Разработка технологии сбраживания высококонцентрированного сусла из ячменя тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.07, кандидат наук Устинова, Алиса Сергеевна

• Устинова, Алиса Сергеевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Устинова, Алиса Сергеевна

Оглавление

Введение

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Факторы, влияющие на эффективность процесса сбраживания высококонцентрированного сусла

1.1.1 Технология приготовления и сбраживания

высококонцентрированного сусла

1.1.2 Физиологическое состояние дрожжей и испытываемые ими стрессы

1.1.3 Влияние штаммов дрожжей на процесс брожения

1.2 Факторы формирования состава питательной среды

1.2.1 Особенности применения ячменя в качестве сырья для производства пищевого спирта

1.2.2 Механическое измельчение

1.2.3 Ферменты

1.3 Постановка задач исследования

2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.1.1 Дрожжи

2.2 Материалы исследования

2.2.1 Ячмень

2.2.2 Ферментные препараты

2.3 Методы исследования

2.3.1 Методы исследования штаммовых характеристик дрожжей

2.3.2 Получение высококонцентрированного сусла

2.3.3 Культивирование дрожжей

2.3.4 Определение качественных характеристик ячменя

2.3.5 Определение степени измельчения ячменя

2.3.6 Определение физико-химических показателей осахаренного сусла47

2.3.7 Определение показателей процесса брожения и зрелой бражки

2.3.8 Приготовление модельных питательных сред

2.3.9 Обработка результатов

3. ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА ШТАММА СПИРТОВЫХ ДРОЖЖЕЙ

3.1 Скрининг штаммов дрожжей

3.2 Исследование бродильной активности штаммов спиртовых дрожжей

4. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СБРАЖИВАНИЯ

ВЫСОКОКОНЦЕНТРИРОВАННОГО СУСЛА ИЗ ЯЧМЕНЯ

4.1 Исследование влияния гранулометрического состава помола ячменя на бродильную активность дрожжей

4.2 Влияние углеводного состава питательной среды на бродильную активность дрожжей

4.3 Исследование влияния состава питательной среды на осмолярность

4.4 Выбор оптимального режима осахаривания высококонцентрированного ячменного сусла

4.5 Разработка технологии сбраживания высококонцентрированного сусла из ячменя

4.6 Разработка технической документации

5. ЭКОНОМИЧЕСКИЙ РАСЧЕТ

6. ВЫВОДЫ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии сбраживания высококонцентрированного сусла из ячменя»

Введение

В настоящее время среди актуальных направлений развития спиртовой промышленности можно выделить снижение себестоимости спирта за счет экономии энергоресурсов и применения более дешевого вида сырья.

Эффективным и не требующим капитальных затрат способом снижения потребления электроэнергии является использование технологии сбраживания высококонцентрированного зернового сусла. Однако применение технологии переработки высококонцентрированных сред осложняется проблемой неполного сбраживания углеводов.

Во время сбраживания высококонцентрированного зернового сусла необходимо, чтобы дрожжи были осмофильными и устойчивыми к продуктам своей жизнедеятельности - этиловому спирту, кислотам, а также к повышению температуры питательной среды, поэтому при переработке высококонцентрированных сред необходимо применять специальные штаммы дрожжей.

В работах И. Трофимовой [52] было показано, что при производстве спирта при сбраживании высококонцентрированных сред на степень их сбраживания влияет доброкачественность сусла, т.е. отношение суммарной концентрации сбраживаемых углеводов к концентрации растворенных в сусле соединений, причем высокое содержание редуцирующих веществ в сусле негативно сказывается на степени его сбраживания.

В работах Н. Бараковой и соавторов [2] было установлено, что на степень сбраживания высококонцентрированного пшеничного сусла влияет не только его доброкачественность, но и соотношение концентраций различных сбраживаемых углеводов, одним из способов формирования которой является механическая деструкции сырья.

Поэтому важным аспектом при решении вопроса полного сбраживания углеводов помимо правильного выбора штаммов дрожжей является вопрос формирования состава питательной среды.

Один из эффективных способов регулирования углеводного состава питательной среды - внесение ферментных препаратов, содержащих глюкоамилазу.

Таким образом, повышение степени сбраживания высококонцентрированного сусла, а следовательно, снижение концентрации несброженных углеводов в зрелой бражке, представляет собой актуальную задачу, стоящую перед спиртовой промышленностью. Особенно важно исследовать все перечисленные аспекты на примере получения и сбраживания высококонцентрированного ячменного сусла, так как ячмень является более дешёвой зерновой культурой по сравнению с другими видами злаков и может существенно повлиять на снижение себестоимости спирта.

Цель исследования. Разработка технологии сбраживания высококонцентрированного ячменного сусла на основе регулирования состава питательной среды и выбора штамма дрожжей.

В соответствии с целью решались следующие задачи:

- провести скрининг штаммов спиртовых дрожжей с целью выбора осмо- и спиртоустойчивых культур дрожжей;

- изучить влияние штаммовых особенностей дрожжей на накопление примесей в бражке из высококонцентрированного ячменного сусла;

- исследовать влияние углеводного состава высококонцентрированного сусла на бродильную активность спиртовых дрожжей;

- выявить влияние компонентов культуральной среды на ее осмолярность и бродильную активность дрожжей;

- разработать режим осахаривания высококонцентрированного ячменного сусла, обеспечивающий наиболее полное сбраживание углеводов;

- разработать проект технической документации по технологии сбраживания высококонцентрированного сусла из ячменя.

Научная новизна работы:

- установлено, что штаммовые особенности дрожжей при сбраживании высококонцентрированного сусла из ячменя влияют на содержание несброженных углеводов и количество примесей в зрелой бражке;

- показано, что гранулометрический состав помола ячменя влияет на степень сбраживания полученного из него высококонцентрированного сусла;

- получено уравнение регрессии, устанавливающее корреляцию между осмолярностью среды, концентрацией глюкозы и мальтозы в питательной среде;

- установлено, что дробное внесение ферментных препаратов осахаривающего действия на стадии брожения снижает количество несброженных углеводов в бражке, увеличивает выход спирта и снижает концентрацию летучих примесей.

Практическая значимость.

