Разработка ИФА-тест системы для диагностики и мониторинга чумы мелких жвачных животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат биологических наук Джумаев, Шухрат Нурмуродович

• Джумаев, Шухрат Нурмуродович
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Джумаев, Шухрат Нурмуродович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Краткая характеристика ЧМЖЖ.

1.2. Лабораторные методы диагностики ЧМЖЖ.

1.3. Конкурентные методы ИФА.

1.3.1. Неконкурентные методы ИФА.

1.3.2. Твердофазный носитель для ИФА.

1.3.3. Иммуноферментные коньюгаты.

1.3.4. Принципы получения диагностических сывороток.

1.3.5. Принципы приготовления антигенов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка ИФА-тест системы для диагностики и мониторинга чумы мелких жвачных животных»

Актуальность проблемы. Чума мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) — Га peste des petits ruminants — вирусное заболевание, характеризующееся некротическим стоматитом, диареей и бронхопневмонией. Возбудитель — РНК-содержащий вирус, относится к семейству Парамиксовирусов, роду Морбилливирус. Впервые она была зарегистрирована в Кот Дивуаре в Западной Африке в 1942 году.

Вирусная этиология болезни была подтверждена в 1972 году во время всестороннего исследования вспышки болезни среди овец и коз клинически похожей на чуму крупного рогатого скота.

Согласно данным МЭБ чума овец и коз в настоящее время распространена по всей территории Центральной Африки, Турции (1994), Ирана, Аравийского полуострова, Индии, Пакистана (1991), Бангладеш, Непала (1993) и Афганистана (1995).

Экономический ущерб, причиняемый ЧМЖЖ козоводству и овцеводству, велик, особенно в странах, где преимущественно разводят мелких жвачных животных, так как заболеваемость в первичных очагах болезни может достигать 100%, при высоком уровне лётальности. Кроме того, ЧМЖЖ обуславливает возникновение сопутствующих болезней у животных, что определяет высокий уровень экономических потерь.

Для борьбы с этой болезнью необходим точный диагноз, но не всегда это удаётся из-за схожести с другими болезнями. Своевременная диагностика ЧМЖЖ является важным условием купирования инфекции в первичном очаге.

В настоящее время для диагностики ЧМЖЖ применяют различные серологические методы такие как: реакция диффузионной преципитации (РДП), реакция связывания комплемента (РСК), реакция нейтрализации (РН) и иммуноферментный анализ (ИФА).

Наиболее простыми в исполнении и легко воспроизводимыми являются реакции диффузионной преципитации и связывания комплемента, но они малочувствительны, реакция нейтрализации является длительной, трудоемкой и требует для постановки культуру клеток.

Известно, что разработанный для диагностики болезни ЧМЖЖ метод ИФА применяют во многих странах. Однако в разных странах методы ИФА отличаются между собой по многим параметрам и имеют специфические особенности.

Принимая вышеуказанное во внимание можно сделать заключение о необходимости разработки ИФА для выявления антигена и антител при ЧМЖЖ. Для широкого применения ИФА для диагностики и серомониторинга требуется разработка и создание универсальных отечественных высокоспецифических диагностикумов.

Цель и задачи исследований.

Разработать тест-систему для лабораторной диагностики и идентификации антигена вируса ЧМЖЖ и антител к нему.

Для достижения указанной цели необходимо было:

- провести эпизоотологические и вирусологические исследования в очагах инфекции и выделить эпизоотический изолят вирулентной культуры вируса ЧМЖЖ, пригодный для приготовления диагностических препаратов; отработать методы приготовления комплексных культуральных специфических и нормальных (контрольных) антигенов для серологических тестов;

- получить активную вирусоспецифическую и антивидовую сыворотку пригодную для постановки ИФА;

- подобрать оптимальные методы выделения иммуноглобулинов и аффинноочищенных антител, и на их основе получения иммунопероксидазных конъюгатов;

- отработать оптимальные условия постановки твердофазного варианта ИФА для обнаружения специфического антигена вируса ЧМЖЖ;

-7- разработать оптимальные условия постановки непрямого твердофазного варианта ИФА для обнаружения антител к вирусу ЧМЖЖ.

Научная новизна. Научная новизна проведенных исследований состоит в том, что:

- впервые выделен эпизоотический вирус ЧМЖЖ из очага болезни мелкого рогатого скота в Республике Таджикистан. Выделенный вирус ЧМЖЖ паспортизован и депонирован в коллекции микроорганизмов ДТП Научно-исследовательском институте проблем биологической безопасности Республики Казахстан штамм вируса ЧМЖЖ «Темурмалик» для биотехнологических целей.

