Разработка стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих IgG к цитомегаловирусу человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Ивченко, Светлана Николаевна

• Ивченко, Светлана Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ивченко, Светлана Николаевна

Список использованных сокращений.

1. Введение.б

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

2.1. Цитомегаловирусная инфекция.

2.1Л. Цитомегаловирус и ареал его распространения (эпидемиологические аспекты).

2.1.2. Этиология и патогенез первичной цитомегаловирусной инфекции.

2.1.3. Вторичные инфекции, развивающиеся на фоне ЦМВИ.

2.2. Диагностика цитомегаловирусной инфекции.

2.2.1. Антигены цитомегаловируса и их использование в диагностике.

2.2.2. Виды и эффективность диагностики цитомегаловирусной инфекции.

2.2.3. Тест - системы для определения специфичных иммуноглобулинов к цитомегаловирусу.

2.3. Разработка сывороточных панелей.

2.3.1. Стандартные сывороточные панели, существующие в мире.

2.3.2. Биохимические характеристики сывороток для создания стандартных панелей.

2.3.3. Критерии отбора сывороток для стандартной панели.

2.3.4. Стабилизирующие растворы.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Материалы.

3.2. Методы.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1 Выбор метода отбора сывороток для создания панели образцов, содержащих и не содержащих антитела класса G к цитомегаловирусу человека.

4.1.1 Исследование антигенных свойств рекомбинантных аналогов белков рр150, р52 и рр65 цитомегаловируса человека.

4.1.2 Подбор концентрации рекомбинантных антигенов для сорбции.

4.1.3 Оптимизация условий анализа иммуноферментного.

4.1.4 Оценка качества лабораторной модели иммуноферментной тест-системы.

4.2 Разработка стандартной панели сывороток для оценки качества иммуноферментных тест-систем, выявляющих антитела класса G к цитомегаловирусу человека при диагностике ЦМВ - инфекции.

4.2.1 Требования к панелям и входящим в их состав образцам.

4.2.2 Формирование панели сывороток, предназначенной для контроля качества тест-систем, выявляющих IgG антитела к цитомегаловирусу.

4.2.3 Разработка жидкой панели сывороток для оценки качества тест-систем, выявляющих иммуноглобулины класса G к цитомегаловирусу человека.

4.2.3.1 Выбор способа стабилизации жидких образцов панели.

4.2.3.2 Оценка стабилизирующих эффектов ультрафильтрации и консервации.

4.2.3.3 Изучение стабилизирующих эффектов облучения электронами.

4.2.3.4 Изучение стабилизирующих эффектов консервантов и стабилизаторов.

4.2.3.5 Исследование стабильности жидкой панели при хранении.

4.2.4 Разработка лиофилизированной панели сывороток для оценки качества тест-систем, выявляющих иммуноглобулины класса G к цитомегаловирусу человека.

4.2.4.1 Отработка способа получения лиофилизированных образцов.

4.2.4.2 Исследование стабильности лиофилизированной панели при хранении.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих IgG к цитомегаловирусу человека»

Актуальность темы

Среди многообразия вирусных инфекционных заболеваний цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) занимает одно из первых мест по распространенности и сложности диагностики. Антитела к цитомегаловирусу человека выявляются у 60-80% взрослого населения, а в некоторых регионах - до 99%.

Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ, цитомегалия) имеет различные формы -латентную, субклиническую, острую и хроническую. ЦМВИ приводит как к системным заболеваниям (мононуклеоз, генерализованная цитомегалия), так и к поражению отдельных органов (печень, легкие, головной мозг, сердце, половые органы и др.). Этой инфекцией страдает 0,5 — 5% всех новорожденных. Частота передачи вируса плоду при первичной инфекции женщин во время беременности составляет 15 - 50%. В настоящее время установлено, что одной из главных причин врожденных уродств, поздних выкидышей и дефективных новорожденных является внутриутробная цитомегаловирусная инфекция у беременных женщин.

Характерной особенностью для цитомегаловируса (ЦМВ) является способность долго сохраняться и, возможно, репродуцироваться в лейкоцитах циркулирующей крови внешне здоровых людей, в виде как клинически выраженной, так и скрыто протекаемой инфекции или вирусоносительства.

Известно, что антитела к цитомегаловирусу появляются значительно раньше клинических проявлений болезней, ассоциированных с цитомегалией. Концентрация антител коррелирует с тяжестью протекания заболевания. В настоящее время для выявления антител к ЦМВ широко используется твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), который является одним из наиболее распространенных в нашей стране и за рубежом эффективных методов диагностики различных инфекционных заболеваний человека. Использование различных антигенов в тест-системах разных производителей приводит к тому, что результаты ИФА сывороток больных отличаются на 20-30% при определении специфических антител. Для определения достоверности результатов ИФА, как положительных, так и отрицательных, получаемых с помощью определенной тест-системы, используют различные контрольные панели сывороток.

Для контроля специфичности и чувствительности иммуноферментных тест-систем используют стандартные панели сывороток. Существуют два вида стандартных панелей - лиофилизированные и жидкие. Наибольшей популярностью в настоящее время пользуются лиофилизированные панели сывороток, поскольку они обладают рядом преимуществ: длительный срок хранения, способность сохранять свойства при перепаде температур. До проведения наших исследований отечественные контрольные панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к ЦМВ, в Российской Федерации отсутствовали. Поэтому настоящая работа посвящена созданию стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к ЦМВ. В качестве основного метода отбора сывороток, разработали лабораторный вариант иммуноферментной тест-системы, с применением рекомбинантных белков: рек-рр150, рек-р52 и рек-рр65.

