Разработка новой лекарственной формы диминазена и ее комплексная оценка при бабезиозах крупного рогатого скота тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.19, кандидат ветеринарных наук Улизко, Максим Алексеевич

• Улизко, Максим Алексеевич
• кандидат ветеринарных наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Улизко, Максим Алексеевич

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения о бабезиях и бабезиозах

1.2. Бабезиозы крупного рогатого скота

1.2.1. Определение заболевания, морфология и биология возбудителей

1.2.2. Эпизоотологические данные и экономический ущерб при бабезиозах

1.2.3. Клиническая картина и патоморфология бабезиоза

1.2.4. Диагностика, терапия и профилактика бабезиозов

1.3. Фармакотоксикологические свойства препаратов на основе диминазена

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследований

2.2. Результаты исследований и их обсуждение

2.2.1. Состав и физико-химические свойства препарата «Неозидин - М»

2.2.2. Изучение токсикологических характеристик новой лекарственной формы диминазена

2.2.3. Изучение фармакологических параметров препарата «Неозидин-М»

2.2.4. Влияние препарата «Неозидин-М» на организм крупного рогатого скота

2.2.5. Комплексная оценка применения препарата «Неозидин-М» при бабезиозах крупного рогатого скота 70 2.2.5.1. Предварительный опыт по оценке эффективности новой лекарственной формы диминазена при бабезиозе крупного рогатого скота

2.2.5.2. Изучение эффективности новой лекарственной формы диминазена против других бабезий у крупного рогатого скота

2.2.5.2.1. Эффективность препарата против B.divergens

2.2.5.2.2. Эффективность препарата против B.bovis

2.2.5.3. Комиссионная оценка эффективности Неозидина-М при бабезиозе крупного рогатого скота

2.2.5.4. Установление терапевтической дозы препарата при бабезиозах крупного рогатого скота

2.2.5.4.1. Титрация доз мицеллярного диминазена при бабезиозе крупного рогатого скота, вызванном B.bigemina

2.2.5.4.2. Титрация доз мицеллярного диминазена при бабезиозе крупного рогатого скота, вызванном В. diver gens

2.2.5.5. Результаты широких испытаний антипротозойной эффективности 5% варианта препарата «Неозидин-М»

2.3. Экономическая эффективность применения препарата «Неозидин-М» при бабезиозах крупного рогатого скота

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка новой лекарственной формы диминазена и ее комплексная оценка при бабезиозах крупного рогатого скота»

Актуальность темы. На сегодняшний день для сельского хозяйства России нет более важной задачи, чем обеспечение растущих потребностей населения страны качественной животноводческой продукцией собственного производства. Решение этой задачи тормозит целый ряд факторов, в том числе и различные инвазионные заболевания сельскохозяйственных животных. Одними из наиболее опасных инвазий являются бабезиозы (Крылов, 1994; 1996).

Бабезиозы - облигатно-трансмиссивные заболевания животных, вызываемые беспигментными эндоглобулярными паразитами крови. Данным инвазиям подвержены многие виды домашних и диких животных, особенно часто крупный и мелкий рогатый скот. Заболевания характеризуются лихорадкой, анемией, желтушностью слизистых оболочек, нарушением функций сердечнососудистой и пищеварительной систем, гемоглобинурией и резким снижением продуктивности. Кроме того, болезнь протекает в виде сезонных вспышек, связанных с развитием генераций специфических клещей-переносчиков (Си-доркин, 2001; Гафуров, 2002). Подробно информация о механизмах передачи бабезий иксодовыми клещами освящена Ю.С. Балашовым (1998).

Бабезиозы наносят значительный экономический ущерб молочному и мясному скотоводству, слагающийся из резкого снижения молочной продуктивности, истощения, а нередко и гибели животных. Причем, заболеванию характерен довольно высокий процент летальности. Избежать массовой гибели зараженных животных можно только при своевременном и грамотном лечении.

Для лечения бабезиозов крупного рогатого скота в России в 50-60-е годы было испытано большое количество лекарственных средств: красители (трипофлавин, трипанблау и др.), тиарген, гравилат и даже перманганат калия. Однако все эти препараты не проявляли должного эффекта, что требовало постоянного изыскания новых средств и методов борьбы с кровепаразитами (Жигалев, 1953; Шмулевич, 1953; Акрамовский, 1954; Вечеркин, 1959; Хаши-мов, 1960).

С середины 70-х годов для борьбы с бабезиозами широко используются препараты на основе диамидина и его производных: диминазена диацетурат, пентамидина изотионат, фенамидина изотионат, имидокарба дипропионат (Penzhorn, 1995). Все диамидины обладают мощной бактерицидной активностью - дибромпропамид и гексамидин изотионаты используют как антисептики (Britich Patent, 2000). Наиболее широкое распространение в России получили препараты на основе диминазена ацетурата - беренил, верибен, азидин, золг, неозидин и другие (Тимофеев и др., 1975; Каримов, Гафуров, Тимофеев, 1986; Макаревич, Воробьев, Баранова, 1989; Макаревич, 1994; Шмунк, Нур-маматов, Саттаров, 1998; Сидоркин, 2001; 2002).

Однако, несмотря на то, что в настоящее время у современной ветеринарной медицины имеется на вооружении достаточно богатый ассортимент препаратов для борьбы с кровепаразитарными заболеваниями, они имеют существенный недостаток - все они порошкообразной формы, требующие разведения непосредственно перед применением. Растворы этих препаратов не стабильны и должны быть использованы в течение 2-3 первых суток после приготовления. Эти недостатки делают все порошкообразные препараты не всегда удобными для практики и, особенно, при массовых обработках животных. Кроме того, при их применении необходимо всегда иметь под руками стерильный физиологический раствор или дистиллированную воду.

Поэтому, особо актуальным, на наш, взгляд стало создание новой стерильной инъекционной лекарственной формы, обладающей высокой эффективностью против бабезий и одновременно стабильностью в течение длительного времени. Эта проблема и побудила нас заняться данной работой.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является разработка новой эффективной и экологически безопасной лекарственной формы на основе диминазена для борьбы с бабезиозами животных.

В связи с этим, перед нами были поставлены следующие задачи:

- разработать и стандартизировать новую препаративную форму на основе диминазена с целью увеличения эффективности за счет пролонгации и увеличения биодоступности, а также повышения стабильности готового инъекционного раствора; всесторонне изучить антипаразитарную активность данного лекарственного средства при различных бабезиозах крупного рогатого скота. определить фармако-токсикологические параметры предлагаемого нами лекарственного средства; изучить влияние новой препаративной формы на организм крупного рогатого скота.

Научная новизна. Впервые для ветеринарной практики предложена новая инъекционная лекарственная форма на основе диминазена и определены ее фармако-токсикологические характеристики. Изучено влияние новой препаративной формы на организм крупного рогатого скота.

Впервые проведены исследования по проникновению активнодейст-вующего вещества препарата (диминазена) в клетки крови, показавшие по сравнению с водными растворами более высокую степень накопления диминазена в эритроцитах, доказывающую направленное действие препарата.

Всесторонне изучена антипаразитарная активность новой лекарственной формы при различных бабезиозах крупного рогатого. Проведены эксперименты по титрации лечебной дозы.

Практическая значимость работы. Сконструирован новый инъекционный препарат, обладающий высокой антипаразитарной эффективностью при кровепаразитарных заболеваниях крупного рогатого скота.

