Разработка системы доставки малых интерферирующих рибонуклеиновых кислот на основе функционализированных липидами магнитных наночастиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Уварова Виктория Игоревна

• Уварова Виктория Игоревна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Уварова Виктория Игоревна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 Обзор литературы

1.1 РНК-терапия

1.1.1 Некодирующие терапевтические РНК

1.1.2 Перспективные мишени для гиполипидемической РНК-терапии

1.1.3 Системы доставки

1.2 Магнитные НЧ для биомедицинских применений

1.2.1 Свойства и получение НЧ оксида железа

1.2.2 Принципы зародышеобразования и роста коллоидных частиц

1.2.3 Внешнее магнитное поле в наномедицине

1.2.4 Магнитофекция

Глава 2 Материалы и методы

2.1 Материалы

2.1.1 Реактивы

2.1.2 Расходные материалы

2.1.3 Оборудование

2.1.4 Малые интерферирующие РНК

2.1.5 Клеточные культуры

2.1.6 Животные модели

2.2 Методы

2.2.1 Синтез прекурсора

2.2.2 Получение НЧ оксида железа

2.2.3 Определение концентрации железа

2.2.4 Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ)

2.2.5 Рентгенофазовый анализ (РФА)

2.2.6 Динамическое рассеяние света (ДРС)

2.2.7 Термогравиметрический анализ (ТГА)

2.2.8 Магнитные свойства

2.2.9 Функционализация НЧ

2.2.10 Цитотоксичность экспериментальных образцов

2.2.11 Определение концентрации терапевтического агента

2.2.12 Загрузка терапевтического агента на функционализированные НЧ

2.2.13 Трансфекция

2.2.14 Выделение и очистка суммарной РНК

2.2.15 Электрофорез в агарозном геле

2.2.16 Синтез первой цепи кДНК на РНК-матрице

2.2.17 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени

2.2.18 Динамика накопления и внутриклеточное распределение НЧ

2.2.19 Влияние внешнего магнитного поля на эффективности накопления и трансфекции in vitro под действием НЧ

2.2.20 Оценка локализации экспериментальных образцов методами магнитно-резонансной томографии (МРТ) и атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой (АЭС-ИСП) in vivo

2.2.21 Гистологическое исследование

2.2.22 Эффективность ингибирования экспрессии мРНК ApoB in vivo, биохимическое исследование крови

2.2.23 Статистический анализ

Глава 3 Результаты и обсуждение

3.1 Синтез НЧ оксида железа

3.2 Функционализация НЧ оксида железа

3.3 Оптимизация загрузки миРНК на функционализированные липидами НЧ

3.4 Биологическое тестирование НЧ, загруженных миРНК

3.5 Влияние внешнего магнитного поля на эффективность трансфекции

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АЛТ - аланинаминотрансфераза АБ - атеросклеротическая бляшка АСО - антисмысловые олигонуклеотиды АСТ - аспартатаминотрансфераза

АЭС-ИСП - атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно-связанной плазмой ДРС - динамическое рассеяние света дц - двухцепочечные

дцРНК - двухцепочечные рибонуклеиновые кислоты ИПД - индекс полидисперсности

кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота КТЗ - классическая теория зародышеобразования

ЛНРНК-К - липидные наночастицы с магнитным ядром кубической формы

ЛНРНК-С - липидные наночастицы с магнитным ядром сферической формы

ЛНЧ - липидные наночастицы

ЛП - липопротеин(ы)

ЛП(а) - липопротеин (а)

ЛПВП - липопротеины высокой плотности

ЛПНП - липопротеины низкой плотности

ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности

ЛППП - липопротеины промежуточной плотности

миРНК - малые интерферирующие рибонуклеиновые кислоты

МП - магнитное поле

мРНК - матричные (информационные) рибонуклеиновые кислоты МРТ - магнитно-резонансная томография НК - нуклеиновые кислоты

нкРНК - некодирующие рибонуклеиновые кислоты

НЧ - наночастицы

оц - одноцепочечные

п. о. - пар оснований

ПАВ - поверхностно-активные вещества

ПМП - переменное магнитное поле

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПЭМ - просвечивающая электронная микроскопия

РФА - рентгенофазовый анализ СГ - семейная гиперхолестеринемия ССЗ - сердечно-сосудистые заболевания ТГА - термогравиметрический анализ ХС - холестерин

ЦТМА - хлорид цетилтриметиламмония

ЭР - эффективность реакции

AGO - белки семейства Argonaute

ANGPTL3 - ангиопоэтин-подобный белок

ANGPTL3 - ген, кодирующий ангиопоэтин-подобный белок

Apo(a) - аполипопротеин A1

ApoB - аполипопротеин B

Apo(a) - ген, кодирующий аполипопротеин A1

ApoB - ген, кодирующий аполипопротеин B

ApoC-Ш - аполипопротеин C3

ApoC-III - ген, кодирующий аполипопротеин C3

C12-200 - (1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-

гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ол) CC50 - полумаксимальная цитотоксическая концентрация

CDM-NAG - карбокси дималеимидный ангидридный линкер с N-ацетилгалактозамином CDM-PEG - карбокси дималеимидный ангидридный линкер с полиэтиленгликолем РНКаза H - рибонуклеаза H

cKK-E 12 - 3,6-бис(4-(бис(2-гидроксидодецил)амино)бутил)пиперазин-2,5 -дион CNR (contrast-to-noise ratio) - отношение контраста к шуму Cy5 - 3,3,3',3'-тетраметил-2,2'-индодикарбоцианин D^ - гидродинамический размер

DiD - 1,1-диоктадецил-3,3,3,3-тетраметилиндодикарбоцианин перхлорат Dil - 1,1-диоктадецил-3,3,3,3-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат DLin-DMA - 1,2-дилинолеилокси-Ы^М-диметиламинопропан

DLin-MC3 -DMA - (6Z,9Z,28Z,31Z)-гептатриаконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил 4-(диметиламино) бутаноат

DMEM - модифицированная по способу Дульбекко среда Игла

DMEM/F12 - модифицированная по способу Дульбекко среда Игла с добавлением питательных веществ (F-12)

DOPC - 1,2-диолеоил^п-глицеро-3-фосфатидил-холин

DOPE - 1,2-диолеоил^п-глицеро-3-фосфоэтаноламин DOTAP - 1,2-диолеоил-З-триметиламмоний-пропан

DPC2.0/EX-1 - амфифильный полимер, состоящий из поли-(бутил-аминовинилового эфира), к которому присоединены CDM-NAG или CDM-PEG DSPC - 1,2-дистеароил^п-глицеро-3-фосфохолин

DSPE-PEG(2000)-NH2 - 1,2-дистеароил^п-глицеро-3-фосфоэтаноламин-Ы-[амино (полиэтиленгликоль)-2000] аммониевая соль EGF - эпидермальный фактор роста FBS - эмбриональная бычья сыворотка

FDA (Food and Drug Administration) - управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов

Fe(III)-OL - комплекс олеата железа (III) GalNAc - трехантенный N-ацетилгалактозамин GAPDH - глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа

GDDC4 - полимер состава PG-P(DPAx-co-DMAEMAy)-PCB, где PG - гуанидинированный поли(аминоэтил-метакрилат), PCB - поли(карбоксибетаин), P(DPAx-co-DMAEMAy) -поли(диметиламиноэтил-метакрилат-со-диизопропилэтил-метакрилат)

L319 - ди(^)-нон-2-ен-1 -ил)-9-((4-(диметиламино)бутаноил)окси)гептадекандиоат Hc - коэрцитивная сила

mPEG-DSPE - 1,2-дистеароил^п-глицеро-3-фосфоэтаноламин-Ы-[метокси-

(полиэтиленгликоль)]

MLP - мелиттиноподобный пептид Ms - намагниченность насыщения

MTS - 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Н-тетразолиум

NaOL - олеат натрия OL - олеиновая кислота

Opti-MEM - модифицированная среда Игла с добавлением HEPES, бикарбоната натрия, гипоксантина, тимидина, пирувата натрия, L-глутамина, микроэлементов и факторов роста Pasp (DET) - поли-(№(№(2-аминоэтил)-2-аминоэтил)аспартамид) PBS - фосфатно-солевой буфер PCC - коэффициента корреляции Пирсона

PCSK9 - ген, кодирующий пропротеиновую конвертазу субтилизин-кексинового типа 9 PCSK9 - пропротеиновая конвертаза субтилизин-кексинового типа 9 PEG - полиэтиленгликоль

PEG-C-DMA - №[(метоксиполи(этиленгликоль)2000)карбамил]-1,2-

димиристилоксипропил-3 -амин PEI - полиэтиленимин PLGA - полилактат-со-гликолевая кислота PNP - полипептидная наночастица

PTMS - поли[этленгликоль-со-(2,4,6,-триметоксибензилиден-1,1,1 -трис(гидроксиметил) этилметакрилат)-со-диметиламиноглицидил метакрилат]

RISC - эффекторный рибонуклеопротеиновый комплекс TRIzol - тризол (гуанидин тиоцианат и фенол) V-АТФаза - аденозинтрифосфатаза вакуолярного типа Ym - коэффициент активности мономера в растворе Цт - химический потенциал мономера

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка системы доставки малых интерферирующих рибонуклеиновых кислот на основе функционализированных липидами магнитных наночастиц»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Малые интерферирующие рибонуклеиновые кислоты (миРНК) - класс двухцепочечных РНК, которые после образования комплекса с рядом белков вызывают деградацию комплементарных матричных РНК (мРНК) [1]. Целенаправленное подавление экспрессии генов с помощью миРНК в быстро делящихся клетках эукариот носит временный характер, при этом выраженный эффект лечения наблюдается в течение нескольких месяцев. Терапия с использованием миРНК является одним из наиболее перспективных направлений - на сегодняшний день не менее 80 препаратов на основе нуклеиновых кислот (НК) проходят различные стадии клинических испытаний для терапии онкологических патологий, вирусных инфекций, диабета, гиперхолестеринемии и глаукомы [2-4]. В качестве терапевтического агента миРНК имеют ряд преимуществ по сравнению с низкомолекулярными соединениями, поскольку достаточно доставить лишь несколько молекул в клетку для достижения терапевтического эффекта. Препараты для генной терапии потенциально способны лечить многие заболевания путем нацеливания на первопричину (дефектный ген), а не блокирования нижестоящих путей или лечения симптомов. Молекула миРНК загружается в эффекторный мультибелковый комплекс, направляя его к мРНК-мишени, которая расщепляется за счет эндонуклеазной активности одной из субъединиц в его составе [5]. Подавление экспрессии целевых генов последовательность-специфическим образом посредством деградации мРНК ведет к снижению биосинтеза белка, что может оказывать терапевтический эффект в случае ряда заболеваний. К этой группе можно отнести семейную гиперхолестеринемию (СГ) -генетическое заболевание липидного обмена, которое характеризуется высоким уровнем холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) в плазме. Для терапии сложных случаев СГ, когда стандартная фармакотерапия статинами не эффективна, используются радикальные меры, такие как шунтирование подвздошной кишки или трансплантация печени. Таким образом, поиск приемлемых способов лечения сложных случаев СГ при помощи доступных и безопасных лекарственных препаратов является важной задачей. Современный подход в разработке терапии СГ - это ингибирование синтеза аполипопротеина В (АроВ), который преимущественно синтезируется в гепатоцитах печени. АроВ играет ключевую роль в сборке и секреции частиц ЛПНП, накопление и окисления которых ведет к повреждению стенок кровеносных сосудов, повышая риск развития атеросклероза [6]. Поэтому в данной работе рассматриваются подходы к доставке миРНК к мРНК АроВ, которая является, с одной стороны, модельным объектом исследования, а с другой - потенциальным терапевтическим агентом для терапии СГ.

Основными препятствиями на пути к безопасной и эффективной липидснижающей генной терапии являются низкая адресность доставки миРНК в гепатоциты, неэффективное преодоление

клеточной мембраны и высвобождение в цитозоль для оказания терапевтического эффекта. Молекулы миРНК обладают выраженным отрицательный зарядом и слишком велики, чтобы пересекать клеточные мембраны, но достаточно малы для быстрого удаления из организма с помощью клубочковой фильтрации, что препятствует их эффективному накоплению в клетках-мишенях [7]. Поэтому нейтрализация отрицательного заряда за счет включения миРНК в системы доставки, в состав которых входят положительно заряженные липиды или полимеры, является основной стратегией для эффективного предотвращения почечного клиренса. Несмотря на современные достижения в области разработки невирусных систем доставки на основе липидных и неорганических наночастиц (НЧ), липосом, дендримеров и конъюгатов, эффективность высвобождения миРНК в цитозоль из эндолизосомального компартмента клетки при эндоцитозе носителя все еще достаточно невысока (1-2 % от введенной миРНК) [8]. Поэтому поиск новых систем доставки терапевтических миРНК, которые обеспечат эффективное решение ранее обозначенных проблем, является актуальной как фундаментальной, так и практической задачей.

Среди множества изученных синтетических средств доставки миРНК НЧ оксида железа являются одной из наиболее перспективных платформ по нескольким причинам. Во-первых, оксид железа является биосовместимым и биоразлагаемым материалом, ряд препаратов на его основе были одобрены для медицинского применения, другие находятся на поздних стадиях клинических испытаний [9]. Во-вторых, развитая поверхность позволяет осуществлять направленную функционализацию частиц, например, катионными липидами, для защиты миРНК от деградации и повышения эффективности трансфекции. Кроме того, наличие магнитного ядра в системе доставки обеспечивает дополнительные преимущества, такие как возможность визуализации НЧ с помощью метода магнитно-резонансной томографии (МРТ) и неинвазивное удаленное управление носителем с помощью внешнего магнитного поля (МП). Применение низкочастотного переменного «вращающего» МП для механической стимуляции клеток может привести к усилению накопления и/или улучшению профиля кинетики доставки НЧ с загруженными миРНК в клетки, повышая эффективность трансфекции.

