Разработка тест-системы для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа: ИКК-Серотест тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Саттарова, Наталья Валерьевна

• Саттарова, Наталья Валерьевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Саттарова, Наталья Валерьевна

СОДЕРЖАНИЕ............................................................................... 2

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................... 4

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ............................................. 5

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................................ 10

1.1 Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота.......... 10

1.2 Характеристика и биологические свойства основного возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита (ИКК) крупного рогатого скота -бактерий Moraxella bovis.................................................................. 15

1.3 Методы диагностики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота............................................................................... 25

1.4 Методы иммуноанализа......................................................... 27

1.5 Иммуноферментный анализ.................................................... 31

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................ 39

2.1 Материалы и методы исследований........................................... 39

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ........................ 52

3.1 Эпизоотологический мониторинг ИКК крупного рогатого скота........ 52

3.2 Изучение биологических свойств культур бактерий, выделенных от животных, больных инфекционным кератоконъюнктивитом, на территории Республики Татарстан.............................................. 54

3.3 Разработка тест-системы ИФА для серологической диагностики ИКК крупного рогатого скота и определения уровня поствакцинальных антител................................................................................. 60

3.3.1 Сравнительная оценка методов получения антигена бактерий Moraxella bovis.................................................................. 60

3.3.2 Подбор оптимальной схемы иммунизации животных для получения гипериммунной ^сыворотки к бактериям Moraxella bovis....................................................................................... 64

3.4 Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител к бактериям Moraxella bovis при тестировании сывороток крови животных в одном разведении....................................... 69

3.5 Комиссионное испытание «Набора препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)»...................... 72

3.6 Производственные испытания «Набора препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа» (ИКК-СЕРОТЕСТ)...................... 76

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ... 78

ВЫВОДЫ................................................................................. 89

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................................... 90

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ................................ 91

ПРИЛОЖЕНИЯ......................................................................... 121

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ-АТ - антиген-антитело

БСА/ЛСА - сывороточный альбумин быка/лошади ИКК - инфекционный кератоконъюнктивит ИФА - иммуноферментный анализ КББ - карбонатно-бикарбонатный буфер КМПА - кровяной мясопептонный агар КРС - крупный рогатый скот

м.к. - микробные клетки »I». ч ........

МПА - мясопептонный агар

МПБ - мясопептонный бульон

МПЖ - мясопептонная желатина

ОП490 - оптическая плотность

ОФД - ортофенилдиамин

ПМПА - полужидкий мясопептонный агар

РА - реакция агглютинации

РДП - реакция диффузионной преципитации

РСК - реакция связывания комплимента

Т - титр

ТСА - триптон-соевый агар

ТСБ - триптон-соевый бульон

ТХУ - трихлоруксусная кислота

УФ - ультрафиолетовый

ФБР - фосфатно-буферный раствор

ФСБР/т. - фосфатно-буферный раствор с Твином 80

шт. - штамм

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка тест-системы для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа: ИКК-Серотест»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Инфекционный кератоконъюнктивит (ИКК) крупного рогатого скота бактериальной этиологии в последние годы приобрел широкое распространение во всем мире. В настоящее время сформировалось общее представление о том, что ведущая роль в возникновении ИКК крупного рогатого скота принадлежит бактериям Moraxella bovis (Иванов A.B., 2005; Гаффаров Х.З. с соавт., 1998, 2007; Angelos J. А., 2001; Postoma G. С, 2008).

Заболевание наносит значительный экономический ущерб сельскохозяйственному производству за счет снижения продуктивности, потерь живой массы, иногда падежа, а также расходов на дорогостоящее лечение.

Особое место в мероприятиях, по борьбе с кератоконъюнктивитом занимает диагностика и специфическая профилактика (Bishop В., 1982; McConnel C.S., 2008). Мировая ветеринарная наука за последние годы достигла значительных успехов в вопросе диагностики, профилактики и лечения ИКК крупного рогатого скота. Для специфической. I профилактики ИКК крупного рогатого скота используются ряд вакцин, отличающихся по принципам получения и по методу проведения вакцинации (Hughes D. Е., 1976; Pugh G.W., 1977; Lepper A.W. et ah, 1995; Burns M. J., 2008; O'Connor A.M., 2011).

В ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" разработана и широко используется в различных регионах РФ ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота (ИКК КРС) на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1 (Иванов A.B., Гаффаров Х.З. и др., 2008; Спиридонов Г.Н., 2008).

С целью разработки более.эффективных и адекватных методов диагностики требуются новые методические подходы, основанные на достижениях биологической науки и научно-технического прогресса в целом. В связи с этим одним из главных направлений ветеринарной диагностики является создание простых в использовании и надежных иммунохимических методов.

В лабораторной диагностике многих болезней широкое применение находит иммуноферментный анализ (ИФА) (Прунтова О.В., 1997; Васильев Д. А., 1998; Хисматуллина H.A., 2002; Мудрак Н.С., 2004).

Использование ИФА может иметь важное значение и для серологического мониторинга инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, а также изучения иммунного статуса в регионах, где проводилась вакцинация.

Метод иммуноферментного анализа универсален, обладает высокой специфичностью и чувствительностью, не требует сложного оборудования, и приемлем для проведения анализов в массовых количествах.

В настоящее время в Российской Федерации не разработаны методы серологической диагностики. ИКК крупного рогатого скота. Исходя из этого, проведение исследований по разработке отечественных иммуноферментных тест-систем на основе антигенов ¡для выявления антител к бактериям Moraxella bovis является актуальной задачей, имеющей научное и практическое значение.

Цель и задачи исследований. Целью работы явилась разработка «Набора препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)» для серологической диагностики инфекционного тсератоконъюнктивита крупного рогатого скота и иммунологического мониторинга вакцинированного поголовья.

В соответствии с поставленной целью решали следующие задачи:

1.Провести эпизоотологический мониторинг и изучить иммунобиологические. .свойства выделенных бактерий Moraxella bovis -возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота;

2. Разработать технологию изготовления компонентов тест-системы ИФА, предназначенной для серологической диагностики ИКК крупного рогатого скота и определения уровня поствакцинальных антител и стандартизировать условия ее проведения; ..«¡¡i,..h) ¡^п..^ ... .

3. Провести оценку активности, специфичности и воспроизводимости иммуноферментной тест-системы .путем тестирования сывороток крови,

полученных от вакцинированных и больных инфекционным кератоконъюнктивитом крупного рогатого скота;

4. Определить диагностическую ценность иммуноферментной тест-системы в лабораторных и производственных условиях, а также провести серологический мониторинг в отношении ИКК крупного рогатого скота в хозяйствах регионах Среднего Поволжья и Предуралья.

Научная новизна работы. Впервые в РФ разработан «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)». Оптимизированы условия проведения иммуноферментного анализа,. В ходе исследований установлена чувствительность, специфичность и воспроизводимость ИФА на основе разработанной тест-системы.

Положительные результаты лабораторных испытаний тест-системы подтверждены в производственных условиях.

Практическая "-значимость работы. Внедрение разработанной иммуноферментной тест-системы в практику ветеринарных лабораторий РФ позволит решить проблему как серологической диагностики ИКК крупного рогатого скота, так и оценки напряженности поствакцинального иммунитета. <.

Разработаны нормативные документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данной тест-системы, в частности:

- технические условия на «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)», ТУ 9388 - 009-00492374-2013, утверждены директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», согласованоФУВ КМРТ, 7 июня 2013 г;.

- инструкция по применению «Набора препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)» (утверждена директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») 7 июня 2013 г;

- инструкция по изготовлению и контролю «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного

анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)» (утверждена директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») 7 июня 2013 г.

Апробация работы. " Основные положения диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на:

- ежегодных заседаниях Ученого совета Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») при обсуждении отчетов о НИР за 2009-2012 гг.;

- международной конференции, посвященной 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии (Самара, 2009);

- международной научно-практической конференции молодых ученных ФГУ «ВНИИЗЖ» (Владимир, 2010);

- междунаро'ДйЬй нау^нЬ-практической конферейЦии, посвященной 70-летию со дня основания Института экспериментальной ветеринарии Сибири, Дальнего Востока «Актуальные вопросы' ветеринарной медицины Сибири» (Краснообск, 2010);

- международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию организации ВГНКИ «Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество)» (Москва, 2011);

- всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» ФГОУ " ВИО" «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» (Казань, 2011);

- международной научно-практической конференции «Биотехнологии в решении экологических проблем природы. Общества и человека в Евразии: взгляд молодых ученных и специалистов» (Казань, 2013).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в т.ч. 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

и'> 15 ПК; . ... „К

1. Эпизоотология ИКК в регионах Среднего Поволжья и Предуралья. Характеристика иммунобиологических свойств выделенных бактерий Moraxella bovis - возбудителя ИКК крупного рогатого скота;

2. Технология изготовления специфических компонентов тест-системы ИФА для серологической диагностики ИКК КРС и определения уровня поствакцинальных антител к бактериям Moraxella bovis;

3. Диагностическая ценность иммуноферментной тест-системы, анализ и интерпретация результатов испытания набора;

4. Результаты серологического мониторинга крупного рогатого скота в отношении ИКК в хозяйствах регионов Среднего Поволжья и Предуралья.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах компьютерного текста и включает разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы и приложения, содержит 277 источника, в том числе 144 иностранных авторов и приложение. Диссертация содержит 14 таблицы и иллюстрирована 5 рисунками.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота

Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота - острое контагиозное заболевание, характеризующееся слезотечением, гиперемией сосудов конъюнктивы, светобоязнью, серозно-гнойным истечением, помутнением и изъязвлением роговицы, деформацией глазного яблока в виде кератоглобуса или кератоконуса, частичной или полной потерей зрения пораженного глаза животного.

Впервые V. Могах (1896) и Т. Axenfeld (1897) независимо друг от друга выделили возбудитель инфекционного конъюнктивита человека. В 1899 году F.S. Billings сообщил о случаях инфекционного кератита у крупного рогатого скота в штате Небраска (США) и в окрашенных мазках, приготовленных из истечений пораженных глаз, выявил короткие палочки с закругленными концами. Позже F.S. Jones и R.B. Little (1923).описали 24 вспышки острого инфекционного офтальмита у крупного рогатого скота и во всех случаях были выявлены характерные диплобациллы.

R. Hauduroy et al. (1937) идентифицировали, выделенные F.S. Jones и R.B.t Little диплобактерии как Hemophilus bovis. Позднее A. Lwoff (1939) включил их в род, Moraxella. .ul(>M!...t.

В нашей стране первые сообщения об эпизоотических вспышках ИКК появились лишь в 70-80-е годы (Бобырь В.К., 1974; Какоулин Т.Е., 1982; Андриасян В.Б.,1988; Черванцев В.А., 1995). Однако были описаны только клинико-эпизоотические особенности болезни и отсутствовали данные по выделению основного возбудителя, идентификации и доказательств его этиологической роли в возникновении болезни.

В настоящее время во всем мире сформировалось общее представление, что ведущая роль в возникновении ИКК крупного рогатого скота принадлежит бактериям Moraxella bovis (Pugh G.W., 1970, 1975; Lepper A.W., 1986; Гаффаров X.3. с соавт., 1998, 2007).

UK * .< Л * l' АМН J ! U ' ' . . . -

1 ••'•"■ -•*>.* n

Наряду с этим известно, что герпесвирус типа I также может вызвать острый конъюнктивит у этого вида животных (Zbrun M.V., 2011). При этом воспалительный процесс не прогрессирует до помутнения роговицы и ее изъязвления. В ряде работ высказывается мнение, что герпесвирус типа I создает благоприятную среду для патогенного действия основного возбудителя ИКК -бактерий Moraxella bovis (Штрауб О.Х., Abinanti F.R. et al., 1961; Sykes J.A., 1962; Mohanty S.B., 1970; Rebnun W. et al., 1978; Straub O.X., 1981; Georg L.W., 1988).

Другие источники указывают на то, что при ИКК крупного рогатого скота могут играть менее выраженную роль хламидии (Фомин Ю.В., 1970; Гаффаров Х.З. 2004; Равилов А.З., 2004; Wehr J.- et; al., 1980), Mycoplasma bovoculi (Эйделынтейн И.A., 1999; Langford E.V., 1973; Schottxer-Wegner H.H., 1990), риккетсии (Сидорчук A.A., 2005) и условно патогенные бактерии, которые в ряде случаев участвуют в формировании смешанных инфекций (Travnicek М. et al., 1982 и др.).

Нет сомнений в том, что в качестве сопутствующей микрофлоры участвуют в этой патологии стрептококки, стафилококки, диплококки, E.coli и др., которые осложняют инфекционный процесс (Дорофеев К.А., 1973; Русинов А.Ф., 1995).

Большое значение в возникновении массовых кератоконъюнктивитов у крупного рогатого скота придается и гельминтам, в частности, нематодам из рода Thelazia Bosc, которые, находясь в глазу, оказывают на него механическое и токсическое раздражающее действие с последующим поражением большей части поверхности роговицы (Горцевский С.А., 1962; Эльце К. с соавт., 1977; Абуладзе К.И., 1980.Русинов А.Ф, 1983; Ивашкин В.М., 1984).