Отработаны оптимальные дозы и схемы применения новой лекарственной формы диминазена при бабезиозах крупного рогатого скота.

Установлены сроки возможного убоя животных на мясо и использования молока после применения новой лекарственной формы диминазена.

Разработан и представлен в ВГНКИ ветпрепаратов Департамента ветеринарии Минсельхоза России для согласования и утверждения комплект нормативной документации: Технические Условия на опытную партию и Временное наставление по применению препарата «Неозидин-М» в ветеринарии.

Применение и использование материалов диссертации подтверждено соответствующими актами.

Апробация работы. Основные результаты и положения диссертационной работы представлены и одобрены на следующих научно-практических конференциях:

- Международной научно-практической конференции: «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Саратов, 2002);

- Научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов СГАУ им. Н.И.Вавилова по итогам научно-исследовательской и методической работы за 2002 год (Саратов, 2003);

- Научной конференции: «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», посвященной 125 -летию со дня рождения К.И. Скрябина (Москва, ВИГИС, 2003);

- Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения С.Н. Никольского: «Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии» (Ставрополь, 2003);

- Международной научной конференции: «Современные проблемы иммуногенеза, теории и практики борьбы с паразитарными и инфекционными болезнями с/х животных», посвященной 90-летию со дня рождения Х.М. Аюпова (Москва-Уфа, 2004);

- Научной конференции: «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, ВИГИС, 2004);

- Научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов СГАУ им. Н.И.Вавилова по итогам научно-исследовательской и методической работы за 2003 год (Саратов, 2004).

Основные положения, выносимые на защиту:

- теоретическое обоснование создания новой лекарственной формы про-тивопаразитарного средства на основе диминазена для борьбы с бабезиозами крупного рогатого скота;

- проникновение активнодействующего вещества в организм животного и накопление его в клетках крови;

- влияние нового лекарственного средства на организм крупного рогатого скота;

- противопаразитарная эффективность препарата «Неозидин-М» при ба-безиозах крупного рогатого скота и его фармако-токсикологические характеристики.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 123 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 30 таблицами и 5 рисунками и состоит из: обзора литературы, материалов и методов работы, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложений. Список использованной литературы состоит из 165 источников, в том числе 60 отечественных и 105 иностранных авторов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Улизко, Максим Алексеевич

выводы

1. Впервые сконструированы два варианта новой воднодисперсной (ми-целлярной) лекарственной формы на основе диминазена (Неозидин-М) для борьбы с кровепаразитарными заболеваниями крупного рогатого скота по своим токсикологическим характеристикам относящиеся к веществам малоопасным для теплокровных животных. Установлено, что для 7% формы LD50 составила - 141,5±7,4 мг/кг, а для 5% формы с феназоном - 152+8,5 мг/кг веса мыши. Отработана технология промышленного производства препарата.

2. Показано, что новая лекарственная форма диминазена не влияет отрицательно на клинико-гематологические и биохимические показатели организма крупного рогатого скота и не проявляет иммунотоксические, аллергенные и сенсибилизирующие свойства.

3. Доказано, что терапевтическая концентрация диминазена в сыворотке крови телят сохраняется в течение 6 часов после применения Неозидина-М, что в 1,5 раза дольше, чем у водных растворов. Остаточные количества диминазена полностью выводятся из организма крупного рогатого скота через 24 и 21 дня соответственно для 7 и 5%-ной форм препарата.

4. Установлено большее сродство новой мицеллярной лекарственной формы диминазена к клеткам крови. Проникновение действующего вещества препарата в эритроциты и лейкоциты по сравнению с традиционно применяемыми лекарственными формами диминазена увеличивается в 1,9-2,0 раза.

5. Однократное внутримышечное применение 7% варианта новой лекарственной формы диминазена в дозе 3,5 мг/кг массы тела по а.д.в. приводит к полному выздоровлению 93,3-100% животных при бабезиозах крупного рогатого скота, что на 7,3-12,1% больше, чем у водных растворов диминазена. При одновременном применении неозидина-М с селеносодержащими препаратами эффективность обработки увеличивается. Клиническое состояние животных улучшается через 5-11 часов после обработки, а показатели крови достигают уровня физиологической нормы к 10-15 дням с начала лечения.

6. С помощью титрации доз препарата «Неозидин М» определена терапевтическая доза в 2,5 мг/кг массы тела животного по диминазену. На основании этого и с целью снижения себестоимости сконструирована 5% форма препарата для лечения крупного рогатого скота при бабезиозах.

7. В результате широких испытаний, проведенных в разных регионах России на 754 особях крупного рогатого скота, установлена 97,3-100% эффективность однократного применения неозидина-М при всех бабезиозах. Статистически достоверных различий в активности препарата против В.bigemina, B.bovis и В. diver gens в зависимости от половозрастной группы или породы не зарегистрировано.

8. Установлено, что экономическая эффективность применения 5%-ного варианта препарата «Неозидин-М» при различных бабезиозах крупного рогатого скота составляет в среднем 51,27 рубля на 1 рубль затрат, в 1,3-4,4 раза превышающую таковую у аналогичных отечественных и импортных препаратов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основе результатов исследований разработан комплект нормативной документации на препарат «Неозидин М»: Технические Условия и Временное наставление по применению в ветеринарии, которые поданы на рассмотрение и утверждение ФГУ ВГНКИ Департамента ветеринарии Минсельхоза России.

В качестве терапевтической дозы препарата «Неозидин-М» при пироплазмозе, бабезиозе и франсаиеллезе крупного рогатого скота рекомендована доза 2,5 мг/кг массы тела по диминазену (против 3,5 мг/кг у аналогов).

Материалы диссертационной работы могут быть использованы в учебном процессе ветеринарных Вузов по дисциплине "Паразитология", а комплексная оценка применения разработанного антипаразитарного лекарственного средства может быть использована в качестве схемы при разработке, изучении и внедрении в ветеринарную практику новых ветеринарных препаратов противопаразитарного действия.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы в различных регионах России ввиду массового рассеивания клещей-переносчиков резко ухудшилась эпизоотическая ситуация по кровепаразитарным заболеваниям. В связи с этим мы задались целью разработки нового лекарственного средства для борьбы с данной группой паразитов.

Ретроспективный анализ литературы и практические наблюдения показали, что препараты на основе диминазена и других ароматических диамиди-нов (верибен, беренил, неозидин, имизол и другие) обладают высоким профилактическим и лечебным эффектом при различных кровепаразитарных заболеваниях разных видов сельскохозяйственных и домашних животных, и заслуживают дальнейшего внедрения в широкую паразитологическую практику (Евплов, Тига, Мироненко, 1960; Лаврентьев, 1960; Хашимов, 1960; Fairclough, 1963; Fitzgerald, 1963; Тимофеев с соавт., 1975; Milner, 1997; Сидоркин, 2001; 2002).

Однако, несмотря на то, что в настоящее время у современной ветеринарной медицины имеется на вооружении достаточно богатый ассортимент препаратов для борьбы с кровепаразитарными заболеваниями, они имеют существенный недостаток - все они порошкообразные формы, требующие разведения непосредственно перед применением. Растворы этих препаратов не стабильны и должны быть использованы в течение 2-3 первых суток после приготовления. Эти недостатки делают все порошкообразные препараты не всегда удобными для практики и, особенно, при массовых обработках животных. Кроме того, при их применении необходимо всегда иметь под руками стерильный физиологический раствор или дистиллированную воду.