Цель и задачи исследования Целью настоящей работы являются комплексные исследования по разработке методологии создания стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса G к цитомегаловирусу, для контроля достоверности результатов ИФА, получаемых с помощью коммерческих тест-систем.

Для выполнения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Разработать оптимальные методы отбора положительных и отрицательных образцов панели сывороток.

2. Разработать технологию изготовления панели сывороток, включающую оптимальные условия консервации, стабилизации, стерилизации образцов сывороток.

3. Создать жидкую и лиофилизированную панели сывороток, содержащих и не содержащих IgG к цитомегаловирусу, соответствующие по стабильности требованиям ВОЗ [4].

4. Провести всесторонние лабораторные испытания созданной лиофилизированной панели сывороток, разработать проект научно-технической документации и провести государственные испытания и аттестацию в качестве ОСО в ГИСКе им. J1.A. Тарасевича.

Научная новизна и практическая ценность работы

1. Разработан метод отбора образцов для конструирования стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к ЦМВ. Впервые в России для отбора сывороток были использованы рекомбинантные аналоги антигенов ЦМВ (рек-рр150, рек-р52 и рек-рр65).

2. Разработан лабораторный вариант иммуноферментной тест-системы для определения IgG к цитомегаловирусу человека на основе трех рекомбинантных антигенов ЦМВ рек-рр150, рек-р52 и рек-рр65.

3. Выбраны и всесторонне охарактеризованы 36 сывороток для формирования стандартных панелей сывороток, содержащих и не содержащих антитела IgG к ЦМВ.

4. Отработана технология получения жидкой панели сывороток, по своей стабильности соответствующая требованиям ВОЗ [4] к биологическим препаратам.

5. Разработана технология получения лиофилизированной стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела IgG к ЦМВ. Данная панель прошла, государственные испытания и является первой в РФ зарегистрированной стандартной панелью, используемой в качестве отраслевого стандартного образца. Было выпущено 3 серии стандартной панели.

Работа выполнена в 1999-2005 гг. в рамках Государственного контракта с Министерством науки технологий Российской Федерации на 2000 год от 14 января 2000 года № ГНТД/ГК-029 (00)-П ГНЦ ВБ «Вектор» и ЗАО «Медико-Биологический Союз». Все экспериментальные исследования проводились в рамках научно-исследовательского проекта, утвержденного Этическим комитетом ГНЦ ВБ «Вектор» (№ IRB 00001360): «Разработка рекомбинантных антигенов и генетических маркеров для диагностики герпесвирусов» (утвержден 03.06.2003).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработан лабораторный вариант иммуноферментной тест-системы для выявления IgG к ЦМВ на основе рекомбинантных антигенов цитомегаловируса рек-рр150, рек-р52 и рек-рр65 с чувствительностью 98% и специфичностью 99%, как основной метод отбора сывороток для создания панели образцов, содержащих и не содержащих антитела класса G к цитомегаловирусу человека.

2. Технология изготовления жидких и лиофилизированных панелей сывороток, содержащих и не содержащих IgG к цитомегаловирусу.

3. Жидкая панель сывороток, содержащих и не содержащих IgG к цитомегаловирусу.

4. Лиофилизированная панель сывороток, содержащих и не содержащих IgG к ЦМВ - отраслевой стандарт ОСО № 42-28-360-01.

Конкретное участие автора в получении результатов

Автор принимал участие во всех экспериментальных и теоретических исследованиях, приведенных в диссертации. Кроме того, автор участвовал в работах совместно с сотрудниками ГИСК им. JI.A. Тарасевича, ЗАО «Медико-биологический союз» и института ядерной физики СО РАН.

Апробация работы и публикации

Материалы диссертации были представлены на следующих конференциях:

1. Ivchenko S.N., Masycheva V.I., Susloparov М.А., Losev M.B. Approaches to the construction of standard serum panel with and without antibodies to cytomegalovirus// IV ISTC SCIENTIFIC ADVISORY COMMITTEE SEMINAR ON «BASIC SCIENCE IN ISTC ACTIVITIES». - Novosibirsk, 2001. - page 150.

2. Ivchenko S.N., Masycheva V.I., Susloparov M.A., Losev M.B. The use of the cytomegalovirus recombinant proteins for testing sera with and without antibodies to cytomegalovirus// IV ISTC SCIENTIFIC ADVISORY COMMITTEE SEMINAR ON «BASIC SCIENCE IN ISTC ACTIVITIES». - Novosibirsk, 2001. - page 151.

3. Ивченко C.H., Масычева В.И., Суслопаров M.A., Воробьева М.С., Лосев М.В., Федосов С.А. Подходы к созданию стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к цитомегаловирусу, в жидком виде// «Новые информационные технологии в медицине и экологии», IT + МЕ'200. -Гурзуф, 2002. - стр.200-201.

По материалам исследований опубликовано 3 статьи:

1. Суслопаров И. М., Суслопаров М. А., Ивченко С. Н., Гришаев М. П., Смердова М. А., Косова Е.Ю., Блинов В. М., Сараев Д. В., Махова Н. М., Носкова Н. В. Конструирование рекомбинантного антигена рр65 цитомегаловируса человека и исследование его иммунохимических свойств// Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2005. - № 2. - стр. 28-32.