Инфекционный кератоконъюнктивит, вызываемый бактериями Moraxella bovis, широко распространен во всех странах мира и наносит значительный экономический ущерб. ¡Частртаеш проявления в Российской^Федерации наиболее высока, особенно среди молодняка крупного рогатого скота текущего года рождения и на откормочных площадках с высокой плотностью поголовья.

Наибольшего развития болезнь достигает в теплое время года, особенно на пастбищах. Поражается чаще один глаз, а затем переходит на другой; реже поражаются сразу два глаза, причем, как правило, один глаз сильнее, чем другой.

Заболевание в больших стадах причиняет значительный экономический ущерб развитию скотоводства вследствие снижения удоя до 50%, прироста массы тела на 31-37%, иногда падежа, а также затрат на проведение ветеринарно-санитарных и лечебно-'профилактических мероприятий (Фомин К.А., 1968).

Болезнь распространяется при непосредственном контакте больных животных со здоровыми, а также через переносчиков - мух и других насекомых (Gerhard R.R., 1982; Glass H.W., 1982).

Известно, что интенсивность развития эпизоотического процесса зависит от степени облучения животных в летние месяцы экстремальным потоком солнечных УФ-лучей: чем оно больше, тем интенсивнее протекает и тяжелее развивается инфекционный! процесс: (Валебная Л.В., 2004; Hughes D.E., 1965; Pugh G.W., 1982).

Учитывая, что инфекционный. . кератоконъюнктивит имеет широкое распространение и поражает все возрастные группы животных, особенно молодняк, вакцинация рассматривается как весьма эффективный метод борьбы с ним. Следует отметить, что : проблема специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивита во многих странах мира уже решена в 7090-е годы прошедшего столетия (Hughes D.E. et al., 1971; Pugh G.W. et al., 1982).

В нашей стране также проведены широкомасштабные исследования и разработана система..,!., мероприятий по борьбе ..с инфекционным керотоконъюнктивитом, которая основывается на проведении комплекса организационно-хозяйственных, зоотехнических, ветеринарно-санитарных, противоэпизоотических, зоогигиенических и специфических мероприятий, направленных на повышение резистентности организма крупного рогатого скота, а также на предотвращение заражения животных возбудителем болезни бактериями Moraxella bovis через объекты внешней среды и путем передачи через насекомых (Карайченцев В.Н., 2003,2004; Гаффаров Х.З., 2004).

В ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" разработана и широко используется ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота (ИКК КРС) на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1 (Гаффаров Х.З. с соавт, 2005, Патент РФ № 2264227).

Иммунизация животных обеспечивает снижение заболеваемости инфекционным кератоконъюнктивитом в среднем в 16 раз, что приводит к значительному сокращению экономического ущерба. Иммунизация животных вызывает определенную иммунобиологическую перестройку в организме у привитых животных, значительно активизирует их специфические защитные механизмы. Эти изменения характеризуются нарастанием титров специфических антител, повышением ¡процентного, соотношения Т- и B-лимфоцитов при оценке клеточной иммунной реакции и превентивной активности сывороток крови вакцинированных животных. Доказано, что -предложенная вакцина формирует активный приобретенный иммунитет против ИКК крупного рогатого скота (Гаффаров Х.З., 2004; Дуплева Л.Ш., 2008).

С целью понять, как болезнь работает, исследователи пытаются определить ' основную и возможную причины. Основная причина - это то, что должно безусловно присутствовать для развития, болезни.

Привычно думать, что бактерии Moraxella bovis - это основная причина инфекционного кератоконъюнктивита («pinkeye»).

Возможные причины немного более сложны. Только, потому, что микроорганизм находится в глазу, не делает его возможной причиной «pinkeye». Должны быть и другие детали.

Так, например, присутствие возбудителя в глазах и повреждения глаз насекомыми (мухами) -"два фактора достаточных, чтобы вызвать заболевание (Steve P.C., 1965). Не понимая это, производители пытаются приуменьшить такие причины, как контролирование популяций мух, покос травы или размножение крупного рогатого скота с "закрытыми" глазами, чтобы предотвратить повреждение ультрафиолетовым излучением. Общеизвестно, что заболеванию крупного рогатого скота способствуют неблагоприятные факторы (сухая жаркая

погода, антисанитарное состояние в загонах, отсутствие навесов для телят в период сильного солнцепека, что способствует постоянному механическому и термическому раздражению конъюнктивы век и глаза), которые ослабляют резистентность конъюнктивы век и глазного яблока.

Необходимо отметить, что такие «возможные» причины также могут измениться в пределах стада. Например, в стаде 100 коров, 40 из которых могут заболеть ИКК. В половине случаев причиной повреждения глаз явились мухи; заболевание другой половины, возможно, связано с плохими климатическими условиями.

Если использовать вакцину, которая направлена только против бактерий Moraxella bovis, то все равно могут быть случаи возникновения ИКК, вызванного другими причинами,-что может быть похоже на, то, что используемая вакцина не сработала. Однако это1 не так: Поскольку имеется большое разнообразие штаммов бактерий Moraxella bovis, а также и другие бактериальные оппортунисты, в связи с этим некоторые исследователи предлагают сначала использовать коммерчески доступные вакцины на основе антигенов бактерий Moraxella bovis. Но если вспышки сохраняются, то. необходимо исследовать образцы культур в рамках данного стада. Исходя из результатов, рекомендуют прививать аутогенной вакциной, на основе выделенных штаммов бактерий (O'Connor A.M., 2012).

Долгое время считали, что основным возбудителем ИКК бактериальной этиологии являются только Moraxella bovis. Однако не всегда применение вакцин на основе антигенов данньк^бактерий.бывает эффективно. Предполагают, что это связано с тем, что есть и другие бактерии, причастные к возникновению ИКК. Другими возможными вызывающими ИКК- бактериями могут быть такие как, Moraxella ovis и Moraxella bovoculi sp. nov. Однако присутствие этих бактерий в верхних дыхательных путях и глазах животного еще не означает, что они являются причиной ИКК. Так как они выделяются из глаз здоровых животных. Такие бактерии могут действовать как оппортунисты, как только поверхность роговицы глаза повреждена (механические повреждения, УФ-свет, мухи) (Angelos J., et al., 2007b).

Впервые бактерии Moraxella bovoculi выделил Angelos (2007с). Проводя испытания эффективности антибиотиков на быках и молочных телках в северной Калифорнии в течение лета 2002, были получены смывы от 138 3-9-месячных телят с роговичными изъязвлениями.

Гемолитические грамотрицательные кокки были выделены в 68 пробах; Moraxella bovis были выделены из 29 проб.

Чтобы охарактеризовать гемолитические грамотрицательные кокки и определить, связаны ли они с известными представителями рода Moraxella, были проведены довольно обширные бактериологические, биохимические тесты и молекулярно-генетически&ёнализы. Исследование последовательности 16S рРНК и филогенетические анализы позволили поместить их в группу, объединяющую Moraxella bovis и Moraxella ovis (Petterson В., et al., 1998; Gerny H.E., 2006). Процент гомологии между выделенными грамотрицательными кокками и бактериями Moraxella boyis и Moraxella ovis был высок и составлял 96%. J.Angelos et. al. предложил отнести их новому виду Moraxella bovoculi sp. nov. (2007a). Номенклатура которого опубликована 5 апреля 2005 года. ""

Продолжающиеся исследования в области инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, его предотвращения приводят к" новым пониманиям и^к^более.! глубокому проникновению в суть механизмов патогенеза бактерий рода Moraxella.

Дальнейшие усилия исследователей. в • этой области могут привести к уменьшению ИКК в популяции крупного рогатого скота. И тем самым приведут к сокращению отрицательного эффекта на крупный рогатый скот.

1.2 Характеристика и биологические свойства основного возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита (ИКК) крупного рогатого скота — бактерий Moraxella bovis

Классификация бактерий рода Moraxella. Согласно определителю бактерий Берджи 1997 г. (Holt J.G., 1997) род Moraxella, предложенный Lwoff

(1939), относился к семейству Neisseriaceae (Bovre К. and Henriksen S.D., 1968). Однако с современных позиций таксономии, на основе изучения 16S рРНК и анализа рРНК-ДНК гибридизации, в настоящее время род Moraxella отнесён к семейству Moraxellaceae (куда также включены роды Acinetobacter и Psychrobacter), порядку Pseudomonadales, классу Proteobacteria (Rossau et al., 1991).

Род Moraxella подразделяется на два подрода: Moraxella и Moraxella (Branhamella) (Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, William B. W. 2001). Известно 20 представителей этого рода, большинство которых связаны с болезнями человека (Калинина Г.П., 1986, 1987; Зубков М.Н., 1987; Kodjo А. 1995, 1997). Относительно недавно признанный новый вид - Moraxella bovoculi был выделен при ИКК у молочных коров калифорнийскими учеными (Angelos J.A. et al., 2007с.).

Вероятно, бактерии Moraxella bovoculi существовали в популяции крупного рогатого скота в течение долгого времени. И все те грамотрицательные кокки, выделяемые ранее от крущюгскрогатого скота при ИКК, которые определяли как «Moraxella ovis», фактически являлись Moraxella bovoculi. Благодаря современным методам молекулярного анализа удалось различить Moraxella ovis и Moraxella bovoculi (Angelos , J.A., Ball L.M. 2007a; Klibs N., 2010).

Таблица 1 - Виды Moraxella, выделенные от животных.

Вид Резервуар

Moraxella bovis Крупный рогатый скот с инфекционным кератоконъюнктивитом

Moraxella bovoculi Крупный рогатый скот с инфекционным кератоконъюнктивитом

Moraxella ovis Овцы с конъюнктивитом

Moraxella oblonga Овцы

Moraxella canis Здоровые собаки и кошки

Moraxella boevrei Здоровые козы

Moraxella caprae Здоровые козы

Moraxella caviae Здоровые морские свинки

Moraxella cuniculi Кролики

Moraxella equi Лошади с конъюнктивитом

Однако для ветеринарной медицины наиболее важным представителем является Moraxella bovis (Стефан Х.Г., 2009; Pebo М.В., 1985; Xie С.Н., 2005).

Морфология возбудителя и тинкториальные свойства. Moraxella bovis — это короткие толстые грамотрицательные палочки (1,0-1,5 х 1,5-2,5 мкм) с округленными концами, чаще расположены парами или в виде коротких цепочек. Характерен полиморфизм. Клетки свежевыделенных культур бактерий могут быть окружены капсулой. Неподвижны, но благодаря наличию полярных фимбрий (пилий), на плотных средах, для бактерии характерно движение рывками, так называемая, «дёргающаяся» подвижность (Сидоров М.А. с соавт., 1995; Карайченцев В. Н., 1992, 2004).

Культуральные свойства. На кровяном агаре через 48 часов формируют колонии диаметром до 1 мм, с зоной /?-гемолиза шириной 0,5 - 1,0 мм. Колонии круглые, выпуклые в центре^блестящие, полупрозрачные, серовато-белые, слегка вросшие в среду. На триптозо-соевом бульоне через 48 - 72 ч инкубации при 37°С наблюдается скудный рост, который по мере старения слегка мутноватый, но образуется осадок, который при взбалтывании разрушается на грубые частицы. При инкубации в условиях реактора бульон становится мутнее через 24 часа с образованием небольшого количества: осадка. Рост в дальнейшем усиливается при • добавлении в 5%-ном объеме кроличьей или телячьей сыворотки (Карайченцев В.Н., 2004, 2005; Holt I.G et al., 1997). ч ,

Биохимические свойства. Биохимическая активность слабо выражена, что создает трудности при; '.идентификации. Не ферментирует Сахаров; не восстанавливает нитраты; не образует индола из триптофана; разжижает желатину, т.е. обладает протеолитической активностью; проба на оксидазу дает положительный результат. При 24-часовой инкубации в лакмусовом молоке образует темную синюю полосу в верхней части пробирки, а при дальнейшей инкубации среда прогрессивно ( становится более щелочной. В течение 6 дней появляется отчетливо выраженные 3 зоны: в верхней части - темно-синяя жидкость, средняя зона - лилового цвета, творожистая по консистенции, а нижний слой - коагулированный казеин бледно-лилового цвета. Продолжение инкубации

приводит к полной пептонизации лакмусового молока однородного ярко-розового цвета (Шендеров Б.А., 1979; Карайченцев В.Н., 2003; Гаффаров Х.З., 2004; Валебная Л.В., 2004).

Факторы вирулентности Moraxella bovis и их роль в патогенезе инфекционного кератоконъюнктивита.

Пили (фимбрии), внешние мембранные белки, липополисахариды (ЛПС), капсула являются важными факторами вирулентности бактерий Moraxella bovis.

Одними из основных компонентов клеточной стенки грамотрицательных бактерий являются липополисахариды (ЛПС). Они представляют собой О-антигены бактериальной'¡клеткиу являются рецепторами для ряда специфических бактериофагов и бактериоцинов (Байчурина А.З., 1999; Игнатов П.Е., 2002; Ruoslanti Е., 1996).