Степень разработанности темы исследования. На момент начала работы была показана возможность увеличения эффективности ингибирования экспрессии генов с помощью магнитных НЧ и миРНК под действием постоянного магнитного поля in vitro [10-12]. В ряде работ было продемонстрировано, что применение осциллирующего [13] или переменного [14] магнитного поля в сочетании с коммерчески доступными НЧ для магнитофекции приводит к повышению эффективности доставки репортерной плазмиды в клетки, однако, оценка производилась только с помощью полуколичественных методов, таких как флуоресцентная и конфокальная микроскопия. Было показано увеличение адресности доставки к опухоли под

действием постоянного магнитного поля in vivo при терапии онкологических заболеваний [15; 16].

Цели и задачи. Цель работы - разработать технологию эффективной системы доставки терапевтических миРНК в составе функционализированных липидами НЧ оксида железа в печень с возможностью визуализации носителя методом МРТ.

Исходя из поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Синтезировать магнитные НЧ оксида железа различных форм и размеров, определить исходя из физико-химической свойств наиболее перспективные НЧ для биомедицинского применения.

2. Провести функционализацию НЧ формуляцией липидов, оптимизировать параметры загрузки терапевтических миРНК.

3. Провести комплексное биологическое исследование полученных комплексов НЧ-миРНК in vitro (цитотоксичность, эффективность ингибирования экспрессии мРНК ApoB, взаимодействие образцов с клетками - внутриклеточная локализация и динамика накопления).

4. Исследовать влияние внешнего магнитного поля на эффективность трансфекции под действием экспериментальных образцов in vitro.

5. Провести тестирование терапевтической эффективности образца системы доставки in vivo: визуализировать локализацию введенных НЧ с помощью метода МРТ, оценить биораспределение и токсичность, эффективность ингибирования мРНК ApoB и уровни общего холестерина.

Научная новизна. В настоящей работе впервые получены НЧ оксида железа различных форм и размеров с помощью разработанного двухстадийного синтеза, где на первом этапе с помощью стандартного метода термического разложения прекурсора были получены зародыши НЧ, а на втором - осуществлялось увеличение размера зародышей путем добавления в реакционную среду раствора прекурсора. Преимущество такого подхода заключается в том, что вторая стадия может быть продлена на произвольно длительное время, что позволяет получать высокомонодисперсные НЧ с контролируемыми формой и размером в широком диапазоне. К тому же, разделение стадий зародышеобразования и роста НЧ позволило тонко контролировать и задавать необходимые физико-химические свойства, что особенно важно для частиц, которые используются в биомедицине, где важен баланс между высокими магнитными характеристиками и коллоидной стабильностью. Результаты, полученные в ходе работы над синтезом магнитных НЧ, легли в основу нескольких полученных патентов на изобретение (№ 2668440, 2656667 и 2689392). В диссертационной работе впервые была экспериментально продемонстрирована возможность использовать низкочастотное переменное МП для увеличения эффективности ингибирования экспрессии мРНК гена-мишени in vitro с помощью магнитных НЧ с

загруженными миРНК в сравнении с теми же образцами без действия поля (патенты № 2699172, 2704998).

Теоретическая и практическая значимость работы. В работе создана теоретическая база для получения магнитных НЧ оксида железа с контролируемыми формой и размером для биомедицинского применения; разработанный метод синтеза позволяет тонко настраивать физико-химические свойства НЧ, которые имеют определяющее значение в их эффективности в качестве средств доставки миРНК. В работе последовательно демонстрируется, что заложенные теоретические основы на стадии химического синтеза НЧ имеют прогностическое значение для их дальнейшего поведения на стадиях in vitro и in vivo. Ключевым практическим аспектом работы является предложенный подход к трансфекции под действием низкочастотного «вращающего» переменного магнитного поля, который может стать решением при переносе технологии магнитофекции с уровня in vitro с использованием постоянного магнита на уровень in vivo, преодолевая тем самым существующие ограничения этого метода. Экспериментально показано, что применение низкочастотного переменного МП приводит к более выраженному накоплению НЧ в клетках и повышению эффективности трансфекции по сравнению с образцом в отсутствии МП. Разработанные в диссертации подходы могут представлять собой практические рекомендации к созданию эффективных систем доставки миРНК на основе магнитных наночастиц и имеют важное значение для прикладных исследований. Работа расширяет понимание методов синтеза НЧ для будущих биомедицинских применений и подходов к магнитофекции, возможных не только для использования in vitro для регуляции или изучения экспрессии генов, но и в терапии генетических заболеваний.

Методология и методы исследования. Экспериментальные исследования проводились с использованием современных физико-химических и биологических методов, на высокоточном оборудовании, со статистической обработкой результатов. На основании анализа информационных литературных источников были выбраны и оптимизированы методологические подходы к синтезу и функционализации НЧ, проведению трансфекции, оценке токсичности и локализации образцов in vitro и in vivo. Основные методы исследования, используемые в работе: полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени с обратной транскрипцией, конфокальная микроскопия, фазово-контрастная микроскопия, магнитно-резонансная томография, атомно-эмиссионный спектральный анализ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Метод синтеза наночастиц оксида железа, основанный на расширенном механизме ЛаМера, позволяет получать высокомонодисперсные частицы с контролируемыми размерами (определяются длительностью введения прекурсора) и формой (варьируется в зависимости от

соотношения химических потенциалов мономера, поверхностно-активных веществ и граней роста кристалла в реакционной среде, а также от изначальной формы используемых зародышей).

2. Формировании того или иного типа функционализированных агломератов обуславливается дипольным параметром X и формой НЧ, входящих в их состав. Тип сформированных агломератов НЧ влияет на емкость загрузки миРНК, скорость накопления НЧ в клетках и эффективность ингибирования экспрессии гена-мишени при проведении трансфекции.

3. Эффективность ингибирования экспрессии мРНК гена-мишени под действием НЧ, загруженных миРНК in vitro, сопоставима с действием современных коммерчески доступных трансфецирующих агентов; образцы не обладают цитотоксическим действием в концентрациях, необходимых для проведения трансфекции.

4. Использование внешнего низкочастотного переменного МП с миРНК-загруженными магнитными НЧ приводит к более выраженному накоплению образцов в клетках и позволяет достоверно увеличить эффективность ингибирования мРНК гена-мишени in vitro по сравнению с тем же образцом в отсутствие поля.

5. При внутривенном введении образцы эффективно накапливаются в целевом органе -печени, где не задерживаются, и через 48 часов более половины введенной дозы образцов удаляется из организма выделительными системами. В течение всего этого времени образцы могут быть визуализированы с помощью МРТ, давая выраженный Т2-контрастный сигнал на изображениях.

6. Введение образцов животным приводит к снижению уровня общего холестерина; концентрации аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в сыворотке лабораторных животных остаются в пределах нормы.

Личный вклад автора. Представленные в работе данные получены лично автором или при ее непосредственном участии на всех этапах исследований под руководством д.х.н, профессора Клячко Н.Л. и к.х.н. Абакумова М.А. Автор самостоятельно изучила современные литературные данные по теме исследования и на их основании составила обзор литературы. Автор самостоятельно или при непосредственном участии выполнила все эксперименты, произвела сбор, обработку и анализ полученных результатов. Автором была проведена значительная работа над текстом статей и патентов, а также представление их в редакции журналов, переписка с редакторами и рецензентами. В работах, опубликованных в соавторстве, основополагающий вклад принадлежит автору. На защиту вынесены только те положения и результаты экспериментов, в получении которых роль соискателя была определяющей.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов определяется проведением экспериментов с использованием современного

высокоточного оборудования, выбором актуальных физико-химических и биологических методов в исследовании, а также статистической обработкой полученных результатов. Основные результаты настоящей работы были представлены на российских и международных конференциях, в том числе: II International scientific-practical conference «Magnetic nanomaterials in biomedicine: synthesis, properties and application» (Москва, Россия, 2017), XXV Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов - 2018» (Москва, Россия, 2018), X Международный конгресс «Биотехнологии: состояние и перспективы развития» (Москва, Россия, 2018), V Международная молодёжная научно-практическая школа-конференция «Актуальные вопросы современного химического и биохимического материаловедения» (Уфа, Россия, 2018), 16th World Medical Nanotechnology Congress (Токио, Япония, 2018), XXXI Зимняя молодёжная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, Россия, 2019), Ежегодный саммит молодых ученых и инженеров «Большие вызовы для общества, государства и науки» (Адлер, Россия, 2019).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 2 статьи в журналах, рецензируемых базами данных Scopus/Web of Science, 5 патентов на изобретение и 6 тезисов докладов всероссийских и международных научных конференций.

Связь работы с государственными программами. Работа выполнена при поддержке Соглашения о предоставлении Субсидии №14.578.21.0201 «Разработка платформенной технологии доставки терапевтических миРНК в печень».

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы по тематике исследования (Глава 1), описания материалов и методов (Глава 2), результатов и обсуждения (Глава 3), заключения, выводов и списка литературы, состоящего из 316 ссылок. Диссертационная работа изложена на 141 странице и включает 49 рисунков и 10 таблиц.

Глава 1 Обзор литературы 1.1 РНК-терапия

1.1.1 Некодирующие терапевтические РНК

Благодаря развитию технологии секвенирования нового поколения, а также статистических и экспериментальных подходов, становится все более достижимо определить генные мутации, отвечающие за возникновение и развитие заболевания [17; 18]. В настоящее время многие фармацевтические и биотехнологические компании разрабатывают препараты на основе РНК для специфической регуляции генов, для лечения как моногенных, так и более сложных случаев полигенных заболеваний. Несколько таких продуктов были успешно одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) для использования в терапии; многие другие находятся на разных стадиях клинических испытаний [19; 20]. Значительное структурное разнообразие молекул РНК позволяет модулировать экспрессию генов и синтез белковых продуктов для широкого спектра мишеней [21; 22]. В зависимости от мишени, терапевтические некодирующие РНК (нкРНК) можно разделить на три группы: нкРНК, нацеленные на нуклеиновые кислоты [23; 24], белки [25; 26] или матричные РНК (мРНК), которые транслируются в белки [27-29]. На Рисунке 1.1 показаны основные представители каждой группы: одноцепочечные (оц) и двухцепочечные (дц) нкРНК, мишенью для которых служат молекулы ДНК или РНК; РНК-аптамеры, которые способны связывается с белком-мишенью с высокой степенью селективности и блокировать его функцию; мРНК, которые являются кодирующей матрицей для синтеза белка-мишени.

Большинство препаратов на основе нкРНК представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды (АСО) или молекулы двухцепочечной РНК, которые участвуют в механизме РНК-интерференции (миРНК) [21]. АСО - короткие (~ 18-30 нуклеотидов) модифицированные одноцепочечные синтетические полимеры нуклеиновых кислот, разработанные для избирательного связывания по принципу комплементарности с заданной последовательностью [30]. В зависимости от цели, терапевтические подходы с использованием АСО могут варьироваться. Например, связываясь с мишенью, они могут запускать деградацию мРНК транскрипта, опосредованную рибонуклеазой H (РНКаза H), или влиять на сплайсинг с помощью изменения фактора рекрутирования, а при связывании со зрелой мРНК могут предотвращать ее прикрепление к рибосоме, блокируя трансляцию [31]. Эндогенный фермент РНКаза H распознает субстрат гетеродуплекса РНК-ДНК, который образуется, когда олигонуклеотиды на основе ДНК связываются с комплементарными транскриптами мРНК, и катализирует его деградацию, тем

самым подавляя экспрессию гена-мишени. На сегодняшний день три АСО, служащие субстратом для расщепления РНКазой H, одобрены FDA: Фомивирсен, Мипомерсен и Инотерсен [32]. Примечательно, что РНКаза Н активна как в цитоплазме, так и в ядре [33-35], что позволяет выбирать в качестве мишеней ядерные транскрипты (например, незрелые предшественники мРНК и длинные нкРНК), которые могут быть менее доступны для других технологий (например, для миРНК).

Рисунок 1.1 - Схемы механизмов действия различных терапевтических РНК.

А) Одноцепочечные АСО предназначены для связывания с пре- или зрелой мРНК для модуляции сплайсинга предшественников мРНК, а также для деградации или ингибирования трансляции мРНК; Б) двухцепочечная миРНК после загрузки в эффекторный комплекс ЯЛБС и удаления цепи-спутницы (смысловой) специфично связывается с последовательностью мРНК-мишени и вызывает ее деградацию; В) РНК-аптамер связывается с молекулярной мишенью и блокирует ее функцию; Г) трансляция с мРНК белкового продукта, который может работать как

фермент или антиген [21]

Другой категорией АСО являются стерически блокирующие олигонуклеотиды, которые предназначены для гибридизации с транскриптами-мишенями для модуляции альтернативного сплайсинга, не приводя при этом к деградации мРНК. Выборочный пропуск или включение в зрелую мРНК экзона первичного транскрипта [36] может использоваться для восстановления трансляционной рамки считывания, чтобы стабилизировать или восстанавливать функции белков [37; 38]. Этот подход был использован для лечения мышечной дистрофии Дюшенна. Это Х-сцепленное рецессивное заболевание, вызванное мутацией в гене дистрофина, которая ведет к преждевременному усечению его трансляции [39; 40]. Однако внутренние делеции или

дупликации, поддерживающие рамку считывания, позволяют транслировать дистрофины, которые сохраняют свои N- и C-концевые домены. В этом случае форма дистрофинов более усеченная, но функциональная, что ведет к менее тяжелой и прогрессивной форме заболевания - мышечной дистрофией Беккера [37; 41]. Ряд АСО был одобрен FDA для ингибирования сплайсинга в конкретном сайте путем пропуска экзона, который либо имеет кодон преждевременной терминации, созданный мутацией, либо делецией, приводящей к сдвигу рамки считывания - Этеплирсен, Голодирсен, Вилтоларсен и Касимерсен для терапии миодистрофии Дюшенна [40] и Нусинерсен для лечения спинальной мышечной атрофии [42]. Тот же подход может быть использован для активации биосинтеза белка посредством ингибирования отрицательной регуляции, если АСО нацелен на длинные нкРНК, вовлеченные в транскрипционную репрессию белок-кодирующих генов [43].

