Разработка технологии получения хондроитинсульфата из гидробионтов Баренцева моря и изучение его физико-химических свойств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.04, кандидат технических наук Порцель, Мария Николаевна

• Порцель, Мария Николаевна
• кандидат технических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат технических наук Порцель, Мария Николаевна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Строение хондроитинсульфата

1.2 Свойства хондроитинсульфата

1.3 Получение хондроитинсульфата

1.3.1 Источники хондроитинсульфата

1.3.2 Основные стадии получения хондроитинсульфата

1.4 Идентификация хондроитинсульфата

1.4.1 Идентификация методом РЖ спектроскопии

1.4.2 Метод капиллярного электрофореза

1.4.3 Метод ядерного магнитного резонанса

1.4.4 Другие методы идентификации хондроитинсульфата

1.5 Методы количественного анализа хондроитинсульфата

1.6 Терапевтические роли хондроитинсульфата

1.7 Выводы. Постановка задачи исследований

Глава 2. Объекты и методы исследования

2.1 Характеристика объектов исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Методика определения массовой доли хондроитинсульфата в образце

2.2.2 Количественное определение восстанавливающих Сахаров

2.2.3 Методика количественного определения Н-ацетил-0-глюкозамина

2.2.4 Методика количественного определения Б-галактозамина в присутствии Б-глюкозамина

2.2.5 Количественное определение О-галактозамина и Б-глюкозамина методом ВЭЖХ

2.2.6 Методика идентификации хондроитинсульфата

2.2.7 Определение экзогликозидазной активности

2.2.8 Методика определения среднемассовой молекулярной массы хондроитинсульфата '

2.2.9 Определение физико-химических свойств водных растворов хондроитинсульфата

2.2.10 Методики определения качественных показателей препаратов . хондроитинсульфата

2.3 Математическая обработка данных

3 Результаты и их обсуждение:

3.1 Выделение хондроитинсульфата из гидробионтов Баренцева моря 56 3 .2 Разработка и совершенствование методов идентификации хондроитинсульфатов

3.2.1 Идентификация хондроитинсульфатов методом инфракрасной спектроскопии" 59 3.2.2. Идентификация хондроитинсульфата методом ЯМР 63 3.2.3 Идентификация хондроитинсульфата методом ВЭЖХ

3.3 Кинетика кислотного гидролиза хондроитинсульфата 73 . 3:3.1 Кинетика гидролиза хондроитинсульфата по образованию восстанавливающих'Сахаров

3.3.2 Кинетика гидролиза хондроитинсульфата по содержанию 1> галактозамина

3.3.3 Кинетика гидролиза хондроитинсульфата;по данным ВЭЖХ 79 3 3.4 Кинетика гидролиза хондроитинсульфата по изменению концентрации О-глюкуроновой кислоты в гидролизатах 82 3.3.5 Кинетика образования и разрушения №ацетил-В-галактозамина в ходе гидролиза хондроитинсульфата

3.4'Математическое моделирование процесса кислотного гидролиза хондроитинсульфата

3.5 Физико-химические свойства растворов хондроитинсульфатов 88 3.5.2 Система хондроитинсульфат-фермент как биомаркер

3.6 Фракционный состав хондроитинсульфата

3.7 Выделение хондроитинсульфата из морских гидробионтов с использованием ультрафильтрации

Глава 4. Разработка технологии получения хондроитинсульфата из морских гидробионтов с использованием мембран

4.1 Обоснование рациональных режимов технологических процессов

4.2 Технология получения хондроитинсульфата и его характеристики 110 4.3. Расчет экономической эффективности технологии получения хондроитинсульфата из морских гидробионтов с использованием ультрафильтрации

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии получения хондроитинсульфата из гидробионтов Баренцева моря и изучение его физико-химических свойств»

Актуальность темы

Разработка современных технологий переработки гидробионтов является актуальной задачей рыбной отрасли. Создание технологий производства обогащенных пищевых продуктов, профилактических и медицинских препаратов, полученных из морских гидробионтов, включает в себя исследование состава сырья, идентификацию и количественный анализ его компонентов, изучение физико-химических свойств биологически активных компонентов сырья.

Природный полисахарид хондроитинсульфат, содержащийся в хрящевой ткани, представляет собой сульфатированный гликозаминогликан, макромолекулы которого состоят из чередующихся мономерных звеньев сульфатированного 1Ч-ацетил-0-галактозамина и D-глюкуроновой кислоты.

Линейные макромолекулы хондроитинсульфата помогают сделать хрящ более устойчивым к давлению, которое оказывает на него вес тела, принимают участие в формировании костной ткани, связок, а также в I поддержании упругости и эластичности стенок кровеносных сосудов. Хондроитинсульфат является широко используемой пищевой добавкой для лечения дегенеративно-дистрофических заболеваний суставов и позвоночника, например, артроза и остеохондроза. В настоящее время коммерческие препараты хондроитинсульфата получают главным образом из хрящевой ткани млекопитающих. В последние годы для его производства стали также использовать ткани гидробионтов. Проблемами выделения хондроитинсульфата из различных природных объектов и его применения в медицине и биотехнологии занимаются такие зарубежные ученые как А Kinoshita, Н. R. Morris, К. Sugahara, М. J. С. Miller, С. Е Costello, П. Takai, Т. Копо, С. Amornrut, А. В. Khare, S. А. Houliston, F. Abdel и российские исследователи Т. Н. Шкарина, И. М. Сорокоумов, С. В. Немцев и другие.

