Разработка иммунологических и молекулярно-генетических методов индикации возбудителя лейкоза крупного рогатого скота тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Сафина Регина Фанисовна

• Сафина Регина Фанисовна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Сафина Регина Фанисовна

Введение

1 Обзор литературы

1.1 Этиология лейкоза крупного рогатого скота

1.2 Структура вириона и геномная организация вируса лейкоза крупного рогатого скота

1.2.1 Строение вириона возбудителя энзоотического лейкоза

1.2.2 Геном вируса

1.3 Основы патогенеза лейкоза КРС и механизм вирусной репликации

1.4 Клинические признаки лейкоза крупного рогатого скота

1.5 Влияние лейкоза КРС на качественные характеристики молочной и мясной продукции

1.6 Методы диагностики возбудителя лейкоза КРС

1.7. Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота

1.7.1 Эпизоотическая ситуация по лейкозу КРС в Российской Федерации

1.8 Заключение по обзору литературы

2 Собственные исследования

2.1 Материалы и методы исследований

2.1.1 Материалы

2.1.2 Методы исследования

2.2 Результаты собственных исследований

2.2.1 Поиск генетических маркеров для индикации ВЛ КРС с целью

повышения эффективности проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ или с англ^еа1-йте

PCR)

2.2.1.1 Дизайн праймерных комбинаций и нуклеотидных последовательностей положительных контрольных образцов

2.2.1.2 BLAST-анализ праймерных комбинаций к генам gag, env, pol и LTR возбудителя лейкоза КРС

2.2.2 Использование генов LTR, GAG, ENV, POL в качестве ДНК-

маркеров для индикации ВЛ КРС в ПЦР-РВ

2.2.3. Разработка метода мультилокусной ПЦР-РВ для индикации

возбудителя лейкоза крупного рогатого скота

2.2.4 Встречаемость ВЛ КРС в субъектах Приволжского Федерального округа (по результатам ПЦР и ИФА исследований

2.2.4.1 Исследования проб крови крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ для обнаружение провирусной ДНК ВЛ КРС в 2016 году

2.2.4.2 Исследования проб крови крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ для обнаружение провирусной ДНК ВЛ КРС в 2017 году

2.2.4.3 Исследования проб крови крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ для обнаружение провирусной ДНК ВЛ КРС и ИФА с целью обнаружения антител к ВЛ КРС в 2018 году

2.2.4.4 Исследования проб крови крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ для обнаружение провирусной ДНК ВЛ КРС и ИФА с целью обнаружения антител к ВЛ КРС в 2019 году

2.2.4.5 Исследования проб крови крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ для обнаружение провирусной ДНК ВЛ КРС в 2020 году

2.2.4.6 Исследования проб крови крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ для обнаружение провирусной ДНК ВЛ КРС и ИФА с целью обнаружения антител к ВЛ КРС в 2021 году

2.2.5 Получение и очистка белкового субстрата культуры клеток FLK-BLV

2.2.6 Анализ белковых фракций вируса лейкоза КРС

2.2.7 Определение оптимального протокола постановки и основных параметров ИФА (специфичность и чувствительность)

3 Обсуждение результатов

4 Заключение

5 Практические предложения

6 Список использованной литературы

7 Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка иммунологических и молекулярно-генетических методов индикации возбудителя лейкоза крупного рогатого скота»

Введение

Проблемы биологической безопасности и питательной ценности продуктов, в том числе и животного происхождения приобретают особую актуальность в современных экологических условиях. Одним из заболеваний сельскохозяйственных животных, оказывающих влияние на санитарное качество и пищевую безопасность мясомолочной продукции, а так же снижающих продуктивность, вызывающих гибель животного, наносящих значительный экономический ущерб животноводческим хозяйствам, является лейкоз крупного рогатого скота [30,31,43].

Лейкоз распространен в большинстве странах мира, в том числе: в Российской Федерации, Австралии, Канаде, Болгарии, Хорватии, Эстонии, Латвии, Польше, Дании, Румынии, Украине, Казахстане и ряде других стран. По официальным данным, 80% всего поголовья КРС США заражено вирусом лейкоза. Около 38% хозяйств мясного и 84% хозяйств молочного скотоводства в США неблагополучны по лейкозу [92]. В инфицированных хозяйствах, неблагополучных по лейкозу, в которых менее 5% коров проявляют клинические признаки подлежат уничтожению [74].

В настоящее время диагностические исследования по индикации вируса лейкоза крупного рогатого скота осуществляются серологическими методами. Основными методами диагностики лейкоза крупного рогатого скота признаны реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД) и иммуноферментный анализ (ИФА). Помимо этих методов проводят гематологические и молекулярно-биологические исследования по обнаружению возбудителя данного заболевания

[14].

Профилактика и борьба с лейкозом крупного рогатого скота находится в зависимости от множества социально-экономических факторов, а также от применяемых методов диагностики данной болезни. Продолжительный период латентного течения болезни приводит к тому, что животноводы перемещают клинически здоровых, но уже инфицированных животных, что в дальнейшем

приводит к возникновению новых энзоотических очагов. Качественная лабораторная диагностика энзоотического лейкоза является одной из основных задач в комплексе противоэпизоотических мероприятий по профилактике и ликвидации данного заболевания.

Несмотря на то, что существующие методы диагностики лейкоза (гематологические и серологические исследования) детально разработаны и имеют ряд своих преимуществ, они не позволяют выявить генетический материал вируса. Также существенным недостатком имеющихся методов диагностики является невозможность выявить ВЛ КРС на ранних стадиях заболевания (в пределах первых 3 - 4 недель с момента заражения). Особенно это явление проявляется у молодняка возрастом до 6 месяцев, когда еще не до конца сформирована иммунная система [46, 56].

Поэтому в настоящее время актуальной задачей является совершенствование методов ранней диагностики. Основными требованиями по отношению к диагностическим тестам являются чувствительность и специфичность. Несвоевременная диагностика лейкоза, связанная с использованием методов исследования, не обладающих достаточной чувствительностью и специфичностью, является одним из сдерживающих факторов проведения оздоровительно-профилактических мероприятий. Решением данной проблемы может стать полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, как наиболее чувствительный и специфичный метод, способный выявить геном возбудителей вирусных болезней в кратчайшие сроки. Ряд авторов предлагают различные методы с использованием ПЦР [17, 26, 36], однако основная часть исследований находится на стадии разработки.

Полимеразная цепная реакция, как метод молекулярной биологии, позволяет добиться (достигнуть) значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в исследуемой пробе. Существует много типов ПЦР, среди них мы остановили свой выбор на полимеразной цепной реакции в реальном времени - PCR Real Time (или ПЦР-РВ,

PCR-RT) с целью использования в качестве метода индикации провирусной ДНК ВЛ КРС в своих исследованиях.

Принципиальной особенностью Real-Time PCR является возможность детекции накопления продуктов амплификации непосредственно во время проведения амплификации. Поскольку кинетика накопления ампликонов напрямую зависит от числа копий исследуемой матрицы, это позволяет проводить количественные измерения ДНК и РНК инфекционных агентов. Кроме этого, данный метод высокочувствительный, позволяет получить результат за несколько часов, из минимального объема исследуемого материала (около 100 мкл крови). ПЦР в реальном времени значительно снижает риск контаминации и как следствие увеличивает достоверность результатов [79].

Что касается иммунологических методов диагностики ВЛ КРС, многообещающим и информативным, в комплексе с ПЦР, является метод иммуноферментного анализа (ИФА).

Метод ИФА характеризуется высокой специфичностью и чувствительность (более 90%), а так же возможностью определения заболевания и отслеживания иммунологической динамики процесса, то есть сравнивание количества антител в разных временных промежутках. Метод непрямого иммуноферментного анализа (ИФА), основанный на применении антивидового конъюгата с использованием ферментов-маркеров, обладает значительно большей чувствительностью, по сравнению с РИД, позволяет автоматизировать процесс, то есть отходить от субъективной оценки результатов реакции. Кроме того, с помощью ИФА можно обнаружить антитела к ВЛ КРС в биологических жидкостях (молоке, моче) [15, 37, 38, 94, 165].

Степень разработанности проблемы. В настоящее время зарубежными исследователями разработаны различные разновидности ПЦР для обнаружения провирусной ДНК вируса лейкоза КРС. Так же представлены комбинированные исследования лейкоза методом ПЦР-РВ с серологическим методом - ИФА [129, 130, 149, 169].

В Российской Федерации диагностические исследования на лейкоз проводят серологическими (РИД, ИФА), молекулярно-биологическим (ПЦР), гематологическим, клиническим и патоморфологическим методами [14].

Ветеринарные микробиологи нашей Республики Татарстан (РТ), внесли заметный вклад в исследование и изучение вируса лейкоза КРС. Так, учеными Казанской государственной ветеринарной академии молекулярно-генетическими методами показано существование 8 генотипа вируса лейкоза крупного рогатого скота, который был выявлен в Республике Татарстан [13].

Исследователями из Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности был разработан способ экспресс-диагностики вируса лейкоза КРС, основанный на методе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени [72].

Цель и задачи научных исследований Целью научной работы было выявление протеомных и геномных особенностей ВЛ КРС и разработка на этой основе иммунологических и молекулярно-генетических методов индикации возбудителя лейкоза КРС. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. провести поиск генетических маркеров специфичных для возбудителя лейкоза КРС и спроектировать на их основе праймеры и флуоресцентно-меченные зонды для индикации провируса возбудителя лейкоза КРС методом ПЦР в режиме реального времени;

2. разработать способ мультилокусной индикации провируса возбудителя лейкоза КРС на основе метода ПЦР-РВ;

3. изучить антигенные свойства вирусных белков возбудителя лейкоза КРС и возможность их использования в качестве антигенного компонента для выявления антител к ВЛ КРС методом непрямого ИФА;

4. разработать способ обнаружения антител к ВЛ КРС на основе метода непрямого ИФА с использованием нативных вирусных белков ВЛ КРС в качестве антигенного компонента.