- разработан режим внесения ферментных препаратов осахаривающего действия на стадии сбраживания высоко-коцентрированного ячменного сусла;

- разработана технология сбраживания высококонцентрированного сусла из ячменя и проект технической документации;

- проведены испытания на заводе ООО «МЕДОВАРУС» (г. Санкт-Петербург).

Экономический эффект от внедрения предлагаемой технологии на спиртовом заводе мощностью 6000 дал/сутки составит 18,6 млн. руб. в год.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Конгрессе молодых ученых (СПб, НИУ ИТМО ИХиБТ, 2013), на ХЫ1 научной и учебно-методической конференции НИУ ИТМО и на Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Пищевые продукты и здоровье человека» (Кемерово, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- выбор осмотолерантного штамма дрожжей для сбраживания высококонцентрированного ячменного сусла методом скрининга штаммов;

- зависимость степени сбраживания высококонцентрированного сусла из ячменя от гранулометрического состава помола сырья;

- влияние углеводного состава среды и содержания в ней этанола на ее осмолярность;

- результаты исследования влияния углеводного состава питательной среды на бродильную активность дрожжей;

- режим осахаривания высококонцентрированного ячменного сусла, обеспечивающий снижение концентрации несброженных углеводов в зрелой бражке.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Факторы, влияющие на эффективность процесса сбраживания высококонцентрированного сусла

1.1.1 Технология приготовления и сбраживания высококонцентрированного сусла

Процессы производства спирта и пива принципиально мало отличаются друг от друга. Оба этих вида производства основаны на спиртовом брожении, осуществляемом дрожжами-сахаромицетами, и в большинстве случаев - видом ЗассИагошусез сегеУ1з1ае.

Сложно переоценить влияние плотности среды на технологический процесс в целом. Концентрация сухих веществ в сусле влияет не только на физико-химические показатели замеса, сусла и бражки, но и на биохимические аспекты по всей цепи производства. В частности, доказано, что густота среды влияет на активность ферментов в составе разжижающих, осахаривающих и прочих ферментных препаратов. Исследованиями в области пивоварения отмечено негативное влияние низкого гидромодуля на такие показатели, как длительность осахаривания сусла и степень сбраживания сусла [26].

Применение технологии переработки высококонцентрированного сусла является способом интенсификации производства [13]. Она дает возможность увеличить производительность предприятия на 30 процентов и более, снизить затраты на персонал в пересчете на готовую продукцию, сократить количества потребляемых воды и электроэнергии; снизить количество сточных вод на единицу объема продукции, и кроме того уменьшить потери производственных сред в аппаратах [19].

Снижение энергозатрат обусловлено тем, что на нагрев 1 кг зерна необходимо 30% от энергии, требуемой на нагрев такого же количества воды, что объясняется различиями в теплоемкости данных материалов [47].

В пивоварении повышение концентрации сухих веществ в сусле кроме снижения гидромодуля при затирании достигается также за счет добавления несоложеных материалов. В технологии производства спирта из зерна добавки не предусмотрены, и увеличение плотности сусла достигается изменением соотношения между помолом зерна и водой. Типовым регламентом производства спирта из крахмалсодержащего сырья предусмотрен гидромодуль в границах 1:2,7 - 1,3,0. Уменьшение данного соотношения можно считать применением технологии переработки высококонцентрированного сусла [30].

При сбраживании плотного сусла возникает ряд проблем, связанных с изменением активности дрожжевых клеток в результате повышения осмотического давления среды и увеличения концентрации этанола. При переработке высокоплотного сусла из-за накопления дрожжевых метаболитов в повышенных концентрациях повышается процент мертвых дрожжевых клеток на конец брожения, может негативно измениться профиль вторичных метаболитов дрожжей [54].

На спиртовом производстве высокие концентрации глюкозы, наблюдаемые при повышении доли сухих веществ в замесе, могут быть причиной либо снижения интенсивности размножения дрожжей и их бродильной активности, либо повышения активности в первые моменты, но преждевременная полная остановка процесса ферментации [74, 72].

Кроме того, высококонцентрированное сусло как правило, обладает повышенной вязкость, особенно в случае, если в качестве сырья используется культура с высоким содержанием некрахмалистых полисахаридов [14]. К таким культурам относится и ячмень [20].

1.1.2 Физиологическое состояние дрожжей и испытываемые ими стрессы

Процесс сбраживания сусла при производстве спирта протекает за счет биохимической активности дрожжей. Поэтому физиологическое состояние используемой дрожжевой культуры имеет критическое влияние на динамику процесса брожения. Физиологическое состояние зависит от множества факторов, включающих возраст культуры, условия хранения и культивирования, содержание запасных углеводов и т.д. [27].

Состояние дрожжей претерпевает значительные изменения даже в условиях одного цикла периодического брожения. Как известно, развитие дрожжевой культуры в среде разделяют на несколько стадий согласно их активности, определяющейся физиологическим состоянием. При внесении инокулята в питательную среду наблюдается сначала лаг-фаза развития (фаза адаптации дрожжей), когда интенсивность накопления биомассы очень низкая. Основными причинами для задержки роста культуры микроорганизмов являются: изменение в питании (реорганизация ферментативной ситемы); изменения в окружающих физических условиях; наличие веществ, ингибирующих рост; состояние засеваемой культуры [32]. Затем наступает лог-фаза (фаза логарифмического - экспоненциального роста), в которой скорость размножения клеток максимальная, после чего наблюдается фаза затухания и стационарная фаза, в течение которых интенсивность размножения активно снижается и достигает нулевого значения. Последующая фаза отмирания дрожжей характеризуется преобладанием автолитических процессов в культуре над синтетическими.

Исследователями отмечено, что интенсивность образования этанола, т.е. динамика самого процесса брожения определяется такими же фазами, оканчивающимися, как правило, стационарной фазой, когда максимальная концентрация этанола уже достигнута, и скорость выделения спирта дрожжами пренебрежимо мала. Интересно, что упомянутые фазы

практически совпадают во времени. В частности, лог-фаза развития дрожжевой культуры можно характеризовать не только наиболее высокой скоростью накопления биомассы дрожжей, но и в свыше 30 раз более высокой скоростью синтеза этилового спирта по сравнению со стационарной фазой [74]. Фаза экспоненциального роста является наиболее важной, т.к. практически данная стадия определяет количество этанола, образованное за отдельно взятый цикл брожения [74]. Другие исследователи, тем не менее, отмечают, что более половины всего этанола за цикл брожения синтезируется в течение стационарной фазы [88].