Клеточная стенка Moraxella bovis типичная для грамотрицательных бактерий, состоящая из липополисахаридов и белков. Являясь микробными эндотоксинами, ЛПС Moraxella * bovis' представляет собой один из ключевых факторов патогенеза инфекций (Koronakis V., 1992; Kyd J.M., 1998). Липополисахариды распознаются клетками адаптивного иммунитета (в первую очередь макрофагами) и вызывает сильный иммунный ответ с секрецией воспалительных цитокинов.(Калинина Г., 1988; Зубков М.Н., 1990; Wilson J.C., 2005).

Определенную роль в патогенезе играет наличий капсул. Прежде всего - это противодействие механизмам фагоцитарной адгезии. Основные функции капсул в качестве фактора патогенности. Капсулы экранируют иммуноактивные структуры бактериальной клетки.дВещества/чвходящие в .состав капсулы, обладают, как правило, сильными гидрофильными свойствами. Известно, что чем гидрофильнее объект, тем труднее он поддается фагоцитозу. Таким образом, гидрофильность, обусловленная капсулой, защищает бактерию от фагоцитоза. Легкая отделяемость капсульных структур и. слизи от бактериальной клетки обуславливает ложную связь фагоцита и возбудителя. Это происходит из-за того, что лиганд, связывающий фагоцит с возбудителем практически не фиксируется на

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Саттарова, Наталья Валерьевна, 2013 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абуладзе, К.И. Паразитология и инвазионные болезни с.-х. животных / К.И.Абуладзе. - М.: ВО Агропромиздат, 1980. - С. 22-25.

2. Адаме, Г.А. Выделение липополисахаридов из грамотрицательных бактерий / Г.А. Адаме // Методы исследования углеводов: Пер. с англ. М.: Мир, 1975.-С. 126-130.

3. Акопян, В.Б. Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве /В.Б. Акопян, В.М. Хлюпкин, Н.Т. Коновалов. -М:.МВА, 1992.-29с,и ч>(4 ж IU/....................

4. Андриасян, В.Б. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота в Северо-Западной зоне РСФСР / В.Б.Андриасян. // Сб. науч. тр. Ленинградского вет. ин-та. - 1988. - С. 6-11.

5. Антонов, Б.И. Справочник. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальное'инфекции / Б.И.Антонов. - М:: Агропромиздат, 1986. -352 с.

6. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, A.A. Воробьев.- Л.: Наука, 1962. - 180 с.

7. Байчурина, А.З. Медицинская микробиология / А.З. Байчурина, Г.Х. Гильманова, В.Е. Григорьев; гл. ред. В.И. Покровский, O.K. Поздеев. - М.: ГЭОТАР Медицина, 1999. - 1183 с.

8. Бакулов, И. А. Методические указания по эпизоотологическому исследованию / И.А. Бакулов соавт. - М., 1982. - 16 с.

9. Бейли, Н." Математика! в ¡медицине и биологии / Н. Бейли.- М.: Мир, 1970. - 326 с.

10. Берджи, Д. Определитель Берджи. В 2т. Т.1 Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта и др. М.: Мир, 1997. - 368 с.

11. Бобырь, В.К. Инфекционные кератоконъюнктивиты крупного рогатого скота в хозяйствах Гомельской области / В.К.Бобырь // Сб. раб. Львовского ветеринарного института. - Вып. 39. - 1974. - С. 167-179.

1 I I и-vi 11 и(, ,

12. Бондаренко, В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса / В.М. Бондаренко // Микробиол. - 1999. - № 5. - 3439 с.

13. Борисевич, В.Б. Инфекционные кератоконъюнктивиты крупного рогатого скота / В.Б.Борисевич, Б.В.Борисевич, П.Д.Солонин, с соавт. // Ветеринария. - 2006. - № 1. - С. 18-19.

14. Борискина, К. И. Иммуногенные свойства озвученных микробных антигенов / К.И Борискина // В сб. вопросы иммунологии и микробиологии. -Куйбышев, 1971.- С. 13-15.

15. Борискина, К.И. Озвученные микробные антигены в реакциях иммунитета. / К.И. Борискина // Вопросы иммунологии и микробиологии. -Куйбышев, 1971.-С. 8-11.

16. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов. - 2-е изд., доп. и перераб. - М.: Мед. информ. агентство, 2001. - 734 с.

17. Борисов, Л.Б. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / Л.Б. Борисов, Б.Н. Козьмин-Соколов, И.С. Фрейдлин. - М.: Медицина, 1994. - С. 201-223.

18. Бугаев, Л.В. Влияние детергентов на иммуногенную активность антигенов Neisseria meningitidis серогруппы В / Л.В. Бугаев, Е.А. Шкурина, В.И. Карабак и др. // Микробиология. - 1993. - № 2. - С. 11-15.

19. Бугин, П.И. Иммуногенные свойства озвученных микробных эмульсий в свете влияния ультразвука на антигенные структуры бактериальных клеток / П.И. Бугин, К.И. Борискина // В сб. тез. докл 1 науч. конф «Ультразвук в физиологии и медицине». - Ростов-на-Дону, 1972.- С. 1-107.

20. Валебная, Л.В. Иммунобиологические свойства возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Л.В. Валебная, Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонова с г соавт.- • // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. — Казань, 2004.-Т. 178.-С. 39-47:¡п ч„. „

21. Васильев, Д. А. Современные методы иммунодиагностики инфекционных болезней / Д.А. Васильев, П.И. Барышников, Б.В. Новиков. -Ульяновск, 1998. - С. 15 - 17.

22. Воробьев, A.A. Микробиология / A.A. Воробьев, A.C. Быков, Е.П. Пашков. - М.: - Медицина, 2003. - 329 с.

23. Воробьева, A.A. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / Под. ред. А. А. Воробьева. - М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 691 с.

24. Воробьева, A.A. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии: учебник для студ. мед. училищ / под. ред. A.A. Воробьева, Ю.С. Кривошеина. - М., 2001. - 464 с......... I -

25. Галактионов, В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. - Издательство Московского университета, 1998. - 480 с.

26. Галактионов; В. F'/Как работает иммунная система / В.Г. Галактионов // Соросовский образовательный журнал. - 1997. - Т. 12. - С. 2-9.

27. Гаффаров, Х.З. Ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, A.B. Иванов, Г.Н. Спиридонов, Л.Ш. Дуплев&и др. // Ветеринария.- 2008. - № 5. - С. 18-21.

28. Гаффаров, Х.З. Ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, Л.Ш. Дуплева, Г.Н. Спиридонов и др. // Матер, международной научно-производственной конф., посвящ. 80-летию. ФГУП "Щелковский биокомбинат". "Ветеринарная биотехнология: настоящеещ ;будущее''.^ Щелково, 2004. - С.-210-216.

29. Гаффаров, Х.З. Биологические свойства бактерий Moraxella bovis -возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонов, Л.В. Валебная, Л.Ш. Дуплева // Матер, международной научно-производственной конференции "Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе.-- С.-Петербург, 2004. - С. 24-25.

30. Гаффаров, Х.З. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, A.B. Иванов, JI.B. Валебная, Г.Н. Спиридонов и др. // Ветеринария. - 2007. - № 12. - С. 21-24.

31. Гаффаров, Х.З. Хламидийный конъюнктивит крупного рогатого скота и овец / Х.З.Гаффаров. - Хламидиозы с.-х. животных. - М.: Колос, 1984. - С. 129130.

32. Гаффаров, Х.З. Эпизоотологические и этиологические аспекты инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Х.З.Гаффаров, Д.М. Миннахметов, Г.Н. Спиридонов, Ф.Ш. Акмалов, A.B. Иванов // Матер, межд. науч. конф., посвящ. 125-летию академии. - Казань, 1998. - Ч. 1. - С. 29-31.

33. Гончаренко, '"Ä:Bü; Бейковые антигены Branhamella (moraxella) catarrhalis и neisseriameningitidis / A.B. Гончаренко, JI.H. Падюков, Т.Н. Филатова // Микробиология, эпидем. и иммунобиол. - 1998. - N 6. - С. 98-102.

34. Гончаренко, A.B. Общие эпитопы у белковых антигенов менингококков и моракселл / A.B. Гончаренко, Т.Н. Филатова, JI.H. Падюков и др. // Микробиология. - 2000. - № 5. - С. 15-19.

35. Горцевский, С.А. Морфологические изменения глаз при телязиозе крупного рогатого скота / С.А.. Горцевский // Науч. тр. Зап. Белоцерковского сельскохозяйственного института. - 1962. - Т. 3. - Вып. 1. — 4 с.

36. Дворецкий,». Б.М. I «Способ определения <//нитратредуктазы у энтеробактерий на плотной питательной среде / Б.М. Дворецкий, А.И. Блинов // Новокузнецк, 1991. - №9. С. 23-41. •• .

37. Дельвиг, A.A. Возможности использования кальций-зависимых лектиновых рецепторов антиген-презентирующих клеток для создания иммунотерапевтичеких препаратов / A.A. Дельвиг, Б.Ф. Семенов // Микробиология. - 2004. - № 1. - 7984 с.

38. Джупина, С.И. Методы эпизоотологического исследования и теория эпизоотического.процесса / С.И. Джупина. - Новосибирск: Наука, 1991. - 144 с.

39. Дише, 3. ¡Цветные реакции-углеводов / 3. Дише. - Методы химии углеводов: Пер. с англ. / Под ред. Н.К. Кочеткова. М.: Мир, 1967. - С. 20-24.

40. Дорофеев, К.А. Кератоконъюнктивит / К.А. Дорофеев // Малоизвестные заразные болезни животных. - М.: Колос, 1973. - С. 198-201.

41. Дрейд, А. И. Применение ультразвука, 2000. // www.rezonans-npk.ru.

42. Дуплева, Л.Ш. Изучение антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1 на телятах / Л.Ш. Дуплева // Матер, науч.- практ. конф. молодых ученых и специалистов "Достижения молодых ученых - в производство".- Казань, 2008.- С. 146-148.

43. Егоров, A.M. Теория .и| практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров и др. - М.: Высш. шк., 1991. - 288 с.

44. Захарова, . М.С-. .Метод получения и контроля ультразвуковых микробных дезинтегратов с высокой протективной активностью. / М.С. Захарова, Г.Н Ширко, H.A. Переверзев // Дезинтеграция микроорганизмов. -Пущино, 1972. - С. 197 -201.

45. Зубков, М.Н. Биологические особенности бактерий рода Moraxella и * их этиологическая роль влгатологии .человека /.М.Н. Зубков // Лаб. дело. - Москва, 1987.-№9.-214 с.

46. Зубков, М.Н. Биологические особенности бактерий рода Moraxella и ихь этиологическая роль в патологии человека. Сообщение И. Характеристика биохимических свойств и идентификация / М.Н. Зубков // Лаб.дело. - 1988. - № 3. -С. 15-18.

47. Зубков, М.Н. Характеристика серологических свойств бактерий рода Moraxella / М.Н. Зубков // Лаб. дело. - 1990. - № 7. - С. 64-66.

48. Иванов, A.B. Иммуноферментная диагностика инфекционного кератоконъюнктивита .крупного ¡рогатого скота / A.B. Иванов, Н. В. Саттарова, Г.Н. Спиридонов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: Матер. Междунар. науч.-практ. конф. - Краснообск, 2010. - С. 87-91.

49. Иванов, A.B. Этиология и патогенез инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / A.B. Иванов, Х.З. Гаффаров, Г.Н.

Спиридонов, JI.B. Валебная, Л.Ш. Дуплева // Ветеринарный врач. - Казань, 2005. -№ 4. - С. 22-27.

50. Ивашкин, В.М. Телязиоз крупного рогатого скота / В.М. Ивашкин, Л.А. Хромов // Ветеринария. - 1984. - № 3. - 52 с.

51. Игнатов, П.Е. Иммунитет и инфекции / П.Е. Игнатов // М.: - Время, 2002.-С. 197-207.

52. Исаенко, Е.Ю. Применение ультразвука для дезинтеграции микробных клеток. / Е.Ю. Исаенко // Annals of Mechnicov Institute. - 2008. - № 1. -C.5-9.

53. Какоулин, Т.Е. Инфекционный кератоконъюнктивит телят в Иркутской области / Т.Е. Какоулин // Сб. науч. тр. - Иркутск, 1982. - С. 73-75.

54. Калина, Г.П. Видообразующая; инволюция патогенных бактерий как биологическая закономерность (на примере бактерий рода Moraxella) / Г.П.. Калинина // Микробиолг, эпиди и иммунол. - 1988. -№ 9. - С..33-40.

55. Калинина, Г.П. Бактерии рода Moraxella. Систематика, дифференциальная диагностика, современное состояние проблемы / Г.П.> Калинина, Г.М. Трухина // Микробиол., эпид. и иммунол. - 1986. - № 10. - С. 99107.

56. Калинина, Г.П.* Бактерии, рода Moraxella. Экология / Г.П. Калинина, Г.М, Трухина // Микробиол., эпид. и иммунол. - 1987. - № 2. - С. 93-102.

