Разработка культуральных моделей нервной ткани и их использование для изучения воздействия гиполипидемических препаратов на клетки мозга человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Павлов, Олег Владимирович

• Павлов, Олег Владимирович
• кандидат биологических наук
• 1994

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Павлов, Олег Владимирович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ингибиторы ГМГ-КоА редуктаэы и пробукол как j* представители наиболее эффективных современных антигиперхолестеринемических препаратов

1.2. Влияние гиполипидемических препаратов на ЦНС in 16 vivo

1.3. Теоретические основы нейротропного действия гиполипидемических препаратов

1.3.1. Проникновение липофильных соединении через гематоэнцефалический барьер

1.3.2. Особенности метаболизма холестерина в ЦНС

1.4. Культура нервной ткани как адекватная модель для изучения нейротропных эффектов гиполипидемических препаратов

1.4.1. Способы культивирования клеток нервной ткани и их применение

1.4.2. Бессывороточное культивирование клеток нервной ткани

1.4.3. Клетки животных и клетки человека

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка культуральных моделей нервной ткани и их использование для изучения воздействия гиполипидемических препаратов на клетки мозга человека»

Актуальность проблемы

Применение гиполипидемических препаратов для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением липидного обмена и высоким содержанием холестерина в крови, в настоящее время приняло массовый характер. Активно ведутся разработки ноеых лекарственных препаратов, способных эффективно понижать содержание липидов, в первую очередь холестерина, в крови.

Одним из наиболее эффективных и перспективных классов антиги-перхолестеринемических препаратов в настоящее время считается группа ингибиторов ГМГ-КоА редуктазы, называемых также "статинами" или "монаколинами". Среди препаратов этой группы наиболее широкое распространение получил ловастатин (мевинолин, Мевакор) и его структурные аналоги.

Другим широко используемым препаратом является антиоксидант пробукол, обладающий гиполипидемическим и антиатеросклеротическим действием. Он является одним из немногих средств, эффективных при лечении гомозиготной семейной гиперхолестеринемии.

При оценке эффективности гиполипидемических препаратов обычно исследуется их способность снижать содержание холестерина в экстрацеребральном компартменте, в первую очередь - в сосудистом русле. При этом, как правило, вне поля зрения исследователей остается возможность проникновения препаратов в ЦНС и их влияния на клетки мозга пациентов, находящихся на постоянной гиполипидеми-ческой терапии.

К настоящему времени, однако, накоплено достаточное количество фактов, свидетельствующих о влиянии некоторых гиполипидемических препаратов на нервную систему. Так показано, что у пациентов, принимавших ловастатин и его липофильные аналоги, наблюдалось сокращение продолжительности и нарушения сна, а также заметно ухудшались некоторые психомоторные реакции.

Пробукол также способен оказывать влияние на процессы, происходящие в нервной системе, однако характер его воздействия существенно отличается от эффектов ловастатина и его аналогов.

Литературные данные свидетельствуют о том, что высоколипо-фильные препараты способны достаточно легко проникать через клеточные мембраны, в том числе и ГЗБ, а относительная автономность метаболизма холестерина в ЦНС делает ее уязвимой для высокоэффективных препаратов, которые способны влиять на отдельные стадии синтеза, транспорта и утилизации холестерина в мозгу и, тем самым, нарушать его гомеостаз.

Очевидно, что в условиях целостного организма практически невозможно оценить степень и характер воздействия данных препаратов на нейроны и глию ЦНС человека. В то же время, использование культур нервной ткани позволяет с высокой степенью достоверности смоделировать in vitro ситуацию, имитирующую проникновение в мозг ли-пофильных гиполипидемических препаратов и оценить степень их непосредственного воздействия на нейрональные и глиальные клетки. Это дает возможность объяснить на клеточно-молекулярном уровне нейротропные эффекты, которые наблюдаются при приеме некоторых из этих препаратов, а также обнаружить эффекты, не выявляемые при наблюдениях in vivo.

Несмотря на то, что влияние этих препаратов на клетки различных тканей достаточно широко изучается на моделях in vivo и in vitro, в литературе практически отсутствуют данные о непосредственном влиянии "терапевтических" концентраций этих препаратов на клетки нервной системы человека и животных и о характере такого воздействия на клеточном уровне.

Вместе с тем, современные методы культивирования позволяют получить различные типы клеточных культур и разработать на их основе адекватные модели для изучения различных аспектов функционирования клеток мозга человека и нейротропных эффектов фармакологических препаратов, проникающих в мозг.

Цеди и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния "терапевтических" концентраций ловастатина и его аналогов, а также пробукола на культивируемые in vitro клетки ЦНС человека.

В задачи исследования входило:

- получение различных типов культур нервной ткани человека;

- разработка на основе культивируемых клеток мозга человека (нейронов и астроцитов) адекватных моделей in vitro, которые позволили бы изучать эффекты тестируемых препаратов на клеточно-моле-кулярном уровне;

- изучение непосредственного влияния тестируемых препаратов на различные процессы жизнедеятельности нейрональных и глиальных клеток ЦНС человека, в частности: отдельные стадии метаболизма холестерина, пролиферативную активность, рост и выживаемость, ультраструктурную организацию.

Положения, выносимые на защиту

1. Разработаны новые методы получения нейронов и астроцитов ЦНС человека, способных к длительному существованию в условиях клеточной культуры.

2. На основе культур клеток головного мозга человека созданы модели, позволяющие в условиях in vitro изучать:

- синтез холестерина и активность ЛНП-рецепторов в клетках нервной ткани человека;

- функционально- морфологические характеристики основных типов клеток мозга человека в процессе их развития

3. Выявлен нейротокоический аффект ловастатина на культуры клеток мозга человека при концентрациях препарата, которые присутствуют в организме пациентов в процессе лечения.