2. Ивченко С. Н., Суслопаров И. М., Масычева В. И., Суслопаров М. А., Мезенцев А.Н. Конструирование жидкой панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к цитомегаловирусу человека// Вестник Российской академии медицинских наук. — 2004. - №8. - стр.37-39.

3.' Ивченко С.Н., Суслопаров И.М., Масычева В.И., Суслопаров М.А., Лосев М.В. Разработка иммуноферментной тест-системы для определения антител в сыворотке крови к цитомегаловирусу человека// Сибирский медицинский журнал. - 2005. - №2(том 20). - стр. 53-55.

На разных этапах выполнения работы в ней принимали участие сотрудники ГНЦ ВБ «Вектор»: В.И. Масычева, М.А. Суслопаров, И.М. Суслопаров, А.Н. Канев, а также сотрудники ГИСК им Л.А.Тарасевича: И.П. Ладыженская, В.Г. Петухов, сотрудники производственной фирмы: ЗАО «Медико-биологический союз» - О.Н. Надточий, А.Н. Мезенцев, О.Г. Васенева, И.В. Валеева.

Всем, принимавшим участие в данной работе, автор выражает искреннюю признательность.

Искреннюю благодарность автор приносит генеральному директору ЗАО «Медико-биологический союз» М.В. Лосеву и заведующему лабораторией 14 ИЯФ СО РАН Ауслендеру В.Л.

Особую благодарность автор выражает М.С. Воробьевой, профессору, доктору медицинских наук, член корреспонденту РАЕН, руководителю лаборатории ГИСК им. Л.А.Тарасевича МЗ и CP РФ.

Автор сердечно благодарит всех своих коллег, принимавших участие в работе.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 154 страницах, содержит 35 таблиц, 21 рисунок. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждений, выводов, списка литературы, приложений. Список литературы включает в себя 165 источников, из них 127 иностранных.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Ивченко, Светлана Николаевна

Выводы

1. Разработан лабораторный вариант иммуноферментной тест-системы для выявления IgG к ЦМВ на основе рекомбинантных антигенов цитомегаловируса рек-рр 150, рек-р52 и рек-рр65 с чувствительностью 98% и специфичностью 99%, который стал основным методом отбора сывороток для создания панели образцов, содержащих и не содержащих антитела класса G к цитомегаловирусу человека.

2. Создана технология изготовления контрольных панелей сывороток, содержащих и не содержащих антитела к цитомегаловирусу.

3. Разработана жидкая панель сывороток, содержащих и не содержащих IgG к цитомегаловирусу, сохраняющая специфические свойства и стабильность в течение года при температуре от 2°С до 8°С.

4. Разработанная лиофилизированная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела к цитомегаловирусу, сохраняющая специфические свойства в течение 2 лет и стабильность при температуре от 2°С до 8°С, аттестована как отраслевой стандарт ОСО № 42-28-360-01.

5. Заключение

В России в последнее десятилетие наблюдается рост числа заболеваний вызывающих иммунодефицит. В этой связи возникает необходимость качественной и удобной диагностики оппортунистических инфекций связанных с иммунодефицитом. Такая диагностика полезна для улучшения качества современного акушерства, актуальной задачей которого является уменьшение числа мертворожденных детей и врожденных патологий плода, вызываемых ЦМВИ. Иммуноферментная диагностика вирусных заболеваний становится востребованной в области трансплантологии, в связи с ростом количества трансплантаций в современной клинике. Поэтому диагностика цитомегаловирусной инфекции становится все актуальнее.

В ходе полученных новых знаний о цитомегаловирусной инфекции и появления более тонких и точных методов, диагностика последнее десятилетие тоже активно эволюционировала. Стало ясно, что использование для ИФА нативных антигенов приводит к неоднозначности результатов, и должно быть заменено или дополнено более специфичными антигенами, так как метод должен достоверно отличать позитивные сыворотки от негативных. Поэтому применение рекомбинантных белков приобретает все большую популярность среди исследователей.

В результате проделанной работы были исследованы взаимодействия рекомбинантных антигенов с рабочей панелью сывороток: рек-рр150, рек-р52 и рек-рр65 [25, 26, 27, 28, 32, 33] цитомегаловируса, показана возможность использования в ИФА этих рекомбинантных антигенов для отбора сывороток, содержащих и не содержащих антитела к цитомегаловирусу. Создана на основе рекомбинантных антигенов лабораторная модель иммуноферментной тест-системы для определения антител к ЦМВ, «UMB-IgG-AC».

Используя эту лабораторную модель тест-системы, как метод отбора сывороток для стандартной панели, аттестовали 36 сывороток для формирования панели. Подобран стабилизирующий раствор и сконструирована панель сывороток (жидкая форма), сохраняющая свои специфические свойства и стабильность при температуре от 2°С до 8°С не менее одного года. Создана стандартная панель (лиофилизированная), которая внесена в Реестр национальных стандартных образцов РФ под номером: ОСО 42-28-360-01 и стала первой в России стандартной панелью, используемой для оценки чувствительности и специфичности иммуноферментных тест-систем, выявляющих антитела класса IgG к ЦМВ. Выпущено три серии отраслевого стандарта. В настоящее время эта панель используется для контроля качества иммуноферментных тест-систем на территории РФ.

