Разработка методов диагностики микоплазмозов кур и изучение изолятов Mycoplasma gallisepticum, выявленных на территории Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Спрыгин, Александр Владимирович

• Спрыгин, Александр Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Спрыгин, Александр Владимирович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Краткая характеристика микоплазм.

2.2. Филогенетические отношения MG.

2.3. Структурная организация клетки MG.

2.4. Иммунные реакции при заражении MG.

2.5. Генетические особенности MG и MS.

2.6. Патогенность микоплазм.

2.6.1 Конкуренция за субстрат.

2.6.2. Адгезия и цитадгезины MG и MS.

2.6.3. Фенотипическое разнообразие микоплазм.

2.6.4. Проникновение в клетку.

2.6.5. Цитопатическое действие MG.

2.7 Выявление MG и MS при смешанных инфекциях.

2.7.1. ПЦР с использованием в качестве матрицы генов 16S рРНК и гемагглютининов.

2.7.2 Сравнение ПЦР с другими методами.

2.7.3. Дифференциация штаммов MG и MS.

2.7.4. Роль микоплазм в ассоциированном течении инфекционных заболеваний.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методов диагностики микоплазмозов кур и изучение изолятов Mycoplasma gallisepticum, выявленных на территории Российской Федерации»

Актуальность темы. Микоплазмы являются уникальными микроорганизмами, занимающими особое положение среди бактерий [160]. Для птицеводства наибольший интерес среди рода Mycoplasma представляют Mycoplasma gallisepticum (MG) и Mycoplasma synoviae (MS), которые наряду с метапневмовирусом птиц (МПВП), вирусом инфекционного бронхита кур (ИБК), ларинготрахеита (ИЛТ) и реовирусом вызывают респираторный синдром и теносиновит [20, 26, 89, 104, 121, 131, 137, 171]. MG и MS наносят значительный экономический ущерб промышленному птицеводству, снижая яйценоскость у птиц и осложняя . течение ассоциированных вирусных и бактериальных заболеваний [19, 34, 121].

Эффективность мероприятий по борьбе с инфекционными заболеваниями во многом зависит от своевременного выявления возбудителя. Диагноз основывается на данных клинического наблюдения и на результатах лабораторных исследований, которые должны быть получены в максимально короткие сроки. Дифференциация микоплазмозов от смешанных вирусных инфекций на ранних стадиях заболевания позволяет вовремя принять необходимые меры и сократить экономические потери.

В настоящее время для выявления MG и MS используют несколько методов. Выделение культуры микроорганизма является надежным, но весьма трудоемким методом, так как это требует значительного времени и специальных селективных сред. К тому же процесс культивирования может осложняться ростом вторичной микрофлоры [141].

Серологические методы являются быстрыми и высокопроизводительными, но для выработки достаточного количества антител в крови, которые могут быть выявлены серологическими методами, требуется от 1-й до 3-х недель с момента начала инфекции [101], что затрудняет выявление инфекции на ранней стадии.

Лабораторные методы, основанные на выявлении генетического материала MG и MS, обладают более высокой чувствительностью и специфичностью по сравнению с культуральными и серологическими методами и сокращают время постановки диагноза до 4-5 часов с момента отбора проб. В последнее время появились методы ПЦР для выявления MG [110, 172, 176] и MS [51], а также запатентованные диагностикумы для MG (IDEXX, США; ИнтерЛабСервис, г. Москва). Сейчас также применяют методы ПЦР, с помощью которых можно идентифицировать MG и MS одновременно [57, 205]. Сравнительно недавно для выявления MG развитие получил такой метод, как ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) [25, 52). Однако выявление MS с помощью ПЦР-РВ еще не описано. Метод ПЦР-РВ более чувствителен и позволяет проводить количественный анализ. Одним из общих недостатков метода ПЦР является возможность ингибирования реакции при исследовании суспензий тканей и органов, таких, как мозг, печень и т.п., содержащих большое количество липидов и ферментов. Для исключения ингибирования и контроля процесса выделения используется внутренний контрольный образец (ВКО), т.е. гетерологичная ДНК, которая добавляется в пробу перед выделением.

Существующие штаммы MG, включая референтные, могут значительно отличаться по антигенным и биологическим свойствам [12, 164], поэтому необходимо не только выявлять изоляты, но также изучать их свойства. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей вариабельных генов даст возможность устанавливать пути распространения инфекции [135]. Более того, использование живых вакцин против MG делает актуальной задачу дифференциации полевых изолятов. К тому же генетическое разнообразие изолятов MG, встречающееся на территории РФ, остаётся в настоящее время неизученным.

Исходя из вышеизложенного, разработка надежных методов выявления MG и MS в пробах патологического материала, а также изучения выявленных изолятов MG является актуальной задачей.

Цель и задачи исследования. Целью исследований являлась разработка методов выявления MG и MS на основе дуплекс ПЦР (дПЦР) и дуплекс ПЦР-РВ (дПЦР-РВ), а также изучение патогенности выявленных изолятов MG.

Для достижения поставленной цели были определены основные задачи:

1. Разработать методы ПЦР для выявления MG и MS в пробах патологического материала от птиц с ассоциированными инфекциями.

2. Провести анализ частоты встречаемости MG и MS в ассоциации с вирусами ИБК, МПВП, ИЛТ и реовируса кур, соответственно, при исследовании проб патологического материала.

3. Изучить патогенность некоторых выявленных изолятов MG.

4. Провести анализ нуклеотидных последовательностей участков вариабельных генов выявленных изолятов MG.

Научная новизна:

- разработаны методы выявления MG и MS на основе дПЦР и дПЦР-РВ с внутренним контрольным образцом;

- показана возможность дифференциации MG и MS от вирусов ИБК, МПВП, ИЛТ и реовируса кур в пробах патологического материала от птиц;

- изучена патогенность 5 выявленных изолятов MG;

- впервые проведен анализ нуклеотидных последовательностей генов gapA, mgc2 и pvpA 26 российских изолятов MG;

- получены последовательности фрагментов генов gap A, mgc2 и pvpA 26 изолятов MG, депонированные в международной базе данных Genbank под номерами FJ965750-FJ965767, FJ965769-FJ965783, FJ965785-FJ965815, FJ965817-FJ965827 и FJ972630-FJ972632.

Практическая значимость. Разработанные молекулярно-биологические методы, прошедшие испытания в «ФГУ ВНИИЗЖ», изложены в следующих документах:

- «Методика выявления генома Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma synoviae с использованием полимеразной цепной реакции в формате мультиплекс» (2006 г.);

- «Методика выявления и количественного анализа Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma synoviae с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с внутренним контрольным образцом» (2008 г.).

Данные методики одобрены учёным советом, утверждены директором ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» и включены в сборник «Методические указания по диагностике заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц с использованием ПЦР» (2008 г.), который допущен Россельхознадзором РФ в качестве пособия для работников ветеринарных диагностических лабораторий.

Основные положения, выносимые на защиту:

Методы ПЦР для выявления MG и MS: одновременная детекция геномов MG и MS методом дуплекс ПЦР и дуплекс ПЦР-РВ с внутренним контрольным образцом.

Результаты выявления MG и MS в пробах от птиц с респираторным комплексом, полученных из птицеводческих хозяйств различных регионов РФ и СНГ в период с 2005 по 2008 гг.

Результаты изучения биологических свойств изолятов MG.

Результаты анализа первичных нуклеотидных последовательностей фрагментов генов gapA, mgc2 и pvpA изолятов MG, выявленных на территории РФ в 2005-2008 гг.

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях учёного совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2006-2008 гг., опубликованы в материалах Всемирного ветеринарного конгресса по птицеводству (Китай, 2007), международных ветеринарных конференциях по птицеводству (Украина, 2008), Международной конференции, посвященной генетике микроорганизмов и эволюции инфекционных заболеваний (США, 2008).

