Разработка технологии получения и исследование свойств иммуномодулирующего препарата из тимуса северного оленя тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Матвеев, Юрий Александрович

• Матвеев, Юрий Александрович
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Матвеев, Юрий Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Анатомическое строение и возрастные изменения тимуса северного оленя.

1.2.Современное представление о тимусе как эндокринном и лимфоидном органе.

1.3 Иммуномодулирующие вещества и препараты, получаемые из тимуса.

1.4 Способы получения иммуномодулирующих препаратов из тимуса.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии получения и исследование свойств иммуномодулирующего препарата из тимуса северного оленя»

Актуальность темы. Широкое распространение и появление новых инфекционных заболеваний, возникновение антибиотикорезистентных штаммов патогенных микроорганизмов, а также развитие тяжелых осложнений у иммунодефицитных больных с инфекционной и неинфекционной патологией вызывают настоятельную необходимость использования при лечении животных и человека иммуномодулирующих препаратов (13, 20, 27, 28, 36, 45, 77).

В настоящее время медицинская промышленность выпускает такие инъекционные формы иммуномодулирующих препаратов как Т-активин, Тималин и Тимоптин. Производство этих иммуномодуляторов представляет собой сложный процесс выделения комплекса биологически активных веществ (БАВ) включающий в себя несколько стадий получения промежуточных продуктов, таких как: получение порошка, высола, обессоленного комплекса гель-фильтрацией с последующей его лиофилизацией или осаждением ацетоном, лиофилизация выделяемого гель-хроматографией пика и приготовление жидкой (Т -активин) или сухой (Тимоптин) инъекционной формы препарата на основе лиофилизированной субстанции (6, 7).

Основными недостатками данных способов получения иммуномодулирующих препаратов являются: трудоемкость, использование ацетона и получение на стадиях отходов требующих специальной утилизации или регенерации.

В промышленности, для производства иммуномодулирующих препаратов действующих на Т-систему иммунитета, в соответствии с ГОСТ 21192 «Железы зобные замороженные» (22) до 1990 года использовали тимус телят и молодняка крупного рогатого скота (КРС) до 1 года. В 1990 г, по постановлению Госстандарта № 1723 от 21.06.90 г, в вышеуказанный 6

ГОСТ на «Железы зобные замороженные» с 08.01.91 г было внесено изменение, по которому для медицинских целей разрешалось использовать тимус, собранный от КРС в возрасте до трех лет. Использование такого сырья привело к резкому снижению качества ряда иммуномодулирующих препаратов в частности, таких как Тимоптин и Тимактид (57).

В последние годы опубликованы работы, в которых тимус северного оленя был использован для получения препарата Т-активин (11) и «Олевил» (8, 66, 67). Необходимо отметить, что технология получения препарата «Олевил» имеет те же недостатки, что и вышеуказанные технологии получения Т-активина и Тимоптина. Работы, свидетельствующие об изучении изменений свойств тимуса северного оленя - немногочисленны и не содержат достаточно сведений о составе, физико-химических и технологических его свойствах (19,40, 41, 50, 59, 60).

В этой связи изучение практически неиспользуемого источника сырья, каким является тимус северного оленя и разработка современной технологии получения на его основе иммуномодулирующего препарата, приобретает особую актуальность.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы заключается в изучении предполагаемого источника сырья - тимуса северного оленя и проведении сравнительной его оценки с аналогичным сырьем, получаемым от крупного рогатого скота, разработке на основе выбранного источника сырья технологии получения иммуномодулирующего препарата и проведении сравнительной оценки по биологическому действию полученного препарата с Т-активином и Тимоптином. Исходя из вышеизложенной цели, нами были определены следующие задачи исследования: 7

- определить возрастную и сезонную категорию северных оленей, тимусы которых могут быть использованы для получения иммуномодулирующего препарата;

- проанализировать способы получения иммуномодулирующих препаратов из тимуса и на их основе разработать технологию получения из тимуса северного оленя иммуномодулирующего препарата, используя более эффективные современные методы очистки БАВ;

- провести сравнительный физико-химический и биологический анализ выделенного комплекса БАВ с аналогами, наработать серии препарата и провести их тестирование;

- разработать нормативно-техническую документацию на исходное сырье, получение препарата и его испытания;

- провести испытания иммунмодулирующего действия препарата на лабораторных животных.