Научная новизна результатов исследований. Разработан молекулярно-генетический способ мультилокусной индикации провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота.

Получен комплексный антиген ВЛ КРС для использования в ИФА, представляющий собой очищенный с помощью ионообменной хроматографии белковый субстрат из культуры клеток БЬК-БЬУ.

Разработан способ обнаружения противовирусных антител к ВЛ КРС в сыворотке крови на основе метода непрямого ИФА.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработанный нами способ мультилокусной индикации провирусной ДНК ВЛ КРС позволит выявлять возбудителя этой болезни сразу по нескольким генетическим локусам, что значительно повышает чувствительность, специфичность метода и достоверность полученных результатов. Предложенный метод апробирован на большом количестве биологического материала из различных хозяйств Республик Татарстан, Удмуртской Республики и Республики Марий Эл.

Предлагаемый способ индикации противовирусных антител к ВЛ КРС позволяет обнаружить специфические иммуноглобулины к вирусу лейкоза в сыворотке крови крупного рогатого скота. Данный метод можно взять за основу при создании ИФА тест-системы для лабораторной диагностики энзоотического лейкоза.

На основании результатов проведенных исследований подготовлен нормативно-технический документ - ТУ 21.10.60-008-00492374-2020 «ТЕСТ-СИСТЕМА «ЛЕЙКОЗ & ИММУНОДЕФИЦИТ КРС 100» ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПРОВИРУСНОЙ ДНК ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЛЕЙКОЗА И ИММУНОДЕФИЦИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ», которые представлены в приложениях.

Так же на основании результатов проведенных исследований подготовлен документ «Методические рекомендации по оздоровлению неблагополучных

хозяйств от энзоотического лейкоза крупного рогатого скота на основе комплексного применения серологических и молекулярно-генетических методов диагностики» представленный в приложениях.

Методология и методы исследования. Объектом исследования являлась кровь крупного рогатого скота, полученная из различных сельхозпредприятий Республики Татарстан, Удмуртской Республики и Республики Марий Эл. Исследования проводились с помощью следующих методов -биоинформационный анализ, иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР-РВ) и «классическая» ПЦР.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, 4 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов, основных положений и выводов подтверждена большим объемом исследований, воспроизводимостью результатов и высокой специфичностью и чувствительностью разработанных методов. Основные положения диссертации представлены и доложены:

1. На ежегодных отчетных научных сессиях ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2018-2021 гг.;

2. Международной научно-практической конференции «Молекулярная диагностика 2021»; (Определение чувствительности и специфичности метода ПЦР-РВ для индикации провирусной ДНК вируса лейкоза КРС / Сафина Р.Ф., Усольцев К.В., Хаммадов Н.И., Фаизов Т.Х. // Молекулярная диагностика. Сб. трудов / колл. авт. - Т. 2. -Тамбов: ООО фирма «Юлис».-2021.- с. 224-225);

3. На международной научной конференции, посвященной 75-летию Е. В. Барковского (Минск, 21 мая 2021 год, Сборник докладов) (Изучение возможности использования синтетических пептидов для обнаружения присутствия вирионов возбудителя энзоотического лейкоза в организме человека и животных / К. В. Усольцев, Р.Ф. Сафина, М. Е. Горбунова, Г. Р. Сальманова, Р.

И. Шангараев, Т. Х. Фаизов, Н.И. Хаммадов //Сборник докладов Международной научной конференции, посвященная 75-летию Е. В. Барковского, Минск, 21 мая 2021 года - с. 308-309);

4. Публикации в журналах базы Scopus ( A New Approach to the Diagnosis of Enzootic Leukosis by Genetic Markers of Bovine Leukemia Virus / Mariya E. Gorbunova, Regina F. Safina, Konstantin V. Usoltcev, Rafkat I. Shangaraev, Marina A. Efimova, Konstantin A. Osyanin, Tagir K. Faizov, Alina I. Khamidullina, Nail I. Khammadov // Biointerface research in applied chemistry.- 2022.- Volume 12, Issue 4.- p. 4448 - 4462).

- в публикациях журналов, рецензируемых ВАК:

1. Повышение чувствительности и специфичности ПЦР с использованием ДНК-маркеров, кодирующих белки p24 и gp51 в ПЦР-РВ для индикации ВЛ КРС /Р. Ф. Сафина, Г.Р. Лукманова, К.В. Усольцев, Н.И. Хаммадов, Т. Х. Фаизов // Ветеринарный врач. -2019.-№2-с.8-14

2. Использование генов, кодирующих белки LTR, p24, gp51, pol в качестве ДНК-маркеров для индикации возбудителя лейкоза КРС в ПЦР-РВ/Сафина Р.Ф.//Ученые Записки Казанской ГАВМ им. Н. Э. Баумана Т.242 (2). -2020. - c.153-158.

3. Разработка способа одновременной индикации и идентификации возбудителей лейкоза и иммунодефицита крупного рогатого скота / К. В. Усольцев, Т. Х. Фаизов, М. Е. Горбунова, Р. Ф. Сафина, Р. И. Шангараев, Г. Р. Сальманова, К. А. Осянин, Н. И. Хаммадов, «Международный вестник ветеринарии» -2021.- №3.- с.46-54.

4. «Одновременная идентификация возбудителей лейкоза и иммунодефицита КРС» /Усольцев К.В., Горбунова М.Е., Сафина Р.Ф., Шангараев Р. И., Сальманова Г. Р., Осянин К. А., Фаизов Т. Х. Хаммадов Н.И.// Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2022. - №1. - с.55-64

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработанный молекулярно-генетический способ мультилокусной индикации провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота позволяет обнаруживать провирусную ДНК ВЛ КРС сразу по нескольким локусам (gag, env, pol и LTR) и увеличивает общую чувствительность и специфичность метода ПЦР-РВ при диагностике данного заболевания;

2. разработанный способ обнаружения противовирусных антител к ВЛ КРС в сыворотке крови, основанный на методе ИФА и использовании белкового субстрата FLK-BLV в качестве антигенного компонента, позволяет обнаруживать специфические иммуноглобулины к ВЛ КРС в сыворотке крови.

Специальность, которой соответствует диссертация. Диссертационная работа соответствует паспорту специальности 06.02.02 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология. Работа посвящена разработке иммунологических и молекулярно-генетических методов индикации возбудителя лейкоза крупного рогатого скота.

Результаты научного исследования соответствуют пунктам паспорта специальности: п.1 «Природа и происхождение, структура, химический состав, морфологические, биологические, физико-химические свойства патогенных бактерий, вирусов и токсигенных грибов. Классификация возбудителей и вызываемых ими инфекционных болезней животных»; п. 5 «Методы выделения микроорганизмов и вирусов из патологического материала, средства и методы диагностики инфекционных болезней животных, индикация патогенных микроорганизмов.»; п. 8 «Эпизоотологический мониторинг и надзор. Природная очаговость инфекционных болезней животных, трансмиссивные инфекции животных различной этиологии. Способы и средства борьбы с переносчиками инфекционных болезней. Принципы противоэпизоотической и профилактической работы. Общие и специальные мероприятия по борьбе, профилактике и ликвидации инфекционных болезней животных. Государственные и международные аспекты эпизоотологии».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах и включает: введение, обзор литературы, материалы, методы, результаты собственных исследований, обсуждение, заключение, практические предложения, список использованной литературы, включающий 98 отечественных и 83 иностранных источников; дополнена приложениями. Содержит 19 рисунков и 12 таблиц.

Личный вклад аспиранта. Основной объём исследований выполнен автором самостоятельно. Автором проведены анализы, исследования по совершенствованию методов ПЦР и ИФА, анализ и обобщение результатов, оформление научных статей и диссертации.

Выражаю искреннюю благодарность и почтение за консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы: в.н.с., к. вет. н. К.В. Усольцеву; в.н.с., к.б.н. Н.И. Хаммадову; зав. отделением биохимии и молекулярно-генетического анализа., к.б.н. Осянину К.А.; зав. лаб. молекулярно-генетического анализа профессору, д. вет.н. Фаизову Т.Х.; в.н.с., к.вет.н. Хаертдынову К.С., зам. директора по науке и инновационному развитию, профессору, д.вет.н. Василевскому Н.М.; врио директора ФГБНУ ФЦТРБ «ФЦТРБ-ВНИВИ» Насыбуллиной Ж.Р.

1 Обзор литературы 1.1 Этиология лейкоза крупного рогатого скота

Лейкоз - хронически протекающая инфекционная болезнь крупного рогатого скота (далее - восприимчивые животные). В развитии болезни различаются бессимптомная, гематологическая и клиническая стадии. В бессимптомной и гематологической стадиях у восприимчивых животных характерные клинические признаки болезни отсутствуют. Бессимптомная стадия болезни характеризуется наличием в сыворотке крови восприимчивых животных антител к возбудителю лейкоза. Гематологическая стадия характеризуется хроническим сохранением увеличенного числа лимфоцитов в периферической крови восприимчивых животных. Возбудителем лейкоза является онкогенный РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Retroviridae роду ВеИагей-оун-ш [1, 4, 14,79 ].

В 1845 году Рудольф Вирхов и Джон Хьюз Беннетт независимо наблюдали аномальное увеличение количества лейкоцитов у некоторых пациентов. Р. Вирхов при вскрытии трупа женщины обнаружил резко увеличенную селезенку, беловатый цвет крови, обусловленный большим содержанием в ней лейкоцитов, правильно определил это заболевание как болезнь крови и назвал его «1еикаш1е» в 1847 г. (позже на английском языке это заболевание было названо лейкоз) [114, 127].

Поэтому основателем учения о лейкозах считается Р. Вирхов. Он определил две формы лейкемии: селезеночную, которая характеризовалась увеличением объема селезенки и большим количеством лейкоцитов в крови, и лимфатическую, проявляющуюся системным увеличением лимфатических узлов и повышением количества малых клеток в крови. Он считал, что лейкемия может протекать алейкемически. Существенный вклад в учение о лейкозе внесли А. Томаров (1862), К. Славянский (1867), А. Щастный (1876) [81,84].