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 3 работы - в материалах международных конференций, 4 работы - в материалах конгрессов за рубежом.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 149 страницах и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, заключение по обзору литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения и приложения. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 18 рисунками. Список использованной литературы включает 210 источников. В приложении представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, её научную и практическую значимость.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Спрыгин, Александр Владимирович

6. ВЫВОДЫ

1. Разработаны методы дПЦР и дПЦР-РВ с использованием ВКО для выявления MG и MS в пробах от птиц с респираторным комплексом. Показано, что разработанные методы обладают высокой чувствительностью и специфичностью. Чувствительность ПЦР составила 100 КОЕ-экв/мл для MG и MS, а ПЦР-РВ - 7 КОЕ-экв/мл и 1 КОЕ-экв/мл для MG и MS, соответственно.

2. При исследовании 620 проб патологического материала из 164 птицефабрик в период с 2005 по 2008 гг. было выявлено 67 изолятов MG из 47 птицефабрик (29%) и 88 изолятов MS из 62 птицефабрик (38%), из которых 30 проб из 28 птицефабрик (17%) были одновременно положительны на MG и MS (р<0,05). к.б.н. Колосову С.Н., к.б.н. Руниной И.А. вет. врачу Колотилову А.Н., а также Овчинниковой Е.В, Хлебовец З.Б., Зинякову Н.Г. и Ерошиной Т.И. за методическую помощь в выполнении отдельных этапов работы.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

MG и MS являются опасными инфекционными агентами, которые представляют серьезную угрозу птицеводческим хозяйствам. У инфицированной птицы снижается яйценоскость, прирост массы тела, наблюдается гибель поголовья, что наносит значительный экономический ущерб. Эффективность мер по борьбе с микоплазмозами во многом зависит от своевременного выявления возбудителя с помощью лабораторных методов. Использование современных методов диагностики инфекционных заболеваний, особенно основанных на технологии выявления генетического материала возбудителя, имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными лабораторными методами. Во-первых, высокая чувствительность молекулярно-биологических методов значительно ускоряет процедуру постановки диагноза, позволяя избежать трат времени на выделение чистой культуры микроорганизма. При этом реакция может быть построена так, что выявление идет сразу на несколько возбудителей. Во-вторых, изучение структуры генома и его части позволяет в высокой степени дать индивидуальную характеристику выявленного изолята, которая при сравнительном анализе может служить основой для определения его филогенетической принадлежности, а также определения возможных источников и путей распространения. Это особенно важно для микоплазм, у которых отсутствуют яркие серологические отличия.

В настоящем исследовании были разработаны методы ПЦР для выявления и дифференциации MG и MS при ассоциированных вирусных инфекциях птиц. Методы включают дПЦР и дПЦР-РВ, в которых генами-мишенями являются mgc2 и vlhA гены MG и MS, соответственно. Оба метода включают внутренний контрольный образец, который позволяет контролировать процесс выделения и исключать ложноотрицательные результаты вследствие ингибирования ПЦР или старения реактивов. Таким образом, одновременное выявление MG и MS в ПЦР позволяет сократить время анализа и экономно использовать дорогостоящие реактивы.

При использовании геномной ДНК культуральных препаратов штаммов MS и MG методы дПЦР и дПЦР-РВ были оптимизированы по температуре отжига праймеров, а также была оценена чувствительность реакции. Она составила 1-7 КОЕ-экв/мл (для MG и MS) и 100 КОЕ-экв/мл (для MG и MS) для ПЦР-РВ и ПЦР соответственно. При оценке чувствительности реакции дПЦР и дПЦР-РВ в присутствии избытка геномной ДНК другой выявляемой микоплазмы, было установлено отсутствие конкуренции при амплификации как специфических матриц, так и матрицы ВКО.

Тестирование специфичности дПЦР и дПЦР-РВ проводили в присутствии вирусных и бактериальных инфекционных агентов. Результаты показали, что неспецифической амплификации отмечено не было, а разработанные методы специфично выявляли ДНК MG и MS как отдельно, так и в формате дуплекс.

В ходе данной работы было исследовано 620 проб патологического материала от птиц с клиническими признаками инфекции, поступивших из 164 птицеводческих хозяйств. При исследовании 620 проб патологического материала из 164 птицефабрик в период с 2005 по 2008 гг. было выявлено 67 изолятов MG из 47 птицефабрик (29%) и 88 изолятов MS из 62 птицефабрик (38%), из которых 30 проб из 28 птицефабрик (17%) были одновременно положительны на MG и MS (р<0,05). Для подтверждения результатов дПЦР и дПЦР-РВ при анализе проб патологического материала были выбраны, в качестве референтных, методы ПЦР GapA и ПЦР 16S для MG и MS. Показано, что дПЦР не уступал по чувствительности и специфичности стандартным методам ПЦР GapA и ПЦР 16S, а дПЦР-РВ превосходил их.

При исследовании проб от птиц в 67 положительных пробах на MG ассоциированные вирусные агенты (вирус инфекционного бронхита, вирус инфекционного ларинготрахеита кур и метапневмовирус) выявляли в 27 пробах (40%) проб) (р<0,01): наиболее часто выявляли вирус инфекционного бронхита (13 проб), а пневмовирус и ИЛТ - в 5 и 9 пробах, соответственно. В 88 положительных пробах на MS реовирус кур выявили в 17 пробах (19% проб) (р<0,01)

MG наиболее часто выявляли в пробах от бройлеров (36 проб) и птиц старше 151 дня (27 проб) с вирусом ИБК (11 проб) и ИЛТ (5 проб), соответственно.

MS наиболее часто выявляли в пробах от несушек старше 151 дня (48 проб) и бройлеров (34 пробы) с реовирусом в 10 и 5 пробах, соответственно.

Наибольшее количество изолятов MG и MS выявили в пробах от птиц с клиническими признаками инфекции из птицефабрик Центрального, Приволжского и Южного федеральных округов. Случаи выявления микоплазм были также отмечены в пробах от птиц из птицефабрик Уральского и Дальневосточного федеральных округов. В пробах от птиц из птицефабрик Сибирского ФО MG и MS в период исследования зарегистрированы не были. В пробах от птиц из птицефабрик Северо-Западного ФО была выявлена только MS. Однако на данное время объективного вывода по Уральскому, Дальневосточному и Северо-Западному федеральному округу сделать невозможно по причине малого количества исследованных проб из различных птицефабрик.

Наибольшее число случаев при микоплазмозе птиц было связано с поражением верхних дыхательных путей, что сопровождалось развитием аэросаккулита, трахеита, коньюктивита и синусита.

Для повышения надежности ПЦР-систем обнаружения MG и MS разработана система внутреннего контрольного образца для ПЦР и ПЦР-РВ. В качестве ВКО для ПЦР использовали ампликон участка S1 гена реовируса кур, а для ПЦР-РВ - ДНК-плазмиду со специфической вставкой фрагмента S3 гена реовируса кур.

С помощью внутреннего контрольного образца удалось идентифицировать ложноотрицательные результаты при исследовании проб патологического материала, которые по-видимому, были связаны с присутствием ингибиторов в исследуемой пробе. При повторном исследовании этих проб после десятикратного разбавления суспензии пробы ложноотрицательные результаты не регистрировали.

