РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИНОЛИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА МЕТОДОМ LC/MS/MS тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Абдрашитов Рустем Хамзиевич

• Абдрашитов Рустем Хамзиевич
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Абдрашитов Рустем Хамзиевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Система метаболизма (биотрансформации) лекарственных средств

1.1.1. История изучения метаболизма лекарственных препаратов

1.1.2. Системы и ферменты, участвующие в метаболизме ЛС 13 1.1.2.1. Основные фазы метаболизма. Суперсемейство цитохром Р450

1.2. Функциональные особенности и полиморфизм изофермента CYP 2D6

1.2.1. Р-блокаторы как субстрат CYP 2D6

1.2.2. Метаболизм антипсихотических ЛС с участием CYP 2D6

1.2.3. Влияние заболеваний печени на активность CYP 2D6

1.3. Методы определения активности СУР 2D6 (фенотипирование)

1.3.1. Количественное определение дебризохина и спартеина

1.3.2. Количественное определение трамадола

1.3.3. Количественное определение метопролола

1.3.4. Количественное определение декстрометорфана

1.4. Определение активности CYP 2D6 по отношению

пинолин/6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-Р-карболин

1.4.1. Скрининг эндогенных субстратов CYP 2D6

1.4.2. Физические, химические и биохимические свойства пинолина

1.4.3. Существующие методики определения пинолина

1.4.3.1. Определение ex vivo

1.4.3.2. Определение in vivo

1.5. Метод ВЭЖХ-МС/МС

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ (СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ)

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Оборудование и материалы

2.1.1. Материалы

2.1.1.1. Стандарты определяемых веществ

2.1.1.2. Биологическая матрица

2.1.1.3. Реактивы 42 2.1.2. Оборудование

2.2. Разработанная методика

2.3. Дизайн фармакологической части 44 ГЛАВА 3. ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 46 3.1 Разработка методики определения отношения пинолин и

6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-Р-карболин

3.1.1. Выбор внутреннего стандарта

3.1.2. Пробоподготовка

3.1.2.1. Отбор проб. Пробоподготовка

3.1.2.2. Пробоподготовка плазмы крови

3.1.2.3. Пробоподготовка мочи

3.1.2.4. Выводы по результатам пробопоготовки

3.1.3. Хроматографические условия

3.1.4. Масс-спектр условия 54 3.2. Валидация методики определения пинолина и

6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-Р-карболин

3.2.1. Параметры пригодности хроматографической системы

3.2.1.1. Селективность

3.2.1.2. Линейность зависимости отклика от концентраций определяемых веществ

3.2.1.2.1. Получение данных для построения калибровочного графика

3.2.1.2.2. Построение калибровочного графика

3.2.1.2.3. Оценка линейности

3.2.1.3. Оценка правильности и прецизионности методики

3.2.1.4. Оценка предела количественного определения

3.2.1.5. Эффект матрицы

3.2.1.6. Стабильность анализируемых веществ 66 3.2.1.6.1. Стабильность стандартного раствора

3.2.1.6.2. Стабильность пинолина и его метаболита в составе биологической матрицы при хранении в замороженном состоянии

3.2.1.6.3. Стабильность пинолина и его метаболита после пробоподготовки 68 3.2.1.7. Тест на разведение 70 3.3. Зависимость активности изофермента CYP 2D6 и изменения отношения пинолина и 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-Р-карболина

3.3.1. Изучение влияния почечной патологии на активность

изофермента CYP 2D6

3.3.2. Изменение активности изофермента CYP 2D6 под действием ингибиторов и индукторов 75 ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 77 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

CYP - cytochrome P450 - цитохром Р450 НЛР - нежелательные лекарственные реакции

LC/MS/MS - ВЭЖХ-МС/МС - высокоэффективная жидкостная хроматография с тандемным масс-спектрометрическим детектированием

ЛС - лекарственное средство

FDA - Food and Drug Administration - Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов

MEGX - monoethylglycinexylidide - моноэтил-глицин-ксилидит

HPLC - ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

М1 - моно-О-дезметилтрамадол

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ТФЭ - твердофазная экстракция

MRM - multiple reaction monitoring - мониторинг множественных реакций

EMA - European Medicines Agency - Европейское агентство лекарственных средств

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИНОЛИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА МЕТОДОМ LC/MS/MS»

Актуальность темы

С проблемой частого развития нежелательных лекарственных реакций сталкивается каждый врач и частично решить данную проблему позволяют персонализированные подходы к фармакотерапии. Одним из инструментов персонализированной медицины является изучение фармакокинетики лекарственных средств.

Одним из основных фармакокинетических процессов, определяющих индивидуальный фармакологический ответ, является метаболизм, или биотрансформация лекарственных средств. Большой вклад в метаболизм многих ксенобиокиков вносит система цитохрома P450, которая состоих из множества изоферментов, отвечающих за биотрансформацию как экзогенных, так и эндогенных веществ. Однако в метаболизме лекарственных средств принимают участие ферменты семейств I, II, III. Наиболее важными для метаболизма ЛС и хорошо изученными изоферментами цитохрома Р450 являются следующие изоферменты: CYP 1Л1, CYP 1Л2, CYP 2А6, СТР 2В6, СТР 2Б6, СТР 2С9, СТР 2С19, СТР 2Е1, СТР 3Л4 [11].

Определение активности того или иного фермента метаболизма ЛС по фармакокинетике его специфического субстрата («маркерного» субстрата) и его метаболита называется фенотипированием. Существуют методики определения изоферментов с применением экзогенных или эндогенных «маркеров».

В настоящее время за рубежом для оценки активности СТР 2Э6 в научных целях широко используется экзогенное вещество декстрометорфан. Данный тест обладает рядом выраженных недостатков, таких как необходимость внутривенного или перорального введения препарата, применение которого сопряжено с риском развития НЛР. Также декстрометорфан в виде монокомпонентного препарата не зарегистрирован на территории РФ, что делает практически невозможным его применение в клинической практике.

В связи с этим более перспективны методы оценки активности СТР 2Э6 по концентрации в биологических жидкостях эндогенного субстрата и его

метаболита. Такими субстратами являются пинолин и его метаболит 6-гидрокси-1, 2, 3, 4,- тетрагидро-Р-карболин, который образуются преимущественно под действием СУР 2Э6 [55]. Поскольку определение эндогенного вещества исключает необходимость введения какого-либо лекарственного средства, то у пациентов не будут развиваться НЛР и такая методика будет более безопасной для больного.