Несколько позднее появились сообщения по лейкозу животных. Первые случаи лейкоза у животных описал Leisermg в 1858 г. Он обнаружил у больной лейкозом лошади резко увеличенную селезенку, в 1865 г. описал лейкоз у свиней [47].

Лейкозом болеют 29 видов животных и 15 видов домашних и диких птиц. В процессе исследования эту болезнь называли по-разному: лейкемия, «белокровие», рак крови, гемобластозы, энзоотический лейкоз. В. Эллерман предложил заменить название болезни "лейкемия" термином "лейкоз", который более полно характеризовал патологический процесс, развивающийся в кроветворной ткани, независимо от изменений, наблюдаемых в периферической крови. Несколько позднее было предложено новое название болезни "гемобластозы", так как при лейкозе наблюдали гиперплазию клеток кроветворной и лимфоидных тканей с развитием злокачественных опухолей. Несмотря на обоснованность термина "гемобластозы", в нашей стране принято употреблять термин "лейкоз" [1].

Опухолевая природа лейкозов была подтверждена многими исследователями более чем столетие тому назад, в том числе нашими соотечественниками К. Славянским и А. Щастным, и в настоящее время является общепризнанной. По характеру и месту локализации опухолевых клеток к определенным росткам гемопоэза гемобластозы разделены на две группы: лейкозы - системные поражения органов кроветворения, включающие лимфоидную, миелоидную, моноцитарную и недифференцированную формы; гематосаркомы - сопровождающиеся опухолевым ростом. К ним относятся лимфосаркома, ретикулосаркома, лимфогрануломатоз и миеломная болезнь.

Первые отличаются системностью поражения кроветворной и лимфоидной тканей с вовлечением в процесс костного мозга, селезенки и лимфатических узлов. Болезни второй группы характеризуются поражением лимфоидной ткани: лимфоузлов и селезенки. Опухоли, состоящие из клеточных элементов, природу которых трудно установить, относятся к числу недифференцированных лейкозов.

По данным литературы, у крупного рогатого скота наибольшее распространение имеет лимфоидный лейкоз [7].

Известно, что патогенез каждого заболевания, прежде всего, обусловлен этиологическим фактором, а затем факторами, способствующими его возникновению и развитию. ВЛ КРС впервые удалось выделить в 1969 году, но в экспериментальных условиях болезнь была воспроизведена ещё в 1916 году путём введения подопытным телятам и взрослым животным крови и суспензии из лимфатических узлов от больной коровы [55]. Большой вклад в изучение проблемы лейкозов внесли наши ученые, которые провели фундаментальные исследования по клинико - гематологической и патоморфологической диагностике [79], биохимическим, патогенетическим [41], и эпизоотологическим аспектам [6,8].

Распространение вируса крупного рогатого скота, по-видимому, связано с тем, что во многие страны для улучшения генофонда местных низкопродуктивных пород были завезены большие партии скота из стран с высокопродуктивным молочным животноводством и в которых процент инфицированности животных вирусом был очень высоким. Этиологическая роль вируса в развитии лейкоза была установлена сравнительно недавно, а методы выявления инфицированных животных были разработаны лишь в 1974-1975 годы, поэтому естественно, что происходивший ранее интенсивный обмен племенными животными способствовал развитию инфекции [15].

1.2 Структура вириона и геномная организация вируса лейкоза крупного рогатого скота 1.2.1 Строение вириона возбудителя энзоотического лейкоза

Зрелые вирионы вируса лейкоза КРС содержат центрально расположенный электронноплотный нуклеокапсид, диаметр которого в зависимости от методов фиксации и обработки препарата варьирует от 40 до 90 нм [61, 65, 106, 108, 117,

121, 126, 169]. Внешняя вирусная оболочка отделена от центральной части нуклеокапсида промежуточным слоем. Нуклеоид имеет гексагональное очертание, что предполагает возможную экосаэдрическую структуру [67, 109, 130, 131]. Внешняя вирусная оболочка представлена липопротеидной мембраной. В мембране находится гидрофобный белок р15, который соединен с белком gр51 с помощью ковалентных (дисульфидных) или нековалентных связей [107]. Вирусная РНК совместно с внутренними структурными белками образует нуклеокапсид, на поверхности которого расположен белок gр30. На поверхности внешней оболочки выявляют пепломеры шипики с пуговкообразным утолщением на конце длиной 8 - 11 нм, состоящих из повторяющихся субъединиц, образованных вирусными 18 гликопротеинами gр51 и gр30 [9, 10, 11, 12, 60, 62]. В нуклеокапсиде РНК находится в виде спирализованного рибонуклеопротеина, который содержит гистоподобный белок р10, фосфорилированный белок р12 и обратную транскриптазу. Химический состав вирионов: белки - 60 % (из них 3,5 7 % гликопротеинов), липиды - 35 % (в основном фосфолипиды), нуклеиновые кислоты 2,2 % и углеводы 0,5 % [130, 149, 162, 123, 165, 177].

Нуклеоид состоит из рибонуклеопротеина, окруженного икосаэндрическим белковым капсидом. Между капсидом и оболочкой находится внутренний белок, покрывающий нуклеотид. На поверхности наружной оболочки выросты в виде шпилек (пепломеры) с утолщениями на конце, образованными гликопротеидами §р51 и gp30 (трансмембранный белок), которые отвечают за типоспецифичность [42, 90]. В структуре вириона различают 6 основных белков с молекулярной массой от 10 до 51 кДа (р10, р12, р15, р24, gp30 и gp51) [171]. Четыре негликозилированных белка (р10, р12, р15, р24) составляют сердцевину вириона. Белок р24 находится в наибольшей концентрации [81]. Согласно предложенной ранее номенклатуре, структурные белки вируса обозначаются следующим образом: МА - матриксный, СА — капсидный, NC - белок нуклеокапсида, SU — поверхностный, ТМ - трансмембранный, PR — протеаза, RT — ревертаза, Ш -белок интеграции.

На рисунке 1 представлено схематическое изображение и внутреннее строение вирусной частицы вируса лейкоза крупного рогатого скота.

Рисунок 1. Схематическое изображение вирусной частицы ВЛ КРС (BLV), внутреннего строения: основных белков и генов.

Примечание. Рисунок взят из статьи «Последние достижения в исследовании лейкоза» («Recent Advances in BLV Research»), авторы Nicolas Gillet, Gerónimo Gutiérrez, Malik Hamaidia, Jean-Rock Jacques, Srikanth Perike, Sathya Neelature Sriramareddy, Nathalie Renotte, Bernard Staumont, Michal Reichert, Karina Trono, Luc Willems; из раздела «Вирусы», книги Луи Мански «Последние достижения в исследованиях HTLV, 2015 г.» с сайта MDPI.COM.

1.2.2 Геном вируса

Вирусный геном состоит из двух идентичных одноцепочечных позитивных молекул РНК, которые нековалентно связаны друг с другом вблизи 5' - концов, так же может существовать в виде ДНК, синтезированной на геномной РНК как на матрице и интегрированной в хромосому клетки-хозяина в виде провируса. Геномная РНК содержится только в зрелых вирионах. В жизненном цикле вируса геномная РНК функционирует лишь 1 раз, когда служит матрицей для фермента -обратной транскриптазы при биосинтезе комплементарной ДНК. Весь объем

биохимических процессов, необходимый для полной репликации вируса, выполняется с участием ДНК - провируса [94].

Длина провирусной ДНК - около 9 тысяч нуклеотидных пар. На обоих концах молекулы содержатся последовательности нуклеотидов, называемые LTR (Long Terminal Repeat) - длинные концевые повторы, которые состоят из трех регионов: U3 (358 п.н.), R (100 п.н.) и U5 (180 п.н.). Транскрипция геномной РНК начинается с первого нуклеотида в R-районе 5' LTR и заканчивается последним нуклеотидом в R-районе 3' LTR. Геном BJI KPC, как и у других ретровирусов, представлен 70S РНК, состоящей из двух 38S субъединиц [129], также содержит gag, pol и env структурные и регуляторные гены, необходимые для синтеза вирусной частицы [118, 128, 158, 160, 159], локализованные между env и 3'-концом длинного концевого повтора (LTR), что также наблюдается и у других дельтаретровирусов [142].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сафина Регина Фанисовна, 2022 год

6 Список использованной литературы

1. Апалькин, В.А. Лейкоз крупного рогатого скота (диагностика и оздоровительные мероприятия): рекомендации / В.А. Апалькин, М.И. Гулюкин Н.И. Петров. - Санкт - Петербург: Петролазер, 2005. - 87 с.

2. Байсеитов, С.Т. Сравнительная оценка диагностической эффективности РИД, ИФА и РНИФ при лейкозе крупного рогатого скота / С.Т. Байсеитов, Н.Н. Новикова, В.С. Власенко, А.П. Красиков // Вестник Омского государственного аграрного университета. - 2020. - № 1 (37). - С. 97-102

3. Барышников П.И. Ветеринарная вирусология: Учебное пособие по общей вирусологии. Барнаул. - 2006. - 116 с.

4. Белов, А.Д. О патогенезе лейкозов крупного рогатого скота / А.Д.Белов, Л.В. Рогожина, Г.В. Сноз // Ветеринария. - 1997. - №12. - С. 16-18.

5. Белявская, В.А. Возможности и ограничения использования ПЦР в диагностике и генотипировании вируса лейкоза крупного рогатого скота / В.А. Белявская, С.В. Осадчева, Е.А. Дурыманова, В.В. Храмцов, П.Н. Смирнов // Сб.: Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных. -Ставрополь, 2003. - С. 275-279.

6. Бурба, Л.Г. Профилактика и борьба с лейкозом крупного рогатого скота // Вестник с.-х. науки. - 1986. - №10. - С. 109-113.

