Разработка технологии получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек овса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Гладышева Евгения Константиновна

• Гладышева Евгения Константиновна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Гладышева Евгения Константиновна

Введение

1 Аналитические исследования

1.1 Характеристика бактериальной целлюлозы

1.2 Продуценты бактериальной целлюлозы

1.3 Механизм биосинтеза бактериальной целлюлозы

1.4 Состав питательных сред

1.4.1 Синтетические среды

1.4.2 Питательные среды из отходов пищевых производств

1.4.3 Альтернативные питательные среды из целлюлозосодержащего сырья

1.4.4 Пути трансформации целлюлозосодержащего сырья в раствор сахаров

1.5 Влияние условий культивирования на биосинтез бактериальной целлюлозы

1.5.1 Концентрация источника углерода в питательной среде

1.5.2 Аэродинамические условия

1.5.3 Температура

1.5.4 Уровень активной кислотности

1.6 Применение бактериальной целлюлозы

1.6.1 Фармацевтическое и медицинское применение

1.6.2 Применение в целлюлозно-бумажной промышленности

1.6.3 Применение в химической промышленности

1.7 Обзор российских патентов по теме диссертации

1.8 Обоснование выбранного направления исследований

2 Методическая часть

2.1 Объекты исследования

2.1.1 Плодовые оболочки овса

2.1.2 Симбиотическая культура Мedusomyces gisevii Ба-12

2.2. Методики проведения экспериментов

2.2.1 Способ получения субстратов из плодовых оболочек овса

2.2.2 Получение ферментативного гидролизата

2.2.3 Приготовление инокулята

2.2.4 Получение бактериальной целлюлозы

2.2.5 Отмывка гель-пленок бактериальной целлюлозы

2.2.6 Высушивание бактериальной целлюлозы

2.2.7 Расчет выхода бактериальной целлюлозы

2.3 Реактивы, аналитическое оборудование и методики анализа

3 Результаты исследований и их обсуждение

3.1 Исследование влияния условий культивирования Мedusomyces ^вуи Ба-12 на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.1 Изучение влияния рН на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.2 Исследование влияния начальной концентрации редуцирующих веществ на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.3 Изучение влияния температуры на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.4 Исследование влияния концентрации этанола на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.5 Изучение влияния концентрации дрожжевого экстракта на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.6 Исследование влияния экстрактивных веществ черного чая на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.7 Изучение влияния соотношения объёмов культуральной среды и воздуха на биосинтез бактериальной целлюлозы

3.1.8 Оптимальные условия биосинтеза бактериальной целлюлозы продуцентом Medusomyces ^явуи Ба-12

3.2 Биосинтез бактериальной целлюлозы в реакторе объемом 16 литров

3.3 Исследование физико-химических и фундаментальных свойств БЦ, синтезированной на синтетической питательной среде

3.3.1 Исследование физико-химических свойств бактериальной целлюлозы, синтезированной на синтетической питательной среде

3.3.2 Исследование влияние температуры на степень полимеризации и структуру бактериальной целлюлозы

3.3.3 Исследование способности бактериальной целлюлозы к ферментативному гидролизу

3.3.4 Исследование способности бактериальной целлюлозы к химической трансформации

3.4 Изучение биосинтеза бактериальной целлюлозы на ферментативных гидролизатах плодовых оболочек овса

3.4.1 Определение химического состава субстратов

3.4.2 Определение состава ферментативных гидролизатов

3.4.3 Исследование процесса биосинтеза бактериальной целлюлозы на ферментативных гидролизатах плодовых оболочек овса

3.4.4 Исследование физико-химических свойств образцов бактериальной целлюлозы, полученных на ферментативных гидролизатах плодовых оболочек овса

3.4.5 Разработка технологии получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек овса

3.5 Применение бактериальной целлюлозы в ветеринарии и гуманной медицине

3.5.1 Изучение гемостатической активности бактериальной целлюлозы

3.5.2 Исследование возможности применения бактериальной целлюлозы в абдоминальной хирургии

3.6 Экономическое обоснование проведения опытно-конструкторских работ

3.7 Связь работы с научными программами института

Список обозначений и сокращений

4 Заключение

4.1 Выводы

4.2 Рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы

4.3 Практические предложения

5 Библиографический список

6 Приложения

6.1 Методика

6.2 Методика

6.3 Методика

6.4 Методика

6.5 Технологическая пропись

6.6 Акт испытания

6.7 Акт испытания

6.8 Акт внедрения

6.9 Патент на изобретение

6.10 Патент на изобретение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек овса»

Введение

Актуальность темы исследования. Направление исследований получения, свойств и применения бактериальной целлюлозы развивается в мировой науке с 1954 г. Бактериальная целлюлоза является востребованным материалом в различных отраслях промышленности, таких как пищевая, биотехнологическая, химическая, целлюлозно-бумажная, электронная, а также в ветеринарии и гуманной медицине.

Биосинтез бактериальной целлюлозы - сложный и дорогостоящий процесс. Это связано с ограниченным выходом бактериальной целлюлозы и использованием дорогостоящих питательных сред из пищевого сырья, которые увеличивают стоимость конечного продукта.

В Российской Федерации нет действующего производства бактериальной целлюлозы, поэтому разработка технологии ее биосинтеза является актуальной. Замена пищевого сырья на непищевое, массовое, возобновляемое в промышленных масштабах сырьё, позволит значительно снизить себестоимость бактериальной целлюлозы. В мировой науке предложены различные варианты решения данной проблемы. Новым направлением в данной области является получение питательных сред из недревесного возобновляемого целлюлозосодержащего сырья. Однако исследования носят поисковый характер, нет готовых методов и технологий по биосинтезу бактериальной целлюлозы, направленных на снижение себестоимости конечного продукта за счет удешевления питательной среды.

Для Российской Федерации перспективным источником недревесного возобновляемого целлюлозосодержащего сырья являются плодовые оболочки овса. Для создания технологии нужно проводить исследования процесса биосинтеза бактериальной целлюлозы на ферментативных гидролизатах плодовых оболочек овса. Уникальность данных исследований обусловлена не только использованием сырья, экономически выгодного именно для России, но и направленностью на разработку технологии получения бактериальной

целлюлозы, которая в будущем может быть масштабирована и внедрена в производство.

Степень разработанности темы. Опубликованные литературные данные подтверждают целесообразность исследований биосинтеза, свойств и применения бактериальной целлюлозы. В этой области успешно работают в России и за рубежом Громовых Т.И., Ревин В.В., Ткаченко А.А., Хрипунов А.К., Son H.J., Cavka A., Guo X., Yang X.X. и другие исследователи (1954-2017). В мировой практике такого рода исследования носят поисковый характер, нет готовых методов и технологий по превращению растительного сырья в бактериальную целлюлозу, необходимо проведение исследований по разработке технологии ее получения для создания высокотехнологичного крупномасштабного производства. Общие подходы к биотехнологическим производствам в России разрабатывались такими учёными, как Варламов В.П., Варфаломеев С.Д., Гернет М.В., Градова Н.Б., Егоров Н.С., Еремец В.И., Красноштанова А.А., Нетрусов А.И., Панфилов В.И., Самуйленко А.Я.

Цель диссертационной работы - разработка технологии получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек овса.

Для реализации поставленной цели сформулированы следующие задачи:

- научное обоснование выбора продуцента и исследование влияния условий культивирования (pH, концентрация глюкозы в питательной среде, температура, соотношение объемом культуральной среды и воздуха, влияние стимулирующих добавок) на выход бактериальной целлюлозы;

- исследование физико-химических и фундаментальных свойств бактериальной целлюлозы, синтезированной на синтетической питательной среде выбранным продуцентом;

- исследование процесса биосинтеза бактериальной целлюлозы в зависимости от способа предварительной химической обработки плодовых оболочек овса;

- исследование физико-химических свойств бактериальной целлюлозы, синтезированной на ферментативных гидролизатах плодовых оболочек овса;

- разработка технологии получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек овса;

- исследование перспективы применения бактериальной целлюлозы в ветеринарии и гуманной медицине.

Научная новизна

Научно обоснована и экспериментально разработана технология получения бактериальной целлюлозы на ферментативном гидролизате технической целлюлозы плодовых оболочек овса, полученной азотнокислым способом, с помощью продуцента Мedusomyces gisevii Sa-12.

Экспериментальным путем определены условия биосинтеза бактериальной целлюлозы продуцентом Мedusomyces gisevii Sa-12, обеспечивающие ее максимальный выход: концентрация редуцирующих веществ от 20 до 25 г/л; pH регулируется симбиозом; температура от 24 °С до 27 содержание экстрактивных веществ черного чая в питательной среде от 1,6 до 4,8 г/л; продолжительность культивирования от 7 до 12 суток.

Экспериментально подтверждена возможность использования ферментативных гидролизатов плодовых оболочек овса в качестве питательных сред для микробиологического синтеза бактериальной целлюлозы; при этом выход колеблется от 2,5 % до 9 % в зависимости от химического способа получения субстрата для ферментативного гидролиза.

Научно обосновано и экспериментально доказано использование симбиотической культуры Мedusomyces gisevii Sa-12 для биосинтеза бактериальной целлюлозы на ферментативных гидролизатах плодовых оболочек овса. Степень кристалличности образцов бактериальной целлюлозы, синтезированных продуцентом Мedusomyces gisevii Sa-12 составляет от 87 % до 90 %. Образцы бактериальной целлюлозы имели сетчатую структуру со средней толщиной микрофибрилл от 28 до 33 нм. В образцах бактериальной целлюлозы

преобладала низкосимметричная фаза 1а, ее содержание изменялось от 93,7 % до 100 %.

Доказана принципиальная возможность получения нитратов бактериальной целлюлозы.

Подтверждена перспективность использования бактериальной целлюлозы в качестве гемостатического средства в ветеринарии и гуманной медицине.

Новизна технических решений подтверждена патентами РФ № 2597291 и № 2624242.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана технология получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек овса, включающая предварительную химическую обработку последовательно разбавленными растворами азотной кислоты и гидроксида натрия с получением технической целлюлозы; ферментативный гидролиз технической целлюлозы с помощью ферментных препаратов «Целлолюкс-А» и «Брюзайм BGX»; приготовление питательных сред для биосинтеза бактериальной целлюлозы; биосинтез бактериальной целлюлозы с помощью симбиотической культуры Мedusomyces gisevii Sa-12; промывку бактериальной целлюлозы с помощью разбавленных растворов гидроксида натрия и соляной кислоты; стерилизацию и упаковывание бактериальной целлюлозы.

Подтверждены высокая степень кристалличности бактериальной целлюлозы и преобладание низкосимметричной фазы 1а в образцах бактериальной целлюлозы (Акт испытаний выдан ФГБОУ ВО «Петрозаводский государственный университет», г. Петрозаводск).

Подтверждена возможность применения полученных образцов бактериальной целлюлозы в медицине в качестве гемостатического средства (Акт внедрения выдан ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава РФ, г. Москва).

Подтверждена возможность применения полученных образцов бактериальной целлюлозы в абдоминальной хирургии (Акт испытаний выдан

ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России и КГБУЗ «Краевая клиническая больница», г. Барнаул).

По результатам исследований разработана технологическая документация, утвержденная директором ИПХЭТ СО РАН.

Основные положения, выносимые на защиту:

- технология получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек

овса;

- результаты исследования зависимости выхода бактериальной целлюлозы, синтезируемой продуцентом Medusomyces gisevii Sa-12 от условий культивирования: pH, концентрации редуцирующих веществ, температуры, соотношения объемов культуральной среды и воздуха, наличия стимулирующих добавок;

- результаты исследования зависимости выхода бактериальной целлюлозы, синтезируемой продуцентом Medusomyces gisevii Sa-12, от способа предварительной химической обработки плодовых оболочек овса;

- эффективность применения продуцента Medusomyces gisevii Sa-12 для биосинтеза высококачественной бактериальной целлюлозы.

Степень достоверности и апробация результатов. Обработку полученных данных проводили с использованием программы «Microsoft Excel 2010» и «Microsoft Word 2010». Экспериментальные данные были получены в трехкратной повторности, результаты в виде среднего значения, а погрешности -в виде стандартного отклонения по выборке.

Достоверность результатов исследований подтверждается соответствием теоретических данных с полученными результатами экспериментальных исследований и производственных испытаний. Экспериментальные данные, выводы и рекомендации основаны на общепринятых теоретических закономерностях, не противоречат и с достаточной степенью точности согласуются с известными концепциями.

