствие анафилактической и температурной реакций при внутривенном введении кроликам гипериммунной плазмы в дозе 10 мл/кг массы тела.

4 Оптимизирована технология производства высокоспецифичного и высокоочищенного F(ab)j-npenapaTa иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади, включающая получение ареактогенной лошадиной антирабической плазмы со специфической активностью не менее 75 МЕ/мл, фракционирование каприлатно-спиртовым способом с протеолизом, внесение 0,2-0,45 % натрия хлорида и стабилизаторов - 0,50-3,00 % мальтозы и 0,70-1,50 % глицина в концентрациях, соответствующих физиологичной осмолярности в пределах 250-350 мОсм/кг.

5 Сравнение с коммерческими аналогами показало, что разработанный препарат иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади является F(ab)2-npenapaTOM - содержание Р(аЬ)2-фрагментов иммуноглобулина G составило не менее 90 %, и продемонстрировало высокие качественные характеристики препарата: содержание у-глобулинов - более 90 %, а- и р-глобулинов - менее 10 %, специфическая активность -не менее 400 МЕ/мл и физиологичная осмолярность - не более 350 мОсм/кг. Качественные характеристики разработанного препарата иммуноглобулина антирабического стабильны в тестах на ускоренное старение и перемешивание и соответствуют требованиям Европейской фармакопеи.

Заключение

До сих пор бешенство остается одним из наиболее опасных заболеваний, которое во всем мире представляет постоянную серьезную угрозу для здоровья людей [Briggs D., Hanlon С.А., 2007; Tepsumethanon S. et al., 2007]. Проблема бешенства актуальна и для России с ее обширными территориями, на которых издавна существуют многочисленные природные очаги этой инфекции [Онищенко Г.Г., 2003; Медуницын Н.В., 2004]. Единственным средством профилактики бешенства остается совместное введение антирабической вакцины и АРИГ, который по требованию ВОЗ должен вводиться во всех случаях возможного заражения людей вирусом. Высокоочищенный препарат иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади является эффективной, доступной и экономичной альтернативой препарату гомологичного происхождения, особенно в развивающихся странах с низким доходом населения [Рахимова Ф.И. и др., 1995; Wilde Н. et al., 1987; Lang J. et al., 1998; Suwansrinon K. et al., 2007]. Качество препаратов гетерологичных ИГ должно определяться не только эффективностью их применения, но и безопасностью. Однако все еще существует множество проблем связанных с получением гетерологичного АРИГ с высокой степенью очистки, соответствующего требованиям Европейской фармакопее. Поэтому проблема разработки иммунологических критериев качества и безопасности вирусного АГ и антирабической плазмы и оптимизация технологии получения высокоспецифичного и высокоочищенного препарата иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади остается до сих пор актуальной проблемой.

Для получения высококачественного препарата АРИГ большое значение имеет разработка способа получения исходного сырья -антирабической плазмы с высокой специфической активностью. Согласно требованиям ВОЗ, необходимо доказать, что используемый для иммунизации животных АГ не вызывает выработки антител, обладающих реактогенной активностью. Однако до сих пор не решен вопрос о пороговых значениях содержания примесных веществ в вирусном АГ, используемом для иммунизации продуцентов, которые при гипериммунизации могут стимулировать образование и накопление AT с нежелательной активностью. Поэтому на первом этапе работы перед нами стояла задача провести исследования по влиянию очистки вируса бешенства, репродуцированного на первичной культуре клеток ПСХ, на качественные характеристики иммуноглобулина. С этой целью мы провели иммунизацию морских свинок вирусным АГ разной степени очистки, в котором содержание общего белка было от 70 до 250 мкг/мл, БСА - от 0,2 до 0,6 мкг/мл. Из полученной антирабической плазмы методом спиртового осаждения по Кону без протеолиза были получены 10 серий препарата иммуноглобулина антирабического. Все серии АРИГ обладали высокой электрофоретической чистотой. Анализ молекулярных параметров показал, что во всех сериях содержание агрегатов было не более 1 %, димеров - менее 10 %, мономеров -более 90 %, Fc-фрагментов - менее 5 %. Однако при контроле на пирогенность шесть серий препарата из десяти вызвали побочные реакции. Поэтому встала задача выяснить причины этого явления и возможные пути ее решения.

Известно, что бактериальный пироген находящийся в плазме, при ее повторном внутривенном введении не вызывает повышения температуры тела. Повторное внутривенное введение кроликам антирабической плазмы, из которой был получен реактогенный препарат АРИГ, вызывало высокую температурную реакцию. Следовательно, возникающая высокая температурная реакция реактогенных антирабической плазмы и ИГ вызвана веществами непирогенной природы.

Для выявления компонентов, ответственных за развитие побочных реакций, был проанализирован состав вирусного материала, которым иммунизировали животных. В качестве субстрата репродукции вируса бешенства использовалась первичная культура клеток ПСХ, в качестве ростовой добавки - сыворотка КРС, стабилизатора - желатоза. Все эти компоненты обладают иммуногенностью, поэтому необходимо было выяснить, какие именно примесные вещества в вирусном АГ вызвали образование AT, обладающих реактогенной активностью.

В результате проведенных исследований была установлена связь между содержанием AT к антигенам клеток ПСХ и реактогенностью препарата АРИГ, подтвержденная реакцией связывания комплемента и иммунопреципитацией по Оухтерлони, а также путем истощения реакогенного иммуноглобулина клетками ПСХ с исчезновением побочных реакций, и реактогенными свойствами AT, элюированных с АГ клеток почек сирийского хомяка. Следует отметить, что ИГ, вызывающий анафилактическую реакцию, после истощения БСА и желатозой, продолжал вызывать у кроликов анафилактический шок. Таким образом, анафилактическая и температурная реакция на внутривенное введением кроликам реактогенных антирабической плазмы и ИГ связана с наличием в них антител к антигенам почек сирийского хомяка. Следовательно, исходная плазма, полученная при иммунизации продуцентов АГ вируса бешенства, должна контролироваться на присутствие в ней AT к субстрату репродукции вируса и на реактогенность, и при необходимости подвергаться истощению соответствующим антигеном.

В связи с отсутствием стандартных методов получения тканевых АГ для истощения соответствующих нежелательных AT, на следующем этапе работы нами был разработан способ получения нерастворимого АГ из клеток почек сирийского хомяка. Для перевода тканевого АГ в стабильную нерастворимую форму клеточный лизат почек обрабатывали 96 % этанолом, 5 % формальдегидом, 3 М калия хлоридом, 2,5 % глютаральдегидом.

Из апробированных методов получения нерастворимых АГ предпочтительным оказался способ, включающий осмотический лизис клеток ПСХ, обработку осадочной части 96 % этанолом, с последующей депирогенизацией тканевого АГ 0,3 М трис-буфером и 3,0 М мочевиной.