7. Бурба, Л.Г. Кунаков А.А. Диагностика лейкозов сельскохозяйственных животных. / Л.Г. Бурба, А.А. Кунаков. М.: Колос, 1983 - 190 с.

8. Бусол, В.А. О генетической предрасположенности к лейкозу, внутриутробной и «горизонтальной» передаче его у крупного рогатого скота / В.А. Бусол, Н.Н. Доронин, Н.С. Мандыгра, И.В. Шваюн, Б.М. Ярчук // Вирусологические аспекты изучения этиологии лейкоза крупного рогатого скота: Тез.докл. Всесоюзн. конф. - Рига. - 1983 - С. 32-33.

9. Валихов, А.Ф. Вирус типа С в культуре лимфоцитов крови коров, больных лейкозом / А.Ф. Валихов, Г.А. Надточей, Н.В. Ваганова // Ветеринария. - 1974. -№4. - С. 43-45.

10. Валихов, А.Ф. Изучение онкорнавируса, выделенного при лейкозе крупного рогатого скота / А.Ф. Валихов // В кн.: Проблемы экспериментальной онкологии и лейкозов человека и животных: под ред. Л.М. Шабада, В.П. Шишкова. - М.: Колос- 1979. - С.205-213.

11. Валихов, А.Ф. Морфология, антигенные свойства вируса и серологическая диагностика онкорнавирусной инфекции крупного рогатого скота: дис. ... канд. биол. наук. - М. - 1978. - 162 с.

12. Валихов, А.Ф. Современное состояние изученности онкорнавируса крупного рогатого скота / А. Ф. Валихов. // Бюлл. ВИЭВ. - 1977. - В.30. - С. 16-18.

13. Вафин, Р.Р. Выявление нового (8-го) генотипа ВЛКРС в различных регионах мира / Р.Р.Вафин, Н.З. Хазипов, А.Ю. Шаева, З.Р. Закирова, Л.И. Зайнуллин, С.В. Тюлькин, И.Р. Абдулина, А.М. Алимов // Фундаментальные исследования. - 2013. - № 10 (часть 7) - С. 1467-1471.

14. Ветеринарные правила осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов лейкоза крупного рогатого скота. Приказ Минсельхоза РФ от 24.03.2021 № 156 «Об утверждении Ветеринарных правил осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов лейкоза КРС» (Зарегистрировано в Минюсте РФ от 29.04.2021№63300).

http://publication.pravo.gov.ru/Document/View/0001202104290036

15. Галеев, Р.Ф. Лейкоз крупного рогатого скота / Р.Ф. Галеев, Р.Ф. Хусаинов // -Уфа: Изд. «Новый стиль». - 2009г. - 220 с.

16. Галеев, Р.Ф. Внутриутробное инфицирование эмбрионов вирусом лейкоза крупного рогатого скота / Галеев, Р.Ф., Хусаинов Р.Ф., Чернов А.Н. // Ветеринарный Врач. - 2008. - №6. - С. 24-26.

17. Галеев, Р.Ф. Вирус лейкоза КРС (культуральные, инфекционные и иммунологические свойства) / Р.Ф. Галеев. - Уфа, Ветеринарная медицина. -1999. - 147 с.

18. Гафарова, И.Э. Обнаружение провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота методом ПЦР / И.Э. Гафарова, Е.С. Лисицына, Ю.А. Савочкина, Н.В. Кириллова, С.В. Чернова, Т.Т. Беренс, Е.Н. Ильина // Ветеринария. - 2020. -№ 2. - С. 20-26.

19. Генджиев, А.Я. Значение комплексной диагностики при оздоровлении хозяйств Калмыкии от лейкоза крупного рогатого скота / А.Я. Генджиев, С.С. Абакин // Ветеринарная патология. - 2018. - № 4 (66). - С. 12-19.

20. Гильманов, Х.Х. Оптимизация условий проведения ПЦР-амплификации локуса BoLA-DRB3-reha / Х.Х. Гильманов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2017. - Т. 232. - № 4. - С. 31-36.

21. Гулюкин, М.И. Межвидовая передача вируса лейкоза крупного рогатого скота в эксперименте / М.И. Гулюкин, Н.Г. Козырева, Л.А. Иванова, Т.В. Степанова, А.И. Клименко, А.В. Коваленко, Ю.Д. Дробин, В.Н. Василенко // Вопросы вирусологии. - 2015. - № 60 (5). - С. 32-37.

22. Гулюкин, М.И. Основные тенденции в организации и проведении противолейкозных мероприятий / М.И. Гулюкин, Н.В. Замараева, В.А. Седов, И.И. Барабанов, С.М. Пау // Труды ВИЭВ. - М. - 1999. - Т. 72. - С. 16- 22.

23. Гулюкин, М.И. Особенности противолейкозных мероприятий, обеспечивающих высокую молочную продуктивность / М.И. Гулюкин, Г.А. Симонян, А.К. Мироменко // Сборник научных трудов. - Екатеринбург. - 2005. -С. 28-34.

24. Гулюкин, М.И. Контроль и тенденции изменения эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в 2000-2016 годах / М.И. Гулюкин, Л.А. Иванова, Т.В. Степанова, И.И. Барабанов, Н.Г. Козырева // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2017. - № 11 (71). - С. 530-537.

25. Гулюкин, М.И. Система мониторинга лейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации / М.И. Гулюкин // Ветеринарный консультант. - 2007. -№17. - C. 5-18.

26. Двоеглазов, Н.Г. Сравнительный анализ применения ИФА и РИД при диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Н.Г. Двоеглазов, В.В. Храмцов, Т.А. Агаркова, Н.А. Осипова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. -2015. - № 1 (242). - С. 89-93.

27. Деринов, А.Н. Псевдоаллергические реакции на туберкулин при лейкозе КРС / А.Н. Деринов, Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов // Ветеринария. - 2006. - №11. -С. 20-23.

28. Джакаит, Д.А. Эффективность ИФА и РИД в диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Д.А. Джакаит // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2016. - № 4. - С. 65-67.

29. Джупина, С.И. Эпизоотический процесс лейкоза крупного рогатого скота и перспективы девастации возбудителя этой инфекции / С.И. Джупина // Ветеринарная патология. - 2014. - № 1. - С. 99-103.

30. Донник, И.М. Лейкоз крупного рогатого скота - диагностика, оздоровление, антропозоонозный потенциал (история вопроса) (обзор) / И. М. Донник, М.И. Гулюкин, В.А. Бусол, Л.В. Коваленко, А.М. Коваленко // Сельскохозяйственная биология. - 2021. - Т. 56. - № 2. - С. 230-244.

31. Донник, И.М. Эпизоотологические аспекты лейкоза КРС в Краснодарском крае / И.М Донник, Г.А. Джаилиди, Е.В. Якубенко // Ветеринария Кубани. - 2014. - №2. - С. 5-18.

32. Жимулев, И.Ф. Общая и молекулярная генетика / И.Ф. Жимулев. -Новосибирск: Сибирское университетское издательство. - 2007. - 480 с.

33. Зигануров, Р.М. Сравнительная чувствительность методов РИД и ИФА при выявлении антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в сыворотке крови и молоке / Р. М. Зигануров, Р. Ф. Галеев // Молодежная наука и АПК: проблемы и перспективы: материалы II Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и аспирантов, Уфа, 14-16 апреля 2008 года. - Уфа: БГАУ. - 2008. - С. 96-98.

34. Зиннатов, Ф.Ф. Диагностическая ценность выявления провирусной ДНК ВЛКРС в молоке / Ф.Ф. Зиннатов, Т.Р. Якупов // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2010. - № 4. - С. 21-22.

35. Зубова, Т.В. Современные методы и опыт борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / Т.В. Зубова, В.А. Плешков, А.Н. Миронов // В мире научных открытий. - 2018. - Т. 10. - № 5. - С. 119-131.

36. Иванов, М.К. Особенности количественного анализа методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени / М.К. Иванов, В.Д. Порываев, Е.В. Кандрушин // Новости «Вектор-Бест» 2008. - №4 (50). - С. 15-18.

37. Иванов, О.В. Возрастная динамика содержания антител к вирусу лейкоза у телят, рожденных от серопозитивных коров / О.В. Иванов, О.В.Иванова, В.П.Федотов, М.В. Баландина, О.А. Верховский, Ю.Н.Федоров // Сельскохозяйственная биология. - 2008. - №6. - С. 87-90.

38. Иванова, Л.А. Выявление иммунного ответа на вирус лейкоза крупного рогатого скота иммуноферментным методом: Автореф. дисс. канд. наук/ Иванова Л.А. - М. - 2000.

39. Козырева, Н.Г. Лабораторные испытания разработанной мультиплексной ПЦР-РВ при диагностике лейкоза крупного рогатого скота у молодняка / Н.Г. Козырева, Л.А. Иванова, Т.В. Степанова, М.И. Гулюкин // Российский журнал Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2019. - № 1 (29). - С. 56- 62.

40. Коромыслов, Г.Ф. Основы профилактики и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота / Г.Ф. Коромыслов, В.П. Шишков // Ветеринария. - 1993. - № 4. -С.15-18.

41. Коромыслов, Г.Ф. Иммунологические аспекты патогенеза и диагностики гемобластозов крупного рогатого скота / Г.Ф. Коромыслов, А.К. Гиздатов, И.И. Яременко, И.В Чупырина // Иммунология и иммунотерапия лейкозов человека и животных: Тез. докл. Всесоюзн. конф. / Самарканд, 9-11 октября, 1984. -Ташкент, 1984. - С. 119-120.

42. Корочкин, Р.Б. Общая вирусология. Учебно-методическое пособие / Р.Б. Корочкин, А.А. Гласкович, А.А. Вербицкий // Витебск: УО ВГАВМ - 2006 - 46 с.

43. Красникова, Е.С. Биологическая безопасность продукции животных, инфицированных вирусами энзоотического лейкоза и иммунодефицита КРС / Е.С. Красникова, О.С. Ларионова // Вестник ветеринарии. - 2014. - №2 (69). - С.85-87.