Поэтому очень остро встал вопрос о создании новой стерильной инъекционной лекарственной формы на основе диминазена, обладающей высокой эффективностью против бабезий при снижении терапевтической дозы, пролонгированостью и одновременно стабильностью в течение длительного времени, которая по стоимости соответствовала бы финансовым возможностям ветеринарной службы, и было доступно как можно более широкому кругу потребителей.

Для любого фармакологического вещества перед определением его активности обязательно изучение его токсикологических и фармакодинамиче-ских свойств. Впервые схема изучения данных свойств для противопаразитар-ных средств доложена в 1973 году Т.П.Веселовой и в дальнейшем получила развитие в работах других авторов (Демидов, 1982; Архипов, 1995). Она слагается из нескольких этапов: параметров острой и субхронической токсичности, эмбриотоксических и тератогенных свойств, фармакокинетики и определения остаточных количеств в органах и тканях. Без знания этих параметров и степени влияния вещества на организм животного невозможна дальнейшая работа по изучению его терапевтической эффективности.

Нами в процессе работы были сконструированы и испытаны две новые лекарственные формы на основе диминазена под общим названием «Неозидин М». Препарат «Неозидин М» - стерильный воднодисперстный (мицеллярный) раствор, содержащий в своем составе 7% диминазена, солюбилизаторы, поверхностно активные вещества и воду дистиллированную. Второй вариант препарата «Неозидин М» отличается от предыдущей версии тем, что в качестве действующих веществ использованы 5% диминазена и 7% феназона.

Предлагаемый нами препарат "Неозидин-М" представляет собой стерильный инъекционный воднодисперсный (мицеллярный) раствор светло-коричневого цвета.

Изучение токсикологических характеристик начали с изучения острой токсичности. LD5o для препарата «Неозидин-М» при его внутрибрюшинном введении белым мышам и ее стандартная ошибка составила для 7% формы препарата - 141,5±7,4 мг/кг и для 5% формы препарата - 152±8,5 мг/кг по а.д.в., что соответственно составило 2,83±0,11 и 3,04±0,40 мл по препарату.

Это позволяет отнести данное лекарственное средство к IV классу опасности (малоопасные вещества согласно ГОСТ 121.007-76).

Для установления порога вредного воздействия на организм животных химических факторов окружающей среды весьма информативны иммунологические тесты (Даугалиева, Филлипов, 1991; Мясцова, Якубовский, 1993). Среди них при изучении опасности антипаразитарных препаратов важное место занимают показатели естественной резистентности и иммунного статуса.

В основе иммунных реакций на введение различных химических веществ, в том числе и паразицидов, лежат те же реакции, что и при инфекционных и инвазионных заболеваниях: неспецифические - интерферон, пропердин и др.; специфические, обусловленные участием в иммунных реакциях лимфо-идных органов (лимфатические узлы, селезенка, лимфоидные образования, тимус и т.д.), где происходят сложные процессы дифференцировки и пролиферации клеток ретикулоэндотелиальной системы.

Однако, в последние годы (1990-1995) разработано новое положение по изучению иммуннотоксичности и аллергенности препаратов, которое включает обязательное тестирование всех новых фармакологических веществ в два этапа: по иммуннотоксичности и аллергизирующим свойствам. Нами проведено изучение препарата «Неозидин М», согласно этого положения.

Оценку Т - клеточного звена иммунитета проводили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и аутологичным ро-зеткообразующим клеткам (ауто-РОК). В результате опытов установлено, что предлагаемое нами лекарственное средство не оказывает выраженного влияния на Т - клеточное звено иммуннитета.

При оценке В - клеточного звена иммунной системы путем изучения кинетики В-лимфоцитов и титров гемагглютининов в сыворотке крови мышей нами установлено незначительное угнетение трансформации В-лимфоцитов в селезенке и снижение иммунного ответа в течение 5-ти дней после введения. Разница между титрами отдельных иммуноглобулинов и титрами общих антител у подопытных и контрольных животных была статистически недостоверной.

Рассматривая титры общих антител и иммуноглобулинов М и G, следует отметить развитие защитных реакций, комплексно регулируемых на уровне всей иммунной системы организма. В их динамике самыми ранними являются неспецифические функции, предшествующие появлению естественных киллеров, прямой фагоцитарной реакции и лизису комплексно-зависимых мембранных структур (K3J1) по альтернативному пути. Динамика появления антитело-опосредованных реакций обусловлена количеством антител, необходимых для их существования. Во всяком случае, учет влияния Неозидина-М на М и G-иммуноглобулины позволяет судить об иммунотропном действии препарата.

По показателям PCAJI (реакции специфической агломерации лейкоцитов) и PCJIJI (реакции специфического лизиса лейкоцитов) разработанную нами лекарственную форму диминазена можно отнести к препаратам, обладающим слабовыраженными сенсибилизирующими свойствами. Аллергическую реакцию на чужеродное тело, в том числе и химическое, следует рассматривать как механизм патофизиологического повреждающего характера. В своей основе, аллергия в тривиальном представлении - это иммунологическая реакция гиперчувствительности, что в наших опытах также имело место, хотя и в слабовыраженной форме.

Таким образом, препарат «Неозидин-М» является безопасным для теплокровных животных препаратом.

Для оценки действия новой мицеллярной лекарственной формы на организм животных мы использовали не только зависимость доза-время-эффект (ответ) по отдельным показателям, но и более обобщенную зависимость доза-время-статус организма по совокупности изменений каждой особи. При этом мы считаем, что зависимость доза-статус организма выступает как шкала пороговых доз, ориентированных на последовательный ряд качественных реакций целостного организма. Другими словами, ключевые системы гомеостаза организма оценивали на разных уровнях его структурно-функциональной организации с использованием физиологических, морфологических и иммунологических показателей. С помощью такого подхода нами показано отсутствие вредного влияния препарата на общеклинические, гематологические и биохимические показатели организма животных.

В результате исследований установлено, что внутримышечное введение неозидина-М в виде 7%-ного раствора в дозе 3,5 мг/кг дойным коровам в зимне-весенний период не сопровождалось развитием каких либо токсических явлений, несмотря на несбалансированность в фосфорно-кальциевом обмене и недостаточность каротина в сыворотке крови.

Показатели активности щелочной фосфатазы у телят, которым применяли препарат, начиная с 4-х часов после введения, возрастают и достигают максимальных значений через 24 часа после введения. К 32 часам активность фермента постепенно снижается до уровня контрольных животных. У животных, которым вводили физиологический раствор, показатели активности фермента остались без изменений. Это говорит о том, что диминазен оказывает незначительное обратимое влияние на организм продуктивных животных.

Что касается активности такого клеточного фермента, как глицерофос-фотдегидрогеназа, отмечается плавное повышение его активности вплоть до 32 часов после введения, сопоставимое с повышением таковой у контрольных животных.

Таким образом, внутримышечное введение новой лекарственной формы на основе диминазена (препарат "Неозидин-М") в терапевтических дозах не оказывает каких-либо побочных явлений и является безвредным для организма крупного рогатого скота.

Без знания процессов распределения и метаболизма любого химического вещества невозможна дальнейшая работа по установлению дозы и кратности применения лекарственного средства.