4. Установлено, что пробукол стимулирует рост и дифференци-ровку нервных клеток, а также увеличивает срок их жизни в культуре.

5. Показано, что пробукол заметно нивелирует негативные цито-токсические эффекты ловастатина в культурах нейронов человека при комбинированном применении этих препаратов.

Научная новизна работы

В процессе исследования были разработаны оригинальные методы получения и долговременного культивирования клеток ЦНС человека.

Впервые в условиях in vitro была смоделирована ситуация долговременного непосредственного воздействия "терапевтических" концентраций ловастатина и пробукола на клетки мозга человека, что-позволило продемонстрировать выраженный негативный эффект ловастатина на нейрональные и глиальные клетки ЦНС человека и стимулирующее влияние пробукола на рост и развитие нейрональных клеток.

Научно-практическое значение полученных результатов

1. Полученные в ходе данного исследования результаты могут быть использованы для выработки рекомендации по практическому применению гиполипидемических препаратов с учетом их возможного действия на центральную нервную систему человека.

2. Разработанные в ходе исследования культуральные модели могут быть использованы для тестирования новых лекарственных препаратов на стадии предклинических испытаний, что позволит существенно сократить сроки их внедрения в практику здравоохранения. Данные модели дают возможность за относительно короткий срок обнаружить возможные побочные эффекты препаратов, для выявления которых в кли-ннике требуются годы.

3. Обнаруженный нейритстимулирующий эффект пробукола после дополнительных исследований может быть использован для стимуляции регенерационных процессов в нервной системе.

Апробация работы

Научные результаты, представленные в диссертации, были доложены на II Всесоюзном симпозиуме "Возбудимые клетки в культуре ткани" (Пущино, 1989 г.) и XIY ежегодной конференции университета г. Сиднея (Австралия, 2-4 февраля 1994г.). Тезисы работы были опубликованы в сборнике "Возбудимые клетки в культуре ткани "(1990) и Трудах Австралийского общества нейронаук (Proceedings of Australian Neuroscience Society, 1994, V. 5).

Структура диссертации

Диссертация изложена на 139 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения и выводов. Работа содержит 21 рисунок и 8 таблиц. Список литературы включает 189 источников.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Павлов, Олег Владимирович

5. ВЫВОДЫ

1. На основе нового способа культивирования, использующего методы реагрегации клеток, бессывороточного культивирования и применения цитозинарабинозида, получены высокообогащенные (более 95% чистоты) культуры нейронов головного мозга человека, способные к длительному существованию в условиях in vitro.

2. Получены чистые (более 95% чистоты) культуры первичных астроцитов человека и разработаны условия их долговременного (до 3 месяцев) культивирования в бессывороточной среде.

3. Созданы культуральные модели, позволяющие изучать ряд функционально-морфологических характеристик основных типов клеток ЦНС человека в процессе их развития in vitro.

4. Ловастатин и его структурные аналоги подавляют внутриклеточный синтез холестерина в нейрональных и глиальных клетках на 50-80%; культуры первичных астроцитов человека обладают повышенной чувствительностью к малым дозам ловастатина.

5. Концентрации ловастатина, которые присутствуют в организме пациентов при клиническом применении этого препарата, оказывают нейротоксическое действие на культуры нервной ткани, что выражается в подавлении роста, нарушении ультраструктуры и гибели клеток ЦНС человека.

6. Пробукол стимулирует рост нейритов в культурах нейрональных агрегатов, способствует дифференцировке нейронов и увеличивает срок их жизни в культуре на 8-12 суток.

7. При комбинированном действии пробукола и ловастатина пробукол в значительной степени ослабляет негативное влияние ловастатина на рост и жизнеспособность нейронов человека в культуре.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Павлов, Олег Владимирович, 1994 год

1. Балабанов Ю.В., Вартанян Г.А., Силаков В.Л. Выявление факторов позной асимметрии в культуре ткани гипофиза под действием ликво-ра кошек с унилатеральным повреждением коры большого мозга. Бюлл. зкспер. биол. мед. 1988. Т. 55, N 2, С. 160-163.

2. Балабанов Ю.В., Бобрышев Ю.В., Чумасов Е.И. Особенности роста глии в культурах ткани коры большого мозга крыс// Арх. анат., гистол., змбриол. 1989. Т. 96, N 5. С. 25-31.

3. Балабанов Ю.В., Завизион Б.А., Трахт И.Н. Получение иммортализованных астроцитов спинного мозга эмбрионов человека// Докл. акад. наук СССР. 1990. Г. 315. N 5, С. 1238-1241.

4. Балабанов Ю.В., Павлов О.В., Бобрышев Ю.В. Получение "чистых" культур нейронов головного мозга эмбрионов человека// Цитология. 1992, Т. 34, N 5, С. 83-88.

5. Бобрышев Ю.В., Балабанов Ю.В., Чеботарь Н.А., Конописцева Л. А. Гибель астроцитов в органотипических культурах спинного мозга плодов крыс с односторонней микромелией// Онтогенез. 1990. Т. 21, N 4, С. 380-387.

6. Буравлев В.М. Особенности клеток мозга эмбрионов, полученных от больных шизофренией женщин в условиях культивирования m vitro// Журн. невропатологии и психиатрии им. С.С.Корсакова. 1971. Т. 716, С. 1238-1241.

7. Буравлев В.М. Цитоморфологическое и кариологическое исследование эксплантатов мозга эмбрионов, абортированных у женщин, больных шизофренией// Автореф. дис. . канд.биол.наук. М., 1972. 120 с.

8. Буравлев В.М. Особенности влияния in vitro психофармакологических средств на эмбриональную ткань мозга плодов больных шизофренией матерей// Журн. невропатол. и психиатрии им. С.С.Корсакова. 1978. Т.78, С. 1070-1075.

9. Буравлев В.М. Использование культуры нервной ткани в исследованиях некоторых психических заболеваний человека// Руководство по культивированию нервной ткани. М.: Наука, 1988. С. 248-252.