Все вышесказанное определяет актуальность настоящего исследования.

Цель исследования - разработать методику количественного определения пинолина и его метаболита методом LC/MS/MS для оценки активности изофермента СУР 2Б6 с целью рационализации фармакотерапии.

Задачи исследования:

1. Выявить и теоретически обобщить, согласно результатам отечественных и зарубежных литературных источников, данные, отражающие применение различных методик определения активности изофермента СУР 2D6 методом ВЭЖХ.

2. Подобрать оптимальные условия количественного определения пинолина и 6-гидрокси-1, 2, 3, 4,-тетрагидро-Р-карболина в биологических жидкостях методом ЬС/МБ/МБ.

3. Провести валидацию разработанной методики.

4. Изучить активность СУР 2D6 у пациентов с помощью разработанной методики.

5. Изучить изменение активности СУР 2D6 у пациентов при приеме ингибиторов активности данного изофермента.

6. Сделать вывод о возможности использования данной методики для определения изменений активности при приеме ингибиторов активности СУР 2Б6.

Научная новизна. В данной работе впервые представлены разработанные и валидированные методики количественного определения пинолина и его метаболита 6-гидрокси-1, 2, 3, 4,-тетрагидро-Р-карболина в плазме крови и моче человека в диапазоне концентраций от 250 до 1500 пг/мл. На основании

экспериментальных данных сделан вывод о возможности определения активности СТР 2D6 у пациентов с помощью разработанной методики. Также применение данной методики количественного определения возможно при назначении ингибиторов изофермента СТР 2Б6.

Методология и методы исследования. В ходе выполнения работы были применены методы пробоподготовки с твердофазной экстракцией и высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием.

Теоретическая и практическая значимость результатов исследования. Разработанные биоаналитические методики были внедрены в практическую деятельность в лаборатории клинической фармакологии ФГБУ ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России и в филиале «Клиническая фармакология» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России.

Степень достоверности результатов исследования. Первичные данные, полученные в результате проведения настоящего исследования, получены при помощи современных методов анализа, являются достоверными и точными, что подтверждено в ходе проведения процедуры

валидации. Использованное в работе оборудование имело действующие свидетельства о поверке и зарегистрировано в Реестре средств измерений, что позволяет считать результаты исследования достоверными.

Апробация работы.

Апробация работы проведена на заседании кафедры фармацевтической и токсикологической химии им. А.П. Арзамасцева фармацевтического факультета Первого МГМУ имени И.М. Сеченова (2016 г.).

Основные положения работы и результаты исследования доложены на научном совете НИИ Фармации «Достижения и перспективы молодых ученых НИИ Фармации» (Москва, 2014 г.), научном совете НИИ Фармации «Достижения и перспективы молодых ученых НИИ Фармации» (Москва, 2015 г.), на Конгрессе Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (ЕЛЛСТ) (Барселона, 2015 г.).

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в проведении экспериментальных исследований, анализе и обобщении полученных результатов. Автором лично проведена разработка, валидация

методик определения пинолина и его метаболита в плазме крови человека и в моче методом ВЭЖХ-МС/МС, статистическая обработка результатов, изучена активность CYP 2D6. Вклад автора является определяющим на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально - теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 «Фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пункту 4 паспорта специальности «Фармацевтическая химия, фармакогнозия».

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 работ, из них 2 - в изданиях из Перечня ВАК и 1 - в издании, включенном в базу Scopus и Web of Science.

Связь темы исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической и токсикологической химии Первого МГМУ имени И.М. Сеченова "Совершенствование образовательных технологий додипломного и последипломного медицинского и фармацевтического образования". Номер государственной регистрации: 01.2.011.68237.

Положения, выносимые на защиту

1. Разработанные методики количественного определения пинолина и его метаболита 6-гидрокси-1, 2, 3, 4,- тетрагидро-Р-карболина в плазме крови и моче с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС.

2. Результаты валидации разработанных методик, выводы по полученным результатам.

3. Результаты определения активности СТР 2Э6 у пациентов с помощью разработанной методики.

4. Результаты использования данной методики для определения изменений активности при приеме индукторов активности СТР 2Э6.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 89 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, 6 общих выводов и списка литературы. Диссертация включает 35 таблиц и 13 рисунков. Библиографический список содержит 101 источников, из них 82 на иностранных языках.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Система метаболизма (биотрансформации) лекарственных средств 1.1.1. История изучения метаболизма лекарственных препаратов

Первые эксперименты по изучению метаболизма ЛС были впервые проведены и опубликованы более 180 лет назад, сначала на собаках в 1824 году и, затем, на людях в 1841 году [99, 92]. Данные эксперименты заложили основу современного понимания биотрансформации путем установления теории, что в организме протекает ряд химических реакций с экзогенным соединением для выведения его с мочой в химически модифицированной форме. Тем не менее, исследования метаболизма были ограничены сложностью изолирования и идентификации предполагаемых метаболитов. Однако существенный прогресс в области органической химии и аналитических методов привел к продвижению в исследованиях фармакокинетики и метаболизма ксенобиотиков.

Первой опубликованной реакцией метаболизма была реакция конъюгации с глицином. В 1841 и 1842 году, двое ученых независимо друг от друга приняли бензойную кислоту и, по сообщению исследователей, наблюдали данный конъюгат в моче «в обильном количестве» и «без видимых вредных последствий» [92, 56]. Выделенное соединение было схоже с бензойной кислотой, но при изучении строения молекулы было обнаружено, что в составе так же был азот. Идентифицировал это соединение, как гиппуровую кислоту, конъюгат глицина с бензойной кислотой, французский ученый по имени Дессень [35].

При дальнейшем исследовании бензойной кислоты было обнаружено, что окисление предшествует конъюгации. После приема коричной кислоты, наблюдали выведение гиппуровой кислоты [41, 100]. Но механизм этих преобразований не был изучен, поскольку в ту эпоху, организм считался просто сосудом, в котором проходят химические реакции. Многие реакции для химиков были «абсолютно загадочными», потому что, вне организма, эти реакции проходили в очень жестких условиях либо вообще были невозможны [29]. Например, когда в 1867 году Бски^вп и Ыаипуп опубликовали определение

фенола в моче людей и собак, которые принимали бензол, окисление бензола до фенола в условиях лаборатории считалось невозможным. На сегодняшний день провести реакцию по преобразованию бензола в фенол можно только в жестких нефизиологических условиях [67].