С использованием разработанной в представленной работе технологии были выпущены две серии стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к вирусу простого герпеса I и II типов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ивченко, Светлана Николаевна, 2008 год

1. Агаджанова А. А. Современные методы терапии больных с привычным невынашиванием беременности// Российский медицинский журнал - 2003. - Т. 11, № 1.-С.6-10.

2. Анджелов В. О., Кричевская Г. И., Хватова А. В., Катаргина JI. А. Цитомегаловирусная инфекция у детей с увеитами// Информационное письмо МНИИ ГБ им. Гельмгольца Москва - 1995.

3. Антитела. Под редакцией Д.Кэтти// Мир Москва, 1991. - Т.2 - С. 152-238.

4. Всемирная организация здравоохранения. Принципы приготовления и утверждения международных и других стандартов и эталонных материалов биологических препаратов// Серия технических докладов Женева, 1990. - № 37.

5. Долгих Т. И., Назарова О.И. Лабораторная диагностика инфекций, вызванных цитомегаловирусом и парвовирусом В19, у больных с вторичными иммунодефицитами// Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии -2002. № 5 - С.53-62.

6. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б. и др. Теория и практика иммуноферментного анализа// Высшая школа Москва, 1991. - С.83-11, 182-183, 266-267

7. Еремин А.Н., Будникова Л.П., Свиридов О.В., Метелица Д.И. Стабилизация разбавленных водных растворов пероксидазы хрена// Прикладная биохимия и микробиология 2002. - Т.38, №2 - С. 174-182.

8. Ивченко С.Н., Суслопаров И.М., Масычева В.И., Суслопаров М.А., Лосев М.В. Разработка иммуноферментной тест-системы для определения антител в сыворотке крови к цитомегаловирусу человека// Сибирский медицинский журнал 2005. - Т. 20, №2. - С. 53-55.

9. Канев А.Н., Воробьева М.С., Шалунова Н.В., Карпович Л.Г., Нетесов С.В., Максютов А.З., Усова С.В. Разработка стандартных панелей сывороток для контроля качества иммуноферментных тест-систем в России// Вопросы вирусологии 1998. - № 2 - С. 47-51.

10. Канев А.Н., Шалунова Н.В., Нетесов С.В., Ястребова О.Н., и др. Конструирование референс-панели сывороток к вирусу гепатита С с нормированным уровнем IgG-антител// Вопросы вирусологии 2000 - № 4 - С. 42-57.

11. Каражас Н.С. Цитомегаловирусная инфекция современная диагностика// Клиническая лабораторная диагностика - 1998 - Т.2 - С. 16-17.

12. Кейзер С.А., Молчанов М.Г. Изменение гемопоэза у белых крыс при однократном и хроническом воздействии гамма-лучей// Вопросы радиобиологии Томск, 1968. -С. 78-85.

13. Когл Дж. Биологические эффекты радиации.// Энергоатамиздат Москва, 1986. -С. 184.

14. Коченгина С.А., Теплова С.Н., Русанова Н.Н., Малиновская В.В., Посевая Т.А. Лабораторная диагностика цитомегаловирусной инфекции у детей первых месяцев жизни// Журнал микробиологии 2000. - № 2 - С. 116-118.

15. Кузин С.Н., Садикова Н.В., Суслов А.П., Эльгорт Д.А., Гольцов В.А. и др. Оценка системы контроля качества детекции HBsAg в сети скрининговых лабораторий// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии 2002. - № 3 - С. 52-56.

16. Рахманова А.Г., Неверов В. А., Пригожина В.К. Инфекционные болезни: руководство для врачей общей практики// Питер Санкт-Петербург, 2001. - С. 576.

17. Решение Ученого Совета ГИСК им. Тарасевича от 24.12.2002 г.

18. Ройт А. Основы иммунологии// Мир Москва, 1991. - С. 42-68.

19. Скрипкин Ю.К., Шарапова Г.Я., Селисский Г.Д. Инфекции, передаваемые половым путем: практическое руководство// Мир Москва, 2001. - С. 221-264.

20. Тишкевич О.А., Шахгильдян В.И., Морозова С.В., Канестри В.Г. Системный цитомегаловирусный васкулит ВИЧ-инфицированного больного// Эпидемиология и инфекционные болезни 2001. - № 1 - С.31-36.

21. Шахгильдян В.И., Шипулина О.Ю., Каражас Н.В., Стаханова В.М., Евсеева Л.Ф., Тишкевич О.А. Лабораторная диагностика цитомегаловирусной инфекции у ВИЧ-инфицированных пациентов // Эпидемиология и инфекционные болезни 2001 -№1 - С.36-40.

22. Химическая энциклопедия// Большая Российская энциклопедия Москва, 1998. -Т.5 - С.987-988.

23. Постановление главного государственного санитарного врача РФ от 18.04.2003г.// САНПИН 2.3.2.1293-03 № 59.

24. Adler SP. Molecular epidemiology of cytomegalovirus: Evidence for viral transmission to parents from children infected at a day care center// Pediatr Infect Dis J. 1986. - V.5 -P.315-318.

25. Alford С A, Pass RF. Epidemiology of chronic congenital and perinatal infections of man// Clin Perinatol 1981. - V.8 - P.397-414.

26. Anawis M.A., Lindberg R.E. Stabilized horseradish peroxidase conjugate composition// Патент № 4782023 США, МКИ С 12 N 9/96,G 01 N 13/00. Опубл. 01.11.1988 НКИ 435/188.