Современные методы получения хондроитинсульфатов представляют собой многостадийные процессы экстракции, а выход конечного продукта и его чистота не всегда высоки. Следует отметить, что физико-химические свойства хондроитинсульфатов из гидробионтов, методы их идентификации и количественного анализа, количественные закономерности химического гидролиза практически не изучены. В связи с этим, разработка новых и совершенствование известных технологий выделения хондроитинсульфатов из морских гидробионтов, изучение их физико-химических свойств, методов идентификации и количественного анализа являются актуальными задачами.

Цели работы: изучение содержания и физико-химических свойств хондроитинсульфатов гидробионтов Баренцева моря; разработка и совершенствование методов их идентификации и количественного анализа. Разработка технологии получения хондроитинсульфатов из гидробионтов.

Для достижения поставленных целей решались следующие задачи:

1. Изучение содержания хондроитинсульфата в гидробионтах Баренцева моря: сёмге (Salmo salar), черноротой акуле (Galeus melanostomus), длиннорылой акуле (Deania calceus), полярной акуле (Somniosus microcephalus), северном скате (Amblyraja hyperborean), морском огурце (Cucumaria /rondos а).

2. Разработка методики идентификации и количественного анализа хондроитинсульфата из морских гидробионтов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе солей D-галактозамина и D-глюкозамина в продуктах кислотного гидролиза хондроитинсульфата. Совершенствование методик спектрофотометрического определения D-галактозамина, N-ацетил-О-галактозамина и D-глюкуроновой кислоты.

3. Изучение кинетики кислотного гидролиза хондроитинсульфата. Выбор математической модели, адекватно описывающей процесс кислотного гидролиза.

4. Изучение физико-химических свойств водных растворов хондроитинсульфатов.

5. Разработка технологии получения хондроитинсульфата с использованием ультрафильтрационных мембран; выбор математической модели, адекватно описывающей технологию получения хондроитинсульфата.

6. Разработка нормативной документации, оценка экономической эффективности технологии выделения хондроитинсульфата.

Научная новизна

Впервые разработана мембранная технология выделения хондроитинсульфатов из гидробионтов Баренцева моря: сёмги (Salmo salar), черноротой акулы {Galeus melanostomus), длиннорылой акулы (Deania calceus), полярной акулы (Somniosus microcephalics), северного ската (Amblyraja hyperborean), морского огурца (Cucumaria frondosa).

Разработана методика идентификации и количественного анализа хондроитинсульфата с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе. Методика включает определение D-галактозамина и D-глюкозамина в продуктах кислотного гидролиза хондроитинсульфата. Усовершенствованы методики спектрофотометрического определения D-галактозамина, М-ацетил-Б-галактозамина и D-глюкуроновой кислоты.

Определены спектральные характеристики, фракционный состав, среднемассовая молекулярная масса, поверхностная и оптическая активность хондроитинсульфата из морских гидробионтов; показано влияние концентрации электролита на процесс полиэлектролитного набухания макромолекул полисахарида.

Рассчитаны константы скоростей гидролиза хондроитинсульфата в хлороводородной и серной кислотах. Разработана математическая модель кинетики гидролиза хондроитинсульфата. Предложена методика расчета содержания хондроитинсульфата в исходных объектах с использованием эффективных констант скоростей реакции гидролиза хондроитинсульфата.

Впервые показана возможность использования системы хондроитинсульфат-ферментный препарат в качестве биомаркера.

Практическая значимость

Разработана технология получения хондроитинсульфата из гидробионтов Баренцева моря с применением ультрафильтрации.

Выделены хондроитинсульфаты из хрящевой ткани сёмги {Salmo salar), черноротой акулы (Galeus melanostomns), длиннорылой акулы (Deania calceus), полярной акулы (Somniosus microcephalics), северного ската {Amblyraja hyperborean), а таюке кожных покровов морского огурца (Cucumaria frondosa).

На основании испытаний на базе учебно-экспериментального цеха ФГБОУВПО «МГТУ», (г. Мурманск) разработана и утверждена технологическая инструкция по получению хондроитинсульфата методом ультрафильтрационного разделения, разработаны Технические условия (ТУ) на «Хондроитин сульфат из тканей морских гидробионтов. Полуфабрикат».

На базе учебно-экспериментального цеха ФГБОУВПО «МГТУ» изготовлена опытная партия хондроитинсульфата, произведенная в соответствии с разработанной технологической инструкцией.

Подана заявка на патент «Способ получения хондроитинсульфата из тканей морских гидробионтов».

Основные положения работы, выносимые на защиту:

1. Разработанная технология получения хондроитинсульфата из тканей морских гидробионтов с использованием ультрафильтрационных мембран, имеющих различные молекулярно-массовые пределы задерживания.

2. Разработанные и усовершенствованные методики идентификации и количественного анализа хондроитинсульфатов.

3. Результаты изучения закономерностей кислотного гидролиза хондроитинсульфата.

4. Математическая модель кинетики гидролиза хондроитинсульфата, методика расчета содержания хондроитинсульфата в исходных объектах с использованием эффективных констант скоростей реакции гидролиза хондроитинсульфата.