При определении фармакокинетических параметров Неозидина-М установили, что диминазен определяется в сыворотке крови телят уже через 30 минут после введения и достигает максимальной концентрации через 4 часа после введения (4,5 мкг/мл), после чего постепенно снижается еще в течение 4 часов после введения (до 0,5 мкг/мл). На терапевтическом уровне концентрация диминазена поддерживается в течение 6 часов после введения, что в 2 раза дольше, чем у водного раствора диминазена. Через 24 часа после введения диминазен в сыворотке крови уже не определяется.

В настоящее время для каждого препарата, наряду с данными по фарма-кокинетике необходима информация об остаточных количествах его в организме, так как наряду с, безусловно, полезными свойствами химиотерапевти-ческих средств, существуют и отрицательные. Накопление препаратов в продуктах животноводства нежелательно из-за их отрицательного действия на человека, поэтому задачей наших исследований явилось определение остаточных количеств диминазена в биологических жидкостях, тканях и органах крупного рогатого скота.

Рассчитывая остаточные количества а.д.в. препарата «Неозидин-М» в органах и тканях животных нельзя не учитывать и медицинских показателей по этому вопросу. В частности, в медицинской практике существуют несколько понятий важности остатков препаратов в продуктах животноводства:

1. установление предельно допустимой дозы для человека, в основу которой закладываются безвредные дозы для животных с учетом коэффициента безопасности;

2. учет распределения остатков препарата в продукте и нормы потребления человеком этого продукта в день (Тимофеев с соавт., 1975).

В противоположность этому в ветеринарии принят нулевой уровень ЦДК любого препарата в органах и тканях животных. Хотя в ряде случаев остатки препаратов не представляют никакой опасности для человека, т.к. образующиеся при их биотрансформации продукты обмена содержатся в организме человека, например, глюкоза, аминокислоты и жирные кислоты. Вместе с тем, при биотрансформации образуются как атоксические, так и токсические продукты обмена.

Наши исследования по препарату «Неозидин-М», проведенные на крупном рогатом скоте свидетельствуют о наличии в организме животных диминазена, который выводятся из организма крупного рогатого скота в следующие сроки: 7%-ная форма - в течение 24 суток, а 5%-ная с феназоном - 21 суток после применения препарата.

Касаясь профилактики метаболических изменений, необходимо отметить, что наиболее эффективным механизмом обеспечения гомеостаза организма после попадания в его внутренние среды паразицидов, должен быть четкий учет используемых концентраций, обеспечивающих нормальное функционирование структурных и биохимических систем, т.е. как уже указывалось выше, анализ зависимости доза-время-статус живого организма.

Несомненным достоинством нашей работы является подтверждение высокой химиотерапевтической эффективности диминазена на примере изучения антипаразитарных свойств нового мицеллярного инъекционного препарата «Неозидин М».

У крупного рогатого скота паразитируют 3 возбудителя бабезиоза (B.bigemina, B.bovis и В. divergens. Причем, первые два заболевания распространены на Северном Кавказе и Дальнем Востоке, а последнее в северозападных регионах России. На Дальнем Востоке (Амурская область, Хабаровский край) отмечаются две вспышки заболевания - весной и осенью, а на Северном Кавказе в связи с большой продолжительностью теплого периода - три вспышки (апрель-май, июнь-июль и август-сентябрь).

Нами проведено изучение терапевтической эффективности неозидина-М при кровепаразитарных заболеваниях крупного рогатого скота, вызываемого всеми тремя бабезиями. Диагноз на бабезиозы ставили комплексно: учитывали эпизоотологические, клинические данные, данные ксенодиагностики и результаты лабораторного исследования мазков из периферической крови. Из эпизо-отологических данных учитывали ареал распространения специфических клещей-переносчиков заболевания, сезон и стационарное неблагополучие региона. Ксенодиагностика - на животных обнаруживали большое количество пастбищных клещей (переносчиков бабезий) из родов Boophilus, Ixodes и Нуа-lomma.

Из клинических признаков учитывали следующие: анорексия, угнетение, брадикардия, атония преджелудков, резкое снижение молочной продуктивности (у коров) на 50-80%, повышение температуры тела на 1,5-2°С и в тяжелых случаях гемоглобинурия (появление в моче примеси крови). Окончательный диагноз ставили по обнаружению характерных парных грушевидных форм эн-доглобулярных паразитов в мазках из периферической крови. Кровь брали из ушной вены, мазки делались из первых капель, высушивались на воздухе, фиксировались в 96% спирте и окрашивались по Романовскому-Гимза.

Опыты по предварительному изучению антипаразитарной эффективности препарата «Неозидин-М» (7%-ный вариант) при бабезиозе крупного рогатого скота, проведенные в апреле-мае 2001 года на базе ААПЗ "Губский" Мос-товского района Краснодарского края показали, что более 95% животных (19 из 20) выздоравливало уже после его однократного введения и 5% остальных животных (1 корова) после повторной инъекции с интервалом в 24 часа после первой. У животных даже после первой инъекции резко падала температура тела (до уровня физиологической нормы), появлялся аппетит, жвачка, резко улучшалось общее состояние животных. Случаев вынужденного убоя животных зарегистрировано не было. Однократное применение препарата «Неозидин-М» также приводит к полному выздоровлению практически всех животных и при бабезиозе, вызванном В. divergens. Однократного же применения водных растворов диминазена не всегда достаточно для оздоровления поголовья. Эти данные согласуются с литературными источниками (Сидоркин, 2001; 2002).

При одновременном введении препарата с Е-селеном можно добиться 100%-ного выздоровления животных после однократной инъекции обеих форм препарата. Полное выздоровление животных наступало: при применении не-озидина - через 4,2±0,25 дней, при применении мицеллярного раствора (Не-озидин-М) - через 2,9±0,3 дня.

Комиссионное исследование антипротозойной активности препарата «Неозидин-М», проведенное в мае 2003 года на 352 спонтанно инвазированных головах крупного рогатого скота установило 100%-ную эффективность новой мицеллярной лекарственной формы диминазена против B.bigemina.

В связи с тем, что в предварительных экспериментах препарат «Неозидин-М» показал более высокую эффективность по сравнению с водными растворами порошкообразных лекарственных форм диминазена, нами была поставлена задача по титрации терапевтической дозы сконструированной нами новой лекарственной формы диминазена.

В результате исследований по титрации терапевтических доз неозидина-М установлено, что какой-либо разницы в антипаразитарной активности разных доз (2,5 и 3,5 мг а.д.в./кг массы тела) применения препарата «Неозидин-М» зарегистрировано не было и дозу 2,5 мг/кг массы тела животного по а.д.в. можно считать терапевтической при бабезиозе крупного рогатого скота, вызванном как B.bigemina, так и В. diver gens.

Следует отметить, что побочных явлений в физиологии и поведенческих реакциях организма животных не обнаруживали.

В связи с тем, что в экспериментах по титрации терапевтических доз препарата «Неозидин М» было установлено, что при двух наиболее распространенных бабезиозах крупного рогатого скота терапевтической дозой сконструированной нами новой лекарственной формы диминазена является доза 2,5 мг а.д.в./кг массы тела животного, и с целью снижения себестоимости лекарственного средства в дальнейшем широкие испытания пироплазмицидной эффективности проводили только с 5%-ным вариантом препарата.

Исследования, проведенные в различных природно-климатических зонах Российской Федерации на базе участковых ветеринарных лечебниц и животноводческих хозяйств Республики Карелия, Краснодарского и Ставропольского краев, а также Новгородской и Псковской областей, в которых было задействовано более 750 голов крупного рогатого скота, полностью подтвердили результаты наших предварительных исследований.

