Разработка метода количественного определения ДНК в соевых белковых препаратах и оценка влияния генной модификации на функционально-технологические свойства продуктов переработки сои тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.07, кандидат технических наук Логинова, Елена Николаевна

• Логинова, Елена Николаевна
• кандидат технических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат технических наук Логинова, Елена Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Мировые тенденции в области создания и использования трансгенных растений.

2. ДНК как носитель генетической информации в клетке.

2.1. Биологическая роль.

2.2. Химический состав и структура молекул ДНК.

2.3. Свойства молекул ДНК в растворе.

2.3.1. Кислотно-основные свойства.

2.3.2. Вязкость.

2.4. Денатурация ДНК.

2.4.1. Условия денатурации ДНК.

2.4.2. Стадии денатурации ДНК.

2.4.3. Гиперхромный эффект.

3. Соя: питательные свойства и возможности применения.

3.1. Историческая справка.

3.2. Важность продуктов из соевых белков.

3.3. Продукты из соевых белков.

3.4. Питательные качества соевых белков.

3.5. Функциональные свойства продуктов из соевых белков в пище.

3.6. Применение соевых белковых препаратов в системе питания.

4. Современные подходы к оценке безопасности генетически модифицированных источников пищи (ГМИ).

4.1. Оценка безопасности продуктов из ГМИ по принципу композиционной эквивалентности.

4.2. Оценка безопасности продуктов из ГМИ, принятая в Российской

Федерации.

4.2.1. Медико-генетическая оценка.

4.2.2. Медико биологическая оценка.:.

4.2.3. Технологическая оценка.

4.3. Маркировка пищевой продукции из генно-модифицированных источников.

5. Законодательное и нормативное регулирование в области генно-инженерной деятельности в России.

6. Методы выделения, очистки и количественного определения ДНК.

6.1 Выделение и очистка.

6.2 Определение концентрации ДНК.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка метода количественного определения ДНК в соевых белковых препаратах и оценка влияния генной модификации на функционально-технологические свойства продуктов переработки сои»

В настоящее время во всем мире происходит активное внедрение генетически модифицированных растений (ГМР) в практику сельского хозяйства

Создание и использование трансгенных растений может способствовать решению целого ряда проблем растениеводства. В частности, устойчивость растений к болезнетворным микроорганизмам, вирусам и насекомым, а также к неблагоприятным условиям внешней среды достигается введением в геном растения целевых генов, обеспечивающих устойчивость растения.

В международном экономическом сообществе существует чёткое понимание того, что в связи с ростом народонаселения Земли, которое по прогнозам учёных должно достичь в 2050 году 9-11 млрд. человек, необходимо удвоение или даже утроение мирового производства с/х продукции, что невозможно без применения трансгенных растений, создание которых многократно ускоряет процесс селекции культурных растений, а также позволяет получить растения с такими свойствами, которые не могут быть получены традиционными методами.

Учёные полагают также, что в ближайшие десятилетия использование трансгенных растений сможет в значительной степени изменить процессы производства пищевых продуктов, так как сделает возможным выращивание культур с улучшенными пищевыми качествами (обогащённых белками, с лучше усваиваемыми сахарами и жирами), с большим сроком хранения, обеспечивающим эффективность транспортировки.

Возможно и использование растений в качестве «живых фабрик» - для производства лекарственных веществ (в том числе природных белков человека) и специфических химических соединений (например, замена полимеров, получаемых сегодня из нефтепродуктов, на растительные полимеры).

Широкий спектр возможностей применения генномодифицированных оганизмов обуславливает постоянно растущий интерес к их использованию в питании людей, а также созданию новых видов трансгенных растений. Вместе с тем растёт количество противников данного метода селекции. Аргументами «против» в таком случае являются теоретически возможные риски негативного влияния на человеческий организм, религиозные принципы и т.д.