5. Результаты изучения физико-химических свойств растворов хондроитинсульфата из тканей морских гидробионтов; изучение возможности применения хондроитинсульфатов из морских гидробионтов в качестве биомаркеров.

6. Технологическая инструкция на полуфабрикат хондроитинсульфата из тканей морских гидробионтов и ТУ «Хондроитин сульфат из тканей морских гидробионтов. Полуфабрикат»

7. Оценка экономической эффективности разработанной технологии.

Заключение диссертации по теме «Технология мясных, молочных и рыбных продуктов и холодильных производств», Порцель, Мария Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Впервые изучено содержание хондроитинсульфатов из гидробионтов Баренцева моря: сёмги (Salmo salar), черноротой акулы {Galeus melanostomus), длиннорылой акулы (Deania calceus), полярной акулы (Somniosus microcephalus), северного ската (Amblyraja hyperborean), морского огурца (Cucumaria frondosa). Показано, что наиболее перспективными видами для получения хондроитинсульфата являются полярная акула (Somniosus microcephalus) и северный скат {Amblyraja hyperborean) и сёмга {Salmo salar). Содержание хондротинсульфата в этих гидробионтах соответственно составляет 13,96 %, 15,51% и 10,31% (масса хондроитинсульфата / масса сухого сырья).

2. Разработан метод идентификации и количественного анализа хондроитинсульфата из морских гидробионтов с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе по содержанию D-галактозамина в продуктах кислотного гидролиза хондроитинсульфата. Усовершенствованы спектрофотометрические методики анализа D-галактозамина, ТЧ-ацетил-О-галактозамина и глюкуроновой кислоты. Предложены методы количественного определения хондроитинсульфата в исходном сырье, конечном продукте и пищевых продуктах.

3. Рассчитаны эффективные константы скорости реакции гидролиза хондроитинсульфата с образованием D-галактозамина и разрушения глюкуроновой кислоты при концентрациях НС1 4, 6, 12 моль/дм3. Выбрана математическая модель, адекватно описывающая процесс кислотного гидролиза хондроитинсульфата.

4. Определены среднемассовые молекулярные массы хондроитинсульфатов из гидробионтов Баренцева моря, поверхностная и оптическая активность их водных растворов. Показано, что при добавлении 2

NaCl с концентрацией 0,05 моль/дм полиэлектролитное набухание макромолекул хондроитинсульфата подавляется. Установлена возможность использования системы хондроитинсульфат-фермент в качестве биомаркера.

5. Разработана технология выделения хондроитинсульфата из гидробионтов с использованием ультрафильтрационных мембран, имеющих различный молекулярно-массовый предел задерживания. Определены близкие к оптимальным параметры стадии осаждения хондроитинсульфата из раствора. Показано, что хондроитинсульфат, полученный по технологии с использованием ультрафильтрации, характеризуется более узким молекулярно-массовым распределением и более высокой степенью очистки.

6. Разработана технологическая инструкция для получения хондроитинсульфата из гидробионтов, и технические условия на полуфабрикат «Хондроитинсульфат из тканей морских гидробионтов». Оценена экономическая эффективность разработанной технологии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Порцель, Мария Николаевна, 2011 год

1. Алексеева, Л.И. Хондроитинсульфат (Структум) при лечении остеоартроза: патогенетическое обоснование и клиническая эффективность / Алексеева Л.И., Беневоленская Л.И., Насонов Е.Л. // Терапевтический архив. 2001.- №11. -С. 87-89.

2. Биологически активная добавка для профилактики ревматоидных заболеваний : пат. 1Ш 2250047 / В. М. Быкова, С. В. Немцев, Е. А. Ежова, И. М. Сорокоумов, К. Н. Панов, А. И. Албулов, Е. В. Шмидт. № 2008103435/13 ; заявл. 04.02.08.

3. Вещества поверхностно-активные. Определение содержания неорганического сульфата. Титриметрический метод : ГОСТ 28478-90 Введ. 01.07.91. -М. : Стандартинформ, 2005. 7 с.

4. Государственная фармакопея Российской Федерации часть 1 / под ред. Н. В. Юргель / 12-е изд. М. : Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2007. — 704 с.

5. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа / сост. Бабаян Э.А. и др. /11-е изд. — М. : Медицина, 1987. 336 с.

6. Деркач, С. Р. Практикум по аналитической химии. Классические методы количественного анализа: учеб. пособие для студ. направл. 020100 -Химия и спец. 020101.65 Химия: в 2 ч. / С. Р. Деркач. - Мурманск: Изд-во МГТУ, 2006.-Ч. 1.-124 с.

7. Дерфель, К. Статистика в аналитической химии / К. Дерфель. — М.: Мир, 1994.-268 с.

8. Куценко, С. А. Основы токсикологии / С. А. Куценко. СПб : Фолиант, 2004. - 570 с.

9. Мусил, Я. Современная биохимия в схемах / Я. Мусил, О. Новакова, К. Кунц. М. : Мир, 1984. - 215 с.

10. Никитин, В. Н. Возрастная и эволюционная биохимия коллагеновых структур / В. Н. Никитин, Е. Э. Перский, Л. А. Утевская. -Киев : Наукова Думка, 1977. — 242 с.

11. О контроле качества посторонних примесей в препаратах гепарина : письмо Росздравнадзора от 8 сентября 2008 г. № 03И-578/08.