57. Калинина, Г.П. Методы: обнаружения и первичной идентификации бактерий рода Moraxella в окружающей среде / Г. П. Калинина, Г. М. Трухина // Гигиена и санитария. -t.1988; - № 8. - С. 45-49.

58. Калинина, Г.П. Патогенны ли моракселлы? Проблема и ее возможные решения / Г.П. Калинина, Г.М. Трухина // Микробиол., эпид. и иммунол. - 1988. — №1.- С. 80-88.

59. Карайченцев, В.Н. Вакцина против инфекционного кератоконъюнктивит а'крупного'рогатого скота / В.Н Карайченцев // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. -Мат 8-й межд. науч.-прошв. конф.'--Белгород,.2004 — С. 76-77..

60. Карайченцев, В.Н. Выделение и идентификация возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / В.Н. Карайченцев // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения: Мат 8-й межд. науч.-произв. конф. - Белгород, 2004. - С. 54-55.

61. Карайченцев, В.Н. Диагностика инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / В.Н Карайченцев // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. - Мат. 7-й межд. науч. — произв. конф. - Белгород, 2003 - 4.1. - С; 163-164.

62. Карайченцев, В.Н. Изоляция Moraxella bovis от молодняка крупного рогатого скота при инфекционном кератоконъюнктивите / В.Н. Карайченцев, Г.В. Дунаев, А.Ф. Русинов, О.В. Бабенко // Ветеринария. - 1992. - №2. - С. 26-27.

63. Карайченцев, В.Н. Инфекционный кератоконъюнктивит крупногоч рогатого скота, вызываемый Moraxella bovis / В.Н Карайченцев // Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных. - Мат. межд. науч. конф. - Улан-Удэ, 2003 - Си .....

64. Карайченцев, В.Н. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, вызываемый Moraxella bovis и его иммунопрофилактика / В.Н. Карайченцев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. - Мат. межд. науч. -практ. конф. -Ульяновск, 2003. - С. 131-134

65. Карайченцев, В.Н. Клинические признаки инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / В.Н. Карайченцев // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. -Мат 7-й межд. науч.-прошв. конф. - Белгород, 2003. - 4 1 -С 164-165.

66. Карайченцев/-.BiH;i-Лабораторная диагностика инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / В.Н Карайченцев // Журнал «Доклады Россельхозакадемии». - 2005. - №6. - С. 51-52.

67. Карайченцев, В.Н. Профилактика инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / В.Н. Карайченцев // «Ветеринария». - 2005. -¡№ 9.1+G. 12-13. ; . •

68. Карайченцев, В.Н. Специфическая профилактика инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / В.Н. Карайченцев // Новые фармакологические средства в ветеринарии. Мат 14-й межд. науч.-практ. конф. СПб, 2002. - С. 22-24.

69. Карайченцев, В.Н. Характеристика Moraxella bovis, выделенных от крупного рогатого скота / В.Н Карайченцев // Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных. - Мат. межд. науч. конф. - Улан-Удэ, 2003 - С. 118-124.

70. Карпищенко, А.И. Медицинские лабораторные технологии: Руководство по клинической лабораторной технологии / Под ред. А.И. Карпищенко. - Изд. ГЭОТАР-Медиа. г Москва,-2012. - С. 354-370.

71. Кашкин,. К.П. Стратегия иммунолабораторных исследований в клинике инфекционных болезней: Лекция / К.П. Кашкин, В.А. Бехало // Клин. Лаб. Диагн. - 2004. - № 3. - С. 23-34.

• 72. Кишкун, A.A. Иммунологические исследования и методы диагностики инфекционных заболеваний в клинической практике / A.A. Кишкун. i -М: Медицинское информационное агентство, 2009. - 536 с.

73. Кишкун, A.A. Юшническая ■ лабораторная диагностика: учебное. пособие / A.A. Кишкун. - Изд. ГЭОТАР-Медиа. - Москва, 2010. - С. 807-809.

74. Кондратьева, И.А. Практикум > по «иммунологии. Учебное пособие для ВУЗов. / И.А. Кондратьева. - Академия, 2004. - С. 58.

75. Кудрявцев. A.A. Об оптимальном времени дезинтеграции клеток микроорганизмов / A.A. Кудрявцев // Дезинтеграция микроорганизмов. Материалы Всесоюзной конференции. - Пущино, 1972. - С. 298-304.

76. Кэтти, Д. Антитела. Методы / Пер. с англ.Под ред. Д.Кэтти. Т. 2. - М.: Мир, 1991.-384 с.

77. Лапач, С.Нл Статистические . методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / С.Н. Лапач, A.B. Губенко, П.Н. Бабич — К.Морион, 2002. - 407 с. .......

78. Ленхоффа, Г. Иммуноферментный анализ / Пер. с англ. - Под ред. Г. Ленхоффа. - М.: Мир, 1988.-446 с.

79. Лефковитс, И. Иммунологические методы исследования / И. Лефковитс, Б. Пернис. - Мир, 1988. - 528 с.

80. Луговская, H.H. Расчет титра сывороток по одному разведению при иммуноферментной диагностике инфекционного бронхита кур / H.H. Луговская, Н.С. Мудрак и др. // Проблемы инфекц. патологии с.-х. животных: тез. докл. конф., посвящ. 100-летию открытия вируса ящура. - Владимир, 1997. - С. 161.

81. Манолов, А. Твердофазные радиоиммунные методы для количественного экспресс-анализа в микробиологии / А. Манолов. - ЖМЭИ. -1985.-№4.-С. 100-107. -

82. Меньшиков, В.В. Качество лабораторных исследований и современные подходы к его оценке. Клиническая лабораторная диагностика / В.В. Меньшиков, О. Г. Кадашева // №6. - 2000. - С. 25-32.

83. Москаленко,niiE.Iilivc К..,.характеристике растворимых антигенов, выделенных методом ультразвуковой дезинтеграции / Е.П. Москаленко, H.K.« Литвинова, П. Ф. Вернигора.. i // , Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии. - 1975. - С. 5-10.

84. Мудрак, Н.С. Применение ИФА для диагностики инфекционных заболеваний ветеринарии / В.В. Дрыгин, Н.С. Мудрак // Совершенствование ветеринарной лаб.-диагност. работы в Российской. Федерации: матер. Всерос. совещания-семинара директоров ^ветеринарных лаб. субъектов РФ. — Брянск, 2004.-С. 96-97.

85. Мудрак, Н.С. г-Разработка и внедрение комплексной системы серологической диагностики болезней птиц в ИФА с компьютерным обеспечением / Н.С. Мудрак // Российский ветеринарный журн. С.-х. животные. Спец. вып., посвящ. 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». - 2008. - С. 78-80.

86. Патент РФ № 2264227 Ассоциированная вакцина для специфической профилактики инфекционного5 кёратоконъюнктивита крупного рогатого скота на

основе бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1 / Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонов, с соавт. - 24.02.2005.

87. Перцева, Т.А. Клинически значимые возбудители инфекций дыхательных путей. Конспект врача-клинициста и микробиолога. Часть 3. Гемофила. Моракселла / Т.А. Перцева, О.В. Плеханова, В.В. Дмитриченко // Юишчна ¡мунолопя. Алерголопя. 1нсектолопя. - 2007. - Т. 6, № 1. - С. 15-20.

88. Плотникова, Э.М. ИФА для индикации возбудителя бруцеллеза в материале от животных / Э.М. Плотникова, A.B. Иванов, K.M. Салмаков. - // Ветеринария. - 2009. - № 7. - С.56-58.

89. Плотникова, Э.М. Иммуноферментная тест-система для индикации бруцеллезного токсического антигена / Э.М. Плотникова, K.M. Салмаков, A.A. Иванов, А.Н. Чернов //«Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность: Матер. Междунар. научно- практ. конф., посвящ. 50-летию ФЦТРБ-ВНИВИ. - Казань, 2010. - С.455-461.

90. Прунтова, О.В. Оценка сывороток крови по одному разведению при иммуноферментной - диагностике сальмонеллеза и пастереллеза свиней / О.В. » Прунтова, Н.С. Мудрак, В.ММГйёвашев // Диагностика,-профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотич. болезнями ж-ных; Матер. Междунар,-научно-практ, конф,, посвящен, 40-летию;ВНИИВВиМ. -Покров, 1998. - С. 368369.

91. Прунтова, О.В. Применение непрямого варианта ИФА для выявления противосальмонеллезных антител в сыворотках крови птиц / О.В. Прунтова, Н.С. Мудрак и др. // Проблемы инфекционной патологии с.-х. животных. Владимир, 1997.-С. 194 —195. > >

92. Равилов, А.З. Хламидиоз животных / А.З. Равилов, Х.З. Гаффаров, Р.Х. Равилов. -Казань;;Фэй, 0041 +U14.C.»...................... ж

93. Рево, М.В. Ветеринарная микробиология / М.В. Рево, М.Д. Жукова. -М.: Сельхозгиз.- 1985.-С. 356-361... .¡¡к

- ■ 94. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Д. Бростофф, Д. Мейл. - Мир, 2000. — 328 с.

I », и I • }'f

J.

95. Русинов, А.Ф. Дифференциальная диагностика массового кератоконъюнктивита у крупного рогатого скота на животноводческих комплексах / А.Ф Русинов // Лабораторное дело. - Харьков, 1986. - С. 64-67.

96. Русинов, А.Ф. Дифференциальная диагностика массовых кератоконъюнктивитов у крупного рогатого скота / А.Ф. Русинов. - Матер, всесоюз. конф. по вопросам вет. хирургии. - Ленинград, 1967. - С. 270-276.

97. Русинов, А.Ф. Инфекционный кератоконъюнктивит у крупного рогатого скота / А.Ф Русинов // Ветеринария. - Киев, 1983. - №57. - С. 23-24.

98. Русинов, А.Ф. Инфекционный кератоконъюнктивит у крупного рогатого скота / А.Ф.Русинов // Информ. бюлл. Укр. акад. аграр. наук. Ин-т эксперим. клинич. вет. Медицины. - 1995. - С. 31-32.

99. Русинов, А.Ф. Кератоконъюнктивиты у крупного рогатого скота в условиях современных животноводческих комплексов / А.Ф Русинов // Ветеринария. - 1987/-,№62*,**.<Зп54н56^ • ' iit

100. Русинов, А.Ф. Массовые кератоконъюнктивиты у крупного рогатого скота и их диагностика. ; Совершенствование мер борьбы с болезнями* сельскохозяйственных животных. / А.Ф Русинов // Ветеринария. - Харьков, 1986. -С. 15-21.

101. Русинов, А.Ф. Массовые кератоконъюнктивиты у крупного рогатого скота и их диагностика / А.Ф. Русинов // Ветеринария. - Харьков, 1987. - С. 15-14.

102. Рэм, В.П. Иммуногены и вакцины нового поколения / В.П. Рэм. - Изд. ГЭОТАР-Медиа. - Москва, 2010. - С. 548.

103. Саттарова,.^Н.В. «Разработка набора реагентов для определения специфических антител к бактериям Moraxella bovis иммуноферментным методом / Н.В. Саттарова, Г.Н. Спиридонов, Л.В. Валебная // Веткорм. - 2010. - №6. - С. 5556.

104. Сиволодский, Е.П. Ускоренное определение бактерий, нитратредуктазы неферментирующих грамотрицательных бактерий / Е.П. Сиволодский, М.Т. Кудакаев // Лаб. дело. - Ленинград, 1991. - 36 с.

» I » ♦ Ь î i 'il i i i 'Al l\ t il I г '} » t • ' 1

/V , i .

11.25. i'aîj..

105. Сидоров, М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов: Справочник / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов. - М.: Колос, 1995. -С. 169-176.

106. Сидорчук, A.A. Инфекционный (риккетсиозный) кератоконъюнктивит (парофтальмит) / A.A. Сидорчук, A.A. Глушков // Ветеринария с.-х. животных. -2005.-№7.-С. 18-20.

107. Скоупс, Р. Методы очистки белков / Р. Скоупс. - М., «Мир», 1985. -

430 с.

108. Сова, В.В. Выделение и очистка белков. Методическое пособие по курсу «Химия и .биохимия белков и ферментов» /В.В. Сова, М.И. Кусайкин. -Методическоепособие .^практическим занятиям по очистке белков. - Изд-во Дальневост. ун-та. - Владивосток, 2006. - 42 с.

109. Соколов, Е.И. Клиническая иммунология / Е.И. Соколов. - Медицина, 1998.-234 с.

110. Сотников, Д.В. Регистрация ферментативных и иммунохимических реакций на основании изменений! акустических свойств среды. / Д.В. Сотников, О.Д. Гендриксон, с соавт. // Биотехнология будущего. Сб. статей. - Москва, 2006.-С. 87-89. - . . .

111. Спиридонов, Г.Н. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота / Г.Н. Спиридонов // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных. Труды международной научно-производственной конференции, Покров, 2008. - С.195-197.