44. Красникова, Е.С. Биологическое обоснование совершенствования ветеринарных правил по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота / Е.С. Красникова, Р.В. Радионов, А.С. Белякова // Агрофорсайт. - 2017. - № 1 (7). - С. 1-5.

45. Красникова, Е.С. Диагностическая оценка серологического и молекулярногенетического методов лабораторных исследований на ретровирусные инфекции крупного рогатого скота / Е.С. Красникова, В.А. Агольцов, П.С. Мелкина // Ветеринарная патология. - 2013. - № 3(45). - С. 23-29.

46. Крикун, В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность// Ветеринария. - 2003. - №6.- С. 7-9.

47. Кудрявцева, Т.П. Лейкоз животных. - М. :Россельхозиздат. - 1980 - 156 с.

48. Кудряшов, А.А. Патологоанатомические изменения при лимфоидном лейкозе у крупного рогатого скота / А.А. Кудряшов, Н.И. Петров // Ветеринария. - 1999. -№10. - С. 14-15.

49. Кузнецов, А.Л. Экономический ущерб, причиняемый лейкозом крупного рогатого скота / А.П. Кузнецов, И.Н. Никитин // Ветеринария. - 1993. - №8. - С. 14-16.

50. Кузин, А.И. Влияние лейкоза на продуктивность коров и качество молока / А.И. Кузин, Е.Н. Закрепина // Ветеринария. - 1997. - №2 - С. 19-21.

51. Кузнецова, А.П. Проблемы лейкоза сельскохозяйственных животных / А.П. Кузнецова, В.П. Смирнов // Ветеринария. - 1998 - №3 - С.32-33.

52. Курьянова, Н.Х. Основы полимеразной цепной реакции / Н.Х. Курьянова // Наука в современных условиях: от идеи до внедрения. - 2006. - № 1. - С. 170-174.

53. Ломакин, А.П. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции / А.П. Ломакин, Л.Б. Прохватилова, С.С. Рыбаков // Тр. ВИЭВ. - М.: 1999. - Т.72. - С. 192- 201.

54. Макаров, В.В. Эпизоотические перспективы лейкоза крупного рогатого скота / В.В. Макаров, Д.П. Гришинин // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2005. - Т.2 - С.70-72.

55. Макаров, В.В. Избранные вопросы, общей эпизоотологии и инфектологии: монография / В.В. Макаров. М: Изд-во РУДН, 1999. - 194 с.

56. Макаров, В.В. Эпизоотологические перспективы лейкоза крупного рогатого скота / В.В. Макаров, Д.П. Гринишин // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2005. -№ 2. - С. 70-73.

57. Мандыгра, Н.С. Крупномасштабные оздоровительные мероприятия против лейкоза крупного рогатого скота / Н.С. Мандыгра // Тр. Свердловской НИВС. -1995. - С. 9-12.

58. Маринин, Е.А. Прогнозирование сроков оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота / Е.А. Маринин, А.П. Кузнецов // Ветеринария. - № 6. -1996 - С. 31 - 33.

59. Меграбян, Д.С. Методы диагностики в борьбе с лейкозом КРС / Д.С. Меграбян // Ветеринарная патология. - 2009. - № 2 (29). - С. 85-87.

60. Меньшикова, З.Н. Изучение морфологии культивируемых in vitro лейкоцитов крови крупного рогатого скота, больного лейкозом. / З.Н. Меньшикова, В.А. Крикун // Сб. науч. тр. MBA. - Москва. - 1978. -Т. 100. - С. 99-101.

61. Меньшикова, З.Н. Морфология лимфоидных клеток при спонтанном и экспериментальном гемобластозах крупного рогатого скота (электронно-микроскопические исследования): Дис. в виде науч. докл. д-ра вет. наук / Моск. гос. акад. вет. медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. - Москва - 1999. -58 с.

62. Меньшикова, З.Н. Электронно-микроскопическая характеристика вариантов морфогенеза бычьего лейкозного вируса / З.Н. Меньшикова, А.3. Махмуд // Сб. науч. тр. MBA «Теорет, и практич, вопросы лейкозов и злокач. опухолей с.-х. животных». - Москва - 1979. - Т. 107. - С. 13-19.

63. Методы лабораторной диагностики лейкозов. Крупный рогатый скот: Гост 25382-82 (СТ СЭВ 2702-80): М. - 1983. - 15 с.

64. Михайлова, В.В. Сравнение серологических методов лабораторной диагностики лейкоза крупного рогатого скота / В.В. Михайлова, Т.П. Лобова, А.Н. Скворцова, М.С. Шишкина, Н.А. Глушакова // Молочное и мясное скотоводство. - 2020. - № 2. - С. 51-52.

65. Надточей, Г.А. Морфологическая характеристика и иммунологические свойства онкорнавируса типа С крупного рогатого скота / Г.А. Надточей, А.Ф. Валихова, Л.Г. Бурба, В.А. Горбатов // Доклады ВАСХНИЛ. - 1976. - Т. 5. - С. 31-33.

66. Нахмансон, В.М. Серологический метод диагностики в системе противолейкозных мероприятий/ В.М. Нахмансон, М.И. Гулюкин, Е.А. Дун // Ветеринария. - 1997. - № 3. - С. 7-9.

67. Нахмансон, В.М. Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота и меры борьбы с ним / В.М. Нахмансон, Е.А. Дун // Итоги науки и техники. - 1986. -С.146- 149.

68. Новикова, Н.А. Молекулярные аспекты взаимодействия вирусов с клеткой: Учебное пособие. - Нижний Новгород: Изд-во ННГУ им. Н.И. Лобачевского. 2015. - 87 с.

69. Новикова, Н.А. Хранение и реализация генетической информации вирусов [Электронный ресурс]: Учебное пособие. Нижний Новгород: ННГУ им.Н.И.Лобачевского.-2007. - 84c.

70. Орлов, Д.Ю. Сравнительный анализ методов прижизненной диагностики различных стадий лейкоза и ветеринарно-санитарная экспертиза молока при этой болезни / Д.Ю. Орлов, М.А. Шариати // Агробизнес и экология. - 2016. - Т. 3. - № 1. - С. 49-61.

71. Смирнов, П.Н. Смирнов, П.Н. Практические аспекты лейкоза крупного рогатого скота / П.Н. Смирнов, В.В. Храмцов, В.В. Смирнова // Ветеринария. -1998. - №8. - С.6-8.

72. Патент № 2644233 C2 Российская Федерация, МПК C12Q 1/66. Способ экспресс-диагностики лейкоза крупного рогатого скота: № 2016109396: заявл. 15.03.2016 : опубл. 08.02.2018 / А.И. Никитин, К.В. Усольцев, Т.Х. Фаизов, А.Н. Чернов, И.И. Усольцева, М.Е. Семенова, Н.И. Хаммадов, З.З. Алеева; заявитель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный Центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ".

73. Проблема лейкоза крупного рогатого скота/ В.А. Мищенко, О.Н. Петрова, А.К. Караулов, А.В. Мищенко. - Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ». - 2018. - 38 с.

74. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. Под редакцией Д.К. Львова.- Москва: Изд-во. «Медицинское информационное агентство». - 2013. - 1197 с.

75. Сальникова, Е.А. Преимущества метода ПЦР в реальном времени, Сахаровские чтения 2017 года: экологические проблемы XXI века: материалы 17-й международной научной конференции, 18-19 мая 2017 г., г. Минск, Республика

Беларусь: в 2 ч. / Сальникова, Е. А.Тарасова, Е. Е. // Междунар. гос. экол. ин-т им. А.Д. Сахарова Бел. гос. ун-та; - Минск: ИВЦ Минфина, 2017. - Ч. 1. - С. 213-214.

76. Саушкин, Н.Ю. Сравнение методов ПЦР и ИФА для определения лейкоза крупного рогатого скота с использованием сухих пятен крови / Н. Ю. Саушкин, Ж.В. Самсонова, А.П. Осипов, С.Э. Кондаков, Т.Е. Макарова, А.Б. Комаров // Вестник Московского университета. Серия 2: Химия. - 2016. - Т. 57. - № 5. - С. 343-349.

77. Свириденко, Г.М. Лейкоз скота и безопасность молочных продуктов / Г.М. Свириденко, Е.Г. Сёмова // Молочная промышленность. - 2003. - № 7. - С. 8-10.

78. Сергеев, В.А., Структура и биология вирусов животных / В.А. Сергеев, Б.Г. Орлянкин. - М.: Колос. - 1983. - 336с.

79. Симонян, Г.А. Клинико-гематологическая и цитоморфологическая характеристика различных форм лейкозов и их диагностика / Г.А. Симонян // Лейкозы и злокачественные опухоли. М: Агропромиздат. - 1988. - 154 - 172 с.

80. Симонян, Г.А. Разработка и совершенствование оздоровительных противолейкозных мероприятий / Г.А. Симонян // Ветеринария. - 2007. - № 7. -С. 3-6.

81. Симонян, Г.А. Лейкоз крупного рогатого скота, причины возникновения и пути передачи возбудителя. Часть 2 / Г.А.Симонян // Farm Animals. - 2016. - №1 (11). - С. 26-28.

82. Смаилова, Б.Т. Лейкоз крупного рогатого скота / Б.Т. Смаилова, А.Н. Байгазанов // Перспективы развития науки в современном мире: Сборник статей по материалам XVI международной научно-практической конференции. В 2-х частях, Уфа, 05 апреля 2019 года. - Уфа: Общество с ограниченной ответственностью Дендра - 2019. - С. 16-27.

83. Смирнов, A.M. Борьба с лейкозом крупного рогатого скота - важнейший элемент системы обеспечения ветеринарного благополучия российского животноводства // Сборник научных трудов. - Екатеринбург. - 2005. - С. 5-9.

84. Смирнов, П.Н. Болезнь века - лейкоз крупного рогатого скота // П.Н. Смирнов. - Новосибирск. - 2007. - 301с.