12. Панасюк, А. Ф. Влияние свободных радикалов на пролиферацию и обмен хондроцитов и на чувствительность клеточного монослоя к действию протеаз / А. Ф. Панасюк, Г. В. Ярошук, Д. Митрович // Вопросы мед. химии. 1995. - Т. 41, № 6. - С. 19-22.

13. Пентин, Ю. А. Физические методы исследования в химии / Ю. А. Пентин, Л. В. Вилков. М. : Мир, 2003. - 683 с.

14. Перевозников, М. А. Тяжелые металлы в пресноводных экосистемах / М. А. Перевоников, Е. А. Богданова. СПб. : ГосНИОРХб, 1999.-228 с.

15. Рациональное питание : Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ : метод, рекомендации МР 2.3.1. 19150-04.

16. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа : ГОСТ 7636-85. — Введ. 01.01.1986. -М.: Изд-во стандартов, 1985. 141 с.

17. Саутин, С. Н. Планирование эксперимента в химии и химической технологии / С. Н. Саутин. — Л., «Химия», 1975. 41 с.

18. Серов, В. В. Соединительная.ткань / В. В. Серов, А. Б. Шехтер. -М. : Медицина, 1981. -312 с.

19. Слуцкий, Л. И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани / Л. И. Слуцкий. Л. : Медицина, 1969. -375 с.

20. Смит, А. Прикладная ИК-спектроскопия : 'пёр. с англ. / А. Смит. -М. : Мир, 1982.-328 с.

21. Способ выделения хондроитинсульфата из животных тканей : пат. 2061485 . А61К35/22 / Васюков С. Е., Кирьянов Н. А. ; заявитель и патентообладатель Васюков С. Е., Кирьянов Н. А.- № 92014708/14 ; заявл. 28.12.1992; опубл. 10.06.1996.

22. Способ экстракции и очистки протеогликана хрящевого типа : пат. 2270023 . МПК6 А61К35/60, А61К35/32 / Такагаки К. ; заявитель и патентообладатель Какухиро КО., ЛТД., Такагаки Кейити № 2002104499/13 ; заявл. 20.02.02 ; опубл. 20.09.2003.

23. Стейси, М. Углеводы живых тканей / М. Стейси, С. Баркер. — М. : Мир, 1965.-324 с.

24. Фащук, Д. Я. Антропогенная нагрузка на геосистему море-водосбор и ее последствия для рыбного хозяйства / Д. Я. Фащук, В. В. Сапожников. М. : ВНИРО, 1999. - 124 с.

25. Хондроитинсульфат из хрящей рыб / И. М. Сорокоумов и др. // Рыбпром. 2007. - № 3. - С. 18-22.

26. Хрящ / В. Н. Павлова и др.. М. : Медицина, 1988. - 317 с.

27. Ягафарова, Г. Г. Биотехнологический способ утилизации нефтешламов и буровых отходов / Г. Г. Ягафарова, М. Мавлютов, В. Б. Барахнина // Горный вестник. — 1998. — № 4 .— С. 43-46.

28. A combined intravesical therapy with hyaluronic acid and chondroitin for refractory painful bladder syndrome/interstitial cystitis / M. Cervigni et al. // International Urogynecology Journal and Pelvic Floor Dysfunction. — 2008. — № 19.-P. 943-947.

29. A metaanalysis of chondroitin sulfate in the treatment of osteoarthritis / B. F. Leeb et al. // Journal of Rheumatology. 2000. - № 27. - P. 205-211.

30. A randomized, double blind, placebo controlled trial of a topical cream containing glucosamine sulfate, chondroitin sulfate, and camphor for osteoarthritis of the knee / M. Cohen et al. // Journal of Rheumatology. — 2003. — №30.-P. 523-528.

31. Age-related changes in the sulphation of the chondroitin sulphate linkage region from human articular cartilage aggrecan / R. M. Lauder et al. // Biochemical Journal. 2001. - № 358. - P. 523-528.

32. Anil B. Khare, Isolating chondroitin sulfate / patent US 20040146993A1 . МГЖ C12P019/30; A61K031/737 / Anil B. Khare, Stephen A. Houliston, Timothy J. Black № 10/704866 ; заявл. 10.10.2003 ; опубл.: 29.07.2004.

33. Antibodies to CD44 enhance adhesion of normal CD34+ cells and acute myeloblasts but not lymphoblastic leukaemia cells to bone marrow stroma / L. J. Bendall et al. // British Journal of Haematology. 1997. - № 98. - P. 828837.

34. Antoni, C. Infliximab for psoriasis and psoriatic arthritis / C. Antoni, B. Manger // Clinical & Experimental Rheumatology. 2002. - № 20. - P. 122125.

35. Arabelovic, S. Considerations in the treatment of early osteoarthritis / S. Arabelovic, Т. E. McAlindon // Current Rheumatology Reports. 2005. - № 7. -P. 29-35.

36. Balassa; Leslie L. Method of processing animal cartilage: patent 4656137, МПК C07G 17/00; A61K 35/32 / № 06/775,492; заявл. 12.09.1985; опубл. 07.04.1987.

37. Bali, J. P. Biochemical basis of the pharmacologic action of chondroitin sulfates on the osteoarticular system / J. P. Bali, H. Cousse, E. Neuzil // Seminars in Arthritis and Rheumatism. 2001. - № 31(1) (aug.). - P. 58-68.