В 1887 после приема ацетата пиридина у собак в моче был обнаружен N-метил пиридин, таким образом, была описана реакция метилирования [52]. Кроме того, в 1887 году Jaffe и Cohn впервые обнаружили вещество, сопряженное с уксусной кислотой [54]. Затем, в 1893 году Cohn подтвердил, что N-ацетилирование является основной реакцией конъюгации [28].

В ходе проведенных экспериментов было обнаружено, что выделяемые соединения гораздо менее токсичные, чем исходные соединения. К 1893 году накопилось достаточно доказательств для внедрения в научную литературу термина «детоксикация» [70, 1].

В XIX веке считалось, что вещества модифицируются организмом в крови. Но вначале ХХ века, сторонники теории трансформации веществ в органах смогли подтвердить свои предположения с помощью таких методов, как резекция печени, перфузия печени и почек лабораторных животных. О том, что в печени проходит реакция конъюгации с глюкуроновой кислотой стало известно благодаря методу с применением серий перфузированных органов собаки (например, печени или селезенки).

Систематизировал накопившиеся труды по изучению метаболизма в 1947 году Welshman R.T. Williams. Именно Williams предложил разделить реакции метаболизма на 2 фазы, что привело к появлению до сих пор известных терминов «I фаза» и «II фаза» [98].

Благодаря достижениям в области аналитических и биохимических методов анализа, начиная с 1950-х годов, ускорились темпы изучения метаболизма. Например, распределительная хроматография позволила дифференцировать ЛС от метаболитов. Возможности абсорбционной спектрофотомерии также улучшили как количественное, так и качественное определение ЛС и

метаболитов. Впервые были выяснены кофакторы ферментативных реакций и были установлены ферментативные пути биосинтеза кофакторов. В конце 1950-х и начале 1960-х была открыта и охарактеризована система ферментов цитохрома Р450, с помощью которой происходит микросомальное окисление ЛС и стероидных гормонов [68, 58, 73, 72].

В 1983 году из печени человека были выделены, идентифицированы и охарактеризованы основные компоненты цитохрома Р450 [95]. Определение точной структуры метаболитов и их количественное определение стало возможным благодаря развитию методов масс-спектрометрии и спектроскопии ядерного магнитного резонанса.

Несмотря на то, что направление по изучению метаболизма считают зрелым, достижения техники двигают вперед исследования по данной тематике. Фармацевтическая индустрия стимулирует к развитию большинство направлений современных технологических разработок, в том числе высокоразвитые аналитические инструменты. Также с развитием «геномной эры» были изучены генетические основы метаболизма ЛС среди индивидов и популяций. В будущем изучение метаболизма будет зависеть от появления и развития новых технологий.

1.1.2. Системы и ферменты, участвующие в метаболизме ЛС

1.1.2.1. Основные фазы метаболизма. Суперсемейство цитохром Р450

Основная функция метаболизма ЛС заключается в том, чтобы облегчить выведение соединений из организма, таким образом, предотвращая нежелательное накопление чужеродных соединений или потенциально токсичных концентраций эндогенных соединений. Эта физиологическая функция описывается количественными фармакокинетическими терминами -биодоступность и клиренс. Биодоступность показывает количество принятого ЛС, которое достигло системного кровотока, т. е. количество абсорбированного ЛС минус пресистемный метаболизм. Степень выведения ЛС из системного кровотока и скорость постсистемного метаболизма характеризует клиренс. Биодоступность и клиренс в совокупности влияют на общее воздействие ЛС на

организм и количественно характеризуются площадью под фармакокинетической кривой (ЛИС) (рис. 1).

/

4

Время Н

4

2.

6. Системное кровообращения

5. Печеночная вена к полой вене до сердца

7. Почки и печень

-постсистемный метаболизм -постсистемная экскрекция через мочу и желчь

2. Двенадцатиперстная киока и тонкий кишечник -абсорбция

-пресистемный метаболизм

4. Печень

-пресистемный метаболизм

-пресистемная экскрекция через желчный проток

3. Брыжеечные вены к портальной вене печени

1. Желудок

-растворение -абсорбция

Рисунок 1 - Фармакокинетическая кривая (а) и путь перорального ЛС (Ь).

Каждое соединение обычно биотрансформируется через ряд параллельных и/или последовательных реакций, через так называемый метаболический путь и, при этом, на разных стадиях образуются различные соединения. Общий метаболизм любого соединения является суммой всех доступных путей метаболизма ЛС. Условно реакции метаболизма можно разделить на «I фазу» и «II фазу».

I фаза метаболизма включает в себя функциональные реакции (окисление, восстановление, гидролиз). С помощью этих реакций вводятся новые полярные функциональные группы, изменяются существующие группы с повышением полярности или гидролизуются закрытые полярные группы.

II фаза характеризуется реакциями конъюгации (глюкуронирование, сульфонирование, конъюгация с глицином/глютамином/глютатионом, ацетилирование, метилирование). После конъюгации резко увеличивается полярность соединения, что способствует лучшему выведению.

Следует отметить, что все реакции биотрансформации проходят в очень мягких условиях: нейтральный рН, приблизительно 37°С, водный растворитель и атмосферное давление. Только благодаря ферментам, участвующим в реакциях в качестве катализаторов, реакции протекают в таких условиях.

При определении биодоступности и фармакокинетики ЛС следует учитывать роль различных семейств ферментов, которые участвуют в его метаболизме. Оценивают метаболизм ЛС по тем ферментам, которые проявляют большую активность по отношению к субстрату.

В реакциях I фазы метаболизма в качестве катализаторов участвуют различные классы ферментов. Поскольку изоферменты суперсемейства цитохрома Р450 широко представлены в организме, они доминируют среди других ферментов по вкладу в биотрансформацию ЛС. Подсемейства СТР 1, СТР 2 и СТР 3 метаболизируют большинство ЛС и ксенобиотиков [46, 97]. Два важных класса ферментов локализованы в эндоплазматическом ретикулуме, рядом с цитохромом Р450: флавин-содержащие монооксигеназы, которые участвуют в реакциях N и ^-окисления и уридин-5-дифосфат глюкуронилтрансферазы, которые катализируют конъюгацию с уридин-5-дифосфорной глюкуроновой кислотой. В дополнение к этим семействам, существуют ^-ацетил трансферазы, сульфотрансферазы, глутатион трансферазы, алкоголь дегидрогиназы и альдегид дегидрогиназы. Почти все метаболические пути включают один или несколько ферментов - большинство включают цитохром Р450.