Основные положения и научные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийских и международных конференциях: «Биотехнологии в химико-лесном комплексе» (г. Архангельск, 2014 г.), «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (г. Барнаул, 2014, 2017 гг.), «Низко-температурные и пищевые технологии в XXI веке» (г. Санкт-Петербург, 2015 г.), «Химия и химическая технология в XXI веке» (г. Томск, 2015 г.), «Перспективы развития химических и биологических технологий в XXI веке» (г. Саранск, 2015 г.), «Биотехнология и общество в XXI веке» (г. Барнаул, 2015 г.), «Химия и технология новых веществ и материалов» (г. Сыктывкар, 2015-2016 гг.), «Структура и физико-химические свойства целлюлоз и нанокомпозитов на их основе» (г. Петрозаводск, 2016 г.), «Технологии и оборудование химической, биотехнологической и пищевой промышленности» (г. Бийск, 2014-2017 г.), «Материалы и технологии XXI века» (г. Бийск, 2015), «Перспективы создания и применения конденсированных высокоэнергетических материалов» (г. Бийск, 2014, 2016).

1 Аналитические исследования

1.1 Характеристика бактериальной целлюлозы

Бактериальную целлюлозу (БЦ) впервые описал Браун в 1887 году [1]. БЦ -экзополисахарид, синтезируемый различными видами микроорганизмов [2].

Целлюлоза представляет собой гомополимер, состоящий из остатков глюкоз, соединенных Р-1—^4 гликозидными связями (рисунок 1.1). Повторяющееся звено полимера состоит из двух молекул глюкозы, соединенных вместе таким образом, что одна молекула поворачивается на 180 градусов по отношению к другой.

СН2ОН

H

OH

сн2он

H

—O—

H OH

-оч

H

—O—

H

H

H

H

OH H

H

H

-о'

О—

н он

-оч

н

I—о—

он

сн2он

н

н

он

Рисунок 1.1 - Структурная формула целлюлозы

Глюкозные остатки в целлюлозе связаны друг с другом, образуя длинную прямую неразветвленную цепь полимера, способного образовывать межмолекулярные водородные связи между соседними глюкановыми цепочками. БЦ состоит из лент микрофибрилл, генерируемых бактериальной клеткой на ее поверхности. Размеры ленты составляют 3-4 нм в толщину и 70-80 нм в ширину [3], длинна может составлять от 1 до 9 мкм [4]. Форма между слоями БЦ поддерживается гидрофобными связями. Известно, что при биосинтезе меж- и внутримолекулярные водородные связи первоначально образуются в каждом целлюлозном слое, а затем кристаллическая структура БЦ формируется, за счет водородных связей между целлюлозными слоями [3].

Химическая структура БЦ аналогична химической структуре растительной целлюлозы. В отличие от растительных источников целлюлозы, БЦ не содержит

примесей, таких как лигнин, пектин и гемицеллюлозы. В таблице 1 приведено сравнение некоторых свойств вегетативной растительной целлюлозы и БЦ.

Таблица 1.1 - Свойства бактериальной и растительной целлюлозы [5]

Свойства БЦ Целлюлоза вегетативной части растений

Толщина волокна, нм 70-80 14000-40000

Кристалличность, % 65-79 56-65

Степень полимеризации 2000-60000 13000-14000

Модуль Юнга, МПа 15-30 5,5-12,6

Влагоудерживающая способность, % 98,5 60

БЦ обладает высокой степенью кристалличности, высоким пределом прочности на разрыв, нерастворимостью в большинстве растворителей, способностью принимать определенную форму в процессе биосинтеза, высокими степенями полимеризации и кристалличности [5]. В БЦ преимущественно преобладает низкосимметричная триклинная фаза 1а. Фаза 1а является метастабильной, поэтому ее реакционная способность выше, чем у фазы 1р [6], характерной для всех видов растительных целлюлоз.

Толщина фибрилл целлюлозы в 200-500 раз тоньше, чем у фибрилл растительной целлюлозы. Влагоудерживающая способность БЦ в 100 раз больше собственного веса. БЦ прочнее, чем растительная целлюлоза [7]. В литературе представлены данные о том, что морфология и свойства БЦ зависят от условий культивирования и состава питательной среды, однако они носят противоречивый характер.

Известно о способности БЦ разрушаться под действием целлюлолитических ферментов. Несмотря на высокую степень кристалличности и крупный размер кристаллов, реакционная способность БЦ к ферментативному гидролизу -высокая. Главной отличительной особенностью БЦ является высокая пористость и развитая поверхность нанофибрилл. Из-за высокой пористости и развитой поверхности, образец БЦ имеет высокую доступность для молекул целлюлолитических ферментов, что способствует ферментативному гидролизу [8]. Исследование мономерного состава ферментативных гидролизатов БЦ

методом тонкослойной хроматографии позволило выявить, что во всех гидролизатах присутствует только глюкоза [9].

1.2 Продуценты бактериальной целлюлозы

К настоящему времени установлено, что к биосинтезу БЦ способны микроорганизмы родов Agrobacterium, Achromobacter, Aerobacter, Enterobacter, Sarcina, Rhizobium, Pseudomonas, Salmonella, Alcaligenes, но наиболее представительным является род Gluconoacetobacter (ранее Acetobacter). Штамм Gluconoacetobacter относится к грамотрицательным аэробным бактериям и представляет собой прямые, слегка изогнутые стержни или эллипсоиды размером от 0,4 до 0,6 мкм. Главным критерием отбора штамма для промышленного получения БЦ является способность микроорганизмов к её биосинтезу, а этот показатель сильно отличается даже внутри одного рода и вида (таблица 1) [3].

Таблица 1.2 - Выход БЦ при использовании различных штаммов

Бактерия Источник Добавки Время Выход,

углерода культивирования, ч г/л

A. xylinum BRC 5 Глюкоза Этанол + кислород 50 15,30

G. hansenii Глюкоза Кислород 48 1,72

G. hansenii Глюкоза Этанол 72 2,50

Acetobacter sp. V6 Глюкоза Этанол 192 4,16

Acetobacter sp. A9 Глюкоза Этанол 192 15,20

A. xylinum BPR2001 Меласса - 72 7,82

A. xylinum BPR2001 Фруктоза Агар + кислород 72 14,10

A. xylinum BPR2001 Фруктоза Агар 56 12,00

A. xylinum ssp. sucrofermentans BPR2001 Фруктоза Кислород 52 10,40

A. xylinum E25 Фруктоза - 168 3,50

G. xylinus K3 Маннитол Зеленый чай 168 3,34

G. xylinus IFO 13773 Глюкоза Лигносульфонат 168 10,10

A. xylinum NUST4.1 Глюкоза Альгинат натрия 120 6,00

G. xylinus IFO 13773 Маннитол - 168 5,76

Gluconoacetobacter sp. RKY5 Меласса - 144 5,63

Известно, что выбор продуцента для биосинтеза БЦ влияет на ее конечные свойства [10].

1.3 Механизм биосинтеза бактериальной целлюлозы

Биохимические реакции, протекающие при биосинтезе БЦ продуцентом Асв1оЪас1вг хуНпыш описаны в литературе [11, 12]. Биосинтез БЦ включает в себя синтез уридиндифосфатглюкозы, которая является предшественником формирования целлюлозы, полимеризацию глюкозы в в-1^4 глюкановые цепи и зарождение цепи, которая образует лентообразную структуру целлюлозных цепей, образованных сотнями или даже тысячами отдельных цепей целлюлозы, их вытеснение из клетки и самосборку в фибриллы [3]. Биосинтез БЦ не мешает другим анаболическим процессам, протекающим в клетке, в том числе синтезу белка. Кроме этого, биохимические процессы в бактериях Асе1оЪас1ег хуНпыш могут протекать по пути гликолиза, по циклу Кребса либо по пентозо-фосфатному циклу (рисунок 1.2) [13, 14].

Рисунок 1.2 - Схема главных метаболических путей, протекающих в клетках

уксуснокислых бактерий

Предшественником целлюлозы является уридиндифосфатглюкоза, которая является продуктом обычного пути, общего во многих организмах, включая растения, и включающая в себя фосфорилирование глюкозы до глюкозо-6-фосфата, катализируемое глюкокиназой, с последующей изомеризацией этого

промежуточного продукта в глюкозу-1-фосфат ферментом фосфоглюкомутазой и превращение последнего метаболита в уридиндифосфатглюкозу под действием уридиндифосфатглюкозо-пирофосфорилазы (рисунок 1.3) [15, 16]. Этот фермент - важнейший из участвующих в синтезе целлюлозы, так как некоторые фенотипические целлюлозоотрицательные мутанты (Се1-) имеют дефицит этого фермента [17].

глюкозопирофосфорилаза

целлюлозосинтазный комплекс

Рисунок 1.3 - Схема начальных стадий биосинтеза целлюлозы в клетках Gluconacetobacter xylinus

Биосинтез целлюлозы в бактериях Аcetobacter xylinum или любых других целлюлозосинтезирующих организмах, включая растения, происходит в два этапа: 1) образование в-1,4 глюкановой цепи с полимеризацией глюкозных единиц; 2) сборка и кристаллизация цепи целлюлозы.

Формирование в-1,4 глюкановой цепи

Целлюлозосинтетазный комплекс катализирует биосинтез целлюлозы, полимеризуя глюкозные единицы в в-1,4 глюкановые цепи. Формирование предцеллюлозного полимера происходит в цитоплазматической мембране. Есть две теории для описания этого механизма в клетках Аcetobacter xylinum. Первая гипотеза предполагает, что полимеризация в-1,4 глюкановой цепи не включает липидный промежуточный продукт. Глюкозные остатки добавляются к

уридиндифо сфатглюкоза

1 г

ЦЕЛЛЮЛОЗА

невосстановленным концам полисахарида, и восстановленные концы образуют зарождающиеся полимерные цепи, расположенные вдали от клеток [18]. Угол скручивания между двумя соседними остатками глюкозы в молекуле целлюлозы составляет 180° и способствует поддержанию растущей цепи в-1,4 глюкановой цепи. Вторая гипотеза состоит в том, что полимеризация в-1,4 глюкановой цепи включает липидный промежуточный продукт [19]. Исследования роли липидных промежуточных продуктов в процессе биосинтеза БЦ продолжаются. При этом известно, что целлюлозосинтетазный комплекс не содержит липидный компонент [3].

Сборка и кристаллизация цепи целлюлозы

Уникальная структура и свойства целлюлозы зависят от направления экструзии цепей и их сборки вне клеток. Предцеллюлозные полимерные молекулы, синтезированные внутри бактериальной клетки, растягиваются, чтобы сформировать протофибриллы диаметром 2-4 нм, а протофибриллы группируются в виде ленты в форме микрофибрилл диаметром 80*4 нм [20].

Электронные микрофотографии поверхности клеточной оболочки указывают на наличие от 50 до 80 пор, расположенных в ряд вдоль длинной оси клетки [21]. Дискретные структуры слоя липополисахаридов предполагают участки экструзии для предцеллюлозных полимеров. Скопления участков, а не отдельных в-1,4 глюкановых цепей, обуславливает первоначальную форму целлюлозного продукта. Существование таких скоплений и аналогичных структур в водорослевых препаратах [22], наводит на мысль, что синтез многих в-1,4 глюкановых цепей одновременно в пространственном ограниченном участке является общей характеристикой сборки микрофибрилл целлюлозы у высших и низших организмов [23]. Процесс сборки и кристаллизации целлюлозных цепей, как правило, описывается как направленный клеткой, так как вне зависимости от клеточного пространства происходит взаимная ориентация и объединение глюкановых цепей, микрофибрилл, пучков и лент, что регулируется исходной формой экструзии пор [13].

1.4 Состав питательных сред

Один из наиболее важных факторов, влияющих на выход, продуктивность и скорость биосинтеза БЦ, является состав питательных сред. Питательная среда считается полноценной, если в ее составе в достаточном количестве содержатся источники углерода (источник энергии для жизнедеятельности клетки), азота (соединения азота являются частью нуклеиновых кислот и белков) и фосфора (соединения фосфора принимают участие в энергетических процессах, при хранении генетической информации). В настоящее время питательные среды, применяемые для биосинтеза БЦ, условно можно разделить на три вида: синтетические среды, натуральные питательные среды из отходов пищевых производств, альтернативные питательные среды из целлюлозосодержащего сырья.

1.4.1 Синтетические среды

Стандартной питательной средой для биосинтеза БЦ считается среда Хестрина-Шрэмма, состоящая, из (%): глюкозы - 2,0; пептона - 0,5; дрожжевого экстракта - 0,5; динатрия фосфата (безводный) - 0,27; лимонной кислоты (моногидрат) - 0,115; рН доводят до 6,0 с помощью разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия [24].