- впервые в Республике Таджикистан разработана методика приготовления комплексных культуральных специфических (на основе штамма «Темурмалик» ЧМЖЖ) и нормального антигенов;

- разработана схема гипериммунизации получения высокоактивных вирусоспецифических (на основе штаммов «0-45» и «Темурмалик») и антивидовых сывороток для серологических реакций;

- отработаны оптимальные условия постановки прямого «Сэндвич» -варианта ИФА для обнаружения антигена вируса ЧМЖЖ;

- отработаны оптимальные условия постановки непрямого варианта ИФА для выявления вирусспецифических антител к вирусу ЧМЖЖ;

Практическая значимость. Предложен способ изготовления культурального антигена на основе эпизоотического штамма «Темурмалик» вируса ЧМЖЖ для постановки серологических реакций и гипериммунизации животных.

Рекомендованная схема получения специфической сыворотки на культуральный антиген и антивидовой кроличьей сыворотки, а также методы выделения и очистки из них иммуноглобулинов и аффинноочищенных антител переданы для использования в НЛП «Биологические препараты» Таджикской Академии сельскохозяйственных наук для налаживания их производства.

По результатам исследований разработана и составлена нормативно-техническая документация: Дастур оид ба ташхиси озмоишгохии тоуни чорвои хурди шохдор бо усули тахлили иммуноферменти (Наставление по лабораторной диагностике ЧМЖЖ методом ИФА) и Тавсияхо оид ба гузаронидани тадбирхои зиддиэпизооти ва пешгирикунанда хангоми тоуни чорвои хурди шохдор (Рекомендации по проведению противоэпизоотических мероприятий при чуме мелких жвачных животных), утвержденные начальником и зам. начальника Службы государственного ветеринарного надзора Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан (15 марта 2011г.) - приложение.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы изложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета НЛП «Биологические препараты» (Среднеазиатского ящурного института) - 2003-2010гг., на научно - теоретических конференциях в Бишкеке и Москве.

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 12 научных работ, из них три статьи в изданиях, по перечню ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 119 страницах компьютерного текста (Word) и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Список используемой литературы включает 151 источников, из которых 79 иностранных. Диссертация иллюстрирована 9 рисунками, 25 таблицами. Приложение на 10 страницах.

Заключение диссертации по теме «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», Джумаев, Шухрат Нурмуродович

-925. ВЫВОДЫ

1. Впервые в Республике Таджикистан получен штамм вируса ЧМЖЖ («Темурмалик») из эпизоотического очага от больной овцы. Проведена его адаптация на культуре клеток ТЯ. Биологическая активность штамма «Темурмалик» в культуре клеток ТЯ составляет 5,25 ^ТЦД50/см3, штамм характеризуется высокой иммуногенной активностью и может быть использовании при создании иммунобиологических препаратов.

2. Разработана технология приготовления специфического антигена вируса ЧМЖЖ на основе штамма «Темурмалик».

3. Разработаны схемы получения диагностических вирусспецифических и антивидовых сывороток, для ИФА метода диагностики ЧМЖЖ.

4. Отработаны оптимальные режимы выделения вирусспецифических иммуноглобулинов из сывороток иммунизированных вирусом ЧМЖЖ животных (спиртовое осаждение по Кону), а из антивидовых - методом аффинной очистки антител на белково-глютаральдегидном иммуносорбенте.

Получены специфически активные и антивидовые иммуноглобулины и вирусспецифические иммунопероксидазные конъюгаты. Предельные разведения приготовленных конъюгатов в ИФА составили от 1:400 до 1:1600, а рабочие разведения от 1:50 до 1:200.

5. Определены оптимальные параметры постановки ИФА при ЧМЖЖ, позволяющие обнаруживать специфический антиген в органо-тканевых и культуральных материалах и вирусспецифические антитела в сыворотках крови от больных, переболевших и гипериммунизированных овец и коз в течение 4-6 часов после поступления проб на анализ. Отработаны методические параметры контроля ИФА-теста на специфичность, чувствительность и интерпретации результатов.

-936. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Рекомендованная схема получения специфической сыворотки на культуральный антиген и антивидовой кроличьей сыворотки, а также методы выделения и очистки из них иммуноглобулинов и аффинноочищенных антител переданы для использования в НПП «Биологические препараты» Таджикской Академии сельскохозяйственных наук и ООО «Агровет» для налаживания их производства.