РНК-интерференция является эволюционно консервативным защитным механизмом против экзогенных дцРНК [44; 45]. Ее основная функция - подавление экспрессии целевых генов последовательность-специфическим образом посредством деградации мРНК-мишени (эффекторные молекулы, участвующие в процессе - миРНК или микроРНК) или репрессии трансляции (только микроРНК), что показано на Рисунке 1.2 [19]. Данный процесс осуществляется РНК-индуцированным белковым комплексом (RISC), в состав которого входят эндонуклеаза семейства Argonaute (AGO2), РНК-связывающий белок и другие эффекторные белки [45; 46], а рибонуклеиновый компонент может быть представлен как эндогенными так и экзогенными короткими РНК. Пути биогенеза микроРНК и миРНК изначально отличаются в зависимости от их двухцепочечных предшественников. Тем не менее, оба этих дуплекса расщепляются рибонуклеазой из семейства РНКаз III, называемой Dicer или Dicer-подобным ферментом [47]. Основным различием между миРНК и микроРНК - степень комплементарности их последовательностей к мРНК. Для миРНК это полная комплементарность, и, соответственно, существование единственной мишени и только одного механизма регуляции - расщепление этой мишени; для микроРНК, напротив, это частичная комплементарность, как правило к 3'-нетранслируемой области мРНК, что подразумевает наличие сразу нескольких целевых последовательностей [48]. На Рисунке 1.2А показана схема механизма РНК-интерференции под действием миРНК. Белковый комплекс RISC рекрутируется для различения двух цепей миРНК как смысловой и антисмысловой (цепь-спутница и ведущая цепь, соответственно). Далее ведущая цепь направляет RISC к полностью комплементарной последовательности мРНК, которая расщепляется за счет эндонуклеазной активности одной из субъединиц в его составе. Активированный RISC может многократно участвовать в процессе расщепления мРНК. К основным механизмам регуляции под действием микроРНК относятся репрессия трансляции и деградация мРНК, а также, в редких случаях, эндонуклеазное расщепление мРНК (только при

высоком уровне комплементарности между микроРНК и мРНК). После процессинга и загрузки в RISC, дуплекс микроРНК раскручивается, высвобождая и отбрасывая цепь-спутницу, в отличие от миРНК, где для аналогичного процесса требуется эндонуклеаза AGO2. Далее зрелые одноцепочечные микроРНК направляют активированный RISC к целевым мРНК, где за счет частичной комплементарности оснований происходит связывание. Это препятствует прохождению рибосомы и ведет к репрессии трансляции. Однако этот процесс усложняется, когда микроРНК становится терапевтической мишенью, на которую нацелены (ингибируют) другие агенты. На Рисунке 1.2Б схематически представлены варианты воздействия на микроРНК, например, стерически блокирующих АСО, выступающих в роли антагомира (анти-микроРНК), которые ингибируют микроРНК за счет прямого связывания с ней в RISC. Альтернативный подход к ингибированию микроРНК - использование АСО, которые регулируют активность микроРНК посредством маскировки целевой последовательности на мРНК транскрипте [49].

Деградация мишени

Целевой участок для микроРНК

Рисунок 1.2 - Регуляция экспрессии генов с участием молекул-триггеров РНК-интерференции.

А) миРНК загружается в RISC, цепь-спутница подвергается эндонуклеолитическому расщеплению. Ведущая цепь направляет RISC к комплементарной последовательности, которая затем расщепляется за счет эндонуклеазной активности AGO2; Б) активность эндогенной микроРНК, загруженной в RISC, может регулироваться стерически блокирующими АСО, которые связываются со зрелой микроРНК или гибридизируются с транскриптом, маскируя

мишень [5]

Синтетические молекулы-триггеры РНК-интерференции обычно представляют собой полностью комплементарные дцРНК или короткие шпилечные РНК с общей длиной от 15 до 30 пар оснований (п. о.). дцРНК размером менее 15 п. о. не могут участвовать в РНК-интерференции, тогда как дцРНК размером более 30 п. о. могут вызывать неспецифическую токсичность посредством активации пути дцРНК-зависимой протеинкиназы [50; 51]. Более крупные (21-30 п. о.) дуплексы расщепляются рибонуклеазой Dicer и ведущая цепь, комплементарная транскрипту-мишени, загружается в RISC. Более короткие (15-21 п. о.) миРНК и аналоги могут обходить расщепление Dicer и проникать в RISC с помощью РНК-связывающего белка TARBP2 [52]. Второй путь может включать Dicer, но может осуществляться и в его отсутствии [53].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Уварова Виктория Игоревна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Saurabh S. RNA interference: concept to reality in crop improvement / S. Saurabh, A. S. Vidyarthi, D. Prasad // Planta. - 2014. - T. 239. - № 3. - C. 543-564.

2. Wittrup A. Knocking down disease: a progress report on siRNA therapeutics / A. Wittrup, J. Lieberman // Nature Reviews Genetics. - 2015. - T. 16. - № 9. - C. 543-552.

3. Therapeutic miRNA and siRNA: Moving from Bench to Clinic as Next Generation Medicine / C. Chakraborty, A. R. Sharma, G. Sharma [h gp.] // Molecular Therapy - Nucleic Acids. - 2017. - T. 8.

- C. 132-143.

4. Saw P. E. siRNA therapeutics: a clinical reality / P. E. Saw, E.-W. Song // Science China Life Sciences. - 2020. - T. 63. - № 4. - C. 485-500.

5. Roberts T. C. Advances in oligonucleotide drug delivery / T. C. Roberts, R. Langer, M. J. A. Wood // Nature Reviews Drug Discovery. - 2020. - T. 19. - № 10. - C. 673-694.

6. Advances in lipid-lowering therapy through gene-silencing technologies / B. G. Nordestgaard, S. J. Nicholls, A. Langsted [h gp.] // Nature Reviews Cardiology. - 2018. - T. 15. - № 5.

- C. 261-272.

7. Pharmacokinetic Behaviors of Intravenously Administered siRNA in Glandular Tissues / Y. Huang, Q. Cheng, J. L. Ji [h gp.] // Theranostics. - 2016. - T. 6. - № 10. - C. 1528-1541.

8. Image-based analysis of lipid nanoparticle-mediated siRNA delivery, intracellular trafficking and endosomal escape / J. Gilleron, W. Querbes, A. Zeigerer [h gp.] // Nature Biotechnology.

- 2013. - T. 31. - № 7. - C. 638-646.

9. Nanoparticle-Based Medicines: A Review of FDA-Approved Materials and Clinical Trials to Date / D. Bobo, K. J. Robinson, J. Islam [h gp.] // Pharmaceutical Research. - 2016. - T. 33. - № 10.

- C. 2373-2387.

10. Gene silencing mediated by magnetic lipospheres tagged with small interfering RNA / P. Del Pino, A. Munoz-Javier, D. Vlaskou [h gp.] // Nano Letters. - 2010. - T. 10. - № 10. - C. 39143921.

11. Lipidoid-Coated Iron Oxide Nanoparticles for Efficient DNA and siRNA delivery / S. Jiang, A. A. Eltoukhy, K. T. Love [h gp.] // Nano Letters. - 2013. - T. 13. - № 3. - C. 1059-1064.

12. Magnetic ternary nanohybrids for nonviral gene delivery of stem cells and applications on cancer therapy / R.-Y. Huang, Y.-H. Lin, S.-Y. Lin [h gp.] // Theranostics. - 2019. - T. 9. - № 8. -C. 2411-2423.

13. Magnetic nanoparticle-mediated gene transfer to oligodendrocyte precursor cell transplant populations is enhanced by magnetofection strategies / S. I. Jenkins, M. R. Pickard, N. Granger, D. M.

Chari // ACS Nano. - 2011. - T. 5. - № 8. - C. 6527-6538.

14. Alternating magnetic field plate for enhanced magnetofection of iron oxide nanoparticle conjugated nucleic acids / M. K. Yapici, A. Al Nabulsi, N. Rizk [h gp.] // Journal of Magnetism and Magnetic Materials. - 2019. - T. 469. - № August 2018. - C. 598-605.

15. Iron oxide nanoparticles for magnetically-guided and magnetically-responsive drug delivery / J. Estelrich, E. Escribano, J. Queralt, M. A. Busquets // International Journal of Molecular Sciences. -2015. - T. 16. - № 4. - C. 8070-8101.

16. Neoadjuvant gene delivery of feline granulocyte-macrophage colony-stimulating factor using magnetofection for the treatment of feline fibrosarcomas: a phase I trial / C. Huttinger, J. Hirschberger, A. Jahnke [h gp.] // The Journal of Gene Medicine. - 2008. - T. 10. - № 6. - C. 655-667.

17. Chi X. Safety of antisense oligonucleotide and siRNA-based therapeutics / X. Chi, P. Gatti, T. Papoian // Drug Discovery Today. - 2017. - T. 22. - № 5. - C. 823-833.

18. Liu B. Identifying causal variants and genes using functional genomics in specialized cell types and contexts / B. Liu, S. B. Montgomery // Human Genetics. - 2020. - T. 139. - № 1. - C. 95102.

19. Therapeutic siRNA: state of the art / B. Hu, L. Zhong, Y. Weng [h gp.] // Signal Transduction and Targeted Therapy. - 2020. - T. 5. - № 101. - C. 1-25.

20. Bennett C. F. Therapeutic Antisense Oligonucleotides Are Coming of Age / C. F. Bennett // Annual Review of Medicine. - 2019. - T. 70. - № 1. - C. 307-321.

21. Kim Y.-K. RNA Therapy: Current Status and Future Potential / Y.-K. Kim // Chonnam Medical Journal. - 2020. - T. 56. - № 2. - C. 87-93.

22. Chery J. RNA therapeutics: RNAi and antisense mechanisms and clinical applications. / J. Chery // Postdoc journal: a journal of postdoctoral research and postdoctoral affairs. - 2016. - T. 4. -№ 7. - C. 35-50.

23. Matsui M. Non-coding RNAs as drug targets / M. Matsui, D. R. Corey // Nature Reviews Drug Discovery. - 2017. - T. 16. - № 3. - C. 167-179.

24. Rupaimoole R. MicroRNA therapeutics: towards a new era for the management of cancer and other diseases / R. Rupaimoole, F. J. Slack // Nature Reviews Drug Discovery. - 2017. - T. 16. -№ 3. - C. 203-222.

25. Zhou J. Aptamers as targeted therapeutics: current potential and challenges / J. Zhou, J. Rossi // Nature Reviews Drug Discovery. - 2017. - T. 16. - № 3. - C. 181-202.

26. Ning Y. Aptamers used for biosensors and targeted therapy. / Y. Ning, J. Hu, F. Lu // Biomedicine & pharmacotherapy = Biomedecine & pharmacotherapie. - 2020. - T. 132. - № 110902. - C. 1-21.

27. Delivering the Messenger: Advances in Technologies for Therapeutic mRNA Delivery / P. S. Kowalski, A. Rudra, L. Miao, D. G. Anderson // Molecular Therapy. - 2019. - T. 27. - № 4. - C. 710728.

28. Delivery of mRNA Therapeutics for the Treatment of Hepatic Diseases / Z. Trepotec, E. Lichtenegger, C. Plank [h gp.] // Molecular Therapy. - 2019. - T. 27. - № 4. - C. 794-802.

29. Therapeutic mRNA delivery to leukocytes / Y. Granot-Matok, E. Kon, N. Dammes [h gp.] // Journal of Controlled Release. - 2019. - T. 305. - C. 165-175.

30. Rossor A. M. Antisense oligonucleotides and other genetic therapies made simple / A. M. Rossor, M. M. Reilly, J. N. Sleigh // Practical Neurology. - 2018. - T. 18. - № 2. - C. 126-131.

31. Pharmacology of Antisense Drugs / C. F. Bennett, B. F. Baker, N. Pham [h gp.] // Annual Review of Pharmacology and Toxicology. - 2017. - T. 57. - № 1. - C. 81-105.

32. Aartsma-Rus A. The 10th Oligonucleotide Therapy Approved: Golodirsen for Duchenne Muscular Dystrophy / A. Aartsma-Rus, D. R. Corey // Nucleic Acid Therapeutics. - 2020. - T. 30. -№ 2. - C. 67-70.

33. RNase H1-Dependent Antisense Oligonucleotides Are Robustly Active in Directing RNA Cleavage in Both the Cytoplasm and the Nucleus / X. H. Liang, H. Sun, J. G. Nichols, S. T. Crooke // Molecular Therapy. - 2017. - T. 25. - № 9. - C. 2075-2092.

34. Lennox K. A. Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides / K. A. Lennox, M. A. Behlke // Nucleic Acids Research. -2016. - T. 44. - № 2. - C. 863-877.

35. Hyjek M. RNases H: Structure and mechanism / M. Hyjek, M. Figiel, M. Nowotny // DNA Repair. - 2019. - T. 84. - № 102672. - C. 1-13.

36. Precision Medicine through Antisense Oligonucleotide-Mediated Exon Skipping / D. Li, F. L. Mastaglia, S. Fletcher, S. D. Wilton // Trends in Pharmacological Sciences. - 2018. - T. 39. - № 11. - C. 982-994.

37. Development of Exon Skipping Therapies for Duchenne Muscular Dystrophy: A Critical Review and a Perspective on the Outstanding Issues / A. Aartsma-Rus, V. Straub, R. Hemmings [h gp.] // Nucleic Acid Therapeutics. - 2017. - T. 27. - № 5. - C. 251-259.

38. Havens M. A. Splice-switching antisense oligonucleotides as therapeutic drugs / M. A. Havens, M. L. Hastings // Nucleic Acids Research. - 2016. - T. 44. - № 14. - C. 6549-6563.