38. Bioiberica (2002) Chondroitin sulfate General Information. Электронный ресурс. : Bioberica. — Режим доступа: http://www.bioberica. com/eng/mp/condroitin.htm. — Загл. с экрана

39. Bjelle, А. О. Fractionation of the glycosaminoglycans of human articular cartilage on estiola cellulose in aging and in osteoarthrosis / A. O. Bjelle, C. A. Antonopoulos // Calcifid Tissue Res. 1972. - Vol. 8, № 3. - P. 237-246.

40. Campo, R. D. The composition of bovine cartilage and bone / R. D. Campo, C. D. Tourtellotte // Biochimica et Biophysica Acta. 1967. — Vol. 141, № 3 - P. 614-624.

41. Caperna, T. Biochemical and molecular roles of nutrients somatotropin alters collagen metabolism in growing pigs / D. Gavelek J. Vossoughi // The Journal of nutrition. 1994. - № . 32. - P. 770-778.

42. Cessi, C. A method for the determination of D-Galactosamine in the presence of D-Glucosamine / C. Cessi, F. Serafini-Cessi // Biochemical Journal-1963. -№88. -P. 132-136.

43. Characteristic hexasaccharide sequences in octasaccharides derived from shark cartilage chondroitin sulfate D with a neurite outgrowth promoting activity / S. Nadanaka et al. // The Journal of Biological Chemistry— 1998. — № 273.-P. 3296-3307.

44. Characterization of oligosaccharides from the chondroitin sulfates. (l)H-NMR and (13)C-NMR studies of reduced disaccharides and tetrasaccharides / T. N. Huckerby et al. // European Journal of Biochemistry- 2001. № 268. - P. 1181-1189.

45. Chondroitin and glucosamine sulfate in combination decrease the pro-resorptive properties of human osteoarthritis subchondral bone osteoblasts: a basic science study / Tat. S. Kwan et al. // Arthritis Research and Therapy. — 2007. № 9.-P. 117.

46. Chondroitin sulfate extracted from the Styela clava tunic suppresses TNF-alpha-induced expression of inflammatory factors, VCAM-1 and iNOS by blocking Akt/NF-kappaB signal in JB6 cells / С. X. Xu et al. // Cancer Letters-2008.-№264.-P. 93-100.

47. Chondroitin sulfate in the management of hip and knee osteoarthritis: an overview / G. Bana, B. Jamard, E. Verrouil, B. Mazieres // Advances in Pharmacology. 2006. - № 53. - P. 507-522.

48. Chondroitin sulfate inhibits the nuclear translocation of nuclear factor-kappaB in interleukin-1 beta-stimulated chondrocytes / C. Jomphe et al. // Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology 2007. - № 102. — P. 59-65.

49. Chondroitin sulfate intake inhibits the IgE-mediated allergic response by down-regulating Th2 responses in mice / S. Sakai et al. // The Journal of Biological Chemistry-2006. -№ 281. P. 19872-19880.

50. Chondroitin sulfate modulation of matrix and inflammatory gene expression in IL-1 beta-stimulated chondrocytes-study in hypoxic alginate bead cultures / F. Legendre et al. // Osteoarthritis and Cartilage. — 2007. — № 27. P. 205-211.

51. Chondroitin sulfate up-regulates the expression of the aggrecan core protein and inhibits that of IL-1 induced matrix proteinases and inflammatory mediators / F. Legendre et al. // Annals of the Rheumatic Diseases. 2006. - № 65.-P. 460-1460.

52. Chondroitins 4 and 6 sulfate in osteoarthritis of the knee: a randomized, controlled trial / B. A. Michel et al. // Annals of the Rheumatic Diseases. 2005. - № 52. - P. 779-786.

53. Chvapil, M. Physiology of connective tissue. Butterworths / M. Chvapil. London et al. : Medical Press, 1967. - 417 p.

54. Clinical and histopathological improvement of psoriasis with oral chondroitin sulfate: a serendipitous finding / J. Verges et al. // Dermatology Online Journal 2005. - № 11. - P. 31.

55. Clinical inquiries: do glucosamine and chondroitin worsen blood sugar control in diabetes? / P. D. Marshall et al. // The Journal of Family Practice. -2006.-№55.-P. 1091-1093.

56. Complement activation triggered by chondroitin sulfate released by thrombin receptor-activated platelets / O. A. Hamad et al. // Journal of Thrombosis and Haemostasis 2008. - Vol. 8.-P. 1413-1421.

57. Conrozier, T. Chondroitin sulfate (CS 4&6) : practical applications and economic impact / T. Conrozier // Presse Med. 1998. — Vol. 27, № 36. — P. 1866-1868.

58. Conrozier, T. Death of articular chondrocytes. Mechanisms and protection / T. Conrozier // Presse Med. 1998. - Vol. 27, № 36. - P. 1859-1861.

59. Contaminated heparin associated with adverse clinical events and activation of the contact system / T. K. Kishimoto et al. // The New England Journal of Medicine. 2008. - № 23. - P. 2457-2467.

60. Davidson, E. Chodroitin, A New Mucopolysaccharide / E. A.J. Davidson, A. K Meyer // Biochem. 1954. - Vol. 211, № 2. - P. 605-611.