По результатам исследований разработана и составлена нормативно-техническая документация: Наставление по лабораторной диагностике ЧМЖЖ методом ИФА (Дастур оид ба ташхиси озмоишгохии тоуни чорвои хурди шохдор бо усули тахлили иммуноферменти) и Рекомендации по проведению противоэпизоотических мероприятий при чуме мелких жвачных животных (Тавсияхо оид ба гузаронидани тадбирхои зиддиэпизооти ва пешгирикунанда хангоми тоуни чорвои хурди шохдор), утвержденные начальником и зам. начальника Службы государственного ветеринарного надзора Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан (15 марта 2011г.)

Разработанные мероприятия по эпизоотологическому анализу и диагностике ЧМЖЖ внедрены в практику ветеринарной службы Таджикистана.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Джумаев, Шухрат Нурмуродович, 2011 год

1. Алексеева В.Н. Характеристика некоторых иммуносорбен-тов//Препараты для экспресс диагн. —Ленинград, 1981. -С. 43

2. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. //Статистические методы в микробиол. исследованиях.-Ленинград, 1962.-С. 180.

3. Бабиков Н.В., Шустова Н.Д., Васерин Ю.И. Иммуноферментный анализ, условия количественного определения антител к вирусу гриппа //Мед. химия. -1984.- С. 4.

4. Бакулова И.А.Чума мелких жвачных. // Карантинные и малоизвестные болезни животных. «Колос» -1983. С. 106.

5. Башкиров О.Г. Лиофилизация конъюгатов для ИФА //Бюл. ВИЭВ.-Москва, 1986. -Выпуск 57.- С. 35-36.

6. Белозеров А.П., Навольнев С.О. Сравнительная характеристика некоторых методов ИФА для определения суммарных иммуноглобулинов//МЭИ,- 1985. -№1. -С. 59.

7. Беляев H.H. Применение иммунных комплексов фермента-антитело в серологическом анализе //МЭИ. -Москва, 1988. -№4. -С. 50-53.

8. Березин И.В., Егоров A.M. Новые направления развития ИФА //Вест. АМН СССР.- 1987. -12. -С. 72-78.

9. Брыкалов, A.B. Новые композиционные носители для иммобилизации ферментов / A.B. Брыкалов, О.В. Воробьева // Современные достижения биотехнологии: Материалы Всерос. конф. -Ставрополь. 1996.- С.279.

10. Ю.Брыкалов, A.B. Получение биопрепаратов на основе методов -аффинной сорбции и иммобилизации // Дис. . д-ра хим. наук / A.B. Брыкалов. -1993,СПб. 330с.

11. П.Ванеева Л.И., Янкина Н.Ф. Разработка методов получения моноспецифических ингредиентов для ИФА //ЖМЭИ. -1989. -№5. -С. 50-55.

12. Ванеева Л.И. Изучение сорбционной способности полистирольных планшетов, используемых в иммуноферментном анализе /, И.Ю.' Гридина, О.Н. Пантелеева и др., // ЖМЭИ- №9.- 1989.-С. 86-89.

13. Васильев А. В. // Пробл. молекул, биол. и патол. с/х животных. -Сб. науч. трудов.- Москва, 1998.- Том 113. -С. 71.

14. Васильев A.B., Непоклонова И.В. Иммуноферментный метод в диагностике вирусных инфекций //Вет. -1982.- №8. -С. 63-65.

15. Василенко Н.Ф., Заревина Л.И. О применении твердофазного ИФМ для определения туляремийного антигена //Акт. вопр. иммунодиагн. особо опасных инфекц. Тез. докл. Всесоюз. науч.-практ. конф. 26-27 мая 1986 г. -С. 53.

16. Веселов М.Е., Синяков И.Г. Разработка иммуноферментной тест-системы для количественной индикации гемагглютинина вируса гриппа в биологических образцах //Вопр. вирусол. -1985. -№ 6.- С. 672.

17. Виха И.В., Воробьев A.A., Желудева С.И. Получение, свойства и применение ß-галактозидазы В. Subtitles в ИФА //ВНИИ биологическая приборостроения. -Москва, 1985.- С. 12-15.

18. Вудворд, Д. Иммобилизованные клетки и ферменты / Д. Вудворд М.: Мир, 1988.- 161с.

19. Гаврилова Е.М., Дзантиев Б.В., Егоров A.M. Иммуноферментный анализ: Тез.докл.З-го Всес.науч.симпоз. "Получение иммобилизованных ферментов в научных исследованиях, промышленности и медицине"-Л., 1980. С.37-38.