Научная новизна работы. Впервые были проведен и научно обоснован выбор возрастной и сезонной категории животных, тимус которых может служить потенциальным источником для получения иммуномодулирующего препарата. Определено, что товарно-технологические свойства тимуса зависят от возраста животных и сезона их промышленной заготовки.

Научно обоснованы и последовательно отработаны все технологические этапы выделения и очистки комплекса БАВ из тимуса северного оленя, охарактеризован состав комплекса БАВ, определены его физико-химические свойства и иммунологические свойства.

В результате научных исследований разработана простая и эффективная технология получения иммуномодулирующего препарата из практически не используемого источника сырья - тимуса северного оленя и 8 доказано, что по своим биологическим свойствам разработанный препарат не уступает аналогам, получаемым из тимуса крупного рогатого скота.

Научно - практическое значение. В научном плане проведенные исследования расширяют существующие представления о принципиальной возможности использования тимуса северного оленя не только в качестве дополнительного сырьевого источника для технологической переработки, но и получения на его основе препарата отличающегося от препарата «Олевил».

Практическая значимость работы заключается в том, что в результате проведенных исследований разработаны:

-технологическая инструкция по сбору, первичной обработке и консервированию тимуса северного оленя на пунктах по производству оленины;

-технические условия на приемку тимуса северного оленя замороженного;

-временная технологическая инструкция по производству препарата «Олетим» из тимуса северного оленя;

-проект технических условий на иммуномодулирующий препарата «Олетим»;

-проект наставления по применению препарата «Олетим».

Основные положения, выносимые на защиту. По результатам выполненных исследований на защиту выносятся следующие положения:

-результаты исследований тимуса северного оленя как потенциального источника сырья для получения на его основе иммуномодулирующего препарата;

-результаты разработки технологии получения иммуномодулирующего препарата из тимуса северного оленя; 9

-новая, отличающаяся от препаратов взятых за основу, лекарственная форма препарата созданная из тимуса северного оленя;

-результаты исследований иммуномодулирующего действия разработанного препарата на лабораторных животных.

10

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Матвеев, Юрий Александрович

5. ВЫВОДЫ

1.На основании оценки товарно-технологических свойств тимуса северного оленя проведен возрастной и сезонный подбор сырья для получения на его основе иммуномодулирующего препарата, в результате чего установлено, что изменчивость тимуса ярко выражена в зависимости от возраста и сезона убоя. Показано, что лучшим источником сырья для использования в производстве иммуномодулирующих препаратов является тимус, собранный от северного оленя в возрасте до 4,5 лет в период убоя с октября по декабрь.

2. Установлены технологические параметры выделения комплекса биологически активных веществ из тимуса северного оленя в частности:

- использовать при гомогенизации фарша соотношение сырье : водно-солевой раствор 1:2, а при в соотношении 1:5, при этом длительность экстрагирования не превышает 1 часа;

- для выделения комплекса биологически активных веществ обладающих исммуномодулирующими свойствами, находящихся в пределах молекулярных масс от 1,0 до 10,0 кД использовать ультрафильтрационные мембраны с соответствующей селективностью;

- для стабилизации активности полученного препарата и придния ему товарного вида добавлять в задерживаемую фракцию Б-маннит в количестве 17-23 мг/мл.

Выход препарата по разработанной технологии, с учетом технологических потерь на стадиях, составляет 985 доз из 1 кг исходного сырья.

3.Выделенный комплекс биологически активных веществ, составляющий основу полученного препарата, отличается от Т-активина наличием вещества с молекулярной массой от 6 до 10 кД, от Тимоптина наличием веществ с молекулярной массой 7-8 кД и практически полным

Ill менее 0,2 %) отсутствием вещества с молекулярной массой менее 1,0 кД, без ухудшения качества препарата.

4.Иммунологические исследования действия лекарственной формы препарата, наработанного из тимуса северного оленя по новой технологии, показали, что введение препарата здоровым мышам с возрастной инволюцией тимуса и мышам, с иммунодефицитом вызванным введением циклофосфана вызывает увеличение: общего количества лимфоцитов, лимфоцитов класса Т- и В-, а также Та-РОК и Ва-РОК; количества иммуноглобулинов класса lgG, IgA и lgM и фагоцитарной активности нейтрофилов.