Реактогенная антирабическая плазма, истощенная полученным АГ, не вызывала температурной реакции при внутривенном введении кроликам в дозе 10 мл/кг массы и полностью сохраняла специфическую активность. Контроль истощенных серий плазмы на остаточное содержание внесенного нерастворимого антигена клеток ПСХ был отрицателен.

На следующем этапе исследования изучалась возможность получения антирабической плазмы с высокой специфической активностью, не содержащей AT к субстрату репродукции вируса бешенства. Поэтому необходимо было определить зависимость образования вируснейтрализующих и примесных AT от дозы вирусного АГ и остаточного содержания в нем АГ клеток почек сирийского хомяка.

Было обнаружено, что доза АГ оказывала сильное влияние на степень антителообразования. Экспериментальные серии антирабической плазмы, полученные при иммунизации морских свинок вирусным АГ в дозах от 0,10 до 0,50 мл, при которых остаточное содержание антигена клеток ПСХ было не более 0,5 мкг/мл, при внутривенном введении не вызывали температурной реакции.

Анализ специфической активности показал, что кривая титров вируснейтрализующих AT имеет волнообразный характер и на разные иммунизирующие дозы вирусного АГ был получен близкий титр специфических AT, при этом динамика титра вируснейтрализующих AT сохранялась во времени, что согласуется с данными О.Г. Анджапаридзе с соавт. (1957) и Р.В. Гнутовой (1985). Таким образом, иммунизация животных с использованием низких доз вирусного АГ, в котором остаточное содержание антигена клеток ПСХ было менее 0,5 мкг/мл, позволила получить ареактогенную высокоспецифичную антирабическую плазму и снизить нагрузку по АГ клеток почек сирийского хомяка.

Следовательно, АГ вируса бешенства, используемый для иммунизации продуцентов, должен контролироваться не только на содержание общего белка и БСА, как предусмотрено ФС на культуральную антирабическую вакцину, но и на остаточное содержание субстрата репродукции вируса бешенства.

Для количественного определения остаточного содержания АГ клеток ПСХ в вирусном материале нами был предложен модифицированный метод ракетного иммуноэлектрофореза, с чувствительностью 0,5 мкг/мл.

Более эффективного повышения специфической активности иммунной плазмы можно достичь при совместной иммунизации продуцентов вирусным АГ с адъювантом. Поэтому мы изучили влияние наиболее часто применяемых адъювантов на образование вируснейтрализующих антител.

Анализ специфической активности показал, что алюминия фосфат имел преимущество по сравнению с другими адъювантами и вызывал в 1,54,9 раза (р<0,05) более высокий гуморальный иммунный ответ.

Далее перед нами стояла задача уточнить оптимальную концентрацию адъюванта алюминия фосфата в АГ вируса бешенства.

Анализ динамики содержания вируснейтрализующих AT в антирабической плазме показал, что снижение концентрации адъюванта в АГ вируса бешенства не всегда ведет к снижению специфической активности. Высокая концентрация алюминия фосфата стимулировала высокий ранний, а низкая - высокий поздний гуморальный иммунный ответ. Следовательно, при длительной иммунизации продуцентов антирабической плазмы предпочтение следует отдавать более низким концентрациям алюминия фосфата в вирусном антигене. Концентрация ионов алюминия в АГ вируса бешенства - 0,5 мг/мл является оптимальной для сорбции вируса бешенства, т.к. она эффективно стимулировала антителообразование на всех стадиях иммуногенеза.

В связи с использованием адъюванта, была изучена возможность получения высокой специфической активности антирабической плазмы при более низких дозах сорбированного антигена. Сорбция вируса бешенства на алюминия фосфате позволила получить высокий титр вируснейтрализующих AT при снижении дозы сорбированного АГ в 3-5 раз, что позволяет снизить затраты на вирусный АГ при гипериммунизации продуцентов. При этом наиболее высокий титр вируснейтрализующих AT выявлялся при концентрации ионов алюминия 0,5 мг/мл.

Далее мы изучили, как зависит антительный ответ от вируса бешенства, культивированного на разных субстратах. Поскольку в предыдущих исследованиях было установлено, что сорбированный на алюминия фосфате вирус бешенства, полученный на первичных клетках ПСХ, вызывает более сильный гуморальный ответ по сравнению с АГ без адъюванта, важно было установить, сохранится ли это преимущество при переходе на другой субстрат. Поэтому для иммунизации морских свинок использовали нативный, концентрированный и сорбированный на алюминия фосфате вирус бешенства, репродуцированный на первичной культуре клеток ПСХ и перевиваемой культуре клеток Vero.

Анализ титра вируснейтрализующих AT, на 42-е сутки иммунизации, показал, что вирус бешенства, полученный на перевиваемой культуре клеток Vero, вызывал статистически значимо более сильный гуморальный ответ как при использовании нативного - в 3,2 раза, так и концентрированного - в 3,9 раза и сорбированного вируса - в 4,9 раза по сравнению с вирусом, культивированным на первичных клетках ПСХ, несмотря на практически одинаковую иммуногенность использованных АГ. Максимальный титр специфических AT был получен при иммунизации морских свинок сорбированным вирусом бешенства, репродуцированным на перевиваемых клетках Vero.

Важно было установить, будет ли сорбированный на алюминия фосфате вирус бешенства, полученный на перевиваемой культуре клеток Vero, вызывать и у лошадей-продуцентов более высокий антительный ответ по сравнению с вирусом, полученным на субстрате клеток почек сирийского хомяка.

На всем протяжении иммунизации специфическая активность антирабической плазмы, полученной при иммунизации лошадей сорбированным АГ вируса бешенства на основе субстрата клеток Vero, по сравнению с первичной культурой клеток ПСХ была статистически значимо выше, и кратность увеличения возрастала с каждой последующей иммунизацией от 1,5 до 2,4 раза. Во всех полученных сериях лошадиной антирабической плазмы титр вируснейтрализующих AT был выше 75 МЕ/мл и не выявлялись AT к примесным компонентам антирабической вакцины, что подтверждает обоснованность допустимого остаточного содержания субстрата репродукции и низких доз вирусного АГ, используемого для иммунизации. Таким образом, была получена высокоспецифичная ареактогенная лошадиная антирабическая плазма, пригодная для получения препарата антирабического иммуноглобулина.

В силу определяющей роли показателя безопасности при создании гетерологичного препарата ИГ, перед нами стояла задача получения высокоочищенного F(ab)2-npenapaTa с максимальным содержанием у-глобулиновой фракции. Поэтому нами было проведено сравнение различных методов выделения у-глобулинов: анионообменной хроматографии, сульфатного, риванольного, риванол-сульфатного, риванол-спиртового, каприлатного, каприлатно-сульфатного и каприлатно-спиртового с проведением и без стадии протеолиза .