В связи с этим можно сделать вывод о том, что необходимо стремиться к поддержанию хорошего физиологического состояния дрожжей на протяжении всего брожения, т.к. оно будет определять не только количество накопленной биомассы, но и длительность процесса сбраживания среды в целом.

Основным фактором ухудшения физиологического состояния дрожжей являются стрессы, испытываемые клетками по различным причинам.

В процессе спиртового брожения основные стрессы, испытываемые дрожжевой клеткой, связаны с действием следующих факторов внешней среды:

высокие концентрации собственных метаболитов (этилового спирта (этанольный стресс) и диоксида углерода,

высокое или низкое осмотическое давление (осмотический

стресс),

высокие концентрации низкомолекулярных углеводов;

высокая кислотность среды,

высокие температуры,

высокая вязкость сусла,

недостаток факторов питания дрожжей,

высокие значения скоростей сдвига при перемешивании,

наличие в среде ингибиторов спиртового брожения или токсичных веществ.

При этом стресс, испытываемый клеткой от одного фактора, усиливается при наличии других стрессовых факторов [88]. Для сохранения жизнедеятельности в стрессовых условиях у дрожжей выработан ряд механизмов противостояния стрессовым факторам, которые иногда могут быть одинаковыми для различных факторов.

Явление осмоса - это явление односторонней диффузии через полупроницаемую мембрану молекул растворителя в сторону с большей концентрацией растворенного вещества. Как известно, дрожжевая клетка состоит из клеточной оболочки, цитоплазмы и различных органелл. Цитоплазма при этом представляет собой многокомпонентный коллоидный раствор, обладающий определенными физико-химическими характеристиками. Дрожжевая клетка окружена цитоплазматической мембраной, которая является полупроницаемой, т.е. проницаемой лишь для определенных веществ, в которых клетка испытывает потребность. Поэтому в крайне редких случаях растворитель (вода) в питательной среде или внутри дрожжевой клетки не стремится проникнуть через мембрану за счет явления осмоса.

Если раствор, в котором находится клетка, содержит мало растворенных веществ, то она испытывает гипоосмотический стресс. При этом осмотическое давление направлено внутрь микроорганизма, и клетка приобретает тенденцию к «набуханию» - увеличению в размерах. В плотных средах, в частности, в условиях высококонцентрированного сусла, дрожжевые клетки испытывают противоположный — гиперосмотический стресс и стремятся к «сморщиванию». Чувствительность клеток к такому воздействию определяется концентрацией веществ в питательной среде, типом Сахаров и физиологическим состоянием дрожжей.

Реакцией клетки на гипоосмотический стресс на биохимическом уровне является стимулирование биосинтеза ее клеточной стенки.

При использовании технологии приготовления и переработки высококонцентрированного сусла после стадии осахаривания в сусле в больших количествах накапливаются низкомолекулярные углеводы (преимущественно глюкоза), что может вызывать повышение осмотического стресса дрожжей [88].

Явления осмоса связывают с такими показателями среды внутри и вне микроорганизма, как осмоляльность, тоничность, активность воды, осмотическое давление, тесно связанными между собой известными уравнениями зависимостей. Такие величины, как осмоляльность, тоничность среды и осмотическое давление, прямо пропорциональны друг другу и в определенных условиях могут быть взаимозаменяемыми.

Осмотическое давление окружающей среды может оказывать существенное влияние на химический состав биологической клетки и ее метаболизм. Хорошо изучены такие явления, как замена тейхуроновой кислоты тейхоевой в составе клеточной стенки бактерий Bacillus subtilis при значительном повышении тоничности среды, а также резкое увеличение содержания L-пролина в аминокислотном пуле некоторых видов бактерий при повышении концентрации хлористого натрия в среде [32].

Осмотический стресс связан с нарушением процессов транспорта через мембрану. При сбраживании плотных сред часто наблюдается динамика брожения, характеризующаяся высокой скоростью на начальном этапе, но преждевременным затуханием и остановкой процесса.

Для каждого микроорганизма существуют индивидуальные оптимальные значения упомянутых показателей в отношении окружающей среды. Они определяются, исходя из данных о скорости роста культуры в условиях с различным осмотическим давлением. При этом для некоторых микроорганизмов доказано, что величина оптимальной тоничности среды не зависит от природы вещества, создающего осмотическую активность. Напротив, максимальная скорость роста этих культуры определяется наравне с другими факторами также и природой осмотического агента [32].

На рис. 1 представлен график зависимости удельной скорости роста микроорганизмов (или радиального роста колоний) от тоничности и активности воды.

\ и tl

12 W 0,8

м

н

г* < «: §

Й1*- 0,6

8.3 0,4

е з

si аг

- /

II

О

1.0

10 10 4,0

Осмоляльпость SO

III

то

20 -tJ

0,9 a 8

Активность воды

0.7

Рис. 1 - Удельные скорости роста как функции активности воды и тоничности среды. I - Salmonella newport; II - Staphylococcus aureus; III -

Aspergillus amstelodami (по С.Дж.Перту [33]) У дрожжевых клеток может наблюдаться несколько механизмов защиты от осмотического стресса. Например, существует несколько веществ, ответственных за регулирование величины осмотического давления клеточного сока. Бетаин является таким веществом во многих организмах и микроорганизмах благодаря своей структуре - он представляет собой неполярную соль [70].

Аккумулирование в дрожжевой клетке глицерина также связывают с реакцией на осмотический стресс, испытываемый клеткой. Считается, что глицерин является важным агентом в борьбе дрожжей за выживание в условиях высокого осмотического давления [88]. При аккумулировании глицерина в условиях высокого осмотического давления окружающей среды

градиент давлений снижается, т.к. глицерин является также осмотически активным веществом [95].