5.Установлено, что препарат, наработанный из тимуса северного оленя, как и препараты Т-активин и Тимоптин, обладает иммуномодулирующей активностью, а по ряду показателей, при использовании в равных дозах превышает аналог (индекс стимуляции). После проведения клинических исследований он может быть использован в ветеринарной практике как лечебное и профилактическое средство для повышения резистентности организма животных, стимуляции иммунных процессов и специфической активации иммунокомпетентной системы.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

На основании проведенной научно-исследовательской работы были разработаны:

1. Технологическая инструкция по сбору, первичной обработке и консервированию тимуса северного оленя, утвержденные генеральным директором ООО «Северные технологии ЭКО» 25.06.1999 г.

2. Технические условия на приемку тимуса северного оленя замороженного, утвержденные генеральным директором ООО «Северные технологии ЭКО» 15.10.2000 г.

112

3. Временная технологическая инструкция на производство препарата «Олетим» из тимуса северного оленя, утвержденная генеральным директором ООО «Северные технологии ЭКО» 24.05.2001 г и согласованная с ВНИТИБП и ООО «БИОС-НОБИ».

4. Проект технических условий на препарат «Олетим» и проект наставления по применению препарата «Олетим» в ветеринарии.

113

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Матвеев, Юрий Александрович, 2001 год

1. Абатурова Е.А. Иммунологическое значение вилочковой железы и фабрициевой сумки. // Сельское хозяйство за рубежом / Животноводство, М., 1970,№2,-С. 30-34.

2. Арион В.Я. Иммунобиология пептидов тимуса: Т-активин. // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология, М., 1987, №4, - С. 98104.

3. Арион В.Я. и др. Разделение и физико-химическая характеристика некоторых компонентов Т-активина (фракция АТФ). // Коррекция нарушений иммунитета в клинике и эксперимент / Сб. научн. тр., М., 1985, - С.12-16.

4. Арион В.Я. Иммунобиология гормонов тимуса. Киев, 1989, - С. 103125.

5. АС СССР № 1255136. А61К 35/55, 1984.

6. АС СССР № 1474923, А61К 35/26, 1986.

7. АС СССР № 1737798, А61К 38/00, 1995.

8. Буров Ю.В., Робокидзе Т.Н., Суханова С.А., Давыдова Л.Е. Изучение влияния тимоптина на поведение экспериментальных животных. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. М., 1996, -121, №3 -С. 285-287.

9. Волегов А.И., Туринцев С.Н. и др. Влияние тимозина и имплантации аллогенных тканей на химический канцерогенез. // Полиферация и рак. / Мед. биол. пробл., Саратов, 1988, - С. 102-103.114

10. Владимиров JI.H. Разработка технологии производства биологически активных веществ из эндокринных желез северного оленя. // Автореф. диссертации. М., 1999, - 32 С.

11. Внуков В.А. Получение и сравнительная характеристика тимозина морских млекопитающих. // Автореф. диссертации. -М., 1986, 16 С.

12. Воронин Е.С., Девришов Д.А. Иммунотерапия острых респираторных заболеваний (ОРЗ) телят. // Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с.-х. животных. М., 1988, - С. 102-103.

13. Воробьева A.A., Медуницин Н.В. Новые принципы и методы создания иммунобиологических препаратов. // Медицина, М., № 10, 1999, -С. 16-17.

14. Вышинский Ф.С., Лисицин Е.А. Белковые фракции тимуса и фабрициевой сумки у птиц. // Макро- и микроструктура тканей в норме, патологии и эксперименте. М. 1980, вып. 7, - С. 49-52.

15. ВФС 42-155-85 « Раствор Тактивина 0,1 % для инъекций»

16. ВФС 42-1837-88 «Тимоптин для инъекций».

17. Гасанова З.Г., Сячин И.И. Основные товарно-технологические свойства тимуса северного оленя. // Товароведение и технология животного сырья. Сб. научн. тр. МГАВМиБ им. К.И. Скярмбина М., 1997, - С. 32-35.

18. Галактионов В.Г. Как работает иммунная система. // Соровский образовательный журнал, Соровск, 1997, № 2, - С. 2-9.