10. Буравлев В.М. Накопление глиофибрилл в культивируемой нервной ткани плодов человека (электронная микроскопия и иммуноцитохи-мия)// Возбудимые клетки в культуре ткани. Матер. II Всесоюзн. симпозиума, 1989, Пущино. Пущино 1990. С. 87-89.

11. Буравлев В.М., Павлова Е.В., Востриков В.М. Влияние биологических жидкостей и экстракта мозга лиц с болезнью Альцгеймера на культуру нервной ткани// Журн. невропатологии и психиатрии им. С.С.Корсакова. 1986. Т. 86, Вып. 7, С. 1007-1111.

12. Викторов И.В. Направленная миграция и дифференцировка ней-робластов в органной культуре спинного мозга мышиных эмбрионов// Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1976. Т. 82, С. 1002-1005.

13. Викторов И.В. Формирование связей межжду изолированными органотипическими эксплантатами мозга// Функционально-структурные основы системной деятельности и механизмы пластичности мозга. М.: АМН СССР. Ин-т мозга, 1976. Вып.5. С. 78-82.

14. Викторов И.В. Развитие и пластичность нейронов в тканевых и клеточных культурах// Автореф. дис. . д-ра биол наук. М., 1987.

15. Викторов И.В., Хаспеков Л.Г. Формирование клеточных структур и межнейронных связей в органотипической культуре ткани гиппо-кампа новорожденных мышей// Нейрофизиология. 1976. Т. 8, С. 384-391.

16. Викторов И.В., Шаронова И.Н. Формирование функциональных синаптических связей между гетерогенными образованиями мозга в органотипической культуре нервной ткани// Там же. 1980. Т. 12, С. 490-497.

17. Викторов И.В., Вербицкая Л.Б., Шашкова Н.А. Синаптогенез в культуре мозжечка// Современные представления о функциях мозжечка. Ереван: Изд-во АН АрмССР, 1984. С. 31-41.

18. Викторов И.В., Хаспеков Л.Г., Шашкова Н.А. Культивирование ткани и клеток центральной нервной системы // Руководство по культивированию нервной ткани. М.: Наука, 1988. С. 141-167.

19. Вильнер Б.Я. Использование тканевых и клеточных культур в изучении патогенеза заболеваний нервной системы// Руководство по культивированию нервной ткани. М.: Наука, 1988. С. 242-248.

20. Вильнер Б.Я. Развитие клеток симпатоадреналовой системы в культуре// Возбудимые клетки в культуре ткани. Матер. II Всесоюзн. симпозиума, 1989, Пущино. Пущино 1990. С. 18-23.

21. Вильнер Б.Я., Дикушина Ж.В., Лущицкая Н.И., Пашковская М.И. Развитие нервных клеток в культуре ткани спинного мозга крыс m vitro//Механизмы нейрогуморальных регуляций функций. Минск: Наука и техника, 1975. С. 229-237.

22. Востриков В.М., Буравлев В.М., Бурбаева Г.Ш., Турсунова

23. Ю.Д. Идентификация клеток различного генеза в культуре эмбрионального мозга человека с помощью моноклональных антител к глиальному фибриллярному кислому белку// Журн. невропатол. и психиатрии им. С.С.Корсакова. 1989. Т.89, С. 40-43.

24. Голдстейн Г.У., Бенц А.Л. Гематоэнцефалический барьер// В мире науки. 1986. N 11, С. 40-49.

25. Ильинский О.Б., Козлова М.В., Кондрикова Е.С., Титов М.И., Беспалова Ж.Д., Ярыгин К.Н., Юрченко Н.Н. Влияние опиоидных пептидов на нервную ткань in vitro// Нейрофизиология. 1985. Т. 17, N 4, С. 549-557.

26. Кимелберг Г.К., Норенберг М.Д. Астроциты// В мире науки. 1989. N 6, С. 32-41.

27. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран. Эволюция липидов мозга. Адаптационная функция липидов. Л.: Наука, 1981. 339 с.

28. Лакеев Ю.В., Косых В.А., Косенков Е.И., Цибульский В.П., Тихомиров О.Ю., Антонов И.А., Репин B.C. Пробукол итокоферол стимулируют синтез желчных кислот в культивируемых гепатоцитах кролика// Биохимия. 1993. Т. 58. Вып. 3, С. 406-415.

29. Ланкин В.З., Лупанов В.П., Лякишев А.А, Ревенко В.М. Механизмы антиатерогенного действия пробукола и перспективы его клинического применения// Кардиология. 1991. Т. 31, N 6, С. 87-90.

30. Медведев С.В., Чумасов Е.И., Балабанов Ю.В., Силаков В.Л., Гурчин Ф.А. О биологической активности ликвора больных с поврежденным спинным мозгом// ДАН СССР. 1987. Т. 2936, N 1, С. 243-245.

31. Оленев С.Н. Дифференциация нервной ткани в культуре// Культура нервной ткани. М.: Медицина, 1977. С. 5-62.

32. Руководство по культивированию нервной ткани. Методы. Техника. Проблемыю М.: Наука, 1988 318 с.

33. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии, т. 2,3. М.: Мир, 1981.

34. Халанский А. С. Опухоли и трансформированные клетки нервной системы в культуре// Руководство по культивированию нервной ткани. М.: Наука, 1988. С. 252-259.

35. Чубаков А.Р., Сотников О.С. Формирование связей между ядрами шва и гиппокампа в культуре ткани (прижизненные функциональные и морфологические исследования)// Арх. анат., гистол., эмбриол. 1982. Т. 82, С. 11-20.

36. Чубаков А. Р. Нейромедиаторы в культурах ЦНС и их роль в развитии нервной ткани// Руководство по культивированию нервной ткани. М.: Наука, 1988. С. 182-200.