На сегодняшний день в Российской Федерации существует государственная законодательно оформленная система контроля и регулирования в области генноинженерной деятельности. Однако определённые аспекты данной системы не разработаны. Государственная система контроля за качеством и безопасностью продуктов из генетически модифицированных источников в Российской Федерации нуждается в разработке дополнительных методов исследований. Планируется, что биохимическая часть анализа пищевых продуктов из генетически модифицированных источников будет включать следующие этапы: 1) определение наличия ДНК в пищевых продуктах, 2) выделение ПЦР-пригодной ДНК, 3) анализ ДНК на содержание генетически модифицированных источников. В данной работе основное внимание будет уделено первому этапу — выбору и оптимизации наиболее адекватного метода для конкретного продукта (соевого белкового препарата). Данный метод должен отвечать следующим критериям: адаптированность к техническим возможностям лабораторий системы Санитарно-эпидемиологического надзора, достаточная простота в исполнении, получение достоверных и воспроизводимых результатов.

В соответствии с принятыми порядками проведения анализа пищевой продукции на безопасность и качество и регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников, помимо медико-биологической и медико-генетической экспертизы в Российской Федерации предусмотрено проведение технологической экспертизы. В нашей стране разрешено использование в пищевых продуктах белковых препаратов, полученных из семян трансгенной сои трёх сортов - сорт Round Up Ready 403-2 производства компании Monsanto Со (США), а также сорта Liberty Link А2704-12 и Liberty Link А5547-127 производства компании Aventis (Германия). Производители пищевых продуктов заинтересованы в том, чтобы белковые препараты из трансгенной сои по функциональным свойствам были сопоставимы с аналогичными препаратами из традиционных сортов сои. В связи с этим, большой интерес представляет изучение функциональных свойств соевых белковых препаратов из трансгенной сои в сравнении с их аналогами из немодифицированной сои. Для каждого вида белковых препаратов существует свой набор функциональных свойств, обусловленный спецификой использования в конкретных пищевых технологиях. Отсутствие достоверных различий в функциональных свойствах изученных образцов белковых препаратов может являться подтверждением идентичности генетически модифицированных источников и традиционных аналогов с точки зрения их использования в пищевых технологиях. Наличие существенных различий определит необходимость разработки рекомендаций к использованию белковых препаратов из генетически модифицированной сои в пищевых производствах.

В связи с этим разработка метода количественного определения содержания ДНК в соевых белковых препаратах и изучение функциональных свойств соевых белковых препаратов, полученных из генетически модифицированной сои, являются актуальными направлениями исследований.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Мировые тенденции в области создания и использования трансгенных растений.

Массовое коммерческое производство трансгенных растений началось с 1996 года. В том году во всём мире было засеяно трансгенными культурами 2.8 млн. га, из них 1.5 млн. га в США, 1.1 млн. га в Китае, 0.1 млн. га в Канаде, далее по убыванию - в Аргентине, Австралии, Мексике /1/.

К настоящему времени получены трансгенные растения более, чем 80 с/х культур, среди которых соя, пшеница, кукуруза, рис, томаты, картофель, хлопок и др. В 1998 году площади под трансгенными растениями во всём мире составляли уже 30 млн. га, что превышает территорию Великобритании /1/.

Среди основных трансгенных культур, выращиваемых во всех странах мира, в 1996 году лидировали табак (35% всех площадей), хлопок (27%), соя (18%), кукуруза (10%), рапс (5%), томаты (4%) и картофель (менее 1%) /1/.

В 1997 году произошло резкое увеличение площадей под трансгенными культурами до 12.8 млн. га (в 4.5 раза по сравнению с 1996 годом). По прежнему, по размеру площадей под трансгенными растениями впереди США (8.1 млн. га), Китай (1.8 млн. га), Аргентина (1.4 млн. га), Канада (1.3 млн. га), Австралия и Мексика /2/.

Изменилось и соотношение площадей под различными культурами: на первое место вышла трансгенная соя (40% всех площадей), затем следовали кукуруза (25%), табак (13%), хлопок (11%), рапс (10%) и томат (1%) /2/.