Терапевтической дозой препарата «Неозидин-М» (в окончательном 5%-ном варианте) при всех исследованных бабезиозах крупного рогатого скота (В.bigemina, В.bovis и В. divergens) определена доза 2,5 мг /кг массы тела животного (по диминазену), или 1 мл/20 кг массы тела (по самому препарату). Данная доза в 1,5 раза ниже, чем у существующих аналогов, которая по многочисленным литературным источникам и нашей практике составляет 3,5 мг а.д.в. /кг массы тела (Евплов, Тига, Мироненко, 1960; Лаврентьев, 1960; Сави-чева, 1989; Yongsheng, 1996; Сидоркин, 2001; 2002).

Препарат «Неозидин-М» является высокоэффективным лекарственным средством для терапии кровепаразитарных заболеваний крупного рогатого скота, наиболее удобным в применении и точном дозировании по сравнению с порошкообразными аналогами. Он также имеет более низкую токсичность для организма теплокровных животных и обладает свойствами направленного транспорта действующего вещества в эритроциты.

Кроме того, нами установлено, то препарат «Неозидин-М» не только высокоэффективен против различных кровепаразитов, но и является препаратом с высокой экономической эффективностью, которая в 1,3-4,4 раза выше, чем у аналогичных по а.д.в. отечественных и импортных лекарственных средств на основе диминазена диацетурата.

Таким образом, в результате проведенного комплекса фармако-токсикологических и противопаразитарных исследований установлены высокая эффективность препарата «Неозидин-М» в дозе 2,5 мг/кг массы животного (по а.д.в. - диминазену) для крупного рогатого скота, широкий спектр антипротозойного действия, включая В.bigemina, B.bovis и В. divergens, а также удобство в применении и безопасность для организма сельскохозяйственных животных.

Все вышеперечисленное позволяет отнести сконструированную нами лекарственную форму диминазена к высокоперспективным препаратам, которая заслуживает дальнейшего широкого внедрения в ветеринарную паразито-логическую практику.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Улизко, Максим Алексеевич, 2004 год

1. Акрамовский М.Н. Применение пироплазмина при гемоспоридиозах крупного рогатого скота // Ветеринария.-1954, №1.-С.44-45.

2. Альберт А. Избирательная токсичность. Т.2. - М.: Медицина - 1989.

3. Архипов И.А. Препараты для терапии смешанных паразитарных заболеваний жвачных животных //Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии / Материалы докладов научной конференции.- М. -1995.-С.12-13.

4. Балашов Ю.С. Иксодовые клещи паразиты и переносчики инфекций. -СПб.-1998.-288с.

5. Белов А.Д., Данилов Е.П., Дукур И.И. Болезни собак // Справочник. М.: Агропромиздат. - 1990. - 320 с.

6. Вечеркин С.С. Сравнительная эффективность трипанблау и азидина при франсаиеллезе крупного рогатого скота // Ветеринария.-1959, №3.-С.24-26.

7. Вечеркин С.С. Пироплазмидозы КРС в Киргизии и меры борьбы с ними. // Автореф. Дисс.докт. биол. наук / ВАСХНИЛ. М. - 1971. - 35 с.

8. Воробьев В.В. Эпизоотология и некоторые вопросы профилактики бабезио-за КРС в Ленинградской области. // Автореф. дисс. докт. биол. наук / ЛВИ. Ленинград. 1970. -25 с.

9. Временная инструкция министерства здравоохранения СССР и министерства медицинской промышленности по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств.- М.-1978.- 12с.

10. Гафуров А.Г. Пироплазмидозы крупного рогатого скота и перспективы развития науки в Узбекистане // Вестник ветеринарии. 2002. - №24 (30). -С.15-17.

11. Годжаев Э.К., Ахундов С.М. Влияние факторов внешней среды и организма хозяина на паразитарную реакцию. // Доклад 5 Всесоюз. Съезда паразитологов. Витебск. - 1992. - №4. - С.94.

12. Гусейнов М.Г.О. Эпизоотология пироплазмидозов и анаплазмоза овец и усовершенствование методов борьбы с ними на Апшеронском полуострове АзССР. // Автореф. дисс.докт.биол.наук / Среднеазиатское отделение ВАСХНИЛ. Самарканд. - 1986. - 18 с.

13. Гуськова Л.С. Государственный контроль лекарственных средств и основные направления повышения его эффективности. // Матер. 1-го Съезда фармацевтов Грузии. Тбилиси. - 1978. - С.7-9.

14. Демидов Н.В. Антгельминтики в ветеринарии. // М.: «Колос». 1982. -367с.

15. Даугалиева Э.Х., Филлипов В.В. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных // М.: Агропромиздат.-1991.- 156 с.

16. Дьяконов Л.П. Роль неспецифических хозяев в поддержании пироплазми-дозных очагов. // Бюлл. Всес. Инст. Экспер. Ветер. 1974. - №18. - С.15-18.

17. Дьяконов Л.П., Засухин Д.Н., Красильников Е.Н. Гемоспоридиозы и пиро-плазмидозы животных и человека. // Итоги науки и практики. ВНИИТИ зоопараз. - 1983. -№8. - С. 1-56.

18. Евплов Н.Н., Тига Н.Н., Мироненко В.И. Беренил при пироплазмозе и франсаиеллезе крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1960. - №8. — С.24.

19. Жигалев П.И. Испытание гемоспоридина и флавакридина (трипанфлавина) при гемоспоридиозе крупного рогатого скота // Ветеринария.-1953, №6.-С.33-34.

20. Золотарева В.М. Гемоспоридиозы КРС и овец в Дагестане. // Автореф. Дисс.докт.биол.наук / Ставрополь. 1968. - 19с.

21. Иргашев Х.И. Лечебные и профилактические свойства азидина при пироплазмозе и франсаиеллезе КРС в Узбекистане. // Автореф. дисс.докт.биол.наук / Туркменский с/х инст. Душанбе. - 1966. ~ 15с.

22. Каримов Б.А. Влияние азидина на ультраструктуру Piroplasma bigemina. II Ветеринария. 1988. - №5. - С.39-41.

23. Каримов Б.А., Гафуров А.Г., Тимофеев Б.А. Эффективность азидина и диа-мидина с полиглюкином при пироплазмидозах. // Ветеринария. 1989. -№6. - С.46-47.

24. Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Воробьев В.В., Шепляков А.А. Эффективность димидина при экспериментальном бабезиозе крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1975. - №3. - С.69-70.

25. Крылов М.В. Пироплазмидозы. Ленинград: Наука. - 1981. - 148с.

26. Крылов М.В. Возбудители протозойных болезней домашних животных и человека. СПб. - 1994. - Т.2. - 269с.

27. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. СПб.- 1996. -604с.

28. Лаврентьев П.А. Применение беренила при гемоспоридиозах крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1960. - №8. - С.21-22.

29. Лебедева В.Л. Пироплазмоз собак. // Доклад 5 Всесоюз. Съезда паразитологов. Витебск. - 1992. - №4. - С.85.

30. Ли П.Н. Методы профилактики и терапии пироплазмоза и франсаиеллеза (бабезиелоза) КРС. // Автореф. дисс.докт.биол.наук / ВИЭВ. М. - 1967. -27с.