19. Голотвеева A.A., Куциди Д.А., Санкин Л.Б. Лабораторный практикум по технологии кожи и меха. // М., 1982, - 145 С.115

20. ГОСТ 21192-75 «Железы зобные замороженные». Издательство Стандартов, М., -8 С.

21. Государственное Киевское предприятие по производству бактерийных препаратов «Биофарма»// Официальный сайт www.biofarma.kiev.ua.

22. Гриневич Ю.А., Чеботарев В.Ф. Иммунобиология гормонов тимуса. Киев, Здоровье, 1989 -152 С.

23. Государственная Фармакопея СССР. Издание 11, вып.1, М., 1987, -336 С.

24. Государственная Фармакопея СССР. Издание 11, вып.2, М., 1990, -400 С.

25. Гусева Е.В., Балахина В.И. Иммуномодуляторы. Владимир, 1995, -154 С.

26. Девришов Д. А. Разработка и изучение свойств иммуномодуляторов и биологических препаратов для профилактики и лечения болезни молодняка сельскохозяйственных животных. // Автореф. диссертации, М., 2000, - 53 С.

27. Житкевич Т.И., Мурзенок П.П., Гурин В.Н. Полиферативная активность клеток тимуса мышей при тепловом и холодовом стрессе. // Стресс и иммунитет, Ростов на Дону, 31 августа-1 сентября, 1989. М., - С 119-120.

28. Журавская И., Алехина Л., Отряшенкова Л. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов. М.: Агропромиздат, 1985, - 296 С.

29. Иванов В.П. Выявление и анализ биологических свойств новых иммуномодулирующих пептидов. //Автореф. дисертации, М., 1992, - 23 С.

30. Инструкция: Контроль на механические примеси сухих лекарственных средств для инъекций применяемых в виде растворов. М., 1989,- 19 С.116

31. Кемелева З.И. Влияние пептидов тимуса и костного мозга на иммунитет. // Тезисы докл. Всесоюзной конференции / Стресс и иммунитет. -Л., 1989, С.187.

32. Ковальчук JI.B. Тимус зависимая иммунологическая недостаточность. // Автореф. диссертации, М., 1983, - 32 С.

33. Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г., Архипов A.B., Белов А.Д. и др. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии. // М.; Агропромиздат, 1985 - 278 С.

34. Коромыслов Г.Ф., Полоз Д.Д., Крюкова В .Я. и др. Применение иммуностимуляторов в ветеринарии. // Сб. науч. тр. ВНИИ экспериментальной санитарии, М., 1985, № 62, - С. 3-8.

35. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология, М., Агропромиздат, 1986, - 266 С.

36. Короткова М.Н., Санина И.В., Арион В.Я. Анализ иммунорегуляторных пептидов тимуса методом ВЭЖХ. // Вопросы мед. Химии, М., 1989, т. 35, № 4, - С. 38-42.

37. Лефковитс И., Пернис Б. Методы исследований в иммунологии.// -М., Мир, 1981,-528 С.

38. Ли O.A. Морфология вил очковой железы при инволюции у пантовых оленей // Науч. техн. бюл. СО ВАСХНИЛ, М., 1984, № 28, -С. 2733.

39. Ли O.A. Видовые и возрастные морфологические показатели вилочковой железы маралов. // Автореф. диссертации, -М., 1986. -38 С.

40. Линдер Д.П, Арион В.Я., Алейникова Н.В. и др. Влияние Т-активина на репродукцию и миграцию тимоцитов. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. М., 1983, № 4, - С.86-88.117

41. Линдер Д.П., Арион В .Я., Поберий И.А. и др., Структурные доказательства имунорегуляторных свойств Т-активина. // Иммунология, -М., 1985, №5,-С. 51-54.

42. Лопухин Ю.М. Клинический опыт коррекции иммунной системы активным фактором тимуса (Т-активин). // Актуальные вопросы иммунологии / Тезисы докл. Всесоюзн. конф., М., 1981, - С.41-42.

43. Лопухин Ю.Н., Петров Р.В. Коррекция нарушений иммунитета в клинике и эксперименте // Сборник научных трудов, М., 1985, - С.3-5.