61. Deal, C. L. Nutraceuticals as therapeutic agents in osteoarthritis. The role of glucosamine, chondroitin sulfate and collagen hydrolysate / C. L. Deal, R. W. Moskowitz // Rheumatic Disease Clinics of North America. — 1999. — Vol. 25, №2.-P. 379-395.

62. Diagnostic test for mucopolysaccharidosis. I. Direct method for quantifying excessive urinary glycosaminoglycan excretion / С. B. Whitley et al. //Clin. Chem. 1989. - № 35. - P. 374-379.

63. Dische, Z. A new specific color reaction of hexuronic acids / Z. Dische // The Journal of Biological Chemistry 1947. - Vol. 167, № 1. - P. 18998.

64. Effect of chondroitin sulfate on murine splenocytes sensitized with ovalbumin / S. Sakai et al. // Immunology Letters 2002. - № 84. - P. 211-216.

65. Effects of chondroitin sulfate on colitis induced by dextran sulfate sodium in rats / Y. Hori et al. // Japanese Journal of Pharmacology, The — 2001. — №85.-P. 155-160.

66. Effects of chondroitin sulfate on immune response in mice / S. Sakai et al. // Glycobiology. 2004. - № 14. - P.' 1160-1160.

67. Extraction, separation and purification of chondroitin sulfate from chicken keel cartilage / ShuangLi Xiong, AnLin Li, ZhaoMin Wu, Ming Wei //

68. Journal Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering. — 2009. — Vol. 25, № l.-P. 271-275.

69. Fourier transform infrared imaging of focal lesions in human osteoarthritic cartilage / E. David-Vaudey et al. // European Cells & Materials-2005.-Vol. 10.-P. 51-60.

70. Fried, M. Plasmodium falciparum: adhesion of placental isolates modulated by the sulfation characteristics of the glycosaminoglycan receptor / M. Fried, R. M. Lauder, P. E. Duffy // Experimental Parasitology 2000. - № 95. - P. 75-78.

71. Resorbable extracellular matrix for reconstruction of cartilage tissue : patent 6326029. МПК A61K 35/32 / Geistlich et al.. заявитель и патентообладатель Geistlich [et al.]. № 08/894517. заявл.: 22.02. 1996 ; опубл. 10.10.1997.

72. Glade, M. J. Polysulphated glucosaminoglycans accelerates net synthesis of collagen and glycosaminoglycan by arthritic equine cartilage tissues and chondrocytes / M. J. Glade // American Journal of Veterinary Research — 1990. -№51. -P. 779-785.

73. Glucosamine, chondroitin sulfate, and the two in combination for painful knee osteoarthritis / D. O. Clegg et al. // The New England Journal of Medicine 2006. - № 354. - P. 795-808.

74. Gohel, M. Electrophoretic separation and characterization of urinary glycosaminoglycans and their roles in urolithiasis / M. Gohel, D. Shum, P.Tam // Carbohydrate Research 2007. - № 342. - P. 79-86.

75. Hardingham, T. Chondroitin sulfate and joint disease / T. Hardingham // Osteoarthritis and Cartilage. 1998. - № 6 (suppl. A). - P. 3-5.

76. Hardingham, Т. E. Proteoglycans: many forms and many functions / E. T. Hardingham, A. J. Fosang // THE FASEB JOURNAL 1992. - № 6. - P. 861-870.

77. Hardingham, Т. E. Proteoglycans: their structure, interactions and molecular organisation in cartilage / E. T. Hardingham // Biochemical Society Transactions 1981. - № 9. - P. 489-497.

78. Hardingham, T. Proteoglycans / T. Hardingham // Biochemical Society Transactions 1981. - Vol. 9, № 6. - P. 489-497.

79. Hathcock, J. N. Risk assessment for glucosamine and chondroitin sulfate / J. N. Hathcock, A. Shao // Regul Toxicol Pharmacol. 2007. - № 47. -P. 78-83.

80. Hop wood, H. The Molecular-Weight Distribution of Glycosaminoglycans / H. Hopwood, C. Robinson // Biochemical Journal — 1973. — № 135.-P. 631-637.

81. Howell, D.S. Pathogenesis of osteoarthritis / D. S. Howell // The American Journal of Medicine 1986. -№ 80. - P. 24-28.

82. Huckerby, T. N. Recent studies on the chondroitin sulfate/dermatan sulfate polymer systems using NMR spectroscopy / T. N. Huckerby, R. M. Lauder, I. A. Nieduszynski // Abstracts of Papers of the American Chemical Society -2003. -№ 225. U653—1653.

83. Identification of the origin of chondroitin sulfate in "health foods" / S. Sakai et al. // Chemical & Pharmaceutical Bulletin (Tokyo). 2007. - № 55. -P. 299-303.

84. Improved and simple micro assay for sulfated glycosaminoglycans quantification in biological extracts and its use in skin and muscle tissue studies /1. Barbosa et al. / Glycobiology. 2003. - vol. 13, № 9. - P. 647-653.

85. Imoto, T. A simple activity measurement of lisozyme / T. Imoto, K. Yagishita // Agricultural and Biological Chemistry. — 1971. Vol. 35, № 7. — P. 1154-1156.

86. In vitro intestinal degradation and absorption of chondroitin sulfate, a glycosaminoglycan drug / L. Barthe et al. // Arzneimittelforschung. — 2004. — № 54.-P. 286-292.