31. Лузий А.Д. Изучение активности некоторых ферментов сыворотки крови при гемоспоридиозах КРС. // Автореф. дисс.докт. биол. наук / Акад. наук Кирг. ССР. Фрунзе. - 1967. - 15с.

32. Макаревич Н.А. Азидин в комплексе с металлохелатом и тетравитом при бабезиозе крупного рогатого скота // Ветеринария. 1994. №1. С. 37-40.

33. Макаревич Н.А., Воробьев В.В., Баранова Н.Ф. Применение азидина с агар-агаром и пепсином для химиопрофилактики бабезиоза КРС // Сб. науч. тр. ЛВИ. 1989. №104. С. 86-93.

34. Марутян Е.М. О сравнительной лечебно-профилактической эффективности беренила при гемоспоридиозах крупного рогатого скота. // Ветеринария. -1960. -№8.-С.24.

35. Мясцова Т.Я., Якубовский М.В. Иммунитет животных при гельминтозах и пути его коррекции.- Витебск.-1993. 66с.

36. Ненецкий A.M. Профилактика пироплазмидозов. // Ветеринария. 1975. -№3. - С.74-75.

37. Оганджанян П.П. Пироплазмидозы и анаплазмоз КРС в Нагорно

38. Карабахской авт. Области и меры борьбы с ним. // Автореф. дисс.канд.вет. наук / Баку. 1972. - 26с.

39. Пастер Е.У., Овод В.В., Позор В.К., Вихоть Н.Е. Иммунология (практикум). - Киев. - 1989. - 127с.

40. Павлюк А. С., Крюков Б.В., Петров Р. В. и др. Оценка субпопуляций Т-лимфоцитов у человека Т-супрессоры и Т-хелперы // Методическая рекомендация. М.-1982. - 45с.

41. Позов С.А. Бабезиоз и клещевой токсикоз косуль. // Автореф. дисс.докт. биол. наук / Ставрополь. 1973. - 19с.

42. Савичева С.В. Фармакология и токсикология новых лекарственных средств и кормовых добавок в ветеринарии. Л.- 1989. - С. 139.

43. Сидоркин В.А. Неозидин при пироплазмидозах крупного рогатого скота. // Ветеринария. №2. - 2002. - С.27-29.

44. Сидоркин В.А. Научные основы разработки и применения новых отечественных противопаразитарных лекарственных средств. // Автореф. дисс.доктора вет. наук. Саратов. -2002. - 48 с.

45. Сидоркин В.А. и др. Справочник ветеринарного врача // Ростов-на-дону.-Феникс.- изд. 3-е доп. и перераб.- 2001.- 566с.

46. Сидоркин В.А. и др. Справочник ветеринарного врача // Ростов-на-дону.-Феникс.- изд. 4-е доп. и перераб.- 2003.- 587с.

47. Степанова Н.И. Протозойные болезни с/х животных. М.: Колос. - 1982. -72с.

48. Тимофеев Б.А. Патогенетическая терапия при кровепаразитарных болезнях. // Ветеринария. 1991. -№7. - С.49.

49. Тимофеев Б.А., Карпенко И.Г. Химиотерапия протозойных заболеваний с/х животных. М.: Россельхозиздат. - 1977. - 47с.

50. Тимофеев Б.А., Лазариди А.В., Хвальковская А.В., Босташвилли Р.Г. Ими-зол и диамидин при бабезиозе и анаплазмозе овец. // Ветеринария. 1984. -№4. - С.37-39.

51. Тимофеев Б.А., Писцов В.Б., Хвальковская А.В., Касперович В.П., Дубовый С.З. Эффективность димидина при пироплазмозе и франсаиеллезе крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1975. - №3. - С.66-68.

52. Тимофеев Б.А. Антибиотики и химиотерапия. М.- 1991. №39 (1). - С.34.

53. Хашимов Т.Х. Лечебные свойства антрицида, пиральдина, беренила и три-пофлавина при пироплазмозе и франсаиеллезе крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1960. - №4. - С.35-37.

54. Хитенкова Л.П. Азидин при гемоспоридиозах овец. // Ветеринария. 1963. - №3. - С.31.

55. Шайкин В.И. Азидиновый "психоз" у собак. // Материалы межд. конф. -Ставрополь.- 2001.- С. 124-126.

56. Шмулевич А.И. Эффективность тиаргена и гравилата при бабезилеозе коров// Ветеринария.-1953, №6.-С.26-27.

57. Шумилов Б.В. Изменения в вирулентности полевого штамма P.canis и динамика некоторых биохимических показателей крови при пироплазмозе. // Автореф. дис. докт. биол. наук / Ленинград. 1971. - 18с.

58. A subtropical case of human babesiosis. / Olmeda A. S., Armstrong P. M.,. Rosenthal В. M., Valladares В., Castillo A., de Armas F., Miguelez M., Gonzalez A., Rodriguez Rodriguez J. A., Spielman A., Telford S. R. // Acta Trop. 1997 -V.67. - P.229-234.

59. Adam К. M. G., Blewet D. A. A serological survey for Babesia in cattle in Sot-land. II. The occurrence of antibody in the population and the distribution of infected herds. // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1978. - V.72. - P.417.

60. Aliu Y.O., Marnman M., Peregrine A. // J. Vet. Pharmacol. Therap. 1999. -V.16. - P.291.

61. Applewhaite L. M., Craig Т. M., Wagner G. G., Long R. F. Clinical and serological evidence of bovine babesiosis and anaplasmosis in St. Lucia. // Vet. Parasitol. 1981-V. 10.-P.307.

62. Banerjee D. P., Prasad K. D., Samad M. A. Seroprevalence of Babesia begemina infection in cattle of India and Bangladesh. // Indian J. Anim. Sci. 1983. - V.53 -P.431.

63. Bannah H.A. // Vet. Med. 1999. - V.46. - P.49.

64. Bannah H.A. // Zentrarbl. Veterinarmed. Ass. 1999. -V.46 (1). - P.46.

65. Barnett S. F. Economical aspects of tick-borne disease control in Britain. // Off. Int. Epizoot. -1974.-V.81.-P.167.

66. Bauer F. // Zeitshrift fur Tropenmedizin und Parasitologie. 1955. - V.6. -P.129-140.

67. Bauer B. // Trop.Animal Health and Prod. 1999. -V.31 (2). - P.89.

68. Beveridge E. // Res.Vet.Sci. 1969. -V.10. - P.534.

69. Bork S.E., Yokoyama N. Growth inhibitory effect of triclosan on equine and bovine Babesia parasites. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2003. - V.68 (3). - P.334-340.

70. Brocklesbi D. W., Barnet S. F. Large Babesia species transmitted to splenec-tomised calves by field collections of British ticks (Haemaphysalis punctata). // Nature (London). 1970. - V.228. - P. - 1215.

71. Brocklesbi D. W., Recent observations on tick-borne protozoa, // in Tick-borne Diseases and Their Vectors, Wilde J. К. H., Ed. Center for Tropical Veterinary Medicine. University of Edinburgh. 1976. - P.263.

72. Bruce-Chwatt L. J. Essential Mariology. // John Wiley & Sons Inc New York -1985.

73. Callow L. L., Kanhai G. K., Vandenberghe A. Serological comparisons of strains of Babesia bovis occurring in Australia and Mozambique. // Trop. Anim. Health Prod.-1981.-V.13.-P.79.