20. Георгиу X. Сравнительная оценка ИФА и РСК при анаплазмозе рогатого скота//Бюл. ВИЭВ -Москва, 1985. -Выпуск 58. -С. 52-54.

21. Граевская Н. А. Закономерности синтеза противовирусных антител. Теоретические исследования в связи с проблемой получения гипериммунных сывороток// Док. дисс. Москва, 1968.

22. Дзантиев Б.Б., Осипов А.П. Классификация и характеристика методов ИФА //Итоги науки и техн. -Биотех. -Москва, 1987. -Т. 3. -С. 56-116.

23. Дзантиев Б.Б. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа //Ж. Всесоюз. химического общества имени Д.И.Менделеева.- 1982.- Т. XXIV.- №4.- с. 82-89.

24. Дзантиев Б.Б. Гетерогенные методы ИФА //Бюл. ВИЭВ. 1985. -Выпуск 58.- С. 10.

25. Диев В.И., Соколов JI.H., Мамкова Р.В., Евсеев A.M., Куляшбекова Ш.К. Изучение чувствительных различных клеточных культур к вирусу чумы мелких жвачных животных.// Вирусные болезни сельскохозяйственных животных. Владимир, 1995.-С.94.

26. Думанова Д., Текерлеков П. Дифференциация вируса ящура с помощью ELISA //Вет.-медицинские науки. -1983.- 2.- С. 13-19.

27. Егоров A.M. //Современное состояние и перспективы развития ИФА: школа-семинар. Совр. проб, биотех. -Астрахань, 1985. -С. 2-24.

28. Иванов А.П., Башкирцев В.Н. Разработка и применение ИФМ для диагностики аденовирусных инфекций //Вопр. вирусол. -1981. -№6. -С. 23-26.

29. Капускин Е.В. Изучение чувствительности клеточных культурах к вакцинному вирусу чумы мелких жвачных штамма «ВНИИЗЖ», Вестник Кыргызкого научно-исследовательского института животноводства, ветеринарии и пастбищ имени А. Дуйшева. Бишкек-2007. С.212-215).

30. Коромыслов Г.Ф., Авилов B.C. Иммуноферментный анализ и применение его в ветеринарии //Бюл. ВИЭВ Москва, 1985. -Выпуск 58.

31. Коромыслов И.Г., Шарабрин О.И., Гуленков В.В. Иммуноферментный метод в диагностике коронавирусной инфекции у КРС //Бюл. ВИЭВ — • Москва, 1985. -№58. -С. 48-51.

32. Кольцов, С.И. Изучение влияния носителя на свойства катализатора / С.И. Кольцов, В.М. Смирнов, В.Б. Алесковский // Кинетика и катализ. -1973.- Т. 14, №5.-С.1300-1303.

33. Корогодин Д.В. Перспективные области применения ИФА на нитроцеллюлозном носителе в биотехнологии и медицине //Механизмы иммунорегуляции и иммун. -Биотех.- Москва, 1989. -С. 87-89.

34. Курманова J1.B., Ермолин Г.А., Эткин А.Ф. Получение специфических иммуноферментных конъюгатов против класса иммуноглобулинов человека// Лаб. дело. -1984. -№2. -С. 80.

35. Кэтти Д. Получение меченых антител посредством связывания антигена с носителем, связывания антител с антигеном и метки ферментом или флуоресцентной краской с последующим освобождением антител. //В кн.: Антитела 2. Москва «Мир», 1991.-С.210-212.

36. Лайко C.B., Блинова Т.В. Приготовление конъюгатов для ИФМ диагностики вирусного гепатита//Вопр. вирусол. №4. -1986. -С. 473.

37. Мамадалиев С.М., Кошеметов Ж.К., Троицкий Е. Н., Нурабаев С. Ш. Отработка условий приготовления специфического антигена чумы крупного рогатого скота// Вторая международная научная конференция

38. Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных». Сборник материалов конференции Самарканд- -2004г. С. 125-127.

39. Матвеева В.М., Кошеметов Ж.К. Мамадалиев С.М.Способы выделения и очистки иммуноглобулиновых препаратов для ИФА при оспе овец. //Биотехнология. Теория и практика. 2006г. №1 С.87-90.

40. Михалкин И.П. Чума мелких жвачных животных.// Сибирская язва и другие опасные инфекционные болезни животных. — Покров, 2005.-С.159-163.

41. Мникова Л. А. Разработка средств и методов иммуноферментного анализа для диагностики оспы овец //Дисс. канд. биол. наук. -Гвардейский, 1977.- 13/1С-Д/46.