В 1998 году произошло дальнейшее, более, чем в два раза, увеличение площадей под трансгенными растениями. При этом 82% всех площадей приходилось на несколько основных культур: трансгенную сою, устойчивую к гербициду (52%), трансгенную кукурузу, устойчивую к насекомым (24%), трансгенный рапс, устойчивый к гербициду (9%), транс генный хлопок, устойчивый к насекомым (9%) и трансгенную кукурузу, устойчивую к гербицидам (6%). Более всего (почти в три раза) увеличились площади под трансгенной соей /3/. В 1998 году в США трансгенные сорта основных сельскохозяйственных культур занимали уже значительную часть всех площадей под этими культурахми: соя, устойчивая к гербициду, - 36% (10.2 млн. га), кукуруза, устойчивая к насекомым, - 22% (6.5 млн. га), хлопок, устойчивый к насекомым, - 20% (>1.0 млн. га) /3/. В период с 1999 по 2001 год площади, занимаемые трансгенными культурами, возросли с 39,9 млн. га до 52,6 млн. га /4/.

С 1986 года проведено более 25000 опытов по выращиванию генетически модифицированных растений. В то время как первоначальные опыты имели целью справиться с важными проблемами болезней или сорняков, последующие разработки предусматривают композиционные изменения с улучшенными белками и маслом, а также углеводами, ферментами и различными пищевыми добавками. Сегодня около 20% сортов генетически модифицированных растений соответствуют культурам с качественными изменениями их состава. В частности, имеющиеся разработки связаны с регулированием жирнокислотного состава масла из семян рапса и сои /1,5/.

Одними из наиболее перспективных исследований являются работы по модификации аминокислотного состава белков семян зернобобовых культур и, в частности, сои. Семена сои перерабатываются с целью получения широкого ассортимента белковых продуктов - муки, концентратов, изолятов, текстуратов. Несмотря на существующие технологические разработки производства пищевого белка из семян гороха, кормовых бобов, люпина, пшеницы и других культур, эти технологии пока не могут конкурировать с технологией переработки семян сои по экономическим показателям. По-видимому, в ближайшем будущем соя будет оставаться основной культурой, перерабатываемой с целью получения пищевого растительного белка.

На основании представленных данных становится очевидным, что соя является приоритетной культурой среди трансгенных растений.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология пищевых продуктов (по отраслям)», Логинова, Елена Николаевна

выводы

1. Теоретически обоснован выбор методов выделения и количественного определения ДНК для исследований в соответствии с поставленной целью. Выбраны: метод выделения ДНК при помощи хлорной кислоты и дифениламиновый метод количественного определения ДНК.

2. Установлены оптимальные режимы, обеспечивающие полную экстракцию ДНК из соевых белковых препаратов: температура экстракции 85 °С, продолжительность экстракции 1 час, соотношение препарат: экстрагент 1:20. Определено оптимальное соотношение экстракта ДНК и дифениламиного реактива 1:10, обеспечивающие высокую чувствительность метода и достоверность получаемых результатов.

3. Проведено сравнение модифицированных методов выделения и количественного определения ДНК с аналогичными используемыми методами. Установлено, что стандартные методы выделения ДНК не могут быть рекомендованы для количественного определения ДНК в белковых препаратах при проведении массовых анализов.

4. Определено содержание ДНК модифицированным методом в соевых белковых препаратах различной степени очистки. Установлено, что концентрация ДНК максимальна в препаратах, не подвергавшихся при изготовлении интенсивному физико-химическому воздействию т.е. в муке, и составляет порядка 6,0-7,5 мг/г белка. Наименьшее количество ДНК содержится в изолятах и находится в диапазоне 3,0-4,5 мг/г белка. В целом, содержание ДНК в соевых белковых препаратах не превышает 10,0 мг/г белка.

5. Установлено, что продукты из немодифицированной сои и её ГМ аналогов не обладают существенными различиями в функциональных свойствах. В то же время, продукты одного класса, но изготовленные по различным технологиям, демонстрируют более высокие различия в функциональных свойствах. Отсутствие существенных различий в свойствах испытанных образцов СБП из семян ГМ сои и контрольных образцов подтвердило возможность применения продуктов из ГМ источников в пищевой промышленности без изменения технологических режимов и рецептур.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Логинова, Елена Николаевна, 2004 год

1. Новые технологии в агро-индустрии. Трансгенные растения / К.Г. Скрябин, И.А. Соловьёва, Ю.Л. Гончарова, Л.Ф. Матяш и др.- Центр «Биоинженерия» РАН, 1999.- 50 с.

2. С. James. Global Status of Transgenic Crops in 1997 // ISAAA (International Servise for the Aquisition of Agri-Biotech Application).- 1997.-Briefs No.S.Ithaca, NY, USA.- p.30.