Изучены патогенные свойства 5 выделенных изолятов MG на куриных эмбрионах, трахеальных органных культурах и естественновосприимчивых животных. Выбор изолятов для исследования осуществлялся по ростовым характеристикам и филогенетическому положению. Установлено, что гибель эмбрионов была значительно выше при инокуляции полевыми изолятами MG в желточный мешок, чем при заражении в аллантоисную полость. Эксперимент по заражению куриных эмбрионов показал, что при заражении в желточный мешок и аллантоисную полость наибольшей патогенностью для куриных эмбрионов обладал изолят MG MG140905. Высокая патогенность данного изолята также была продемонстрирована в ТОК и на восприимчивых животных. Данный изолят вызывал почти полный цилиостаз в ТОК и, при заражении однодневных SPF-цыплят, вызывал значительные патолого-анатомические изменения в органах (р<0,05). Для дифференциации 26 выявленных изолятов использовали опубликованные системы праймеров на гены gapA, mgc2, pvpA и межгенный спейсерный участок ISR. При сравнении последовательностей ампликонов изучаемых участков генов показано, что большинство российских изолятов группируются отдельно от референтных штаммов. Всего 13 изолятов MG120208, MG140308a, MG070607, MG200407, MG031008, MG090107, MG130807 и MG040408 MG040805, MG280405, MG140307, MG060705, MG151008 группировались вместе по 4 изучаемым последовательностям, что свидетельствует об эндемичности MG. Изолят MG140905 группируется с патогенным штаммом Rlow по последовательности mgc2 и gapA. Изоляты MG310807 и MG080508, выделенные из одного птицеводческого хозяйства, группируются вместе по последовательностям ISR и gapA с вакцинным штаммом tsll и др., тогда как по mgc2 они входят в группу российских - изолятов. Уровень отличий между всеми выявленными изолятами по участкам gap A, mgc2, pvpA и ISR не превышал 3,6 %, 12 %, 7% и 4,5%, соответственно.

3. При анализе встречаемости вирусов ИБК, ИЛТ, МПВП и реовируса показано, что MG и MS ассоциированы с данными вирусами в 40% (р<0,01) и 19% (р<0,01) случаев, соответственно.

4. Методом секвенирования определены участки последовательностей генов gapA, mgc2 и pvpA 26 изолятов MG. Показано, что большинство выявленных изолятов MG генетически отличаются от референтных штаммов и формируют отдельную филогенетическую группу.

5. В результате экспериментального заражения куриных эмбрионов, трахеальных органных культур и естественно-восприимчивых животных 5 изолятами MG: MG250106, MG070306, MG030506, MG200705 и MG140905, установлено, что наиболее патогенным среди изучаемых российских изолятов является изолят MG140905 (р<0,05), который генетически близок к высокопатогенному штамму Rlow по последовательностям генов gapA и mgc2.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Практическая значимость. Для практического использования предлагаются одобренные ученым советом и утвержденные директором ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» следующие методики:

- «Методика выявления генома Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma synoviae с использованием полимеразной цепной реакции в формате мультиплекс»;

- «Методика выявления и количественного анализа Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma synoviae с помощью полимеразной цепной реакции режиме реального времени с внутренним контрольным образцом».

Благодарность. Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю д.б.н., профессору Дрыгину В.В. за консультативную помощь в процессе выполнения данной работы. Автор также признателен

Установлена корреляция по филогенетической принадлежности (по последовательности gapA и mgc2 и биологическим свойствам изолята MG140905 с патогенным штаммом Rlow.

При исследовании проб, поступавших из одной и той же птицефабрики в течение 2-3 лет, выявляли разные циркулирующие изоляты. Наибольшее количество, по 4 изолята, было выявлено в пробах из птицефабрик из Тульской и Самарской областей. В первом случае выявленные изоляты не формировали общей группы, а были распределены по дендрограмме с уровнем отличий, не превышающим 2,5%; во втором случае группировались вместе, причём три из них были идентичны. Установленные факты могут подтверждать как длительную совместную персистенцию неродственных изолятов, так и изменение генома в результате многолетней персистенции MG в птицехозяйстве. Установить связь между выявленными изолятами, датой выявления и географической локализации птицефабрик, в которых они выявлялись, не удалось.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Спрыгин, Александр Владимирович, 2009 год

1. Борхсениус, С.Н. Микоплазмы. Молекулярная и клеточная биология, патогенность, диагностика / С.Н. Борхсениус, О.А. Чернова. Л.: Наука, 1989.- 156 с.

2. Коровин, Р.Н. Лабораторная диагностика болезней птиц/ Р.Н. Коровин, В.П. Зеленский, Г.А. Трошева. М.: Агропромиздат, 1989. -С. 172-174.

3. Методические указания по приготовлению и поддержанию трахеальной органной культуры куриных эмбрионов и цыплят / О.Н. Чупина, С.В. Фролов, В.Н. Диев, А.В. Борисов; ФГУ "ВНИИЗЖ". -Владимир, 2006. 4с.

4. Прозоровский, С.В. Медицинская микоплазмология / С.В. Прозоровский, И.В. Раковская, Ю.В. Вульфович. М.: Медицина, 1995.-С. 56-78.

5. A gene family in Mycoplasma imitans closely related to the pMGA family of Mycoplasma gallisepticum /P.F. Markham, M.F.Duffy, M.D. Glew, G.F. Browning // Microbiology.- 1999. Vol. 145. - P. 2095-2103.

6. A novel mechanism for control of antigenic variation in the haemagglutinin gene family of Mycoplasma synoviae/AM. Noormohammadi, P.F. Markham, A. Kanci et al. И Mol. Microbiol. -2000. Vol. 35. - P. 911- 923.

7. A putative transposase gene in the 16S-23S rRNA intergenic spacer region of Mycoplasma imitans / R. Harasawa, D. G. Pitcher, A. S. Ramirez, J. M. Bradbury // Microbiology. 2004. - Vol. 150. - P. 10231029.

8. A surface epitope undergoing high-frequency phase variation is shared by Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma bovis / D.Yogev, D.Menaker, K. Strutzberg et al. // Infect. Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 4962-4968.

9. Abdulmawjood, A. Two methods for construction of internal amplification controls for the detection of Escherichia coli 0157 by polymerase chain reaction / A. Abdulmawjood, S. Roth, M. Bulte // Mol. Cell. Probes. 2002. - Vol. 16. - P. 335-339.

10. Acylation and immunological properties of Mycoplasma gallisepticum membrane proteins /G. Jan, C. Fontenelle, M. Le Henaff, H. Wroblewski // Res. Microbiol.- 1995. Vol. 146. - P. 739-745.

11. Adherence of Mycoplasma gallisepticum involves variable surface membrane proteins / A. Athamna, R. Rosengarten, S. Levisohn et al. И Infect. Immun. 1997. - Vol. 65, N 6. - P. 2468-2471.

12. Akhtar, M. Chick embryo mortality studies using different strains of Mycoplasma gallisepticum / M.Akhtar, N. Aisha, A. Khan / Journal of Islamic Academy of Sciences. 1991. - Vol. 4. -P.297-300.

13. An internal control for the diagnosis of crown gall by PCR / J. Cubero, J. van der Wolf, J. van Beckhoven, M. M. Lopez // J. Microbiol. Methods. -2002. Vol. 51. - P. 387-392.

14. An internal control for routine diagnostic PCR: design, properties, and effect on clinical performance / M. Rosenstraus, Z. Wang, S.Y. Chang et al. И J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol. 36. - P. 191-197.

15. Analysis of cytadherence-deficient, Go/^-negative Mycoplasma gallisepticum strain R / L. Papazisi, K.E. Troy, T.S. Gorton et al. II Infect. Immun. 2000. - Vol. 68. - P. 6643-6649.

16. Antigenic variation of Mycoplasma gallisepticum, as detected by use of monoclonal antibodies /V.S. Panangala, M.A. Morsy, M.M. Gresham, M. Toivio-Kinnucan // Am. J. Vet. Res. 1992. - Vol. 53. - P. 1139-1144.

17. Bencina, D. Haemagglutinins of pathogenic avian mycoplasmas / D. Bencina //Avian Pathol. 2002. - Vol. 31, N 5. - P. 535-547.

18. Bradbury, J. M. Poultry mycoplasmas: sophisticated pathogens in simple guise / J. M. Bradbury / Brit. Poultry Sci. 2005. - Vol. 46. - P. 125-136.

19. Bradbury, J.M. Dual infection with Mycoplasma synoviae and a tenosynovitis-inducing reovirus in chickens /J.M. Bradbury, A. Garuti// Avian Pathol. -1978,- V. 7. P.407-419.

20. Braunius, W.W. Respiratory problems in reovirus infection in broiler chicks / W.W. Braunius // Tijdschr. Diergeneeskd. 1992. - Vol. 117. -P. 390-391.