42. Нго Г.Т, Ленхофор Г.М. Иммуноферментный анализ —М:. 1988.-С.25— 167

43. Пономарева H.A., Нечаева A.C. //Гамма-глобулин. -Москва, 1965. -С. 3-20.

44. Покровский, В.И. Иммуноферментный анализ: современное состояние и тенденции развития / В.И. Покровский // Медицинская генетика и иммунология.- М:. 1986.- С. 4-5.

45. Пшеничная JI. А., Хабижанов А. Б. Полимеразная цепная реакция // Эскулап. Алматы, 2000.- №9. - С. 8.

46. Рукосуев B.C., Капинус JI.H. Иммуноморфологический метод исследования с меткой антител пероксидазой //Архив патол. -1979. -№5. -С. 64-67.

47. Сухоруков, A.M. Изучение сорбционных свойств полистироловых планшетов, используемых в иммуноферментном анализе / A.M. Сухоруков, А.М.Пономарева//ЖМЭИ.- 1987.-№9.- С. 18-22.

48. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. // Диагностика вирусных болезней животных. -Москва ВО "Агропромиздат", 1991. С. 157.

49. Тривен, М. Иммобилизованные ферменты / М. Тривен. М:. Мир, 1983.-c.23.

50. Федоров Ю.Н. Принципы получения моноспецифических антисывороток к Иг Г овец //Труды Всесоюз. института экспериментальной вет. -1980. -51. -С. 106-112.

51. Фримель Г. //Иммунологические методы. -Медицина.- Москва, 1987.-С.472.

52. Харитоненков И.Г., Христова М.М. Использование ИФА в вирусологии// МГМиВ. -1985.- №6.-С.17-21.

53. Хлюстов C.B., Коломнец Н.Д., Коломнец А.Г. Применение ИФА в целях диагностирования ретровирусной инфекции при лейкозе КРС //Теор. и практ. вопр. вет,- Тарту.- 1981. Т.2.- С. 25-31.

54. Чард Г. //Радиоиммунологические методы.- Москва, 1981.- С. 246.

55. Шажко Ж.А., Мищенко H.H. Оптимизация ИФМ на фильтровальных мембранах для выявления ящура и противоящурных антител //Бюл. ВИЭВ.—Москва, 1985.-Выпуск 58. -С. 62-64.

56. Шамардин В.А., Кузьмин Ю.А., Каральник Б.В. Использование каталазы в иммуноферментных реакциях //Лаб. дело. -1988. -№4. -С. 69-73.

57. Шаханина, К. Л. Выбор критериев пригодности твердофазных носителей на основе полистирола для проведения иммуноферментного анализа / К.Л. Шаханина, A.A. Соколенко, И.П. Павлова // ЖМЭИ.-№9.- 1987.-С. 8-11.

58. Янкина Н.Ф., Ванеева А.И. Разработка метода получения конъюгатов пероксидазы с антиглобулином для ИФА //МЭИ. -1985.- №1. -С. 35

59. Abu-Elzein E.M.E., Hassanien M.M., Al-Afaleq A.I., Abd-Elhadi M.A. & Housawi F.M.I. Isolation of peste des petits ruminants from goats in Saudi Arabia// Vet. Rec.-1990- 127 (12), 309-310

60. Anaokar,.S.Solid-phase enzyme immunoassay for serum ferreting / S. Anaokar, P.J. Sorry, J.C. Standefer // Clin. Chem.-1979.- V.25.-P.1426-1431.

61. Anderson J., Rowe L.W., Taylor W.P. An enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of Ig G, Ig M, Ig A antibodies to rinderpest virus in experimentally infected cattle //Res. vet. sci.- 1982.- V. 32.- №2.-P.98-100.

62. Anderson J. & McKay J.A. The detection of antibodies against peste des petits ruminants vims in cattle, sheep and goats and the possible implication to rinderpest control programmes// Epidemiol. Infect.-1994- 112, 225-234.

63. Avrameas S. Coupling of enzymes to proteins with glutaraldehyde. Use of the conjugates for the detection of antigens and antibody //Immunochemistry.- 1969.- №6.- P. 43-52.

64. Avrameas S., Wiel A. Methode de marquage d'antigens et d'anticorps avec des enzymes et su application immunodiffusion //C.R. acad. sci.- 1966.- V. 26.-№2.- P. 25-43.

65. Bazarghani IT, Charkhkar S, Doroudi J, Bani Hassan E. A Review on Peste des Petits Ruminants (PPR) with Special Reference to PPR in Iran// J Vet Med B Infect Dis Vet Public Health.- 2006- Dec;53 Suppl 1:17-8.