39. Gieron-Korthals M. New Developments in Diagnosis, Treatment, and Management of Duchenne Muscular Dystrophy / M. Gieron-Korthals, R. Fernandez // Advances in Pediatrics. - 2020. -T. 67. - C. 183-196.

40. Therapeutic Approaches for Duchenne Muscular Dystrophy: Old and New / S. J. Mackenzie,

S. Nicolau, A. M. Connolly, J. R. Mendell // Seminars in Pediatric Neurology. - 2021. - T. 37. -№ 100877. - C. 1-7.

41. Flanigan K. M. Duchenne and Becker Muscular Dystrophies / K. M. Flanigan // Neurologic Clinics. - 2014. - T. 32. - № 3. - C. 671-688.

42. Scharner J. Clinical Applications of Single-Stranded Oligonucleotides: Current Landscape of Approved and In-Development Therapeutics / J. Scharner, I. Aznarez // Molecular Therapy. - 2021.

- T. 29. - № 2. - C. 540-554.

43. Nonsense-mediated decay as a terminating mechanism for antisense oligonucleotides / A. J. Ward, M. Norrbom, S. Chun [h gp.] // Nucleic Acids Research. - 2014. - T. 42. - № 9. - C. 5871-5879.

44. Setten R. L. The current state and future directions of RNAi-based therapeutics / R. L. Setten, J. J. Rossi, S. ping Han // Nature Reviews Drug Discovery. - 2019. - T. 18. - № 6. - C. 421446.

45. Wilson R. C. Molecular Mechanisms of RNA Interference / R. C. Wilson, J. A. Doudna // Annual Review of Biophysics. - 2013. - T. 42. - № 1. - C. 217-239.

46. RNA-induced silencing complex (RISC) Proteins PACT, TRBP, and Dicer are SRA binding nuclear receptor coregulators / A. D. Redfern, S. M. Colley, D. J. Beveridge [h gp.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2013. - T. 110. - № 16. - C. 6536-6541.

47. Pare J. M. Dicer: Structure, Function And Role In RNA-Dependent Gene-Silencing Pathways / J. M. Pare, T. C. Hobman // Industrial Enzymes. - Dordrecht : Springer Netherlands, 2007.

- C. 421-438.

48. siRNA Versus miRNA as Therapeutics for Gene Silencing / J. K. W. W. Lam, M. Y. T. T. Chow, Y. Zhang, S. W. S. S. Leung // Molecular therapy. Nucleic acids. - 2015. - T. 4. - № e252. -C. 1-20.

49. Wang Z. The principles of MiRNA-masking antisense oligonucleotides technology. / Z. Wang // Methods in molecular biology (Clifton, N.J.). - 2011. - T. 676. - C. 43-49.

50. Synthetic dsRNA Dicer substrates enhance RNAi potency and efficacy / D. H. Kim, M. A. Behlke, S. D. Rose [h gp.] // Nature Biotechnology. - 2005. - T. 23. - № 2. - C. 222-226.

51. Impact of Protein Kinase PKR in Cell Biology: from Antiviral to Antiproliferative Action / M. A. Garcia, J. Gil, I. Ventoso [h gp.] // Microbiology and Molecular Biology Reviews. - 2006. - T. 70.

- № 4. - C. 1032-1060.

52. Differential roles of human Dicer-binding proteins TRBP and PACT in small RNA processing / H. Y. Lee, K. Zhou, A. M. Smith [h gp.] // Nucleic Acids Research. - 2013. - T. 41. -№ 13. - C. 6568-6576.

53. A novel miRNA processing pathway independent of dicer requires argonaute2 catalytic

activity / D. Cifuentes, H. Xue, D. W. Taylor [h gp.] // Science. - 2010. - T. 328. - № 5986. - C. 16941698.

54. Effect of asymmetric terminal structures of short RNA duplexes on the RNA interference activity and strand selection / M. Sano, M. Sierant, M. Miyagishi [h gp.] // Nucleic Acids Research. -2008. - T. 36. - № 18. - C. 5812-5821.

55. Molecular basis for improved gene silencing by Dicer substrate interfering RNA compared with other siRNA variants / N. M. Snead, X. Wu, A. Li [h gp.] // Nucleic Acids Research. - 2013. -T. 41. - № 12. - C. 6209-6221.

56. 5'-(E)-Vinylphosphonate: A Stable Phosphate Mimic Can Improve the RNAi Activity of siRNA-GalNAc Conjugates / R. Parmar, J. L. S. Willoughby, J. Liu [h gp.] // ChemBioChem. - 2016.

- T. 17. - № 11. - C. 985-989.

57. Rational siRNA design for RNA interference / A. Reynolds, D. Leake, Q. Boese [h gp.] // Nature Biotechnology. - 2004. - T. 22. - № 3. - C. 326-330.

58. Khvorova A. Functional siRNAs and miRNAs exhibit strand bias / A. Khvorova, A. Reynolds, S. D. Jayasena // Cell. - 2003. - T. 115. - № 2. - C. 209-216.

59. Lewis B. P. Conserved seed pairing, often flanked by adenosines, indicates that thousands of human genes are microRNA targets / B. P. Lewis, C. B. Burge, D. P. Bartel // Cell. - 2005. - T. 120.

- № 1. - C. 15-20.

60. Riley K. J. Association of Argonaute proteins and microRNAs can occur after cell lysis / K. J. Riley, T. A. Yario, J. A. Steitz // RNA. - 2012. - T. 18. - № 9. - C. 1581-1585.

61. Ender C. Argonaute proteins at a glance / C. Ender, G. Meister // Journal of Cell Science. -2010. - T. 123. - № 11. - C. 1819-1823.

62. BLAST+: Architecture and applications / C. Camacho, G. Coulouris, V. Avagyan [h gp.] // BMC Bioinformatics. - 2009. - T. 10. - № 421. - C. 1-9.

63. Gelinas A. D. Embracing proteins: Structural themes in aptamer-protein complexes / A. D. Gelinas, D. R. Davies, N. Janjic // Current Opinion in Structural Biology. - 2016. - T. 36. - C. 122-132.

64. Geiger A. RNA aptamers that bind L-arginine with sub-micromolar dissociation constants and high enantioselectivity / A. Geiger // Nucleic Acids Research. - 1996. - T. 24. - № 6. - C. 10291036.

65. High-Resolution Molecular Discrimination by RNA / R. D. Jenison, S. C. Gill, A. Pardi, B. Polisky // Science. - 1994. - T. 263. - № 5152. - C. 1425-1429.

66. Sassanfar M. An RNA motif that binds ATP / M. Sassanfar, J. W. Szostak // Nature. - 1993.

- T. 364. - № 6437. - C. 550-553.

67. The isolation of an RNA aptamer targeting to p53 protein with single amino acid mutation /

L. Chen, F. Rashid, A. Shah [h gp.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2015. -T. 112. - № 32. - C. 10002-10007.

68. Keefe A. D. Aptamers as therapeutics / A. D. Keefe, S. Pai, A. Ellington // Nature Reviews Drug Discovery 2010 9:7. - 2010. - T. 9. - № 7. - C. 537-550.

69. Therapeutic RNA aptamers in clinical trials / P. Sundaram, H. Kurniawan, M. E. Byrne, J. Wower // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2013. - T. 48. - № 1-2. - C. 259-271.

70. Ecker D. M. The therapeutic monoclonal antibody market / D. M. Ecker, S. D. Jones, H. L. Levine // mAbs. - 2015. - T. 7. - № 1. - C. 9-14.

71. Pegaptanib, a targeted anti-VEGF aptamer for ocular vascular disease / E. W. M. Ng, D. T. Shima, P. Calias [h gp.] // Nature Reviews Drug Discovery. - 2006. - T. 5. - № 2. - C. 123-132.

72. Siddiqui M. A. A. Pegaptanib / M. A. A. Siddiqui, G. M. Keating // Drugs. - 2005. - T. 65. - № 11. - C. 1571-1577.

73. Mousa S. A. Current Status of Vascular Endothelial Growth Factor Inhibition in Age-Related Macular Degeneration / S. A. Mousa, S. S. Mousa // BioDrugs. - 2010. - T. 24. - № 3. - C. 183194.

74. Ferrara N. Ten years of anti-vascular endothelial growth factor therapy / N. Ferrara, A. P. Adamis // Nature Reviews Drug Discovery. - 2016. - T. 15. - № 6. - C. 385-403.

75. Sahin U. mRNA-based therapeutics — developing a new class of drugs / U. Sahin, K. Kariko, Ö. Türeci // Nature Reviews Drug Discovery. - 2014. - T. 13. - № 10. - C. 759-780.

76. mRNA vaccines — a new era in vaccinology / N. Pardi, M. J. Hogan, F. W. Porter, D. Weissman // Nature Reviews Drug Discovery. - 2018. - T. 17. - № 4. - C. 261-279.

77. An RNA toolbox for cancer immunotherapy / F. Pastor, P. Berraondo, I. Etxeberria [h gp.] // Nature Reviews Drug Discovery. - 2018. - T. 17. - № 10. - C. 751-767.

78. Tan L. Recent advances in mRNA vaccine delivery / L. Tan, X. Sun // Nano Research. -2018. - T. 11. - № 10. - C. 5338-5354.

79. Evading innate immunity in nonviral mRNA delivery: don't shoot the messenger / J. Devoldere, H. Dewitte, S. C. De Smedt, K. Remaut // Drug Discovery Today. - 2016. - T. 21. - № 1. -C. 11-25.

80. Preclinical and Clinical Demonstration of Immunogenicity by mRNA Vaccines against H10N8 and H7N9 Influenza Viruses / K. Bahl, J. J. Senn, O. Yuzhakov [h gp.] // Molecular Therapy. -2017. - T. 25. - № 6. - C. 1316-1327.

81. Davidson B. L. Current prospects for RNA interference-based therapies / B. L. Davidson, P. B. McCray // Nature Reviews Genetics. - 2011. - T. 12. - № 5. - C. 329-340.

82. Kissler S. From genome-wide association studies to etiology: probing autoimmunity genes

by RNAi / S. Kissler // Trends in Molecular Medicine. - 2011. - T. 17. - № 11. - C. 634-640.

83. Host gene targets for novel influenza therapies elucidated by high-throughput RNA interference screens / V. A. Meliopoulos, L. E. Andersen, K. F. Birrer [h gp.] // The FASEB Journal. -2012. - T. 26. - № 4. - C. 1372-1386.

84. A Highly Durable RNAi Therapeutic Inhibitor of PCSK9 / K. Fitzgerald, S. White, A. Borodovsky [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 376. - № 1. - C. 41-51.

85. Global, regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016 / M. Naghavi, A. A. Abajobir, C. Abbafati [h gp.] // The Lancet. - 2017. - T. 390. - № 10100. - C. 1151-1210.

86. Efficacy and safety of cholesterol-lowering treatment: prospective meta-analysis of data from 90 056 participants in 14 randomised trials of statins / C. Baigent, A. Keech, P. M. Kearney [h gp.] // The Lancet. - 2005. - T. 366. - № 9493. - C. 1267-1278.

87. Rosuvastatin to Prevent Vascular Events in Men and Women with Elevated C-Reactive Protein / P. M. Ridker, E. Danielson, F. A. H. Fonseca [h gp.] // New England Journal of Medicine. -2008. - T. 359. - № 21. - C. 2195-2207.

88. Efficacy and safety of more intensive lowering of LDL cholesterol: A meta-analysis of data from 170 000 participants in 26 randomised trials / C. Baigent, L. Blackwell, J. Emberson [h gp.] // The Lancet. - 2010. - T. 376. - № 9753. - C. 1670-1681.

89. Ezetimibe Added to Statin Therapy after Acute Coronary Syndromes / C. P. Cannon, M. A. Blazing, R. P. Giugliano [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2015. - T. 372. - № 25. -C. 2387-2397.

90. Evolocumab and Clinical Outcomes in Patients with Cardiovascular Disease / M. S. Sabatine, R. P. Giugliano, A. C. Keech [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 376. -№ 18. - C. 1713-1722.

91. Cardiovascular Efficacy and Safety of Bococizumab in High-Risk Patients / P. M. Ridker, J. Revkin, P. Amarenco [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 376. - № 16. -C. 1527-1539.

92. Effects of Combination Lipid Therapy in Type 2 Diabetes Mellitus / H. Ginsberg, M. Elam, L. Lovato [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2010. - T. 362. - № 17. - C. 1563-1574.

93. Effects of Anacetrapib in Patients with Atherosclerotic Vascular Disease / L. Bowman, J. C. Hopewell, F. Chen [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 377. - № 13. - C. 12171227.

94. Antiinflammatory Therapy with Canakinumab for Atherosclerotic Disease / P. M. Ridker, B. M. Everett, T. Thuren [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 377. - № 12. -

C. 1119-1131.

95. The Evolving Understanding and Approach to Residual Cardiovascular Risk Management /

D. S. Dhindsa, P. B. Sandesara, M. D. Shapiro, N. D. Wong // Frontiers in Cardiovascular Medicine. -2020. - T. 7. - № 88. - C. 1-11.

96. Revisiting biomarker discovery by plasma proteomics / P. E. Geyer, L. M. Holdt, D. Teupser, M. Mann // Molecular Systems Biology. - 2017. - T. 13. - № 942. - C. 1-15.

97. Nordestgaard B. G. A Test in Context: Lipid Profile, Fasting Versus Nonfasting / B. G. Nordestgaard // Journal of the American College of Cardiology. - 2017. - T. 70. - № 13. - C. 16371646.

98. Nordestgaard B. G. Triglycerides and cardiovascular disease. / B. G. Nordestgaard, A. Varbo // Lancet (London, England). - 2014. - T. 384. - № 9943. - C. 626-635.

99. Nordestgaard B. G. Triglyceride-Rich Lipoproteins and Atherosclerotic Cardiovascular Disease / B. G. Nordestgaard // Circulation Research. - 2016. - T. 118. - № 4. - C. 547-563.