21. Bredt, W. Motility of mycoplasmas / W. Bredt // Ann. N.Y.Acad. Sci. -1973. Vol. 225. - P. 246-250.

22. Bredt, W. Gliding motility of Mycoplasma hominis / W. Bredt, U. Radestock // J.Bacteriol. 1977. - Vol. 130. - P. 937-938.

23. Brightwell, G. Development of internal controls for PCR detection of Bacillus anthracis / G. Brightwell, M. Pearce, D. Leslie // Mol. Cell. Probes. 1998. - Vol. 12. - P. 367- 377.

24. Browning, G.F. The organization of the multigene family which encodes the major cell surface protein,pMGA, of Mycoplasma gallisepticum / G.F. Browning, K.G Whithear, I.D. Walker // FEBS Letters. 1994. - Vol. 325.-P. 347-352.

25. Carli, K.T. Real-time polymerase chain reaction for Mycoplasma gallisepticum in chicken trachea / K.T. Carli, A. Eyigor / Avian Dis. -2003. Vol. 47, N 3. - P. 712-717.

26. Cavanagh, D. Appearance of type В avian pneumovirus in Great Britain / C. Naylor, K. Shaw, P. Britton et al. // Avian Pathol. 1997. - Vol. 26. - P.327-338.

27. Cecchini, K.R. Transcriptional responces of Mycoplasma gallisepticum strain R in association with eukaryotic cell / K.R Cecchini, T.S Gorton, S.J Geary // J. Bacteriol. 2007. Vol.189. - P. 5803-5807.

28. Chambaud, I. Interactions between mycoplasma lipoprotein and the host immune system / I. Chambaud, H. Wroblewski, A. Blanchard //Current Trends Microbiol. 1999. - Vol. 7. - P. 493- 499.

29. Chambaud, I. The complete genome sequence of the murine respiratory pathogen Mycoplasma pulmonis/ I. Chambaud, R. Heilig, S. Ferris // Nucleic Acids Res. 2001. - Vol. 29. - P. 2145-2153.

30. Characterization of a major hemagglutinin protein from Mycoplasma gallisepticum /P.F. Markham, M.D.Glew, M.R. Brandon et al. II Infect. Immun. 1992. -Vol. 60.-P. 3885-3891.

31. Chemokine and cytokine gene expression profiles in chickens inoculated with Mycoplasma gallisepticum strains Rlow or GT5 /J. Mohammed, S. Frasca, K. Cecchini et al. II Vaccine.- 2007. Vol. 25 - P. 8611-8621.

32. Chu, H.P. Single and mixed infections of avian infectious bronchitis virus and Mycoplasma gallisepticum / H.P.Chu, P.K. Uppal // Dev. Biol. Stand. 1975.-V. 28. P. 101-14

33. Cloning and characterization of a putative cytadhesin gene (mgcl) from Mycoplasma gallisepticum / L.C. Keeler, L.L. Hnatow, P.L. Whetzel, J.E. Dohms // Infect. Immun. 1996. - Vol. 64. - P. 1541-1547.

34. Cluss, R.G. Interaction of albumin and phospholipid: cholesterol liposomes in growth of Mycoplasma spp / R.G. Cluss, N.L. Somerson // Appl Environ Microbiol.- 1986. Vol. 51, N 2. - P. 281-287.

35. Comparison of culture, PCR, and different serologic tests for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae infections / A. Feberwee, D.R. Mekkes, J.J de Wit et al. //Avian Dis. 2005. - Vol. 49, N2.-P. 260-268.

36. Complete sequence analysis of the genome of the bacterium Mycoplasma pneumoniae /R. Himmelreich, H. Hilbert, H. Plagens et al. II Nucleic Acids Res. 1997. - Vol. 24. - P. 4420-4449.

37. Control of membrane lipids in MG: effect on lipid order / C. Le Grimellec, J. Cardinal, M.C. Giocondi et al. II J. Bacteriol. 1981. -Vol. 146.-P. 155-162.

38. Correlates of immune protection in chickens vaccinated with Mycoplasma gallisepticum strain GT5 following challenge with pathogenic MG strain Rlow / M.A. Javed, S. Frasca, D. Rood et al. И Infect. Immun. 2005. -Vol. 73, N9.-P. 5410-5419.

39. Courtney, В. С. Development of internal controls for probe-based nucleic acid diagnostic assays / В. C. Courtney, M. M. Smith, E. A. Henchal // Anal. Biochem. 1999. - Vol. 270. - P. 249-256.

40. Cullen, G.A. A cell-free haemagglutinating antigen of Mycoplasma synoviaeand its use in haemagglutination inhibition tests / G.A. Cullen, G.C. Snell // J. Biol. Standard. 1976. - Vol. 4. - P. 203-207.

41. Cytadherence-deficient mutants of Mycoplasma gallisepticum generated by transposon mutagenesis /S. Mudahi-Orenstein, S. Levisohn, S.J. Geary, D.Yogev// Infect. Immun. -2003. Vol. 71, N 1. - P. 3812-3820.

42. DaMassa, A.J. Mycoplasmas of sheep and goats / A.J. DaMassa, P.S. Wakenell, D.L. Brooks // J. Vet. Diagn. Invest. 1992. - Vol. 4. - P. 101113.

43. Detection and identification of avian mycoplasmas by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism assay / I. Kiss, K. Matiz, E. Kaszanyitzky et al. // Vet. Microbiol. 1997. - Vol. 58, N 1. -P. 23-30.

44. Determination of cholesterol asymmetry by rapid kinetics of filipin-cholesterol association: effect of modification in lipids and proteins / R. Bittman, L. Blau, S. Clejan, S. Rottem // Biochemistry. 1981. - Vol. 20, N9.-P. 2425-2432.

45. Development and application of a multiplex polymerase chain reaction for avian respiratory agents IY. Pang, H. Wang, T. Girshick et al. //Avian Dis. 2002. - Vol. 46, N 3. - P. 691-699.

46. Development and evaluation of a diagnostic PCR for Mycoplasma synoviae using primers located in the intergenic spacer region and the 23 S rRNA gene / A.S. Ramirez, C.J. Naylo, P.P. Hammond, J.M. Bradbury // Vet. Microbiol. 2006. - Vol. 118. - P. 76-82.

47. Development and validation of a real-time taqman polymerase chain reaction assay for the detection of mycoplasma allisepticum in naturally infected birds / S. Callison, A. Riblet, S. Sun et al. II Avian Dis. 2006. -Vol. 50.-P. 537-544.

48. Differentiation of Mycoplasma gallisepticum strains using molecular methods / J. Biro, N. Erdei, I. Szekely, L. Stipkovits // Acta. Vet. Hung. -2006. Vol. 54, N 4. - P. 437-448.

49. Discrimination of Streptomyces albidoflavus strains based on the size and number of 16S-23S ribosomal DNA intergenic spacers IT. Hain, N. Ward-Rainey, R. M. Kroppenstedt et al. II Int. J. Syst. Bacterid.- 1997. -Vol. 47.-P. 202-206.

50. Displaying the protein of Mycoplasma gallisepticum agglutinin on the cell surface of Bacillus thuringiensis with the S-layer protein / M. Liu, S. Guo, S. Hu et al. // Vet. Microbiol. 2008. - Vol.130, N 1-2. - P. 99-106.

51. Dual infection of turkey poults with avian pneumovirus and Mycoplasma synoviae /R. S. Khehra, R. C. Jones, J. M. Bradbury et al. //Avian Pathol. 1999.- V. 28. P. 401-404

52. Dybvig, K. Molecular biology of mycoplasmas / K. Dybvig //Annu. Rev. Microbiol. 1996. - Vol. 50. - P. 25 - 57.

53. Early detection of tracheal damage in chickens by scanning electron microscopy / I. Hod, Y. Yegana, A. Herz, S. Levinsohn //Avian Dis. -1982. Vol. 26. N 6. - P. 450-457.

54. Eleven, S.H. Mycoplasma synoviae infection / S.H. Eleven // Diseases of Poultry / ed. B.W. Calnek 10th ed. Ames, IA: Iowa State Univer. Press.-1997.-P. 220-225.