37. ЧумасовЕ.И., Чубаков А. Р., Коновалов Г. В., Громова Е. А. Влияние серотонина на рост и дифференцировку клеточных элементов гиппокампа в условиях культивирования// Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. 1978. Т. 74, С. 98-106.

38. ЧумасовЕ.И., Чубаков А.Р., Коновалов Г.В., Громова Е.А. Влияние норадреналина на рост и дифференцировку клеточных элементов гиппокампа крыс в условиях эксплантации// Там же. 1980. Т. 78, С. 13-22.

39. Чумасов Е.И., Чалисова Н.И. Современные аспекты культивирования нервных тканей// Арх. анат., гистол., эмбриол. 1985. Т. 89, N 9, С. 87-93.

40. Чумасов Е.И., Бобрышев Ю.В., Балабанов Ю.В., Павлов О.В. Ультраструктурные особенности развития нейральных клеток эмбриональной закладки коры головного мозга человека в культуре// Ультраструктура и пластичность нейронов. Пущино, 1990. С. 135-142.

41. Эдельман М. "Молекулы адгезии клеток" и их роль в эмбриональном развитии// В мире науки. 1984. N 6, С. 70-82.

42. Aburatani Н. , Matsumoto A., Kodama Т., Takaku F. , Fukazawa С., Itakura Н. Increased level of messenger ribonucleic acid for apolipoprotein E in the spleen of probucol-treated rabbits// Am. J. Cardiol. 1988. V. 62, P. 60B-65B.

43. Alberts A.W. Discovery, biochemistry and biology of lovastatin// Am. J. Cardiol. 1988. V. 62, H 15, P. 10J-15J.

44. Almazan G., Honegger P., Matthieu J.-M., Guentert-Laubert

45. B. Epidermal growth factor and bovine growth hormone stimulate differentiation and myelination of brain cell aggregates in culture// Dev. Brain Res. 1985. V. 21, P. 45-54.

46. Aloisi F. , Borsellino G., Samoggia P., Testa U., Chelucci

47. C., Russo G., Peschle C. , Levi G. Astrocyte cultures from human embryonic brain: characterization and modulation of surface molecules by inflammatory cytokines// J. Neurosci. Res. 1992. V. 32, P. 494-506.

48. Anastasi A., Betteridge D.J., Galton D.J. Effect of probucol and other drugs on sterol synthesis in human lymphocytes// Diet and Drugs in Atherosclerosis. N.Y.: Raven Press, 1980. P. 161-163.

49. Asher R., Bignami A. Hyaluronate binding and CD44 expression in human glioblastoma cells and astrocytes. Exp. Cell.

50. Res. 1992. V. 203, P. 80-90.

51. Assouline J.G., Bosch P., Lim R. , Kim S. , Jensen R. , Pantazis N.J. Rat astrocytes and Schwann cells in culture synthesize nerve growth factor-like neurite-promoting factors// Dev. Brain Res. 1937. V. 31, P. 103-113.

52. Atterwill C.K., Pillar A.M., Prince A.K. The effects of ethylcholine mustard aziridinium (ECMA) in rat brain reaggregate cultures// Br. J. Pharm. 1936. V. 33, P. 355P.

53. Banker G.A. Trophic interactions between astroglial cells and hippocampal neurons in culture// Science. 1930. V. 209, P. 309-310.

54. Barochovsky 0., Bradford H.F. Development of transmitter-releasing capacity in neuron-enriched tissue culture// J. Keurochem. 1937. V. 43, P. 737-797.

55. Barth J.D., Kruisbrink O.A.E., Van Dijk A.L. Inhibitors of hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase for treating hyperholesterolaemia// Br. Med. J. 1990. V. 301, К 6753, P. 669.

56. Bloom F.E. Neurochemical transmission and the central nervous system// Gilman A.G., Goodman L.S., Gilman A., eds. Goodman and Gilman's the pharmacological basis of therapeutics. 6th ed. New York: MacMillan, 1930. P. 235-257.

57. Bornstein M.B. Reconstituted rat-tail collagen used as substrate for tissue cultures on coverslips in Maximov slices androller tubes// Lab. Invest. 1958. V. 13, P. 134-137.

58. Bottenstein J.E. Growth and differentiation of neural cells in defined media// Cell culture in the neurosciencss. N.Y., London: Plenum Press, 1935. P.3-43.

59. Bottenstein J.E.,Sato G.H. Growth of a rat neuroblastoma cell line in serum-free supplemented medium// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. V. 76, N 1, P. 514-517.

60. Brewer G.J., Cotman C.W. Survival and growth of hippocampal neurons in defined medium at low density:advantages of a sandwich culture technique or low oxygen. Brain Res. 1989. V. 494, P. 65-74.

61. Bunge M.B., Bunge R.P., Peterson E.R. The onset of synaptic formation in spinal cord cultures as studied by electron microscopy// Brain Res. 1967. V. 6, P. 728-749.

62. Cepco C.L. Immortalization of neural cells via oncogene transduction// Trends in Neurosci. 1988. V. 11, N 1, P. 6-8.

63. Cepco C.L. Immortalization of neural cells via retrovirus-mediated oncogene transduction// Ann. Rev. Neurosci. 1989. V. 12, P. 47-65.

64. Cestelli A., Savettieri G., Ferraro D., Vitale F.

65. Formulation of a novel synthetic medium for selectively culturing rat CMS neurons// Dbv. Brain Res. 1985. V.22, P. 219-227.

66. Cheng J.Т., Yang C.F., Jou T.C. Inhibitory effect of 1-ascorbic acid on the growth of astrocytes in cell culture// Neuropharmacology. 1933. V. 27, N 11, P. 1179-1182.

67. Choi B.H., Kim R.C. Expression of glial fibrillary acidic protein in immature oligodendroglia// Science. 1984. V. 223, N 4634, P. 407-409.