Известно, что углеводный состав сусла имеет определенное влияние на протекание процесса брожения. Исследованиями в области пивоварения показано, что при использовании в производстве пива несоложеных материалов в сусле повышается доля глюкозы среди прочих простых Сахаров. В солодовом сусле соотношение глюкозы, мальтозы и мальтотриозы составляет соответственно 1,0:6,3:1,8. При увеличении концентрации глюкозы динамика ферментации замедляется, дрожжевые клетки размножаются менее интенсивно, повышается концентрация отдельных вторичных метаболитов в готовой продукции [27].

Установлено, что уровень осмотического давления питательной среды влияет на активность отдельных ферментов в дрожжевой клетке, которая зависит также и от углеводного состава среды [79]. При этом меняется также и метаболизм углеводов в дрожжевых клетках [28]. В первую очередь сказывается влияние на стабильность клеточной мембраны, и следовательно, на активность ферментов, с ней связанных.

В исследованиях, касающихся технологии производства пива, утверждается, что при сбраживании пивного сусла разного углеводного состава дрожжи выделяют различные вторичные метаболиты и сенсорный профиль готовой продукции при этом способен меняться значительно([26].

Дрожжи - факультативно анаэробные микроорганизмы, которые способны размножаться как в присутствии, так и в отсутствии кислорода. В присутствии кислорода в достаточных количествах и при низких концентрациях субстрата этанол совсем не синтезируется дрожжами или синтезируется в очень малых количествах.

В аэробных условиях энергетическая эффективность утилизации углеводов выше, и на построение биомассы уходит большая доля субстрата. При таком типе метаболизма утилизация глюкозы начинается с процесса гликолиза (путь Эмбдена-Мейергофа-Парнаса), и пировиноградная кислота,

образующаяся в результате этих реакций, катализируемых эндогенными клеточными ферментами, полностью распадается на низкомолекулярные соединения в цикле трикарбоновых кислот с высвобождением в общей сложности 36 молекул АТФ в расчете на одну молекулы глюкозы.

В отсутствие кислорода ферменты цикла Кребса ингибируются, и для получения энергии остается только процесс гликолиза, энегретическая эффективность которого составляет 2 молекулы АТФ на каждую молекулу глюкозы. Образующаяся пировиноградная кислота, накапливаясь внутри клетки, негативно влияет на эндогенные ферментативные процессы, и поэтому в ходе эволюции дрожжи приобрели способность избежать этого влияния за счет трансформации пировинограной кислоты в этанол и диоксид углерода. Поэтому анаэробный путь утилизации глюкозы гораздо менее энергетически эффективен для клетки по сравнению с аэробным путем [42].

Накопление биомассы в брожении - критически важный момент, определяющий длительность и эффективность всего процесса [69, 71]. Основная биомасса дрожжей синтезируется в начале, когда в балансе между дыханием клетки и ее анаэробным метаболизмом существенная доля принадлежит энергетически более выгодному дыханию, несмотря на то, что дрожжи размножаются и после перехода полностью в стадию брожения.

Существует также другой тип влияния углеводов на метаболизм дрожжей. Эффект Кребтри (эффект катаболической репрессии) заключается в ингибировании аэробного метаболизма клетки в присутствии сбраживаемых углеводов в концентрациях, превышающих определенный порог [10]. В таких условиях наблюдается определенный баланс между процессами дыхания и брожения в микроорганизме, и смещение этого баланса в одну или другую сторону будет зависеть от множества факторов, но в первую очередь - от концентрации углевода и содержания кислорода в среде. Этот порог соответствует концентрации 0,1 % по массе для глюкозы и 0,4% - для мальтозы. Таким образом, типом углевода, используемого в

качестве субстрата, можно в отдельных случаях объяснить направленность метаболизма дрожжей [71].

Катаболитная репрессия при избытке источника углерода -распространенный эффект в культивировании микроорганизмов. При этом репрессию исследователи рекомендуют подавлять несколькими способами: подбором другого источника углерода, распределенным дозированием источника углерода или использованием смешанных источников углерода, что на практике дает лучшие результаты, чем при использовании единственного источника [32].

В ходе некоторых исследований установлено, что различные сбраживаемые и несбраживаемые углеводы в одинаковых концентрациях по-разному влияют на физиологическое состояние дрожжей, т.е. в разной степени ингибируют их развитие [48, 79]. Однако в данных исследованиях не было уточнения, за счет каких свойств соединений проявлялись наблюдаемые различия во влиянии на метаболизм дрожжей, хотя делались предположения о различных осмотических свойствах данных веществ. В связи с этим возникает необходимость исследовать, как осмотическое давление питательной среды зависит от природы углеводов в ее составе, а также проанализировать влияние сред разного углеводного состава на бродильную активность дрожжей.

Углеводный состав оказывает существенное влияние на активность дрожжей в таких процессах, как культивирование дрожжей и реактивация сухих препаратов дрожжевых культур [48, 23].

Клетки на стадии размножения более чувствительны к осмотическому стрессу, чем клетки из стационарной фазы, что может быть связано с накоплением в стационарной фазе углевода трегалозы в клеточной стенке дрожжей [74]. По-видимому, её роль в данном случае совпадает с таковой при термошоке. Сахара препятствуют денатурированию белков и взаимодействуют с белками, образующимися в результате термошока. Таким образом, трегалоза является средством противостояния дрожжевых клеток

осмотическому и термическому стрессам. Также была доказана роль трегалозы в качестве химического детоксиканта. Ван Дийк и др. в своей работе [99] показали зависимость между содержанием трегалозы в клетках и сопротивляемостью стрессам у клеток в процессе брожения.

Предполагается, что трегалоза является важным защитником от осмотического воздействия и индикатором стресса в пивоваренных дрожжах в процессе сбраживания высокоплотных и очень высокоплотных сусел [75, 59, 8, 73]. В таких средах при брожении накапливаются большие количества этанола. Поэтому при использовании технологии высококонцентрированного сусла очень важно точно соблюдать технологию возбраживания, чтобы обеспечить для дрожжей возможность оказать сопротивление столь высоким уровням стресса. Однако согласно исследованиям Качмазова Г.С. и др. [16, 17, 18] сопротивляемость осмотическим стрессам у спиртовых штаммов дрожжей достаточно высока, чтобы не приниматься во внимание как лимитирующий фактор при применении технологии

высококонцентрированного сусла. Исходя из этого, по мнению авторов, технологические усовершенствования, направленные на устранение трудностей, возникающих при сбраживании сусел с высокой концентрацией растворенных сухих веществ, должны учитывать: во-первых, повышение вязкости сусла, т.к. она является фактором, ограничивающим контакт клетки с субстратом; во-вторых, устойчивость используемого штамма к токсическому действию этилового спирта; в-третьих, устойчивость используемого штамма к токсичным продуктам, неизбежно накапливающимся в питательной среде.