55. Elgavish, S. Lectin-carbohydrate interactions: different folds, common recognition principles / S. Elgavish, B. Shaanan // Trends Biochem. Sci. -1997. Vol. 22. - P. 462-467.

56. Erdmann, Т. Untersuchungen zur Morphologie, Vermehrung und Beweglichkeit von M.gallisepticum: M.D. thesis / T. Erdmann. Mainz, Germany: Johannes Gutenberg Univer. 1976. - 146 S.

57. Evaluation and comparison of various PCR methods for detection of Mycoplasma gallisepticum infection in chickens / M. Garcia, A.N. Ikuta, S. Levisohn, S.H. Kleven // Avian Dis. 2005. - Vol. 49, N 1. - P. 125132.

58. Evaluation of cytopathologic changes induced in chicken tracheal epithelium by Mycoplasma gallisepticum in vivo and in vitro / M.J. Dykstra, S. Levisohn, O.J. Fletcher, S.H. Kleven // Am. J. Vet. Res. -1985.-Vol. 49, N l.-P.l 16-122.

59. Expression of two members of the pMGA gene family of Mycoplasma gallisepticum oscillates and is influenced by pMGA-specific antibodies /P.F. Markham, M.D.Glew, G.F. Browning et al. // Infect. Immun. -1998. Vol. 66, N 6. - P. 2845-2853.

60. Expression studies on four members of the pMGA multigene family in Mycoplasma gallisepticum S6 / M.D. Glew, P.F. Markham, G.F. Browning, I.D. Walker I I Microbiology. 1995. - Vol. 141. - P. 30053014.

61. Fabricant, J. Experimental production of complicated chronic respiratory disease infection ("airsac" disease) / J. Fabricant, P. P. Levine. // Avian. Dis.- 1962.-V. 6. P.13-23.

62. Fan, H.H. Application of polymerase chain reaction with arbitrary primers to strain identification of Mycoplasma gallisepticum / H.H. Fan, S.H. Kleven, M.W. Jackwood //Avian Dis. 1995. - Vol. 39, N 4. - P. 729735.

63. Fan, H.H. Species identification of avian mycoplasmas by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis / H.H. Fan, S.H. Kleven, M.W. Jackwood et al. II Avian Dis. 1995. -Vol. 39, N2-P. 398-407.

64. Forterre, P. Where is the root or the universal tree of life? /Р. Forterre, H. Philippe //Bioessays. 1999. - Vol. 21. - P. 871-879.

65. Fox, G.E. How close is close? 16S rRNA sequence identity may not be sufficient to guarantee species identity /G.E. Fox, J.D. Wisotzkey, P. Jurtshuk // Int. J. Syst. Bacteriol. 1992. - Vol. 42. - P. 166-170.

66. GAA trinucleotide repeat region regulates M9IpMGA gene expression and Mycoplasma gallisepticum / L. Liu, K. Dybvig, V.S. Panangala et al. II Infect. Immun. 2000. - Vol. 68. - P. 871- 876.

67. Gatt, S. Lysophospholipase-catalyzed hydrolysis of lysophospholipids in Mycoplasma gallisepticum membranes IS. Gatt, B. Morag, S. Rottem // J. Bacteriol. 1982.-Vol. 151, N3.-P. 1095-1101.

68. Georgiades, G. Cases of swollen head syndrome in broiler chickens in Greece /G. Georgiades, P. Iordanidis, M. Koumbati // Avian Dis. 2001. -Vol. 45. N3.-P. 745-750.

69. Ghosh, A. Lack of repair of ultraviolet light damage in Mycoplasma gallisepticum /А. Ghosh, J. Das, J. Maniloff// J. Mol. Biol. 1977. - Vol. 116, N2.-P. 337-344.

70. Hasegawa, M. Estimation of branching dates among primates by molecular clocks of nuclear DNA which slowed down in hominoidea / M. Hasegawa, H. Kishino, T.A. Yano // J. Hum. Evol. 1989. - Vol. 18. -P. 461-476.

71. Homologue of macrophage-activating lipoprotein in Mycoplasma gallisepticum is not essential for growth and pathogenicity in tracheal organ cultures /P.F. Markham, A. Kanci, G. Czifra et al. I I J. Bacteriol.-2003. Vol. 185, N 8. - P. 2538-47.

72. Hoorfar, J. Critical aspects of standardization of PCR /J. Hoorfar, N. Cook // Methods Mol. Biol. 2003. - Vol. 216. - P. 51-64.

73. Hunter, P. R. Numerical index of the discriminatory ability of typing systems: an application of Simpson's index of diversity /Р. R. Hunter, M. A. Gaston // J. Clin. Microbiol. 1988. - Vol. 26. - P. 2465-2466.

74. Huynen, M.A Measuring genome evolution /М.А. Huynen, P. Bork // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95. - P. 5849-5856.

75. Identification of fibronectin-binding proteins in Mycoplasma gallisepticum strain R /М. May, L. Papazisi, T.S. Gorton, S.J.Geary // Infect. Immun.-2006. Vol. 74, N3.-P. 1777-1785.

76. Identification of major immunogenic proteins of Mycoplasma synoviae'isolztQs / R.Bercic, B.Slavec, M. Lavric et al. // Vet. Microbiol. -2008.-Vol.127.-P.147-154.

77. Incorporation and modification of exogenous phosphatidylcholines by mycoplasmas / S. Rottem, L. Adar, Z. Gross et al. II J.Bacteriol. 1986. -Vol. 167.-P. 299-304.

78. Infectious bronchitis / D. Cavanagh, S. A. Naqi, B.W. Calnek et al. //Diseases of Poultry.- 10th ed.- Ames, IA: Iowa Univer. Press, 1997. P. 511-526.

79. Inter- and intraspecies comparison of the 16S-23S rRNA operon intergenic spacer regions of six Listeria spp /Т. A. Graham, E. J. Golsteyn-Thomas J. E. Thomas, V. P. J. Gannon // Int. J. Syst. Bacteriol. 1997. - Vol. 47. - P. 863-869.

80. Isolation and characterization of a 6/85-like Mycoplasma gallisepticum from commercial laying hens / S.J Throne Steinlage, N. Ferguson, J.E. Sander et al. I/ Avian. Dis. 2003. - Vol. 47, N 2. - P. 499-505.

81. Jan, G. Purification of Mycoplasma gallisepticum membrane proteins p52, p67 (pMGA), and p77 by high-performance liquid chromatography /G. Jan, C. Brenner, H. Wroblewski I I Protein' Expression and Purification. -1996.-Vol. 7.-P. 160-166.

82. Jagoueix, S.Comparison of the 16S/23S ribosomal intergenic regions of Candidatus Liberobacter asiaticum and Candidatus Liberobacterafricanum / S. Jagoueix, J. M. Bove, M. Gamier // Int. J. Syst. Bacteriol. -1997. Vol. 47. - P. 224-227.

83. Jones, B.V. The preparation of chicken tracheal organ cultures for virus isolation, propagation and titration / B.V. Jones, R.M. Hennion // Methods Mol. Biol. -2008. Vol. 454. - P. 103-107.

84. Kasper, D.L. Bacterial capsule—old dogmas and new tricks/ D.L. Kasper // J. Infect. Dis. 1986. - Vol. 153, N 3. - P. 407-415.

85. Kempf, I. Comparison of serological tests for detection of Mycoplasma gallisepticum antibodies in eggs and chicks hatched from experimentally infected hens / I. Kempf, F. Gesbert, M. Guittet // Res. Vet. Sci. 1997. -Vol. 63, N3.-P. 211-213.

86. Kempf, I. DNA amplification methods for diagnosis and epidemiological investigations of avian mycoplasmosis / I. Kempf //Acta Vet. Hung. -1997. Vol. 45, N 3. - P. 373-386.

87. Kenny, G.E. Mycoplasma contamination of cell cultures / G.E. Kenny //1. Gylstorff (ed.). Infectionen durch Mycoplasmatales. Germany:VEB, 1985.-S. 210-227.