68. Cholewinski A.J., Wilkin G.P. Astrocytes from forebrain, cerebellum, and spinal cord differ in their responses to vasoactive intestinal peptide// J. NeurochBtn. 1988. V. 51, P. 1626-1633.

69. Dambergs R., Lean J., Kidson C. SBlBction of differentiated neurons in embryonal mouse brain cultures using arabinofuranosylcytosine// Exp. Neurol. 1978. V. 59, N 2, P. 296-303.

70. Dehouck M.-P., Jol1iet-Riant P., Bree F. , Fruchart J.-C., Cecchelli R., Tillement J.-P. Drug transfer across the blood-brain barrier: correlation between in vitro and in vivo models// J. Neurochem. 1992. V. 58, N 5, P. 1790-1797.

71. De La Vega F.M., Mendosa-Figueroa T. Effects of probucol on lipid metabolism and secretion in long-term cultures of adult rat hepatocytes// Biochim. Biophys. Acta. 1991. V. 1081, N 3, P. 293-300.

72. De Long G.R. Histogenesis of fetal mouse isocortex and hippocampus in reaggregating cell cultures// Dev. Biol. 1970. V. 22, P. 563-583.

73. Dietschy J.M., Turley S.D., Spady D.K. Role of liver in the maintenance of cholesterol and low density lipoprotein homeostasis in different animal species, including humans// J. Lipid. Res. 1993.1. V. 34, N10, P. 1637-1659.

74. Elder G.A. , Major E.O. Early appearance of type II astrocytes in developing human fetal brain// Dev. Brain Res. 1938. V. 42, P. 146-150.

75. Ennas M.G., Cocchia D., Silvetti E., Sogos V. , Riva A., TorBlli S., Gremo F. Immunocompetent cell markers in human fetal astrocytes and neurons in culture// J. Neurosci. Res. 1992. V. 32, P. 424-436.

76. Espinosa de los Monteros A., Foucaud B. Effect of iron and transferrin on pure oligodendrocytes in culture; characterisation of a high-affinity transferrin receptor at different ages// Dev. Brain Res. 1987. V. 35, P. 123-130.

77. Evrard C., Galiana E., Rouget P. Establishment of "normal" nervous cell lines after transfer of polyoma virus and adenovirus early genes into murine brain cells// EMBO J. 1986. V. 5, N 12, P. 3157-3162.

78. Evrard C., Borde I., Marin P., Galiana E., Premont J., Gros F., Rouget P. Immortalization of bipotential and plastic glio-neuronal precursor cells// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87, P. 3062-3066.

79. Fairbanks K.P., Witte L.D., Goodman D.S. Relationship between mevalonate and mitogenesis in human fibroblasts stimulated with platelet-dBrived growth factor// J. Biol. Chem. 1984. V. 259, N 3, P. 1546-1551.

80. Fawcett J.W., Fersht N., Housden L., Schachner M., Pesheva

81. P. Axonal growth on astrocytes is not inhibited by oligodendrocytes// J. Cell Sci. 1992. V. 103, P. 571-579.

82. Fischbach G., Nelson P. Cell culture in neurobiology// Handbook of physiology. H.Y.: Acad. Press, 1977. V. 1, P. 719-768.

83. Fok-Seang J., MillBr R.H. Astrocyte precursors in neonatal rat spinal cord cultures// J. Neurosci. 1992. V. 12, N 7, P. 2751-2764.

84. Fontana A., Kristensen F. , Dubs R. , Gemsa D., Weber E. Production of prostaglandin E and interleukin-1 like growth factor by cultured astrocytes and C6 glioma cells// J. Immunol. 1982. V. 129. N 6, P. 2413-2419.

85. Garber B. Cell aggregation and recognition in sel1fassembly of brain tissue// Cell, Tissue and Organ Cultures in Neurobiology. N.Y.: Acad, press, 1977, P. 515-537.

86. Giulian D., Lachman L.B. Interleukin-I stimulation of astroglial proliferation after brain injury// Science. 1985. V. 228, P. 497-499.

87. Godfrey E.W., Nelson P.G., Schrier В. Neurons from fetal rat brain in a new cell culture system: a multidisciplinary analysis// Brain Res. 1975. V. 90, P. 1-21.

88. Goldman S.A., Pulsinelli W.A., Clarke W.Y., Kraig R.P., Plum F. The effects of extracellular acidosis on neurons and glia in vitro// J. Cerebral Blood Flow and Metabolism. 1989. V. 9, P. 471-477.

89. Goodman D.S., Noble R.P., Dell R.B. Three-pool model of the long term turnover of plasma cholesterol in man// J. Lipid Res. 1973. V. 14, N 2, P. 178-188.

90. Grega D.S. Culturing spinal cord explants in a collagen gel// J. Neurosci. Meth. 1984. V. 11, P. 199-203.

91. Grisham J.W., Smith G.J. Predictive and mechnistic evsluation of toxic responses in mammalian cell culture systems// Pharm. Rev. 1984. V. 36, N 2, P. 151S-171S.

92. Grumet M., Hoffman S.r Crossin K.L., Edelman G.M. Cytotactin, an extracellular matrix protein of neural and non-neural tissues that mediates glia-neuron interaction// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1935. V. 82, P. 8075-3079.

93. Grundy S.M. Drug therapy of hyperlipidaemia. N.Y.:Gower Medical Publishing, 1990.

94. Habenicht A.J.E., Glomset J.A., Ross R. Relation of cholesterol and mevalonic acid to the cell cycle in smooth muscle and Swiss 3T3 cells stimulated to divide by platelet-derived growth factor// J. Biol. Chem. 1980. V.255, N 1, P. 5134-5140.

95. Hemmendinger L.M., Garber B.B., Hoffmann P.C., Heller A. Target neuron-specific process formation by embryonic mesencephalic dopamine neurons in vitro// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V. 78, N 2, P. 1264-1268.