При всех методах фракционирования стадия протеолиза, обеспечивающая получение F(ab)2-npenapaTa, повышала содержание у-глобулиновой фракции и снижала содержание реактогенных примесей -альбумина и а- и р-глобулинов. Анализ полученных серий АРИГ по электрофоретической чистоте и выходу специфической активности показал преимущество каприлатно-спиртового способа с протеолизом, который и был выбран в качестве основного метода получения препарата. В готовую форму препарата добавляли натрия хлорид в пределах 0,20-0,45 % и стабилизаторы: 0,7-1,5 % глицин и 0,5-3,0 % мальтозу. Комбинация стабилизаторов и натрия хлорида была подобрана в концентрациях, обеспечивающих физиологичную осмолярность разрабатываемого препарата иммуноглобулина в пределах 250-350 мОсм/кг.

На конечном этапе работы мы провели сравнение разработанного препарата АРИГ с коммерческими аналогами фирм «Биолек» и «Микроб». Препарат, полученный по нашей технологии превосходил препараты сравнения по качеству. Он характеризовался большей электрофоретической чистотой, содержание у-глобулинов превышало аналоги на 10 %, содержание реактогенных а- и р-глобулинов снижено в 4 раза. Анализ молекулярных параметров показал, что полученный нами АРИГ является F(ab)2-npenapaTOM. Содержание Р(аЬ)2-фрагментов IgG составляло не менее 90 %, а содержание Fc-фрагментов снижено в 3,3-7,5 раза. Кроме того, наш препарат обладал в 1,5 раза большей удельной специфической активностью. Осмолярность разработанного препарата снижена в 2 раза и доведена до физиологичного уровня - 300 мОсм/кг. Снижение содержания натрия хлорида в препарате с 0,9 до 0,45-0,1 %, внесение дополнительного стабилизатора мальтозы в конечную лекарственную форму обеспечило стабильность препарата в тестах на ускоренное старение и перемешивание.

Таким образом, в результате настоящих исследований была разработана собственная модификация технологического процесса, позволяющая получить ареактогенный высокоочищенный F(ab)2-npenapaT иммуноглобулина антирабического из плазмы крови лошади, обладающий высокими качественными характеристиками и стабильностью в условиях хранения и транспортировки, что позволит свести к минимуму риск возникновения нежелательных реакций при терапии больных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ситник, Наталья Павловна, 2007 год

1. Избранные вопросы сывороточного производства / М.М. Алсынбаев,

2. A.Г. Исрафилов, Т.А. Баталова и др. // Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: мат. Всерос. науч. конф.: в 2 ч. Уфа: РИО ГУЛ «Иммунопрепарат», 2000. - Ч. 1.-С. 140-148.

3. Анастасиев, В.В. Иммуноглобулин для внутривенного введения /

4. B.В. Анастасиев. -Н. Новгород: НГМА, 2000. 168 с.

5. А.с. 200743 А1 СССР, А61К37/06. Способ производства антирабического гамма-глобулина / М.А. Селимов, В.Я. Роговский, С.Р. Резник, Т.А. Аксенова (СССР). Заявл. 18.04.1966 ; опубл. 05.04.1977 // Бюл. изобретений. - 1977. - № 13.

6. Баталова, Т.А. Изучение способов очистки антитоксических сывороток. Разработка бессолевого метода «Ультраферм» : автореф. дис. . канд. биол. наук : 03.096 / ГКИМБП / Баталова Татьяна Абрамовна. М., 1971.-17 с.

7. Буковская, С.Н. О частоте случаев шока при введении кроличьей и овечьей антирабических вакцин / С.Н. Буковская // Журнал микробиол. -1965.-№6.-С. 134-136.

8. Вагабов, P.M.-А. Новая сухая 2 % антирабическая вакцина МИВП-2 / Р.М.-А. Вагабов, М.К. Каракуюмчян // Материалы к Всесоюзной конференции по проблеме «Научные основы производства бактерийных и вирусных препаратов». - Уфа, 1969. - С. 182-184.

9. Ведерников, В.А. Обзор эпизоотической ситуации бешенства в

10. Российской Федерации в 2000 году и прогноз на 2001 год / В.А. Ведерников, А.А. Шабейкин, А.А. Харкевич // Ветеринар, патол. 2002. - № 1. - С. 52-59.

11. Волкова, А.В. Культивирование вируса бешенства штамма Внуково-32 в культуре перевиваемых клеток для производства антирабической вакцины: автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.06 / Уфимский НИИВС / А.В. Волкова М., 1997. - 20 с.

12. Воробьев, А.А. Адъюванты / А.А. Воробьев, Н.Н. Васильев. М.: Медицина, 1969. - 207 с.

13. Георгадзе, И.А. Развитие аутоиммунных реакций у лошадей -продуцентов антистолбнячной сыворотки в процессе их эксплуатации / И.А. Георгадзе, З.М. Нозадзе // Журн. микробиол. 1986. - № 3. - С. 86-89.

14. Гипериммунные сыворотки / С.П. Карпов, С.М. Прегер, Г.Е. Синельников, Ю.В. Федоров; под общей ред. С.П. Карпова. Томск: Издательство Томского университета, 1976. - 379 с.

15. Гнутова, Р.В. Иммунологические исследования в фитовирусологии / Р.В. Гнутова. М.: Наука, 1985.- 184 с.

16. Горшунова, Л.П. О роли лимфатических узлов в механизме естественной резистентности к бешенству / Л.П. Горшунова / Журн. микробиол. 1962. - № 2. - С. 45-^8.

17. Дулина Алла Викторовна. Уфа, 1983. - 158 с.

18. Европейская фармакопея: 3-е издание. 2000. - V.2.6.20. Монография № 0918.

19. Здродовский, П.Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии / П.Ф. Здродовский. -М.: Медгиз, 1963. 468 с.

20. Земсков, В.М. Низкомолекулярная РНК: получение, гидролиз и применение в медицине / В.М. Земсков, М.Ю. Лидак, У.Я. Микстайс. Рига: Зинатне, 1985.- 191 с.

21. Проявление иммуногенной потенции антирабической вакцины из штамма Щелково-51 в зависимости от места ее введения / B.C. Иванов,

22. A.Я. Самуйленко, В.И. Титеричев, И.В. Иванов // Тезисы конференции. -Щелково, 2000. С. 33-36.

23. Калинина, Л.И. К вопросу производства и лечебно-профилактического применения противогриппозных сывороток / Л.И. Калинина // Труды Московского НИИВС им. И.И. Мечникова ; под. ред.

24. B.Д. Соловьева, Л.И. Фалькович. М.: МЗ СССР, 1957. - Т. IX. - С. 41-53.

25. Козлова, М.А. К вопросу определения бактериальных и небактериальных пирогенов в растворах белков крови человека / М.А. Козлова // Проблемы гематологии и переливания крови 1970. - № 6.1. C. 42-45.

26. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Ласса / В.П. Краснянский, В.Н. Градобоев, И.В. Борисевич и др. // Вопросы вирусологии 1997. - Т. 42, № 4. - С. 168-170.