В работе [25] исследовано влияние различных источников углерода (глюкоза, фруктоза, сахароза и этанол) и азота (дрожжевой экстракт, гидролизат казеина и сульфата аммония) на биосинтез БЦ продуцентом Лс&оЪас1вг \ovaniensis ИББ5. Наибольший выход БЦ получен при использовании в качестве источника углерода - глюкозы, в качестве источника азота - дрожжевого экстракта. В питательной среде, состоящей из 2 % глюкозы и 0,5 % дрожжевого экстракта, выход сухой БЦ составил 0,040 г/л через 7 дней культивирования.

Для штамма 01ысопасв1оЪас1вг sp. RV28 наиболее предпочтительным источником углерода является сахароза. Выход БЦ, полученный на питательной среде, содержащей сахарозу, составил 2,3 г/л. Исследования показали, что

источник углерода влияет на выход БЦ, но не оказывает влияние на ее молекулярную структуру [3].

В работе [26] для штамма Gluconacetobacter xylinus АТСС 53524 кроме сахарозы предпочтительным источником является глицерин. Выход БЦ, на питательных средах, содержащих сахарозу и глицерин составил 3,83 и 3,75 г/л соответственно. Исследования методом ЯМР показало, что независимо от источника углерода, БЦ имела высокую степень кристалличности.

Изучение биосинтеза БЦ продуцентом Gluconacetobacter xylinus ATCC 10245 показало, что наибольший выход (28,7 %) получен при культивировании на питательной среде, содержащей глицерин. С помощью рентгенографических исследований установлено, что образцы БЦ, синтезированные на питательных средах, содержащих в качестве источника углерода глюкозу и фруктозу, имеют степень кристалличности - 88 и 86 %. Степень кристалличности образца БЦ полученного при культивировании на питательной среде, содержащей глицерин составила 78 % [27].

В работе [28] исследован биосинтез БЦ продуцентом Acetobacter xylinum 1FO 13693 на питательных средах, содержащих различные источники углерода. Установлено, что глюкоза, фруктоза и глицерин - предпочтительные источники углерода для биосинтеза БЦ. Однако в работе [29] для продуцента Komagataeibacter sucrofermentans DSM 15973 показано, что выход БЦ на питательной среде, содержащей глицерин, меньше, чем на питательной среде, где в качестве источника углерода использовалась сахароза.

Для продуцента Medusomyces gisevii исследован биосинтез БЦ на питательных средах, содержащих различные источники углерода: фркутозу, сахарозу, глюкозу и мальтозу. Показано, что наиболее предпочтительным источником углерода является глюкоза [30].

В работе [31] исследован процесс биосинтеза БЦ продуцентом Gluconacetobacter xylinus ATCC 53524 на различных питательных средах, содержащих разные источники углерода, модифицированных добавлением кукурузного экстракта. Полученные образцы БЦ, исследованные методом

рентгеноструктурного анализа, имели близкие размеры кристаллитов и состояли преимущественно из фазы I а. Однако, степень кристалличности образцов БЦ при использовании различных питательных сред значительно отличалась: от 50 до 95 %.

Условия культивирования для биосинтеза БЦ продуцентом Лсе1оЪас1ег хуНпыш ВРЯ2001 оптимизированы с помощью статистической обработки [32]. Согласно полученным данным, выход БЦ на уровне 14 г/л может быть достигнут через 72 часа ферментации при использовании питательной среды, содержащей 4,99 % фруктозы, 2,85 % кукурузного экстракта, 28,33 % растворенного кислорода и 0,38 % агара.

Исследована зависимость выхода БЦ от содержания в питательной среде пептона и дрожжевого экстракта. Установлено, что концентрация дрожжевого экстракта, обеспечивающего наибольший выход БЦ, составляет 7 г/л, пептона -9 г/л. При этом выход БЦ составляет 11,65 г/л [33].

Дрожжевой экстракт в питательных средах является источником азота и аминокислот. Однако, использование дрожжевого экстракта повышает стоимость питательной среды. В работе [3] предложено использовать гидролизат рыбного порошка в качестве источника азота и аминокислот. Опыты показали, что 15 г/л гидролизата рыбного порошока в питательной среде увеличивает объемный выход до 3,0 г/л.

Изучение процесса биосинтеза БЦ продуцентом Лсе1оЪас1ег хуНпыш яыЪяр. зысго/вгшвШат на синтетических питательных средах с добавлением различных стимулирующих компонентов показало, что присутствие в питательной среде лактата в динамических условиях культивирования позволяет повысить выход БЦ приблизительно в 4-5 раз [34].

Есть данные, что на биосинтез БЦ положительную роль играет добавление в питательную среду этанола [4, 9, 35, 36]. Этанол подавляет спонтанные мутации целлюлозосинтезирующих бактерий, снижающие их продуктивность. Такие мутации могут появляться при динамических условиях культивирования. Кроме того, этанол может использоваться как дополнительный источник углерода. Так,

для Gluconacetobacter hansenii выход БЦ увеличивается от 1,30 до 2,31 г/л при добавлении 1 % этанола [35]. Для Acetobacter sp. А 9 добавление 1,4 % этанола в питательную среду увеличивает выход БЦ на 400 % (до 15,2 г/л), что примерно в 4 раза больше чем на питательной среде, не содержащей этанол [36]. По другим данным, добавление 1 % этанола к стандартной питательной среде увеличивает выход БЦ в 2-10 раз [9]. Для продуцента Gluconacetobacter hansenii ОИ-1/2008 выход БЦ вырос в два раза при добавлении 0,5 % этанола [4]. Однако исследования методом растровой электронной микроскопии показали, что добавление этанола изменяет сетчатую структуру БЦ на более плоскую структуру с тонкими микрофибриллами [37].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гладышева Евгения Константиновна, 2018 год

5 Библиографический список:

1. Brown, A.J. XIX.—The chemical action of pure cultivations of bacterium aceti / A.J. Brown // Journal of the Chemical Society, Transactions. - 1886. - № 49. -P. 172-177.

2. Chawla, P.R. Microbial cellulose: Fermentative production and applications / P.R. Chawla, I.B. Bajaj, S.A. Survase, R.S Singhal // Food Technology and Biotechnology. - 2009. - Vol. 47, № 2. - P. 107-124.

3. Lee, K.-Y. More than Meets the Eye in Bacterial Cellulose: Boisynthesis, Bioprocessing, and Applications in Advanced Fiber Composites / K.-Y. Lee, G. Buldum, A. Mantalaris, A. Bismarck.// Macromolecular Bioscience. - 2014. - Vol. 14, № 1. - P. 10-32.

4. Фан Ми Хань. Биотехнология бактериальной целлюлозы с использованием штамма - продуцента Gluconacetobacter hansenii GH - 1/2008: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.01.06 / Фан Ми Хань. - Москва, 2013. - 25 с.

5. Belgacem, M.N. Monomers, Polymers and Composites from Renewable Resources / M.N Belgacem, A. Gandini. - Amsterdam: Elsevier. - 2008. - 553 p.

6. Алешина, Л.А. Современные представления о строении целлюлоз (обзор) / Л.А. Алешина, С.В. Глазкова, Л.А. Луговская, М.В. Подойникова, А.Д. Фофанов, Е.В. Силина // Химия растительного сырья. - 2001. - № 1. - С. 5-35.

7. Wanichapichart, P. Characterization of cellulose membranes produced by Acetobacter xylinum / P. Wanichapichart, S. Kaewnopparat, K. Buaking, W. Puthai // Journal of Vacuum Science and Technology. - 2002. - № 24. - P. 855-862.

8. Ioelovich, M. Study of enzymatic hydrolysis of bacterial nanocellulose / M. Ioelovich // American Journal of BioScience. - 2014. - Vol. 2, № 1. - P. 13-16.

9. Петухова, Н.И. Синтез целлюлозы изолятами уксуснокислых бактерий из «Чайного гриба» / Н.И. Петухова, С.А. Колобова, Р.Р. Назмутдинова, В.В. Зорин // Башкирский химический журнал. - 2016. - Т.23, №1. - C. 7-13.

10. Hassan, E.A. The characterization of bacterial cellulose produced by Acetobacter xylinum and Komgataeibacter saccharovorans under optimized

fermentation conditions / E.A. Hassan, H.M. Abdelhady, S.S.A. El-Salam, S.M. Abdullah // British Microbiology Research Journal. - 2015. -Vol. 9, № 3. - P. 1-13.

11. Brown, R.M.Jr. The biosynthesis of cellulose / R.M.Jr. Brown // Food Hydrocolloid. -1987. - Vol 1, № 5-6. - P. 345-351.

12. Delmer, D.P. Cellulose biosynthesis / D.P. Delmer, Y. Amor // Plant Cell. - 1995. - Vol. 7, № 7. - P. 987-1000.

13. Ross, P. Cellulose biosynthesis and function in bacteria / P. Ross, R. Mayer, M. Benziman // Microbiology and Molecular Biology Reviews. - 1991. -Vol. 55, № 1 - P. 35-58.

14. Tonouchi, N. Characterization of the biosynthetic pathway of cellulose from glucose and fructose in Acetobacter xylinum / N. Tonouchi, T. Tsuchida, F. Yoshinaga, T. Beppu, S. Horinouchi // Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. -1996. - Vol. 60, № 1.- P. 1377-1379.

15. Дебабов, В.Г., Богуш В.Г. Природные волокна для будущего / В.Г. Дебабов, В.Г. Богуш // Природа. - 1999. - № 2. - С. 5-15.

16. Гладышева, Е.К. Влияние углеродного состава питательных сред на продуктивность целлюлозосинтезирующих бактерий (обзор) / Е.К. Гладышева, Е.А.Скиба // Ползуновский вестник. - 2014. - № 3. - С. 168-173.

17. Valla, S. Cloning of a gene involved in cellulose biosynthesis in Acetobacter xylinum: Complementation of cellulose-negative mutant by the UDPG pyrophosphorylase structural gene / S. Valla, D. H. Coucheron, E. Fjaervik, J. Kjosbakken, H. Weinhouse, P. Ross, D. Amikam, M. Benziman // Molecular and General Genetics. - 1989. - Vol. 217, № 1. - P. 26-30.

18. Brown, R.M.Jr. Cellulose biosynthesis: A model for understanding the assembly of biopolymers / R.M.Jr .Brown, I.M. Saxena // Plant Physiology and Biochemistry. - 2000. - Vol. 38, № 1-2. - P. 57-67.

19. De Iannino, N.I., Couso R.O., Dankert M.A. Lipid-linked intermediates and the synthesis of acetan in Acetobacter xylinum / N.I. De Iannino, R.O. Couso, M.A. Dankert // Journal of general microbiology. - 1988. - Vol. 134, № 6. - P. 1731-1736.

20. Iguchi, M. Bacterial cellulose - a masterpiece of nature's arts / M. Iguchi, S. Yamanaka, A. Budhiono // Journal of Materials Science. - 2000. - Vol. 35, № 2. -P. 261-270.

21. Zaar, K. Visualization of pores (export sites) correlated with cellulose production in the envelope of the Gram-negative bacterium Acetobacter xylinum / K. Zaar // The Journal of Cell Biology. - 1979. - Vol. 80, № 3. - P. 773-777.

22. Benziman, M. Cellulose biogenesis: polymerization and crystallization are coupled process in Acetobacter xylinum / M. Benziman, C.H. Haigler, R.M.Jr. Brown, A.R. White, K.M. Cooper // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1980. - Vol. 77, № 11. - P. 6678-6682.

23. Delmer, D.P. Cellulose biosynthesis / D.P. Delmer // Annual Review of Plant Biology. - 1987. - Vol. 38. - P. 259-290.

24. Hestrin, S. Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum: II. Preparation of freeze-dried cells capable of polymerizing glucose to cellulose / S. Hestrin, M. Schramm // Journal of Biochemistry. - 1954. - Vol. 58, № 2. - P. 345-352.

25. Coban, E.P. Effect of various carbon and nitrogen sources on cellulose synthesis by Acetobacter lovaniensis HBB5 / Coban E.P., H. Biyik // African Journal of Biotechnology. - 2011. - Vol. 10, № 27. - P. 5346-5354

26. Mikkelsen, D. Influence of different carbon sources on bacterial cellulose production by Gluconacetobacter xylinus strain ATCC 53524 / D. Mikkelsen, B.M. Flanagan, G.A. Dykes, M.J. Gidley // Journal of Applied Microbiology. - 2009. -Vol. 107, № 2. - P. 576-583.

27. Keshk, S., Sameshima K. Evaluation of different carbon sources for bacterial cellulose production / S. Keshk, K. Sameshima // African Journal of Biotechnology. - 2005. - Vol. 4, № 6 - P. 478-482.