87. Inhibition of human elastase from PMN leukocytes by glycosaminoglycan polysulphate (arteparon) / A. Baici, P. Salgam, K. Fehr, A. Boni // Biochemical Pharmacology 1980. - № 29. - P. 1723-1727.

88. Inhibitory effects of chondroitin sulfate prepared from salmon nasal cartilage on fat storage in mice fed a high-fat diet / L. K. Han et al. // International Journal of Obesity 2000. - № 24. - P. 1131-1138.

89. Interaction of 1,9-dimethylmethylene blue with glycosaminoglycans / J. E. Stone et al. // Annals of Clinical Biochemistry. 1994. - № 31. - P. 147152.

90. Joint Cartilage Degradation. Basic and clinical aspects / ed. J. F. Woessner, D. S.Howell. N. Y. - Basel - Hong Kong : Marcel Dekker Inc., 1993. -557 p.

91. Kalbhen, D. A. Pharmacological studies on the anti-inflammatory effect of a semisynthetic polysaccharide (pentosan poly sulfate) / D. A. Kalbhen // Pharmacology. 1973. - № 9. - P. 74-79.

92. Kelly, G. S. The role glucosamine sulfate and chondroitin sulfate in the treatment of degenerative joint disease / G. S. Kelly // Alternative Medicine Review 1998. - Vol. 3, № 1. - P. 27-39.

93. Khan, S. R. Modulators of urinary stone formation / S. R. Khan, D. J. Kok // Frontiers in Bioscience 2004. - № 9. - P. 1450-1482.

94. Knudsen, J. F. Potential glucosamine-warfarin interaction resulting in increased international normalized ratio: case report and review of the literature and MedWatch database / J. F. Knudsen, G. H. Sokol // Pharmacotherapy. — 2008. -№28.-P. 540-548.

95. Komano, T. Studies on the chemical structure of mucopolysaccharides / T. Komano Kyoto: Kyoto University, 1962. - p. 106.

96. Kyker, K. D. Exogenous glycosaminoglycans coat damaged bladder surfaces in experimentally damaged mouse bladder / K. D. Kyker, J. Coffman, R. E. Hurst // BMC Urology 2005. - № 5. - P. 4.

97. Lauder, R. M. A fingerprinting method for chondroitin/dermatan sulfate and hyaluronan oligosaccharides / R. M. Lauder, T. N. Huckerby, I. A. Nieduszynski // Glycobiology. 2000. - № 10. - P. 393-401.

98. Lauder, R. M. Analysis of proteoglycans and glycosaminoglycans / R. M. Lauder ; ed. R. A. Myers // Encyclopaedia of Analytical Chemistry. -Chichester : John Wiley & Sons Ltd, 2000. P. 860-895.

99. Maccari, F. Structural characterization of chondroitin sulfate from sturgeon bone / F. Maccari, F. Ferrarini, N. Volpi // Carbohydrate Research -2010.-Vol. 345.-P. 1575.

100. Martin B. Mathews. Sodium chondroitin sulfate-protein complexes of cartilage. I. Molecular weight and shape / Martin B. Mathews, Irene Lozaityte // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1958. - Vol. 74, № 1. - P. 158-174.

101. Meta-analysis: chondroitin for osteoarthritis of the knee or hip / S. Reichenbach et al. // Annals of Internal Medicine 2007. - № 146. - P. 580-590.

102. Modification of copper-catalyzed oxidation of low density lipoprotein by proteoglycans and glycosaminoglycans / G. Camejo et al. // The Journal of Lipid Research- 1991.-№ 32.-P. 1983-1991.

103. Nadanaka, S. Chondroitin sulfate: structure, function, and biosynthesis / S. Nadanaka // Trends in Glycoscience and Glycotechnology 1999. - № 11.-P. 233-238.

104. Nandini, C. D. Role of the sulfation pattern of chondroitin sulfate in its biological activities and in the binding of growth factors / C. D. Nandini, K. Sugahara //Advances in Pharmacology. 2006. - № 53: - P. 253-279.

105. Optimization of shark (Squatina oculata) cartilage hydrolysis for the preparation of chondroitin sulfate / J.-H. Jo // The Food Science and Biotechnology 2005. - № 14 (5). - P. 651-655.

106. Osteoarthritis an untreatable disease? / H. A. Wieland et al. // Nature Reviews Drug Discovery - 2005. - № 4. - P. 331-344.

107. Osterman, M. T. Current and future anti-TNF therapy for inflammatory bowel disease / M. T. Osterman, G. R. Lichtenstein // Current Treatment Options in Gastroenterology — 2007. № 10. — P. 195-207.

108. Oversulfated chondroitin sulfate is a contaminant in heparin associated with adverse clinical events / M. Guerrini et al. // Nature Biotechnology 2008. - № 26. - P. 669-675.

109. Palylyk-Colwell, E. Chondroitin sulfate for interstitial cystitis / E. Palylyk-Colwell // Issues Emerg Health Technol. 2006. - 84. - P. 1-4.

110. Quantification of glycosaminoglycans by reversed-phase HPLC separation of fluorescent isoindole derivatives / Daniel R. Studelska et al. // Glycobiology. 2006. -Vol. 16, № l.-P. 65-72.