100. Current Understanding of Atherogenesis / R. A. Brown, E. Shantsila, C. Varma, G. Y. H. Lip // The American Journal of Medicine. - 2017. - T. 130. - № 3. - C. 268-282.

101. Mechanisms of plaque formation and rupture / J. F. Bentzon, F. Otsuka, R. Virmani, E. Falk // Circulation Research. - 2014. - T. 114. - № 12. - C. 1852-1866.

102. Boffa M. B. Lipoprotein (a): truly a direct prothrombotic factor in cardiovascular disease? / M. B. Boffa, M. L. Koschinsky // Journal of Lipid Research. - 2016. - T. 57. - № 5. - C. 745-757.

103. Low-density lipoproteins cause atherosclerotic cardiovascular disease. 1. Evidence from genetic, epidemiologic, and clinical studies. A consensus statement fromthe European Atherosclerosis Society Consensus Panel / B. A. Ference, H. N. Ginsberg, I. Graham [h gp.] // European Heart Journal. - 2017. - T. 38. - № 32. - C. 2459-2472.

104. Triglyceride-rich lipoproteins and high-density lipoprotein cholesterol in patients at high risk of cardiovascular disease: evidence and guidance for management / M. J. Chapman, H. N. Ginsberg, P. Amarenco [h gp.] // European Heart Journal. - 2011. - T. 32. - № 11. - C. 1345-1361.

105. The polygenic nature of hypertriglyceridaemia: implications for definition, diagnosis, and management / R. A. Hegele, H. N. Ginsberg, M. J. Chapman [h gp.] // The Lancet Diabetes & Endocrinology. - 2014. - T. 2. - № 8. - C. 655-666.

106. Nordestgaard B. G. Lipoprotein (a) as a cause of cardiovascular disease: insights from epidemiology, genetics, and biology / B. G. Nordestgaard, A. Langsted // Journal of Lipid Research. -2016. - T. 57. - № 11. - C. 1953-1975.

107. Lipoprotein(a) as a cardiovascular risk factor: current status / B. G. Nordestgaard, M. J. Chapman, K. Ray [h gp.] // European Heart Journal. - 2010. - T. 31. - № 23. - C. 2844-2853.

108. Kronenberg F. Lipoprotein(a): resurrected by genetics / F. Kronenberg, G. Utermann // Journal of Internal Medicine. - 2013. - T. 273. - № 1. - C. 6-30.

109. Gaudet D. Gene-based therapies in lipidology / D. Gaudet, D. Brisson // Current Opinion in Lipidology. - 2015. - T. 26. - № 6. - C. 553-565.

110. Effect of an RNA interference drug on the synthesis of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) and the concentration of serum LDL cholesterol in healthy volunteers: A randomised, single-blind, placebo-controlled, phase 1 trial / K. Fitzgerald, M. Frank-Kamenetsky, S. Shulga-Morskaya [h gp.] // The Lancet. - 2014. - T. 383. - № 9911. - C. 60-68.

111. Horton J. Molecular biology of PCSK9: its role in LDL metabolism / J. Horton, J. Cohen, H. Hobbs // Trends in Biochemical Sciences. - 2007. - T. 32. - № 2. - C. 71-77.

112. Dissection of the endogenous cellular pathways of PCSK9-induced low density Lipoprotein receptor degradation. Evidence for an intracellular route / S. Poirier, G. Mayer, V. Poupon [h gp.] // Journal of Biological Chemistry. - 2009. - T. 284. - № 42. - C. 28856-28864.

113. A Highly Durable RNAi Therapeutic Inhibitor of PCSK9 / K. Fitzgerald, S. White, A. Borodovsky [h gp.] // http://dx.doi.org/10.1056/NEJMoa1609243. - 2016. - T. 376. - № 1. - C. 41-51.

114. Lamb Y. N. Inclisiran: First Approval / Y. N. Lamb // Drugs. - 2021. - T. 81. - № 3. -C. 389-395.

115. Inclisiran: A New Promising Agent in the Management of Hypercholesterolemia / C. Kosmas, A. Muñoz Estrella, A. Sourlas [h gp.] // Diseases. - 2018. - T. 6. - № 63. - C. 1-6.

116. Loss-of-function mutations in APOC3 and risk of ischemic vascular disease / A. B. Jr0gensen, R. Frikke-Schmidt, B. G. Nordestgaard, A. Tybjrag-Hansen // New England Journal of Medicine. - 2014. - T. 371. - № 1. - C. 32-41.

117. Antisense oligonucleotide inhibition of apolipoprotein c-iii reduces plasma triglycerides in rodents, nonhuman primates, and humans / M. J. Graham, R. G. Lee, T. A. Bell [h gp.] // Circulation Research. - 2013. - T. 112. - № 11. - C. 1479-1490.

118. Wang X. Clinical and genetic analysis of a family diagnosed with familial hypobetalipoproteinemia in which the proband was diagnosed with diabetes mellitus / X. Wang, D. Wang, Z. Shan // Atherosclerosis. - 2015. - T. 239. - № 2. - C. 552-556.

119. Silencing of ANGPTL 3 (angiopoietin-like protein 3) in human hepatocytes results in decreased expression of gluconeogenic genes and reduced triacylglycerol-rich VLDL secretion upon insulin stimulation / A. Tikka, J. Soronen, P. P. Laurila [h gp.] // Bioscience Reports. - 2014. - T. 34. -№ 6. - C. 811-821.

120. Cardiovascular and Metabolic Effects of ANGPTL3 Antisense Oligonucleotides / M. J. Graham, R. G. Lee, T. A. Brandt [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2017. - T. 377. - № 3.

- C. 222-232.

121. Genetically Elevated Lipoprotein(a) and Increased Risk of Myocardial Infarction / P. R. Kamstrup, A. Tybj^rg-Hansen, R. Steffensen, B. G. Nordestgaard // JAMA. - 2009. - T. 301. - № 22.

- C. 2331-2339.

122. Genetic Variants Associated with Lp(a) Lipoprotein Level and Coronary Disease / R. Clarke, J. F. Peden, J. C. Hopewell [h gp.] // New England Journal of Medicine. - 2009. - T. 361. - № 26. -C. 2518-2528.

123. Kamstrup P. R. Elevated lipoprotein(a) and risk of aortic valve stenosis in the general population / P. R. Kamstrup, A. Tybj^rg-Hansen, B. G. Nordestgaard // Journal of the American College of Cardiology. - 2014. - T. 63. - № 5. - C. 470-477.

124. Antisense therapy targeting apolipoprotein(a): a randomised, double-blind, placebo-controlled phase 1 study / S. Tsimikas, N. J. Viney, S. G. Hughes [h gp.] // The Lancet. - 2015. - T. 386.

- № 10002. - C. 1472-1483.

125. Antisense oligonucleotides targeting apolipoprotein(a) in people with raised lipoprotein(a): two randomised, double-blind, placebo-controlled, dose-ranging trials / N. J. Viney, J. C. van Capelleveen, R. S. Geary [h gp.] // The Lancet. - 2016. - T. 388. - № 10057. - C. 2239-2253.

126. Kamstrup P. R. Lipoprotein(a) concentrations, isoform size, and risk of type 2 diabetes: A Mendelian randomisation study / P. R. Kamstrup, B. G. Nordestgaard // The Lancet Diabetes and Endocrinology. - 2013. - T. 1. - № 3. - C. 220-227.

127. The association between circulating lipoprotein(a) and type 2 diabetes: Is it causal? / Z. Ye, P. C. Haycock, D. Gurdasani [h gp.] // Diabetes. - 2014. - T. 63. - № 1. - C. 332-342.

128. Familial defective apolipoprotein B-100: A review / L. H. Andersen, A. R. Miserez, Z. Ahmad, R. L. Andersen // Journal of Clinical Lipidology. - 2016. - T. 10. - № 6. - C. 1297-1302.

129. Complex effects of inhibiting hepatic apolipoprotein B100 synthesis in humans. / G. Reyes-Soffer, B. Moon, A. Hernandez-Ono [h gp.] // Science translational medicine. - 2016. - T. 8. - № 323.

- C. 1-10.

130. Alterations in the hepatic transcriptional landscape after RNAi mediated ApoB silencing in cynomolgus monkeys / M. S. Hamza, C. Kumar, S. M. Chia [h gp.] // Atherosclerosis. - 2015. - T. 242.

- № 2. - C. 383-395.

131. Quick nuclear transportation of siRNA and in vivo hepatic ApoB gene silencing with galactose-bearing polymeric carrier / Y. Tachibana, M. C. Munisso, W. Kamata [h gp.] // Journal of Biotechnology. - 2014. - T. 175. - № 1. - C. 15-21.

132. Mipomersen and other therapies for the treatment of severe familial hypercholesterolemia / J. Burnett, Bell, Hooper, Watts // Vascular Health and Risk Management. - 2012. - T. 8. - № 1. -

C. 651-659.

133. Randomized, Placebo-Controlled Trial of Mipomersen in Patients with Severe Hypercholesterolemia Receiving Maximally Tolerated Lipid-Lowering Therapy / M. P. McGowan, J.-C. Tardif, R. Ceska [h gp.] // PLoS ONE. - 2012. - T. 7. - № 11. - C. e49006.

134. Effect of apolipoprotein-B synthesis inhibition on liver triglyceride content in patients with familial hypercholesterolemia / M. E. Visser, F. Akdim, D. L. Tribble [h gp.] // Journal of Lipid Research. - 2010. - T. 51. - № 5. - C. 1057-1062.

135. ApoB siRNA-induced Liver Steatosis is Resistant to Clearance by the Loss of Fatty Acid Transport Protein 5 (Fatp5) / B. Ason, J. Castro-Perez, S. Tep [h gp.] // Lipids 2011 46:11. - 2011. -T. 46. - № 11. - C. 991-1003.

136. Chemical and structural modifications of RNAi therapeutics / S. H. Ku, S. D. Jo, Y. K. Lee [h gp.] // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2016. - T. 104. - C. 16-28.

137. Zuckerman J. E. Clinical experiences with systemically administered siRNA-based therapeutics in cancer / J. E. Zuckerman, M. E. Davis // Nature Reviews Drug Discovery. - 2015. -T. 14. - № 12. - C. 843-856.

138. Mechanisms and optimization of in vivo delivery of lipophilic siRNAs / C. Wolfrum, S. Shi, K. N. Jayaprakash [h gp.] // Nature Biotechnology. - 2007. - T. 25. - № 10. - C. 1149-1157.

139. An ionizable lipid toolbox for RNA delivery / X. Han, H. Zhang, K. Butowska [h gp.] // Nature Communications. - 2021. - T. 12. - № 7233. - C. 1-6.

140. Doherty G. J. Mechanisms of Endocytosis / G. J. Doherty, H. T. McMahon // Annual Review of Biochemistry. - 2009. - T. 78. - № 1. - C. 857-902.

141. Pei D. Overcoming Endosomal Entrapment in Drug Delivery / D. Pei, M. Buyanova // Bioconjugate Chemistry. - 2019. - T. 30. - № 2. - C. 273-283.

142. White J. M. Fusion of Enveloped Viruses in Endosomes / J. M. White, G. R. Whittaker // Traffic. - 2016. - T. 17. - № 6. - C. 593-614.

143. Visualizing lipid-formulated siRNA release from endosomes and target gene knockdown / A. Wittrup, A. Ai, X. Liu [h gp.] // Nature Biotechnology. - 2015. - T. 33. - № 8. - C. 870-876.

144. Freeman E. C. Modeling the proton sponge hypothesis: Examining proton sponge effectiveness for enhancing intracellular gene delivery through multiscale modeling / E. C. Freeman, L. M. Weiland, W. S. Meng // Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. - 2013. - T. 24. - № 4. -C. 398-416.

145. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery / S. C. Semple, A. Akinc, J. Chen [h gp.] // Nature Biotechnology. - 2010. - T. 28. - № 2. - C. 172-176.

146. Dominska M. Breaking down the barriers: siRNA delivery and endosome escape / M.

Dominska, D. M. Dykxhoorn // Journal of Cell Science. - 2010. - T. 123. - № 8. - C. 1183-1189.

147. Hepatic Tumor Metastases Cause Enhanced PEGylated Liposome Uptake by Kupffer Cells / M. Ukawa, Y. Fujiwara, H. Ando [h gp.] // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2016. - T. 39. -№ 2. - C. 215-220.

148. Efficiency of siRNA delivery by lipid nanoparticles is limited by endocytic recycling / G. Sahay, W. Querbes, C. Alabi [h gp.] // Nature Biotechnology. - 2013. - T. 31. - № 7. - C. 653-658.

149. The Endosomal Escape of Nanoparticles: Toward More Efficient Cellular Delivery / S. A. Smith, L. I. Selby, A. P. R. R. Johnston, G. K. Such // Bioconjugate Chemistry. - 2019. - T. 30. - № 2.

- C. 263-272.

150. Endosomal escape of polymeric gene delivery complexes is not always enhanced by polymers buffering at low pH / A. M. Funhoff, C. F. van Nostrum, G. A. Koning [h gp.] // Biomacromolecules. - 2004. - T. 5. - № 1. - C. 32-39.

151. The Possible "Proton Sponge " Effect of Polyethylenimine (PEI) Does Not Include Change in Lysosomal pH / R. V. Benjaminsen, M. A. Mattebjerg, J. R. Henriksen [h gp.] // Molecular Therapy.

- 2013. - T. 21. - № 1. - C. 149-157.

152. Rehman Z. U. Mechanism of polyplex- and lipoplex-mediated delivery of nucleic acids: real-time visualization of transient membrane destabilization without endosomal lysis / Z. U. Rehman, D. Hoekstra, I. S. Zuhorn // ACS nano. - 2013. - T. 7. - № 5. - C. 3767-3777.