Трегалоза представляет собой запасной клеточный дисахарид, состоящий из двух остатков О-глюкозы. Наряду с глюкозой источником биосинтеза трегалозы может быть и гликоген [101]. Известно, что биосинтез «белков теплового шока», индуцированный, к примеру, кратковременной экспозицией дрожжей действию высокой, но не смертельной температуры, и накопление в дрожжевой клетке трегалозы связаны между собой. При этом

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Устинова, Алиса Сергеевна, 2013 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Баракова, Н. В. Разработка технологии этилового спирта при пониженных температурных режимах водно-тепловой и ферментативной обработки высококонцентрированных замесов из ячменя: автореферат дис. ...канд. техн. наук: 05.18.07 / Баракова Надежда Васильевна. — СПб, 2010. -16 с.

2. Баракова, Н. В. Исследование влияния степени диспергирования зерна на технологические параметры при производстве спирта из пшеницы / Н. В. Баракова, А. С. Устинова // Технологии и оборудование химической, биотехнологической и пищевой промышленности. Материалы 3-й Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием 28-30 апреля 2010 года, г. Бийск, часть 1. - 2010. - С. 220-222.

3. Баракова, Н. В. Влияние ферментных препаратов на вязкость высококонцентрированных замесов из ячменя при производстве этилового спирта / Н. В.Баракова, В. Б. Тишин, А. В. Леонов // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2010. - №4. - С. 24-26.

4. Василенко, 3. В. Влияние видовых особенностей зерновых культур на выход и качество пищевого этилового спирта / 3. В. Василенко, Е.

A. Цед, С. В. Волкова и др. // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2010. - №1. - С. 26-29.

5. Великая, Е. И. Лабораторный практикум по курсу общей технологии бродильный производств / Е. И. Великая, В. Ф. Суходол // М.: Легкая и пищевая промышленность, 1986. - 368с.

6. Зуева, Н. В. Влияние ферментных препаратов различного действия на динамику накопления сбраживаемых углеводов / Н. В. Зуева, С.

B. Востриков // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2008. -№4.-С. 7-9.

7. Востриков, С. В. Влияние степени измельчения пшеницы на распределение белка и сбраживаемых углеводов / С. В. Востриков, Н. В. Саутина // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2005. - №1. -

C. 36.

8. Дамберг, В.Э. Роль трегалозы в росте и восстановлении дрожжей З.сеге^ае / В. Э. Дамберг // Изв. АН Латв. ССР. - 1982. - № 8. - С. 93-98.

9. Доморощенкова, М. Л. Зависимость размножения дрожжей от условий выращивания посевного материала / М. Л. Доморощенкова, В. Н.

Красильникова, Н. В. Розманова, Н. К. Палагина, И. А. Карпищева // Хлебная и кондитерская промышленность. - 1965. - № 4. - С. 41-43.

10. Ждан-Пушкина, С. Н. Основы роста культур микроорганизмов / С. Н. Ждан-Пушккина - Л.: ЛГУ, 1983. - 187с.

11. Захаров, И. А. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов / И. А. Захаров, С. А. Кожин, Т. Н. Кожина, И. В. Федорова. -Л.: Наука, 1984-112 с.

12. Зуева, Н. В. Влияние некоторых параметров на физико-химические показатели процесса сбраживания зернового осветленного сусла / Н. В. Зуева, С. В. Востриков // Хранение и переработка сельхозсырья. -2008.-№2.-С. 42-43.

13. Интенсификация спиртового производства / В. А. Маринченко [и др.]. - К.: Техника, 1983. - 128 с.

14. Иэнсер, Э. Снижение вязкости при сбраживании сусла высокой концентрации / Э. Йэнсер, Э. Андерсен, Р. Чечнев, А. Кадиева // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2007. - №4. - С. 23-26.

15. Кадиева, А. Т. Влияние экстремальных температур и осмоса на свойства новых рас ЗассЬагошусез сегеу1з1ае 985-Т и 985-0 / А. Т. Кадиева, М. Б. Оверченко, Н. И. Игнатова, Л. В. Римарева // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2003. - №4. - С.38-40.

16. Качмазов, Г. С. Сравнительная характеристика осмотической устойчивости дрожжей спиртовых рас / Г. С. Качмазов, Г. С. Качмазова, С. Ю. Гугкаев, К. О. Хаметова // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2007. - №3. - С.31.

17. Качмазов, Г. С. Метод определения осмотической устойчивости дрожжей / Г. С. Качмазов, И. К. Сатцаева, 3. Т. Дзампаева // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2004. - №2. - С. 29.

18. Качмазов, Г. С. Сравнительная характеристика осмотической устойчивости дрожжей спиртовых рас / Г. С. Качмазов, К. О. Хаметова, Г. А. Качмазова, С. Ю. Гугкаев // Производство спирта и ликероводочных изделий. -2007. -№3.- С. 31.

19. Коукол, Н. Высокоплотное пивоварение / Н. Коукол, Ханау // ВгаишеН-Мир пива. - 1997. - №3. - С.24-27.

20. Крикунова, Л. Н. Технология этанола на основе получения и сбраживания концентрированного сусла из ИК-обработанного ячменя. Часть I. Подбор мультиэнзимной композиции / Л. Н. Крикунова, Л. И. Сумина // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2009. - №2. - С. 51-54.

21. Лихтенберг, Л. А. Влияние технологических приемов на качество спирта / Л. А. Лихтенберг // Производство спирта и ликероводочных изделий. -2001. - №2. - С.28-29..

22. Мальцев, П. М. Технология бродильных производств / П. М. Мальцев. - М.: Пищевая промышленность, 1980. - 560 с.

23. Мартыненко, Н. Н. Влияние углеводного состава среды на реактивацию сухих винных и спиртовых дрожжей / Н. Н. Мартыненко, В. В. Верченов, Л. В. Римарева // Производство спирта и ликероводочных изделий. -2006.-№1.-С: 34-35.