112. Стефан, Х.Г. Наглядные инфекционные болезни и микробиология / Х.Г.Стефан, Б.Б. Кетлин;г«сПеревод.^англ.-под. ред. чл.-кор. РАМН С.Г.Пака. -Москва. - Изд. Группа «ГЭОТАР-Медиа», 2009. - С. 50 - 52.

113. Тертон, М. Новые методы иммуноанализа / М. Тертон, Д.Р. Бангхем с соавт. - Пер с англ. - М.: Мир, 1991. - 280 с.

114. Урбан, В.П. Инфекционный кератоконъюнктивит с.-х. животных / В. П. Урбан, В. К. Бобырь. - Сб. науч. тр. - Тарту, 1973. - С. 57-60.

115. Фихте, Б.А. Дезинтеграция микроорганизмов. Задачи и перспективы / Фихте, Б.А // Дезинтеграция микроорганизмов. - Пущино - на - Оке, 1972, -С. 5 -14.

116. Фомин, К.А. Инфекционный кератоконъюнктивит / К. А.Фомин // Глазные болезни животных. -М.: Колос, 1968. - С. 168-176.

117. Фомин, Ю.В. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота / Ю.В. Фомин, Н.В. Сафронская, Г.А. Иванова // Животноводство и ветеринария. Биологические основы. Проблемы ветеринарной вирусологии. — Москва, 1970. -С. 102-124.

118. Фримель, Г. Иммунологические методы / Г. Фримель. - М: Медицина, 1987.-324 с. --ми, ; ■

119. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов. - М: Медицина, 2000. - 320 с. » л. Нифонт , и

120. Хаитов, P.M. Руководство по клинической иммунологии: диагностика заболеваний иммунной системы / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, A.A. Ярилин. - Изд. ГЭОТАР-Медиа. - Москва, 2009. - С. 108-111.

121. Хисматуллина, H.A. Оптимизация условий постановки метода иммуноферментного анализа для обнаружения специфических антител к вирусу? болезни Ауески / H.A. Хисматуллина, А.Н. Чернов, Х.З. Гафарова, Ш.М. Насыров, Н.Р. Мифтахов // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность: Матер. Междунар. научно-практ. конф., посвящ. 50-летию ФЦТРБ-ВНИВИ. - Казань, 2010. - С.343-345.

122. Хисматуллина, H.A. Разработка непрямых вариантов иммуноферментного анализа для определения антигена вируса бешенства и специфических антител /H.A. Хисматуллина, Р.Х.Юсупов// Матер. Всесоюзн. конф. Львов, 1988. -.98 с.

• 123. Хисматуллина;1 nt • ¡HiAk»:!.--Разработка средств и методов иммунологического мониторинга и мер борьбы при бешенстве и лихорадке Ку животных: автореф. дисс. докт. биол. наук / H.A. Хисматуллина. Казань, 2000. -45 с.

124. Хузин, Д.А. Иммуноферментный метод определения антител к возбудителю некробактериоза /Д.А.Хузин, Е.К.Акимов, Н.А.Хисматуллина,

B.В.Сабирова// Матер, международ, конф., посвящ. 125- летию академии. -Казань,

1998. 4.1.-С. 111-112.

125. Черванев, В.А. Массовые болезни глаз у крупного рогатого скота и их диагностика / В.А. Черванев, Б. Н. Алтухов // Матер, координац. совещ. — Воронеж, 1995.-С. 186-188.

126. Шендеров, Б.А. Неферментирующие грамотрицательные бактерии / Б.А. Шкендеров, Г.П. Серкова // Микробиол., эпид. и иммунол. - 1979. -.№ 3. - С. 14-20

127. Шигина, Ю.В. Иммунология / Ю.В. Шигина. - Учебное пособие. -Издательство РИОР, 2007. - 302 с.

128. Штрауб, О.Х. Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые вирусами герпеса / О.Х. Штрауб. - Под ред. Д.Ф.Осидзе. - М.: Колос, 1981. - 207

C. • ' <«"! '¡ttHU'H ! > 1 > ■ ,. > ..........и

129. Эдельштейн, И.А. Современная классификация хламидий.. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия / И.А. Эдельштейн. -Т. 1. -№ 1.- 1999.- С. 5-11.

130. Эльце, К. Болезни молодняка с.-х. животных / К. Эльце, X. Мейер, Г.Штейнбах. - М.: Колос - 1977;- С. 96-98.

131. Ярилин, А.А. Иммунология / А.А. Ярилин. - М: Медицина, 2010. - С. 700-720. ■

132. Ярилин, А. А. Основы иммунологии / А. А. Ярилин. - М: Медицина,

1999.-С. 315-357.

133. Abinanti, F.R. The isolation of infectious bovine rhinotracheitis virus from cattle affected with conjunctivitis- observations on the experimental infection / F.R. Abinanti, G.J. Plummer // Am. J. Vet. Res. - 1961. - V.22. P. 13-17.

134. Aleixo, J.A. Generation of monoclonal antibodies against surface antigens of Moraxella bovis / J. A. Aleixo,И.С.' Barbosa, C. Gil-Turnes I I Hybridoma. - 1991. -V.10(5).-P. 625-31. . ,

135. Allen, J.A preliminary note on infectious keratitis / J.Allen // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1919-V.54. - P. 307-313.

136. Ambagala, T. Thé leukotoxin of Pasteurella haemolytica binds to beta(2) integrins on bovine leukocytes / T.Ambagala, A.P. Ambagala // FEMS Microbiol. Lett. - 1999.- V. 179.-P. 161-167.

137. Angelos, J. A Recombinant Moraxella bovoculi cytotoxin-ISCOM matrix adjuvanted vaccine to prevent naturally occurring infectious bovine keratoconjunctivitis / J.A. Angelos, V.M. Lane, L.M. Ball, J.F. Hess // Vet. Res. Commun. - 2010. - V. 34(3).-P. 229-239.

138. Angelos, J.A. An RTX operon in hemolytic Moraxella bovis is absent from nonhemolytic strains / J.A. Angelos, J.F. Hess, L.W. George // Vet. Microbiol. - 2003. -V. 92. P. 363 - 377. ..1.1 nc leukuu, »...................

139. Angelos, J.A. Cloning and characterization of a Moraxella bovis cytotoxin gene / J.A. Angelos, J.F. Hess, L.W. George // Am. J. Vet. Res. - 2001. - V. 62. - P. 1222-1228.

140. Angelos, J.A.. Identification and characterization of complete RTX opérons. in Moraxella bovoculi and Moraxella'ovis / J.A. Angelos, L. M. Ball, J. F. Hess // Vet. Microbiol. - 2007a. - V. 125. - P. 73 - 79.

141. Angelos, J.A. Moraxella* bovoculi sp. nov., isolated from calves with infectious bovine. keratoconjunctivitis / J.A. Angelos, P.Q. Spinks, L.M. Ball, L.W. George // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. - 2007c. - V. 57. P. 789 - 795.

142. Angelos, J.A. Prevention of naturally occurring infectious bovine keratoconjunctivitis with a recombinant Moraxella bovis pilin - Moraxella bovis cytotoxin - ISCOM matrix adjuvanted vaccine / J.A. Angelos, R.G. Bonifacio, L.M. Ball, J.F. Hess II Vet. Microbiol. - 2007b. - V. 125. - P. 274 - 283.

143. Angelos, J.A. ' 'Prevention of ' naturally occurring infectious bovine keratoconjunctivitis with a recombinant Moraxella bovis cytotoxin - ISCOM matrix adjuvanted vaccine / J.A. Angelos, J:F. Hess, L.W. George // Vaccine. - 2004. - V. 23. P. 537-545.

144. Angelos, J.A. Relatedness of cytotoxins from geographically diverse isolates of Moraxella bovis / J.A. Angelos, L.M. Ball // Vet. Microbiol. - 2007c. - V. 124.-P. 382-386.

145. Angelos, J.A. Differentiation of Moraxella bovoculi sp. nov. from other coccoid moraxellae by the use of polymerase chain reaction and restriction endonuclease analysis of amplified DNA / J.A. Angelos, L.M. Ball // J. Vet. Diagn. Invest. - 2007a. - V. 19. P. 532 - 534 .

146. Annuar, B.O. Adherence of Moraxella bovis to cell cultures of bovine origin / B.O. Annuar, G.E. Wilcox // Res. Vet. Sei. - 1985. - V. 39. - P. 241 - 246.

147. Arends, J.J. Transmission of Moraxella bovis from blood agar cultures to Hereford cattle by face flies (Diptera: .Muscidae ) /.J.J. Arends, E.E. Wright, P.B. Barto, K.S. Lusby // J. Econ. Entomol. - 1984. - V. 77. - P. 394 - 398.

148. Arutyunova, E.1 Crystal structure of the N-lobe of lactoferrin binding protein B from Moraxella' bovis 7 E?¡Arutyunova, C.L. Brooks, A. Beddek, et al. II, Biochem Cell Biol. 2012. -V. 90(3). -P. 51-61.

149. Atwell, J.L. Characterization of pilin genes from seven serologically^ defined prototype strains of Moraxella bovis II J.L. Atwell, J.M. Tennent, A.W. Lepper , T.C. Elleman // J. Bacteriol. ~ 1994.- V.176. - P. 4875 - 4882.

150. Axenfeld, T. Uber die chronishe Diplobacillen conjunctivitis / T.Axenfeld //Zentralbl. f. Bakt.- 1897. - V. 21.-P. 1-9.

151. Beard, M.K. Reproduction of bovine keratoconjunctivitis with a purified haemolytic and cytotoxic fraction of Moraxella bovis / M.K. Beard, L.J. Moore // Vet. Microbiol. - 1994. - V.42; ^Bnl.5/-i33.....................•

152. Billings, F.S. Keratitis Contagiosa in Cattle / F.S.Billings // Agr. Exp. Sta. Nebr. - 1899. - V. 10.-P. 112-116.

153. Billson, F.M. A haemolytic cell - free preparation of Moraxella bovis confers protection against infectious bovine keratoconjunctivitis / F.M. Billson, J.L. Hodgson, J.R. Egerton, A.W. Lepper,.W.P. Michalski, C.L. Schwartzkoff//Microbiol. Lett. - 1994. - V. 124. - P. 69 - 74.

•- K ■ .-'I' hi i) i ;/<)'»'! ' I • ' >

154. Billson, F.M. Characterization of hemolysin of Moraxella bovis using a hemolysis - neutralizing monoclonal antibody / F.M. Billson, C.Harbour, W.P. Michalski, et al. // Infect. Immun. - 2000. - V. 68. - P. 3469 - 3474.

155. Bishop, B. Enzyme - linked immunosorbent assay for measurement of anti

- Moraxella bovis antibodies / B. Bishop, G.G. Schurig , H.F. Troutt // Am. J. Vet. Res.

- 1982. -V. 43. - P. 1443 - 1445.

156. Bosch, A. Type-IV pili spectroscopic markers: applications in the quantification of piliation levels in Moraxella bovis cells by a FT-IR ANN-based model / A. Bosch, C. Prieto, D.O. Serra et al. // J.Biophotonics. 2010. - V. 3(8-9). - P. 52233.

157. Bovre, K. The; ¡Taxonomy of the Genera Moraxella and Neisseria / K. Bovre, S.D. Henriksen//J. Microbiology-sgm - 1968. - V. 51. - P. 387-392.

158. Burns, M. J. Assessment of methodological quality and sources of variation in the magnitude of vaccine efficacy: a systematic review of studies from 1960 to 2005 reporting immunization with Moraxella bovis vaccines in young cattle / M.J. Burns, A.M. O'Connor // Vaccine1.'2008y- V:il0;26(2). - P/144-52. <• "

159. Cerny, H.E. Effects of Moraxella (Branhamella) ovis culture filtrates on bovine erythrocytes, peripheral mononuclear cells, and corneal epithelial cells / H.E;. Cerny, D.G. Rogers, J.T. Gray, D.R. Smith, S. Hinkley // J. Clin. Microbiol. - 2006. -V. 44.-P. 772-776. —

160. Clinkenbeard, K.D Mechanism of action of Moraxella bovis hemolysin / K.D. Clinkenbeard, A.E. Thiessen // Infect. Immun. - 1991. - V. 59. P. 1148 - 1152.

161. Conceifäo, F.R. Antigenic relationships of Moraxella bovis bisolates recovered from outbreaks of infectious bovine keratoconjunctivitis in Argentina, Brazil, and Uruguay between .1.983.änd:2000./F,R. Conceifäo, F. Paolicchi, A.L. Cobo, C. Gil-Turnes // J. Can Vet Res. - 2003. - V. 67(4). - P. 315-8.

162. Du, R.P. Cloning and expression »of; the Moraxella catarrhalis lactoferrin receptor genes / R.P. Du, Q.Wang, Y.P. Yang, A.B. Schryvers, P. Chong, M.H. Klein // Infect. Immun. - 1998. - V. 66. - P. 3656 - 3665.

163. Farn, J.L. Molecular characterization of a secreted enzyme with phospholipase B activity from Moraxella bovis / J.L. Farn, R.A. Strugnell, P.A. Hoyne, W.P. Michalski, J.M. Tennent // J. Bacteriol. - 2001. - V. 183. - P. 6717 - 6720.