28. Masaoka, S., Ohe T., Sakota N. Production of cellulose from glucose by Acetobacter xylinum / S. Masaoka, T. Ohe, N. Sakota // Journal of Fermentation and Bioengineering. - 1993. - Vol. 7, № 1 - P. 18-22.

29. Tsouko, E. Bacterial cellulose production from industrial waste and byproduct streams / E. Tsouko, C. Kourmentza, D. Ladakis, N. Kopsahelis, I. Mandala, S.

Papanikolaou, F. Paloukis, V. Alves, A. Koutinas // International Journal of Molecular Sciences. - 2015. - Vol. 16, № 7. - P. 14832-14849.

30. Юркевич, Д.И. Медузомицет (Чайный гриб): научная история, состав, особенности физиологии и метаболизма / Д.И. Юркевич, В.П. Кутышенко // Биофизика. - 2002. - № 6. - С. 1116-1129.

31. Ruka, D.R. Altering the growth conditions of Gluconacetobacter xylinus to maximize the yield of bacterial cellulose / D.R. Ruka, G.P .Simon, K.M. Dean // Carbohydrate Polymers. - 2012. - Vol. 89, № 2. - P. 613-622.

32. Bae, S. Statistical optimization of culture conditions for bacterial cellulose production using Box-Behnken design / S. Bae, M. Shoda // Biotechnology and Bioengineering. - 2005. - Vol. 90, № 2. - P. 20-28.

33. Pourramezan, G.Z., Roayaei A.M., Qezelbash Q.R. Optimization of culture conditions for bacterial cellulose production by Acetobacter sp. 4B-2 / G.Z. Pourramezan, A.M. Roayaei, Q.R. Qezelbash // Biotechnology. - 2009. - Vol. 8, № 1. -P. 150-154.

34. Matsuoka, M. A synthetic medium for bacterial cellulose production by Acetobacter xylinum subsp. Sucrofermentans / M. Matsuoka, T. Tsuchida, K. Matsushita, O. Adachi, F. Yoshinaga // Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. -1996. - Vol. 60, № 4. - P. 575-579.

35. Park, J.K. Cellulose production by Gluconacetobacter hansenii in a medium containing ethanol / J.K. Park, J.Y. Jung, Y.H. Park // Biotechnology letters. -2003. - Vol. 25, № 24. - P. 2055-2059.

36. Son, H.J. Optimization of fermentation conditions for the production of bacterial cellulose by a newly isolated Acetobacter / H.J. Son, M.S. Heo, Y.G. Kim, S.J .Lee // Biotechnology and Applied Biochemistry. - 2001. - Vol. 33, № 1. - P. 1-5.

37. Mohammadkazemi, F. Effect of ethanol and medium on bacterial cellulose (BC) production by Gluconacetobacter xylinus (PTCC 1734) / F. Mohammadkazemi, K. Doosthoseini, M. Azin // Cellulose chemistry and technology. - 2015. - Vol. 49, № 5-6. - P. 455-462.

38. Son, H.J. Increased production of bacterial cellulose by Acetobacter sp. V6

in synthetic media under shaking culture conditions / H.J. Son, H.G. Kim, K.K. Kim, H.S. Kim, Y.G. Kim, S.J. Lee // Bioresource technology. - 2003. - Vol. 86, № 3. -P. 215-219.

39. Zhou, L.L. Effect of addition of sodium alginate on bacterial cellulose production by Acetobacter xylinum / L.L. Zhou, D.P. Sun, L.Y. Hu, Y.W. Li, J.Z. Yang // Journal of industrial microbiology and biotechnology. - 2007. - Vol. 34. - P. 483489.

40. Фан Ми Хань. Получение бактериальной целлюлозы микробиологическим синтезом / Фан Ми Хань, Т.И. Громовых // Вестник российской сельскохозяйственной науки. - 2012. - № 5. - С.67-58.

41. Пат. 2189394 Россия, МПК С12Р19/04, С12Ш/20, C12N1/20, C12R1/02. Состав питательной среды культивирования Acetobacter xylinum для получения бактериальной целлюлозы (варианты) / А.К. Хрипунов, А.А. Ткаченко. - № 98100669/13; заявлено 12.01.1998; опубл. 20.08.2000, Бюл. № 26 - 16 с.

42. Богатырева, А.О. Получение бактериальных экзополисахаридов на средах с отходами биотехнологических производств / А.О. Богатырева, Н.Б. Сапунова, М.В. Щанкин , Е.В. Лияськина , В.В. Ревин // Вестник казанского технологического университета. - 2016. - Т. 19, № 24. - С. 142-145.

43. Сапунова, Н.Б. Получение бактериальной целлюлозы на среде с мелассой / Н.Б. Сапунова, Богатырева А.О., М.В. Щанкин, Е.В. Лияськина, В.В. Ревин // Вестник казанского технологического университета. - 2016. - Т. 19, № 24. - С. 154-156.

44. Liiaskina E. Cost-effective production of bacterial cellulose using food industry by-products / E. Liiaskina, V. Revin, M. Nazarkina, A. Bogatyreva, M. Shchankin // Journal of Biotechnology. - 2015. - Vol. 208. - P. S117.

45. Пат. 2141530 Россия, МПК С12Р19/02, С12Ш/20. Состав питательной среды культивирования Acetobacter xylinum для получения бактериальной целлюлозы / А.К. Хрипунов, А.А. Ткаченко. - № 98108987/13; заявлено 05.05.1998; опубл. 20.11.1999.

46. Пат. № 2536257 Россия, МПК C12N1/20, C12R1/01. Способ получения бактериальной целлюлозы / В.В. Ревин, Е.В. Лияськина, М.И. Назаркина, Н.В. Киреев. - № 2013127538/10; заявлено 17.06.2013; опубл. 20.12.2014. Бюл. № 35 -4 стр.

47. Пат. № 2536973 Россия, МПК С12Ш/20, d2P19/04, 02R1/01. Способ получения бактериальной целлюлозы / В.В. Ревин, Е.В. Лияськина, М.И. Назаркина. - № 2013154403/10; заявл. 06.12.2013; опубл. 27.12.2014. Бюл. № 36 -6 стр.

48. Ревин, В.В. Получение бактериальной целлюлозы на отходах пищевой промышленности / В.В. Ревин, Е.В. Лияськина, М.И. Назаркина, А.О. Богатырева, М.В. Щанкин // Актуальная биотехнология. - 2014. - № 3. - С.112.

49. Bae, S. Bacterial Cellulose Production by Fed-Batch Fermentation in Molasses Medium / S. Bae, M. Shoda // Biotechnology Progress. - 2004. - Vol. 20, № 4. - P. 1366-1371.

50. Keshk, S. Bacterial cellulose production from beet molasses / S. Keshk, T.M.A. Razek, K. Sameshima // African Journal of Biotechnology. - 2006. - Vol. 5, № 17. - P. 1519-1523.

51. Moon, S.H. Comparisons of physical properties of bacterial celluloses produced in different culture conditions using saccharified food wastes / S.H. Moon, J.M. Park, H.Y. Chun, S.J. Kim // Biotechnology and Bioprocess Engineering. - 2006. -№ 11. - P. 26-31.

52. Jozala, A.F. Bacterial cellulose production by Gluconacetobacter xylinus by employing alternative culture media / A.F. Jozala, R.A.N. Pértile, C.A. dos Santos, V. de Carvalho Santos-Ebinuma, M.M. Seckler, F.M. Gama, A. Pessoa Jr. // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2015. - Vol. 99, № 3. - P. 1181-1190.

53. Moosavi-Nasab, M. Investigation of physicochemical properties of the bacterial cellulose produced by Gluconacetobacterxylinus from date syrup / M. Moosavi-Nasab, A.R. Yousefi // World Academy of Science, Engineering and Technology. - 2010. - Vol. 4, № 8. - P. 613-618.

54. Kurosumi, A. Utilization of various fruit juices as carbon source for production of bacterial cellulose by Acetobacter xylinum NBRC 13693 / A. Kurosumi,

C. Sasaki, Y. Yamashita, Y. Nakamura // Carbohydrate Polymers. - 2009. - Vol. 76, № 2. - P. 333-335.

55. Wu, J.M. Thin stillage supplementation greatly enhances bacterial cellulose production by Gluconacetobacter xylinus / J.M. Wu, R.H. Liu // Carbohydrate Polymers. - 2012. - Vol. 90, № 1. - P. 116-121.

56. Zeng, X. Statistical optimization of culture conditions for bacterial cellulose production by Acetobacter xylinum BPR 2001 from maple syrup / X. Zeng,

D.P. Small, W. Wan // Carbohydrate Polymers. - 2011. - Vol. 85, № 3. - P. 506-513.

57. Carreira, P. Utilization of residues from agro-forest industries in the production of high value bacterial cellulose / P. Carreira, J.A.S. Mendes, E. Trovatti, L.S. Serafim, C.S.R. Freire, A.J.D. Silvestre // Bioresource technology. - 2011. -Vol. 102, № 15. - P. 7354-7360.

58. Vazquez, A. Bacterial cellulose from simple and low cost production media by Gluconacetobacter xylinus / A. Vazquez, M.L. Foresti, P. Cerrutti, M. Galvagno // Journal of Polymers and the Environment. - 2013. - Vol. 21, № 2. - P. 545-554.

59. Rani, M.U. Statistical optimization of medium composition for bacterial cellulose production by Gluconacetobacter hansenii UAC09 using coffee cherry husk extract--an agro-industry waste / M.U. Rani, K.R. Navin, K.A.A. Appaiah // Journal of Microbiology and Biotechnology. - 2011. - Vol. 21, № 7. - P. 739-745.

60. Li, Z. Production of nanobacterial cellulose from waste water of candied jujube-processing industry using Acetobacter xylinum / Z. Li, L. Wang, J. Hua, S. Jia, J. Zhang, H. Liu // Carbohydrate Polymers. - 2015. - Vol. 120. - P. 115-119.

61. Octave, S. Biorefinery: toward an industrial metabolism / S. Octave, D. Thomas // Biochimie. - 2009. - Vol. 91, № 6. - P. 659-664.

62. Макарова, Е.И. Биоконверсия непищевого целлюлозосодержащего сырья: энергетических растений и отходов АПК / Е.И. Макарова: дис. ... канд. технич. наук: 03.01.06. - Щелково, 2015. - 161 с.

63. Yang, X.-Y. Bioconversion of elephant grass (Pennisetum purpureum) acid hydrolysate to bacterial cellulose by Gluconacetobacter xylinus / X.-Y. Yang, C. Huang, H.-J. Guo, L. Xiong, Y.-Y. Li, H.-R. Zhang, X.-D. Chen // Journal of Applied Microbiology. - 2013. - Vol. 115, № 4. - P. 995-1002.

64. Hong, F. An alternative carbon source from konjac powder for enhancing production of bacterial cellulose in static cultures by a model strain Acetobacter aceti subsp. xylinus ATCC 23770 / F. Hong, K. Qiu // Carbohydrate Polymers. - 2008. -Vol. 72, № 3. - P. 545-549.

65. Guo, X. Comparison of methods for detoxification of spruce hydrolysate for bacterial cellulose production / X. Guo, A. Cavka, L.J. Jonsson, F. Hong // Microbial Cell Factories. - 2013. - № 12. - P. 1-14.

66. Goelzer, F.D.E. Production and characterization of nanospheres of bacterial cellulose from Acetobacter xylinum from processed rice bark / F.D.E. Goelzer, P.C.S. Faria-Tischer, J.C. Vitorino, M.R. Sierakowski, C.A. Tischer // Materials Science and Engineering. - 2009. - Vol. 29, № 2. - P. 546-551.

67. Chen, L. Biotransformation of wheat straw to bacterial cellulose and its mechanism / L. Chen, F. Hong, X.X. Yang, S.F. Han // Bioresource Technology. -2013. - Vol. 135. - P. 464-468.

68. Hong, F. Wheat straw acid hydrolysate as a potential cost-effective feedstock for production of bacterial cellulose / F. Hong, Y.X. Zhu, G. Yang, X.X. Yang // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. - 2011. - Vol. 86, № 5. -P. 675-680.

69. Hong, F. Bacterial cellulose production from cotton based waste textiles: enzymatic saccharification enhanced by ionic liquid pretreatment / F. Hong, X. Guo, S. Zhang, S. Han, G. Yang, L.J. Jonsson // Bioresource Technology. - 2012. - Vol. 104. -P. 503-508.

70. Cavka, A. Production of bacterial cellulose and enzyme from waste fiber sludge / A. Cavka, X. Guo, S.J. Tang, S. Winestrand, L.J. Jonsson, F. Hong // Biotechnology for Biofuels. - 2013. - № 6. - P. 25-35.