66. Braide VP. Peste des petits ruminants, a review.//FAO World Animal Review.-1981-39:25-28.

67. Cantorero L.A., Butler J.E., Oslorne J.W. The adsorptive characteristics of protein for polystyrene and their significance in solid phase immunoassay //Anal, biochem.- 1980.- V. 105.- P. 375-382.

68. Catt R., Treagear G.W. Solid-phase radioimmunoassay in antibody coated tubes//Science.- 1967.-№158.-P. 1570.

69. Couacy-Hymann R.F., Hurard C., Guillou J.P., Libeau G. & Diallo A. Rapid and sensitive detection of peste des petits ruminants virus by a polymerase chain reaction assay//J. Virol. Methods.-2002.-100, 17-25.

70. Dhar, P., B. P. Sreenivasa, T. Barrett, M. Corteyn, R. P. Singh, and S. K. Bandyopadhyay. Recent epidemiology of peste des petits ruminants virus (PPRV)//Vet. Microbiol.-2002.- 88:153-159. 32.

71. Diop M, Sarr J, Libeau G. Evaluation of novel diagnostic tools for peste des petits ruminants virus in naturally infected goat herds// Epidemiol Infect.' 2005 Aug;133(4):711-7.

72. Diallo A, Minet C, Le Goff C, Berhe G, Albina E, Libeau G and Barrett T. The threat of peste de petits ruminants: progress in vaccine development for disease control // Vaccine.-2007.- 25(30):5591-5597.

73. Dugimont J.C. Essais d'automatisation de 1' ELISA //"Enzyme linked immunosorbent assay". Orig. lab. interpret.- 1976.- P. 627-629.

74. Durojaiye O.A., Obi T.U. & Ojo O. Virological and serological diagnosis of peste des petits ruminants//Trop. Vet.-1983.- 1, 13—17.

75. E1-Hakim OA .An Outbreak of Peste de Petit Ruminants (PPR) At Aswan Province, Eygpt Evaluation of Some Novel Tools for Diagnosis Of PPR //Assiut Veterinary Medical Journal.-2006.- 52(110): 132-145.

76. Engvall E., Perlmann P. Enzyme linked immunosorbent assay. III. Quantitation of specific antibodies by enzyme-labeled antiimmunoglobulin antigen-coated tubes//J.Immunol.- 1972.-V. 109.- №1.- P. 129-135.

77. Forsyth, M. and Barrett, T. Evaluation of polymerase chain reaction for the detection of rinderpest and peste des petits ruminants viruses for epidemiological studies// Virus Research.-1995.- 39, 151-163.

78. Ford D., Radin R., Pesce A. Characterization of glutaraldehyde coupled alcaline phosphatase-antibody and lactoperoxidase-antibody conjugates//Immunochemistry.-1978.- V. 15.-P. 237-243.

79. Gargadennec L. & Lalanne A. La peste des petits ruminants// Bull. Serv. Zoo. A.O.F.-1942.- 5, 15-21.

80. Gilbert L., Monnier A., Adaptation olu virus de la des petits ruminants aux cultures cellulaires. Note prelimimaire -Rev. Elev. Med. Vet. Pays trop., 1962, v.15 4, p. 321-325.

81. Guesdon J.L., Avrameas S. Magnetic solid phase enzyme immunoassay//Immunochemistry.- 1977.- V. 17.- P. 443-447.

82. Guesdon J.-L. La methde enzyme-immunologique. Aspects theoriques et practiques //Techn. et biol.- 1987.- V. 13.- P. 97-107.

83. Hamblin C.C., Barnett J.T.R. A new enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies against food-and-mouth disease virus //J.Immunol. methods.- 1986.- V. 93.-№1.- P. 115-129.

84. Hamdy F.M. & Dardiri A.H. Response of white-tailed deer to infection with peste des petits ruminants virus// J. Wildl. Dis.-1976.-12, 516- 522.

85. Halliday M.J., Wisdom G.B. A comparison of three methods for the preparation of enzyme-antibody conjugates //Biochem. soc. trans.- 1986- № 14.- P. 473-474.

86. Hawanitz J.H. Immunoassay. Innovations in label technology //Arch, pathol. and Med. Lab.- 1988.- V. 112.- №8.- P. 775-779.

87. Hendry R.M., Hermann J.E. Immobilization of antibodies on nylon for use in enzyme-linked immunoassay //J.Immunol, methods.- 1980.- № 35.- P. 285-286.