Цитохром Р450 является одним из наиболее важных семейств ферментов, которые участвуют в регуляции фармакологически активных, токсичных и потенциально токсичных ксенобиотиков. Ферменты цитохрома являются мембранно-связанными гемопротеинами, которые соединяются с гладким эндоплазматическим ретикулумом. Известно, что субстратами цитохрома являются соединения с различными функциональными группами, которые подвергаются метаболизму путем окисления.

Цитохром делится на подсемейства в зависимости от общей аминокислотной последовательности. Более 50 различных изоферментов идентифицированы у человека. Среди них проявляют активность в метаболизме большинства ЛС следующие изоферменты: CYP 1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 2J2, 3A4, 3A5, 4F2, 4F3a, 4F3b и 4F12. Фактически CYP 1A2, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6 и 3A4 являются наиболее важными изоферментами при определении фармакокинетических параметров.

Эта номенклатура используется не только у человека, но и у других видов. Как правило, у различных видов изоферменты имеют схожие между собой структуру, функции и название, но, важно отметить, что они не идентичны человеческим формам. Даже небольшое различие в аминокислотной последовательности может повлиять на сродство к субстрату и на способность фермента метаболизировать субстрат и/или регион специфичное место молекулы. Изучая метаболизм, следует обращать внимание на стадии биотрансформации, которым подвергается субстрат, а также определять ферменты, под действием которых происходят такие трансформации. Фармакокинетические показатели, полученные в испытаниях in vivo на мышах или других лабораторных животных, не всегда коррелируют с показателями человека. Для прогнозирования фармакокинетики ЛС у человека нужно проводить анализ на разных видах животных, а также учитывать данные, полученные в испытания in vitro и in silico [84, 89].

Как семейство, несколько изоферментов вместе участвуют в окислении и биотрансформации сложных соединения. Однако у отдельных изоферментов есть тенденция к большей селективности к субстратам с определенными свойствами, что позволяет дифференцировать их (табл. 1) [64, 65]. CYP 1A1 часто участвует в метаболизме арильных углеводов [40]. У CYP 1A1 и CYP 1A2 частично совпадает сродство к субстратам; однако, CYP 1A2 преимущественно метаболизирует полициклические ароматические углеводы. Как CYP 1A1, так и CYP 1A2 участвуют в биотрансформации проканцерогенов в канцерогены. Было показано,

что СУР 1А2 является основным ферментом, метаболизирующим такие ЛС, как фенацетин и теофиллин. СУР 2А6 отдает предпочтение более мелким, нейтральным, менее липофильным молекулам, таким как кетоны и нитрозамины. СУР 2С9 и СУР 2С19 могут метаболизировать кислые молекулы. СУР 2С9 участвует в реакциях О-деметилирования фенольных радикалов, окислении ароматических метил радикалов, радикалов, содержащих атом серы, N деалкилировании [84]. Напротив, СУР 2D6 может метаболизировать основные молекулы с атомом азота (флуоксетин, нортриптилин, декстрометорфан и буфуралол), а также катализирует реакции О-деметилирования, окисления метил радикалов и фенол О-деметилирования. СУР 2Е1 эффективен в биотрансформации малых молекул (этанол, ацетаминофен, халотан и пара-нитрофенол), а СУР 3А4 - больших, липофильных молекул (симвастатин, тестостерон, кортизол, циклоспорин и мидазолам) [47, 64]. Также СУР 3А4 проявляет активность при К-деалкилировании, гидроксилировании ароматических систем и окислении радикалов, содержащих серу.

Изофермент Свойство субстрата Пример субстрата

СУР1А1,1А2 Плоская липофильная; Фенацетин, дапсон, такрин,

нейтральная или основная рамелтеон, кофеин,

молекула теофиллин

СУР2С9 Кислотная молекула Диклофенак, варфарин,

средних размеров толбутамин, лозартан

СУР2С19 Основная молекула (5)-мефетоин, омепразол

средних размеров

СУР 2Б6 Основная молекула Флуоксетин,

средних размеров с декстрометорфан,

протонируемым атомом нортриптилин, буфуралол

азота

СУР2Е1 Маленькая, нейтральная Паранитрофенол, этанол,

молекула хлорзоксазон

СУР3А4 Большая, липофильная Тестостерон, циклоспорин А,

молекула нифедипин, мидазолам,

симвастатин, кортизол

Таблица 1 - Цитохром Р450 и его субстратная селективность.

3Э структура белка субстрата уникальна для каждого изофермента и, таким образом, контролируются участки связывания с лигандами. Субстраты и ингибиторы должны быть в состоянии вступить во взаимодействие со связывающим участком. Несмотря на то, что у лиганда и активного центра белка есть конформационная гибкость, исследования показали, что эта гибкость ограничена атомными, водородными и прочими связями. Таким образом, каждый изофермент ограничен диапазоном лигандов, которые могут взаимодействовать с активным центром, и эти ограничения определяют субстратную, ингибиторную и региоселективность каждого изофермента цитохрома Р450.

Селективность изофермента относится к способности активного центра связаться с лигандом. Например, потенциальный лиганд не сможет связаться с активным центром, если он не подходит по структуре связывающему или каталитическому участкам. Также может быть, что лиганд подходит по размеру, но у него нет дополнительных функциональных групп, необходимых для связывания с изоферментом. С помощью рационального изучения лигандов, окисленных конкретными изоформами цитохрома Р450 можно разработать надежные параметры для прогнозирования специфичности [63, 90]. По данным исследования подготовлено древо решений для прогнозирования селективности основных изоферментов (рис. 2).

Рисунок 2 - Древо решений для прогнозирования селективности изофермента цитохрома Р450.