88. Kheyar, A. The 64 kDa lipoprotein of Mycoplasma gallisepticum has two distinct epitopes responsible for haemagglutination and growth inhibition / A. Kheyar, S.K. Reddy, A. Silim // Avian Pathol. 1995. - Vol. 24. - P. 55-68.

89. Kleven, S. H. Antibody response to avian mycoplasmas / S.H. Kleven // Am. J. Vet. Res. 1975. - Vol. 36. - P. 563-565.

90. Lam, K.M. Mycoplasma gallisepticum-'mduced alterations in cytokine genes in chicken cells and embryos / K.M. Lam // Avian Dis. 2004. -Vol. 48, N 1.-P. 215-219.

91. Langman, R.E. A theory of the ontogeny of the chicken humoral immune system: the consequences of diversification by gene hyperconversion and its extension to rabbit / R.E. Langman, M. Cohn // Res. Immunol. 1993. -Vol. 144.-P. 422-446.

92. Laryngotracheitis IT. J. Bagust, J. S. Guy, B. W. Calnek et al. II Diseases of Poultry.- 10th ed.- Ames, IA: Iowa Univer. Press, 1997. P. 527-540.

93. Lauerman, L. H. Mycoplasma PCR Assays / L. H. Lauerman // Nucleic Acid Amplification Assays for Diagnosis of Animal Diseases /Am. Assoc. Vet. Lab. Diagn.- Auburn, AL, 1998. P. 41-52.

94. Le Grimellec, C. Analysis of membrane fractions from Mycoplasma gallisepticum / C. Le Grimellec, M. Zollinger, M.C. Giocondi // Biochim Biophys Acta. 1982. - Vol. 689, N 2. - P. 309-318.

95. Legume lectin structure / R. Loris, T. Hamelryck, J. Bouckaert, L. Wyns //Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1383. - P. 9-36.

96. Levisohn, S. A quantitative study of single and mixed infection of the chicken trachea by Mycoplasma gallisepticum IS. Levisohn, M.J. Dykstra 11 Avian Dis. 1987. - Vol. 31. N 1. - P. 1-12.

97. Ley, D.H. Mycoplasma gallisepticum infection / D.H. Ley, H.W. Yoder // Diseases of Poultry.- 10th ed.- Ames, IA: Iowa Univer. Press, 1997. P. 194-200.

98. Lipid composition and synthesis in the pleuropneumonia-like organism Mycoplasma gallisepticum / M.E. Tourtellotte, R.G. Jensen, G.W. Gander, H.J. Morowitz // J. Bacteriol. 1963. - Vol. 86. - P. 370-379.

99. Liu, L. Trinucleotide GAA repeats dictate pMGA gene expression in Mycoplasma gallisepticum by affecting spacing between flanking regions / L. Liu, V.S. Panangala, K. Dybvig // J. Bacteriol. 2002. - Vol. 184, N 5.-P. 1335-1339.

100. Legume lectin structure / R. Loris, T. Hamelryck, J. Bouckaert, L. Wyns //Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1383. - P. 9-36.

101. Lymphocytic infiltration in the chicken trachea in response to Mycoplasma gallisepticum infection / J.E. Gaunson, C.J. Philip, K.G. Whithear, G.F. Browning // Microbiology. 2000. - Vol. 146, N 5. - P. 1223-1229.

102. Maniloff, J. Partial purification of a membrane-associated deoxyribonucleic acid complex from Mycoplasma gallisepticum /J.

103. Maniloff, D.C. Quinlan // J. Bacteriol. 1974. - Vol. 120, N 1. - P. 495501.

104. Maniloff, J. Ultrastructure and ribosomes of Mycoplasma gallisepticum /J.Maniloff, H.J. Morowitz, R.J.Barrnett // J. Bacteriol.- 1965. Vol. 90, N l.-P. 193-204.

105. Marois, C. Polymerase chain reaction for detection of Mycoplasma gallisepticum in environmental samples / C. Marois, F. Dufour-Gesbert, I. Kempf//Avian Pathol.-2002.-Vol. 31, N2.-P. 163-168.

106. Mekkes, D.R. Real-time polymerase chain reaction for the qualitative and quantitative detection of Mycoplasma gallisepticum / D.R. Mekkes, A. Feberwee // Avian Pathol. 2005. - Vol. 34, N 3. - P. 348-354.

107. Miloseviac-Berliac, T. Sequence polymorphisms within the pMGA genes and pMGA antigenic variants in Mycoplasma gallisepticum /Т. Miloseviac-Berliac, D. Benacina, P. Dovac // FEMS Microbiol. Letters. — 2000.-Vol. 184.-P. 133-139.

108. Mixed infection of turkeys with Mycoplasma synoviae and reovirus: Field and experimental observations / A. AlAfaleq, J.Bradbury, R. Jones et al. II Avian Pathol. 1989. -V.18. P.441 - 453

109. Mohammed, H. О. Economic impact of M.gallisepticum and M. synoviae in commercial layer flocks / H. O. Mohammed, Т. E. Carpenter, R. Yamamoto // Avian. Dis.- 1987.- V. 31.- P.477 482.

110. Molecular and biochemical analysis of a 105 kDa Mycoplasma gallisepticum cytadhesin (GapA) /M.S. Goh, T.S. Gorton, M.H. Forsyth etal. //Microbiology. 1998.-Vol. 144, N 11.-P. 2971-2978.

111. Molecular cloning of a member of the gene family that encodespMGA, a hemagglutinin of Mycoplasma gallisepticum / P.F. Markham, M.D.Glew, K.G. Whithear, I.D. Walker // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61. - P. 903909.

112. Molecular characterization of the Mycoplasma gallisepticum pvpA gene which encodes a putative variable cytadhesin protein / S. Boguslavsky, D. Menaker, I. Lysnyansky et al. // Infect. Immun. 2000. - Vol. 68, N 7. -P. 3956-3964.

113. Molecular variability of the adhesin-encoding gene pvpA among Mycoplasma gallisepticum strains and its application in diagnosis / T. Liu, M. Garcia, S.Levisohn et al. // J.Clin. Microbil.- 2001. Vol. 39. - P. 1882-1888.

114. Morowitz, H.J. Analysis of the life cycle of Mycoplasma gallisepticum /H.J.Morowitz, J. Maniloff // J. Bacteriol. 1966. - Vol. 91, N 4. - P. 1638-1644.

115. Mrazek, J. Analysis of distribution indicates diverse functions of simple sequence repeats in Mycoplasma genomes /J. Mrazek // Mol. Biol. Evol. -2006.-Vol. 23, N 1. -P. 1370-1385.

116. Multigene families encoding the major hemagglutinins in phylogenetically distinct mycoplasmas /А.Н. Noormohammadi, P.F. Markham, M.F. Duffy et al. 11 Infect. Immun. 1998. - Vol. 66. - P. 3470-3475.

117. Mycoplasma gallisepticum infection / D.H. Ley, H. W., Yoder, B. W. Calnek et al. II Diseases of Poultry. 10 ed. - Ames, Iowa: Univers. Press. - 1997.-P. 194-207.

118. Mycoplasma gallisepticum: influence of cell invasiveness on the outcome of experimental infection in chickens / P. Much, F. Winner, L. Stipkovits et al. И FEMS Immun. Med. Microbiol. 2002. - Vol. 34. - P. 181186.

119. Mycoplasma gallisepticum invades chicken erythrocytes during infection / G. Vogl, A. Plaickner, S.Szathmary et al. //Infect. Immun. 2007-Vol.76. - P.71-77.

120. Mycoplasma gallisepticum strain differentiation by arbitrary primer PCR (RAPD) fingerprinting /S.J. Geary, M.H. Forsyth, S. Aboul Saoud et al. II Mol. Cell. Probes. 1994.-Vol. 8, N4.-P. 311-316.

121. Mycoplasma infection / D.H. Ley, Y. M. Saif, H. J. Barnes et al. // Diseases of Poultry. 11th ed.- Ames, IA: Iowa Univer. Press, 2003. - P. 722-744.