3. C. James. Global Review of Commercialized Transgenic Crops: 1998 // ISAAA (International Servise for the Aquisition of Agri-Biotech Application).-1998.-Briefs No.8.- Ithaca, NY, USA.- p.43.

4. Nap J.-P., Metz P., Escaler M., Conner A.J. The Release of genetically modified crops into the environment. The Plant Journal. — 2003, v. 33, p. 1-18.

5. Bottermann J., Leemans J. Trends Genet 1998, v 4, p 219-222.

6. А. Ленинджер. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функций клетки: Пер. с англ./ Под ред. и с предисл. акад. А.А. Баева и д-ра хим наук Я. М. Варшавского. М.: Мир, 1974. - 957 с.

7. Stent G.S., W.H. Freeman. Molecular Biology of Bacterial Viruses, San Francisco, 1963.- 345 p.

8. Ueda Т., Fox J.J. The Mononucleotides // Advan. Carbogydrate Chem. — 1980, Vol. 22. P. 307-419.

9. Дэвидсон Дж. Биохимия нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1976. - 362 с.

10. Cantoni G.L., Devies D. Procedures in Nucleic Acid Research, Harper and Row Publshers Inc., New York, 1966. 254 p.

11. М.И. Булатов, И.П. Калинкин. Практическое руководство по фотометрическим и спектрофотометрическим методам анализа.- Л.: Химия, 1976.- 132 с.

12. Michelson A.M. The Chemistry of Nucleosides and Nucleotides, Academic Press Inc., New York, 1963.- 396 p.

13. Хаггис Дж., Михи Д., Мюик А., Роберте К., Уокер П. Введение в молекулярную биологию: Пер. с англ. М.: Мир, 1967.- 248 с.

14. Felsenfeld G., Miles H.T. Physical and Chemical Properties of Nucleic Acids I I Ann. Rev. Biochem. 1967. Vol. 36. P. 407-448,.

15. Watson J.D., Molekular Biology of the Gene, New York, 1965. 165 p.

16. Watson J.D., The Double Helix, Atheneum, New York, 1968. 422 p.

17. Srb A., Owen R.D., Edgar R.S., General Genetics, W.H. Freeman, San Francisco, 1965. 208 p.

18. Методы исследования нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1970. — 167 с.

19. Dawidson J.N. (eds.), Biochemistry of Nucleic Acids, Wiley, New York, 1969. 198p.

20. Nucleic Acids / Florkin M., Stotz E.H. and ets. American Elsewier Publishing Company // Comprehensive Biochemistry. - New York, 1963. Vol. 8. - P. 102110.

21. Сингер M., Берг П. Гены и геномы: В 2 т: Пер. с англ. М.: Мир, 1998. -Т 1.-373 с.

22. Шабарова З.А., Богданов А.А. Химия нуклеиновых кислот и их компонентов. М.: Химия, 1978. 178 с.

23. Стент Г. Молекулярная генетика: Пер. с англ. / Под ред. д.б.н. С.И. Алиханяна. М., Мир, 1974. - 525 с.

24. Продукты из соевых белков: характеристики, питательные свойства и применение. Совет производителей соевых белков, Вашингтон, 1987. -57с.

25. Растительный белок: Пер. с фр. В.Г.Долгополова / Под. ред. Т.П.Микулович. М.: Агропромиздат, 1991. - 684с.

26. Dubois D.K., Hoover, W.J. // J. Am. Oil Chem. Soc., 1981. Vol. 58. - 343 p.

27. Fukushima D. Recent progress of soybean protein foods: chemistry, technologe and nutrition // Food Rev. Int., 1991. Vol.7. P. 323-351.

28. Waggle D.H., Kolar C.W. Types of soy protein products / In: Soy proteins and human nutrition / Eds. Wilcke H.L., Hopkins D.T., Waggle D.H., New York, Academic Press, 1979. P. 19-51.

29. Wolf W.J. Purification and properties of the proteins / In: Soybeans: chemistry and technology / Eds. Smith A.K. and Circle S.J., Westport / USA, AVI Publishing Co. Inc., 1972. Vol.1. P. 93-143.