44. Малинин В.В. Коррекция пептидными препаратами тимуса и костного мозга вторичных иммунодефицитных состояний. // Автореф. диссертации, СПб, 1992, - 22 С.

45. Малинина В.В., Хавинсон В.Х. Сравнительная характеристика иммуномодуляторов. // Иммунология, М., 1999, № 2, - С.23-25.

46. Малыжев В.А., Никитенко A.M., Заика Л.А., Гирявенко Е.Я. Об участии тимуса в регуляции полиферации Т-лимфоцитов. // Сельскохозяйственная биология, М., 1986, № 10, - С. 93-95.

47. Мешкова Н.П., Северина С.Е. Практикум по биохимии. М., 1979, -430 С.

48. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Выделение из костного мозга, лимфоцитов, из тимуса полипептидов, регулирующих процессы межклеточной кооперации в системе иммунитета. // Докл. АН СССР, -М.,1981, т.261, № 1, С.235-23.118

49. Морозов В.Г. Факторы тимуса и его влияние на иммунологичечскую реактивность организма. // Автореф. диссертации, Л., 1979,- 17 С.

50. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Характеристика и изучение механизма действия фактора тимуса (тимарина) // Докл. АН СССР М., 1978, т.240, № 4, - С.1004-1007.

51. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Выделение, биологическая активность и механизм действия регуляторных пептидов тимуса и костного мозга. Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике. // Тезисы докл. Всесоюзного симпозиума, М, 1983, - С. 106-107.

52. Натвига Д., Перлман П., Вигзель X., Лимфоциты. Выделение, фракционирование и характеристика. М., Медицина, 1980, - 64 С.

53. Никольский И.С. Исследование условий, способствующих выявлению в экстракте тимуса гуморального фактора, стимулирующего антителогенез. // Автореф. диссертации, К., 1975, - 21 С.

54. Отчет Государственного института кровезаменителей и медицинских препаратов (ГИКиМП) за 1995 год. М., 1995, - 48 С.

55. Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. Наука,-М, 1985, 530 С.

56. Пак Т.В. Технология получения и исследования свойств биологически активных веществ из фабрициевой сумки (бурсы) кур. // Диссертация, Щелково, 2000, -135 С.

57. Патент СССР № 1836954, А61Л35/28, 1993.

58. Патент СССР № 1077089, А61ЛЗ5/28, 1995.

59. Петров Р.В. Структура и функции иммуномодулирующих пептидов // Итоги науки и техники / Иммунология, М., 1988, т. 22, - С. 68-90.

60. Платонов И.А. Влияние фракций тимозина на развитие компрессионального отёка набухания головного мозга. // Экспериментальная и клинич. Фармакология, М., 1998, т. 61, № 4, - С. 51-53.

61. Протопопов Б.В. Иследование иммуноактивных свойств гуморальных факторов тимуса северного оленя. // Автореф. диссертации, -Новосибирск, 1991, 22 С.

62. Протопопов Б.В. Исследование иммуноактивных свойств гуморальных факторов тимуса северного оленя. // Диссертация, -Новосибирск, 1991, 167 С.

63. Решетников И.С. Морфологические исследования вил очковой железы Якутского помесного крупного рогатого скота в возрастном аспекте. // Автореф. диссертации, Якутск, 1966, - 21 С.

64. Решетников И.С. Морфологические исследования вил очковой железы северного оленя в онтогенезе. // Диссертация, М., 1986, - 427 С.

65. Скобельцина Е.С., Столяров Т.В. и др. Противоопухолевая активность гуморального фактора тимуса. // Рига, 1982, - С. 21-28.

66. Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике. Под редакцикй В.В. Меньшикова, М., Медицина, 1987, - 368 С.120

67. Справочник фирмы Райхельт Хемитехник Гмб+Ко. Внешторгиздат, -М., 1982,- 58 С.

68. Струков С.М., Киреева Е.Г. и др. Иммунорегулятор альфа-1-тимозин-ингибитор ферментативной активности альфа-1-тромбина. // Докл. АН СССР, 1989, М., № 1, - С. 306.

69. Сухинина T.JI. Результирующие свойства пептидов тимуса и бурсы Фабриция при иммунодепрессии у птиц. // Бюл. Экспериментальной биологии и медицины, М., 1990, т. 59, № 2, - С. 169-172.