96. Hertz L., Dreijer J., Schousboe A. Energy metabolism in glutamatergic neurons, GABAergic neurons and astrocytes in primary cultures// Neurochem Res. 1983. V. 13,N 7, P. 605-610.

97. Hill M.A. The growth of motoneurons and their neurites in relation to Schwann cells harvested from sciatic nerve// Dev. Brain Res. 1937. V. 33, P. 243-253.

98. Hofmann S.I., Russel D.W., Goldstein J.L., Brown M.S. rnRNAfor low density lipoprotein receptor in brain and spinal cord of immature and mature rabbits// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1937. V. 84, P. 6312-6316.

99. Honegger P. Biochemical differentiation in serum-free aggregating brain cell cultures// Cell culture in the neurosciences. N. У. , London: Plenum Press, 1985. P. 223-243.

100. Honegger P., Richelson E. Biochemical differentiation of mechanically dissociated mammalian brain in aggregating cell culture. Brain Res. 1976. V. 109, P. 335-354.

101. Honegger P., Richelson E. Kainic acid alters neurochemical development in fetal rat brain aggregating cell cultures// Brain Res. 1977. V. 138, P. 580-584.

102. Honegger P., Lenoir D. Triiodthyronine enhancement of neuronal differentiation in aggregating fetal rat brain cells cultured in a chemically defined medium// Brain Res. 1980. V. 199, P. 425-434.

103. Honegger P, Werffeli P. Use of aggregating cell cultures for toxicological studies. Experientia. 1988. V. 44, P. 817-823.

104. Ignatius M.J., Gebicke-Harter P.J., Skene J.H.P., Schilling J.W. , Weisgraber K.H., Mahley R.W., Shooter E. Expression of apolipoprotein E during nerve degeneration and regeneration// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1936. V. 83, P. 1125-1129.

105. Ignatius M.J., Shooter E.M., Pitas R.E., Mahley R.W. Lipoprotein uptake by neuronal growth cones in vitro// Science. 1987. V. 236, P. 959-962.

106. Ilyinsky O.B., Kozlova M.V., Kondrikova E.S., Kalentchuk V.U., Titov M.I., Bespalova Z.D. Effects of opioid peptides and naloxone on nervous tissue in culture// Neuroscience. 1987. V. 22, N 2, P. 719-735.

107. Kennedy P.G.E., Lisak R.P., Raff M.C. Cell-type epocific markers for human glial and neuronal cells in culture// Lab. Invest. 19S0. V. 43, К 4, P. 342-351.

108. Kennedy P.G.E., Fok-Seang J. Studies on the development, antigenic phenotype and function of human glial cells in culture// Brain. 1936. V. 109, Part YI, P.1261-1277.

109. Kozak L.P., Eppig J.J., Dahl D., Bignami A. Ultrastructural and immunohistоlogical characterization of a cell culture model for the study of neuronal-glial interactions// Dev. Biol. 1977. V. 59, P. 206-227.

110. Kozlova M.V., Ilyinsky O.B., Kalentchuk V.U., Kondrikova E.S. Stimulatory effect of substance P on sympathetic ganglia and spinal cord in culture// Neurosci. Lett. 1937. V. 82, N 1, P. 16-20.

111. La Du B.N., Maudel H.G., Way E.L. eds. Fundamentals of drug metabolism and drug disposition. Baltimore: Williams and Wilkins, 1971.

112. Langston J.W. MPTP and Parkinson's disease// Trends in Neurosci. 1935. V. 8, P. 79-83.

113. Leonetti C., D'Agnano I., Del Bufalo D., Carapella C.M., Zupi G. Hunan glioma lines as experimental model for biological and chemosensitivity studies// J. Neurosurg. Sci. 1989. V. 33, N 1, P. 39-42.

114. Letourneau P.C. Cel1-to-substratum adhesion and guidance of axonal elongation// Dev. Biol. 1975. V. 44, P. 92-101.

115. Letourneau P.C. Possible roles for eel1-to-substratum adhesionin neuronal morphogenesis// Ibid. P. 77-91.

116. Letourneau P.C. Cel1-substratum adhesion of neurits growth conBS and its role in neurite elongation// Exp. Cell Res. 1979. V.

117. Lewin R. Parkinson's disease: an environmental cause?// Science. 1985. V. 229, P. 257-258.

118. Lim R., Miller K.F. An improved procedure for the isolation of glia maturation factor// J Cell. Physiol. 1984. V. 119, P. 255-259.

119. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent// J. Biol. Chem. 1951. V. 193, P. 265-275.

120. Mahley R.W. Apolipoprotein E: cholesterol transport protein with expanding role in cell biology// Science. 1988. V. 240, N 4852, P. 622-629.

121. Mahley R.W., Innerarity T.L., Rail S.C., Weisgraber K.H. Plasma lipoproteins: apolipoprotein structure and function// J. Lipid Res. 1984, V. 25, P. 1277-1294.

122. Mahoney E.M., Child M.J., Smith-Monroy C.A. Differential transport of pravastatin and lovastatin by hepatocytes and fibroblasts// Circulation. 1990, V. 82, (Suppl. 3), P. Ill 6.

123. Maier C.E., Watanabe M., Singer M., McQuarrie I.G., Sunshine J., Rutishauser U. Expression and function of neural cell adhesion molecule during limb regeneration// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83, P. 3395-8399.

124. Matsumura H., Takahata R., Kantha S.S., Hayaishi 0. The effects of lovastatin, simvastatin, and pravastatin on sleep-wake activity in rats (Abstr.)// XI International symposium on drugsaffecting lipid metabolism. Florence, Italy. May 1992.

125. Mattson M.P., Rychlik B. Cell culture of cryopreserved human fetal cerebral cortical and hippocampal neurons: neuronal development and responses to trophic factors// Brain Res. 1990. V. 522., P. 204-214.