71. Новый справочник химика и технолога. Сырье и продукты промышленности органических и неорганических веществ. Ч.11. - Спб.: НПО «Профессионал», 2006. - 1142 с.

72. Скиба, Е.А. Методика определения биологической доброкачественности гидролизатов из целлюлозосодержащего сырья с помощью штамма Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-1693 / Е.А. Скиба // Известия вузов. прикладная химия и биотехнология. - 2016. - № 1 (16). - С. 34-44.

73. Синицын, А.П. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов / А.П. Синицын, А.В. Гусаков, В.М. Черноглазов. - М.: Изд-во Московского университета, 1995. - 224 с.

74. Hu, F. Pretreatment and Lignocellulosic Chemistry / F. Hu, A. Ragauskas // Bioenergy research. - 2012. - Vol. 5, № 4. - С. 1043-1066.

75. Синицын, А.П. Получение биокатализатора на основе рекомбинантных целлюлолитических ферментных препаратов Penicillium verruculosum и его применение в бумажной промышленности / А.П. Синицын,

A.М. Рожкова, О.А. Синицына, М.А. Холмова, К.Ю. Терентьев, Я.В. Казаков, Д.Г. Чухчин, Е.В. Новожилов // Катализ в промышленности. - 2015. - Т. 15, № 6. -P. 84-89.

76. Ефременко, Е.Н. Иммобилизованные грибные биокатализаторы для получения комплекса целлюлаз, гидролизующего возобновляемое растительное сырье/ Е.Н. Ефременко, Н.А. Степанов, Гудков Д.А., Сенько О.В., Лозинский

B.И., Варфоломеев С.Д. // Катализ в промышленности. - 2013. - № 1. - С. 68-77.

77. Химия биомассы: биотоплива и биопластики / под ред. С.Д. Варфоломеева. - М.: Научный мир, 2017. - 790 с.

78. Биотехнология: Учебник. - 2-ое переработанное изд. / А.Я. Самуйленко и [др.]. - М., 2013. - 446 с.

79. Goh, W.N. Fermentation of black tea broth (Kombucha): I. Effects of sucrose concentration and fermentation time on the yield of microbial cellulose / W.N. Goh, A. Rosma, B. Kaur, A. Fazilah, A.A. Karim, B. Rajeev // International Food Research Journal. - 2012. - Vol. 19, № 1. - P. 109-117.

80. Shirai, A. Biosynthesis of a novel polysaccharide by Acetobacter xylinum / A. Shirai, M. Takahashi, H. Kaneko, S. Nishimura, M. Ogawa, N. Nishi, S. Tokura // International Journal of Biological Macromolecules. - 1994. - № 16. - P. 297-300.

81. Aloni, Y. Achievement of high rates of in vitro synthesis of 1, 4-beta-D-glucan: activation by cooperative interaction of the Acetobacter xylinum enzyme system with GTP, polyethylene glycol, and a protein factor / Y. Aloni, D.P. Delmer, M. Benziman // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1982. - Vol. 79, № 21. - P. 6448-6452.

82. Нетрусов, А.И. Микробиология / А.И. Нетрусов, И.Б. Котова. - М.: Академия, 2006. - 353 с.

83. Kouda, T. Effects of oxygen and carbon dioxide pressures on bacterial cellulose production by Acetobacter in aerated and agitated culture / T. Kouda, T. Naritomi, H. Yano, F. Yoshinaga // Journal of Bioscience and Bioengineering. - 1997. -Vol. 84, № 2. - P. 124-137.

84. Song H.-J. Pilot-scale production of bacterial cellulose by a spherical type bubble column bioreactor using saccharified food wastes / H.-J. Song, H. Li, J.-H. Seo, M.-J. Kim, S.-J. Kim // Korean Journal of Chemical Engineering. - 2009. - Vol. 26, № 1. - P. 141-146.

85. Li, H. Determination of the stoichiometry and critical oxygen tension in the production culture of bacterial cellulose using saccharified food wastes / H. Li, S.-J. Kim, Y.-W. Lee, C. Kee, I. Oh // Korean Journal of Chemical Engineering. - 2011. -Vol. 28, № 11. - P. 2306-2311.

86. Kim, S. Effect of viscosity inducing factors on oxygen transfer in production culture of bacterial cellulose / S. Kim, H. Li, I. Oh, C. Kee, M. Kim // Korean Journal of Chemical Engineering. - 2012. - Vol. 29, № 6. - P. 792-797.

87. Tantratian, S. Effect of dissolved oxygen on cellulose production by Acetobacter sp. / S. Tantratian, P. Tammarate, W. Krusong, P. Bhattarakosol, A Phunsri // Journal Sciences Research Chula University. - 2005. - Vol. 30, № 2. - P. 179-186.

88. Hwang, J.W. Effects of pH and dissolved oxygen on cellulose production by Acetobacter xylinum BRC5 in agitated culture / J.W. Hwang, Y.K. Yang, J.K.

Hwang, Y.R. Pyun, Y.S. Kim // Journal Of Bioscience And Bioengineering. - 1999. -Vol. 88, № 2. - P. 183-188.

89. Chao, Y. Bacterial cellulose production under oxygen-enriched air at different fructose concentrations in a 50-liter, internal-loop airlift reactor / Y. Chao, Y. Sugano, M Shoda // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2001. - Vol. 55, № 6.

- P. 673-679.

90. Son, H.J. Optimization of fermentation conditions for the production of bacterial cellulose by a newly isolated Acetobacter / H.J. Son, M.S. Heo, Y.G. Kim, S.J. Lee // Biotechnology and Applied Biochemistry. - 2001. - Vol. 33, № 1. - P. 1-5.

91. Wong, H.C. Genetic organization of the cellulose synthase operon in Acetobacter xylinum / H.C. Wong, A.L. Fear, R.D. Calhoon, G.H. Eichinger, R. Mayer,

D. Amikam, M. Benziman, D.H. Gelfand, J.H. Meade, A.W. Emerick, R. Bruner, A. Ben-Bassat, R. Tal // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 1990. - Vol. 87, № 2. - P. 8130-8134.

92. Hirai, A. Culture conditions producing structure entities composed of cellulose I and II in bacterial cellulose / A. Hirai, M. Tsuji, F. Horii // Cellulose. - 1997.

- Vol. 4, № 3. - P. 239-245.

93. Zeng, X. Screening of the common culture conditions affecting crystallinity of bacterial cellulose / X. Zeng, J. Liu, J. Chen, Q. Wang, Z. Li, H. Wang // Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology. - 2011. - Vol. 38, № 12. - P. 1993-1999.

94. Penttila, P.A. Effects of reaction conditions on cellulose structures synthesized in vitro by bacterial cellulose synthases / P.A. Penttila, J. Sugiyma, T. Imai // Carbohydrate Polymers. - 2016. - Vol. 136. - P. 656-666.

95. Coban, E.P. Evaluation of different pH and temperatures for bacterial cellulose production in HS (Hestrin-Scharmm) medium and beet molasses medium /

E.P. Coban, H. Biyik // African Journal of Microbiology Research. - 2011. - Vol. 5, № 9. - P. 1037-1045.

96. Jonas R. Production and application of microbial cellulose / R. Jonas, L.F. Farah // Polymer Degradation and Stability. - 1998. - Vol. 59, № 1-3. - P. 101-106.

97. Bacterial nanocellulose: a sophisticated multifunctional material / ed. by M.Gama, P.Gatenholm, D.Klemm. - 2013. - 306 p.

98. Klemn, D. Bacterial synthesis cellulose—artificial blood vessels for microsurgery / D. Klemn, D. Schumann, U. Udhart, S. Marsch // Progress in Polymer Science. - 2001. - Vol. 26, № 9. - P. 1561-1603.

99. Jagannath, A. The effect of pH, sucrose and ammonium sulphate concentrations on the production of bacterial cellulose (Nata-de-coco) by Acetobacter xylinum / A. Jagannath, A. Kalaiselvan, S.S. Manjunatha, P.S. Raju, A.S. Bawa // World Journal of Microbiology and Biotechnology. - 2008. - Vol. 24, № 11. - P. 2593-2599.

100. Zeng, X. Screening of the common culture conditions affecting crystallinity of bacterial cellulose / X. Zeng, J. Liu, J. Chen, Q. Wang, Z. Li, H. Wang // Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology. - 2011. - Vol. 38, № 12. - P. 1993-1999.

101. Noro, N. Utilization of the buffering capacity of corn steep liquor in bacterial cellulose production by Acetobacter xylinum / N. Noro, Y. Sugano, M. Shoda // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2004. - Vol.64, № 2. - P. 199-205.

102. Khairul, A.Z. Monitoring the Effect of pH on Bacterial Cellulose Production and Acetobacter xylinum 0416 Growth in a Rotary Discs Reactor / A.Z. Khairul, P. Norhayati, I.M. Ida // Arabian Journal for Science and Engineering. - 2015. - Vol. 40, № 7. - P. 1881-1885.

103. Гладышева, Е.К. Обоснование выбора питательной среды для синтеза бактериальной целлюлозы / Е.К. Гладышева // Вестник алтайской науки. - 2014. -№ 1. - P. 307-310.

104. Громовых, Т.И. Перспективы направленного использования бактериальной целлюлозы в медицине / Т.И. Громовых, С.В. Луценко, Т.Н. Данильчук, Фан Ми Хань // Интер-Медикап. - 2015. - № 7(13). - С. 4-9.

105. Громовых, Т.И. Бактериальная целлюлоза, синтезируемая Gluconacetobacter hansenii, для использования в медицине / Т.И. Громовых, С.С. Садыкова, С.В. Луценко, А.С. Дмитренок, Н.Б. Фельдман, Т.Н. Данильчук, В.В. Каширин // Прикладная биохимия и микробиология. - 2017. - Т. 53, № 1. - С. 6975.

106. Czaja, W. Microbial cellulose - The natural power to heal wounds / W. Czaja, A. Krystynowicz, S. Bielecki, R.M. Brown Jr. // Biomaterials. - 2006. - Vol. 27, № 2. - P. 145-151.

107. Meftahi, A. The effects of cotton gauze coating with microbial cellulose / A. Meftahi, R. Khajavi, A. Rashidi, M. Sattari, M.E. Yazdanshenas, M. Torabi // Cellulose. - 2010. - Vol. 17, № 1. - P. 199-204.

108. Lin, S.-P. Biosynthesis, production and applications of bacterial cellulose / S.-P. Lin, I.L. Calvar, J.M. Catchmark, J.-R. Liu, A. Demirci, K.-C. Cheng // Cellulose. - 2013. - Vol. 20, № 5. - P. 2191-2219.

109. Венгерович, Н.Г. Исследование возможности применения бактериальной целлюлозы на этапах медицинской эвакуации / Н.Г. Венгерович, А.К. Хрипунов, Э.А. Рузанова, А.С. Никифоров, И.М. Иванов, А.А. Ткаченко // WWW.MEDLINE.RU. - 2014. - Т.15. - С.620-628.

110. Венгерович, Н.Г. Применение биоактивных наноматериалов при раневом процессе / Н.Г. Венгерович, Е.В. Антоненкова, В.А. Андреев, О.Б. Зайцева, А.К. Хрипунов, В.А. Попов // Вестник российской военно-медицинской академии. - 2011. - № 1 (33). - С. 162 - 167.

111. Watanabe, K. A new bacterial cellulose substrate for mammalian cell culture. A new bacterial cellulose substrate / K. Watanabe, Y. Eto, S. Takano, S. Nakamori, H. Shibai, S. Yamanaka // Cytotechnology. - 1993. - Vol. 13, № 2. - P. 107114.

112. Svensson, A. Bacterial cellulose as a potential scaffold for tissue engineering of cartilage / A. Svensson, E. Nicklasson, T. Harrah, B. Panilaitis, D.L. Kaplan, M. Brittberg, P. Gatenholm // Biomaterials. - 2005. - Vol. 26, № 4. - P. 419431.

113. Sanchavanakit, N. Growth of human keratinocytes and fibroblasts on bacterial cellulose film / N. Sanchavanakit, W. Sangrungraungroj, R. Kaomongkolgit, T. Banaprasert, P. Pavasant, M. Phisalaphong // Biotechnology Progress. - 2006. -Vol. 22, № 4. - P. 1194-1199.

114. Backdahl, H. Mechanical properties of bacterial cellulose and interactionswith smoothmuscle cells / H. Backdahl, G. Helenius, A. Bodin, U. Nannmark, B.R. Johansson, B. Risberg, P. Gatenholm // Biomaterials. - 2006. -Vol. 27, № 9. - P. 2141-2149.