88. Hendry R.M., Hermann J.E. Coupling of antibodies and enteroviruses to plastics enzyme linked immunoassay //Abstr. annu. meet. amer. microbiol. -Los Angeles, Calif. 1979. Washington D.C.- 1979.- P. 3330.

89. Ismail IM and House J. Evidence and identification of peste des petits ruminants from goats in Egypt// Archiv fur Experimentelle Veterinärmedizin.-1990.- 44(3):471-474.

90. Laurent A., Aspects biologigues de la multiplication au virus de la peste des petits ruminants on PPR sur les cultures cellulaires ,- Rev. Elev. Med. Vet. -Pays trop, 1968, v.21, 3,p.297-308

91. Laurent C. Detection d'antigens viruses de la maladie de Marek a l'immunoserums conyuquest a la peroxidase //C.R. acad. se. -Paris, 1973.- V. 277.-№19.- P. 2093-2096.

92. H.Lefevre P.C. & Diallo A. Peste des petits ruminants// Rev. sci. tech. Off. int. Epiz.-1990.- 9, 951-965.

93. Libeau, G. & Lefevre, P.C. Comparison of rinderpest and peste des petits ruminants viruses using anti-nucleoprotein monoclonal antibodies. Vet. Microbiol.-1990.- 25: 1-16.

94. Mohanty P.K., Verme P.C. Detection of swine pox and buffalo pox viruses in cell culture using protein A — horseradisch peroxidase conjugate //Acta, virol.- 1989.- V. 33.- №3.- P. 290-296.

95. Nakane, P.K. Peroxidase-labelled antibody a new method of conjugation /P.K. Nakane, A. Kawaoi // J.Histochem. Cytochem.-1974.- V.22. №4-P.506-506.

96. Nawathe D.R., Taylor W.P.// Trop. Anim. P^ep Prod. 1979. V. 11. P. 120123

97. Nygren H., Hansson H.A. Conjugation of horseradish peroxidase staphylococcus protein A with benzoquinone, gluteraldehyde or periodate as cross-linking reagents. A comparative study //Histochem. cytochem.- 1981.-V. 29. №2.- P. 266-270.

98. Obi T. U., M. O. Ojo, O. A. Durojaiye, O. B. Kasali, S. Akpavie, and D. B. Opasina. 1983. Peste des petits ruminants (PPR) in goats in Nigeria: clinical, microbiological and pathological features. Zentralbl. Veterinaermed. Reihe B 30:751-761.

99. Pfahler W.H.E., Reimann M. Abiotin-avidin amplified enzyme immunoassay for detection and quantitation of orthopox virus camel antibodies in dromedaries //J. Vet. med. b. 1986.- V. 33.- № 7.- P. 477-484.

100. Piroird R., Lambard M. Les methods immuno-enzymatiques et leurs applications serologiques //Rev. med. vet. pays trop.-1980,- V. 131.- P. 2542.

101. Potgieter L.N.D., Rouse B.T., Webb-Martin T.A. Enzyme-linked immunosorbent assay using staphylococcal protein A for detecting virus antibodies //Amer. J. Vet. res.- 1980- V. 41.- №6- P. 978-980.

102. Rossister P.B., Iessett D.M., Holmes P. MicroELISA test for detecting antibodies to rinderpest virus antigens //Trop. anim. hlth. prod.- 1981.-' №13.-P. 113-116.

103. Rossiter PB. Peste des petits ruminants. In: Infectious Diseases of Livestock, vol 2, 2nd edition, Coetzer JAW and Tustin RC (eds), Oxford University Press, UK.-2005.

104. Saliki J.T., Libeau G., House J.A., Mebus C.A. & Dubovi E.J. Monoclonal antibody based blocking ELISA for specific detection and titration of peste des petits ruminants antibody in caprine and ovine sera.//J. clin. Microbiol.-1993-31 (5), 1075-1082.

105. Sanders G.S., Clinard E.N., Bartelett M.L. Application of the indirect enzyme-labelled antibody microtest to the detection and surveillance of animal diseases //J.Infect. dis.- 1977-№136- P.258-266.

106. Schilow W.E., Meyer V. Durchführung und Awendungsmöglichkeiten des ELISA in der veterinärmedizinischen Virusdiagnostik //Mh. vet.-med.-1985.-№ 40.-P. 186-189.

107. Shaila, M. S., D. Shamaki, M. A. Forsyth, D. Diallo, L. Goatley, R. P. Kitching, and T. Barrett. Geographie distribution and epidemiology of peste des petits ruminants viruses//Viras Res.-1996.- 43:149-153.