27. Определение каприлат-ионов в препарате крови «Раствор альбумина10 % для инфузий» методом ион-эксклюзионной хроматографии /

28. A.Н. Кузьмеико, В.П. Панов, А.А. Иванов и др. // Качество, эффективность, безопасность средств трансфузионной и инфузионной терапии: Сб. тр. службы гос. контроля. / Под ред. А.И. Воробьева, В.П. Панова. М., 2005. -С.144-146.

29. Кульберг, А.Я. Ионообменная хроматография и гель-фильтрация в иммунологии / А.Я. Кульберг ; под ред. JI.A. Зильбер / М. : Медицина, 1968. -С. 21-42.

30. Лукин, Ю.Б. Сравнительная оценка применяемых антигенов в производстве противостолбнячной сыворотки / Ю.Б Лукин // Труды Уфимского НИИВС им. И.И. Мечникова / под ред. Н.И. Мельникова. Уфа: Башкирское книжное изд-во, 1955. - № 3. - С. 33-44.

31. Людоговская, Л.А. Получение и обработка иммунных сывороток / Л.А. Людоговская // Иммунохимический анализ / под ред. Л.А. Зильбер. -М.: Медицина, 1968. С. 5-20.

32. Майорова, М.И. Опыт получения антирабической сыворотки / М.И. Майорова, И.Е. Корчемкина, М.А. Селимов // Бешенство: сб. тр. Всесоюз. науч. конф. / под ред. Т. Агурской. М.: Бюро научной информации, 1962.-С. 119-125.

33. Мамаладзе, А.И. Сравнительное изучение эффективности сухой антирабической вакцины из мозга овец и новорожденных кроликов с различным содержанием мозгового вещества / А.И. Мамаладзе,

34. B.Е. Курашвили // Материалы к Всесоюзной конференции по проблеме «Научные основы производства бактерийных и вирусных препаратов». -Уфа, 1969.-С. 179-180.

35. Маркин, С.А. Клиническая осмометрия и онкометрия / С.А. Маркин // Российский журнал анестезиологии и интенсивной терапии. 1999. - № 2. -С. 2-5.

36. Медуницын, Н.В. Вакцинология / Н.В. Медуницын. 2-е изд.,перераб. и доп. М.: Триада-Х, 2004. - 448 с.

37. Миниович, Ф.Л. Опыт производственного получения антирабического гамма-глобулина / Ф.Л. Миниович // Бешенство: сб. тр. Всесоюз. науч. конф. / под ред. Т. Агурской. М.: Бюро научной информации, 1962.-С. 126-132.

38. Мовсесянц, А.А. Бешенство серьезная проблема наших дней /

39. A.А. Мовсесянц // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2003. - № 3. -С. 47-48.

40. Мостовская, Е.В. Оптимизация технологии получения жидкой формы иммуноглобулина для внутривенного введения: дис. . канд. биол. наук: 14.00.36, 14.00.29 / Уфимский НИИВС / Мостовская Елена Викторовна. -М., 2004.- 137 с.

41. Немов, В.В. Сравнительное изучение сенсибилизирующей активности гетерологичных сывороточных препаратов /В.В. Немов // Журн. микробиол. 1985. - № 7. - С. 63-67.

42. Препарат антирабического иммуноглобулина на основе F(ab')2-фрагментов / А.К. Никифоров, О.А. Волох, О.А. Лобовикова, И.А. Дятлов, И.М. Жулидов // Журн. микробиол. эпидемиол. иммунобиол. 2007. - № 1. -С. 72-74.

43. Онищенко, Г.Г. Инфекционные болезни важнейший фактор биоопасности / Г.Г. Онищенко / Эпидем. и инфекц. болезни - 2003. - № 3. -С. 4-16.

44. Пат. 2111001 С1 РФ, 6 А61К35/16. Способ получения иммуноглобулинового препарата / А.В. Волков, В.А. Алешкин (РФ). -Заявл. 03.07.1995; опубл. 20.05.1998 //БИПМ. 1998. -№ 14.

45. Пат. 2196607 С2 РФ, 7 А61К39/205, А61К39/42, G01N33/569. Способ получения гипериммунной антирабической сыворотки /

46. B.В. Недосеков, И.А. Сливко, В.В. Куринов и др. (РФ). Заявл. 30.03.2001; опубл. 20.01.2003 // БИПМ. - 2003. - № 2.

47. Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны: дополнение Госкомсанэпиднадзора от 20.10.1993 г. № 9 к Перечню ПДК от 26.05.1988 г. № 4617-88.

48. Пыцкий, В.И. Аллергические заболевания / В.И. Пыцкий, Н.В. Адрианова, А.В. Артомасова. 3-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Триада-Х, 1999.-470 с.

49. Разработка малореактогенного антирабического лошадиного иммуноглобулина / Ф.И. Рахимова, О.Г. Бердникова, Е.М. Шахматова, Л.Е. Крущева // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: мат. Междунар. симпоз. Уфа, 1995. -Ч. 2. - С. 155-157.

50. Русанов, В.М. Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови / В.М. Русанов, Л.И. Скобелев. М.: Медицина, 1983. -224 с.

51. Об антирабическом гамма-глобулине. Сообщение I. Получение ифракционирование иммунной антирабической сыворотки / М.А. Селимов, М.Н. Дурасова, Е.Н. Рогозина и др. // Журн. микробиол. 1957. - № 7. -С. 28-32.

52. Симонова, Э.С. Аллергологический анализ гриппозных вакцин : автореф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.36 / ГУП НПО «Иммунопрепарат» Уфимский НИИВС им. И.И. Мечникова / Симонова Эмилия Станиславовна. -Уфа, 1996.-26 с.

53. Статкевич, И.А. Колебание титра антитоксина у лошадей -продуцентов при различной дозировке антигенов В. perfringens / И.А. Статкевич // Журн. микробиол. 1949. - № 9. - С. 32.

54. Тарханова, И.А. Количественные методы определения антигенов и антител в реакции связывания комплемента / И.А. Тарханова // Иммунохимический анализ / под ред. JI.A. Зильбер. М.: Медицина, 1968. -С. 79-98.

55. Федоров, Ю.В. Непрерывная гипериммунизация лошадей в практике производства сыворотки против клещевого энцефалита /Ю.В. Федоров // Вопросы медицинской вирусологии. 1963. - № 8. - С. 113-119.

56. Белки плазмы и их фракционирование в производстве препаратов крови / А.А. Фром, Л.И. Скобелев, В.М. Русанов, А.А. Никитенко. М.: Медицина, 1974.-С. 18.

57. ФСП 42-0020441303 Иммуноглобулин антирабический из сыворотки крови лошади жидкий / Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»».

58. ФСП 42-412ВС-93 Иммуноглобулин антирабический из сывороткикрови лошади жидкий / Харьковское предприятие «Биолек».

59. Сравнительное изучение иммуногенных и толерогенных свойств препаратов иммуноглобулинов в зависимости от их молекулярного состава / Т.Г. Шемеровская, В.В. Немов, И.А. Киселева, Б.Н. Софронов // Иммунология. 1982. - № 4. - С. 60-63.