115. Cai, Z. Bacterial cellulose/poly(ethylene glycol) composite: characterization and first evaluation of biocompatibility / Z. Cai, J. Kim // Cellulose. -2010. - Vol. 17, № 1. - P. 83-91.

116. Fink, H. Real-time measurements of coagulation on bacterial cellulose and conventional vascular graft materials / H. Fink, L. Faxalv, G.F. Molnar, K. Drotz, B. Risberg, T.L. Lindahl, A. Sellborn // Acta Biomaterialia. - 2010. - Vol. 6, № 3. - P. 1125-1130.

117. Schumann, D. Artificial vascular implants from bacterial cellulose: preliminary results of small arterial substitutes / D. Schumann, J. Wippermann, D. Klemm, F. Kramer, D. Koth, H. Kosmehl, T. Wahlers, i S. Salehi-Gelan // Cellulose. -2009. - Vol. 16, № 5. - P. 877-885.

118. Putra, A. Tubular bacterial cellulose gel with oriented fibrils on the curved surface / A. Putra, A. Kakugo, H. Furukawa, J.P. Gong, Y. Osada // Polymer. - 2008. -Vol. 49, № 7. - P. 1885-1891.

119. Hu, Y. In vitro biodegradability and mechanical properties of bioabsorbable bacterial cellulose incorporating cellulases / Y. Hu, J.M. Catchmark // Acta Biomaterialia. - 2011a. - Vol. 7, № 7. - P. 2835-2845.

120. Hu, Y. Integration of cellulases into bacterial cellulose: toward bioabsorbable cellulose composites / Y. Hu, J.M. Catchmark // Journal of Biomedical Materials Research Part B. - 2011b. - Vol. 97 B, № 1. - P. 114-123.

121. Klemm, D. Nanocelluloses: a new family of naturebased materials / D. Klemm, F. Kramer, S. Moritz, T. Lindstrom, M. Ankerfors, D. Gray, A. Dorris // Angewandte Chemie. - 2011. - Vol. 50, № 24. - P. 5438-5466.

122. Petersen, N. Bacterial cellulose-based materials and medical devices: current state and perspectives / N. Petersen, P. Gatenholm // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2011. - Vol. 91. - P. 1277-1286.

123. Wu, S.C. Application of bacterial cellulose pellets in enzyme immobilization / S.C. Wu, Y.K. Lia // Journal of Molecular Catalysis B Enzymatic. -2008. - Vol. 54, № 3-4. - P. 103-108.

124. Helenius, G. In vivo biocompatibility of bacterial cellulose / G. Helenius, H. Backdahl, A. Bodin, U. Nannmark, P. Gatenholm, B. Risberg // Journal of Biomedical Materials Research Part A. - 2006. - Vol. 76 A, № 2. - P. 431-438.

125. Mendes, P.N. In vivo and in vitro evaluation of an Acetobacter xylinum synthesized microbial cellulose membrane intended for guided tissue repair / P.N. Mendes, S.C. Rahal, O.C. Pereira-Junior, V.E. Fabris, S.L. Lenharo, J.F. de Lima-Neto, F. da Cruz Landim-Alvarenga // Acta Veterinaria Scandinavica. - 2009. - Vol. 51, № 1. - P. 12.

126. Amin, M.C.I.M. Synthesis and characterization of thermo- and pH-responsive bacterial cellulose/acrylic acid hydrogels for drug delivery / M.C.I.M. Amin, A.G. Abadi, N. Ahmad, H. Katas, J.A. Jamal // Carbohydrate Polymers. - 2012b. -Vol. 88, № 2. - P. 465-473.

127. Капуцкий, Ф.Н. Изучение иммобилизации цисплатина карбоксилсодержащими целлюлозами / Ф.Н. Капуцкий, Т.Л. Юркштович, П.М. Бычковский, С. А. Беляев, Д. А. Адамчик, С. О. Соломевич // Вестник БГУ. Серия № 2, Химия. Биология. География. - 2010. - № 1. - С. 3 - 6.

128. Адамчик, Д.А. Сравнительная оценка противоопухолевой активности цисплатина, иммобилизованного на модифицированных хлопковой и бактериальной целлюлозах / Д.А. Адамчик, П.М. Бычковский, Т.Л. Юркштович, Е.Н. Александрова // Онкологический журнал. - 2012. - Т.6, № 3 (23) - С. 30-33.

129. Bodin, A. Bacterial cellulose as a potential meniscus implant / A. Bodin, S. Concaro, M. Brittberg, P. Gatenholm // Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. - 2007. - Vol. 1, № 5. - С. 406-408.

130. Гофман, И.В. Полимерные композиции на основе целлюлозы Acetobacter xylinum и синтетических полимеров: функциональные свойства и перспективы применения в медицине / И.В. Гофман, А.Л. Буянов, А.К. Хрипунов,

Л.Г. Ревельская, А.А. Ткаченко, Б.А. Парамонов // Материалы. Технологии. Инструменты. - 2006. - Т.11, № 1. - С. 35-41.

131. Буянов, А.Л. Высокопрочные биосовместимые гидрогели на основе полиакриламида и целлюлозы: синтез, механические свойства и перспективы применения в качестве искусственных заменителей хрящевых тканей / А.Л. Буянов, И.В. Гофман, А.К. Хрипунов, А.А. Ткаченко, Е.Э. Ушакова // Высокомолекулярные соединения, Серия А. - 2013. - Т.55, № 5. - С. 512-522.

132. Gao, W.-H. Properties of bacterial cellulose and it s influence on the physical properties of paper / W.-H. Gao, K.-F. Chen, R.-D. Yang, F. Yang, W.-J. Han. // BioResources. - 2011. - Vol. 6, № 1. - C. 144-153.

133. Yamanaka, S. The structure and mechanical properties of sheets prepared from bacterial cellulose / S. Yamanaka, K. Watanabe, N. Kitamura, M. Iguchi, S. Mitsuhashi, Y. Nishi, M. Uryu // Journal of Materials Science. - 1989. - Vol. 24, № 9. - P. 3141-3145.

134. Gutierrez J., Tercjak A., Algar I., Retegi A., Mondragon I. Conductive properties of TiO2/bacterial cellulose hybrid fibres // Journal of Colloid and Interface Science.- 2012b. - Vol. 337, № 1. - P. 88 - 93.

135. Смирнова Е.Г. Повышение устойчивости бумаги к старению формированием ее композиционного состава: автореф. дис. ... док. технич. наук: 05.21.03. / Е.Г. Смирнова. - Санкт-Петербург, 2014. - 311 с.

136. Модификация целлюлозы - перспективное направление в создании новых материалов / Н.И. Ткачева и [др.] // Высокомолекулярные соединения, серия Б. - 2013. - Т. 55, № 8. - P. 1086-1107.

137. Sun, D.-P. Novel nitrocellulose made from bacterial cellulose / D.-P. Sun, B. Ma, C.-L. Zhu, C.-S. Liu, J.-Z. Yang // Journal of Energetic Materials. - 2010. -Vol. 28, № 2. - Р. 85-97.

138. Yamamoto, H. In Situ crystallization of bacterial cellulose I. Influences of polymeric additives, stirring and temperature on the formation celluloses Ia and ip as revealed by cross polarization/magic angle spinning (CP/MAS) 13C NMR spectroscopy / H. Yamamoto, F. Horii // Cellulose. - 1994. - Vol. 1, № 1. - P. 57-66.

139. Cheng, H.N. Rheology of carboxymethylcellulose made from bacterial cellulose / H.N. Cheng, M. Takai, E.A. Ekong. // Macromolecular Symposia. - 1999. -Vol. 140. - P.145-153.

140. Kulicke, W.M. Characterization of aqueous carboxymethylcellulosesolution in terms of their molecular structure and its influence onrheological behavior / W.M. Kulicke, A.H. Kull, W. Kull, H. Thielking, J. Engelhardt, J.B. Pannek // Polymer. - 1996. - Vol. 37, № 13. - P. 2723-2731.

141. Кезина, Е.В. Получение карбоксиметильных производных бактериальной целлюлозы с высокой степенью замещения / Е.В. Кезина, О.В. Парчайкина, Д.А. Кадималиев, В.В. Ревин, Е.А. Котина // Актуальная биотехнология. - 2014. - № 3. - С. 37.

142. Moosavi-Nasab, M. Fermentative Production and Characterization of Carboxymethyl Bacterial Cellulose Using Date Syrup / M. Moosavi-Nasab, A.R. Yousefi, H. Askari, M. Bakhtiyari // World Academy of Science, Engineering and Technology. - 2010. - Vol. 4, № 8. - P. 635-639.

143. Schlufter, K. Carboxymethylation of Bacterial Cellulose / K. Schlufter, T. Heinze // Macromolecular Symposia. - 2010. - Vol. 294, № 2. - P. 117-124.

144. Пат. 2464307 Россия, МПК C12N1/20, C12P19/04, C12R1/01. Штамм бактерии Cluconacetobacter hansenii GH-1/2008 - продуцент бактериальной целлюлозы/ Т.И. Громовых, Фан Ми Хань, Т.Н. Данильчук. - № 2011121841/10; заявл. 31.05.2011; опубл. 20.10.2012 Бюл. № 29. - 12 стр.

145. Пат. 2568605 Россия, C12N1/20, C12P19/04, C12R1/00. Штамм бактерии Komagataeibacter xylinus - продуцент бактериальной целлюлозы/ Т.Г. Волова, С.В. Прудникова, Е.И. Шишацкая. - . № 2014150288/10; заявл. 11.12.2014; опубл. 20.11.2015 Бюл. № 32. - 11 стр.

146. Пат. 2500198 Россия, A23L1/30, A23L2/00, A23F3/16. Способ получения биологически активного биоматериала и биоматериал, полученный данным способом / В.Х. Хачатрян. - № 2012135672/13; заявл. 21.08.2012; опубл. 10.12.2013 Бюл. № 34. - 8 стр.

147. Пат. CN105349594 China, 02P19/04, 02R1/01. Method for preparing bacterial cellulose from soybean molasses / Xu Su; Cheng Jianjun; Yin yuan; Ma Jiage; Zhang Shan; Ge Xiaoyuan. - № CN20151990189; заявл. 25.12.2015; опубл. 24.02.2016. - 7 стр.

148. Пат. CN105647988 China, 02P19/04, 02R1/01. Method of preparing nano level bacterial cellulose from waste food / Li Zheng; Wang Lifen; Zhang Jianfei; Gong Jixian; Jia Shiru. - № CN20141747437; заявл. 05.12.2014; опубл. 08.06.2016. -6 стр.

149. Пат. CN104611390 China, 02P19/04, 02R1/02. Method for preparing bacterial cellulose by using bean curd yellow serofluid / Xia Xiufang; Huang Li; Wang Yingnan; Wu Lei. - № CN20131539984; заявл. 05.11.2013; опубл. 13.05.2015. -6 стр.

150. Пат. CN104630311 China, 02P19/04, 02R1/02. Method for synchronously producing straw nano-cellulose and bacterial cellulose by using sweet sorghum / Tang Bo; Liu Wenyu. - № CN2015166078; заявл. 09.02.2015; опубл. 20.05.2015. - 8 стр.

151. Пат. CN105063126 China, 02P19/04, 02R1/02. Method for preparing bacterial cellulose from peanut shells / Sun Dongping; Sun Bianjing; Zhang Heng; Zhu Chunlin; Yang Jiazhi. - № CN20151475356; заявл. 05.08.2015; опубл. 18.11.2015. -8 стр.

152. Пат. 2545729 Россия, A61K9/00, A61L15/18, A61L15/28, A61L15/40. Сетчатое биоактивное раневое покрытие / К.Н. Касанов, Р.А. Евсеев, Ю.А. Игнатьева, А.К. Хрипунов, В.А. Попов, А.И. Везенцев, М.В. Успенская. - № 2013145823/15; заявл. 15.10.2013; опубл. 10.04.2015. Бюл. № 29. - 8 стр.

153. Пат. 94151 Россия, A61F13/02. Биологически активное покрытие для лечения ран / Н.В. Калмыкова, Е.В. Канов, П.В. Кругляков, Д.Г. Полынцев, Е.В. Скоробогатая. - № 2009147084/22; заявл. 18.12.2009; опубл. 20.05.2010 Бюл. № 14. - 2 стр.

154. Пат. 2437681 Россия, A61L15/18, A61L15/44, A61L15/28. Раневое покрытие с лечебным действием / В.А. Попов, Н.Г. Венгерович, А.К. Хрипунов,

Л.А. Ткаченко, Е.Р. Гасилова, Г.П Александрова, К.Н. Касанов, Е.В. Антоненкова. - № 2010133389/15; заявл. 09.08.2010; опубл. 27.12.2011 Бюл. № 36. - 10 стр.