74. Chisholm E. S., Ruebush Т. K., Sulzer A. J., Healy G. R. Babesia microti infection in man: evaluation of an indirect immunofluorescent antibody test. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1978 - V.27. - P.14-19.

75. Day W. С., Kutler К. L. Animal health considerations involved in the movement of U. S. cattle to Haiti. // Southwest. Vet. 1975. - V.28. - P.229. Denning H.K. et al. // Z.Parasitenk. - 1969. - V.l 1. - P.95.

76. De Vos A. J. Epidemiology and control of bovine babesiosis in South Africa. // J. S. Afr. Vet. Assoc. 1979. - V.50. - P.357.

77. De Vos A. J., Bessenger R., Fourie C. G. Virulence and heterologous strain immunity of South Africa and Australian Babesia bovis strains with reduced pathogenicity. I I Onderstepoort J. Vet. Res. 1982a. - V.49. - P. 133.

78. De Vos A. J., Combring M. P., Bessenger R. Babesia begemina vaccine: comparison of the efficacy and safety of Australian and South African strains under experimental conditions in South Africa. // Onderstepoort J. Vet. Res. 1982b. -V.49. -P.155.

79. Detections of Babesia microti by polymerase chain reaction. / Persing D. H., Mathiesen D., Marshall W. F., Telford S. R., Spielman A., Thomford J. W., Conrad P. A. // J. Clin. Microbiol. 1992 - V.30. - P.2097-2103.

80. Diagnosis of babesiosis: evalution of a serologic test for the detection of Babesia microti antibody. / Krause P. J., Telford S. R., Ryan R., Conrad P. A., Wilson M., Thomford J. W., Spielman A.// J. Infect. Dis. 1994 - V. 169. - P.923-926.

81. Dolman С. E. Texas cattle fever, a commemorative tribute to Theobald Smith. // Clio Med. 1969. - V.4. - P. 1.

82. Elamin E. The efficacy of Berenil against Trypanosoma evansi infection in mice. // J.Vet.Pharmacol.Therap. 1982. - V.5. - P.256.

83. Epidemiology of human babesiosis on Nantucket Island. / Ruebush Т. K., Jura-nek D. D., Spilman A., Piesman J., Healy G. R. // Am. J. Trop. Med. Hyg. -1981.-V.30.-P.937-941.

84. Fairclough R. Observation on the use of Berenil against Trypanosomosis in Kenya. // VetRecords. 1963. - V.75. - P.l 107.

85. Fairlamb A., Bowman I. // Trans.roy.Soc.Trop.Med.hyg. 1975. - V.69. -P.268.

86. Festy В. // Biochim.Biophis.Acta. 1975. -V.407. - P.24.

87. Fitzgerald R.R. Treatment of Genital Trichomoniasis in bulls. // J. Amer. Vet. Med. Ass. 1963.- N.l. - P.259-263.

88. Gilbert R.J. //Br. J. Pharmacol. 1983. -V.80. - P. 133.

89. Goldman M., Rosenberg A. S. Immunofluorescene studies of the small Babesia species of cattle from different geographical regions. // Res. Vet. Sci. 1974 -V.16 -P.341.

90. Goodwin L.G. II Parasutology. 1977. - V.74. - P.33.

91. Graham O.H., Hourrigan J.L. Eradication programs for the arthropod parasites of livestock. // J. Med. Entomol. 1977. - V.13. - P.629.

92. Gray J. S., Harte L. N. An estimation of the prevalence and economic importance of clinical bovine babesiosis in the Republic of Irland. // Ir. Vet. J. 1985. -V.39. -P.75.

93. Gummow В // Ond. J. Vet. Res. 1995. - V.62. - P.l.

94. Hinaidy H. K. Babesiasis of cattle in Austria. I. Distribution and prevalence. // Wien. Tieraerztl. Monarsschr. 1981. - V.68. - P.52.

95. Houte H. M. D. The tick fever parasites of cattle. // Proc. R. Soc. Queensl. -1976. V.87. -P.5.

96. Hughes W.T. Successful prevention and treatment of babesiosis with atovaquone. //J. Infect. Dis. 1995. -V. 172 94). - P. 1042-1046.

97. Intraerythrocytic "gametocytes" of Babesia microti and their maturation in tick. / Rudzinska M. A., Spielman A., rick R. F., Lewengrub S. J., Piesman J. // Can. J. Zool. 1979. - V.57. - P.424-434.

98. Jolivet G., Marchand A. Le piroplasme du chien aspects taxonomigue, mor-fologique et biologique. // Anim. Co. 1974. - V.2. - P. 13, 125-126.

99. Kakoma I, Mehlhorn H. Babesia of domestic animals. 1993 - P.141-216.

100. Kellner H.M., Ecrert H.G. // Tropenmedizin und Parasitol. 1985. - V.36. -P. 199.

101. Klatt P., Hajdu P. Pharmacokinetic investigations on diminazene and rolitetracy-cline in comparison to a combination of both // The Veterinary Record.-1976.-№6.-P.372-374.

102. Krause P.J. Atovaquone and azithromycin for the treatment of babesiosis. // New Engl. J. Med. -2000. V.343 (20). P. 1454-1458.

103. Kreir J. P. (ed.) Parasitic protozoa. // Academic Press, San Diego, Calif. 1993 -V.7.-P.223-229.

104. Kutler K. L., Jonson L. W. Chemoprophylactic activity of imidocarb diminasine and oxytetracicline against Babesia bovis and B. bigemina. II Vet. Parasitol. -1986.-V.21.-P.107.

105. Leeflang P., Perie N. M. Comparative immunofluorescent studies on 4 Babesia species of cattle. // Res. Vet. Sci. 1972. - V.13. - P.342.

106. Les piroplasmoses bovines dues aux Babesiella etude d'ensemble avec description d'une especy nouvelle, B. major, originaire de France. / Sergent E., Donatien A., Pappot L., Lestuqard F., Planturiux E. // Arch. Inst. Pasteur Alger. 1926. -V.4-P.318.

107. Lewis D., Purnell R.E., Shaw S.R., Revington J.P. The isolation and characterization of human and bovine strains of Babesia diver gens from Drumnadrachit. // Scotland, Parasitology. 1980. - V.81. -P.145.

108. Lignieres J. La piroplasmose bovine. Nouvelles recherches et observations sur la multiplicite de parasites, leur evolution, la transmission naturelle de la maladie et vaccination. // Arch. Parasitol. 1903. - V.7 - P.398.

109. Losos G., Crockett E. // Vet. Records. 1969. - V.85. - P. 196.

110. Madruga C.R., Leal C.R.B. et al. Genetic and antigenetic analysis of Babesia bigemina isolates for five geographical regions of Brazil. // Pesq. Vet. Bras. -2002.-V.22. -P. 153-160.

111. Mdachi R.E. // Bull. Anim. Helth & Prod. 1993. - V.41. - P.221.

112. Mdachi R.E. // Vet. Parasitology. 1995. - V.58. P.215.

113. Mehlhorn H., Peters W., Haberkorn A. The formation of kinetes and oocysts in Plasmodium gallinations and considerations on phylogenetic relationships between Haemosporidia, Piraplasmida, and Coccidia. II Protistologica 1980 — V.16. -P.135-154.

114. Merck Index. -Twelfth ed.-l996. -5264.

115. Methods for Detecting Babesia microti infection in wild rodens. / Etkind P., Pi-esman J., Ruebush Т., Spielman A., Juranek D.D. // J. Parasitol. 1980 - V.66. -P.107-110.