27. Arens М. Methods for Subtyping and Molecular Comparison of Human Viral Genomes// Clin microbiol reviews. Oct. 1999 - V.12, №. 4 - P.612-626.

28. Aspin MM, Gallez-Hawkins GM, Giugni TD, Tegtmeier B. Comparison of plasma PCR and bronchoalveolar lavage fluid culture for detection of cytomegalovirus infection in adult bone marrow transplant recipients// J Clin Microbiol. 1994. - V.32 - P.2266-2269.

29. Baldick С J Jr, Marchini A, Patterson CE, Shenk T. Human cytomegalovirus tegument protein pp71 (ppUL82) enhances the infectivity of viral DNA and accelerates the infectious cycle. // J Virol. 1997. - V.71 - P.4400-4408.

30. Baldick CJ Jr, Shenk T. Proteins associated with purified human cytomegalovirus particles// J Virol. 1996 - V. 70 - P.6097-6105.

31. Bale JF, Petheram SJ, Inara ES, Murph JR. Cytomegalovirus reinfection in young children// J Pediatr. 1996. - V.128 - P.347-352.

32. Benko DM, Haltiwanger RS, Hart GW, Gibson W. Virion basic phosphoprotein from human cytomegalovirus contains O-linked N-acetylglucosamine. //Proc Natl Acad Sci USA. 1988. - V. 85 - P.2573-2577.

33. Bevan, I. S., R. A. Daw, P. J. Day, F. A. Ala, and M. R. Walker. Polymerase chain reaction for detection of human cytomegalovirus infection in a blood donor population// Br. J. Hematol. 1991. - V.78 - P.94-99

34. Boeckh M., and Boivin G. Quantitation of Cytomegalovirus: Methodologic Aspects and Clinical Applications// Clin microbiol reviews. July 1998. - V. 11, № 3 - P.533-554.

35. Bogner E, Reschke M, Reis B, et al. Identification of the gene product encoded by ORF UL56 of the human cytomegalovirus genome// Virology. 1993. - V. 196 - P.290-293.

36. Bongarts A, von Laer D, Vogelberg C, et al. Glycoprotein В genotype of human cytomegalovirus: Distribution in HIV-infected patients. Scand// J Infect Dis. 1996 -V.28 - P.447-449.

37. Bradshaw PA, Duran-Guarino MR, Perkins S, et al. Localization of antigenic sites on human cytomegalovirus virion structural proteins encoded by UL48 and UL56// Virology. 1994 - V.205 - P.321-328.

38. Britt WJ, Mach M. Human cytomegalovirus glycoproteins// Intervirology. 1996 - V.39 - P.401-412

39. Button L.N., DeWolf W.S., Newburger P.E. et al. The effects of irradiation on blood components// Transfusion. 1981. - V.21 - P.419-426.

40. Cha T-A, Tom E, Kemble GW, et al. Human cytomegalovirus clinical isolates carry at least 19 genes not found in laboratory strains// J Virol. 1996. - V.70 - P.78-83.

41. Chen-Yang Shen, Shu-Fen Chang, Show-Lin Yang, et al. Cytomegalovirus Is Present in Semen from a Population of Men Seeking Fertility Evaluation// The Journal of Infectious Diseases. 1994. - V.69 - P.222-223.

42. Chou S. Acquisition of donor strains of cytomegalovirus by renal-transplant recipients// N Engl J Med. 1986 - V.314 - P. 1418-1423.

43. Chou S. and K.M. Scott. Latex Agglutination and Enzyme-Linked Immunosorbent Assays for Cytomegalovirus Serologic Screening of Transplant Donors and Recipients// J Clin Microbiol. Oct. 1988 - V.26, №10 - P.2116-2119.

44. Chou S. Differentiation of cytomegalovirus strains by restriction analysis of DNA sequences amplified from clinical specimens// J Infect Dis.- 1990 V.162 - P.738-742.

45. Chou S. Molecular epidemiology of envelope glycoprotein H of human cytomegalovirus// J Infect Dis. 1992 - V.l66 - P.604-607.

46. Chou SW, Dennison KM. Analysis of interstrain variation in cytomegalovirus lycoprotein В sequences encoding neutralization-related epitopes// J Infect Dis. 1991 -V.163 -P.1229-1234.

47. Cinque P, Yago L, Brytting M, et al. Cytomegalovirus infection of the central nervous sytem in patients with AIDS: Diagnosis by DNA amplification from cerebrospinal fluid// J Infect Dis. 1992 - V.l66 - P.l408-1411.

48. Craighead JE, Kanich RE, Almeida JD. Nonviral microbodies with viral antigenicity produced in cytomegalovirus-infected cells// J Virol. — 1972 V.10 - P.766-775.

49. Delgado R, Lumbreras C, Alba C, et al. Low predictive value of polymerase chain reaction for diagnosis of cytomegalovirus disease in liver transplant recipients// J Clin Microbiol. 1992 - V.30 - P.876-1878.

50. Domen R.E., Nelson K.A. Results of a survey of infectious disease testing practices by organ procurement organizations in the United States. // Transplantation Jun. 1997. -V.63(12) - P.1790-1794.

51. Dow B.C. Microbiology confirmatory tests for blood donors// Blood Rev. Jun., 1999. -V.13(2) - P.91-104.

52. Farrell HE, Vally H, Lynch DM, et al. Inhibition of natural killer cells by a cytomegalovirus MHC class I homologue in vivo//Nature 1997 - V.386 - P.510-514.