На базе быстро развивающихся компьютерных технологий, ученые разрабатывают методы прогнозирования селективности изоферментов in silico. С помощью этих методов определяются участки, которые подвергаются метаболизму посредством цитохрома [101]. Разработано и валидировано компьютерное обеспечение, которое позволяет быстро обработать несколько сотен молекул потенциальных ЛС и выявить какие участки молекулы будут метаболизироваться, каким изоферментом, а также какие возможные метаболиты будут образовываться [26]. Данные, полученные in silico, облегчают дальнейшее изучение ЛС in vitro и in vivo.

Белки-переносчики эндогенных веществ и ЛС.

За последнее десятилетие наблюдается повышенный интерес к роли белков-переносчиков в распределении веществ в организме. На сегодняшний день

известно, что белки-переносчики могут играть ключевую роль в фармакокинетике ЛП. При ингибировании или индукции белков-переносчиков могут проявляться НЛР, снижение эффективности или межлекарственные взаимодействия [24, 93]. Белки-переносчики представлены различными семействами либо

индивидуальными переносчиками (таблица 2).

Семейство Генное семейство Ген

АВС переносчики Белок полирезистентности МБЮ/Р - §р

МЯР1

МКР2

МКР3

МКР4

Экспортная помпа желчных солей ББЕР

Белок резистентности рака молочной железы БСЯР

Котранспортный белок натрия таурохолата ЖСБ

Переносчики растворенных веществ Олигопептидные переносчики РЕРТ 1

РЕРТ 2

Органические анион-транспортирующие полипептиды ОАТР -А/ОАТР1А2

ОАТР -Б/ОАТР2Б1

ОАТР -С/ОАТР1Б1

ОАТР 8/ОАТР1Б3

ОАТР -Б/ОАТР3А1

ОАТР -Е/ОАТР4А1

ОАТР -Б/ОАТР1С1

Переносчики органических катионов ОСТ1

ОСТ2

ОСТ3

Новые переносчики органических катионов ОСТШ

ОСТШ

Переносчики органических анионов ОАТ1

ОАТ2

ОАТ3

ОАТ4

Таблица 2 - Семейства белков-переносчиков.

Из всех белков-переносчиков, представленных в таблице 2, наиболее изучен гликопротеин-Р. Ген МОМ экспрессируется в различных тканях организма. Гликопротеин-Р локализуется на внешней мембране энтероцитов, в клетках проксимальных почечных канальцев, желчных канальцев, на границе гематоэнцефалического барьера и т.д [53]. Гликопротеин-Р выводит из клеток ксенобиотики обратно в кровоток или в почечные канальцы, тем самым защищая организм от экзогенных веществ. Поскольку экзогенными веществами являются и ЛП, гликопротеин-Р обуславливает резистентность организма к ним и вносит большой вклад в их фармакокинетику.

Межлекарственные взаимодействия наблюдаются при ингибировании или индукции активности гликопротеина-Р. Классическим примером такого взаимодействия выступают дигоксин и такие ингибиторы гликопротеина-Р, как кинидин, кларитромицин или аторвастатин. При приеме этих ЛП происходит усиление эффекта дигоксина и повышается частота возникновения НЛР, поскольку гликопротеин-Р не выводит дигоксин из организма. Проблема межлекарственных взаимодействий особенно остро стоит у лекарств с узким терапевтическим окном. К таким ЛП относятся, например, дигоксин, противоопухолевые препараты и иммуносупрессоры [83, 82].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Абдрашитов Рустем Хамзиевич, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абдрашитов Р.Х. Количественное определение пинолина для определения активности изоферментов цитохрома Р450 // Сборник материалов международного симпозиума посвященный 5-летию Клинико-диагностического центра Международного Казахско-Турецкого Университета им. Ахмеда Ясауи «Инновации в оказании скорой неотложной медицинской помощи и актуальные вопросы медицины». - г. Туркестан, Казахстан, 2014. - С. 214-216.

2. Абдрашитов Р.Х. Разработка количественного определения пинолина для оценки активности изофермента СУР 2D6 цитохрома Р450 методом LC/MS/MS // Сборник материалов IV Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», Санкт-Петербург, 14-15 апреля 2014 г. - СПб.: Изд-во СПХФА, 2014. -С. 377 - 378.

3. Абдрашитов Р.Х. Разработка методик количественного определения пинолина для оценки активности изофермента СУР 2D6 цитохрома Р450 методом ВЭЖХ / Сеченовский вестник. - 2014. - №. 2(16) - С. 102.

4. Абдрашитов Р.Х. Разработка методики количественного определения пинолина и его метаболита для измерения активности изофермента СУР 2D6 цитохрома Р450 методом LC/MS/MS // Сборник материалов 74 Всеукраинской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Современные аспекты медицины и фармации». - г. Запорожье, Украина, 2014. - С. 161.

5. Абдрашитов Р.Х., Петухов А.Е., Смирнов В.В. Разработка и валидация биоаналитической методики количественного определения пинолина и его метаболита 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-Р-карболина с целью определения активности изофермента СУР 2D6 // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2016. - № 1 (14). - С. 120 - 124.

6. Абдрашитов Р.Х., Смирнов В.В. Количественное определение пинолина для определения активности изофермента СУР 2D6 цитохрома Р450 методом LC/MS/MS // Всероссийская научная Интернет-конференция с международным

участием «Фармакологическая наука - от теории к практике». - г. Казань, 2014. -С. 5 - 6.

7. Абдрашитов Р.Х., Смирнов В.В. Разработка методики определения активности изофермента CYP 2D6 цитохрома Р450 методом LC/MS/MS // Сборник материалов XXI Российский Национальный Конгресс «Человек и лекарство». - г. Москва, 2014. - С. 190.

8. Абдрашитов Р.Х., Смирнов В.В. Разработка методки количественного определения пинолина для измерения активности изофермента CYP 2D6 цитохрома Р450 методом LC/MS/MS // Сборник материалов Украинской научно-практической конференции «Проблемы синтеза биологически активных веществ и создание на их основе лекарственных субстанций». - г. Харьков, Украина, 2014. -С. 87.

9. Влияние изофермента CYP 2D6 на метаболизм лекарственных препаратов и методы определения его активности/ В.В. Смирнов [и др.] // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. - 2015. - № 3. - С. 32-35.

10. Государственнаяя Фармакопея Российской Федерации XIII издание, том 1. - М.: Министерство здравоохранения Российской Федерации, 2015. - С. 464-467.