60. Шилов, Е.М. Механизмы образования и патогенетическая роль иммунных комплексов при гломерулонефрите / Е.М. Шилов, И.Е. Тареева // Иммунология. 1983. - № 5. - С. 5-13.

61. Abelseth, М.К. Культурально-тканевые вакцины для иммунизации животных / М.К. Abelseth // Методы лабораторных исследований по бешенству: пер. с англ. / под ред. М.М. Kaplan, Н. Koprowski. Женева: ВОЗ, 1975.-С. 258-264.

62. Acute renal failure and intravenous immune globulin: occurs with sucrose-stabilized, but not with D-sorbitol-stabilized, formulation / S A. Chapman, K.L. Gilkerson, T.D. Davin, M.R. Pritzker // Ann. Pharmacother. 2004. - Vol. 38, №12.-P. 2059-2067.

63. Acute renal failure associated with immunoglobulin administration / S. Michail, L. Nakopoulou, I. Stravrianopoulous et al. // Nephrol. Dial. Transplant. 1997. - Vol. 12, № 7. - P. 1497-1499.

64. Adverse effects of equine rabies immune globulin / H. Wilde, H. Chomchey, S. Prakongsri et al. // Vaccine. 1989. - Vol. 7, № 1. - P. 10-11.

65. Adverse reaction to human rabies immune globulin manufactured by the Thai Red Cross Society / K. Suwansrinon, W. Jaijaroensup, S. Daviratanasilpa et al. // Vaccine. 2005. - Vol. 23, № 11. - P. 1324-1325.

66. Aluminium phosphate potentiates the efficacy of DNA vaccines against Leishmania mexicana / M. Rosado-Vallado, M. Mut-Martin, R. Garcia-Miss Mdel, E. Dumonteil // Vaccine. 2005. - Vol. 23, № 46-47. - P. 5372-5379.

67. An economical regimen of human diploid cell strain antirabies vaccine for post-exposure / M.J. Warrell, D.A. Warrell, P. Suntharasamai et al. // Lancet. 1983. - Vol. 2, № 8345. - P. 301-304.

68. An immunogenicity and efficacy study chick embryo cell culture rabies vaccine manufactured in Japan / M. Benjavongkulchai, C. Kositprapa, K. Limsuwun et al.//Vaccine. 1997.-Vol. 15, № 17-18.-P. 1816-1819.

69. Arora, A. Safety and immunogenicity of a new chromatographically purified rabies vaccine in comparison to the human diploid cell rabies vaccine / A. Arora, L. Moeller, J. Froeschle // J. Travel. Med. 2004. - Vol. 11, № 4. -P. 195-199.

70. Assessment of the viral safety of antivenoms fractionated from equine plasma / T. Burnouf, E. Griffiths, A. Padilla et al. // Biologicals. 2004. -Vol. 32, №3.-P. 115-128.

71. Assessing the burden of human rabies in India: results of a national multicenter epidemiological survey / M.K. Sudarshan, S.N. Madhusudana, B.J. Mahendra et al. // Int. J. Infect. Dis. 2007. - Vol. 11, № 1. - P. 29-35.

72. Assessing the relationship between antigenicity and immunogenicity of human rabies vaccine. Results of a meta-analysis / M.K. Sudarshan, B.J. Mahendra, S.N. Madhusudana et al. // Hum. Vaccin. 2005. - Vol. 1, № 5. -P. 187-190.

73. Atanasiu, P. Количественная оценка и определение активности антирабической сыворотки и иммуноглобулина / P. Atanasiu // Методы лабораторных исследований по бешенству: пер. с англ. / под ред. М.М. Kaplan, Н. Koprowski. Женева : ВОЗ, 1975. - С. 311-315.

74. Banzhof, Е. The practitional precipitation of antitoxic serum / E. Banzhof, R. Gibson // J. Biol. Chem. 1907. - Vol. 3. - P. 253.

75. Briggs, D. World Rabies Day: focusing attention on a neglected disease / D. Briggs, C.A. Hanlon // Vet. Rec. 2007. - Vol. 161, № 9. - P. 288-289.

76. Cann, J.R. Application of electrophoresis-convection to the fractionationof bovine gamma-globulin / J.R. Cann, R.A. Brown, J.G. Kirkwood // J. Biol. Chem.-1949.-Vol. 181,№ l.-P. 161-170.

77. Chromatographic method for large-scale preparation of immunoglobulin G2a monoclonal antibodies Lym-1 and TNT-1 F(ab)2 fragments / F.M. Chen, C.Z. Liu, S.A. Gaffar, A.L. Epstein // J. Chromatogr. 1991. - Vol. 563, № 2. -P. 243-255.

78. Cohen, H. Consistency in potency assay of tetanus toxoid in mice / H. Cohen, J. Ramshorst, A. Tasman // Bull. WHO. 1959. - № 20. - P. 11331150.

79. Cohn, E. Preparation and properties of serum and plasma proteins / E. Cohn, L. Strong, W. Hughes // J. Am. Chem. Cos. 1946. - Vol. 68, № 3. -P. 599.

80. Comparison of an anti-rabies human monoclonal antibody combination with human polyclonal anti-rabies immune globulin / J. Goudsmit, W.E. Marissen, W.C. Weldon et al. // J. Infect. Dis. 2006. - Vol. 193, № 6. - P. 796-801.

81. Composite affinity sorbents and their cleaning in place / P. Girot, Y. Moroux, X.P. Duteil et al. // J. Chromatogr. 1990. - Vol. 510. - P. 213-223.

82. Connelly, K.P. Pets and pests: Misconceptions about zoonotic infections / K.P. Connelly // Infect. Med. 2004. - Vol. 11, № 21. - P. 557-565.

83. Delsal, J.L. Purification and concentration of antitoxic plasmas. I. History, technics in industry and method used in Iran / J.L. Delsal, H.M. Chamsy // Rev. Immunol. Ther. Antimicrob. 1953. - Vol. 17, № 3 - P. 110-134.

84. Development of an improved method for production of antiscorpion F(ab)2 fragment of IgG with high yield and potency / S.S. Seddik, S. Wanas, A. Shehata et al. // J. Nat. Toxins. 2002. - Vol. 11, № 2. - P. 123-132.

85. Effect of a booster-dose of rabies vaccine on the duration of virus neutralizing antibody titers in bovines / A. Albas, P.E. Pardo, A.A. Gomes et al. // Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 1998. - Vol. 31, № 4. - P. 367-371.

86. Effect of different adjuvants in equines for the production of equine rabies immunoglobulin / S. Arora, S. Sharma, S.K. Goel, U.S. Singh // Natl. Med. J. India. 2005. - Vol. 18, № 6. - P. 289-292.

87. Effect of preservatives on IgG aggregation, complement-activating effect and hypotensive activity of horse polyvalent antivenom used in snakebite envenomation / M. Garcia, M. Monge, G. Leon et al. // Biologicals. 2002. -Vol. 30, №2.-P. 143-151.