24. Меле дина, Т. В. Роль штаммовых характеристик дрожжей в формировании вкуса и аромата пива / Т. В. Мел едина // Brauwelt - Мир пива, 1997. -№ 1.-С. 35-37.

25. Меледина, Т. В. Качество пива. Стабильность вкуса и аромата, коллоидная стойкость, дегустация / Т. В. Меледина, А. Т. Дедегкаев, Д. В. Афонин - СПб: Профессия, 2011. - 224 с.

26. Меледина, Т. Пиво с высокой долей сухих веществ. Часть I / Т. Меледина, С. Черепанов // Индустрия напитков, 2006. - №5. -С. 12-18.

27. Меледина, Т. Пиво с высокой долей сухих веществ. Часть II / Т. Меледина, С. Черепанов // Индустрия напитков, 2006. - №6. -С. 24-29.

28. Меледина, Т. Пиво с высокой долей сухих веществ. Часть III / Т. Меледина, С. Черепанов // Индустрия напитков, 2007. - №1. -С. 10-12.

29. Меледина, Т. В. Применение математических методов планирования экспериментов в биотехнологии: методические указания к выполнению научно-исследовательской работы для студентов специальностей 27.02 и 27.04 / Т. В. Меледина, И. М. Василинец, И. Е. Кострова. - Л.: ЛТИХП, 1988. - 23 с.

30. Мюллер, В. К. Высокоплотное пивоварение / В. К. Мюллер, X. У. Поль // Brauwelt-Мир пива. - 1995. - №1. - С. 19-25.

31. О состоянии и направлениях развития производства спирта этилового из пищевого сырья и ликероводочной продукции: материалы пятой международной научно-практической конференции / под ред. В.И. Ярмоша. - М.: Пищевая промышленность, 2005. - 424 с.

32. Перт, С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток / С. Дж. Перт; пер. с англ. Петровой Т.А., Позмоговой И.Н.; ред. Работнова И.Л. - М.: Мир, 1978. - 330 с.

33. Петрунькина, А. М. Практическая биохимия / А. М. Петрунькина. - М.: Медгиз, 1961. -428с.

34. Полыгалина, Г. В. Технохимический контроль спиртового и ликероводочного производства / Г. В. Полыгалина. - М.: Колос, 1999. - 336 с.

35. Поляков, В. А. Перспективные ферментные препараты и особенности их применения в спиртовой промышленности / В. А. Поляков, Л. В. Римарева // Пиво и напитки. - 2000. - №2. - С. 52.

36. Помозова, В. А. Технология спиртового и ликеро-водочного производств: учебное пособие / Помозова В.А.; Кемеровский технологический институт пищевой промышленности. - Кемерово, 2005. -124 с.

37. Римарева, Л. В. Зависимость физиологической активности спиртовых дрожжей 8асс1гагошусе8сегеу181ае 985-Т и 987-0 от экстремальных температур и осмоса / Л. В. Римарева, М. Б. Оверченко, Н. И. Игнатова // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2005. - №2. - С. 25-26.

38. Римарева, Л. В. Скрининг активных рас дрожжей с термотолерантными и осмофильными свойствами для интенсификации производства этанола / Л. В. Римарева, М. Б. Оверченко, А. М. Гернет // Пиво и напитки. - 2000. - №1. - С. 34-36.

39. Римарева, Л. В. Технологические аспекты получения высококачественного спирта / / Л. В. Римарева, М. Б. Оверченко, Н. И. Игнатова, А. Т. Кадиева, Т. М. Шелехова // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2002. - №3. - С. 16-19.

40. Римарева, Л. В. Сбраживание концентрированного зернового сусла с использованием осмофильной расы спиртовых дрожжей 8ассЬаготусе8сегеу181ае 1039 / Л. В. Римарева, М. Б. Оверченко, Е. М. Серба и др. // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2011. - №3. - С. 10-12.

41. Римарева, Л. В. Рациональный выбор расы спиртовых дрожжей / Л. В. Римарева, М. Б. Оверченко, Н. И. Игнатова // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2001. - №2. - С. 19.

42. Римарева, Л. В. Теоретические и практические основы биотехнологии дрожжей / Л. В. Римарева. - М.: ДеЛи принт, 2010. - 252 с.

43. Римарева, Л. В. Теоретические и практические основы ферментативного катализа полимеров зернового сырья в спиртовом производстве / Л. В. Римарева, М. Б. Оверченко, Н. И. Игнатова и др. // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2008. - №3. - С. 4-9.

44. Румянцева, В. В. Научно-практические основы ресурсосберегающих технологий получения и применения биомодифицированных продуктов из овса и ячменя. Автореферат дис. ...докт. техн. наук: 15.18.01. - Орел, 2011.-40 с.

45. Середа, А. С. Исследование гидролитической способности комплексных ферментных препаратов, полученных на основе

высокоэффективных рекомбинантных штаммов АБре^Шшашатоп, по отношению к полисахаридам зернового сырья / А. С. Середа, Н. И. Игнатова, М. Б. Оверченко // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2011. - №3. - С. 54-56.

46. Совершенствование технологии производства спирта и ликероводочной продукции: материалы научно-практического семинара. -М.: РАСН, 2010.-110 с.

47. Степанов, В. И. Метод переработки крахмалсодержащего сырья при получении концентрированного зернового сусла / В. И. Степанов, Л. В. Римарева, В. В. Иванов, А. Ю. Шариков // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2007. - №3. - С. 16-17.

48. Сумина, Л. И. Влияние углеводного состава сусла на развитие спиртовых дрожжей / Л. И. Сумина, Л. Н. Крикунова // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2009. - №3. - С. 10-11.

49. Теоретические и практические основы совершенствования технологии спирта: сборник научных трудов / под ред. В.А. Полякова, Л.В. Римаревой. - М.: ВНИИПБТ, 2008. - 264 с.

50. Технология спирта / В. Л. Яровенко [и др.]. - М.: Колос, 2002. -

463 с.

51. Типовой технологический регламент производства спирта из крахмалистого сырья. - М.: Министерство сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации, 1998.