155. Пат. 2472891 Россия, МПК D21H17/25, D21H25/18. Способ восстановления недостающих частей листов бумаги / Е.Г. Смирнова, Е.М. Лоцманова, А.К. Хрипунов, А.А. Ткаченко. - № 2011123979/05; заявл. 15.06.2011; опубл. 20.01.2013 Бюл. № 2. - 5 стр.

156. Пат. 2415221 Россия, D21H27/12, D21H17/25, C12S3/08. Способ получения электроизоляционной бумаги / Н.М. Журавлева, Б.И. Сажин, Е.Г. Смирнова, А.К. Хрипунов, А.А. Ткаченко. - № 2010117529/12; заявл. 30.04.2010; опубл. 27.03.2011 Бюл. № 9. - 5 стр.

157. Будаева, В.В. Новые сырьевые источники целлюлозы для технической химии / В.В. Будаева, Р.Ю. Митрофанов, В.Н. Золотухин, Г.В. Сакович // Вестник Казанского технологического университета. - 2011. - № 7. - С. 205-212.

158. Goh, W.N. Microstructure and physical properties of microbial cellulose produced during fermentation of black tea broth (Kombucha). II / W.N. Goh, A. Rosma, B. Kaur, A. Fazilah, A.A. Karim, B. Rajeev // International Food Research Journal. -2012. - Vol. 19, № 1. - P. 153-158.

159. Жумабекова, Б.К. Технология получения чайного кваса с добавлением экстракта душицы / Б.К. Жумабекова, К.А. Жумабекова // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 2-11. - С. 2370-2373.

160. Жумабекова, Б.К. Получение высокоактивной ассоциации «Чайного гриба» из природных штаммов микроорганизмов / Б.К. Жумабекова, К.А. Жумабекова // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 2-11. - С. 2374-2376.

161. Кутышенко, В.П. Влияние тяжелой воды на метаболизм симбиотического организма / В.П. Кутышенко, Д.И. Юркевич // Биофизика. -2002. - Т. 44, № 2. - С. 690-700.

162. Gama M. Bacterial nanocellulose. From Biotechnology to Bio-Economy / M. Gama, F. Dourado, S. Bielecki. - Amsterdam: Elsevier, 2016. - 240 p.

163. Gismatulina, Y.A. Cellulose from various parts of soranovskii miscanthus / Y.A. Gismatulina, V.V. Budaeva, G.V. Sakovich, S.G. Veprev, V.K. Shumny // Russian

Journal of Genetics: Applied Research. - 2015. - Т. 5, № 1. - С. 60-68.

164. Оболенская, А.В. Лабораторные работы по химии древесины и целлюлозы: Учебное пособие для вузов / А.В. Оболенская, З.П. Ельницкая, А.А. Леонович. - М.: Экология, 1991. - 320 с.

165. ГОСТ 6840-78. Целлюлоза. Метод определения содержания альфа-целлюлозы. Издание официальное. - М., 1978. - 6 с.

166. ГОСТ 10820-75. Целлюлоза. Метод определения массовой доли пентозанов. Издание официальное. - М., 1975. - 7 с.

167. ГОСТ 18461-93. Целлюлоза. Метод определения содержания золы. Издание официальное. - М., 1993. - 8 с.

168. ГОСТ 25438-82. Целлюлоза для химической переработки. Методы определения характеристической вязкости. Издание официальное. - М., 1982. -20 с.

169. Gusakov A.V. Comparison of two methods for assaying reducing sugars in the determination of carbohydrase activities / A.V. Gusakov, E.G. Kondratyeva, A.P. Sinitsyn // International Journal of Analytical Chemistry. - 2011. - V. 2011. - P. 1-4.

170. Градова, Н.Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии / Н.Б. Градова. - М.:Дели принт, 2001. - 131 с.

171. Яровенко. В.Л. Технология спирта / В.Л. Яровенко, В.А. Маринченко, В.А. Смирнов. - М.: Колос, 1999. - 464 с.

172. Пат. 2556940, Россия. Способ получения нитратов целлюлозы / Будаева В.В., Якушева А.А., Гисматулина Ю.А., Золотухин В.Н., Сакович Г.В. -№ 2014100776, заявлено 09.01.2014; опубл. 23.06.2015.

173. Геньш, К.В. Количественный анализ нитратов целлюлозы методом ИК-Фурье-спектроскопии / К.В. Геньш, П.В. Колосов, Н.Г. Базарнова // Химия растительного сырья. - 2010. - № 3. - С. 63-66.

174. Якушева, А.А. Определение массовой доли азота в нитратах целлюлозы из мискантуса и плодовых оболочек овса / А.А. Якушева [и др.] // Технология и оборудование химической, биотехнологической и пищевой промышленности: материалы 4-й Всерос. науч.-практ. конф. студентов,

аспирантов и молодых ученых с междунар. участием, - Бийск, 2011. - С. 106-109.

175. Нитроцеллюлоза. Методы определения вязкости: ГОСТ В 5769-75 -Введ. 1975.

176. Нитроцеллюлоза. Методы определения растворимости: ГОСТ В 576675 - Введ. 1975.

177. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Часть первая. - М.: Гриф иК, 2012, стр. 453-479.

178. Гладышева, Е.К. Биосинтез бактериальной целлюлозы культурой Medusomyces gisevii / Е.К. Гладышева, Е.А.Скиба // Вестник Вестник Воронежского государственного университета инженерных технологий - 2015. -№ 3. - С. 149-156.

179. Гладышева, Е.К. Культивирование Medusomyces gisevii J.Lindau при различных значениях активной кислотности / Е.К. Гладышева, О.А. Судакова / Технологии и оборудование химической, биотехнологической и пищевой промышленности: материалы VII Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием, 21-23 мая 2014 г., г. Бийск. - Бийск: Изд-во Алт. гос. техн. ун-та, 2014. -С. 284-286.

180. Гладышева, Е.К. Изучение биосинтеза бактериальной целлюлозы культурой Medusomyces gisevii J. Lindau на средах с различной начальной концентрацией глюкозы / Е.К. Гладышева // Фундаментальные исследования. -2015. -№ 2-1. - С. 13-17.

181. Кошевая, Н.О. Культивирование Medusomyces gisevii при различных концентрациях глюкозы / Н.О. Кошевая, Е.К. Гладышева, Е.А. Скиба / Технологии и оборудование химической, биотехнологической и пищевой промышленности: материалы VIII Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием, 20-22 мая 2015 г., г. Бийск. - Бийск: Изд-во Алт. гос. техн. ун-та, 2015. -С. 265-269.

182. Гладышева, Е.К. Влияние начальной концентрации субстрата на биосинтез гель-плёнки бактериальной целлюлозы культурой Medusomyces gisevii J. Lindau / Е.К. Гладышева / Биотехнологии в химико-лесном комплексе: материалы Международной научной конференции, 11-12 сентября 2014 г., г. Архангельск. - Архангельск: ИД САФУ, 2014. - С. 130-133.

183. Гладышева, Е.К. Исследование влияния температуры на синтез бактериальной целлюлозы продуцентом Medusomyces gisevii / Е.К. Гладышева // Современные наукоемкие технологии. - 2016. - № 8-1. - С. 36-40.

184. Гладышева, Е.К. Изучение влияния температуры на биосинтез бактериальной целлюлозы / Е.К. Гладышева / Пищевые технологии и биотехнологии: материалы XIV Международной конференции молодых ученых, г. Казань, 13-14 мая 2015 г.: сборник тезисов докладов. - Казань: Издательство «БРИГ», 2015. - С. 64.

185. Гладышева, Е.К. Изучение влияния различных условий на синтез бактериальной целлюлозы, продуцентом Medusomyces gisevii / Е.К. Гладышева, Е.А. Скиба / Химия и химическая технология в XXI веке: материалы XVI Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых, посвященной 115-летию со дня рождения профессора Л.П. Кулева, в 2-х т, 25-29 мая 2015 г., г. Томск / Томский политехнический университет. - Томск : Изд-во Томского политехнического университета, 2015. - Т. 2. - С. 277-278.

186. Гладышева, Е.К. Изучение влияния этанола и дрожжевого экстракта на биосинтез бактериальной целлюлозы, продуцентом Medusomyces gisevii / Е.К. Гладышева / Пищевые инновации и биотехнологии: материалы Международной научной конференции, 28 апреля 2015 г., г. Кемерово. - Кемерово, 2015. - С. 4850.

187. ГОСТ 32573-2013. Чай черный. Технические условия. - Взамен 193890; введ. 01.07.2015. - М.: Изд-во стандартов, 2014. - 8 с.

188. Гладышева Е.К. Изучение влияния концентрации чая на синтез бактериальной целлюлозы / Е.К. Гладышева / Химия и технология растительных веществ: тезисы докладов IX Всероссийской научной конференции с

международным участием и школой молодых ученых, 28-30 сентября 2015 г. -Сыктывкар-Москва: Институт химии Коми НЦ УрО РАН, 2015. - С. 46.

189. Гладышева, Е.К. Изучение влияния соотношения объёмов питательной среды и воздуха на биосинтез бактериальной целлюлозы / Е.К. Гладышева / Химия и технология новых веществ и материалов: тезисы доклада V Всероссийской молодежной научной конференции Института химии Коми научного центра. - Сыктывкар, 2015. - С. 156-158.

190. Получение бактериальной целлюлозы на синтетической питательной среде в реакторе объемом 16 литров / Е.К. Гладышева, Е.А. Скиба / Низкотемпературные и пищевые технологии в XXI веке: материалы VII Международной научно-технической конференции, Санкт-Петербург, 17-20 ноября 2015 г. - СПб.: Университет ИТМО, 2015. - Ч. II. - С. 297-300.

191. Гисматулина, Ю.А. Сравнение целлюлоз, выделенных из мискантуса, с хлопковой целлюлозой методом ИК-Фурье спектроскопии / Ю.А. Гисматулина, В.В. Будаева // Ползуновский вестник. - 2014. - № 3. - С. 177-181.

192. Yin, X. Comparison of succinylation methods for bacterial cellulose and adsorption capacities of bacterial cellulose derivatives for Cu ion / X. Yin, C. Yu, X. Zhang, J. Yang, Q. Lin, J. Wang, Q. Zhu // Polymer Bulletin. - 2011. - Vol. 67, № 3. -P. 401-412.

193. Алешина, Л.А. Современные представления о строении целлюлоз (обзор) / Л.А. Алешина, С.В. Глазкова, Л.А. Луговская, М.В. Подойникова, А.Д. Фофанов, Е.В. Силина // Химия растительного сырья. - 2001. - №1. - С. 5-35.

194. Гладышева, Е.К. Исследование физико-химических свойств бактериальной целлюлозы, продуцируемой культурой Medusomyces gisevii / Е.К. Гладышева // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 5-1. - С. 53-57.

195. Гладышева, Е.К. Исследование структуры и химического строения бактериальной целлюлозы / Е.К. Гладышева // Ползуновский вестник. - 2015. -№ 4-2. - С. 100-105.

196. Коваленко, В.И. Строение, синтез и термическое разложение нитратов целлюлозы: монография / В.И. Коваленко, Г.Н. Марченко, Г.М. Храпковский,

А.Г. Шамов. - М.: КДУ, 2012. - 396 с.

197. Гладышева, Е.К. Получение нитратов на основе бактериальной целлюлозы / Е.К. Гладышева, Ю.А. Гисматулина, М.Н .Денисова, В.В. Будаева / Материалы и технологии XXI века: доклады IV Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов, 9-11 сентября 2015, г. Бийск Алтайского края. - Бийск: Изд-во Алт. гос. техн. ун-та, 2015. - С. 149154.

198. Гладышева Е.К. Альтернативный источник сырья для синтеза нитратов целлюлозы / Е.К. Гладышева, Ю.А. Гисматулина, В.В. Будаева / Перспективы создания и применения конденсированных высокоэнергетических материалов: материалы 6-ой Всероссийской научно-технической конференции молодых ученых, 15-16 сентября 2016, г. Бийск Алтайского края. - Бийск: РОАК ОООП «Общероссийское литературное общество», 2016. - С. 56-60.

199. Макарова, Е.И. Применение ВЭЖХ в анализе ферментативных гидролизатов плодовых оболочек овса / Е.И. Макарова, В.В. Будаева // Ползуновский вестник. - 2016. - Т.1, № 4. - С. 14-16.