88. Effect of salt concentration on immunoglobulin G structure / V.P. Zav'yalov, S.Y. Tetin, V.M. Abramov, G.V. Troitsky // Biochim. Biophis. Acta. 1978. - Vol. 533, № 2. - P. 496-503.

89. Effect of vaccination on serum concentrations of total and antigen-specific immunoglobulin E in dogs / H. Hogenesch, A.D. Dunham, C. Scott-Moncrieff et al. // Am. J. Vet. Res. 2002. - Vol. 63, № 4. - P. 611-616.

90. Enokibori, М. Anaphylactoid reaction to maltose 5 % solution duringspinal anaesthesia / M. Enokibori, M. Kuge, K. Mori // Can. J. Anaesth. 1998. -Vol. 45, №1.-P. 52-55.

91. Enveloped virus inactivation by caprylate: a robust alternative to solvent-detergent treatment in plasma derived intermediates / M. Korneyeva, J. Hotta, W. Lebing et al. // Biologicals. 2002. - Vol. 30, № 2. - P. 153-162.

92. Eseverri, J.L. Adverse reactions to vaccines / J.L. Eseverri, S. Ranea, A. Marin // Allergol. Immunopathol. 2003. - Vol. 31, № 3. - P. 125-138.

93. Fenje, P. Potentiation of tissue culture rabies vaccine by adjuvants / P. Fenje, L. Pinteric // Am. J. Public. Health. Nations. Healtu. 1966. - Vol. 56, № 12.-P. 2106-2113.

94. Fuenzalida, E. Production of hyperimmune antirabies serum in horses / E. Fuenzalida // Bull. WHO. 1964. - Vol. 30. - P. 437-439.

95. Fujusawa, I. Purification and serology of beet mosaic virus/1. Fujusawa, T. Tsuchizaki, N. Iizuka // Ann. Phytopathol. Soc. Jap. 1983. - Vol. 49, № 1. -P. 22-32.

96. Gluck, R. Purification techniques for heterologous rabies antiserum / R. Gluck, D. Labert // Laboratory techniques in rabies / M.M. Kaplan, H. Koprowski. Geneva: WHO, 1973 - P. 405-410.

97. Goch, H. Stability of the lyophilized F(ab)2 fragments of horse tetanus antibodies isolated by affinity chromatography / H. Goch, B. Schiller, M. Korbeski

98. I Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.). 1979. - Vol. 27, № 4. - P. 499-509.

99. Goel, S.K. Antibody response to purified chick embryo cell vaccine in equines for production of equine rabies immune globulin / S.K. Goel, S. Sharma, U.S. Singh // Biologicals. 2003. - Vol. 31. - P. 233-236.

100. Hahn, R.G. Intravenous infusion of irrigating fluids containing glycine or mannitol with and without ethanol / R.G. Hahn, H.P. Stalberg, S.A. Gustafsson //J. Urol.- 1989.-Vol. 142, №4.-P. 1102-1105.

101. Haskin, J. A. Acute renal failure after large doses of intravenous immune globulin / J.A. Haskin, D.J. Warner, D.U. Blank // Ann. Pharmacother. 1999. -Vol. 33, №7-8. -P. 800-803.

102. Human diploid cell rabies vaccine. Effectiveness of immunization with small intradermal or subcutaneous doses / K.W. Bernard, M.A. Roberts, J. Sumneret al. // J. Amer. Med. Assoc. 1982. - Vol. 247, № 8. - P. 1138-1142.

103. Human rabies exposures and postexposure prophylaxis in South Carolina, 1993-2002 / S.A. O'Bell, J. McQuiston, LJ. Bell et al. // Public. Health. Rep.-2006.-Vol. 121, №2.-P. 197-202.

104. Hypotension with intravenous immunoglobulin therapy: importance of pH and dimer formation / M. Kroez, E.J. Kanzy, P. Gronski, G. Dickneite // Biologicals. 2003. - Vol. 31, № 4. - P. 277-286.

105. IgE reactivity to vaccine components in dogs that developed immediate-type allergic reactions after vaccination / K. Ohmori, K. Masuda, S. Maeda et al. // Vet. Immunol. Immunopathol. 2005 - Vol. 104, № 3-4. p. 249-256.

106. Immunoblot analysis for IgE-reactive components of fetal calf serum in dogs that developed allergic reactions after non-rabies vaccination / K. Ohmori, K. Masuda, D.J. Deboer et al. // Vet. Immunol. Immunopathol. 2007 -Vol. 115, № 1-2.-P. 166-171.

107. Immunogenicity and safety of purified Vero cell rabies vaccine in severely rabies-exposed patients in China / X.J. Wang, J. Lang, X.R. Tao et al. // Southeast. Asian. J. Trop. Med. Public. Health. 2000. - Vol. 31, № 2. - P. 287294.

108. Immunogenicity of a new, highly purified, highly concentrated duck-embryo rabies vaccine / H. Keller, R. Gluck, A. Wegmann, A.I. Wandeler // Schweiz. Med. Wochenschr. 1984. - Vol. 114, № 19. - P. 648-653.

109. Inactivated suckling mouse rabies vaccine provides short-term immunity in capuchin monkeys (Cebus paella) / E.C. Passos, P.M. Germano, M.A. Guimaraes et al. // J. Zoo. Wildl. Med. 2001. - Vol. 32, №1.-P. 55-57.

110. Is injecting a finger with rabies immunoglobulin dangerous? /

111. К. Suwansrinon, W. Jaijaroensup, H. Wilde, V. Sitprija // Am. J. Trop. Hyg. -2006. Vol. 75, № 2. - P. 363-364.

112. Jones, R.G. Enhanced pepsin digestion: a novel process for purifying antibody F(ab')2-fragments in high yield from serum / R.G. Jones, J. Landon // J. Immunol. Methods. 2002. - Vol. 263, № 1-2. - P. 57-74.

113. Joshi, D.D. Role of lesser developed nations in rabies research / D.D. Joshi, K. Bogel // Rev. Infect. Dis. 1988. - Vol. 10, № 4. - P. 600-603.

114. Karrenberg, R. The dangers of fructose-sorbitol infusions / R. Karrenberg, H.D. Stober // Anaesthesiol. Reanim. 1990. - Vol. 15, № 3. -P. 181-187.

115. Kissling, R.E. Antirabies vaccine of tissue culture origin / R.E. Kissling, D. Reese//J. Immunol. 1963. - Vol. 91, № 3. - P. 362-368.

116. Koenig, R. Indirect ELISA methods for the broad specificity detection of plant viruses / R. Koenig // J. Gen. Virol. 1981. - Vol. 55, № 1. - P. 53-62.