85. Смирнов, Ю.П. Генетический и экологический анализ факторов, детерминирующих предрасположенность к канцеро и лейкозогену / Ю.П. Смирнов // Тр. ВИЭВ. - М.: - 1999 - Т. 72 - С. 87-96.

86. Смирнов, Ю.П. Основные пути распространения лейкоза / Ю.П. Смирнов // Ветгазета. 1999. - №4. - С.3-4.

87. Смирнов, Ю.П. Некоторые гематологические показатели у коров в бессимптомной стадии развития лейкозного процесса / Ю.П. Смирнов, И.Л. Суворова // Ветеринарная патология. - 2009. - № 1 (28). - С. 26-29.

88. Степанова, Т.В. Анализ экономического ущерба при заболевании лейкозом крупного рогатого скота в период с 2010 по 2014 годы в Российской Федерации / Т.В. Степанова // Russian J. Agricultural and Socio Economic Sciences (RJOAS). -2016. - №8 (56). - С. 49-56.

89. Стратегический продукт // Farm Animals. - 2016. - №1(11). - С.4-5.

90. Сюрин, В.Н. Вирус лейкоза крупного рогатого скота / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина // Москва: MBA. - 1986. - С. 29.

91. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина // Москва: ВНИТИБП. - 1998. - С. 528.

92. Фролова, Н.С. Современные методы диагностики лейкоза КРС / Н.С. Фролова, Е.В. Фролов // Актуальные вопросы и инновационные технологии в ветеринарной медицине, животноводстве и природоохранном комплексе: Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 40-летнему юбилею со дня образования ветеринарного факультета, Уссурийск, 06-08 ноября 2019 года. - Уссурийск: Приморская государственная сельскохозяйственная академия. - 2019. - С. 128-130.

93. Храмцов, В.В. Изучение эффективности применения антигенов при выявлении антител к вирусу лейкоза методом ИФА / В.В. Храмцов, Н.Г.

Двоеглазов, Ю.В. Туманов // Инновации и продовольственная безопасность. -2013. - № 2 (2). - С. 81-84.

94. Шишков, В.П. Серологические методы выявления животных, инфицированных вирусом лейкоза КРС: Лейкозы и злокачественные опухоли животных / В.П. Шишков, А.В. Валихов; под ред. Шишков В.П., Бурбы Л.Г. // М.: Агропромиздат,1998. - С.173-194.

95. Шульга, Н.Н. Система борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Хабаровском крае / Н.Н. Шульга, И.С. Шульга, Л.П. Плавшак, С.С. Дикунина // Эффективное животноводство. - 2020. - № 6 (163). - С. 82- 84.

96. Якубовская, Ю.Л. Атипичное проявление лейкоза КРС в форме лимфогранулематоза / Ю.Л. Якубовская, В.С. Цветкова, И.Ф. Грищук // Вестник Приднестровского университета. Серия: Медико-биологические и химические науки. - 2018. - № 2 (59). - С. 20-24.

97. Якупов, Т.Р. Возможности ИФА молока в диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, Н.З. Хазипов, А.М. Алимов, Б.В. Камалов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2010. - № 2 (201). - С. 133-136.

98. Якушева, Л.И. Практический опыт использования ПЦР-диагностики для оздоровления стада от лейкоза КРС / Л.И. Якушева, В.Ф. Сацук, Н.В. Ковалюк, Е.В. Мачульская // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. - 2012. - Т. 3. - № 1. - С. 194-196.

99. Adam, E. Involvement of the cyclic AMP-responsive element binding protein in bovine leukemia virus expression in vivo / E. Adam, P. Kerkhofs, M. Mammerickx, R. Kettmann, A. Burny, L. Droogmans, L. Willems // J.Virol. - 1994. - № 68. - P. 58455853.

100. Avidan, O. The processivity and fidelity of DNA synthesis exhibited by the reverse transcriptase of bovine leukemia virus / O. Avidan, M.E. Meer, Oz I., Hizi A.Eur // J Biochem. - 2002. - № 269. - P. 859-867.

101. Beier, D. Blutserologische, pathologischhistologische und hamatologische Untersuchungen an mit bovinem Leukosevirus infizierten tumorosen Rindern / D. Beier, E. Starick, W. Wittmann, B. Nitschke // Arch. Exper. Vet. Med. - 1987. - Vol. 41. - P. 763-766.

102. Blankenstein, P.A. Nucleotide deletion causing a translational stop in the protease reading frame of bovine leukaemia virus (BLV) results in modified protein expression and loss of infectivity / P. Blankenstein, A. Bondzio, H. Fechner, D. Beier, O. Marquardt, A.C. Looman, D. Ebner // J Vet Med B Infect Dis Vet Public Health. - 2000 - № 47(5). - P. 361-371.

103. Bruck, C. Monoclonal antibodies define eight independent antigenic regions on the bovine leukemia virus (BLV) envelope glycoprotein gp51 / C. Bruck, S. Mathot, D. Portetelle, C. Berte, J.D. Franssen, P. Herion, A. Burny // Virology. - 1982. - № 122. -P. 342-352.

104. Burny, A. Bovine leukemia virus, a versatile agent with various pathogenic effects in various animal species / A. Burny, C. Bruck, Y. Cleuter, D. Couez, J. Deschamps, J. Ghysdael, D. Gmgoire, R. Kettmann, M. Mammerickx, G. Marbaix // Cancer Res. -1985. - Vol. 45(9). - P. 4578-4582.

105. Burny, A. Bovine leukemia virus: a new mode of leukemogenesis / A. Burny, C. Bruck, Y. Cleuter // Advances in viral oncology. - 1985. - P. 35-55.

106. Burridge, M.J. An overview of modes of transmission of bovine leukemia virus / M.J. Burridge, M.C. Thurmond // Proc. 85th Ann. Meet. US. Anim. Hlth. Ass. - 1981. -P. 165-169.

107. Cann, A.J. Principles of Molecular Virology / Washington: ASM Press, - 2012. -303 p.

108. Chen, G. Synthesis of functional bovine leukemia virus (BLV) p34tax protein by recombinant baculoviruses / G. Chen, L. Willems, D. Portetelle, K.E. Willard-Gallo, A. Burny, D. Gheysen, R. Kettmann // Virology - 1989. - № 173. P. 343-347.

109. Copeland, T.D. Complete amino acid sequence of the nucleic acid-binding protein of bovine leukemia virus / T.D. Copeland, M.A. Morgan, S. Oroszlan // FEBS Lett. -1983. - № 156. P. 37-40.

110. Corredor, A.P. In silico and in vitro analysis of boAP3d1 protein interaction with bovine leukaemia virus gp51 / A.P. Corredor, J. Conzalez, L.A. Baquero, H. Curtidor, N.N. Olaya-Galan, M.A. Patarroyo, M.F. Gutierrez // PLoS ONE. - 2018. - № 13(6). -e0199397.

111. Da, Y. Milk and fat yields decline in bovine leukemia virus-infected Holstein cattle with persistent lymphocytosis / Y. Da, R.D. Shanks, J.A. Stewart, H.A. Lewin // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. -1993. - № 90(14). - P. 6538-6541.

112. de Brogniez, A. Mast J., Willems L. Determinants of the bovine leukemia virus envelope glycoproteins involved in infectivity, replication and pathogenesis / A. de Brogniez, J. Mast, L. Willems // Viruses. - 2016. - № 8(4). - P. 88.

113. Debacq, C. Reduced cell turnover in bovine leukemia virus-infected, persistently lymphocytotic cattle. Journal of virology/ C. Debacq, B. Asquith, M. Reichert, A. Burny, R. Kettmann, L. Willems // Journal of virology. - 2003. - № 77(24). - P. 13073-13083.

114. Degos, L. John Hughes Bennett, Rudolph Virchow. and Alfred Donné: the first description of leukemia» / L. Degos // The Hematology Journal. - 2001. - № 2(1). - P. 1.

115. Deren, W. The eradication of enzootic bovine leucosis in a large farm population / W. Deren, A. Szewczyk-Sadowska, J. Rulka // Pol J Vet Sci. - 2003. - № 6. - P. 12-14.

116. Derse, D. Two elements in the bovine leukemia virus long terminal repeat that regulate gene expression / D. Derse, J.W. Casey // Science - 1986. - № 231. - P. 14371440.

117. Driscoll, D.M. Inhibition of bovine leukemia virus release by antiviral antibodies / D.M. Driscoll, M. Onuma, C. Olson // Arch. Virol. - 1977. - V. 55. - P. 139-144.

118. Dube, S. Degenerate and specific PCR assays for the detection of bovine leukaemia virus and primate T-cell leukaemia/lymphoma virus pol DNA and RNA: phylogenetic comparisons of amplified sequences from cattle and primates from around the world / S. Dube, S. Bachman, T. Spicer, J. Love, D. Choi, E. Esteban, J.F. Ferrer, B.J. Poiesz // J. Gen. Virol. - 1997. - V. 78 - P. 1389-1398.

119. Dubois, N. Retroviral RNA dimerization: from structure to functions / N. Dubois, R. Marquet, J.C. Paillart, S. Bernacchi // Front. Microbiol. - 2018. - № 9. - P. 527.

120. Erskine, R.J. Association between bovine leukemia virus, production, and population age in Michigan dairy herds / R.J. Erskine, P.C. Bartlett, T.M. Byrem, C.L. Render, C. Febvay, J.T. Houseman // Journal of Dairy Science. - 2012. - № V.95. - P. 727- 734.

121. Gilden, R. Characteristics of the major internal protein and RNA-dependent DNA polymerase of bovine leukemia virus / R. Gilden, C. Long, M. Hanson // J. Gen. Virol.

- 1975. - V. 29(3). - P. 305-314.