11. Кукес В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты. - М.: Издательство «Реафарм», 2004. - 144 с.

12. Кукес В.Г., Сычев Д.А., Ших Е.В. Изучение биотрансформации лекарственных средств - путь к повышению эффективности и безопасности фармакотерапии // Врач. - 2007. - № 1. - С. 6 - 8.

13. Медведев Ю. и др. Физические методы исследования и их практическое применение в химическом анализе. - Litres, 2016. - С. 9 - 21.

14. Метаболизм лекарственных препаратов/ Под ред. Академика РМН. Проф Кукеса В.Г.. чл.-коор. РАМН, проф. Фисснко В.П. М : Палея-М. 2001.

15. Обзор существующих методик оценки активности CYP 2D6 с применением экзогенных и эндогенных маркеров / Р.Х. Абдрашитов [и др.] // Фармакокинетика и фармакодинамика. - 2015. - № 1. - С. 4 - 11.

16. Перспективы методики оценки активности CYP 2D6 с применением пинолина / Р.Х. Абдрашитов [и др.] // Фармация. - 2015. - № 5. - С. 41-44.

17. Раменская Г.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография в оценке биотрансфомации лекарственных средств (фармакокинетикя и фармакогенетнка). Автореф.диссер. на соиск. ум. степени докт. Фарм. наук. 2003.

18. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Том 1 / Под ред. А.Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2013. — 328 с.

19. Смирнов В.В., Абдрашитов Р.Х. Оценка активности изоферментов цитохрома Р450 при иммунокорректирующем лечении // Сборник научных работ VII Международной Научно-практической конференции «Современные концепции научных исследований». - г. Москва, 2014. - № 7. - С. 143 - 144.

20. Adedoyin A. et al. Selective effect of liver disease on the activities of specific metabolizing enzymes: investigation of cytochromes P450 2C19 and 2D6 //Clinical Pharmacology & Therapeutics. - 1998. - Т. 64. - №. 1. - С. 8-17.

21. Agilent 8800 Triple Quadrupole ICP-MS (ICP-QQQ) brochure [Электронный ресурс] URL: https://www.agilent.com/cs/library/brochures/5991-0079EN_8800_ICPQQQ_Brochure.pdf (дата обращения: 06.05.2016)

22. Bachmann C., Bickel M.H. History of drug metabolism: the first half of the 20th century // Drug Metab. Rev. -1985. -№ 16(3). - C. 185-253.

23. Bengtsson C., Johnsson G., Regardh C. G. Plasma levels and effects of metoprolol on blood pressure and heart rate in hypertensive patients after an acute dose and between two doses during long-term treatment //Clinical pharmacology and therapeutics. - 1975. - Т. 17. - №. 4. - С. 400-408.

24. Bodo A. et al. The role of multidrug transporters in drug availability, metabolism and toxicity //Toxicology letters. - 2003. - Т. 140. - С. 133-143.

25. Bozkurt A. et al. Metabolic ratios of four probes of CYP 2D6 in Turkish subjects: a cross-over study //European journal of drug metabolism and pharmacokinetics. - 1996. - Т. 21. - №. 4. - С. 309-314.

26. Burton J. et al. Virtual screening for cytochromes p450: successes of machine learning filters //Combinatorial chemistry & high throughput screening. -2009. - T. 12. - №. 4. - C. 369-382.

27. Cerqueira P. M. et al. Influence of chronic renal failure on stereoselective metoprolol metabolism in hypertensive patients //The Journal of Clinical Pharmacology.

- 2005. - T. 45. - №. 12. - C. 1422-1433.

28. Cohn R. Concerning the occurrence of acetylated conjugates following the administration of aldehydes //Z. physiol. Chem. - 1893. - T. 17. - C. 274.

29. Conti A., Bickel M. H. History of drug metabolism: discoveries of the major pathways in the 19th century //Drug Metabolism Reviews. - 1977. - T. 6. - №. 1.

- C. 1-50.

30. Cooper E. J. et al. Effects of the ß-carbolines, harmane and pinoline, on insulin secretion from isolated human islets of Langerhans //European journal of pharmacology. - 2003. - T. 482. - №. 1. - C. 189-196..

31. Cytochrome P450 2D6 Phenoconversion Is Common in Patients Being Treated for Depression: Implications for Personalized Medicine / H.P. Sheldon [et al] // J.Clin. Psychiatry. - 2013. -№ 74(6). - P. 614-621.

32. Dalen P. et al. Inhibition of debrisoquine hydroxylation with quinidine in subjects with three or more functional CYP 2D6 genes //British journal of clinical pharmacology. - 2000. - T. 49. - №. 2. - C. 180-184.

33. Dayer P. et al. Bioactivation of the narcotic drug codeine in human liver is mediated by the polymorphic monooxygenase catalyzing debrisoquine 4-hydroxylation (cytochrome P-450 dbl/bufI) //Biochemical and biophysical research communications. -1988. - T. 152. - №. 1. - C. 411-416.

34. de Groote P., Ennezat P. V., Mouquet F. Bisoprolol in the treatment of chronic heart failure //Vascular health and risk management. - 2007. - T. 3. - №. 4. - C. 431.

35. Dessaignes V./ C. R. Acad. Sci. - 1845. - № 21. - 1224 p.

36. Development of validated method for simultaneous cytochrome P450 isoforms activity determination in drug allergy testing / V. Smirnov [et al] // Abstract BOOK EAACI 2014. - 2014. - P. 262.

37. Development of validated method for CYP 2D6 phenotyping in studies of correlation between drug allergy and cytochrome P450 activity/ R.Kh. Abdrashitov [et al] // Allergy. - 2015. - T. 70. № S101. - P. 227.

38. Distlerath L. M., Guengerich F. P. Characterization of a human liver cytochrome P-450 involved in the oxidation of debrisoquine and other drugs by using antibodies raised to the analogous rat enzyme //Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1984. - T. 81. - №. 23. - C. 7348-7352.

39. Dorado P., Peas-LLed E. M., LLerena A. CYP 2D6 polymorphism: implications for antipsychotic drug response, schizophrenia and personality traits //Pharmacogenomics. - 2007. - T. 8. - №. 11. - C. 1597-1608.

40. Drahushuk A. T. et al. Detection of CYP1A1 protein in human liver and induction by TCDD in precision-cut liver slices incubated in dynamic organ culture //Carcinogenesis. - 1998. - T. 19. - №. 8. - C. 1361-1368.