70. Туркальне Т.С., Муцениеце А.Я., Гарклава Р.Р., Лея Д.П., Липарте A.A. наш опыт применения Т-активина и Тимоптина в онкологии // Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума / Актуальные вопросы иммунотерапии опухолей, Рига, 1988, - С. 39-42.

71. Федоров Ю.Н.,. Верховский O.A. Иммунодефицита домашних животных. М., 1996, - 94 С.

72. Хаитов Р.Н., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения. // Клиническая медицина, М., 1996* - С. 7-13.

73. Чеснокова В.М., Игнатьева Е.В. Влияние Т-активина на функциональную активность надпочечников // Стресс и иммунитет / Тезисы доклада Всесоюзной конференции стресс и иммунитет, Л., 1989, С.70.

74. Чеснокова В.М., Игнатьева Е.В. «Роль тимуса в адаптации животных» // Стресс и иммунитет / Тезисы доклада Всесоюзной конференции стресс и иммунитет, Л., 1989,- С.78.121

75. Чернохвостова Е.В. Количественное определение иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в геле. // Методические рекомендации. М., 1975, - 28 С.

76. Чиркунов А.В. Влияние тималина, тимогена и вилона на некоторые показатели иммунитета и гемостаза. // Автореф. диссертации, Чита, 2000, -19 С.

77. Ярилин А.А. Комплексное тестирование активности препаратов тимуса in vitro. // Иммунология, М., 1986, № 3, - С.8-12.

78. Bach J.F., Dardenne М., Goldstein A.L., Guha A., White. А. "Appearance of T-cell markers in bone marrow rosette forming cell after inoculation with thymosin, a thymic С hormone". // Proc. Nat. Acad. Sci. USA", 1971, vol.68, p.2734-2738

79. Brelynska Renata "Thymic nurse cells: devision of thymocytes within complexes" // Cell and Tissue Res. -1989.vol. 258, №3, p. 637-643/

80. Bubenic G. A. "Collog in Cent." // Etud. boil. anim. sauvag. chize, 1-5 jull 1985. Paris, 1986, p.461-474/

81. Boehmer H., Kisilow P. "The Thyms selects the useful, neglects the useless and destroys the harmful" // Immunol. Today 1989, vol.10, № 2, p. 5761/

82. Caldarella J. "A peptide related to thymosin ab isolated from calf thymosin fraction 5". //Natl. Acad. Sci USA 80 (24), 1983, p.7424-7427/122

83. Chakir J., Rouabhia M., Deschaux P. "In vitro effect of methionine-enkephalin and thymosin on murine expression of Thy 1-2 antigen" // Immunopharmacology, 1989, vol. 17, №1, p. 31-35.

84. Crouse D., Jordan R., Sharp J. "Thymic microenvironment" // Curr. Methodol. Experim. Hematol. Basel, e. a., 1984, p. 293-320.

85. Effros R. at al. "The effect of thymosin al, on immunity to influrnza in aged mice". //AGING: Immunol, and Infec. Disease, 1989, № 1, p.1201-1204.

86. Engebretsen, Rolf. H. "Topography of internal organs of reindeer (Rangifer tar ndus)". // Topographic anatomy appl. In the hunting of reindeer. Copengagen, 1975.

87. Fuller P. et al. "Somatostatin gene expression in the thymus gland" // J. Immunol. 1989, 143, № 3, p.1015-1017.

88. Goff Belinda Lawler, Roth J. A. Arp L. H., Jncefy Genevieve S. "Clin. And Exp. Immunol.", 1987, vol. 68, N 3, p. 580-587.

89. Goldstein A.L., Low T.L., Rossio J.L. "Recent developments in the chemistry and biology of tymosin". // In: Immunomodulation and control of neoplasie by adjuvant therapy M.A. Chirigos ed. New York: Raven Press, 1978, p.281-291/

90. Goldstein A. at al. "Preparation, assay and partial purfication of a thymic linphocytopoietic factor (Thymosin)". // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, vol.56, p.1010-1016/

91. Goldstein A.L., Low T.L. at al., "Thimosin al: isolation and sequence analysis of an immunologically active thymic polipeptide". // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, vol. 74, № 2, p.725-729.