126. McCarthy K.D., de Vellis J. Preparation of separate astroglial and oligodendrog1ial cell cultures from rat cerebral tissue// J. Cell Biol. 1930. V. 35, P. 390-902.

127. McCaslin P.P., Morgan W.W. Cultured cerebellar cells as an in vitro model of excitatory amino acid receptor function// Brain Res. 1987. V. 417, P. 380-334.

128. Mevacor, Product Monography. 1983. Merck & Co.,Inc.,Rahway.

129. Millaruelo A.I., Nieto-Sampedro M., Cotman C. Cooperation between nerve growth factor and laminin or fibronectin in promoting sensory neuron survival and neurite outgrowth// Dev. Brain Res. 1988. V. 38, P.219-228.

130. Moscona A.A. Patterns and mechanisms of tissue reconstruction from dissociated cells// Developing Cell Systems and

131. ThBir Control. N.Y.: Ronald PrBss, 1960. P. 45-70.

132. Moscona A.A. Analysis of cell recombinations in experimental synthesis of tissue in vitro// J. CbII. Сотр. Physiol. 1962. V.60, Suppl. 1, P. 65-80.

133. Moscona A.A. Recombination of dissociated cells and the development of cell aggregates// Cell and Tissue in Culture. N.Y.: Acad. Press, 1965. V. 1, P. 489-529.

134. Mosley S.T., Kalinowski S.S., Schafer B.L., Tanaka R.D. TissuB-SBlective acute effects of inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutary1 coenzyme A reductase on cholesterol biosynthesis in lens// J. Lipid. Rbs. 1989. V. 30, К 9, P. 1411-1420.

135. Muller H.W., Ignatius M.J., Hangen D.H., ShootBr E.M. Expression of specific shBath cell protBins during peripheral nerve growth and regeneration in mammals// J. Cell. Biol. 1986. V. 102, N 2, P. 393-402.

136. Munoz D.G., На Т., Uitti R.J. Neurite extension on dibutyryl cyclic AMP-stimulated astrocytes// Exp. Neurol. 1988. V. 101, N 3, P. 374-384.

137. Naruszewicz M., Carew Т.Е., Pittman R.C., Witztum J.L., Steinberg D. A. A novel mechanism by which probucol lowers low density lipoprotein levels demonstrated in the LDL receptor-deficient rabbits// J. Lipid Res. 1984. V. 25, N 11, P. 1206-1213.

138. Neil-Dwyer G., Bartlett J., McAinsh J., Cruickshank J.M. ^-adrenoreceptor blockers and thB blood-brain barrier// Br. J. Clin.

139. Pharmacol. 1981. V. 11, N 6, P. 549-553.

140. NoblB M., Fok-Seang J., Cohen J. Glia are a unique substrate for in vitro growth of central nervous system neurons// J.

141. Neurosci. 1934. V. 4, N7, P. 1392-1903.

142. O'Donnell M.P., Kasiske B.L., Kin Y. , Atluru D. , Kean© W.F. Lovastatin inhibits proliferation of rat mesangial cells// J. Clin Invest. 1993. V.91, P. 83-87.

143. Oorschot D.E. Effect of fluorodeoxyuridine on neurons and non-neuronal cells in cerebral explants// Exp. Brain Res. 1939. V. 78, P. 132-133.

144. Oorschot D.E., Jones D.G. Neuronal survival and neurite growth in cultured cerebral explants: Assessment of the effect of cytosine arabinoside using improved stereology// Brain Res. 1991. V. 546, P. 146-150.

145. Pitas R.E., Boyles J.K., Lee S.H., Foss D., Mahley R.W. Astrocytes synthetize apolipoprotein E and metabolize apolipoprotein E-containing lipoproteins// Biochim. Biophys. Acta. 1987. V. 917, P. 143-161.

146. Pitas R.E., Boyles J.K., Lee S.H., Hui D., Weisgraber K.H. Lipoproteins and their receptors in the central nervous system// J. Biol. Chem. 1987. V. 262, N 29, P. 14352-14360.

147. Poirier J., Hess M. , May P.C., Finch C.E. Astrocytic lipoprotein E mRNA and GFAP mRNA in hippocampus after entorhinal lesioning// Mol. Brain. Res. 1991. V. 11, N 2, P. 97-106.

148. Preobrazhensky S.N., Ivanov V.O., Fuki I.V., Tsibulsky V.P., Kameneva A.M., Repin V.S., Ermolin G.A. Enzyme-linked immunospecific assay of low-density-1ipoprotein receptors// Anal. Biochem. V. 149, P. 269-274.

149. Quesney-Huneeus V., Galick H.A., Siperstein M.D., Erickson S.K., Spenser T.A., Nelson J.A. The dual role of mevalonate in the cell cycle// J. Biol. Chem. 1933. V. 253, N 1, P. 373-335.

150. Raff M.C. Glial cell diversification in the rat opticnerve// Science. 1989. V. 243, N 4897, P. 1450-1455.

151. Raff M.C., Miller R.H., Noble M. A glial progenitor cell that develops in vitro into an astrocyte or a oligodendrocyte depending on culture medium// Nature. 1983. V. 303, P. 390-396.

152. Raff M.C., Lillien L.E. Differentiation of a bipotential gl'ial progenitor cell: what controls the timing and the choice of developmental pathway?// J. Cell Sci. 1988. Suppl. N 10, P. 77-83.

153. Riederer B.M., Monnet-Tschuidi F., Honegger P. Development and maintenance of the neuronal cytoskeleton in aggregating cell cultures of fetal rat telencephalon and influence of elevated K+ concentrations// J. Neurochem. 1992. V. 58, N 2, P. 649-657.

154. Roth Т., Richardson G.R., Sullivan J.P., Lee R.M., Merlotti L., Roehrs T. Comparative effects of pravastatin and lovastatin on nighttime sleep and daytime performance// Clin. Cardiol. 1992. V. 15, N 6, P. 426-432.