41. Erdmann O. L., Marchand R. F. Metabolism of cinnamic acid to hippuric acid in animals //Ann. Chem. Pharm. - 1842. - T. 44. - C. 344.

42. Felmlee M. A. et al. Cytochrome P450 expression and regulation in CYP3A4/CYP 2D6 double transgenic humanized mice //Drug Metabolism and Disposition. - 2008. - T. 36. - №. 2. - C. 435-441.

43. Frye R. F. et al. Liver disease selectively modulates cytochrome P450-mediated metabolism //Clinical Pharmacology & Therapeutics. - 2006. - T. 80. - №. 3. - C. 235-245.

44. Granvil C. P. et al. 4-Hydroxylation of debrisoquine by human CYP1A1 and its inhibition by quinidine and quinine //Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. - 2002. - T. 301. - №. 3. - C. 1025-1032.

45. Griese E. U. et al. Assessment of the predictive power of genotypes for the in-vivo catalytic function of CYP 2D6 in a German population //Pharmacogenetics and Genomics. - 1998. - T. 8. - №. 1. - C. 15-26.

46. Guengerich F. P. Cytochromes P450, drugs, and diseases //Molecular interventions. - 2003. - T. 3. - №. 4. - C. 194.

47. Guengerich F. P. et al. Diversity in the oxidation of substrates by cytochrome P450 2D6: lack of an obligatory role of aspartate 301-substrate electrostatic bonding //Biochemistry. - 2002. - T. 41. - №. 36. - C. 11025-11034.

48. Guidance for Industry: Bioanalytical method validation. U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and Research (CDER). U.S. Government Printing Office: Washington, DC, 2001.

49. Guideline on validation of bioanalytical methods (draft).European Medicines Agency. Committee for medicinal products for human use: London, 2009.

50. Hashiyada M. et al. Unexpectedly high blood concentration of bisoprolol after an incorrect prescription: A case report //Legal Medicine. - 2013. - T. 15. - №. 2. -C. 103-105.

51. Herraiz T., Galisteo J. Endogenous and dietary indoles: a class of antioxidants and radical scavengers in the ABTS assay //Free radical research. - 2004. -T. 38. - №. 3. - C. 323-331.

52. His W. On the metabolic products of pyridine //Arch. Ex. Pathol. Pharmakol. - 1887. - T. 22. - C. 253-260.

53. Ho R. H., Kim R. B. Transporters and drug therapy: implications for drug disposition and disease //Clinical Pharmacology & Therapeutics. - 2005. - T. 78. - №. 3. - C. 260-277.

54. Jaffe M., Cohn R. // Ber. Dtsch. Chem. Ges. - 1887. - T. 20. - 2311c.

55. Jiang X. L., Shen H. W., Yu A. M. Pinoline may be used as a probe for CYP 2D6 activity //Drug Metabolism and Disposition. - 2009. - T. 37. - №. 3. - C. 443-446.

56. Keller W. M. Keller on the Conversion of Benzoic into Hippuric Acid //Provincial medical journal and retrospect of the medical sciences. - 1842. - T. 4. - №. 92. - C. 256.

57. Kim M. et al. Inhibition of the enantioselective oxidative metabolism of metoprolol by verapamil in human liver microsomes //Drug metabolism and disposition.

- 1993. - T. 21. - №. 2. - C. 309-317.

58. Klingenberg M. Pigments of rat liver microsomes //Archives of biochemistry and biophysics. - 1958. - T. 75. - №. 2. - C. 376-386.

59. Knollmann B. C. (ed.). Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics. - New York : McGraw-Hill Medical, 2011. - T. 12. - C. 327-328.

60. Labbe L. et al. Effect of gender, sex hormones, time variables and physiological urinary pH on apparent CYP 2D6 activity as assessed by metabolic ratios of marker substrates //Pharmacogenetics and Genomics. - 2000. - T. 10. - №. 5. - C. 425-438.

61. Lennard M. S. et al. Oxidation phenotype—a major determinant of metoprolol metabolism and response //New England Journal of Medicine. - 1982. - T. 307. - №. 25. - C. 1558-1560.

62. Lennard M. S. et al. Oxidation phenotype—a major determinant of metoprolol metabolism and response //New England Journal of Medicine. - 1982. - T. 307. - №. 25. - C. 1558-1560.

63. Lewis D. F. V. Essential requirements for substrate binding affinity and selectivity toward human CYP2 family enzymes //Archives of biochemistry and biophysics. - 2003. - T. 409. - №. 1. - C. 32-44.

64. Lewis D. F. V., Dickins M. Substrate SARs in human P450s //Drug discovery today. - 2002. - T. 7. - №. 17. - C. 918-925.

65. Lewis D. F. V., Jacobs M. N., Dickins M. Compound lipophilicity for substrate binding to human P450s in drug metabolism //Drug discovery today. - 2004. -T. 9. - №. 12. - C. 530-537.

66. Marandi T. et al. Debrisoquine and S-mephenytoin hydroxylation polymorphisms in a Russian population living in Estonia //European journal of clinical pharmacology. - 1997. - T. 53. - №. 3-4. - C. 257-260.

67. March , J. Advanced Organic Chemistry 4th edn // John Wiley & Sons, Inc.

- 1992. - C. 553 - 554.

68. Mason H. S. Mechanism of Oxygen Metabolism. Adv. Enzymol. 19, 79233 (1957).—Cf. ibid. 16, 105 (1955) //Oxidases. Ann. Revs. Biochem. - 1965. - T. 34. - C. 595-634..

69. Moltke L. L. et al. Multiple Human Cytochromes Contribute to Biotransformation of Dextromethorphan In-vitro: Role of CYP2C9, CYP2C19, CYP 2D6, and CYP3A //Journal of pharmacy and pharmacology. - 1998. - T. 50. - №. 9. -C. 997-1004.

70. Neumeister R. Lehrbuch der physiologischen Chemie: mit Berücksichtigung der pathologischen Verhältnisse. - G. Fischer, 1897.

71. Nozawa T. et al. Influence of CYP 2D6 genotype on metoprolol plasma concentration and ß-adrenergic inhibition during long-term treatment: A comparison with bisoprolol //Journal of cardiovascular pharmacology. - 2005. - T. 46. - №. 5. - C. 713-720.