92. Goldstein A. at al. "Purification and biological activity of Thymosin, a hormone of thymus gland". // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1972, vol. 69, № 7, p.1800-1803.123

93. Gravenstein S. at al. "Augmentation of influenza antibodu response in elderly men by thymosin alpha one." // Soc., 1989, v. 37, № 1, p. 155-160.

94. Grossman H. "Personal communication".// Inter. May, 1997, p. 18.

95. Haritos A. A., Yioloris P. P., Heimer E. P., Felix A. H., Rosemeyer M. A. "On the molecular size of thymosine" / FEBS Lett, 1987, 218, № 1, p. 107-112.

96. Handzel ZT et al. "mmuno-reconstitution of T-cell impairments in asymptomatic male homosexuals by thymic humoral factor". // Intren J. Immuno-pharmacol, № 9, 1987, p. 165-173.

97. Haritos A.A. at al. "Protymosin a: isolation and properties of the major immunoreactive from of thymosin oci in rat thymus". // Nat. Amer. Sciences, vol.81, Nr.4, 1984, p.1008-1011.

98. Kendall M.D., Normann at all. "A new radioimmunoassay for the thimic peptide thymulin, and its application for measuring thimulin in blood samples" // I. Immunol. Meth. 1990, vol.127, №2 p. 255-262.

99. Kimoto H., Shirosawa T., Taniguch M., Takemori T. "B cell precursors are present in the thymus during early development". // Immunol. 1989, vol.19 № 1. p.97-104.

100. Kyewski B. "A cloaer look at T cell differentation" // Lab. Invest. -1988, 59, № 5, p.561-563.

101. Mota I. "O timo: um orgao de misterios". // Cienc. E cult., 1989, vol. 41, 1 9, p.859-867.

102. Mutchnic M. et al. "Thymosin treatment of chronic hepatitis B: a placebo-controlled pilot trial". // Hepatology № 14, 1991, p.409-415.

103. Nilssen Kjell J. Bye Karstein, Sandsfiord Johan A. "Seasonal changes in T3, FT4, and Cortisol in free-ranging svalbard reindeer (Rangifer tarandus plathyrhynchus)" / Gen. And Comp. Endocrinol., 1985, vol. 59, N2, 210-213.

104. Schuurman HI. "The thymus in AIDS". // Amer. J. Pathol. № 134, 1989, p.1329-1338.

105. Schuloff H. S. "Thymosin fnd immunopathology fo aging" // Fed. Proc., 1974, vol. 33, № 9, h/ 2053-2056.

106. Trainin N. et al. "Thyumic function".// Lancet № 338, 1991, p.1533.

107. Trainin N. "Prospects of AIDS therapy by thymic humoral factor, a thymic hormone". // Nat Immun Cell Growth Regul № 9, 1990, p. 155-159.

108. Tzehoval E., Sztein Marcelob et al. "Thymosins ai and (34 potentiate the antigen presentatig capacity of macrophages". // Immunopharmacology 1989, vol. 18, №2, p. 107-113/

109. Valesini G. "A calf thymus acid lysate improves clinical symptoms and T-cell defects in early stages of HIV infrction: second report". // European J Cancer and Clin Oncol, 1987, № 23, p. 521-531.

110. Zell R. A. "TodeskuP in Thymus" // Bild Wiss. 1989, 26 № 11, p.62-75.

111. ZohcE.-"Thethymic hormones"//Hormones, 1971, v.2, N 4, pp. 2351. ТИ -0019-10-00 С.6

112. Предельно допустимые нагрузки для женщин при подъеме и перемещении тяжестей вручную не должна превышать:- 15 кг при подъеме и перемещении тяжестей вручную при чередовании с другой работой,-10 кг при подъеме на высоту более 1,5 м.

113. Суммарно допустимая масса перемещаемого женщинами вручную груза за смену (продолжительность 8 часов) на расстояние более 9 м не должна превышать 7000 кг.

114. Помещение для хранения замороженного сырья должно соответствовать категории "В" по взрывной, взрывоопасной, противопожарной и пожарной опасности.

115. При работе с замороженным сырьем рабочие должны быть обеспечены дополнительно:- защитными рукавицами;- валенками;- хлопчатобумажными куртками и брюками на утепленной подкладке.