108. Singh R.P., Sreenivasa B.P., Dhar P., Shah L.C. & Bandyopadhyay S.K. Development of monoclonal antibody based competitive ELISA for detection and titration of antibodies to peste des petits ruminants (PPR) virus//Vet. Microbiol.-2004.- 98 (1), 3-15

109. Steck F., Huggler Chr. Inheritance and interaction of immune traits in beef calves //"Off. int. epiz", 43 sess. general C. I. E.- Paris, 1975.- P.13-15.

110. Sumption K.J., Aradom G., Libeau G. & Wilsmore A.J. (1998). Detection of peste des petits ruminants antigen in conjunctival smears of goats by indirect immunofluorescence. Vet. Rec., 142, 421-424.

111. Sundquist V.-A., Wahren B. An interchangeable ELISA for cytomegalovirus antigen and antibody //J.Virol, methods.- 1981.- №2,- P. 301-302.

112. Taketa K., Ichikawa E. A tetrasolium method for staining peroxidase labels in blottings assays //J.Immunol, methods.- 1986.- V. 95.- №1.- P. 71-77.

113. Taylor W.P. Serological studies with the virus of peste des petits ruminants in Nigeria//Res. Vet. Sci., 26,- 1979.-236-242.

114. Taylor W.P., Albusaidy S. & Barrett T. The epidemiology of peste des petits ruminants in the Sultanate of Oman//Vet. Microbiol 22.- 1990. 341-352.

115. Taylor WP. The distribution and epidemiology of peste des petits ruminants//Preventive Veterinary Medicine -1984.-2:157-166.

116. Van Weemann B.K. ELISA. Highlights of the present state of the art //J.Virol, methods.- 1985.- V. 10, №4.- P. 371-378.

117. Vorde D.E., Sasse E.A., Hursa R. Competitive enzyme-linked immunoassay with use of soluble enzyme antibody immunocomplexes for labelling. I. measurement of human choriogonadotropin //Clin, chem.- 1976.- V. 22.-№8.-P. 1372-1377.

118. Voller A., Bidwell D.E., Bartlett A. The use of microplatelets test of ELISA in some infection diseases //Proc. int. symp. immuno-enz. techniques.- Paris, 2-4 Apr.- 1975.-№4. 1975.

119. Wilson M.B., Nakane P.K. Recent development in the periodate method of conjugating horseradish peroxidase (HRPO) to antibodies //Biomedical Press.- 1978.-P. 215-244.

120. ВАЗОРАТИ КИШОВАРЗИИ ЧУМ^УРИИ Ю1ЩКИСТОП АКАДЕМИКИ ИЛМДОИ КИШОВАРЗИИ то^икистон КОРХОНАИ ИЛМИЮ ИСТЕДСОЛИИ «МАВОДХОИ БИОЛОГИ»

121. Дида ва маъкул дониста шуд» Дар Шурой илмию техникии байтории Хадамоти назорати даэлатии байтории ВК Суратчдласаи №1 29 ноябри с. 2010

122. ДАСТУР ОИД БА ГАШХИСИ ОЗМОИШГОХДИ ТОУНИ ЧОРВОИ ХУРДИ ШОХДОР БО У СУЛИ ТАХдаЛИ ИММУНОФЕРМЕНГЙ1. ДУШАНБЕ -201*ясунам» назоратикч;трбеков с.201ф

123. ВАЗОРАТИ КШПОВАРЗИИ ЧУМХУРИИ ТОЧИКИСТОН АКАДЕМИЯМ ШЕУЩОИ КИШОВАРЗИИ ТОЧИКИСТОН КОРХОНАИ ИЛМИЮ ИСТЕХСОЛИИ «МАВОДХОИ БИОЛОГЙ»

124. Дида ва маъкул дониста шуд» Дар Шурой илмию техиикии байтории Хадамоти назорати давлатии байтории ВК Ч,Т Сура-щаласаи № 1 ' 29 ноябри с. 2010

125. ТАВСИЯХО ОИД БА ГУ ЗАРОНИДАНИ Т^ДБИРХОИ ЗИДДИЭПИЗООТЙ ВА ПЕШГИРИКУНАНДА ХАНГОМИ ТОУНИ ЧОРВОИ ХУРДИ ШОХДОРI-ПО

126. ДТВЕРЖДАЮ» НачалыI»гГ^Служхп государственного де {ери йгрд >чй г.а надзора, ларных наук с А')|\мирбеков•'Ч'.*//., 2007г.