52. Трофимова, И. И. Исследование и разработка способа сбраживания высококонцентрированного сусла из крахмалистого сырья: Автореферат дис. ...канд. техн. наук. - Москва, 1979.

53. Уонг, Д. Ферментация и технология ферментов / Д. Уонг, Ч. Коней, А. Демайн и др. - М. : Легкая и пищевая промышленность, 1983. -335 с.

54. Фараджева, Е. Д. Образование побочных продуктов брожения при высокоплотном пивоварении / Е. Д. Фараджева, Н. А. Колнышенко // Пиво и напитки. - 2008. - №2. - С. 14-16.

55. Федюшкина, И. Л. Пути повышения активности спиртовых дрожжей / И. Л. Федюшкина, В. А. Помозова // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2003. - №2. - С.24-25.

56. Цед, Е.А. Влияние различных осахаривающих средств на выход пищевого этилового спирта / Е. А. Цед, 3. В. Василенко, С. В. Волкова и др. // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2008. - №2. - С. 35-37.

57. Цед, Е.А. Исследование биохимических особенностей получения и сбраживания спиртового сусла с использованием ферментных препаратов /

Е. А. Цед, С. В. Волкова, JI. М. Королева и др. // Производство спирта и ликероводочных изделий. - 2007. - №4. - С. 27-28.

58. Цыганков, П. С. Руководство по ректификации спирта / П. С. Цыганков, С. П. Цыганков. - М.: Пищепромиздат, 2002. - 400 с.

59. Черепанов, С. А. Исследование осмо- и спиртоустойчивости различных штаммов дрожжей и возможности и возможности их применения для высокоплотного пивоварения: дис. ...канд. техн. наук: 05.18.07. - Санкт-Петербург, 2004. -156 с.

60. Справочник по производству спирта. Сырье, технология и технохимконтроль / В. J1. Яровенко. - М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981. - 336 с.

61. Ado, S. A. Byconversion of cassava starch to ethanol in a simultaneous saccharification and fermentation process by co-cultures of Aspergillus niger and Saccharomyces cerevisiae / S. A. Ado, G. B. Olukotun, J. B. Ameh, A. Yabaya // Science World Journal. - 2009. - Vol. 4 (no 1). - P. 19-22.

62. Aguilera, A. Role of mitochondria in ethanol tolerance of Saccharomyces cerevisiae / A. Aguilera, T. Benitez // Archives of Microbiology. -1985. -№ 142. - P. 389-392.

63. Alexandre, H. Relationship between ethanol tolerance, lipid composition and plasma membrane fluidity in Saccharomyces cerevisiae and Kloekera apiculata / H. Alexandre, I. Rousseaux, C. Charpentier // FEMS Microbiology Letters. - 1994. - № 124. - P. 17-22.

64. Bandas, E. L. Induction of rho minus mutation in yeast Saccharomyces cerevisiae by ethanol / E. L. Bandas, M. Zakharov // Mutation Research. - 1980. - № 71. - P. 193-199.

65. Casey, G. M. Ethanol tolerance in yeast / G. M. Casey, W. M. Ingledew // Critical reviews in microbiology. - 1986. - № 13. - P. 219-290.

66. Ciesarova, Z. Enhancement of yeast ethanol tolerance by calcium and magnesium / Z. Ciesarova, D. Smogrovicova, Z. Domeny // Folia Microbiologica. - 1996.-№41.-P. 485-488.

67. Colaco, C. Extraordinary stability of enzymes dried in trehalose: simplified molecular biology / C. Colaco, S. Sen, M. Thangavelu, S. Pinder, R. Roser// Biotechnology. - 1992. - № 10. - P. 1007-1011.

68. Conrad, M. J. Solubility of amphipathic molecules in biological membranes and lipid bilayers and its implications for membrane structure / M. J. Conrad // Biochemistry. -1981. - Vol. 20 (4). - P. 808-818.

69. Patrascu, E. Current approaches to efficient biotechnological production of ethanol / E. Patrascu, G. Rapeanu, T. Hopulele // "Dunarea de Jos" University: Innovative Romanian Food Biotechnology. - 2009. - Vol. 4 (March).

70. Fermentation and biochemical engineering handbook. Principles. Process design and equipment / 2nd edition, edited by H. C. Vogel. - New Jersey: Noyes Publications, 1997.

71. Ingledew, W. M. Alcohol production by Saccharomyces cerevisiae: a yeast primer // Alcohol Textbook, 3rd edition. - Nottingham University Press, 1999.-P. 49-88.

72. Introduce to pressure fermentation // Brygmesteren. - 1986. - № 2. -P. 7-15.

73. Iwahashi, H. The correlative evidence suggesting that trehalose stabilizes membrane structure in the yeast Saccharomyces cerevisiae / H. Iwahashi, K. Obuchi, S. Fujii, Y. Komatsu // Cellular and Molecular Biology. - 1995. - № 41.-P. 763-769.

74. Kelsall, D. R. Management of fermentations in production of alcohol: moving toward 23% ethanol / D. R. Kelsall, T. P. Lyons // Alcohol Textbook, 3rd edition. - Nottingham University Press, 1999. - P. 25-38.

75. Lentini, A. The impact of ethanol stress on yeast physiology / A. Lentini et al. // Brewing yeast fermentation performance. - 2003. - P. 25-38.

76. Lie, S. The EBC-ninhydrin method for determination of free alpha amino nitrogen / S. Lie // J. Inst. Brew. - 1973. - Vol.79. - P. 37-41.

77. Lloyd, D. Effects of growth with ethanol on fermentation and membrane fluidity of Saccharomyces cerevisiae / D. Lloyd, S. Morrell, H. N. Carilsen et. al. // Yeast. - 1993. - № 9. - P. 825-833.

78. Millar, D.G. Activity and stability of glycolytic enzymes in the presence of ethanol / D. G. Millar, S. K. Griffins, E. Algar, R. K. Scopes // Biotechnol. Lett. - 1982. - № 4. - P. 601-606.

79. Moneke, A. N. Selection and characterization of high ethanol tolerant Saccharomyces cerevisiae yeasts from orchard soil / A. N. Moneke, B. N. Okolo, A. I. Nweke, L. I. Ezeogu, F. S. Ire // African Journal of Biotechnology. - 2008. -Vol. 7 (24) Dec. - P. 4567-4575.