30. Высоцкий В.Г., Зилова И.С. Роль соевых белков в питании человека // Вопросы питания, 1995. №5. - С. 20-27.

31. Fridman М. Natritional value of proteins from different food sources. A review. J. Agric // Food Chem., 1996. Vol.44. - P.6-29.

32. Soy proteins and human nutrition. Eds. Wilcke H.L., Hopkins D.T., Waggle D.H. New York, Academic Press., 1979. - P. 369.

33. Kies C., Fox H.M. Comparison of protein nutritional value of TVP, methionine enriched TVP and beaf at two levels of intake for human adults // J. Food Sci., 1971.-Vol.36.-P.841-845.

34. Young V.R. Soy protein in relation to human protein and amino acid nutrition //J. Am. Diet Assoc., 1991. Vol. 91. - P. 828-835.

35. Виробен Г., Бертран Д. Питательная ценность белковых растительных продуктов. В кн. Растительный белок. М.: Агропромиздат, 1991. С. 568595.

36. Толстогузов В.Б. Искусственные продукты питания. — М.: Наука, 1978. 231 с

37. Толстогузов В.Б. Новые формы белковой пищи. М.: Агропромиздат, 1987.303 с.

38. Protein functionality in food systems. Eds. Hettiarachchy N.S. and Ziegler G.R., Marcel Dekker Inc., New York, 1994. P. 402.

39. Functional properties of food marcomolecules. Eds. Mitchel J.R. and Ledward D.A., Elsevier Applied Science. London, 1986. - P. 182.

40. Tolstoguzov V.B., Gurov A.N., Braudo E.E. On the protein functional properties and the methods of their control. Part 1. Nahrung, 1981. Vol. 25. -P. 186-194.

41. Tolstoguzov V.B., Gurov A.N., Braudo E.E. On the protein functional properties and the methods of their control. Part 2. Nahrung, 1981. Vol. 25. -P. 195-211.

42. Kinsella J.E. Functional properties of soy proteins // J. Am. Oil Chem. Sci. -1975.-Vol. 56. P. 242-258.

43. Hutton C.W., Campbell A.M. Functional properties of a soy concentrate and soy isolate in simple systems. Nitrogen solubility index and water absorption // J. Food Sci., 1977. Vol. 42. P.454-456.

44. Shen J.L. Soy protein solubility: the effect of experimental conditions on the solubility of soy protein isolates // Cereal Chem,. 1976. Vol.53. - P.902-909.

45. Morr C.V., German В., Kinsella J.E., Regenstein J.M., van Buren J.p., Kilara A., Lewis B.A., Mangino M.T. A collaborative study to develop a standardized food protein solubility procedure // J. Food Sci., 1985. Vol.50. - P.1715-1718.

46. Shen J.L. Protein functionality in foods. Solubility and viscosity // ACS Symp. Ser., 1981. Vol.147. - P.89-109.

47. Wang C.R., Zayas J.F. Water retention and solubility of soy proteins and corn germ proteins in model system // J. Food Sci. 1991. Vol.56. - P.455-458.

48. Колпакова B.B., Нечаев А.П. Растворимость и водоудерживающая способность белковой муки из пшеничных отрубей // Известия ВУЗов. Пищевая технология.- 1995.- №1-2.- С.31-33.

49. Kinsella J.E., Damodaran S., German В. Physicochemical and functional properties of oilseed proteins with emphasis on soy protein // New Food Proteins, 1985. Vol.5. - P.107-178.

50. Гурова H.B., Токаев Э.С., Гуров A.H. Методы определения эмульсионных свойств белков. -М.: АгроНИИТЭИММП, 1994. -32с.

51. Hutton C.W., Campbell A.M. Functional properties of a soy concentrate and a soy isolate in simple systems and in a food system. Emulsion properties, thickening function and fat absorption //J. Food Sci., 1977.-Vol.42. P.457-461.

52. Колпакова В.В., Волкова А.Е., Нечаев А.П. Эмульгирующие и пенообразующие свойства белковой муки из пшеничных отрубей // Известия ВУЗов. Пищевая технология.- 1995.- №1-2.- С.34-37.

53. Tornberg Е., Lundh G. Functional characterization of protein stabilizied emulsions: standardized emulsifying procedure7/ J.Food Sci., 1989. Vol.43. -P.l 553-1558.