153. Nanoescapology: progress toward understanding the endosomal escape of polymeric nanoparticles / L. I. Selby, C. M. Cortez-Jugo, G. K. Such, A. P. R. Johnston // Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. - 2017. - T. 9. - № 5. - C. 1-23.

154. Bobbin M. L. RNA Interference (RNAi)-Based Therapeutics: Delivering on the Promise? / M. L. Bobbin, J. J. Rossi // Annual Review of Pharmacology and Toxicology. - 2016. - T. 56. - № 1. -C. 103-122.

155. Delivery materials for siRNA therapeutics / R. Kanasty, J. R. Dorkin, A. Vegas, D. Anderson // Nature Materials. - 2013. - T. 12. - № 11. - C. 967-977.

156. Non-viral vectors for gene-based therapy / H. Yin, R. L. Kanasty, A. A. Eltoukhy [h gp.] // Nature Reviews Genetics. - 2014. - T. 15. - № 8. - C. 541-555.

157. Gao Y. Research progress on siRNA delivery with nonviral carriers. / Y. Gao, X. Liu, X.-R. Li // International journal of nanomedicine. - 2011. - T. 6. - C. 1017-1025.

158. Bridging small interfering RNA with giant therapeutic outcomes using nanometric liposomes / Y. Singh, S. Tomar, S. Khan [h gp.] // Journal of Controlled Release. - 2015. - T. 220. -C. 368-387.

159. Leung A. K. K. Lipid Nanoparticles for Short Interfering RNA Delivery / A. K. K. Leung,

Y. Y. C. Tam, P. R. Cullis // Advances in Genetics. - Academic Press Inc., 2014. - T. 88. - C. 71-110.

160. Hope M. J. Enhancing siRNA delivery by employing lipid nanoparticles / M. J. Hope // Therapeutic Delivery. - 2014. - T. 5. - № 6. - C. 663-673.

161. Cationic lipid saturation influences intracellular delivery of encapsulated nucleic acids / J. Heyes, L. Palmer, K. Bremner, I. MacLachlan // Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. - 2005. - T. 107. - № 2. - C. 276-287.

162. Maximizing the potency of siRNA lipid nanoparticles for hepatic gene silencing in vivo / M. Jayaraman, S. M. Ansell, B. L. Mui [h gp.] // Angewandte Chemie (International ed. in English). -2012. - T. 51. - № 34. - C. 8529-8533.

163. Membrane-destabilizing ionizable phospholipids for organ-selective mRNA delivery and CRISPR-Cas gene editing / S. Liu, Q. Cheng, T. Wei [h gp.] // Nature Materials. - 2021. - T. 20. - № 5. - C. 701-710.

164. A combinatorial library of lipid-like materials for delivery of RNAi therapeutics / A. Akinc, A. Zumbuehl, M. Goldberg [h gp.] // Nature biotechnology. - 2008. - T. 26. - № 5. - C. 561-569.

165. Lipopeptide nanoparticles for potent and selective siRNA delivery in rodents and nonhuman primates / Y. Dong, K. T. Love, J. R. Dorkin [h gp.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2014. - T. 111. - № 11. - C. 3955-3960.

166. Lipid-like materials for low-dose, in vivo gene silencing / K. T. Love, K. P. Mahon, C. G. Levins [h gp.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2010. - T. 107. - № 5. - C. 18641869.

167. Biodegradable lipids enabling rapidly eliminated lipid nanoparticles for systemic delivery of RNAi therapeutics / M. A. Maier, M. Jayaraman, S. Matsuda [h gp.] // Molecular Therapy. - 2013. -T. 21. - № 8. - C. 1570-1578.

168. A Novel Amino Lipid Series for mRNA Delivery: Improved Endosomal Escape and Sustained Pharmacology and Safety in Non-human Primates / S. Sabnis, E. S. Kumarasinghe, T. Salerno [h gp.] // Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy. - 2018. - T. 26. -№ 6. - C. 1509-1519.

169. Wan C. Lipid nanoparticle delivery systems for siRNA-based therapeutics / C. Wan, T. M. Allen, P. R. Cullis // Drug Delivery and Translational Research. - 2014. - T. 4. - № 1. - C. 74-83.

170. CRISPR-Cas9 In Vivo Gene Editing for Transthyretin Amyloidosis / J. D. Gillmore, E. Gane, J. Taubel [h gp.] // The New England journal of medicine. - 2021. - T. 385. - № 6. - C. 493-502.

171. Cheng X. The role of helper lipids in lipid nanoparticles (LNPs) designed for oligonucleotide delivery / X. Cheng, R. J. Lee // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2016. - T. 99. - C. 129-137.

172. Shielding of Lipid Nanoparticles for siRNA Delivery: Impact on Physicochemical

Properties, Cytokine Induction, and Efficacy / V. Kumar, J. Qin, Y. Jiang [h gp.] // Molecular Therapy

- Nucleic Acids. - 2014. - T. 3. - № e210. - C. 1-7.

173. Xia Y. Effect of surface properties on liposomal siRNA delivery / Y. Xia, J. Tian, X. Chen // Biomaterials. - 2016. - T. 79. - C. 56-68.

174. The effect of neutral helper lipids on the structure of cationic lipid monolayers / A. P. Dabkowska, D. J. Barlow, A. V. Hughes [h gp.] // Journal of the Royal Society Interface. - 2012. - T. 9.

- № 68. - C. 548-561.

175. Tenchov B. G. Cubic phases in phosphatidylcholine-cholesterol mixtures: Cholesterol as membrane «fusogen» / B. G. Tenchov, R. C. MacDonald, D. P. Siegel // Biophysical Journal. - 2006. -T. 91. - № 7. - C. 2508-2516.

176. Sokolova V. Inorganic Nanoparticles as Carriers of Nucleic Acids into Cells / V. Sokolova, M. Epple // Angewandte Chemie International Edition. - 2008. - T. 47. - № 8. - C. 1382-1395.

177. Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles: Cytotoxicity, Metabolism, and Cellular Behavior in Biomedicine Applications. / H. Wei, Y. Hu, J. Wang [h gp.] // International journal of nanomedicine. - 2021. - T. 16. - C. 6097-6113.

178. Uptake, distribution, clearance, and toxicity of iron oxide nanoparticles with different sizes and coatings / Q. Feng, Y. Liu, J. Huang [h gp.] // Scientific Reports. - 2018. - T. 8. - № 1. - C. 1-13.

179. Repurposing ferumoxytol: Diagnostic and therapeutic applications of an FDA-approved nanoparticle / Y. Huang, J. C. Hsu, H. Koo, D. P. Cormode // Theranostics. - 2022. - T. 12. - № 2. -C. 796-816.

180. Engineering Nanoparticles for Targeted Delivery of Nucleic Acid Therapeutics in Tumor / Y. Xiao, K. Shi, Y. Qu [h gp.] // Molecular Therapy - Methods and Clinical Development. - 2019. -T. 12. - C. 1-18.

181. 15 years on siRNA delivery: Beyond the State-of-the-Art on inorganic nanoparticles for RNAi therapeutics / J. Conde, A. Ambrosone, Y. Hernandez [h gp.] // Nano Today. - 2015. - T. 10. -№ 4. - C. 421-450.

182. Design of iron oxide-based nanoparticles for MRI and magnetic hyperthermia / C. Blanco-Andujar, A. Walter, G. Cotin [h gp.] // Nanomedicine. - 2016. - T. 11. - № 14. - C. 1889-1910.

183. Structural effects on the magnetic hyperthermia properties of iron oxide nanoparticles / E. C. Abenojar, S. Wickramasinghe, J. Bas-Concepcion, A. C. S. Samia // Progress in Natural Science: Materials International. - 2016. - T. 26. - № 5. - C. 440-448.

184. Suriyanto. Physical mechanism and modeling of heat generation and transfer in magnetic fluid hyperthermia through Neelian and Brownian relaxation: a review / Suriyanto, E. Y. K. Ng, S. D. Kumar // BioMedical Engineering OnLine. - 2017. - T. 16. - № 36. - C. 1-22.

185. Chen W. Spatial, Temporal, and Dose Control of Drug Delivery using Noninvasive Magnetic Stimulation. / W. Chen, C.-A. Cheng, J. I. Zink // ACS nano. - 2019. - T. 13. - № 2. - C. 12921308.

186. Externally Triggered Heat and Drug Release from Magnetically Controlled Nanocarriers / E. G. Fuller, H. Sun, R. D. Dhavalikar [h gp.] // ACS Applied Polymer Materials. - 2019. - T. 1. - № 2.

- C. 211-220.

187. Nanoparticle uptake: The phagocyte problem / H. H. Gustafson, D. Holt-Casper, D. W. Grainger, H. Ghandehari // Nano Today. - 2015. - T. 10. - № 4. - C. 487-510.

188. Hegyi G. Hyperthermia versus Oncothermia: Cellular Effects in Complementary Cancer Therapy / G. Hegyi, G. P. Szigeti, A. Szasz // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. - 2013. - T. 2013. - C. 1-12.

189. Nanotechnology in hyperthermia cancer therapy: From fundamental principles to advanced applications / J. Beik, Z. Abed, F. S. Ghoreishi [h gp.] // Journal of Controlled Release. - 2016. - T. 235.

- C. 205-221.

190. Magnetic fluid hyperthermia: Advances, challenges, and opportunity / B. Kozissnik, A. C. Bohorquez, J. Dobson, C. Rinaldi // International Journal of Hyperthermia. - 2013. - T. 29. - № 8. -C. 706-714.

191. Hedayatnasab Z. Review on magnetic nanoparticles for magnetic nanofluid hyperthermia application / Z. Hedayatnasab, F. Abnisa, W. M. A. W. Daud // Materials and Design. - 2017. - T. 123.

- C. 174-196.

192. Heim E. Binding assays with streptavidin-functionalized superparamagnetic nanoparticles and biotinylated analytes using fluxgate magnetorelaxometry / E. Heim, F. Ludwig, M. Schilling // Journal of Magnetism and Magnetic Materials. - 2009. - T. 321. - № 10. - C. 1628-1631.

193. Dieckhoff J. Fluxgate based detection of magnetic nanoparticle dynamics in a rotating magnetic field / J. Dieckhoff, M. Schilling, F. Ludwig // Applied Physics Letters. - 2011. - T. 99. -№ 112501. - C. 1-3.

194. Xu C. New forms of superparamagnetic nanoparticles for biomedical applications / C. Xu, S. Sun // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2013. - T. 65. - № 5. - C. 732-743.

195. Yu M. K. Magnetic nanoparticles and their applications in image-guided drug delivery / M. K. Yu, J. Park, S. Jon // Drug Delivery and Translational Research. - 2012. - T. 2. - № 1. - C. 3-21.

196. Parkinson G. S. Iron oxide surfaces / G. S. Parkinson // Surface Science Reports. - 2016. -T. 71. - № 1. - C. 272-365.

197. Superparamagnetic Colloids: Controlled Synthesis and Niche Applications / U. Jeong, X. Teng, Y. Wang [h gp.] // Advanced Materials. - 2007. - T. 19. - № 1. - C. 33-60.

198. Tuning the Magnetic Properties of Nanoparticles / A. Kolhatkar, A. Jamison, D. Litvinov [h gp.] // International Journal of Molecular Sciences. - 2013. - T. 14. - № 8. - C. 15977-16009.

199. Synthesis, characterization, applications, and challenges of iron oxide nanoparticles / A. Ali, H. Zafar, M. Zia [h gp.] // Nanotechnology, Science and Applications. - 2016. - T. 9. - C. 49-67.

200. Iron oxide nanoparticles: synthesis, functionalization, and applications in diagnosis and treatment of cancer / A. A. Hernández-Hernández, G. Aguirre-Álvarez, R. Cariño-Cortés [h gp.] // Chemical Papers. - 2020. - T. 74. - № 11. - C. 3809-3824.

201. Review of Green Methods of Iron Nanoparticles Synthesis and Applications / H. M. Fahmy, F. M. Mohamed, M. H. Marzouq [h gp.] // BioNanoScience. - 2018. - T. 8. - № 2. - C. 491-503.

202. Fernández-Barahona I. Microwave-Driven Synthesis of Iron-Oxide Nanoparticles for Molecular Imaging / I. Fernández-Barahona, M. Muñoz-Hernando, F. Herranz // Molecules. - 2019. -T. 24. - № 1224. - C. 1-35.

203. Magnetic Iron Oxide Nanoparticles: Synthesis, Characterization and Functionalization for Biomedical Applications in the Central Nervous System / S. Ansari, E. Ficiarà, F. Ruffinatti [h gp.] // Materials. - 2019. - T. 12. - № 465. - C. 1-24.

204. Massart R. Preparation of aqueous magnetic liquids in alkaline and acidic media / R. Massart // IEEE Transactions on Magnetics. - 1981. - T. 17. - № 2. - C. 1247-1248.

205. Highly stable monodisperse PEGylated iron oxide nanoparticle aqueous suspensions: A nontoxic tracer for homogeneous magnetic bioassays / A. Lak, J. Dieckhoff, F. Ludwig [h gp.] // Nanoscale. - 2013. - T. 5. - № 23. - C. 11447-11455.

206. Vidal-Vidal J. Synthesis of monodisperse maghemite nanoparticles by the microemulsion method / J. Vidal-Vidal, J. Rivas, M. A. López-Quintela // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. - 2006. - T. 288. - № 1-3. - C. 44-51.

207. Schmid G. Nanopartilces - From Theory to Application / G. Schmid. - Wiley-VCH, 2010.

- 434 c.

208. Wang Y. Hydrothermal and biomineralization synthesis of a dual-modal nanoprobe for targeted near-infrared persistent luminescence and magnetic resonance imaging / Y. Wang, C.-X. Yang, X.-P. Yan // Nanoscale. - 2017. - T. 9. - № 26. - C. 9049-9055.

209. Synthesis, Characterization, and Applications of Magnetic Nanoparticles Featuring Polyzwitterionic Coatings / P. Biehl, M. von der Lühe, S. Dutz, F. Schacher // Polymers. - 2018. - T. 10.