53. Fries ВС, Chou S, Boeckh M, Torok-Storb B. Frequency distribution of cytomegalovirus envelope glycoprotein genotypes in bone marrow transplant recipients// J Infect Dis. -1994 V. 169 - P.769-74.

54. Gallina A, Simoncini L, Garbelli S, et al. Polo-like kinase 1 as a target for human cytomegalovirus pp65 lower matrix protein// J Virol. 1999 - V.73 - P. 1468-1478.

55. Gibson W. Protein counterparts of human and simian cytomegaloviruses// Virology -1983 V.128 - P.391-406.

56. Gibson W. Structure and assembly of the virion// Intervirology 1996 - V.39 - P.389-400.

57. Gilbert GL, Hudson I, Hayes K, James J. Prevention of transfusion-acquired cytomegalovirus infection in infants by blood filtration to remove leucocytes// Lancet -1989 V.l - P.1228-1231.

58. Halwachs-Baumann G, Wilders-Trucshnig M, Desoye G, et al. Human trophoblast cells are permissive to the complete replicative cycle of human cytomegalovirus// J Virol.-1998 V.72 - P.7598-7602.

59. Hemmings DG, Kilani R, Nyukiforuk C, et al. Permissive cytomegalovirus infection of primary villous term and first trimester trophoblasts// J Virol. 1998 - V.72 - P.4970-4979.

60. Horn J. Стабилизированный препарат пероксидазы. //Патент № 3726634 ФРГ, МКИ С 12 N 9108. Опубл. 23.02.1989.

61. Huang ES, Alford СА, Reynolds DW, et al. Molecular epidemiology of cytomegalovirus infections in women and their infants// N Engl J Med. 1980 - V.303 - P.958-962.

62. Huber MT, Compton T. The human cytomegalovirus UL74 gene encodes the third component of the glycoprotein H-glycoprotein L-containing envelope complex// J Virol. -1998-V.72-P.8191-8197.

63. Hunt A.F., Allen D.L., Brown R.L., Robb B.A., Puckett A.Y., Entwistle C.C. Comparative trial of six methods for the detection of CMV antibody in blood donors// J Clin Pathol. Jan. 1984 - V.37(l) - P.95-97.

64. Irmiere A, Gibson W. Isolation and characterization of a noninfectious virion-like particle released from cells infected with human strains of cytomegalovirus// Virology -1983 -V.130-P.118-133.

65. Jahn G, Kouzarides T, Mach M, et al. Map position and nucleotide sequence of the gene for the large structural phosphoprotein of human cytomegalovirus// J Virol. 1987 - V.61 - P.1358-1367.

66. Kawana Т., Kawagoe K., Takizawa J. Т., Cheng Т., Kawaguchi Т., Sacomoto S. Clinical and virologic studies on female genital herpes// Obset. Gynecol. 1982 - V.60 - P.456-461.

67. Klages S, Ruger B, Jahn G. Multiplicity dependent expression of the predominant phosphoprotein pp65 of human cytomegalovirus. //Virus Res. 1989 - V.12 - P. 159-168.

68. Komanduri K.V., Donahoe S.M., Moretto W.J., Schmidt D.K. et al. Direct Measurement of CD4+ and CD8+ T-Cell Responses to CMV in HIV-1-Infected Subjects// Virology. -2001 V.279, № 2 - P.459-470.

69. Landini MP, Guan MX, Jahn G, et al. Large-scale screening of human sera with cytomegalovirus recombinant antigens// J Clin Microbiol. 1990 - V.28 - P.1375-1379.

70. Landini MP, Severi B, Furlini G, Badiali DGL. Human cytomegalovirus structural components: Intracellular and intraviral localization of p28 and p65-69 by immunoelectron microscopy// Virus Res. 1987 - V.8 - P.15-23.

71. Landini MP. Antibodies to human cytomegalovirus structural polypeptides// Rev Med Virol. 1992 - V.2 - P.63-72.

72. Lazzarotto T, Spezzacatena P, Varani S, et al. Anticytomegalovirus (anti-CMV) immunoglobulin G avidity in identification of pregnant women at risk of transmitting congenital CMV infection// Clin Diag Lab Immunol. 1999 - V.6 - P.127-129.

73. Lazzarotto Т., Gabrielli L., Lanari M., Guerra В., Bellucci Т., Sassi M., and Landini M. P. Congenital Cytomegalovirus Infection: Recent Advances in the Diagnosis of Maternal Infection// Human Immunology. 2004 - V.65 - P.410-415.

74. Leitman S.F., Holland P.V. Irradiation of blood products// Transfusion 1985 - V.25 -P.293-303.

75. Levin MJ, Rinaldo CR, Leary PL, et al. Immune response to herpes virus antigens in adults with acute cytomegalovirus mononucleosis// J Infect Dis. 1979 - V. 140 - P.851-857.

76. Liu B, Stinski MF. Human cytomegalovirus contains a tegument protein that enhances transcription from promoters with upstream ATF and AP-1 cis-acting elements// J Virol. 1992 - V.66 - P.4434-4444.

77. M. Urban, T. Winkler,* M. P. Landini, W. Britt, and M. Mach. Epitope-Specific Distribution of IgG Subclasses against Antigenic Domains on Glycoproteins of Human Cytomegalovirus// Journal of Infectious Diseases 1994 - V. 169 - P.83-90.