122. Gillet, N.A. Massive depletion of bovine leukemia virus proviral clones located in genomic transcriptionally activesites during primary infection / N.A. Gillet, G. Gutiérrez, S.M. Rodriguez, A. de Brogniez, N. Renotte, I. Alvarez, K. Trono, L. Willems // PLoS Pathog. - 2013. - № 9(10). - e1003687.

123. Guillemain, B. Specificity and mechanisms of early and late polykaryocytosis induced by different isolates of the bovine leukemia virus / B. Guillemain, R. Mamoun, T. Astier, J.F. Duplan // 5th Int. Symp. On bovine leukosis, Tubingen (O.C. Straub ed.).

- 1984. - P. 117-139.

124. Gupta, P. Detection of a precursor-like protein of bovine leukaemia virus structural polypeptides in purified virions. / P. Gupta, J.F. Ferrer // J. Gen. Virol. - 1980. - № 47.

- P. 311-322.

125. Jaworski, J. P. Interlaboratory Comparison of Six Real-Time PCR Assays for Detection of Bovine Leukemia Virus Proviral DNA / J.P. Jaworski, A. Pluta, M. Rola-Luszczak, S.L. McGowan, C. Finnegan, K. Heenemann, H.A. Carignano, I. Alvarez, K.

Murakami, L. Willems, T.W. Vahlenkamp, K.G. Trono, B. Choudhury, J. Kuzmakc // Journal of Clinical Microbiology. - 2018. - № 56(7). - e00304-18.

126. Johnston, E.R. The SU and TM envelope protein subunits of bovine leukemia virus are linked by disulfide bonds, both in cells and in virions / E.R. Johnston, K. Radke // J. Virol. - 2000. - Vol.74(6). - P. 2930-2935.

127. Kampen, K.R. The discovery and early understanding of leukemia / K.R. Kampen // Journal of Leukemia Research. - 2012. - Vol. 36(1). - P. 6-13.

128. Katoh, I. Bovine leukemia virus matrix-associated protein MA(p15): further processing and formation of a specific complex with the dimer of the 5'-terminal genomic RNA fragment / I. Katoh, H. Kyushiki, Y. Sakamoto, Y. Ikawa, Y. Yoshinaka. // J Virol - 1991. - № 65. - P. 6845-6855.

129. Katoh, I. Bovine leukemia virus RNA sequences involved in dimerization and specific gag protein binding: close relation to the packaging sites of avian, murine, and human retroviruses / I. Katoh, T. Yasunaga, Y. Yoshinaka // J Virol - 1993. - № 67. -P. 1830-1839.

130. Kerkhofs, P. Long-term protection against bovine leukaemia virus replication in cattle and sheep / P. Kerkhofs, J.S. Gatot, K. Knapen // J. Gen. Virol. - 2000. - Vol. 81. - P. 957-963.

131. Kettman, R. Integration of bovine leukemia virus DNA in the bovine genome / R. Kettman, M. Meunier-Rotival, J. Cortadas // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1979. - Vol. 76(10). - P. 4827-4826.

132. Kettmann, R. Bovine leukemia virus: an exogenous RNA oncogenic virus / R. Kettmann, D. Portetelle, M. Mammerickx, Y. Cleuter, D. Dekegel, M. Galoux, J. Ghysdael, A. Burny, H. Chantrenne // Proc Natl Acad Sci USA - 1976. - № 73. - P. 1014-1018.

133. Kittelberger, R. Detection of antibodies against the core protein p24 of the bovine leukaemia virus in cattle for confirmatory serological testing / R. Kittelberger, M.P. Reichel, R.M. Meynell // J. Virol. Methods. - 1999. - Vol. 77(1). - P. 109-114.

134. Klintevall, K. Evaluation of an indirect ELISA for the detection of antibodies to bovine leukaemia virus in milk and serum / K. Klintevall, K. Naslund, G. Svedlund, L. Hajdu, N. Linde, B. Klingeborn // J Virol Methods. - 1991. - Vol. 33(3). - P. 319-333.

135. Kobayashi, S. Analysis of risk factors associated with bovine leukemia virus seropositivity within dairy and beef breeding farms in Japan: A nationwide survey / S.Kobayashi, A. Hidano, T.Tsutsui, T.Yamamoto, Y. Hayama // Research in Veterinary Science. - 2014. - Vol. 96. - P. 47-53.

136. Kobayashi, S. Risk factors associated with within-herd transmission of bovine leukemia virus on dairy farms in Japan / S. Kobayashi, T.Tsutsui, T. Yamamoto, Y.Hayama, K. Kameyama K, M. Konishi, K. Murakami // BMC Vet. Res. - 2010. -Vol. 6. - P. 1.

137. Konishi, M. Simultaneous evaluation of diagnostic marker utility for enzootic bovine leucosis / M. Konishi, S. Kobayashi, T. Tokunaga, Y. Chiba, T. Tsutsui, S. Arai, K.I. Kameyama, T. Yamamoto // BMC veterinary research. - 2019. - 15(1). - P. 406.

138. Lavanya, M. Cell surface expression of the bovine leukemia virus-binding receptor on B and T lymphocytes is induced by receptor engagement. / M. Lavanya, S. Kinet, A. Montel-Hagen, C. Mongellaz, J.L. Battini, M. Sitbon, N. Taylor // J. Immunol. - 2008. - Vol. 181(2). - P. 891-898.

139. Lefebvre, L. Oncoviral bovine leukemia virus G4 and human T-cell leukemia virus type 1 p13(II) accessory proteins interact with farnesyl pyrophosphate synthetase / L. Lefebvre, A. Vanderplasschen, V. Ciminale, H. Heremans, O. Dangoisse, J.C. Jauniaux, J.F. Toussaint, V. Zelnik, A. Burny, R. Kettmann, L. Willems // Journal of Virology. -2002. - Vol. 76. - P. 1400-1414.

140. Lefebvre, L. Subcellular localization of the bovine leukemia virus R3 and G4 accessory proteins / L. Lefebvre, V. Ciminale, A. Vanderplasschen, D. D'Agostino, A. Burny, L. Willems, R. Kettmann // J. Virol. - 2002. - Vol. 76. - P. 7843-7854.

141. Llames, L. Cellular distribution of bovine leukemia virus proteins gp51SU, Pr72 (env), and Pr66(gag-pro) in persistently infected cells / L. Llames, J. Goyache, A.

Domenech, A.V. Montana, G. Suarez, E. Gomez-Lucia // Virus Res. - 2001. - Vol. 79. - P. 47-57.

142. Mahieux, R. New human retroviruses: HTLV-3 and HTLV-4. / R. Mahieux, A. Gessain // Med Trop. - 2005. - Vol. 65. - P. 525-528.

143. Mamoun, R.Z. The pX region of the bovine leukemia virus is transcribed as a 2.1-kilobase mRNA / R.Z. Mamoun, T. Astier-Gin, R. Kettmann, J. Deschamps, N. Rebeyrotte, B.J. Guillemain // J Virol. - 1985. - Vol. 54. - P. 625-629.

144. Mamoun, R.Z. Bovine lymphosarcoma: expression of BLV-related proteins in cultured cells / R.Z. Mamoun, T. Astier, B. Guillemain, J.F. Duplan // J Gen Virol. -1983. - Vol. 64. - P. 1895-1905.

145. Matthews, S. The solution structure of the bovine leukaemia virus matrix protein and similarity with lentiviral matrix proteins / S. Matthews, M. Mikhailov, A. Burny, P. Roy // EMBO J. - 1996. - Vol. 15. - P. 3267-3274.

146. Misako, K. The effectiveness of colostral antibodies for preventing bovine leukemia virus (BLV) infection in vitro / K. Misako, H. Ishizaki, K. Kameyama, K. Murakami, T. Yamamoto // BMC Veterinary Research. - 2018

147. Mohammadabadi, M.R. Using PCR for early diagnosis of bovine leukemia virus infection in some native cattle / M.R. Mohammadabadi, M. Soflaei, H. Mostafavi, M. Honarmand // Genet Mol Res. - 2011. - № 10(4). - P. 2658-2663.

148. Morcock, D.R. Fluorescence and nucleic acid binding properties of bovine leukemia virus nucleocapsid protein / D.R. Morcock, S. Katakam, B.P. Kane, J.R. Casas-Finet // Biophys Chem. - 2002. - Vol. 97. - P. 203-212.

149. Nouqayrede, Ph. Enzootic bovine leukosis: preparation of an antigen for the agar gel immunodiffusion test and statistical comparison with other antigens / Ph. Nouqayrede, J. Pellen, C. Quentel // Vet. Microbiol. - 1981. - V. 6. - P. 247-257.

150. Phillips, M. Isolation of a precipitating glycoprotein antigen from cell cultures persistently infected with bovine leukemia virus / Phillips M., Miller J.M., Van der Maaten M.J. // J Natl Cancer Inst -1978.- 60. - P. 213-217.

151. Pierard, V. DNA cytosine methylation in the bovine leukemia virus promoter is associated with latency in a lymphoma-derived B-cell line: potential involvement of direct inhibition of cAMP-responsive element (CRE)-binding protein/CRE modulator/activation transcription factor binding. / V. Pierard, A. Guiguen, L. Colin, G. Wijmeersch, C. Vanhulle, B. Van Driessche, A. Dekoninck, J. Blazkova, C. Cardona, M. Merimi, V. Vierendeel, C. Calomme, T.L. NguyKn, M. Nuttinck, J.C. Twizere, R. Kettmann, D. Portetelle, A. Burny, I. Hirsch, O. Rohr, C. Van Lint // The Journal of Biological Chemistry - 2010. - № 285(25). - P. 19434-19449.

152. Porta, N.G Experimental infection of sheep with Bovine leukemia virus (BLV): Minimum dose of BLV-FLK cells and cell-free BLV and neutralization activity of natural antibodies / N.G Porta, I. Alvarez, G. Suarez Archilla, V. Ruiz, A. Abdala, K. Trono // Rev Argent Microbiol. - 2019 - № 51(4). - P. 316-323.