122. Mycoplasma synoviae has two distinct phase-variable major membrane antigens, one of which is a putative hemagglutinin /А.Н. Noormohammadi, P.F. Markham, K.G. Whithear et al. // Infect. Immun. 1997. - Vol. 65. - P. 2542-2547.

123. Mycoplasma synoviae infection / S.H. Kleven, B. W. Calnek, H.J Barnes et al. II Diseases of Poultry. 10 ed. - Ames, Iowa: Univers. Press. -1997.-P. 220-227.

124. Mycoplasma synoviae infection / S.H. Kleven, Y.M. Saif, HJ Barnes et al. 11 Diseases of Poultry. 12 ed. - Ames, Iowa: Univers. Press. - 2003. -P. 756-766.

125. Mycoplasma synoviae invades non-phagocytic chicken cells in vitro fD. Dusanic, R.L. Bercic I. Cizelj et al. И Vet. Microbiol.- 2009. -V. 138. P. 114-119.

126. Mycoplasmas in the etiology of multifactorial respiratory disease / S.H. Kleven, R.M. Fulton, M. Garcia et al. II Avian Dis. 2004. - Vol. 48, N 3.-P. 562-569.

127. Mycoplasmosis / S.H. Kleven, D.E. Swayne, J.R. Glisson et al. II A Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens. 4th ed. - Kennett Square, PA, -1998. - P.74-80.

128. Noormohammadi, A.H. Role of phenotypic diversity in pathogenesis of avian mycoplasmosis /А.Н. Noormohammadi // Avian Pathol. 2007— Vol. 36, N6. -P. 439-444.

129. Natural case of salpingitis apparently caused by Mycoplasma gallisepticum in chickens /Т. Nunoya, M. Tajima, T. Yagahashi, S.Sannai // Avian Pathol. 1997.- Vol. 26. - P. 391-398.

130. Naylor, C. J. Exacerbation of Mycoplasma gallisepticum infection in Turkeys by rhinotracheitis virus/ C. J. Naylor, A. R. Al-Ankari, A. I. Al-Afaleq et al. I/ Avian Pathol. 1992,- V.21. P.295 - 305.

131. OIE quality Standard and Guidelines forVeterinary Laboratories: infectious diseases. OIE, Paris, 2008.

132. Olson, N.O. Studies of infectious synovitis in chickens / N.O. Olson, D.C. Shelton, J.K. Bletner et al. II Am. J. Vet. Res. 1956. - V.-17. P. 747-754.

133. Olson, N.O. Mycoplasma synoviae infection /N.O. Olson // Diseases of Poultry, 8th edition. Diseases of Poultry. 8 ed. - Ames, Iowa: Univers. Press. - 1984.P. 212-220.

134. Oshima, K. Phylogenetic relationships among Mycoplasmas based on the whole genomic information / K.Oshima, H.Nishida // J. Mol. Evol. -2007.-Vol. 65. P.249-258.

135. Pakpinyo, S. Molecular characterization and determination of antimicrobial resistance of Mycoplasma gallisepticum isolated fromchickens IS. Pakpinyo, J.Sasipreeyajan // Vet. Microbiol. 2007. - Vol. 125.-P. 59-65.

136. Pancholi, V. Multifunctional alpha-enolase: its role in diseases /V. Pancholi // Cell. Mol. Life Sci. 2001. - Vol. 58, N 7. - P. 902-920.

137. Pathogenicity of Mycoplasma lipofaciens strain ML64 for turkey embryos /М. Lierz, S. Deppenmeier, A.D. Gruber et al. II Avian Pathol. 2007. -Vol. 36, N5.-P. 389-393.

138. Phillips, M.C. Mechanisms and consequences of cellular cholesterol exchange and transfer /М.С. Phillips, W.J. Johnson, G.H. Rothblat // Biochim. Biophys. Acta.- 1987. Vol. 906, N 3. - P. 223-276.

139. Portnoy, V. Mycoplasma gallisepticum as the first analyzed bacterium in which RNA is not polyadenylated N. Portnoy, G. Schuster // FEMS Microbiol. Letters. -2008. Vol. 283. - P. 97-103.

140. Pour-El, I. Construction of mini-Tn4001tet and its use in Mycoplasma gallisepticum / I. Pour-El, C. Adams, F.C. Minion // Plasmid. 2002. -Vol. 47, N2.-P. 129-137.

141. Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of Mycoplasma gallisepticum isolates from turkeys from the central valley of California / B.R. Charlton, A.A. Bickford, R.P. Chin, R.L.Walker // J. Vet. Diagn. Invest. 1999.-Vol. 11, N5.-P. 408-415

142. Razin, S. Mycoplasma adhesion / S. Razin, E Jacobs // J. Gen. Microbiol. 1992. - Vol. 138. - P. 407- 422.

143. Razin, S. Mycoplasma adherence / S. Razin, M.F. Barile // The Mycoplasmas. Vol.4. Mycoplasma Pathogenicity. Orlando, FL: Acad. Press, 1985.-P. 161-202.

144. Razin, S. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas / S. Razin, D. Yogev, Y. Naot // Microbiol. Mol. Biology Rev. 1998. - Vol. 62.-P. 1094-1156.

145. Reductive evolution suggested from the complete genomesequence of a plant-pathogenic phytoplasma / K. Oshima, S. Kakizawa, H. Nishigawa et al. II Nature Genet. 2004.- Vol. 36. - P. 27-29.

146. Rodwell, A.W. MG requires exogenous phospholipids for growth / A.W Rodwell // FEMS Microbiol. Letters. 1983. - Vol. 172. - P. 265-268.

147. Role of Mycoplasma synoviae in commercial layer Escherichia coli Peritonitis Syndrome / Z. Raviv, N. Ferguson-Noel, V. Laibinis et al. //Avian Dis. 2007. V. 51. P. 685-690.

148. Rosengarten, R. Variant colony surface antigenic phenotypes within mycoplasma strain populations: implications for species identification and strain standarization / R. Rosengarten, D Yogev // J. Clin. Microbiol. -1996.-Vol. 34.-P. 149-158.

149. Rottem, S. Cholesterol distribution and movement in the Mycoplasma gallisepticum cell membrane /S. Rottem, G.M. Slutzky, R.Bittman // Biochemistry. 1978. - Vol. 17, N 14. - P. 2723-2726.

150. Rottem, S. Proton motive force across the membrane of Mycoplasma gallisepticum and its possible role in cell volume regulation / S. Rottem,

151. C. Linker, Т.Н. Wilson // J Bacteriol. 1981. - Vol. 145, N 3. - P. 12991304.

152. Rottem, S. Symmetrical distribution and rapid transbilayer movement of cholesterol in Mycoplasma gallisepticum membranes /S. Rottem, D. Shinar, R. Bittman // Biochim. Biophys Acta. 1981. - Vol. 649, N 3. -P. 572-580.

153. Roussan, D. Molecular Survey of Avian Respiratory Pathogens in Commercial Broiler Chicken Flocks with Respiratory Diseases in Jordan /

154. D. A. Roussan, R. Haddad, G. Khawaldeh //Poultry Sci. 2009. - V. 87. P.444-448.

155. Sachadyn, P. The construction and use of a PCR internal control / P. Sachadyn, J. Kur // Mol. Cell. Probes. 1998. - Vol. 12. -P. 259-262.

156. Sahu, S.P. Comparison of the characteristics of avian reoviruses isolated from the digestive and respiratory tract, with viruses isolated from the synovia / S.P. Sahu, N.O. Olson // Am. J. Vet. Res.- 1975. Vol. 36, N 6. -P. 847-50.

157. Screening for infectious diseases of animals // Applied Veterinary Epidemiology and the Control of Disease in Populations / B. Toma B. Dufour, M. Sanaa et al. IIAEEMA. Maisons-Alforr, France, 1999. - P. 41-86.