164. Fenwick, B. Iron repressible outer membrane proteins of Moraxella bovis and demonstration of siderophore - like activity / B. Fenwick, M. Rider, J. Liang, A. Brightman // Vet. Microbiol. - 1996. - V. 48. - P. 315 - 324.

165. Frank, S.K. Hydrolytic enzymes of Moraxella bovis / S.K. Frank, J.D. Gerber II J. Clin. Microbiol. - V. 13. - P. 269 - 271.

166. Galväo, K.N. Ulcerative blepharitis and conjunctivitis in adult dairy cows and association with Moraxella bovoculi / N.K. Galväo, J.A. Angelos // Can Vet J. -2010. - V.51(4). - P. 400-402.

167. George, M.G. Bergey's manual of systematic bacteriology / M.G. George. -2001, USA. -V. 2. -P. 4H»-425t^sii)!-........ .......

168. George, L.W Enhancement of infectious bovine keratoconjunctivitis by modified - live infectious bovine • rhinotracheitis virus vaccine / George, L.W., A. Ardans, J. Mihalyi, M.R. Guerra // Am. J. Vet. Res. - 1988. - V. 49. - P. 1800 - 1806. ,,

169. George, L.W. Effectiveness of a cytolysin - enriched vaccine for protection of cattle against infectious bovine keratoconjunctivitis / George, L.W., A.J. Borrowman,* J.A. Angelos // Am. J. Vet. Res. - 2005. - V. 66. - P. 136 - 142.

170. George, L.W. Stability, antigenicity, and aggregation of Moraxella bovis cytolysin after purification and storage / L.W. George, J.A. Angelos, W.W. Ruehl // Am. J. Vet. Res. - 2004. r- VJ 6S^.P. 977 - 983.

171. Gerber, J.D. 1988. Immunogenicity of a Moraxella bovis bacterin containing attachment and cornea - degrading enzyme antigens / J.D. Gerber, N.L. Selzer, R.L. Sharpee, W.H. Beckenhauer // Vet. Immunol. Immunopathol. - 1988. - V. 18.— P. 41 -52.

172. Gerhardt, R.R. 1982 The . role of face flies in an episode of infectious bovine keratoconjunctivitis / R.R..Gerhardt, J.W. Allen, W.H. Greene, P.C. Smith // J. Am. Vet. Med. - 1982. - V. 180. - P. 156^ 159.

v, or

173. Glass, H.W. Survival ot Moraxella bovis in the alimentary tract of the face fly / R.R. Glass, R.R. Gerhardt, W.H. Greene // J. Econ. Entomol. - 1982. - V. 75. - P. 545 - 546.

174. Gray, J.T. Partial characterization of a Moraxella bovis cytolysin // J.T. Gray, P.J. Fedorka - Cray, D.G. Rogers // Vet. Microbiol. - 1995. - V. 43. - P. 183 -196.

175. Greene, W.H. Detection of shared antigenic determinants on whole Moraxella bovis pili by use of antisera to cyanogen bromide - cleaved M. bovis pilus protein / W.H. Greene, S.T. Grubbs, L.N. Potgieter // Am. J. Vet. Res. - 2001a. - V. 62. -P. 1279-1284. т.-... ■

176. Greene, W.H. Immunoblot analysis of cyanogen bromide-cleaved Moraxella bovis pilin reveals presence of shared antigenic determinants on pili from heterologous strains / W.H. Greene, S.T. Grubbs, L.N. Potgieter //. Vet. Microbiol. -2001b.-V. 80.-P. 365-372.

177. Hauduroy, R. Dictionnare des Bacteries Pathogenes / P.Hauduroy, G.Ehringer, A. Urbain, G. Guillot, J. Magrou // C. Masson. Paris. - 1937. - P. 247. i

178. Heinrich, D.W. Transcriptional regulation of type 4 pilin genes and the site

- specific recombinase gene, piv , in Moraxella lacunata and Moraxella bovis / D.W.; Heinrich, A.C. Glasgow II J. Bacterid. - 1997. - V. 179. - P. 7298 - 7305.

179. Hess, J.F. The Moraxella bovis RTX toxin locus mbx defines a pathogenicity island / J.F. Hess, J.A. Angelos // J. Med. Microbiol. - 2006. - V. 55. - P. 443-449. . • • ii' ■

180. Hoien-Dalen, P.S. Comparative characterization of the leukocidic and hemolytic activity of Moraxella bov.is^/ P.S. Hoien-Dalen, R.F. Rpsenbusch, J.A. Roth // Am. J. Vet. Res. - 1990. - V. 51. - P. 191 - 196.

181. Holt, J.G. Bergey's "Manual of Determinative Bacteriology" / J.G.Holt, N.R.Krieg, P.H.A.Sneath, J.T.Staley, S.T.Williams. - Williams and Wilkins Co. -Перев. с англ. под ред. акад. РАН Г.А.Заварзина. - М.: Мир. - 9-е изд. - 1997 - Т. 1.-С.94 ' ■ ^,'v/.'. ' •

182. Hughes, D.E. Effects of vaccination with a Moraxella bovis bacterin on the subsequent development of signs of corneal disease and infection with M. bovis in calves under natural environmental conditions // D.E. Hughes, G.W. Pugh, R.H. Kohlmeier, G.D. Booth, B.W. Knapp // Am. J. Vet. Res. - 1976 - V. 37. - P. 1291 -1305.

183. Hughes, D.E. Experimental bovine infectious keratoconjunctivitis caused by sunlamp irradiation and Moraxella bovis infection: resistance to exposure with homologous and heterologous Moraxella bovis / D.E. Hughes, G.W. Pugh, T.J. McDonald // Am. J. Vet. Res. - 1968. - V. 29. - P. 829 - 833.

184. Hughes, D.E. - Experimentally. induced bovine infectious keratoconjunctivitis: effectiveness of intramuscular vaccination with viable Moraxella bovis culture / D.E. Hughes, G.W.,Pugh // Am. J. Vet. Res. - 1971. - V. 32. - P. 879 -886.

185. Hughes, D.E. Experimentally induced infectious bovine keratoconjunctivitis: vaccination with nonviable Moraxella bovis culture / D.E. Hughes, G.W. Pugh // J. Am.Vet. Res. - 1972. - V. 33. - P. 2475 - 2479.

186. Hughes, D.E;»Isolations/and.description of a Moraxella from horses with conjunctivitis / D.E. Hughes, G.W. Pugh // Am. J. Vet. Res. - 1970. - V. 31. - P. 457 462. . -. . .

187. Hughes, D.E. Ultraviolet radiation and Moraxella bovis in the etiology of bovine infectious keratoconjunctivitis / D.E. Hughes, G.W. Pugh, T.J. McDonald // Am. J. Vet. Res. - 1965. - V. 26. - P. 1331 - 1338.

188. Issartel, J.P. Activation of Escherichia coli prohaemolysin to the mature toxin by acyl carrier protein - dependent fatty acylation / J.P. Issartel, V. Koronakis, C. Hughes // J. Nature. -1991. - V. 351. - P. 759 - 761.

189. Jannes, G. Polyphasio taxonomy leading to the proposal of Moraxella canis sp. nov. for Moraxella catarrhalis - like strains / G. Jannes, M. Vaneechoutte, M. Lannoo, M. Gillis, M. Vancanneyt, P. Vandamme // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1993. - V. 43.-P. 438-449.

190. Jayappa, H.G. Pathogenicity and immunogenicity of piliated and nonpiliated phases of Moraxella bovis in calves / H.G. Jayappa, C. Lehr // Am. J. Vet. Res. - 1986. - V. 47. - P. 2217 - 2221.

191. Jones, F.S. An Infectious Ophthalmia of Cattle / F.S.Jones, R.B.Little // J. Exp. Med. - 1923.-V. 38.-P. 139-148.

192. Kagonyera, G.M. Cytopathic effects of Moraxella bovis on cultured bovine neutrophils and corneal epithelial cells / G.M. Kagonyera, L.W. George, R. Munn // Am. J. Vet. Res. - 1989b. - V. 50. - 10 - 17.

193. Kagonyera, G.M. Effects of Moraxella bovis and culture filtrates on 51 Cr -labeled bovine neutrophils / G.M.!Kagonyera, L. George, M. Miller // Am. J. Vet. Res. -1989a.-V. 50.-P. 18-21.

194. Kakuda, T. Cloning and: characterization of the fur gene from Moraxella bovis / T. Kakuda, D. Oishi, S. Tsubaki, S. Takai // J. Microbiol. Immunol. - 2003a. -V. 47.-P. 411-417. : .

195. Kakuda, T. Filamentous-haemagglutinin-like protein genes encoded on a plasmid of Moraxella bovis / T. Kakuda, N. Sarataphan, T. Tanaka et al. // Vet.' Microbiol. 2006. -V. 26; 118(1-2). - P. 141-7.

196. Kakuda, T. Molecular cloning and characterization of a 79 - kDa iron repressible outer - membrane ^protein-oiMoraxella bovis / TV Kakuda, D. Oishi, S. Tsubaki, S. Takai // FEMS Microbiol. Lett. - 2003b. V. 225. - P. 279 - 284.

197. Killinger, A.H. Detection of Moraxella bovis antibodies in the SIgA, IgG, and IgM classes of immunoglobulin in bovine lacrimal secretions by an indirect fluorescent antibody test // A.H. Killinger, R.M. Weisiger, L.C. Helper, M.E. Mansfield // Am. J. Vet. Res. - 1978. - V. 39. - P. 931 - 934.

198. Klibs, N. Ulcerative blepharitis and conjunctivitis in adult dairy cows and association with Moraxella bovoculi / N.G: Klibs, J.A. Angelos // J. Can. Vet. - 2010. -V. 51.(4). P. 400-402 ' . ..

199. Kodjo, A. Identification .of Moraxella bovis and related species from calves with IBK and goats by qualitative genetic transformation assay / A. Kodjo, P. Exbrayat, Y. Richard // Zentralbl. Veterinarmed: - 1994. - V. 41. - P. 336 - 343.

200. Kodjo, A. Moraxella boevrei sp. nov., a new Moraxella species found in goats / A. Kodjo, Y. Richard, T. Tonjum // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1997. - V. 47. - P. 115-121.

201. Kodjo, A. Moraxella caprae sp. nov., a new member of the classical Moraxellae with very close affinity to Moraxella bovis / A. Kodjo, T. Tonjum, Y. Richard, K. Bovre // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1995. - V. 45. - P. 467 - 471.

202. Koronakis, V. The HlyB/HlyD - dependent secretion of toxins by gram -negative bacteria / V. Koronakis, P. Stanley, E. Koronakis, C. Hughes // FEMS Microbiol. Immunol. - 1992. - V. 5. - P. 45 - 53.

203. Kruger, E.F. Bovine monocytes induce immunoglobulin production in peripheral blood B lymphocytes / E.F. Kruger, B.L. Boyd, L.M. Pinchuk // Dev. Comp. Immunol. - 2003. -V. 27. - 889-97.

204. Kyd, J.M. Outer-membrane antigen expression by Moraxella (Branhamella) catarrhalis/'influences pulmonary clearance / J.M. Kyd, A.W. Cripps, T.F. Murphy // J. Med Microbiol. - 1998. - V. 47(2). - P. 159-68.

205. Lally, E.T. RTXt-toxins, recognize a ß 2 integrin on the surface of human"41 target cells / E.T. Lally, R. Kieba, A. Sato, C. L. Green, J. Rosenbloom, J. Korostoff // J. Biol. Chem. - 1997. - V. 272. - P. 30463 - 30469.

206. Lane, V.M. Efficacy of tulathromycin for treatment of cattle with acute ocular Moraxella bovis infections / V.M. Lane, L.W. George, D.M. Cleaver // J. Am. Vet. Med Assoc. 2006. - V. 15;229(4). - P. 557-61.

207. Langford, E.V.Characterization of a mycoplasma isolated from infectious bovine reratoconjunctivitis: M.bovoculi sp. nov./ E.V Langford., Leach R.H. - Canad. J. Microbiol., 1973. - V.. 19. - P. 1435-1444.

208. Langford, B.V.' Atmycoplasma isolated from cattle with infectious bovine keratoconjunctivitis / E.V. Langford, W.J. Dorward // Can. J. Comp. Med. - 1969. - V. 33.-P. 275-279.

209. Lepper, A.W. Characterisation and quantitation of pilus antigens of Moraxella bovis by ELISA / A.W. Lepper, L.R. Hermans // J. Aust. Vet. - 1986. - V.

63. - P. 401 —405. V !v'?n>(.|, . .

210. Lepper, A.W. Infectious bovine keratoconjunctivitis: seasonal variation in cultural, biochemical and immunoreactive properties of Moraxella bovis isolated from the eyes of cattle / A.W. Lepper, I.J. Barton // Aust. Vet. J. 1987. - V.64. - P. 33 - 39.

211. Lepper, A.W. The protective efficacy of cloned Moraxell bovis pili in monovalent and multivalent vaccine formulations against experimentally induced infectious bovine keratoconjunctivitis (IBK) / A.W. Lepper, J.L. Atwell, P.R. Lehrbach, C.L. Schwartzkoff, J.R. Egerton, J.M. Tennent // Vet. Microbiol. - 1995. - V. 45. - P. 129-138.