- № 91. - C. 1-28.

210. Murray C. B. Synthesis and characterization of nearly monodisperse CdE (E = sulfur, selenium, tellurium) semiconductor nanocrystallites / C. B. Murray, D. J. Norris, M. G. Bawendi // Journal of the American Chemical Society. - 1993. - T. 115. - № 19. - C. 8706-8715.

211. Ultra-large-scale syntheses of monodisperse nanocrystals / J. Park, K. An, Y. Hwang [h gp.] // Nature Materials. - 2004. - T. 3. - № 12. - C. 891-895.

212. Standardizing Size- and Shape-Controlled Synthesis of Monodisperse Magnetite (Fe3O4) Nanocrystals by Identifying and Exploiting Effects of Organic Impurities / L. Qiao, Z. Fu, J. Li [h gp.] // ACS Nano. - 2017. - T. 11. - № 6. - C. 6370-6381.

213. Magnetite Fe3O4(111): surface structure by LEED crystallography and energetics / A. Barbieri, W. Weiss, M. A. Van Hove, G. A. Somorjai // Surface Science. - 1994. - T. 302. - № 3. -C. 259-279.

214. Nonclassical nucleation and growth of inorganic nanoparticles / J. Lee, J. Yang, S. G. Kwon, T. Hyeon // Nature Reviews Materials. - 2016. - T. 1. - № 16034. - C. 1-16.

215. Precise Size Control of the Growth of Fe 3 O 4 Nanocubes over a Wide Size Range Using a Rationally Designed One-Pot Synthesis / J. Muro-Cruces, A. G. Roca, A. Lopez-Ortega [h gp.] // ACS Nano. - 2019. - T. 13. - № 7. - C. 7716-7728.

216. Becker R. Kinetische Behandlung der Keimbildung in übersättigten Dämpfen / R. Becker, W. Döring // Annalen der Physik. - 1935. - T. 416. - № 8. - C. 719-752.

217. Polte J. Fundamental growth principles of colloidal metal nanoparticles - a new perspective / J. Polte // CrystEngComm. - 2015. - T. 17. - № 36. - C. 6809-6830.

218. Finney E. E. Nanocluster nucleation and growth kinetic and mechanistic studies: A review emphasizing transition-metal nanoclusters / E. E. Finney, R. G. Finke // Journal of Colloid and Interface Science. - 2008. - T. 317. - № 2. - C. 351-374.

219. Mer V. K. La. Nucleation in Phase Transitions. / V. K. La Mer // Industrial & Engineering Chemistry. - 2002. - T. 44. - № 6. - C. 1270-1277.

220. Enhanced Nanoparticle Size Control by Extending LaMer's Mechanism / R. Rakhshaee, Y. Noorani, E. C. Vreeland [h gp.] // Chemistry of Materials. - 2015. - T. 27. - № 17. - C. 6059-6066.

221. Rakhshaee R. Extending LaMer's mechanism using open system for increasing forced and controlled growth of Au nano particles: Desired decreasing Fe3O4 nano particles size during simultaneous synthesis in optimized conditions / R. Rakhshaee, Y. Noorani // Advanced Powder Technology. - 2017. - T. 28. - № 7. - C. 1797-1814.

222. Rempel J. Y. Insights into the kinetics of semiconductor nanocrystal nucleation and growth / J. Y. Rempel, M. G. Bawendi, K. F. Jensen // Journal of the American Chemical Society. - 2009. -T. 131. - № 12. - C. 4479-4489.

223. Evolution of colloidal nanocrystals: Theory and modeling of their nucleation and growth / J. Van Embden, J. E. Sader, M. Davidson, P. Mulvaney // Journal of Physical Chemistry C. - 2009. -T. 113. - № 37. - C. 16342-16355.

224. Privman V. Mechanisms of Diffusional Nucleation of Nanocrystals and Their Self-Assembly into Uniform Colloids / V. Privman // Annals of the New York Academy of Sciences. - 2009.

- T. 1161. - № 1. - C. 508-525.

225. Karthika S. A Review of Classical and Nonclassical Nucleation Theories / S. Karthika, T. K. Radhakrishnan, P. Kalaichelvi // Crystal Growth and Design. - 2016. - T. 16. - № 11. - C. 66636681.

226. Whitehead C. B. LaMer's 1950 model of particle formation: a review and critical analysis of its classical nucleation and fluctuation theory basis, of competing models and mechanisms for phase-changes and particle formation, and then of its application to silver halide, semiconductor, metal, and metal-oxide nanoparticles / C. B. Whitehead, S. Ozkar, R. G. Finke // Materials Advances. - 2021. -T. 2. - № 1. - C. 186-235.

227. Ikai A. Force in biology / A. Ikai, R. Afrin. - 1st ed. - Amsterdam, The Netherlands; : Elsevier, 2008. - 1-21 c.

228. Grissom C. B. Magnetic Field Effects in Biology: A Survey of Possible Mechanisms with Emphasis on Radical-Pair Recombination / C. B. Grissom // Chemical Reviews. - 1995. - T. 95. - № 1.

- C. 3-24.

229. Golovin Y. I. Magnetoplastic effects in solids / Y. I. Golovin // Physics of the Solid State. -2004. - T. 46. - № 5. - C. 789-824.

230. Milyaev V. A. On the physical nature of magnetobiological effects / V. A. Milyaev, V. N. Binhi // Quantum Electronics. - 2006. - T. 36. - № 8. - C. 691-701.

231. Binhi V. N. The effects of weak magnetic fields on biological systems: Physical aspects / V. N. Binhi, A. V. Savin // Uspekhi Fizicheskikh Nauk. - 2003. - T. 173. - № 3. - C. 265-300.

232. Towards nanomedicines of the future: Remote magneto-mechanical actuation of nanomedicines by alternating magnetic fields / Y. I. Golovin, S. L. Gribanovsky, D. Y. Golovin [h gp.] // Journal of Controlled Release. - 2015. - T. 219. - C. 43-60.

233. Controlled cell death by magnetic hyperthermia: Effects of exposure time, field amplitude, and nanoparticle concentration / L. Asín, M. R. Ibarra, A. Tres, G. F. Goya // Pharmaceutical Research.

- 2012. - T. 29. - № 5. - C. 1319-1327.

234. Cell death induced by the application of alternating magnetic fields to nanoparticle-loaded dendritic cells / I. Marcos-Campos, L. Asín, T. E. Torres [h gp.] // Nanotechnology. - 2011. - T. 22. -№ 205101. - C. 1-13.

235. Induced cell toxicity originates dendritic cell death following magnetic hyperthermia treatment / L. Asín, G. F. Goya, A. Tres, M. R. Ibarra // Cell Death & Disease. - 2013. - T. 4. - № e596.

- C. 1-4.

236. Goya G. F. Cell death induced by AC magnetic fields and magnetic nanoparticles: Current state and perspectives / G. F. Goya, L. Asín, M. R. Ibarra // International Journal of Hyperthermia. -2013. - T. 29. - № 8. - C. 810-818.

237. EGFR-Targeted Magnetic Nanoparticle Heaters Kill Cancer Cells without a Perceptible Temperature Rise / M. Creixell, A. C. Bohórquez, M. Torres-Lugo, C. Rinaldi // ACS Nano. - 2011. -T. 5. - № 9. - C. 7124-7129.

238. Lysosomal membrane permeabilization by targeted magnetic nanoparticles in alternating magnetic fields / M. Domenech, I. Marrero-Berrios, M. Torres-Lugo, C. Rinaldi // ACS Nano. - 2013.

- T. 7. - № 6. - C. 5091-5101.

239. Synthesis of oleic acid functionalized Fe3O4 magnetic nanoparticles and studying their interaction with tumor cells for potential hyperthermia applications / N. V. Jadhav, A. I. Prasad, A. Kumar [h gp.] // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. - 2013. - T. 108. - C. 158-168.

240. Hyperthermia HeLa Cell Treatment with Silica-Coated Manganese Oxide Nanoparticles / A. Villanueva, P. de la Presa, J. M. Alonso [h gp.] // The Journal of Physical Chemistry C. - 2010. -T. 114. - № 5. - C. 1976-1981.

241. Dynamic Magnetic Fields Remote-Control Apoptosis via Nanoparticle Rotation / E. Zhang, M. F. Kircher, M. Koch [h gp.] // ACS Nano. - 2014. - T. 8. - № 4. - C. 3192-3201.

242. Tomasini M. D. Molecular dynamics simulations of rupture in lipid bilayers / M. D. Tomasini, C. Rinaldi, M. S. Tomassone // Experimental Biology and Medicine. - 2010. - T. 235. - № 2.

- C. 181-188.

243. Single-domain magnetic nanoparticles as force generators for the nanomechanical control of biochemical reactions by low-frequency magnetic fields / Y. I. Golovin, N. L. Klyachko, M. Sokolsky-Papkov, A. V. Kabanov // Bulletin of the Russian Academy of Sciences: Physics. - 2013. -T. 77. - № 11. - C. 1350-1359.

244. Gazeau F. Optimizing magnetic nanoparticle design for nanothermotherapy / F. Gazeau, M. Lévy, C. Wilhelm // Nanomedicine. - 2008. - T. 3. - № 6. - C. 831-844.

245. Plank C. Magnetically enhanced nucleic acid delivery. Ten years of magnetofection-Progress and prospects / C. Plank, O. Zelphati, O. Mykhaylyk // Advanced Drug Delivery Reviews. -2011. - T. 63. - № 14-15. - C. 1300-1331.

246. Advances in magnetofection—magnetically guided nucleic acid delivery / U. Schillinger, T. Brill, C. Rudolph [h gp.] // Journal of Magnetism and Magnetic Materials. - 2005. - T. 293. - № 1. -C. 501-508.

247. Streptavidin Paramagnetic Particles Provide a Choice of Three Affinity-Based Capture and Magnetic Concentration Strategies for Retroviral Vectors / C. Hughes, J. Galea-Lauri, F. Farzaneh, D.

Darling // Molecular Therapy. - 2001. - T. 3. - № 4. - C. 623-630.

248. Magnetofection: enhancing and targeting gene delivery by magnetic force in vitro and in vivo / F. Scherer, M. Anton, U. Schillinger [h gp.] // Gene Therapy. - 2002. - T. 9. - № 2. - C. 102109.

249. The magnetofection method: Using magnetic force to enhance gene delivery / C. Plank, U. Schillinger, F. Scherer [h gp.] // Biological Chemistry. - 2003. - T. 384. - № 5. - C. 737-747.

250. Magnetofection—A highly efficient tool for antisense oligonucleotide delivery in vitro and in vivo / F. Krotz, C. de Wit, H.-Y. Sohn [h gp.] // Molecular Therapy. - 2003. - T. 7. - № 5. - C. 700710.

251. Gene delivery to respiratory epithelial cells by magnetofection / S. W. Gersting, U. Schillinger, J. Lausier [h gp.] // The Journal of Gene Medicine. - 2004. - T. 6. - № 8. - C. 913-922.

252. Magnetofection potentiates gene delivery to cultured endothelial cells / F. Krotz, H. Y. Sohn, T. Gloe [h gp.] // Journal of Vascular Research. - 2003. - T. 40. - № 5. - C. 425-434.

253. Enhancement of the efficiency of non-viral gene delivery by application of pulsed magnetic field / S. W. Kamau, P. O. Hassa, B. Steitz [h gp.] // Nucleic acids research. - 2006. - T. 34. - № 5. -C. 1-8.

254. Magnetic nanoparticles as gene delivery agents: enhanced transfection in the presence of oscillating magnet arrays / S. C. McBain, U. Griesenbach, S. Xenariou [h gp.] // Nanotechnology. -2008. - T. 19. - № 405102. - C. 1-5.

255. Multivalent N -acetylgalactosamine-conjugated siRNA localizes in hepatocytes and elicits robust RNAi-mediated gene silencing / J. K. Nair, J. L. S. Willoughby, A. Chan [h gp.] // Journal of the American Chemical Society. - 2014. - T. 136. - № 49. - C. 16958-16961.

256. Easy Synthesis and Magnetic Properties of Iron Oxide Nanoparticles / K. Woo, J. Hong, S. Choi [h gp.] // Chemistry of Materials. - 2004. - T. 16. - № 14. - C. 2814-2818.

257. Precise control over shape and size of iron oxide nanocrystals suitable for assembly into ordered particle arrays / E. Wetterskog, M. Agthe, A. Mayence [h gp.] // Science and Technology of Advanced Materials. - 2014. - T. 15. - № 055010. - C. 1-9.

258. Fatty Acid Salts as Stabilizers in Size- and Shape-Controlled Nanocrystal Synthesis: The Case of Inverse Spinel Iron Oxide / M. V Kovalenko, M. I. Bodnarchuk, R. T. Lechner [h gp.] // Journal of the American Chemical Society. - 2007. - T. 129. - № 20. - C. 6352-6353.

259. Colorimetric ferrozine-based assay for the quantitation of iron in cultured cells / J. Riemer, H. H. Hoepken, H. Czerwinska [h gp.] // Analytical Biochemistry. - 2004. - T. 331. - № 2. - C. 370375.

260. Gold-Pluronic core-shell nanoparticles: synthesis, characterization and biological

evaluation / T. Simon, S. Boca, D. Biro [h gp.] // Journal of Nanoparticle Research. - 2013. - T. 15. -№ 1578. - C. 1-8.

261. Gonzales M. Phase transfer of highly monodisperse iron oxide nanocrystals with Pluronic F127 for biomedical applications / M. Gonzales, K. M. Krishnan // Journal of Magnetism and Magnetic Materials. - 2007. - T. 1. - № 311. - C. 59-62.

262. Potent and persistent in vivo anti-HBV activity of chemically modified siRNAs / D. V Morrissey, J. A. Lockridge, L. Shaw [h gp.] // Nature Biotechnology. - 2005. - T. 23. - № 8. - C. 10021007.