54. Kang I.J., Matsumura Y., Mori T. Characterization of texture and mechanical properties of heat-induced soy protein gels // J. Amer. Oil Chem. Soc., 1991. -Vol.68. P.339-345.

55. Hsu S. Reological studies on gelling behavior of soy protein isolates // J. Food Sci., 1999. Vol.64, № 1. - P.136-140.

56. Толстогузов В.Б. Новые формы белковой пищи. М.: Агропромиздат, 1987.-303с.

57. Morris E.R. Mixed polymer gels. In: Food gels. Ed. Harris P., Elsevier. -London, 1990. P.291-359.

58. Tolstguzov V.B. Functional properties of protein-polysaccharide mixtures. In: Functioanal properties of food macromolecules. Eds. Mitchell J.A. and Ledward D.A., Elsevier. London, 1986. - P.385-415.

59. Puppo M.C., Anon M.C. Structural properties of heat induced soy-protein gels as affected by ionic strength and pH // J. Agric. Food Chem., 1998. Vol.46. -P.3583-3589.

60. Chronanis I.S. Network formation and viscoelastic properties of commercial soy protein dispersions: effect of heat treatment, pH and calcium ions // Food Res. Int., 1996. Vol.29. P. 123-134.

61. Hamann D.D. Rheology a tool for understanding thermally induced protein gelation // Interaction of Food Proteins, 1991. - Vol.454. - P.212-227.

62. Puppo M.C., Anon M.C. Rheological properties of acidic soybean protein gels: salt addition effect // Food Hydrocolloids, 1999. Vol.13. - P.l67-176.

63. Arakawa T., Prestrelski S.J., Denney W.C., Carpenter J.F. Factors affecting short term and long term stabilities of proteins // Adv. Drug. Del. Rev., 1993. -Vol.10. -P.l-21.

64. Visser A., Thomas A. Review: Soya protein products their processing, functionality and application aspects // Food Rev. Int., 1987. Vol.3. - P. 1-32.

65. Hamada J. Deamidation of food proteins to improve functionality // Crit. Rev. Food Sci. Nutr.,1994. Vol.34. - P.283-292.

66. Damodaran S. Structure-function relationship of food proteins. In: Protein functionality in food systems. Eds. Hettriarachchy N.S. and Ziegler G.R. Marcel Dekker Inc., New York, 1994. P. 1-38.

67. Casella M.L., Whitaker J.R. Enzymatically and chemically modified zein for improvement of functional properties // J. Food Biochem., 1990. Vol.14, P.453-475.

68. Campbell N.F., Shih F.F., Marshall W.E. Enzymatic phosphorylation of soy protein isolate for improved functional properties // J. Agric. Food Chem., 1992.-Vol.40.-P.403-406.

69. Seguro K., Motoki M. Functional properties of enzymatically phosphorylated soybean protein// Agric. Biol. Chem., 1990. Vol.54. - P.1271-1274.

70. Hamada J., Marshall W. Preparation and functional properties of enzymatically deamidated soy protein // J. Food Sci., 1989. Vol.54. - P.598-601.

71. Shen J.L. Soy protein solubility: the effect of experimental conditions on the solubility of soy protein isolates // Cereal Chem., 1976. Vol.53. - P.902-909.

72. Chou D.M., Morr C.V. Protein-water interactions and functional properties // J.A.O.C.S., 1979. Vol.56. - P.53-58.

73. Rhee K.C. Functionality of soy proteins. In: Protein functionality of food systems. Eds. Hettiarachchy N.S., Ziegeer G.R., Marcel Dekker Inc., New York, 1994.-P.311-324.

74. Lawson М.Л. Food proteins: properties, functionality and utilization. Ingredient Technology Short Course. Annual Meeting of the Inst. // Food Technologists, Chicago, III, July 9, 1993. P. 531-539.

75. Statement of policy: Foods derived from new plant varieties: Notice // Federal Register. Vol. 57 (104). - P. 22984-23005. 18.