212. Li, J. Bovine CD 18 identified as a species specific receptor for Pasteurella haemolytica leukotoxin / J. Li, K.D. Clinkenbeard, J.W. Ritchey // Vet. Microbiol. -1999.-V. 67. P. 91-97.

213. Linhartov, I. RTX-proteins: a highly diverse family secreted by a common mechanism / I. Linhartov, Bi^Ladislav // FEMS Microbiol. Rev. - 2010. V. 34. - P. 1076-1112.

214. Liu, G.L. Specific immune-, milk production of cows implanted with antigen-release devices / G.L. Liu, J.Q. Wang, D.P. Bu et al. // J. Dairy Sei. - 2009. -■> V. 92(1).-P. 100-8.

215. Lwoff, A. Revision et1 Dismemberment des Haemophilus le Genge Moraxella Nov. Gen. / A. Lwoff// Ann. Inst. Pasteur. - 1939. - № 62. - P. 168-176.

216. Marrion, R.M. Detection of cell detachment activity induced by Moraxella bovis / R.M. Marrion,> L.K. Riley // Am. J. Vet. Res. - 2000. - V. 61. - P. 1145 - 1149.

217. Marrs, C.Fv Pilin n gene, phase variation of Moraxella bovis is caused by an inversion of the pilin genes / C.F Marrs, W.W. Ruehl, G.K. Schoolnik, S. Falkow // J. Bacteriol. 1988. - V. 170. - P. 3032 - 3039.

218. McConnel, C.S. Serologic cross-reactivity of Australian Moraxella bovis to vaccinal bacterin trains as determined by competitive ELISA / C.S McConnel, L. Shum, B.L. Gleeson, J.K. House'//J.; Aust. Vet: 2008. - V.86. - P. 124'- 129.

219. Mohanty, S.B. Relationship of infectious bovine keratoconjunctivitis virus to the virus of infectious bovine rhinotracheitis / S:B. Mohanty, M.G. Lillie // Cornell Vet. 1970.-V. 60.-P. 3-9.

220. Moore, L.J. A unified serotyping scheme for Moraxella bovis / L.J Moore, A.W. Lepper // Vet. Microbiol. 1991. - V. 29. - P. 75 - 83.

221. Morax, U. Note sur un diplobacille pathogene pour la conjunctive humane / U.Morax // Ann. Inst. Pasteur. - 1896. - № 10. - P. 337-345.

222. Morgenthau, A. The role of lactoferrin binding protein B in mediating protection against human lactoferricin / A. Morgenthau, M. Livingstone, et al. // Biochem. Cell. Biol. 2012. - V. 90(3). - P. 417-23.

223. Nakazawa, M. Fibrinolytic activity of Moraxella bovis / M. Nakazawa, H. Nemoto // Nip. Juig. Zas. 1979a. - V. 41. - P. 541 - 543.

224. Nakazawaj M. Hemolytic-activity öf Moraxella bovis / M. Nakazawa, H. Nemoto // Nip. Juig. Zas. 1979b. - V. 41. - P. 363 - 367.

225. Nayar, P.S. Infectious bovine keratoconjunctivitis II. Antibodies in lacrimal secretions of cattle naturally or experimentally infected with Moraxella bovis / P.S. Nayar, J.R. Saunders // Can. J. .Comp. Med. 1975. - V. 39. P.- 32 - 40.

226. Neiland, J.B. Siderophore: structure and function of microbial iron transport compounds / J.B. Neiland // J. Biol. Chem. - 1995. - P. 26723-26726

227. O'Connor, A.M. A randomized clinical trial evaluating a farm-of-origin autogenous Moraxella bovis vaccine to control infectious bovine keratoconjunctivis (pinkeye) in beef cattle A A.Mv O'Connor, S. Brace,- S. Gould et-al. // J Vet Intern Med. 2011.-V. 25(6).-P. 1447-53.

228. O'Connor, A.M. Descriptive epidemiology of Moraxella bovis, Moraxella bovoculi and Moraxella ovis in beef calves with naturally occurring infectious bovine keratoconjunctivitis (Pinkeye) / A.M. O'Connor, H.G. Shen, C. Wang et al. // Ve.t Microbiol. 2012. - V. 23; 155(2-4). - Pi 74-80.

229. Osipiuk, J. Crystal structure of MboIIA methyltransferase / J. Osipiuk, M. A. Walsh, A. Joachimiak //Nuc. Acids Res.'-2003. -V. 15-31(18). - P. 5440-5448.

230. Ostle, A.G. Immunogenicity of Moraxella bovis hemolysin / A.G. Ostle, R. F. Rosenbusch // Am. J.Vet.\Res;ü985wT, V. 46. t-.P.JOI 1-1014.

231. Patel, P. Shared antigenicity and immunogenicity of type 4 pilins expressed by Pseudomonas aeruginosa, Moraxella bovis,'Neisseria gonorrhoaea, Dichelobacter

nodosus, and Vibrio cholera II P. Patel, C.F. Marrs, J.S. Mattick, et. all // Infect. Immun. 1991. - V. 59. - P. 4674 - 4676.

232. Pedersen, K.B. The origin of immunoglobulin - G in bovine tears / K.B. Pedersen // Acta Pathol. Microbiol. Immunol. 1973. - V. 81. - P. 245 - 252.

233. Pettersson, B. Phylogeny of the family Moraxellaceae by 16S rDNA sequence analysis, with special emphasis on differentiation of Moraxella species / B. Pettersson, B. Kodjo, A. Ronaghi // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1998. - V. 48. - P. 75-89

234. Postma, G.C. Moraxella bovis pathogenicity: an update / G.C. Postma, J.C. Carfagnini, L. Minatel // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2008. - V. 31(6). P. 449-58.

235. Prieto, C.I. Whole-bacterial cell enzyme-linked immunosorbent assay for cell-bound Moraxella bovis pili // C.I. Prieto, M.E. Rodriguez, A. Bosch, et al. // Vet. Microbiol. 2003. - V. 91. - P. 157 - 168.

236. Prieto, C.I. Vaccine against infectious bovine keratoconjunctivitis: a new approach to optimize the production of highly piliated Moraxella bovis cells / C.I. Prieto, A. Bosch et al // Vaccine;-2008.i-V. 2;26(51). - P. 6542-9.

237. Pugh, G.W. Bovine infectious keratoconjunctivitis: carrier state of Moraxella bovis and the development ¡of preventive measures against disease / G.W. Pugh, D.E. Hughes//J. Am. Vet. Med. Assoc. 1975.-V. 167.-P. 310-313.

238. Pugh, G.W. -; Bovine infectious keratoconjunctivitis: interactions of Moraxella bovis and infectious bovine rhinotracheitis virus / G.W. Pugh, D.E. Hughes, R.A. Packer // Am. J. Vet. Res. 1970. - V. 31. - P. 653 - 662.

239. Pugh, G.W. Experimental bovine infectious keratoconjunctivitis caused by sunlamp irradiation and Moraxella bovis infection: correlation of hemolytic ability and pathogenicity / G.W. Pugh,iDjE. .Hughes I I Am.. J. .Vet.. Res. 1968. - V. 29. - P. 835 -839.

240. Pugh, G.W. Experimentally induced infections bovine keratoconjunctivitis: effectiveness of a pilus vaccine against exposure to homologous strains of Moraxella bovis I I G.W. Pugh, D.E. Hughes, G.D. Booth // Am. J. Vet. Res. 1977. - V. 38. - P. 1519-1522. ! .

241. Pugh, G.W. Identification of bovine carriers of Moraxella bovis by comparative cultural - examinations of ocular and nasal secretions / G.W Pugh, T.J. McDonald // Am. J. Vet. Res. 1986. - V. 47. - P. 2343 - 2345.

242. Pugh, G.W. Infectious bovine keratoconjunctivitis: experimental induction of infection in calves with mycoplasmas and Moraxella bovis / G.W. Pugh, D.E. Hughes, V D. Schulz // Am. J. Vet. Res. 1976. - V. 37. - P. 493 - 495.

243. Pugh, G.W. Isolation of Moraxella bovis ribosomes and their subsequent use in a vaccine gainst infectious bovine keratoconjunctivitis / G.W. Pugh, M. Phillips et al. // Vet. Res. 1981. - V. 42. - P. 516 - 520.

244. Rebnun, W.C. An outbreak of the conjunctival form of infectious bovine rhinotracheitis / W.C. Rebnun, J.S. Smith, J.E. Post // Cornell, vet. 1978. - V. 68. - P. 297-307.

245. Rogers, D.Gj i - Conjunctival lesions • caused by * Moraxella bovis in gnotobiotic calves / D.G. Rogers, N.F. Cheville, G.W. Pugh // Vet. Pathol. 1987a. - V. 24.-P. 554-559.

246. Rogers, D. Pathogenesis of corneal lesions caused by Moraxella bovis in . gnotobiotic calves / D. Rogers, N.F. Cheville, G.W. Pugh // Vet. Pathol. - 1987b. - V. 24.-P. 287-295. '

247. Rossau, R. Taxonomy of Moraxellaceae fam. nov., a new bacterial family to accommodate the genera Moraxella; Acinetobacter and Psychrobacter and related organisms / R. Rossau, A. Van Landschoot et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1991. - V. 41. -P.310-319. •

248. Ruehl, W.W. Infection rates, disease frequency, pilin gene rearrangement, and pilin expression in calves inoculated with Moraxella bovis pilin - specific isogenic variants / W.W. Ruehl, C. Marrs, L. George et al. // Am. J. Vet. Res. 1993b. - V. 54. -P. 248-253.

249. Ruehl, W.W. Purification, characterization, and pathogenicity of Moraxella bovis pili / W.W. Ruehl, C. Marrs, et al. // J. Exp. Med. 1988. - V. 168. - P. 983 - 1002.

250. Ruehl, W.W. Q pili enhance the attachment of Moraxella bovis to bovine corneas in vitro / W. W. Ruehl, C. Marrs, et al. // Mol. Microbiol. 1993a. - V. 7. - P. 285-288.

251. Ruoslahti, E. RGD and other recognition sequences for integrins / E. Ruoslahti // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1996. - V. 12. - P. 697 - 715.

252. Schöttker-Wegner, H. H. Detection of mycoplasmas in eye swab specimens of cattle / H.H. Schöttker-Wegner , A. Binder, H. Kirchhoff / Zentralbl Veterinarmed. -1990.- V. 37(6). P. 436-41.

253. Shen, H.G. Development and evaluation of a multiplex real-time PCR assay for the detection and'differentiation of Moraxella bovis,'Moraxella bovoculi and Moraxella ovis in pure culture isolates and lacrimal swabs collected from conventionally raised cattle / H.G., Shen, S. Gould, J. Kinyon et al. // J. Appl. Microbiol. 2011.-V. 111(5).— P. 1037-43.

254. Shiell, B.J. Expression, purification and characterization of recombinant phospholipase B from Moraxella bovis with anomalous electrophoretic behavior / B.J. Shiell, M. Tachedjian, K. Bruce, et al. // Protein Expr. Purif. 2007. - V. 55. P. 262 -272.

255. Simpson, C.F. The structure of pili (fimbriae) of Moraxella bovis / C.F. Simpson, F.H White, T.S>'Sandhu-//iCamJ.< Comp. Med. 1976. ->V. 40. P. 1 -4.

256. Smith, P.C. Antibodies related to resistance in bovine pinkeye / P.C. Smith, W.H. Greene, J.W. Allen // Calif. Vet. 1989. - V. 43. - P. 9 - 10.

257. Snyder, D.B. Rapid serological profiling by enzyme linked immunosorbent assay. I. Measurement of antibody activity titer against Newcastle disease virus in a single serum dilution / D.B. Snyder, W.W. Marquardt, E. T. Mallinson // Avian dis. 1983.-V. 27. P. 161-170.

258. Sosa, V. Molecular and phenotypic analysis of Moraxella spp. associated with infectious bovine keratoconjunctivitis in Uruguay / V. Sosa, P. Zunino // Vet. J. 2012.-V. 193(2).- P. 595r7üiim< „ v

r J v

. 259. Stanley, P. Fattyacylation of two internal lysine residues required for the toxic activity of Escherichia coli hemolysin / P. Stanley, L. C. Packman, V. Koronakis, C. Hughes // Science. 1994. - V. 266. - P. 1992 - 1996.

260. Steve, P.C. Investigations on transmissability of Moraxella bovis by the face fly / P. C. Steve, J. H. Lilly // J. Econ. Entomol. 1965. - V. 58. - P. 444 - 446.

261. Straub, O.C. Die Differenzierung des Virus der Rhinotracheitis (IBR) vom Virus des Bläschenausschlager (IPV) durch trägerfrei Virus-Zonen-elektrophorese in einem Glukose-Dichtegradienten / O.C. Straub, H.D. Matheka, K. Strohmaier // Zbl. Vet. Bull. - 1964. - V. 11. - P. 565-571.