111. Recent advances in the structural biology of chondroitin sulfate and dermatan sulfate / K. Sugahara et al. // Current Opinion in Structural Biology — 2003.-№ 13.-P. 612-620.

112. Reissig, J. L. A modified colorimetric method for the estimation of N-acetylamino sugars / J. L. Reissig, J. L. Strominger, L. F. Leloir // The Journal of Biological Chemistry. 1955. - Vol. 217, № 2. - P. 959-966.

113. Retention and removal of a new viscous dispersive ophthalmic viscosurgical device during cataract surgery in animal eyes / T. Oshika et al. // British Journal of Ophthalmology. 2006. - № 90. - P. 485-487.

114. Reissig, J. L. A modified colorimetric method for the estimation of N-acetylamino sugars / J. L. Reissig, J. L. Strominger, L. F. Leloir // The Journal of Biological Chemistry. 1955. - Vol. 217, № 2. - P. 959-966.

115. Salmon-origin chondroitin sulfate : patent US 20030162744, МПК A61K 031/737, C08B 037/00 / M. Takai, H. Kono ; заявитель и патентоообладатель M. Takai, Н. Kono № 220539; заявл. 17.12.2002; опубл. 28.08.2003.

116. Setnikar, I. Antiarthritic effect of glucosamine sulfate studied in animal models / I. Setnikar, M. A. Pacini, L. Revel // Arzneimittel Forschung -1991.-№41.-P. 542-545.

117. Siegmeth, W. Comparison of glycosaminoglycan polysulfate (Arteparon) and physiological saline solution in arthrosis of the large joints. Results of a multicenter double-blind study / W. Siegmeth, I. Radi // Z. Rheumatol. 1983.-№42.-P. 223-228.

118. Spectrophotometric determination of sodium chondroitin sulfate in eye drops after derivatization with 4-amino-3-hydrazino-5- mercapto-l,2,4-triazole /К. Kamata et al. //Analyst. 1995. -№ 120. - P. 2755-2758.

119. Stone Prosthetic articular cartilage: patent US 5306311, МПК A61F 232 / Kevin R Stone et al. ; заявитель ReGen Corporation. № : 809003; заявл: 17.12.1991; опубл. 26.04.1994.

120. Structural and symptomatic efficacy of glucosamine and chondroitin in knee osteoarthritis: a comprehensive metaanalysis / F. Richy et al. // Archives of Internal Medicine-2003.-№ 163.-P. 1514-1522.

121. Structure of a fucoidan from the brown seaweed Fucus evanescens C.Ag. / M. I. Bilan et al. // Carbohydrate Research 2002. - Vol. 337. - P. 719.

122. Sugahara, K. Chondroitin/dermatan sulfate in the central nervous system // К Sugahara, T. Mikami // Current Opinion in Structural Biology 2007. -Vol. 17, № 5.-P. 536-545.

123. Suppression of active collagenase from calcified lapine synovium by arteparon / P. B. Halverson et al. // The Journal of Rheumatology. 1987. - № 14.-P. 1013-1017.

124. Systemic administration of glycosaminoglycan polysulphate (arteparon) provides partial protection of articular cartilage from damage produced by meniscectomy in the canine / H. Hannan et al. // Journal of Orthopaedic Research. 1987. - № 5. - P. 47-59.

125. The interaction of pentosan polysulphate with human neutrophil elastase and connective tissue matrix components / J. L. Andrews, P. Ghosh, A. Lentini, B. Ternai // Chemico-Biological Interactions. — 1983. № 47. — P. 157173.

126. Theoharides, T. C. A pilot open label study of Cystoprotek in interstitial cystitis / T. C. Theoharides, G. R. Sant // International Journal of Immunopathology and Pharmacology. — 2005. — № 18. — P. 183-188.

127. Treatment of knee osteoarthritis with oral chondroitin sulfate / D. Uebelhart et al. // Advances in Pharmacology. 2006. - № 53. - P. 523-539.

128. Tsuneo Okubo. Surface Tension of Biological Polyelectrolyte Solutions / Tsuneo Okubo, Kenji Kobayashi // Journal of Colloid and Interface Science. 1998. - Vol. 205, № 2. - P. 433-442.

129. Varum, K. M. Acid hydrolysis of chitosans / K. M. Varum, M. H. Ottoy, O. Smidsrod // Carbohydrate Polymers. 2001. - Vol. 46, № 1. - P. 89-98.

130. Tully, S. E. Discovery of a TNF-alpha antagonist using chondroitin sulfate microarrays // S. E. Tully, M. Rawat, L. C. Hsieh-Wilson // Journal of American Chemical Society. 2006. - № 128. - P. 7740-7741.

131. Volpi, N. Inhibition of human leukocyte elastase activity by chondroitin sulfates / N. Volpi // Chemico-Biological Interactions. 1997. — № 105.-P. 157-167.

132. Xiong, S. L. Bioactive composition of pig laryngeal cartilage extracts and their free radical-scavenging activity / S. L. Xiong, Z. Y. Jin, A. L. Li // Food Science and Technology International. 2006. — № 12. — P. 371-377.

133. Xiong, S. L. The free radical-scavenging property of chondroitin sulfate from pig laryngeal cartilage in vitro / S. L. Xiong, Z. Y. Jin // Journal of Food Biochemistry. 2007. - № 31. - P. 28-44.