116. ИСПОЛНИТЕЛИ: Консультант лаборатории биологически активных соединений (БАС) ООО «Северные технологии ЭКО», кандидат биологических наук

117. Ведущий специалист лаборатории (БАС) ООО «Северные технологии ЭКО»

118. Гл. ветеринарный врач СТ «Ижемка»1. ВТИ № 5 С. 13

119. Соблюдать Типовую инструкцию № 6/29 «По электробезопасности для лиц, не имеющих специальной электротехнической подготовки».

120. Соблюдать технологическую инструкцию № 24 «По режиму работы и безопасному обслуживанию сосудов, работающих под давлением».

121. Соблюдать осторожность при работе со стеклянной посудой. Осколки разбитой посуды собирать с помощью щетки и совка.

122. Порядок приема и сдачи выполненной работы и производственныхпомещений

123. Технолог контролирует выполнение задания в полном объеме, обеспечение сырьем и вспомогательными материалами очередной наработки; проверяет состояние рабочих мест, работу оборудования. Заполняет документацию о приеме выполненной работы.

124. Обязанности обслуживающего персонала и ответственность занарушение инструкции. 5.1.Обслуживающий персонал обязан соблюдать требования настоящей инструкции.

125. Персонал несет ответственность за нарушение данной инструкции в соответствии с правилами внутреннего трудового распорядка предприятия и в установленном законом порядке.

126. Консультант лаборатории биологически активных соединений (БАС) «Северные технологии ЭКО», доктор биологических наук

127. Ведущий специалист лаборатории БАС «Северные технологии ЭКО»

128. Заведующий отделом обеспечения качества лекарственных средств для животных Всероссийского научно-исследовательского и технологического институтабиологической промышленности1. ВНИТИБП) РАСХН, докторбиологических наук

129. Зав. лабораторией ВНИТИБП, кандидат биологических наук»1. А.Н. ПАНИН 2001 г.1. Технические условия №с.10инструкцией по применению помещают в картонную пачку по ОСТ 64-7

130. Групповая и транспортная маркировка в соответствии с ГОСТ 17768

131. Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-80. Хранение.

132. В сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 20 °С Срок годности. 3 года. Иммуномодулирующее средство.343.84.80.

133. Консультант лаборатории биологически активных соединений (БАС) «Северные технологии ЭКО, доктор биологических наук, профессор1. РАЗРАБОТЧИКИ:

134. Ведущий специалист лаборатории БАС «Северные технологии ЭКО»

135. Заведующий отделом обеспечения качества лекарственных средств для животных Всероссийского научно-исследовательского и технологического институтабиологической промышленности

136. ВНИИТИБП) РАСХН, доктор биологических наук1. В.И. Еремец

137. Заведующий лабораторией ВНИИТИБП, кандидат биологических наук1. Л.А. Ковальская

138. Заведующий отделом контроля качества ООО «БИОС-НОБИ»1. Т.В. Ильина

139. Главный технолог ООО «БИОС-НОБИ»1. Г.А. Демина1. ПРОЕКТ1. НАСТАВЛЕНИЕпо применению ОЛЕТИМА (Oletimum) в ветеринарии Регистрационный номер

140. ПОБОЧНОЕ ДЕЙСТВИЕ Олетим не вызывает побочных реакций.

141. ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ Для применения олетима противопоказаний нет.

142. ФОРМА ВЫПУСКА Олетим выпускают в виде стерильного, лиофилизированного порошка в герметически закрытых стеклянных флаконах по 200 и 600 мкг.

143. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ Препарат следует хранить в сухом защищенном от света месте при температуре не выше 20 °С. РАЗРАБОТЧИКИ:

144. ООО «Северные технологии ЭКО»

145. Всеробеийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (ВНИИТИБП) РАСХН

146. Всероссийский научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов

147. Оренбургский Государственный аграрный университетsiaSft1. S Ч1. АКТ -rv'^f/1. УТВЕРЖДАЮ»втор СПК «Победа» Зубанков В,Й.гД/2001 г.о проведении производственных испытаний иммуномодулирующего средства из тимуса северного оленя олетима1. Я,"

148. Применение новорожденным телятам олетима способствовало увеличению на 20-40% количества Т- и В-лимфоцитов, бактерицидной и лизоцим-ной активности сыворотки крови.