262. Sykes, J.A. Isolation of a virus from infectious bovine keratoconjunctivitis / J.A. Sykes, L. Kmochowski, C.E. Grey et al. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1962. - V. 111. -P. 51 -57. ' 1

263. Thompson, S.A. Neisseria meningitidis produces iron-regulated proteins related to the RTX family of exoproteins / S.A. Thompson, L.L. Wang, A. West, P.F. Sparling//J.Bacterid. 1993.-V. 175.-P. 811-818.

264. Travnicer, Mii Isolation of-Chlamydia psittaci anMoraxella bovis from -infectious keratoconjunctivitis in lambs / M. Travnicer, T. Dravecky, J. Balascak // Vet. Med. Praha. - 1982, N 27, p. 491-496.

265. Vandergaast, N. Infectious bovine keratoconjunctivitis epizootic associated with area-wide emergence of a new Moraxella bovis pilus type / N. Vandergaast, R.F. Rosenbusch // Am. J. Vet. Res. 1989. - V. 50. - P. 1437 - 1441.

266. Vogelweid, C.M. Scanning electron microscopy of bovine corneas irradiated with sun lamps and challenge exposed with Moraxella bovis / C.M. Vogelweid, R.B. Miller, J.N. Berg, D.A. Kinden // Am. J. Vet. Res. 1986. - V. 47. - P. 378-384. >!. .....

267. Wandersman, C. Tol C an Escherichia coli outer membrane protein required for hemolysin secretion / C. Wandersman, P. Delepelaire // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1990. - V. 87. - P. 4776 - 4780.

268. Warburg, O. . Christian W. Isolierung und Kristallisation des Garugsterments Enolase // Brochfeiit) J. -M941. - Vol. 310. - P; 384-421.

269. Ward, J.K. Pinkeye (bovine infectious keratoconjunctivitis) in beef cattle / J.K. Ward, M.K. Neilson // J. Anim. Sei. 1979. - V. 49. - P. 361 - 366.

270. Wehr, J. Untersuchungen zur Bedeutung der Chlamydien bei der infektiösen keratokonjunetivitis des rindes / J. Wehr, H. Blohm, V. Schmidt // Wissensch. Zschr. Humboldt. Univ. - Berlin, 1980. - V. 29-1. - P. 61-65.

271. Welch, R.A. Pore-forming cytolysins of Gram-negative bacteria / R.A. Welch//Moi. Microbiol. 1991. - V. 5. - P. 521-528.

272. Westphal, O. Bacterial lipopolysaccharides extraction with phenol-water and further application of the procedure / O. Westphal, K. Jann // In: Methods in Carbohydrate Chemistry - 1965. - V.5. - P. 83 - 91.

273. Wilson, J.C. Identification, of a capsular polysaccharide from Moraxella bovis / J.C. Wilson, P.G. Hitchen, M. Frank, et al. // Carbohydr. Res. 2005. - V. 21;340(4). - P. 765-9. .

274. Xie, C.H. Transfer öf the misnamed Alysiella sp. I AM 14971 (=ATCC 29468) to the genus Moraxella as Moraxell oblonga sp. nov // C.H. Xie, A. Yokota // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2005. -V. 55. - P. 331 - 334.

275. Yu, R.H: Bacterial lactoferrin receptors: insights from characterizing the Moraxella bovis receptors i/ R;HjYu,^A.B. Schryvers // Biochem. Cell. Biol. 2002. - V. 80.-P. 81 -90.

276. Yu, R. Transferrin receptors on ruminant pathogens vary in their interaction with the C-lobe and N-lobe of ruminant transferrins / R. Yu, A.B. Schryvers // Can. J. Microbiol. 1994. - V. 40. - P. 532 - 540.

277. Zbrun, M.V. Dynamics of Moraxella bovis infection and humoral immune response to bovine herpes virus type 1 during a natural outbreak of infectious bovine keratoconjunctivitis in beef calves / M.V. Zbrun, G.C. Zielinski, et al. // J. Vet Sei. 2011.-V. 12(4).-P.347.

278. Zbrun, M.V.: Evaluation of anti-Moraxella bovis pili immunoglobulin-A in tears following intranasal vaccination of cattle / M.V. Zbrun, G.C. Zielinski, H.C. Piscitelli et al. // Res Vet. Sei. 2012. V.93(l). - P. .183-9.

V Dynamics of

ПРИЛОЖЕНИЯ

ОКП 93 8850

Группа Р-31

СОГЛАСОВАНО: Начальник П ветеринар!

ления

алов

УТВЕРЖДАЮ: Директод^ГБУ «Федеральный центр

радиационной л К - асности», рофессор А.В.Иванов 2013 г.

и

НАБОР ПРЕПЕРАТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К БАКТЕРИЯМ MORAXELLA BOVIS МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИКК-СЕРОТЕСТ)

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

ТУ 9388-009-00492374-2013

Срок введения с « »_2013 г.

Без ограничения срока действия

Казань-2013

Продолжение титульного листа

Технические условия ТУ 9388-009-00492374-2013

Разработчики:

Директор ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», член-корр. РАСХН, доктор биологических наук, профессор

.В.Иванов , 2013 г.

Зав. лабораторией по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», старший научный сотрудник, кандидат вереридарныхлгауз

Ь- Г.Н.Спиридонов « 2013 г.

Зав. лабораторией вирусологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», доктор ветеринарных наук, ппо^сор

Х.З.Гаффаров « ^ » ^ 2013 г.

Младший научный сотрудник лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЩТБ-ВНИШ»

_.." ' Н.В.Саттарова

« 2013 г.

Старший научный сотрудник лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», кандидат биологических

_(/АУШо& Л.В.Валебная

« _ 2013 г.

СОГЛАСОВАН! Начальник ветеринарии.

ления

УТВЕРЖДАЮ: Дире

TOKI

и

чш

■^Ж^€едеральный центр радиационной

асности»,

ессор

А.В.Иванов 2013 г.

ИНСТРУКЦИЯ

по применению «Набора препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа»

(Организация-разработчик: ФГБУ «Федеральный центр радиационной, токсикологической и биологической безопасности», г. Казань)

I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

1. Международное непатентованное наименование: Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа

2. Состав набора

1). Планшеты для иммуноферментного анализа с сорбированным антигеном бактерий Moraxella bovis — 2 шт;

2). Сыворотка крупного рогатого скота положительная к бактериям Moraxella bovis, 1 см3 — 1 ампула;

3). Сыворотка крупного рогатого скота отрицательная, 1 см3 - 1 ампула;

4). Антитела класса IgG к иммуноглобулину быка, меченные пероксидазой хрена (конъюгат), 0,2 см3 - 1 ампул;

5). Фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБР), 20-кратный концентрат, 20 см3 - 2 флакона;

6). Детергент (твин-80), 1 см3 - 1 флакон;

7). Цитратно-фосфатный буферный раствор (ЦФБР), 10 см3 — 2 флакона;

8). Хромоген (ортофенилендиамин - ОФД), 4,5 мг - 2 флакона;

9). Перекись водорода, 1 см3 - 1 ампула;

10). 1 М серная кислота (стоп-раствор), 10 см3 - 2 флакона.

3. Упаковка и маркировка

Компоненты набора расфасованы в ампулы, запаянные под вакуумом или в стерильные флаконы, укупоренные резиновыми пробками с алюминиевыми колпачками, и упакованы в коробки.

На флаконных (ампулах) с каждым компонентом должна быть этикетка с указанием наименования компонента и его номера, объема препарата во флаконе (ампуле), номера серии, дата изготовления (месяц, год).

На каждую коробку набора наклеивают этикетку с указанием наименования ведомства, наименования организации-производителя и его товарного знака, наименования набора, перечня препаратов в наборе,

количества ампул каждого препарата в коробке, номера серии, номера контроля, даты изготовления (месяц," год), срока годности, условий хранения, обозначения настоящих СТО. В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению набора.

4. Срок годности? компонентов набора - 12 месяцев со дня изготовления при условии хранения и транспортирования их в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С. Не допускается замораживание компонентов! Флаконы без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета подлежат выбраковке. Планшеты обеззараживают 3% раствором хлорамина. Остальные компоненты набора не требуют специальных мер утилизации. Запрещено использовать наборы по окончании срока годности.

II. ПРИНЦИП МЕТОДА

5. Метод основан на взаимодействии иммобилизованного на поверхности лунок планшета ' антигена бактерий Moraxella bovis со специфическими антителами из исследуемой сыворотки и последующим выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченными пероксидазой

, ' . ОДНОС1Н КО VII.Ч . т - , г

хрена специфическими антителами к IgG быка). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в хромоген-субстратном растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.

; 1П. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ

6. Подготовка биологическое .материала

Для анализа используют сыворотку крови крупного рогатого скота. Если -, анализ проводят в течение 24 ч после отбора, образцы биоматериала хранят при температуре 4 С. При более длительном хранении образцы замораживают при температуре минус 20°С. Перед исследованием замороженные образцы быстро (в течение 5-10 мин) нагревают в водяной бане при температуре 37°С. В случае выпадения осадка пробы обязательно осветляют центрифугированием в

.. • . 1«И\Г1и.Л:ШIИ lOLiijMii . , ......................r г

течение 10 мин при 2000 g. Многократное замораживание и оттаивание образцов не допускается.

7. Подготовка рабочих растворов и реагентов

7.1. Перед началом работы всё реагенты выдерживают 30 минут при комнатной температуре.

7.2. Планшет для иммуноферментного анализа с адсорбированным в лунках антигеном бактерий Moraxella bovis - готов к употреблению.

• " ♦ OMOTOI M'lfCKO! О \!'"'•ч '*''

7.3. Рабочий раствор для разведения конъюгата - 0,01 М фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР). Содержимое флакона № 5 доводят свежеприготовленной дистиллированной водой до объема 400 см3. Допускается хранить не более 1'мёс. 'при температуре 4±2°С.

| I ff» 1 ; Ii

•■•МТ ''ООП У V»i,v "9

7.4. Рабочий раствор для • промывки планшетов (ФСБР/т). К 500 см3 фосфатно-солевой буферного раствора (ФСБР) добавляют 0,25 см3 твин-80 (флакон № 6) и перемешивают до полного растворения.

7.5. Сыворотки крупного рогатого скота положительную (№2) и отрицательную (№ 3) растворяют дистиллированной водой до 1 см3.

7.6. Содержимое ампулы с конъюгатом (№ 4) растворяют фосфатно-солевым буферным раствором, не содержащего твин-80 (ФСБР) да рабочего разведения.

7.7. Содержимое ампулы с перекисью водорода (№ 9) растворяют в дистиллированной воде в объеме, указанном на этикетке ампулы.

7.8. Субстратно-индикаторную смесь готовят непосредственно перед использованием в реакции следующим образом: содержимое флакона № 8 (хромоген) растворяют в 10 см3 цитратно-фосфатного буферного раствора (флакон № 7) и вносят 0,17 см3 перекиси водорода.

_ _ ' ЛП1 иаСШОр Jlir Шя,.....ii.i?......: ... v

7.9. Стоп-реагент - готов к употреблению.

8. Проведение анализа

8.1. Во все лунки планшета с сорбированными антигенами вносят по 0,1 см3 буферного раствора 'ФСБР/т. Контрольные (отрицательная и положительная) и исследуемые сыворотки разводят в 40 раз буферным раствором ФСБР/т и вносят в горизонтальные лунки планшета в объеме 0,1 см3. При этом в лунку AI вносят контрольную отрицательную сыворотку, в лунку А2 - контрольную положительную и в лунки от A3 до А12 - исследуемые сыворотки и готовят двукратные разведения их от 1:80 до 1:10240. Планшет закрывают крышкой и инкубируют при 37±0,5°С в течение 1 ч.

8.2. Отмывание планшета. ' Планшет 5 раз промывают буферным раствором ФСБР/т (доверху заполняя лунки), в каждом случае полностью удаляя жидкость постукиванием перевернутого планшета по фильтровальной. бумаге.

„ _ .....!•■<■'!! ГО пи; H \ • .........'.• ' _

8.3. Внесение иммунопероксидазного конъюгата. В каждую лунку вносят по 0,1 см3 иммунопероксидазного конъюгата в рабочем разведении. Инкубируют в течение 1 ч при 37±0,5°С.

8.4. Отмывание планшета. '

8.5. Внесение субстратно-индикаторной смеси. Во все лунки планшета вносят по 0,1 см3 субстратно-индикаторную смесь. Планшет закрывают крышкой и инкубируют в темноте 20 мин при комнатной температуре.

8.6. Остановка реакции. Не сливая содержимое, во все лунки планшета добавляют 0,05 см3 стоп-реагент (1 M раствор серной кислоты).

9. Оценка и интерпретация результатов реакции

9.1. Результаты ИФА учитывают" после остановки реакции по показаниям оптической плотности субстратно-индикаторной смеси на спектрофотомётре при длине волны 492 нм (ОП492). Реакцию считают

положительной, если оптическая плотность субстратно-индикаторной смеси в

нопепп!--«-!• ••:<«■.•■' г ■■ ■■ ' г

лунках, в которых предварительно инкубировали положительную