78. M.P. Landini, A. Ripalti, K. Sra, and P. Pouletty. Human Cytomegalovirus Structural Proteins: Immune Reaction against ppl50 Synthetic Peptides// Journal of clinical microbiology Sept. 1991 - V.29, № 9 - P. 1868-1872.

79. Mar EC, Patel PC, Huang ES. Human cytomegalovirus-associated DNA polymerase and protein kinase activities// J Gen Virol. 1981 - V.57 - P. 149-156.

80. McMican A., Luban N.L.C., Sacher R.A., et al. Practical aspects of blood irradiation// Lab. Med. 1987 - V.l8 - P.299-303.

81. McVoy M.A. and Adler S.P. Immunologic Evidence for Frequent Age-Related Cytomegalovirus Reactivation in Seropositive Immunocompetent Individuals// The Journal of Infectious Diseases. Jul. 1989 - V.l 60, № I.

82. Meurman O., Waris M., Heedman K. Immunoglobulin G antibody in patient with respiratory syncytial infection// J. Clin. Microbiol. 1992 - V.30 - P. 1479-1484.

83. Mezzasoma L., Bacarese-Hamilton Т., Di Cristina M., Rossi R., Bistoni F., and A. Crisanti. Antigen Microarrays for Serodiagnosis of Infectious Diseases// Clinical Chemistry. -2002 V.48(l) - P. 121-130.

84. Mocarski E.S. Cytomegaloviruses and their replication. Fields of Virology. // Eds B.N. Fields et al., 3-rd Ed. Philadelphia, 1996 - P.2447 - 2492.

85. Mocarski ES. Cytomegalovirus biology and replication. In: Roizman B, Whitley R, Lopez C, eds. The Human Herpesviruses// Raven Press New York, 1993 - P. 173-226.

86. Pass RF, Britt WJ, Stagno S. Cytomegalovirus. // In: Lennette EH, Lennette DA, Lennette ET, eds. Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial and Chlamydial Infections, 7th ed. Washington, DC: APHA 1995 - P.253-271.

87. Pass RF, Griffiths PD, August AM. Antibody response to cytomegalovirus after renal transplantation: Comparison of patients with primary and recurrent infection// J Infect Dis. 1983 - V. 147- P.40-46.

88. Pass RF, Little EA, Stagno S, et al. Young children as a probable source of maternal and congenital cytomegalovirus infection. N Engl// J Med. 1987 - V.316 - P.1366-1370.

89. Patterson CE, Shenk T. Human cytomegalovirus UL36 protein is dispensable for viral replication in cultured cells// J Virol. 1999 - V.73 - P.7126-7131.

90. Pereira L, Hoffman M, Tatsuno M, Dondero D. Polymorphism of human cytomegalovirus glycoproteins characterized by monoclonal antibodies// Virology 1984- V.139-P.73-86.

91. Plotkin SA, Farquhar J, Hornberger E. Clinical trials of immunization with the Towne 125 strain of human cytomegalovirus// J Infect Dis. 1976 - V.134 - P.470-475.

92. Plotkin SA, Starr SE, Friedman HM, et al. Protective effects of Towne cytomegalovirus vaccine against low-passage cytomegalovirus administered as a challenge// J Infect Dis, -1989 V.59 - P.860-865.

93. Pustowoit В., Herrmann F., Макарова H.E., Кущ А.А. Динамика иммунного ответа при первичной цитомегаловирусной инфекции при реактивации цитомегаловируса у больных после аллотрансплантации органов// Вопросы вирусологии 2001. - № 2- С.24-29.

94. Revello М. G. and Gerna G. Diagnosis and Management of Human Cytomegalovirus Infection in the Mother, Fetus, and Newborn Infant. // Clinical Microbiology Reviews. -2002 V.15, № 4 - P.680-715.

95. Revello M., Percivalle E., Arbustini E., Pardi R., Sozzani S, and Gerna G. In Vitro Generation of Human Cytomegalovirus pp65 Antigenemia, Viremia, and LeukoDNAemia// J. Clin. Invest. Jun. 1998. - V.101, №12 - P.2686-2692.

96. Ripalti A, Ruan Q, Boccuni MC, et al. Construction of polyepitope fusion antigens of human cytomegalovirus ppUL32: Reactivity with human antibodies// J Clin Microbiol. -1994- V.32 P.358-363.

97. Roby C, Gibson W. Characterization of phosphoproteins and protein kinase activity of virions, noninfectious enveloped particles, and dense bodies of human cytomegalovirus// J Virol. 1986. - V.59 - P.714-727.

98. Romanowski MJ, Garrido-Guerrero E, Shenk T. pIRSl and pTRSl are present in human cytomegalovirus virions// J Virol. 1997 - V.71 - P.5703-5705.

99. Rosen HR, Corless CL, Rabkin J, Chou S. Association of cytomegalovirus genotype with graft rejection after liver transplantation// Transplantation 1998 - V.66 - P. 1627-1631.

100. S. Schmolke, H.F. Kern, P. Drescher, G. Jahn, and B. Plachter. The Dominant Phosphoprotein pp65 (UL83) of Human Cytomegalovirus Is Dispensable for Growth in Cell Culture// J Virol. 1995 - V. 69, № 10 - P.5959-5968.

101. Sarov I, Abady I. The morphogenesis of human cytomegalovirus. Isolation and polypeptide characterization of cytomegalovirions and dense bodies// Virology 1975 -V.66 - P.464-473.