153. Portetelle, D. In animals infected by bovine leukemia virus (BLV) antibodies to envelope glycoprotein gp51 are directed against the carbohydrate moiety / D. Portetelle, C. Bruck, M. Mammerickx, A. Burny // Virology. - 1980. - № 105. - P. 223-233.

154. Portetelle, D. Use of monoclonal antibody in an ELISA test for the detection of antibodies to bovine leukaemia virus / D. Portetelle, C. Bruck, M. Mammerickx, A. Burny // J. Virol. Meth. - 1983. - Vol. 6. - P. 19-29.

155. Powers, M.A. Activation of bovine leukemia virus transcription in lymphocytes from infected sheep: rapid transitionthrough early to late gene expression / M.A. Powers, K. Radke // J Virol. - 1992. - № 66. - P. 4769-4777.

156. Powers, M.A. Episodic occurrence of antibodies against the bovine leukemia virus Rex protein during the course of infection in sheep / M.A. Powers, D. Grossman, L.C. Kidd, K. Radke // J Virol. - 1991. - № 65. - P. 4959-4965.

157. Rice, N.R., The nucleotide sequence of the env gene and post-env region of bovine leukemia virus. / N.R. Rice, R.M. Stephens, D. Couez, J. Deschamps, R. Kettmann, A. Burny, R.V. Gilden // Virology - 1984. - № 138. - P. 82-93.

158. Sagata, N. Bovine leukemia virus: unique structural features of its long terminal repeats and its evolutionary relationship to human T-cell leukemia virus. / N. Sagata, T.

Yasunaga, Y. Ogawa, J. Tsuzuku-Kawamura, Y. Ikawa // Proc Natl Acad Sci USA. -1984. - № 81. - P. 4741-4744.

159. Sagata, N. Comparison of the entire genomes of bovine leukemia virus and human T-cell leukemia virus and characterization of their unidentified open reading frames / N. Sagata, T. Yasunaga, K. Ohishi, J. Tsuzuku-Kawamura, M. Onuma, Y. Ikawa // EMBO J. - 1984. - № 3. - P. 3231-3237.

160. Sagata, N. Complete nucleotide sequence of the genome of bovine leukemia virus: Its evolutionary relationship to other retroviruses/ N. Sagata, T. Yasuaga, J.K. Tsuzuku, K. Ohish, Y. Ogawa, Y. Ikawa // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1985. - №82. - P. 677681.

161. Saushkin, N.Yu. Strip-dried blood sampling: applicability for bovine leukemia virus detection with ELISA and real-time PCR / N.Yu. Saushkin, J.V. Samsonova, A.P. Osipova, S.E. Kondakov // Journal of Virological Methods. - Vol. 263. - 2019. - P. 101-104.

162. Scholz, O. Preparation von BLV Antigenen und ihre Bewertung Sowie Eignung in einem Anti-BLV-Enzym immunassay / O. Scholz, A. Konshake, L. Niemann // Mh. Vet. Med. - 1988. - № 19/20. - P. 695-699.

163. Schultz, A.M. The envelope proteins of bovine leukemia virus: purification and sequence analysis. / A.M. Schultz, T.D. Copeland, S. Oroszlan // Virology. - 1984. - № 135. -P. 417-427.

164. Simard, C. Enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of bovine leukosis: comparison with the agar gel immunodiffusion test approved by the Canadian Food Inspection Agency / C. Simard, S. Richardson, P. Dixon, C. Bélanger, P. Maxwell. // Can J Vet Res. - 2000. - № 64(2). - P. 101-106.

165. Stear, V.J. BoLA antigens are associated with increased frequency of persistent lymphocytosis in bovine leukaemia virus infected cattle and with increased incidence of antibodies to bovine leukaemia virus / V.J. Stear; C.K. Dimmock; M.J. Newman, F.W. Nicholas // Animal Genetic. - 1988. - № 19. - P. 151-1584.

166. Suh, G.H. Establishment of a bovine leukemia virus-free dairy herd in Korea / G. H. Suh, J.C. Lee, C.Y. Lee // J Vet Sci. - 2005. - № 6(3). - P. 227-230.

167. Suzuki, T. Evaluation of the 5 subunit of bovine adaptor protein complex 3 as a receptor for bovine leukaemia virus / Suzuki T., Matsubara Y., Kitani H., Ikeda // J. Gen. Virol. - 2003 - №. 84. - P. 1309-1316.

168. Suzuki, T. Restricted viral cDNA synthesis in cell lines that fail to support productive infection by bovine leukemia virus / T. Suzuki, H. Ikeda, M. Masse // Arch. Virol. - 2018 - Vol. 163(9). -P. 2415-2422.

169. Trono, K. Virus de Leucosis Bovina: Epidemiologica en Argentina / K. Trono, D. Perer- Filgueira, S. Duffy, M. Costelli, I. Lager, S. Duffy, M.V. Borca, C. Carrillo // VI Congresso Argentino de Virologica. - 1999. - P. 235-248.

170. Twizere, J.C. Interaction of retroviral Tax oncoproteins with tristetraprolin and regulation of tumor necrosis factor-alpha expression. / J.C. Twizere, V. Kruys, L. Lefebvre, A. Vanderplasschen, D. Collete, C. Debacq, W.S. Lai, J.C. Jauniaux, L.R. Bernstein, O.J. Semmes, A. Burny, P.J. Blackshear, R. Kettmann, L. Willems // J Natl Cancer Inst - 2003. - № 95. - P. 1846-1859.

171. Uckert W. Isolation and characterization of covalently closed circular proviral DNA molecules of several type D retroviruses isolated from humancell lines. / W. Uckert, M. Fleischhacker, R. Kettmann // Virology. - 1986. - № 155. - P. 742-746.

172. Uckert W. Translational order of bovine leukemia virus gag and env gene-coded proteins. / Uckert W., Grofova M., Beaudreau G. // Virology. - 1984. - № 135. - P. 288-292.

173. Van der Maaten M. Bovine leukosis virus. In Z. Dinter and B. Morein (ed.) / M. Van der Maaten, J.M. Miller // Virus infections of ruminants. Elsevier Science Publishers B.V. - 1990. - P. 419-429.

174. Vickie, J. R. On-site detection of bovine leukemia virus by a field-deployable automatic nucleic extraction plus insulated is othermal polymerase chain reaction system / J.R. Vickie, J.B. Oscar, T. Yun-Long, A.L. Pei-Yu, T.L. Chuan-Fu, B. Paul // Journal of Virological Methods. - Vol. 259. - 2018. - P. 116-121.

175. Wallin, M. Receptor-triggered but alkylation-arrested env of murine leukemia virus reveals the transmembrane subunit in a prehairpin conformation. / M. Wallin, Ekström M., Garoff H // J. Virol. - 2006 - 80(19): 9921-9925 (doi: 10.1128/JVI.00380-06 14: 419

176. Wang, H. Analysis of bovine leukemia virus gag membrane targeting and late domain function / H. Wang, K.M. Norris, L.M. Mansky // J. Virol. - 2002. - № 76. - P. 8485-8493.

177. Weiland, F. Differences in the in vitro response of lymphocytes from leukotic and normal cattle to Concanavalin A / F. Weiland, O.C. Straub // Res. Vet. Sci. - 1976. - V. 20. - P. 340-341.

178. Willems, L. Expression of a cDNA clone corresponding to the long open reading frame (XBL-I) of the bovine leukemia virus / Willems L., Bruck C., Portetelle D., Burny A., Kettmann R. // Virology. - 1987. - № 160. - P. 55-59.

179. Willems, L. The amino acid (157-197) peptide segment of bovine leukemia virus p34 tax encompass a leucine-rich globally neutral activation domain / L. Willems, R. Kettmann, A. Burny // Oncogene - 1991. - № 6. - P. 159-163.

180. Yakobson, B. Cellular immune response cytokine expression during the stage of bovine leukemia virus (BLV) infection determines the progression to persistent lymphocytosis / B. Yakobson, J. Brenner, H. Waron, Z. Trainin // Comparative Immunology, Microbiology, Diseases. - 2000. - V. 23. - P. 197-208.

181. Zarkik, S. Comparative processing of bovine leukemia virus envelope glycoprotein gp72 by subtilisin/kexin-like mammalian convertases / S. Zarkik, E. Decroly, R. Wattiez, N.G. Seidah, A. Burny, J.M. Ruysschaert // FEBS Lett. - 1997. - № 406. -P. 205-221.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Департамент научно-технической политики и образования

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ НАУЧНОЕ

УЧРЕЖДЕНИЕ

«ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЙ, РАДИАЦИОННОЙ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ»

(ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»)

ОКПД2 21Л 0.60.196

УТВЕРЖДАЮ

ТЕСТ-СИСТЕМА «ЛЕЙКОЗ & ИММУНОДЕФИЦИТ КРС 100» ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПРОВИРУСНОЙ ДНК ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЛЕЙКОЗА И ИММУНОДЕФИЦИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ

Технические условия ТУ 21.10.60-008-00492374-2020 (введено впервые)

Дата введения " 20^3'.

Без ограничения срока действия

Казань 2020

УТВЕРЖДАЮ

Врио директора

ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и оТиЧес кой безопасности»

ИНСТРУКЦИЯ

по применению тест-системы «ЛЕЙКОЗ & ИММУНОДЕФИЦИТ КРС 100» для выявления провирусной ДНК возбудителей лейкоза и иммунодефицита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции в режиме

реального времени

(Организация - разработчик: ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»

г. Казань.)

Казань 2020

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Департамент образования, научно-технологической политики и рыбохо 1нйс I венно! о комплекса

ФГБНУ «Федеральный центр токсиколог ической, радиационной и биологической безопасности»

СЕРТИФИКАТ

участника Данный сертификат подтверждает, что

'ИШЬ о^ЩУяСи Фсшл'а^иьи_

принял(ла) участие в работе международной научно-практической конференции «Инновационные решения актуальных вопросов биобезопасности»

11-12 ноября 2021 г. г. Казань

ю 00

я

TS

я

U

О

£ гс X Н гъ