76. Biotechnology and food safety. Report of a Joint FAO/WHO Consultation. -Rome, 1996.-№61.-P. 31

77. The safety assessment of nowel foods. ILSI Europe Report Series, 1995. — P. 112.

78. Mae-Wan Ho, Steinbrecher R. Aoint. Environmental Nutr // Inter, 1998. -Vol. 1-2.-P. 51-84.

79. Report on the use of antibiotic resistance markers in genetically modified food organisms. ACNFP (Advisory committee on novel foods and processes). -London, 1994.-P. 12.

80. Detection methods for novel foods derived from genetically modified organisms. ILSI Europe Report Series, 1999. P. 53.

81. Медико-биологические исследования углеводородных дрожжей / Под ред. А.А. Покровского.- М.: Наука, 1972. 184 с.

82. Методические рекомендации по изучению безвредности и пищевой ценности продуктов животноводства, полученных с использованием кормовых добавок микробиологического происхождения.- М: Минздрав СССР, 1982.-224 с.

83. Nordlee J.A. Neu Engl J Med. 1996. Vol. 14. - P. 688-728.

84. Falco S.C. Biotechnology. 1995. Vol. 5. - P. 577-582.

85. JI.B. Донченко, В.Д. Надыкта. Безопасность пищевой продукции. М.: Пищепромиздат, 2001.- 525 с.

86. Современные подходы к оценке безопасности генетически модифицированных источников пищи. Опыт изучения соевых бобов линии 40-3-2 / Г.Г. Онищенко, В.А. Тутельян, А.И. Петухов и др. // Вопросы питания. 1999. № 5/6. - С.3-8.

87. Санитарно-противоэпидемические правила «Безопасность работы с рекомбинантными молекулами ДНК».- М.: Изд-во Минздрава СССР, 1989.-20с.

88. Федеральный Закон Российской Федерации «Об экологической экспертизе».- № 174-ФЗ от 23.11.95г.

89. Федеральный Закон Российской Федерации «О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности» №86-ФЗ от 5.06.96г.

90. Постановление правительства Российской Федерации «О Межведомственной комиссии по проблемам генно-инженерной деятельности».- № 464 от 22.04.97г.

91. Федеральный Закон Российской Федерации «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».- № 52-ФЗ от 30.03.99г.

92. Постановление Главного санитарного врача Российской Федерации «О порядке гигиенической оценки и регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников».- №7от 06.04.99г.

93. Федеральный Закон Российской Федерации «О качестве и безопасности пищевых продуктов» январь 2000г.

94. Федеральный Закон «О внесении изменений и дополнений в Федеральный Закон «О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности», касающихся генотерапии и генодиагностики» от 28.06.2000 г.

95. Медико-биологическая оценка пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников.- Методические указания

96. Минздрава Российской Федерации (МУК 2.3.2.970-00).- М.: Изд-во Минздрав России, 2000.- 94 с.

97. Положение об оценке воздействия намечаемой хозяйственной и иной деятельности на окружающую среду в Российской Федерации.-Приложение к приказу Госкомэкологии Российской Федерации № 372 от 16.05.2000г.

98. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации «О нанесении информации на потребительскую упаковку пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников» № 13 от 8.11.2000г.

99. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации «О порядке проведения санитарно-эпидемиологической экспертизы пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников» № 14 от 8.11.2000 г.

100. Постановление правительства Российской Федерации «О государственной регистрации генно-инженерно-модифицированных организмов» № 120 от 16.02.01г.

101. Нуклеиновые кислоты: Сб. ст.: Пер. с англ. Ф.Ф. Ходжеванова / Под ред. и с предисл. И.Б. Збарского.- М.: Мир, 1966.- 415 с.

102. Marko A.M., Butler G.C. // J. Biol. Chem., 1951. Vol. 190. - P. 165.

103. Kay E. R. M., Simmons N.S., Dounce A. L. // J. Am. Chem. Soc., 1952. Vol. 74.-P. 1724.

104. Simmons N.S., Chavos S., Orbach H.K. // Federation Proc., 1952. Vol. 11.-P.390.

105. Zamenhof S., in "Biochemical Preparations" (C.S. Vestling, ed.).- Wiley, New York, 1958. Vol. 6.- P. 8.

106. Kirby K.S. Isolation of ribonucleic acid // Biochem. J., 1957.- Vol. 66. P. 495.

107. Kirby K.S. // Biochem. J., 1958. Vol. 70. - P. 260.

108. Kirby K.S.//Biochem. Biophys. Acta, 1959. Vol. 36, P. 117.

109. Kirby K.S. A new method for the isolation of ribonucleic acid from mammalian tissue // Biochem. J., 1956. Vol. 64. - P. 405.