102. Schoppel К, Kropff В, Schmidt С, et al. The humoral immune response against human cytomegalovirus is characterized by a delayed synthesis of glycoprotein-specific antibodies// J Infect Dis.-1997 V. 175 - P.533-544.

103. Schoub B.D., Blacburn N.K., Jonson S., et al. Low antibody avidity in elderly chickenpox patients// J Med Virol.- 1992 V.37 - P.l 13-115.

104. Shen C., Chang S., Yang S., Wu C., Yang Y., Ho H.N., and Huang E. Cytomegalovirus Is Present in Semen from a Population of Men Seeking Fertility Evaluation// The Journal of Infectious Diseases -1994 V. 169 - P.222-223.

105. Shepp DH, Match ME, Lipson SM, Pergolizzi RG. A fifth human cytomegalovirus glycoprotein В genotype// Res Virol. -1998 V. 149 - P. 109-114.

106. Sinzger C, Jahn G. Human cytomegalovirus cell tropism and pathogenesis// Intervirology 1996 - V.39 - P.302-319.

107. Somogyi T, Michelson S, Masse MJ. Genomic location of a human cytomegalovirus protein with protein kinase activity (PK68)// Virology 1990 - V. 174 - P.276-285.

108. Spaete RR, Gehrz RC, Landini MP. Human cytomegalovirus structural proteins// J Gen Virol. 1994 - V.75(12) - P.3287-3308.

109. Spector SA, Spector DH. Molecular epidemiology of cytomegalovirus infections in premature twin infants and their mother// Pediatr Infect Dis J. 1982 - V.l - P.405-409.

110. Spector SA. Transmission of cytomegalovirus among infants in hospital documented by restriction-endonuclease-digestion analyses// Lancet 1983 - V.l - P.378-381.

111. Stagno S. 1990 Cytomegalovirus. In:Remington JS, Klein JO (eds) Infectious diseases of the fetus and newborn infant// WB Sauders, Philadelphia.

112. Stinski MF. Human cytomegalovirus: Glycoproteins associated with virions and dense bodies// J Virol. 1976 - V. 19 - P.594-609.

113. Taubert H. Стабилизация гемм-содержащих ферментов и среда, стабилизированная таким образом.// Патент № 237325 ГДР, МКИ С 12 № 9/96. Опубл. 09.07.1986.

114. Thomas H.I.J., Morgan-Capner P., Cradeck-Waatson J.E., et al. Persistent of specific IgM and low avidity specific IgG, following primary rubella// J Virol Meth. 1992 -V.339 - P.149-155.

115. Thomas Morgan-Capner P., Cradeck-Waatson J.E., et al. Slow maturation of IgG avidity and persistence of specific IgM in congenital rubella; implications for diagnosis and immunopatology// J Med Virol. 1993 - V.41 - P. 196-200.

116. Torok-Storb B, Boeckh M, Hoy C, et al. Association of specific cytomegalovirus genotypes with death from myelosuppression after marrow transplantation// Blood -1997 V.90 - P.2097-2102.

117. Verbraak FD, van den Horn GJ, van der Meer JT, et al. Risk of developing CMV retinitis following non-ocular CMV end organ disease in AIDS patients// Br J Ophthalmol. -1998 V.82 - P.748-750.

118. Weber В., Berger A., Rabenau H. Human cytomegalovirus infection: diagnostic potential of recombinant antigens for cytomegalovirus antibody detection// Journal of Virological Methods 2001 - V.96 - P. 157-170.

119. Weber В., Fall E.M., Berger A., Doerr H.W. Screening of blood donors for human cytomegalovirus (HCMV) IgG antibody with an enzyme immunoassay using recombinant antigens// J Clin Virol. 1999 - V.l4(3) - P. 173-181.

120. Wehner R., Matterberger J.,Klenner D., Deutsch G. Стабилизация активности пероксидазы в растворе// Патент № 3509238 ФРГ. Опубл. 18.09.1986.

121. Wing В A, Lee GC, Huang ES. The human cytomegalovirus UL94 open reading frame encodes a conserved herpesvirus capsid/tegument-associated virion protein that is expressed with true late kinetics// J Virol. 1996 - V.70 - P.3339-3345.

122. Winkler M, Stamminger T. A specific subform of the human cytomegalovirus transactivator protein pUL69 is contained within the tegument of virus particles// J Virol. -1996-V.70-P.8984-8987.

123. Wolf DG, Honigman A, Lazarovits J, et al. Characterization of the human cytomegalovirus UL97 gene product as a virion-associated protein kinase// Arch Virol.-1998 V.143 - P.1223-1232.

124. Wolf DG, Spector SA. Early diagnosis of human cytomegalovirus disease in transplant recipients by DNA amplification in plasma// Transplantation 1993 - V.56 - P.330-334.

125. Zipeto D, Hong C, Gerna G, et al. Geographic and demographic differences in the frequency of human cytomegalovirus gB genotypes 1-4 in immunocompromised patients// AIDS Res Hum Retroviruses. 1998 - V. 14 - P.533-536.

126. Selivanov A.S. Стабильность ферментных препаратов в условиях, моделирующих распылительную сушку. // Химия растительного сырья 2002 - № 2 - С.121-127.

127. Guidance for Industry. Gamma irradiation of blood and blood components: a pilot program for licensing// www.fda.gov/cber/guidelines.htm.