263. Lipid-based nanotherapeutics for siRNA delivery / A. Schroeder, C. G. Levins, C. Cortez [h gp.] // Journal of Internal Medicine. - 2010. - T. 267. - № 1. - C. 9-21.

264. Kesharwani P. A review of nanocarriers for the delivery of small interfering RNA / P. Kesharwani, V. Gajbhiye, N. K. Jain // Biomaterials. - 2012. - T. 33. - № 29. - C. 7138-7150.

265. CHOMZYNSKI P. Single-Step Method of RNA Isolation by Acid Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chloroform Extraction / P. CHOMZYNSKI // Analytical Biochemistry. - 1987. -T. 162. - № 1. - C. 156-159.

266. Livak K. J. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-AACT method / K. J. Livak, T. D. Schmittgen // Methods. - 2001. - T. 25. - № 4. - C. 402-408.

267. Guideline to reference gene selection for quantitative real-time PCR / A. Radonic, S. Thulke, I. M. Mackay [h gp.] // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2004. - T. 313. -№ 4. - C. 856-862.

268. Simple and rapid monitoring of doxorubicin using streptavidin-modified microparticle-based time-resolved fluorescence immunoassay / J. Liang, Z. Zhang, H. Zhao [h gp.] // RSC Advances.

- 2018. - T. 8. - № 28. - C. 15621-15631.

269. Rockenberger J. A New Nonhydrolytic Single-Precursor Approach to Surfactant-Capped Nanocrystals of Transition Metal Oxides / J. Rockenberger, E. C. Scher, A. P. Alivisatos // Journal of the American Chemical Society. - 1999. - T. 121. - № 49. - C. 11595-11596.

270. Synthesis of Highly Crystalline and Monodisperse Maghemite Nanocrystallites without a Size-Selection Process / T. Hyeon, S. S. Lee, J. Park [h gp.] // Journal of the American Chemical Society.

- 2001. - T. 123. - № 51. - C. 12798-12801.

271. Sun S. Size-controlled synthesis of magnetite nanoparticles / S. Sun, H. Zeng // Journal of the American Chemical Society. - 2002. - T. 124. - № 28. - C. 8204-8205.

272. Magnetic nanoparticles: synthesis, functionalization, and applications in bioimaging and magnetic energy storage. / N. A. Frey, S. Peng, K. Cheng, S. Sun // Chemical Society reviews. - 2009.

- T. 38. - № 9. - C. 2532-2542.

273. Seeded Growth Synthesis of Au-Fe3O4 Heterostructured Nanocrystals: Rational Design and Mechanistic Insights / E. Fantechi, A. G. Roca, B. Sepúlveda [h gp.] // Chemistry of Materials. - 2017.

- T. 29. - № 9. - C. 4022-4035.

274. Nanoscale size effect on surface spin canting in iron oxide nanoparticles synthesized by the microemulsion method / M. Darbandi, F. Stromberg, J. Landers [h gp.] // Journal of Physics D: Applied Physics. - 2012. - T. 45. - № 195001. - C. 1-11.

275. Magnetic iron oxide nanoparticles: Reproducible tuning of the size and nanosized-dependent composition, defects, and spin canting / W. Baaziz, B. P. Pichon, S. Fleutot [h gp.] // Journal of Physical Chemistry C. - 2014. - T. 118. - № 7. - C. 3795-3810.

276. Anomalous magnetic properties of nanoparticles arising from defect structures: Topotaxial oxidation of Fe1- xO|Fe 3-5O4 core|shell nanocubes to single-phase particles / E. Wetterskog, C. W. Tai, J. Grins [h gp.] // ACS Nano. - 2013. - T. 7. - № 8. - C. 7132-7144.

277. Synthesis and Characterization of Iron/Iron Oxide Core/Shell Nanocubes / A. Shavel, B. Rodríguez-González, M. Spasova [h gp.] // Advanced Functional Materials. - 2007. - T. 17. - № 18. -C. 3870-3876.

278. Characterization of monodisperse wüstite nanoparticles following partial oxidation / C. J. Chen, R. K. Chiang, H. Y. Lai, C. R. Lin // Journal of Physical Chemistry C. - 2010. - T. 114. - № 10.

- C. 4258-4263.

279. Synthesis of size-tuneable P-FeOOH nanoellipsoids and a study of their morphological and compositional changes by reduction / G. Kasparis, A. S. Erdocio, J. M. Tuffnell, N. T. K. Thanh // CrystEngComm. - 2019. - T. 21. - № 8. - C. 1293-1301.

280. Correlation between particle size/domain structure and magnetic properties of highly crystalline Fe3O4 nanoparticles / Q. Li, C. W. Kartikowati, S. Horie [h gp.] // Scientific Reports. - 2017.

- T. 7. - № 1. - C. 1-7.

281. Magnetite-maghemite nanoparticles in the 5-15 nm range: Correlating the core-shell composition and the surface structure to the magnetic properties. A total scattering study. / R. Frison, G. Cernuto, A. Cervellino [h gp.] // Chemistry of Materials. - 2013. - T. 25. - № 23. - C. 4820-4827.

282. Size-dependent properties of magnetic iron oxidenanocrystals / A. Demortiere, P. Panissod, B. P. Pichon [h gp.] // Nanoscale. - 2011. - T. 3. - № 1. - C. 225-232.

283. Guardia P. Tuning the size, the shape, and the magnetic properties of iron oxide nanoparticles / P. Guardia, A. Labarta, X. Batlle // Journal of Physical Chemistry C. - 2011. - T. 115. -№ 2. - C. 390-396.

284. Shavel A. Shape control of iron oxide nanoparticles / A. Shavel, L. M. Liz-Marzán // Physical Chemistry Chemical Physics. - 2009. - T. 11. - C. 3762-3767.

285. Nanoscale magnetism control via surface and exchange anisotropy for optimized ferrimagnetic hysteresis / S. H. Noh, W. Na, J. T. Jang [h gp.] // Nano Letters. - 2012. - T. 12. - № 7.

- C. 3716-3721.

286. High-performance iron oxide nanoparticles for magnetic particle imaging-guided hyperthermia (hMPI) / L. M. Bauer, S. F. Situ, M. A. Griswold, A. C. S. Samia // Nanoscale. - 2016. -T. 8. - № 24. - C. 12162-12169.

287. Influence of iron oleate complex structure on iron oxide nanoparticle formation / L. M. Bronstein, X. Huang, J. Retrum [h gp.] // Chemistry of Materials. - 2007. - T. 19. - № 15. - C. 36243632.

288. Gas-bubble effects on the formation of colloidal iron oxide nanocrystals / J. Lynch, J. Zhuang, T. Wang [h gp.] // Journal of the American Chemical Society. - 2011. - T. 133. - № 32. -C. 12664-12674.

289. Enhanced Nanoparticle Size Control by Extending LaMer's Mechanism / E. C. Vreeland, J. Watt, G. B. Schober [h gp.] // Chemistry of Materials. - 2015. - T. 27. - № 17. - C. 6059-6066.

290. Kinetics of monodisperse iron oxide nanocrystal formation by «heating-up» process / G. K. Soon, Y. Piao, J. Park [h gp.] // Journal of the American Chemical Society. - 2007. - T. 129. - № 41. -C. 12571-12584.

291. A novel synthetic route for high-index faceted iron oxide concave nanocubes with high T2 relaxivity for in vivo MRI applications / S. F. Situ-Loewenstein, S. Wickramasinghe, E. C. Abenojar [h gp.] // Journal of Materials Science: Materials in Medicine. - 2018. - T. 29. - № 58. - C. 1-10.

292. Reduction of maghemite to magnetite over 304SS, in the presence of silver nanoparticles / I. Martínez-Mera, C. Gutiérrez-Wing, C. Argánis-Juárez, A. R. Vilchis-Nestor // Surface and Coatings Technology. - 2017. - T. 324. - C. 338-344.

293. Jung H. Photochemical reduction of nanocrystalline maghemite to magnetite / H. Jung, A. M. Schimpf // Nanoscale. - 2021. - T. 13. - № 41. - C. 17465-17472.

294. Gupta A. K. Synthesis and surface engineering of iron oxide nanoparticles for biomedical applications. / A. K. Gupta, M. Gupta // Biomaterials. - 2005. - T. 26. - № 18. - C. 3995-4021.

295. Origin of the long-range attraction between surfactant-coated surfaces / E. E. Meyer, Q. Lin, T. Hassenkam [h gp.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2005. - T. 102. - № 19. -C. 6839-6842.

296. Gonzales M. Synthesis of magnetoliposomes with monodisperse iron oxide nanocrystal cores for hyperthermia / M. Gonzales, K. M. Krishnan // Journal of Magnetism and Magnetic Materials.

- 2005. - T. 293. - № 1. - C. 265-270.

297. A novel magnetic crystal-lipid nanostructure for magnetically guided in vivo gene delivery

/ Y. Namiki, T. Namiki, H. Yoshida [h gp.] // Nature Nanotechnology. - 2009. - T. 4. - № 9. - C. 598606.

298. Liu Y. Designer Lipids Advance Systemic siRNA Delivery / Y. Liu, L. Huang // Molecular Therapy. - 2010. - T. 18. - № 4. - C. 669-670.

299. Huh-7 or HepG2 cells: which is the better model for studying human apolipoprotein-B100 assembly and secretion? / S. J. R. Meex, U. Andreo, J. D. Sparks, E. A. Fisher // Journal of Lipid Research. - 2011. - T. 52. - № 1. - C. 152-158.

300. In vitro cellular models of human hepatic fatty acid metabolism: differences between Huh7 and HepG2 cell lines in human and fetal bovine culturing serum. / P. J. Gunn, C. J. Green, C. Pramfalk, L. Hodson // Physiological reports. - 2017. - T. 5. - № 24. - C. 1-12.

301. Gupta A. K. Cytotoxicity suppression and cellular uptake enhancement of surface modified magnetic nanoparticles / A. K. Gupta, M. Gupta // Biomaterials. - 2005. - T. 26. - № 13. - C. 15651573.

302. Gupta A. K. Lactoferrin and ceruloplasmin derivatized superparamagnetic iron oxide nanoparticles for targeting cell surface receptors / A. K. Gupta, A. S. G. Curtis // Biomaterials. - 2004.

- T. 25. - № 15. - C. 3029-3040.

303. High intracellular iron oxide nanoparticle concentrations affect cellular cytoskeleton and focal adhesion kinase-mediated signaling / S. J. H. Soenen, N. Nuytten, S. F. De Meyer [h gp.] // Small.

- 2010. - T. 6. - № 7. - C. 832-842.

304. Schubert M. A. Characterisation of surface-modified solid lipid nanoparticles (SLN): Influence of lecithin and nonionic emulsifier / M. A. Schubert, C. C. Muller-Goymann // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. - 2005. - T. 61. - № 1-2. - C. 77-86.

305. Shape evolution of «multibranched» Mn-Zn ferrite nanostructures with high performance: A transformation of nanocrystals into nanoclusters / J. Xie, C. Yan, Y. Zhang, N. Gu // Chemistry of Materials. - 2013. - T. 25. - № 18. - C. 3702-3709.

306. Lalatonne Y. Van der Waals versus dipolar forces controlling mesoscopic organizations of magnetic nanocrystals / Y. Lalatonne, J. Richardi, M. P. Pileni // Nature Materials 2004 3:2. - 2004. -T. 3. - № 2. - C. 121-125.

307. Octapod iron oxide nanoparticles as high-performance T 2 contrast agents for magnetic resonance imaging / Z. Zhao, Z. Zhou, J. Bao [h gp.] // Nature Communications. - 2013. - T. 4. -№ 2266. - C. 1-7.

308. Quantification and biodistribution of iron oxide nanoparticles in the primary clearance organs of mice using T i contrast for heating / J. Zhang, H. L. Ring, K. R. Hurley [h gp.] // Magnetic Resonance in Medicine. - 2017. - T. 78. - № 2. - C. 702-712.

309. Apolipoprotein B knockdown by AAV-delivered shRNA lowers plasma cholesterol in mice / A. Koornneef, P. MacZuga, R. Van Logtenstein [h gp.] // Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy. - 2011. - T. 19. - № 4. - C. 731-740.

310. An in vivo evaluation of amphiphilic, biodegradable peptide copolymers as siRNA delivery agents / S. E. Barrett, M. T. Abrams, R. Burke [h gp.] // International journal of pharmaceutics. - 2014.

- T. 466. - № 1-2. - C. 58-67.

311. Perez E. A. Doxorubicin and paclitaxel in the treatment of advanced breast cancer: efficacy and cardiac considerations / E. A. Perez // Cancer investigation. - 2001. - T. 19. - № 2. - C. 155-164.

312. A review on the efficacy and toxicity of different doxorubicin nanoparticles for targeted therapy in metastatic breast cancer / A. Shafei, W. El-Bakly, A. Sobhy [h gp.] // Biomedicine & pharmacotherapy = Biomedecine & pharmacotherapie. - 2017. - T. 95. - C. 1209-1218.

313. Use of liposomal doxorubicin for adjuvant chemotherapy of breast cancer in clinical practice / M. Zhao, X. feng Ding, J. yu Shen [h gp.] // Journal of Zhejiang University. Science. B. - 2017. -T. 18. - № 1. - C. 15-26.

314. Magnetic resonance imaging of multifunctional pluronic stabilized iron-oxide nanoparticles in tumor-bearing mice / T. K. Jain, S. P. Foy, B. Erokwu [h gp.] // Biomaterials. - 2009. - T. 30. - № 35.

- C. 6748-6756.

315. Doxorubicin loaded magneto-niosomes for targeted drug delivery / L. Tavano, M. Vivacqua, V. Carito [h gp.] // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. - 2013. - T. 102. - C. 803-807.

316. Construction of EGFP Expressing HepG2 Cell Line Using Electroporation / M. Cemazar, I. Hreljac, G. Sersa, M. Filipic. - Springer, Berlin, Heidelberg, 2009. - 128-131 c.