117. Kositprapa, C. Immune response to simulated postexposure rabies booster vaccinations in volunteers who received preexposure vaccinations /

118. C. Kositprapa, K. Limsuwun, H. Wilde // Clin. Infect. Dis. 1997. - Vol. 25, № 3. -P. 614-616.

119. Lalosevic, D. Economical production of rabies vaccine on cell cultures /

120. D. Lalosevic, L. Lazarevic-Ivanc, S. Stankov // Med. Pregl. 1997. - Vol. 50, № 11-12.-P. 565-568.

121. Lavender, J.F. Zonal-centrifuged purified duck embryo cell culture rabies vaccine for human vaccination / J.F. Lavender, R.M. Frank // Appl. Microbiol. 1971. - Vol. 22, № 3. - P. 358-365.

122. Leon, G. Anticomplementary activity of equine whole IgG antivenoms: comparison of three fractionation protocols / G. Leon, B. Lomonte, J.M. Gutierrez // Toxicon. 2005. - Vol. 45, № 1. - P. 123-128.

123. Lepine, P.P. Production of antirabies serum of animal origin / P.P. Lepine, P. Atanasiu // Monogr. Ser. World Health Organ. 1973. - № 23.1. P. 299-303.

124. Lepine, P.P. Производство лечебной антирабической сыворотки на животных / P.P. Lepine, P. Atanasiu // Методы лабораторных исследований по бешенству : пер. с англ. / под ред. М.М. Kaplan, Н. Koprowski. Женева: ВОЗ, 1975.-С. 295-303.

125. Lester, L.R. Should adding albumin to parenteral nutrient solutions be considered an unsafe practice? / L.R. Lester, C.M. Crill, E.B. Hak // Am. J. Health. Syst. Pharm.-2006.-Vol. 63, № 17.-P. 1656-1661.

126. Levenbook, I.S. Rhesus diploid rabies vaccine (adsorbed): neurological safety in guinea pigs and Lewis rats / I.S. Levenbook, B.L. Elisberg, B.F. Driscoll // Vaccine. 1986. - Vol. 4, № 4. - P. 225-227.

127. Local tissue irritating effects and adjuvant activities of calcium phosphate and aluminium hydroxide with different physical properties / N. Goto, H. Kato, J. Maeyama et al. / Vaccine. 1997. - Vol. 15, № 12-13. - P. 13641371.

128. Long-term therapy using horse anti-dog lymphocyte globulin without sensitization against horse protein / J. Scheel, K.H. Duswald, J. Ring et al. // Blut. 1977. - Vol. 34, № 4. - P. 305-316.

129. Low рН, caprylate incubation as a second viral inactivation step in the manufacture of albumin. Parametric and validation studies / A. Johnston, E. Uren,

130. D. Johnstone, J. Wu // J. Biologicals. 2003. - Vol. 31, № 3, - P. 213-234.

131. Luekrajang, T. Production of antirabies serum of equine origin / T. Luekrajang, T. Wangsar, P. Phanuphak // Laboratory techniques in rabies. -1996.-P. 401^403.

132. Matejtschuk, P. Factors affecting the production of intravenous immunoglobulin / P. Matejtschuk, J. More // Biochem. Soc. Trans. 1990. -Vol. 18, №2.-P. 309-310.

133. McKinney M.M. A simple, non-chromatographic to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid / M.M. McKinney, A. Parkinson // J. Immunol. Methods. 1987. - Vol. 96, № 2. - P. 271-278.

134. Methods for the purification of equine rabies immunoglobulin : effects on yield and biological activity / H.A. Hong, E.J. Rooijakkers, N.T. Ke et al. // Biologicals. 1994. - Vol. 22, № 1. - P. 1-6.

135. Morris, J. Preexposure rabies booster vaccinations: a literature review / J. Morris, N.S. Crowcroft // Dev. Biol. (Basel). 2006. - Vol. 125. - P. 205-215.

136. Ochoa, J.L. Hydrophobic (interaction) chromatography / J.L. Ochoa // Biochimie. 1978.-Vol. 60, № l.-P. 1-15.

137. Orbach, H. Intravenous immunoglobulin and the kidney- a two-edged sword / H. Orbach, M. Tishler, Y. Shoenfeld // Semin. Arthritis. Rheum. 2004. -Vol. 34, №3.-P. 593-601.

138. Osmotic nephropathy resulting from maltose-based intravenous immunoglobulin therapy / B. Chacko, G.T. John, N. Balakrishnan et al. // Ren. Fail. 2006. - Vol. 28, № 2. - P. 193-195.

139. Pan-African polyspecific antivenom produced by caprylic acid purification of horse IgG: an alternative to the antivenom crisis in Africa / J.M. Gutierrez, E. Rojas, L. Quesada et al. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. -2005. Vol. 99, № 6. - P. 468^75.

140. Persistence of humoral immunity to rabies 1100 days after immunization and effect of a single booster dose of rabies vaccine / R. Vodopija,

141. M. Lafont, Z. Baklaic et al. I I Vaccine. 1997. - Vol. 15, № 5. - P. 571-574.

142. Peterson, E.A. Chromatography of proteins. I. Cellulose ion-exchange adsorbents / E.A. Peterson, H.A. Sober // J. Amer. Chem. Soc. 1956. - Vol. 78. -P. 751-763.

143. Plotkin, S.A. Rabies vaccination in the 1980s / S.A. Plotkin // Hosp. Pract.- 1980.-Vol. 15,№ 11.-P. 65-72.

144. Post-exposure anti-rabies prophylaxis in Lublin province (Eastern Poland) in 2004-2005 / K. Tomasiewicz, H. Fota-Markowska, J. Krzowska-Firych, G. Krawczuk // Ann. Agric. Environ. Med. 2006. - Vol. 13, № 2. - P. 337-340.

145. Problems in human rabies post-exposure prophylaxis management / S. Tepsumethanon, V. Tepsumethanon, K. Suwansrinon et al. // Travel. Med. Infect. Dis. 2007. - Vol. 5, № 3. - P. 189-193.

146. Purified equine rabies immune globulin: a safe and affordable alternative to human rabies immune globulin / H. Wilde, P. Chomchey, P. Punyaratabandhu et al. // Bull. World Health Organ. 1989. - Vol. 67, № 6.1. P. 731-736.

147. Rabies DNA vaccine in the horse: strategies to improve serological responses / L. Fischer, J. Minke, N. Dufay et al. // Vaccine. 2003. - Vol. 21, №31. -P. 4593^596.

148. Rabies: epidemiological tendencies and control tools / N. Tordo, C. Bahloul, Y. Jacob et al. // Dev. Biol. (Basel). 2006. - Vol. 125. - P. 3-13.

149. Rabies exposures in thai children / C. Pancharoen, U. Thisyakorn, W. Lawtongkum, H. Wilde // Wilderness Environ Med. 2001. - Vol. 12, № 4. -P. 239-243.

150. Rabies in Thailand: 1990 / H. Wilde, S. Chutivongse, W. Tepsumethanon et al. // Rev. Infect. Dis. 1991. - Vol. 13, № 4. - P. 644652.

151. Rabies surveillance in the United States during 2004 // J.W. Krebs, E.J. Mandel, D.L. Swerdlow, C.E. Rupprecht // J. Am. Vet. Med. Assoc. 2005. -Vol. 227, № 12. - P. 1912-1925.