155. Rothe Т., Muller H.W. Uptake of endoneural lipoprotein into Schwann cells and sensory neurons is mediated by low density lipoprotein receptors and stimulated after axonal injury// J. Neurochem. 1991. V. 57, N 6, P. 2016-2025.

156. Samuel P., Perl W. Long-term decay of serum cholesterol radioactivity: body cholesterol metabolism in normals and in patients with hyperlipoproteinemia and atherosclerosis// J. Clin. Invest. 1970. V.49, P. 346-357.

157. Sastry P.S. Lipids of nervous tissue: composition and metabolism// Prog. Lipid Res. 1985. V. 24, N 2, P.69-176.

158. Selak J., Skaper S.D., Varon S. Age-dependent requirements of sympathetic neurons in serum-free culture// Dev. Brain Res. 1983. V. 7, N 2-3, P. 171-179.

159. Scarpini E., Kreider B.Q., Lisak R.P., Meola G., Velicogna M.E., Baron P., Beretta S., Buscaglia M., Ross A.H., Scarlato G. Cultures of human Schwann cells isolated from fetal nerves// Brain Res. 1983. V. 440, P. 261-266.

160. Schunack W. Open acids vs prodrugs: are pharmakokinetic differences clinically relevant?// 57th EAS Meeting. Lisbon, Portugal, May 1991.

161. Schaefer E.J. HMG-CoA reductase inhibitors for hypercholesterolemia (letter)// N. Engl. J. Med. 1988. V. 319. N 13, P. 1222-1223.

162. Silani V. , Pizzuti A., Strada 0., Falini A., Buscaglia M., Scarlato G. Human neuronal cell viability demonstrated in culture after cryopreservation// Brain Res. 1933. V. 473, P. 169-174.

163. Silani V.,Donato M.F., Villani R.M., Scarlato G. Human brain primary cultures// Ital. J. Neurol. Sci. 1991. V. 12, N 5, P. 26-29.

164. Smith G.M., Rutishauser U., Silver J., Miller R.H.Л

165. Maturation of astrocytes in vitro alters the extent and molecular basis of neurite outgrowth// Dev. Biol. 1990. V. 138, N 2, P. 377-390.

166. Snyder S.H., D'Amato R.J. MPTP: A neurotoxin relevant to the pathophysiology of Parkinson's disease// Neurology. 1986. V. 36, P. 250-258.

167. Staels В., van Tol A., Jansen H., Auwerx J. The effect of probucol on lipoprotein metabolism in the rat// Biochim. Biophys.

168. Acta. 1991. V.1035, N 1, P. 131-135.

169. Strandberg Т., Kuusi Т., Tilvis R., MiettinBn T.A. Effect of probucol on cholesterol synthesis, plasma lipoproteins and the activities of lipoprotein and hepatic lipase in the rat// Atherosclerosis. 1931. V. 40, P. 193-201.1. V >

170. Sviridov D.D., Safonova I.G., Pavlov M.Y., Kosykh V.A., Podrez E.A.,Antonov A.S., Fuki I.V., Repin V.S. Inhibition of cholesterol synthesis by. lovastatin tested on six human cell types in vitro// Lipids. 1990. V. 25, P. 177-179.

171. Sviridov D.D., Endo A., Pavlova M.Yu., Eepin V.S., Smirnov V.N. Comparison of the effects of six compactin-related compounds on cholesterol synthesis in five human cell types// Ibid. N 11, P. 635-690.

172. Sviridov D.D., Endo A., Pavlov M.Y., Eepin V.S. Time response of cholesterol synthesis inhibition by compactin-related compounds. In vitro quantitation of the "escape phenomenon"// Ibid. 1993. V. 23, N 6, P. 569-571.

173. Temple S. , Raff M.C. Clonal analysis of oligodendrocyte development in culture: evidence for a developmental clock that counts cell divisions// Cell. 1936. V. 44, P. 773-779.

174. Thompson G.R. A handbook of hyper1ipidaemia. London: Current Science. 1939. - 236p.

175. Tomaselli K.J., Reichardt L.F., Bixby J.L. Distinct molecular interactions mediated neuronal process outgrowth on-Лnon-neuronal cell surfaces and extracellular matrices// J. Cell Biol. 1936. V. 103, N 6, P. 2659-2672.

176. Vgontzas A.N., Kales A., Bixlsr E.O., Manfredi R.L., Tyson K.L. Effects of lovastatin and pravastatin on sleep efficiency and sleep stages// Clin. Pharmacol. Ther. 1991. V. 50, N 6, P. 730-737.Л

177. Wilson J.D. The measurement of the exchangeable pools of cholesterol in the baboon// J. Clin. Invest. 1970. V. 49, P. 346-357.

178. Wu D.K., Scully S., de Vellis J. Induction of glutaminB synthBtasB in rat astrocytes by co-cultivation with embryonic chick neurons// J. Neurochem. 1983. V. 50, P. 929-935.

179. Yamamoto A., Matsuzava Y., Kishino B., Hayashi R., Hirobe K., Kikkawa T. Effect of probucol on homozygous cases of familial-Лhypercholesterolemia// Atherosclerosis. 1983. V. 48, P. 157-166.

180. Yen S.-H., Fields K.L. Antibodies to neurofilament, glial filament, and fibroblast intermediate filament proteins bind to different cell types of the nervous system// J. Cell Biol. 1931. V. 33, P. 115-126.

181. Yong V.W., Kim S.U., Kim M.W., Shin D.H. Growth factors for human glial cells in culture// Glia. 1988. V. 1, P. 113-123.

182. Yong V.W., Yong F.P., Olivier A., Robitaille Y., Antel J.P. Morphologic heterogenity of human adult astrocytes in culture: correlation with HLA-DR expression// J. Neurosci. Res. 1990. V. 27, P. 678-688.