116. M'Fadyean J., Stockman S. A new species of Piroplasm found in the blood of British cattle. // J. Pasteur Alger. 1911. - V.33 - P.310.

117. Milner RJ. // J. S. Afr. Vet. Ass. 1997. - V.68 (4). - P.l 11.

118. Moen J. H. A case of piroplasmosis in housed cattle. // Nor. Vet. 1980. - V.92. -P.136.

119. Morel P. C. Reflections on the epizootology of bovine babesiasis in Europe due to Babesia divergens. II Bull. Acad. Vet. Fr. 1980 - V.53. - P.451.

120. Newton В .A. Antibiotics. // Springer-Velard. N.Y. - 1975. -V.3.

121. Norval R. A. I. Tick infestations and tick-borne diseases in Zimbabwe, Rhodesia. //J. S. Afr. Vet. Med. Assoc. 1979. - V.50 - P.289.

122. Payne R. C., Scott J.M. Anaplasmosis and babesiosis in El Salvador. // Trop. Anim. Health Pproc. 1982 - V. 14. - P.75.

123. Penzhorn B.L. // J. S. Afr. Vet. Ass. 1995. - V.66 (3). - P. 157.

124. Persing D. H., Conrad P. A. Babesiosis: new insights from phylogenetic analysis. Infect. Agents Dis. 1995. - V.4. - P. 182-185.

125. Persistent parasitemia after acute babesiosis. / Krause P. J., Spielman A., Telford S. R., Sikand V. K., McKay K., Christianson D., Pollack R. J., Brasard P., Mag-era J., Ryan R., Persing D.H. // N. Engl. J. Med. 1998. - V.339. - P.160-165.

126. Piesman J. Т., Mather T. N., Sinsky R. J., Spielman A. Duration of tick Attachment and Borrelia burgdorferi transmission. // J. Clin. Mirobiol. 1987. - V.25. -P.557-558.

127. PilchD.S. //Biochemistry. 1995. -V.34 (31). -P. 121.

128. Potgieter F. T. The Life Cycle of Babesia bovis and Babesia bigemina in Ticks in cattle in South Africa. // Ph. D. thesis Rand Afrikaans University, Johannesburg, South Africa. 1977.

129. Purnel R. E. Babesiosis in various hosts, in Babesiosis. // Ristic M., Kreier J. P. Eds., Academic Press, New York 1981. - P.25.

130. Rabanal B. // J. Cromatogr. Biomed. Sci. Appl. 2000. -V.738 (2). - P.293.

131. Ranque S. The treatment of babesiosis. // New Engl. J. Med. 2001. V.344 (10). - P.773-774.

132. Reinert K.E. //J. Biomol. Struct. Dyn. 1999. - V.17 (2). -P.311.

133. Rees C. W. Characteristics of the piroplasms Babesia argentina and Babesia be-gemina in the United States. // J. Agric. Res. 1934. - V.48. - P.427.

134. Reik R.F. Babesiosis. In infectious blood disease of man and animals. // New York. Academic Press. 1968. - V.2. - P.219-268.

135. Rowin K. S., Tanowitz H. В., Wittner M. Therapy of experimental babesiosis. // Ann. Intern. Med. 1982. - V.97. - P.556- 558.

136. Rudzinska M. A. Ultrastructure of intraerythrocytic Babesia microti, with emphasis on the feeding mechanism. // J. Protozool. 1976. - V.23. - P.224-233.

137. Rudzinska M. A., Trager W., Lewengrub S. J., Gubert E. An electron microscopic study of Babesia microti invading erythrocytes. // Cell. Tissue Res. -1976. V.169. -P.323-334.

138. Schreuder В. E., Van Wijk C. An outbreak of babesiosis in Eastern Flovoland. // tijd schr. Diergeneeskd. 1984 - V.109. - P.549.

139. Schubery H., Reichenow E. Uber Bau und Vermehrung von Babesia canis in Blute des Hundes. // Keiser. Gesundheitamte. 1912 - V.39. - P.415.

140. Sexuality in piroplasms as revealed by electron microscopy in Babesia microti. / Rudzinska M. A., Lewengrub S., Spielman A., Trager W., Piesman J. // 1983. -V.80. - P.2966- 2970.

141. Shillinger J. E. Deer in relation to fever tick eradication in Florida, Texas. // Trans. North Am. Wildl. Conf. 1938. - V.3. - P.882.

142. Smith T. Preliminary observations on the microorganism of Texas fever. // Med. News Philadelphia. 1889. - V.55. - P.689.

143. Smith Т., Kilborne F. L. Investigations into the nature, causation and prevention of Texas or southern cattle fever. // Bull. Bur. Anim. Ind. U.S. Dep. Agric. -1893. V.l. -P.l.

144. Successful Chemotherapy of transfusion babesiosis. / Witter M., Rowin K. S., Tanowitz H. В., Hobbs J. F., Saltzman S., Wenz В., Hirsch R., Chisholm E., Healy G. R. // Ann. Intern. Med. 1982. - V.96. - P.601-604.

145. Tarahashi Toshiyuri. Delay of reticulocyte maturation in cattle with chronic anemia caused by Babesia gibsoni infection. // Jap. Vet. Rec. 1992. - V.l. — P.61.

146. Taylor S. M. Assessment of prevalence of clinical babesiosis in cattle in Northern Irland. // Vet. rec. 1983. - V.l 12. - P.247.

147. Taylor J. H., Guthrie A. J., Leisewit Z. A. The effect of endogenously produced carbon monoxide on the oxygten status of dogs infected with Babesia canis. II J. S. Afr. Vet. Assoc. 1991. - V.4. -P.153.

148. Telford S. R., Spilman A. Babesiosis of humans. 1998. - P.349-359.

149. The Merk veterinary manual. 8-th Ed. - 1998. - P.25.

150. Thompson G. D., Medellin J. A., Trevino G. S., Wagner G. G. bovine babesiosis in northern Mexico. // Trop. Anim. Health Prod. 1980. - V.12. -P.132.

151. Tucker M.J. Quoited in ref Roe FJC. 1979.

152. Ullemann В., Centurier C., Weiland G., Boch J. A contribution to the study of bovine baesiosis in Western Allgau. // Berl. Muench. Tierarztl. Wochenschr. -1984.-V.97.-P.165.

153. U.S. Patent No 2838485. 1958 (Hoechst).

154. Waring M.J., Baily C.J. //Mol. Recognit. 1997. - V.10. (3). -P.121.

155. Weiss L.M., Wittner M., Tanowitz H.B. The treatment of babesiosis. // New Engl. J. Med. 2001. V.344 (10). - P.773.

156. Weiss L.M., Wittner M., Tanowitz H.B. et al. Efficacy of azithromycin for treating Babesia microti in hamster model. // J. Infect. Dis. 1993. - V.168. -P.1289-1292.

157. Wittner M., Tanowitz H.B. et al. Atovaquone in the treatment Babesia microti in hamsters. // Fm. J. Trop. Med. 1996. - V.55. -P.219-222.

158. Yongsheng Y. // Vet. Parasitol. 1996. - V.61 (3). - P.349.

159. Zwart D., Van Den Ende M. C., Kouwenhoven В., Buys J. The difference between B. begemina and a Dutch strain of B. major. I I Tijdschr. Diergeneeskd. -1968-V.93-P.126.