110. Gierer A., Schramm G. Infectivity of ribonucleic acid from tobacco mosaic virus // Nature, 1956. Vol. 177. - P. 702.

111. Техника биохимического исследования субклеточных структур и биополимеров / Под ред. А.С. Вечера.- Минск: Наука и техника, 1977.150 с.

112. Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича.- М.: Медицина, 1977.- 392 с.

113. Гловер Дэвид М. Клонирование ДНК. Методы.- М.: Мир, 1988.- 486 с.

114. Schmidt G., Thannhauser S.J. A method for the determination of desoxyribonucleic acid, ribonucleic acid, phosphoprotein in animal tissue // J. Biol. Chem., 1945. Vol. 161. - №1. - P. 83.

115. Практикум по биохимии / Под ред. Н.П. Мешковой и С.Е. Северина. М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1979.- 430 с.

116. Методы современной биохимии: Сб. ст.- М.: Наука, 1975.- 176 с.

117. Murrau M.G., Thompson W.F. Nucleic Acids Res., 1980. Vol. 8. P. 4321.

118. Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных. Школа-практикум / Под ред. д.б.н. Зиновьевой Н.А.- Изд-во ВНИИ животноводства, 2002.- 78 с.

119. Манниатис Г., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. — М.: Мир, 1984. — 453 с.

120. Химический энциклопедический словарь. / Гл. ред. И.Л. Кнунянц.- М.: Сов. Энциклопедия, 1983. 792 с.

121. Рабинович В.А., Хавин З.Я. Краткий химический справочник. — Л: Химия, 1977. 376 с.

122. Крешков А.П. Основы аналитической химии. Теоретические основы. Количественный анализ, книга2-я, изд. 4-е, перераб. М.: Химия, 1976, 480с.

123. Химические реактивы и высокочистые химические вещества. Каталог. 2-е изд. перераб. и доп. М.: Химия, 1983. - 704 с.

124. А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика. Физико-химические свойства, методики, библиография: Пер. с англ. Е.А. Розенберга и С.И. Коппель. -М.: Мир, 1976.-542 с.

125. А. Вайсбергер, Э. Проскауэр, Дж. Риддик, Э. Тупс. Органические растворители. Физические свойства и методы очистки: Пер. с англ. H.H. Тихомировой / Под ред. Я.М. Варшавского. М.: Изд-во иностранной литературы, 1958. - 518 с.

126. ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ. Методики выполнения измерений. — М.: Изд-во стандартов, 2001. 9 с.

127. Зейдель А.Н. Погрешности измерений физических величин. — JL: Наука, 1985.- 112 с.

128. Кассандрова О.Н., Лебедев В.В. Обработка результатов наблюдений. — М.: Наука, 1970.-104 с.

129. Кондратов А.П., Шестопалов Е.В. Основы физического эксперимента и математическая обработка результатов измерений. — М.: Атомиздат, 1977.-197 с.

130. Тейлор Дж. Введение в теорию ошибок: Пер. с англ. Л.Г. Деденко. — М.: Мир, 1985.-272 с.

131. Брянский Л.Н., Дойников A.C. Краткий справочник метролога. — М.: Изд-во стандартов, 1991. 89 с.

132. Сквайре Дж. Практическая физика. — М.: Мир, 1971. 163 с.

133. Худсон Д. Статистика для физиков. М.: Мир, 1970. - 134 с.

134. Кунце Х.-И. Методы физических измерений. М.: Мир, 1989. — 228 с.

135. Тойберт П. Оценка точности результатов измерений. М.: Энергоатомиздат, 1988. - 109 с.

136. Берштейн И.Я., Каминский Ю.Л. Спектрофотометрический анализ в органической химии. 2-е изд., перераб. и доп. Л.: Химия, 1986. — 200 с.

137. Медико-биологическая оценка пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников: Методические указания. — М.: Федеральный реестр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000.