80. Montesinos, T. Production of alcohol from raw wheat flour by amyloglucosidase and Saccharomyces cerevisiae / T. Montesinos, J. M. Navarro // Enzyme and Microbial Technology. - 2000. - vol. 27 - P. 362-370.

81. Nikolic, S. Simultaneous enzymatic sacchariflcation and fermentation (SSF) in bioethanol production from corn meal by free and immobilized cells of Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus / S. Nikolic, L. Mojovic, M. Rakin, J. Pejin, A. Djukic-Vukovic, M. Bulatovic // Journal of Chemical Science and Technology. - 2012. - Vol. 1, Iss.l. - P. 21-26.

82. Norton, J.S. Plant and Cell Physiology / J. S. Norton, R. W. Krauss -1972.-№ 13.- 139 p.

83. Novotny, C. Effect of 5, 7-unsaturated sterols on ethanol tolerance in Saccharomyces cerevisiae / C. Novotny, M. Flieger, J. Panos, F. Karst // Biotechnology and Applied Biotechnology. - 1992. - № 15. - P. 314-320.

84. Ohgren, K. A comparison between simultaneous saccharification and fermentation and separate hydrolysis and fermentation using steam-pretreatment corn stover / K. Ohgren, R. Bura, G. Lesnicki, J. Saddler, G. Zacchi // Process Biochemistry. - 2007. - Vol. 42. - P. 834-839.

85. Okolo, B. Toxicity of ethanol, n-butanol, and iso-amyl alcohol in Saccharomyces cerevisiae when supplied separately and in mixtures / B. Okolo, J. R. Johnston, D. R. Berry // Biotechnology Letters. - 1987. - № 9. - P. 431-434.

86. Pampulha, M. E. Activity of glycolytic enzymes of Saccharomyces cerevisiae in the presence of acetic acid / M. E. Pampulha, M. C. Loureiro-Dias // Applied Microbiology and Biotechnology. - 1990. - № 34. - P. 611-614.

87. Panek, A. D., Metabolism and thermotolerance function of trehalose in Saccharomyces cerevisiae: a current perspective / A. D. Panek, A. C. Panek // Journal of Biotechnology. - 1990. - № 14. - P. 229-238.

88. Samarth Shyam Sunder Rathore Decision making in dry-grind etanol industry using near-infrared spectroscopy. Dissertation (Ph.D.) / Samarth Shyam Sunder Rathore - University of Illinois at Urbana-Champaign, 2009.

89. Santos, J. Ethanol tolerance of sugar transport, and the rectification of stuck wine fermentations / J. Santos, M. J. Sousa, H. Cardoso, J. Inacio, S. Silva, I. Spencer-artins, C. Leao // Microbiology. - 2008. - Vol. 154. - P. 422-430.

90. Sharma, S. C. A possible role of trehalose in osmotolerance and ethanol tolerance in Saccharomyces cerevisiae / S. C. Sharma // FEMS Microbiology Letters. - 1997. -Vol. 152. - P. 11-15.

91. Ochoa, S. Adaptive control of the Simultaneius Saccharification -Fermentation Process from Starch to Ethanol / S. Ochoa, V. Lyubenova, J.-U. Repke, M. Ignatova, G. Wozny // Computer Aided Chemical Engineering. -2008. -Vol. 25.-P. 489-494.

92. Srichuwong, S. Simultaneous saccharification and fermentation (SSF) of very high gravity (VHG) potato mash for the production of ethanol / S. Srichuwong, M. Fujiwara, X. Wang et al. // Biomass and bioenergy. - 2009. - Vol. 33, Iss. 5.-P. 890-898.

93. Sudip, R. Optimal control strategies for simultaneous saccharification and fermentation of starch / Sudip Roy, Ravindra D. Gudi, K.V. Venkatesh, Sunil S. Shah // Process Biochemistry. -2001. - Vol. 36, issues 8-9, March. - P. 713-722.

94. Thatiparnala, R. Effects of high product and substrate inhibitions on the kinetics and biomass and product yields during ethanol batch fermentation / R.

Thatiparnala, S. Rohani, G. A. Hill // Biotechnology and Bioengineering. - 1992. -№ 40. - P. 289-297.

95. The Alcohol Textbook / 4th edition; ed. by K.A. Jacques, T.P. Lyons, D.R. Kelsall. - Nottingham University Press, 2003. - 447 p.

96. The Alcohol Textbook / 5th edition; ed. by W.M. Ingledew, D.R. Kelsall, G.D. Austin, C. Kluhspies. - Nottingham University Press, 2009. - 542 p.

97. Thomas, K. C. Production of fuel alcohol from hull-less barley by very high gravity technology / K. C. Thomas, A. Ghas, B. G. Rossnagel, W. M. Ingledew // Cereal Chemistry. - 1995. - Vol. 72(4). - P. 360-364.

98. Thomas, K. C. Effects of particulate materials and osmoprotectants on very-high-gravity ethanolic fermentations by Saccharomyces cerevisiae / K. C. Thomas, S. H. Hynes, W. M. Ingledew // Appl. Environ. Microbiol. - 1994. - Vol. 60.-P. 1519-1524.

99. Van Dijck, P.,Colavizza, D., Smet, P. and Thevelein, J.M. (1995) Differential importance of trehalose in stress resistance in fermenting and non-fermenting Saccharomyces cerevisiae cells. Appl. Environ. Microbiol. 61. 109115.

100. Wahab, O. The alcoholic fermentative efficiency of indigenous yeast strains of different origin on orange juice / O. Wahab, R. Okunowo, O. Okotore, A.. A. Osuntoki // African Journal of Biotechnology. - 2005. - Vol. 4 (11) Nov. - P. 1290-1296.

101. Winkler, K. Metabolic regulation of trehalose content of vegetative yeast / K. Winkler, I. Kienle, M. Burgert, J. C. Wagner, H. Holzer // FEBS Letters. - 1991.-№291.-P. 269-272.

102. Zhu, S. Simultaneous saccharification and fermentation of microwave /alkali pretreated rice straw to ethanol / S. Zhu, Y. Wu, Z. Yu, X. Zhang et al. // Biosystems Engineering. - 2005. - Vol. 92. - P. 229-235.