158. Slavi, M. F. Development and evaluation of the polymerase chain reaction method for diagnosis of Mycoplasma, gallisepticum infection in chickens

159. M.F. Slavi, R. F. Wang, W. W. Cao // Mol. Cell. Probes. 1993. - N. 7. -P. 459-463.

160. Strain differentiating real-time PCR for Mycoplasma gallisepticum live vaccine evaluation studies / Z. Raviv, S.A. Callison, N. Ferguson-Noel, S.H. Kleven //Vet. Microbiol. -2008. Vol.129 - P. 179-187.

161. Structural and functional characterization of an organic hydroperoxide resistance protein from Mycoplasma gallisepticum / C. Jenkins, R. Samudrala, S.J. Geary, S.P. Djordjevic // J.Bacteriol.- 2008. Vol. 190, N6.-P. 2206-2216.

162. Swine and poultry pathogens: the complete genome sequences of two strains of Mycoplasma hyopneumoniae and a strain of Mycoplasma synoviae/ A.T. Vasconcelos, H.B.Ferreira, C.V.Bizarro \et al. II J. Bacterid-2005.-Vol. 187.-P. 5568-5577.

163. Tajima, M. An ultrastructural study on the interaction of Mycoplasma gallisepticum with the chicken tracheal epithelium / M. Tajima, T. Nunoya, T. Yagihashi // Am. J. Vet. Res. 1979. - Vol. 40, N 7. - P. 1009-1014.

164. Tajima, M. Capsular material of Mycoplasma gallisepticum and its possible relevance to the pathogenic process / M. Tajima, T.Yagihashi, Y.Miki // Infect. Immun. 1982. - Vol. 36. N 2. - P. 830-833.

165. Thomas, L. Methaemoglobin formation by MG: the role of hydrogen peroxide / L. Thomas, W. Bitensky // Nature (London). 1966. - Vol. 210.-P. 963-964.

166. Thomas, L. Studies of PPLO infection. The production of cerebral polyarteritis by MG in turkeys: the neurotoxic property of the mycoplasma / L. Thomas, M. Davidson, R.McCluskey // J. Exp. Med. -1966a.-Vol. 123.-P. 897-912.

167. Thomas, L. The neurotoxins of M.neurolyticum and MG / L. Thomas 11 Ann. N.Y.Acad. Sci. 1967. - Vol. 143. - P. 218-224.

168. The complete genome and proteome of Mycoplasma mobile / J.D. Jaffe, N. Stange-Thomann, C. Smith et al. II Genome Res 2004. - Vol. 4. -P. 1447-1461.

169. The complete genome sequence of the avian pathogen Mycoplasma gallisepticum strain Rlow /L. Papazisi, T.S. Gorton, G. Kutish, P.F. Markham et al. // Microbiology. 2003. - Vol. 149. - P. 2307-2316.

170. The complete genome sequence of the Gram-positive bacterium Bacillus subtilis / F. Kunst, N. Ogasawara, I.Moszer et al. II Nature. 1997. -Vol. 390.-P. 249-256.

171. The complete genomic sequence of Mycoplasma penetrans, anintracellular bacterial pathogen in humans / Y. Sasaki, J. Ishikawa, A. Yamashita, K. Oshima et al. II Nucleic Acids Res. 2002. - Vol. 30. -P. 5293-5300.

172. The genome sequence of Mycoplasma hyopneumoniae strain 232, the agent of swine mycoplasmosis /F.C. Minion, EJ. Lefkowitz, M.L. Madsen et al. //J Bacteriol. 2004. - Vol. 186, N21.-P. 7123-7133.

173. The genome sequence of Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC typestrain PG1, the causative agent of contagious bovine pleuropneumonia / J. Westberg, A. Persson, A. Holmberg et al. II Genome Res.- 2004. Vol. 14. - P. 221-227.

174. The complete sequence of the mucosal pathogen Ureaplasma urealyticum /J.I. Glass, E.J. Lefkowitz, J.S. Glass et al. II Nature. 2000. - Vol. 7. -P. 757-762.

175. The minimal gene complement of Mycoplasma genitalium /С.М. Fraser, J.D. Gocayne, O. White, M.D.Adams //Science. 1995. - Vol. 270. - P. 397-403.

176. The Mycoplasma gallisepticum 16S-23S rRNA intergenic spacer-region sequence as a novel tool for epizootiological studies / Z. Raviv, S.A. Callison, N. Ferguson-Noel et al. II Avian Dis.- 2007. Vol. 51, N 2. -P. 555-560.

177. The Mycoplasma gallisepticum OsmC-like protein MG1142 resides on the cell surface and binds heparin / C. Jenkins, S.J. Geary, M. Gladd, S.P. Djordjevic//Microbiology.-2007.-Vol. 153. N5.-P. 1455-1463.

178. The non-variable 78 kDa Mycoplasma synoviae membrane protein has a diagnostic potential / P.F. Markham, S. Zohari, A. Kanci et al. II Proce. 15th Congr. Inter. Organization for Mycoplasmology. Athens, GA, 2004.- P. 86.

179. The organisation of the multigene family which encodes the major cell surface protein, pMGA, of Mycoplasma gallisepticum / P.F. Markham, M.D. Glew, J.E. Sykes et al. IIFEBS Letters. 1994. - Vol. 352, N 3. -P. 347-352.

180. The rationale and method for constructing internal control DNA used in pertussis polymerase chain reaction /F.M. Muller, N. Schnitzler, O. Cloot et al. II Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 1998. - Vol. 31. - P. 517-523.

181. Tracheal organ cultures as a useful tool to study Felid herpesvirus infection in respiratory epithelium / G. Leeming, M.L. Meli, P. Cripps et al. IIJ Virol. Methods. 2006. - Vol. 138, N 1-2. - P. 191-195.

182. Transition mutations in the 23 S rRNA of erythromycin-resistant isolates of Mycoplasma pneumoniae / T.S. Lucier, K. Heitzman, S.K Liu, P.C. Hu //Antimicrob. Agents Chemother. 1995. - Vol. 39. - P. 2770-2773.

183. Transposon mutagenesis of Mycoplasma gallisepticum / P.L. Whetzel, L.L. Hnatow, C.L. Keeler, J.E. Dohms // Plasmid. 2003. - Vol. 49, N 1. -P. 34-43.

184. Use of an alkaline phosphatase-labelled probe for the detection of Mycoplasma synoviaein chickens / H. Salisch, M. Ryll, R. Leise, U. Neumann // J. Vet. Med. B. 2000. - Vol. 47, N 1. - P. 27-35.

185. Wambura, P.N. Comparative propagation of shape Newcastle disease virus (strains 1-2 and V4) on chicken embryo tracheal explants / P.N. Wambura // Vet. Res. Commun. 2006. - Vol. 30, N 6. - P. 673-677.

186. Wang, H. Multiplex PCR for avian pathogenic mycoplasmas / H. Wang, A.A. Fadl, M.I. Khan //Mol Cell Probes. 1997. - Vol. 11, N 3. - P. 211216.

187. Winner, F. In vitro cell invasion of Mycoplasma gallisepticum / F. Winner, R. Rosengarten, C. Citty // Infect. Immun. 2000. - Vol. 68. - P. 4238- 4244.

188. Variable expression of epitopes on surface of Mycoplasma gallisepticum demonstrated with monoclonal antibodies / D. Bencina, S. H. Kleven, M. Elfaki et al. // Avian Pathol. 1994. - Vol. 23. - P. 19-36.

189. Woese, C.R. Towards a natural system of organisms proposal for the domains archaea, bacteria, andeucarya / C.R. Woese, O. Kandler, M.L. Wheelis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1990. - Vol. 87. - P. 45764579.

190. Yashpal, S. M. Detection of three avian respiratory viruses by single-tube multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction assay / S. M. Yashpal, P. P. Devi, M. G. Sagar // J. Vet. Diagn. Invest. 2004. - V. 16. P. 244-248

191. Yogev, D. Genetic and antigenic relatedness between Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae/ D. Yogev, S. Levisohn, S. Razin // Vet. Microbiol. 1989. - Vol. 19. - P. 75-84.