152. Raweerith, R. Fractionation of equine antivenom using caprylic acidprecipitation in combination with cationic ion-exchange chromatography / R. Raweerith, K. Ratanabanangkoon // J. Immunol. Methods. 2003. - Vol. 282, № 1-2. - P. 63-72.

153. Reed, L.J. A simple method of estimating fifty percent and points / L.J. Reed, H. Muench // Am. J. Hyg. 1938. - Vol. 27. - P. 493^97.

154. Retrospective: animal attacks and rabies exposures in Thai children / C. Sriaroon, P. Sriaroon, S. Daviratanasilpa et al. // Travel. Med. Infect. Dis. -2006. Vol. 4, № 5. - P. 270-274.

155. Rojas, G. Caprylic acid fractionation of hyperimmune horse plasma: description of a simple procedure for antivenom production / G. Rojas, J.M. Jimenez, J.M. Gutierrez // Toxicon. 1994. - Vol. 32, № 3. - P. 351-363.

156. Sadkowska-Todys, M. Rabies in Poland in 2003 / M. Sadkowska-Todys, E. Labunska // Przegl. Epidemiol. 2005. - Vol. 59, № 2. - P. 313-321.

157. Safety of equine rabies immune globulin / H. Wilde, P. Chomchey, S. Prakongsri, P. Punyaratabandhu // J. Lancet. 1987. - Vol. 2, № 8570. -P. 1275.

158. Schneider, L. Метод очистки вируса бешенства фосфатом алюминия / L. Schneider // Методы лабораторных исследований по бешенству : пер. с англ. / под ред. М.М. Kaplan, Н. Koprowski. Женева : ВОЗ, 1975. - С. 179181.

159. Sedwick, W.D. Reproducible plaquing system for rabies, lymphocytic choriomeningitis and other ribonucleic acid viruses in BHK-21-13S agarose suspensions / W.D. Sedwick, T.J. Wiktor // J. Virol. 1967. - Vol. 1, № 6. -P. 1224-1226.

160. Seligmann, E.B. Определение иммуногенности по методу NIH / Е.В. Seligmann // Методы лабораторных исследований по бешенству : пер. с англ. / под ред. М.М. Kaplan, Н. Koprowski. Женева: ВОЗ, 1975. - С. 275282.

161. Serum anti-rabbit and anti-horse IgG, IgA, and IgM in kidney transplant recipients / C. Prin Mathieu, E. Renoult, A. Kennel De March et al. // Nephrol. Dial. Transplant.-1997.-Vol. 12, № 10.-P. 2133-2139.

162. Sex- and age-related differences in rabies immunoglobulin hypersensitivity / K. Suwansrinon, W. Jaijaroensup, H. Wilde et al. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2007. - Vol. 101, № 2. - P. 206-208.

163. Snake bite by European vipers. A multicenter study of tolerance to Viperfav, a new intravenous antivenom // L. Haro, J. Lang, R. Bedry et al. // Ann. Fr. Anesth. Reanim. 1998. - Vol. 17, № 7. - P. 681-687.

164. Spier, R.E. Large-scale mammalian cell culture: methods, applications and products / R.E. Spier // Curr. Opin. Biotechnol. 1991. - Vol. 2, № 3. -P. 375-379.

165. Studies on the toxicities of aluminium hydroxide and calcium phosphate as immunological adjuvants for vaccines / N. Goto, H. Kato, J. Maeyama et al. / Vaccine. 1993.- Vol. 11, № 9. - P. 914-918.

166. Suppressor T cells in tolerance to desaggregated horse anti-human thymocyte globulin in man / N.I. Abdou, M. Amare, A. Sagawa, N.L. Abdou // Transplantation. 1980. - Vol. 29, № 4. - P. 324-328.

167. The impact of a low dose, low volume, multi-site immunization on the production of therapeutic antivenoms in Thailand / S. Sriprapat, S. Aeksowan, S. Sapsutthipas et al. // Toxicon. 2003. - Vol. 41, № 1. - P. 57-64.

168. The rabies peripheral challenge test: more accurate determination of vaccine potency / P.S. Wunderli, D.W. Dreesen, T.J. Miller, G.M. Baer // Vaccine. 2006. - Vol. 24, № 49-50. - P. 7115-7123.

169. The separation of antibodies, isoagglutinins, prothrombin, plasminogen and beta lipoproteins into sub-fractions of human plasma / I.L. Oncley, M. Melin, D.A. Richert et al. // J. Am. Chem. Soc. 1949. - Vol. 71. - P. 541-550.

170. Theakston, R.D.G. Report of a WHO workshop on the standardization and control of antivenoms / R.D.G. Theakston, D.A. Warrell, E. Griffiths // Toxicon. 2003. - Vol. 41. - P. 541-557.

171. Toxicokinetic and toxicodynamic analyses of Androctonus australis hector venom in rats: optimization of antivenom therapy / D. Hammoudi-Triki, J. Lefort, C. Rougeot et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2007. - Vol. 218, № 3. -P. 205-214.

172. Tsiang, H. Rabies vaccines: a review of progress towards improved efficacy and safety / H. Tsiang // Bio. Drugs. 1998. - Vol. 10, № 4. - P. 317328.

173. Wang, S. Adjuvant synergy in the response to hepatitis В vaccines / S.Wang, X. Liu, MJ. Caulfield // Vaccine. 2003. - Vol. 21, № 27-30. -P. 4297^306.

174. Wezel, A.L. Production of an inactivated rabies vaccine in primary dogkidney cells / A.L. Wezel, G. Steenis 11 Dev. Biol. Stand. 1978. - Vol. 40. -P. 69-75.

175. Whitacre, C. Characterization of IgG-containing DEAE fractions of canine serum / C. Whitacre, R.W. Lang // Transplant. Proc. 1975. - Vol. 7, № 4. -P. 531-536.

176. Wiktor, T.J. Методы тканевых культур / T.J. Wiktor // Методы лабораторных исследований по бешенству : пер. с англ. / под ред. M.M. Kaplan, Н. Koprowski. Женева : ВОЗ, 1975. - С. 101-123.

177. Wiktor, T.J. Production and control of rabies vaccines made on diploid cells / T.J. Wiktor // Dev. Biol. Stand. 1976. - Vol. 37. - P. 265-266.

178. Wilde, H. Equine rabies immune globulin: a product with an underserved poor reputation / H. Wilde, S. Chutivongse // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1990. - Vol. 42, № 2. - P. 175-178.

179. World Health Organization. WHO expert committee on rabies: eighth report // WHO. Tech. Rep. Ser. Geneva, 1992. - Vol. 824. - P. 1-84.

180. World Health Organization. The use of essential drugs // WHO. -Tech. Rep. Ser. Geneva, 2000. - Vol. 895. - P. 1-61.

181. World Health Organization. WHO expert consultation on rabies // WHO. Tech. Rep. Ser. Geneva, 2005. - Vol. 931. - P. 1-88.