72. Omura T. et al. Function of cytochrome P-450 of microsomes //Federation proceedings. - 1965. - T. 24. - №. 5. - C. 1181.

73. Omura T., Sato R. A new cytochrome in liver microsomes //Journal of Biological Chemistry. - 1962. - T. 237. - №. 4. - C. PC1375-PC1376.

74. Otton S. V. et al. Use of quinidine inhibition to define the role of the sparteine/debrisoquine cytochrome P450 in metoprolol oxidation by human liver microsomes //Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. - 1988. - T. 247. - №. 1. - C. 242-247.

75. Pähkla R., Harro J., Rägo L. Behavioural effects of pinoline in the rat forced swimming, open field and elevated plus-maze tests //Pharmacological research. -1996. - T. 34. - №. 1. - C. 73-78.

76. Pedersen R. S., Damkier P., Brosen K. Tramadol as a new probe for cytochrome P450 2D6 phenotyping: a population study //Clinical Pharmacology & Therapeutics. - 2005. - T. 77. - №. 6. - C. 458-467.

77. Poulsen L. et al. The hypoalgesic effect of tramadol in relation to CYP 2D6* //Clinical Pharmacology & Therapeutics. - 1996. - T. 60. - №. 6. - C. 636-644.

78. Qi W. et al. Increased levels of oxidatively damaged DNA induced by chromium (III) and H2O2: protection by melatonin and related molecules //Journal of pineal research. - 2000. - T. 29. - №. 1. - C. 54-61.

79. Regárdh C. G., Johnsson G. Clinical pharmacokinetics of metoprolol //Clinical pharmacokinetics. - 1980. - T. 5. - №. 6. - C. 557-569.

80. Rodrigues A. D. Integrated cytochrome P450 reaction phenotyping //Biochem Pharmacol. - 1999. - T. 57. - C. 465-480.

81. Schellens J. H. et al. Lack of pharmacokinetic interaction between nifedipine, sparteine and phenytoin in man //British journal of clinical pharmacology. -1991. - T. 31. - №. 2. - C. 175-178.

82. Schinkel A. H. et al. P-glycoprotein in the blood-brain barrier of mice influences the brain penetration and pharmacological activity of many drugs //Journal of Clinical Investigation. - 1996. - T. 97. - №. 11. - C. 2517.

83. Seelig A., Gottschlich R., Devant R. M. A method to determine the ability of drugs to diffuse through the blood-brain barrier //Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1994. - T. 91. - №. 1. - C. 68-72.

84. Sheridan R. P. et al. Empirical regioselectivity models for human cytochromes P450 3A4, 2D6, and 2C9 //Journal of medicinal chemistry. - 2007. - T. 50. - №. 14. - C. 3173-3184.

85. Streetman D. S., Bertino Jr J. S., Nafziger A. N. Phenotyping of drug-metabolizing enzymes in adults: a review of in-vivo cytochrome P450 phenotyping probes //Pharmacogenetics and Genomics. - 2000. - T. 10. - №. 3. - C. 187-216.

86. Subrahmanyam V. et al. Identification of cytochrome P-450 isoforms responsible for cis-tramadol metabolism in human liver microsomes //Drug Metabolism and Disposition. - 2001. - T. 29. - №. 8. - C. 1146-1155.

87. Takashima T. et al. Evaluation of dextromethorphan metabolism using hepatocytes from CYP 2D6 poor and extensive metabolizers //Drug metabolism and pharmacokinetics. - 2005. - T. 20. - №. 3. - C. 177-182.

88. Tegeder I., Lotsch J., Geisslinger G. Pharmacokinetics of opioids in liver disease //Clinical pharmacokinetics. - 1999. - T. 37. - №. 1. - C. 17-40.

89. Terfloth L., Bienfait B., Gasteiger J. Ligand-based models for the isoform specificity of cytochrome P450 3A4, 2D6, and 2C9 substrates //Journal of chemical information and modeling. - 2007. - T. 47. - №. 4. - C. 1688-1701.

90. Totah R. A., Rettie A. E. Cytochrome P450 2C8: substrates, inhibitors, pharmacogenetics, and clinical relevance //Clinical Pharmacology & Therapeutics. -2005. - T. 77. - №. 5. - C. 341-352.

91. Trager W. F. et al. Oral anticoagulants //Metabolic Drug Interactions. -2000. - 748 c.

92. Ure A. On gouty concretions, with a new method of treatment //Medico-chirurgical transactions. - 1841. - T. 24. - C. 30.

93. Van Montfoort J. E. et al. Drug uptake systems in liver and kidney //Current drug metabolism. - 2003. - T. 4. - №. 3. - C. 185-211.

94. Von Bahr C. et al. Plasma levels and effects of metoprolol on blood pressure, adrenergic beta receptor blockade, and plasma renin activity in essential hypertension //Clinical pharmacology and therapeutics. - 1976. - T. 20. - №. 2. - C. 130-137.

95. Wang P. P. et al. Purification and characterization of six cytochrome P-450 isozymes from human liver microsomes //Biochemistry. - 1983. - T. 22. - №. 23. - C. 5375-5383.

96. Ward C.. Sumpter, Miller F. M. Heterocyclic compounds with indole and carbazole systems. - Interscience, 1954.

97. Williams J. A. et al. Drug-drug interactions for UDP-glucuronosyltransferase substrates: a pharmacokinetic explanation for typically observed low exposure (AUCi/AUC) ratios //Drug Metabolism and Disposition. - 2004. - T. 32. - №. 11. - C. 1201-1208.

98. Williams R. T. et al. Detoxication mechanisms. The metabolism of drugs and allied organic compounds //Detoxication mechanisms. The metabolism of drugs and allied organic compounds. - 1947.

99. Wohler F. Tiedemann's Z //Physiol. - 1824. - T. 1. - C. 142.

100. Wôhler F., Frerichs F. T. Concerning the modifications which particular organic materials undergo in their transition to the urine //Ann Chem Pharm. - 1848. -T. 63. - C. 335.

101. Yap C. W., Chen Y. Z. Prediction of cytochrome P450 3A4, 2D6, and 2C9 inhibitors and substrates by using support vector machines //Journal of chemical information and modeling. - 2005. - T. 45. - №. 4. - C. 982-992.