200. Гладышева, Е.К. Особенности структурных характеристик бактериальной целлюлозы, синтезированной на ферментативном гидролизате лигноцеллюлозного материала плодовых оболочек овса / Е.К. Гладышева, Е.А. Скиба, Л.А. Алешина // Ползуновский вестник. - 2016. - № 4-1. - С. 152-156.

201. Гладышева, Е.К. Исследование процесса биосинтеза бактериальной целлюлозы на ферментативном гидролизате волокнистого продукта плодовых оболочек овса / Е.К. Гладышева // Фундаментальные исследования. - 2016. -№ 11-2. - С. 260-265.

202. Гладышева, Е.К. Биосинтез бактериальной целлюлозы на ферментативном гидролизате технической целлюлозы из плодовых оболочек овса / Е.К. Гладышева, Е.А. Скиба // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. - 2017. - Т. 7, № 1. - С. 140-146.

203. Сакович, Г.В. Технологические основы получения бактериальной наноцеллюлозы из сырья с нулевой себестоимостью / Г.В. Сакович, Е.А. Скиба,

В.В. Будаева, Е.К. Гладышева, Л.А. Алёшина // Доклады Академии наук. - 2017. -№ 1 (477). - С. 109-112.

204. Гладышева, Е.К. Результаты рентгенографических исследований бактериальной целлюлозы / Е.К. Гладышева // Фундаментальные исследования. -2015. - № 7-2 . - С. 240-244.

205. Гладышева, Е.К. Рентгенографические исследования бактериальной целлюлозы, выращенной на ферментативном гидролизате мискантуса / Е.К. Гладышева, И.В. Люханова / Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: материалы VI Всероссийской конференции с международным участием, г. Барнаул, 21-24 апреля 2014 г. / Под ред. Н.Г. Базарновой, В.И. Маркина. - Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2014. - С. 404-406.

206. Гладышева, Е.К. Биотехнологические основы получения бактериальной целлюлозы из целлюлозосодержащего сырья / Е.К. Гладышева / Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: материалы VI Всероссийской конференции с международным участием, г. Барнаул, 24-28 апреля 2017 г. / Под ред. Н.Г. Базарновой, В.И. Маркина. -Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2017. - С. 389-391.

207. Пат. РФ № 2624242, А6^ 15/18, А6^ 15/44, А6^ 15/28, А6№ 13/00. Раневое покрытие с гемостатическим действием и способ его получения / В.Г. Савченко, Г.Г. Белозерская, В.А. Макаров, Л.С. Малыхина, О.Е. Неведрова, Д.Ю. Бычичко, Е.М. Голубев, Т.И. Широкова, Д.В. Шальнев, Н.М. Никитина, В.А. Кабак, А.П. Момот, И.И. Шахматов, В.В. Будаева, Е.К. Гладышева, Е.А. Скиба, Г.В. Сакович, Е.И. Макарова, Ю.А. Гисматулина, Н.В. Бычин - № 2016133023; заявл. 10.08.2016; опубл. 03.07.2017, Бюл. № 19. - 19 с.

208. Лубянский, В.Г. Экспериментальное исследование возможности применения бактериальной целлюлозы в хирургии / В.Г. Лубянский, А.Н. Жариков, Е.К. Гладышева, Е.А. Скиба, В.В. Будаева, Е.Н. Семенова / Альманах Института. - 2017. - № S1. - С. 226-227.

209. The university Maine Technology [Электронный ресурс]. - Режим лоступа: https://umainetechnology.com/2014/07/21/synthesis-of-bacterial-cellulose-in-

low-cost-culture-medium-using-hot-water-extracted-wood-sugars/

6 Приложения 6.1 Методика

БИЙСК 2017

БИЙСК 2017

6.5 Технологическая пропись

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки ИНСТИТУТ ПРОБЛЕМ ХИМИКО-ЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ Сибирского отделения Российской академии наук (ИПХЭТ СО РАН)

Инв. № ТП-214 УТВЕРЖДАЮ

Экз. № \ Директор ИПХЭТ СО РАН,

/ профессор

_[пЛь С. В. Сысолятин

«М» 2017 г.

ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОПИСЬ получения бактериальной целлюлозы из плодовых оболочек овса ТП 10018691.02101.00212

Заместитель, ректора по учной рабе , д.х.н.

С.Г. Ильясов

»

рин^с. ессу^ у 2017 г.

Гл. специалист по ОТ и ЭБ, к.т.н. у-"';/. ¿¿А.К). Докучаев

«А 6 » г.

РАЗРАБОТЧИКИ:

Заведующая лаб. № 8, к.х.п.

_В.В. Будаева

« 1(2, » есУ^ -г-Г}^ 2017 г. Ст. науч. сотр. лаб. № 8, к.т.н.

Е.А. Скиба /-а-Т,,МЛ 2017 г. Мл. науч. сотр. лаб. № 8

^^ Е.К. Гладышева «2Р » У2017 г.

Ст. науч. сотр. лаб. № 8, к.т.н.

• _И.Н. Павлов

» 2017 г.

Науч. сотр. лаб. № 8, к.т.н.

Е.И. Кащеева

» > с, I . с -V

2017 1. >ПСЛВ, К.т.н.

Ю.А. Крюков

2017 г.

^контролер, ведущий инженер ГИО

_И.Д. Попова

«¡/Л£» ¿ё^Ш/Яё/ 2017 г.

Бийск 2017

6.6 Акт испытания

УТВЕРЖДАЮ

Директор Физико-технического института федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Петрозаводский ,

явственный университет»

Д.И. Балашов

2017 г.

АКТ ИС1

экспериментальных образцов целлюлозы, предоставленных Институтом проблем химико-энергетических технологий (ИПХЭТ) СО РАН, г. Бийск

Настоящим подтверждаю, что в период с 24.03.2016 г. по 25.01.2017 г. в ФГБОУ ВО «Петрозаводский государственный университет», на кафедре физики твердого тела, были проведено рентгенографирование 13 (тринадцати) опытных образцов целлюлоз, полученных патентованным способом (пат. РФ № 2597291) и предоставленных для исследований ИПХЭТ СО РАН.

Образцы рентгенографировались на дифрактометре ДРОН-6 в монохроматизированном кристаллом пиролитического графита Fe-Ka излучении в интервале углов рассеяния от 3 до 145°.

В результате исследований установлено, что анализируемые образцы по фазовому составу соответствуют целлюлозе I. Содержание триклинной модификации 1а составляет 97-100 %; степень кристалличности образцов, рассчитанная по рентгенограммам, отснятым на просвет, составляет от 85 до 94%. Таким образом, предоставленные для исследований образцы являются бактериальной целлюлозой, характеризующейся высокой степенью кристалличности.

Доцент каф. физики твердого тела, к.ф.-м.н. ¿¿¿¿¿¿¿¿¿^ Алешина JT.A.

6.7 Акт испытания

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГ О ОБРАЗОВАНИЯ

АЛТАЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ (ФГБОУ ВО АГМУ Минздрава России)

656038, г.Барнаул, пр. Ленина, 40. Тел.[phone], факс [phone] E-mail: [e-mail];http://w\vw.agmu.ru ОКПО 01962853,ОГРН 1022201762164;

ИНН 2225003156, КПП 222501001

АКТ ИСПЫТАНИЯ экспериментального образца бактериальной наноцеллюлозы

В соответствии с сопроводительным письмом исх. № 15365-208- 2115 от 24.10.2016 в Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО АГМУ Минздрава России), на кафедру факультетской хирургии им. И.И. Неймарка и госпитальной хирургии с курсом ДПО был поставлен образец бактериальной наноцеллюлозы для исследований.

Образец бактериальной целлюлозы влажностью 99 % синтезирован в ИПХЭТ СО РАН 03-11 сентября 2016 гг. по патенту РФ № 2597291.

На кафедре факультетской хирургии им. И.И. Неймарка и госпитальной хирургии с курсом ДПО ФГБОУ ВО АГМУ Минздрава России и на базе Краевого государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Краевая клиническая больница» экспериментально и морфологически исследована возможность применения БЦ в абдоминальной хирургии (герниология, герметизация кишечного шва, хирургический гемостаз).

Достигнуты положительные результаты: при микробиологическом исследовании с условно-патогенной архивной культурой E.Coli бактериальная целлюлоза проявляет антибактериальную активность; после ее фиксации на апоневрозе передней брюшной стенки и на ране тонкой кишке инфицирования материала не происходит; спустя 14 суток представленные образцы способствуют разрастанию грануляционной ткани, закрывающей как кишечный, так и апоневротический шовный материал, бактериальная целлюлоза обладает гемостатическим эффектом.

Профессор кафедры факультетской хирургии им. И.И. Неймарка и госпитальной хирургии с курсом ДПО, д.м.н., профессор

Профессор кафедры факультетской хирургии им. И.И. Неймарка и госпитальной хирургии с курсом ДПО, д.м.н., доцент

6.8 Акт внедрения

АКТ ВНЕ,

экспериментального образца бактериальной целлюлозы, предоставленного ИПХЭТ СО РАН

В соответствии с Соглашением о сотрудничестве от 11 ноября 2015 г. между Институтом проблем химико-энергетических технологий СО РАН (ИПХЭТ СО РАН, г.Бийск) и Федеральным государственным бюджетным учреждением «Гематологический научный центр» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ ГНЦ Минздрава России, г. Москва) при выполнении научно-исследовательской работы «Раневые покрытия на основе бактериальной целлюлозы» в ФГБУ ГНЦ Минздрава России был поставлен образец бактериальной целлюлозы № 1 для создания на его основе различных фармакологических форм для использования их в качестве местного гемостатика.

Данный образец бактериальной целлюлозы синтезирован 01.06.2015-11.10.2015 гг. в соответствии с запатентованным способом (Будаева В.В., Гладышева Е.К., Скиба ЕА., Сакович Г.В. Способ получения бактериальной целлюлозы - заявка на изобретение. Регистрационный № 2015129304 от 16.07.2015) на среде ферментативного гидролизата технической целлюлозы. Техническая целлюлоза наработана из плодовых оболочек овса на опытном производстве ИПХЭТ СО РАН азотнокислым способом. Масса образца бактериальной целлюлозы во влажном состоянии составила 2000 г, влажность - 99 %, степень полимеризации - 1450, зольность - 0,14 %, средняя толщина волокна - 30,0 нм.

В лаборатории патологии и фармакологии гемостаза ФГБУ ГНЦ Минздрава России было проведено исследование гемостатической эффективности полученных образцов бактериальной целлюлозы, гемостатическая активность которых определена по методике, утвержденной Фармкомитетом МЗ РФ для доклинической оценки гемостатического действия потенциальных лекарственных средств и описанной в «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Часть первая.-М.: Гриф иК, 2012, стр. 453-479. Установлено, что данные образцы обладали выраженной местной гемостатической активностью: время остановки кровотечения составляло 35 ± 8 с при контроле (марлевый тампон) 246,0±22,0 с, объем (масса) кровопотери 0,527 ±0,162 г при контроле 5,9±1,4 г. Гемостатическая активность полученных образцов составила 85,81 ±11,16%. Отчет о выполнении научно-исследовательской работы по соглашению о сотрудничестве между ИПХЭТ СО РАН и ФГБУ ГНЦ Минздрава России по теме: «Раневые покрытия на основе бактериальной целлюлозы» предоставлен в ИПХЭТ СО РАН.

Ответственный исполнитель:

заведующая лабораторией патологии ' / 7

и фармакологии гемостаза, д.м.н. / Г.Г. Белозерская

6.9 Патент на изобретение

\втр(ы): Будаева Hepa Владимировна (RU), Гладышева Евгения Константиновна (RU), Скипа Екатерина Анатольевна (RU), Сакович Геннадии Викторович (Ri)

6.10 Патент на изобретение

Авторы: Савченко Валерии Григорьевич (ЯГ), Белозерская Галина Геннадьевна (ЯП), Макаров Владимир Александрович (1111), Малыхина Лариса Сергеевна (ЯП), Неведрова Ольга Евгеньевна (ЯГ), Бычичко Дмитрии Юрьевич (ЯГ), Голубев Евгении Михайлович (ЯГ), Широкова Татьяна Ивановна (ЯП), Шальнев Дмитрий Владимирович (Я1I), Никитина Нина Михайловна (ЯГ), Кабак Валерий Алексеевич (Я1I), Момот Андрей Павлович (Яи), Шахматов Игорь Ильич (ЯГ), Будаева Вера Владимировна (ЯП), Гладышева Евгения Константиновна (ЯГ), Скиба Екатерина Анатольевна (ЯГ), Сакович Геннадий Викторович (ЯГ), Макарова Екатерина Ивановна (ЯГ), Гисматулина Юлия Александровна (ЯГ), Бычин Николай Валерьевич (ЯГ)

<