Разработка и совершенствование методов диагностики фитоплазм - возбудителей болезней плодовых и ягодных культур тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.07, кандидат наук Матяшова, Галина Николаевна

• Матяшова, Галина Николаевна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Матяшова, Галина Николаевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Систематическое положение фитоплазм

1.1.1. Классификация фитоплазм на основе филогенетического анализа

1.1.2. Классификация фитоплазм на основе RFLP-анализа

1.1.3. Таксономическое положение исследуемых видов фитоплазм

1.2. Морфологические признаки фитоплазм

1.3. Биологические признаки фитоплазм

1.4. Географическое распространение исследуемых видов фитоплазм

1.5. Фитосанитарный статус фитоплазмозов плодовых и ягодных культур

1.6. Растения-хозяева исследуемых видов фитоплазм

1.7. Симптомы повреждения фитоплазмами

1.8. Вредоносность исследуемых возбудителей фитоплазмозов

1.9. Меры борьбы с фитоплазмами

1.10. Методы диагностики фитоплазм

1.10.1. Электронная микроскопия

1.10.2. Иммуноферментный анализ

1.10.3. Молекулярно-генетические методы

1.10.4. Генетические маркеры генома, используемые для идентификации фитоплазм

1.10.5. Кластерный анализ видов рода Candidatus Phytoplasma

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Место проведения исследований

2.2. Материал, использованный в работе

2.3. Молекулярно-генетические методы исследования

2.3.1. Выделение ДНК

2.3.2. Измерение концентрации ДНК

2.3.3. Исследование классической и «nested»-nUP для диагностики фитоплазм

2.3.4. Проведение RFLP-анализа

2.3.5. Секвенирование ДНК фитоплазм

2.3.6. Кластерный анализ участков генома фитоплазм

2.3.7. Апробация ПЦР в режиме «реального времени» для диагностики фитоплазм

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выявление возбудителей фитоплазмозов

3.2. Поиск чувствительного метода выделения ДНК фитоплазм

3.3. Применение и оптимизация методов «nested»-nUP и классической ПЦР для диагностики фитоплазм

3.3.1. Использование классической ПЦР для выявления фитоплазм

3.3.2. Оптимизация и применение «nested»-ПЦP участка 16S-23S гена

для диагностики фитоплазм

3.3.3. Использование tuf гена для видовой идентификации фитоплазм

3.3.4. Разработка RFLP-анализа для групповой и видовой идентификации фитоплазм

3.4. Анализ последовательностей ДНК фитоплазм

3.5. Кластеризация участков ДНК выявленных видов фитоплазм

3.6. Применение ПЦР в режиме «реального времени» для выявления идентификации фитоплазм

3.6.1. Анализ универсальной системы ПЦР-РВ для выявления фитопатогенов рода Candidatus Phytoplasma

3.6.2. Анализ специфических систем ПЦР-РВ для видовой идентификации фитоплазмозов винограда

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО

ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

БИБЛИОГРАФИЯ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и совершенствование методов диагностики фитоплазм - возбудителей болезней плодовых и ягодных культур»

ВВЕДЕНИЕ

С момента открытия в 1967 году фитоплазм, как «микоплазмы живых организмов», они быстро утвердились в качестве уникальной группы фитопатогенов (Chang, 1982; Lee et al., 1993). Первоначально предполагалось, что заболевания растений, такие как «желтухи», связаны с вирусами, но, как стало известно позднее, многие из них вызваны фитоплазмами.

На основании изучения морфологии и ультраструктуры микоплазмоподобные организмы выделили в отдельную группу фитопатогенов. Впоследствии изучение данных микроорганизмов показало, что они вызывают множество болезней с широким спектром симптомов. В 1970 гг. исследование было сосредоточено на диагностике с помощью наблюдения за симптомами и электронной микроскопии для визуализации фитоплазм во флоэме растений, изучении накопления в насекомых и распространения ими (Gundersen, Lee, 1996).

По основным генетическим признакам (базовый состав ДНК, размер генома, последовательности генов РНК и белков, свойства мембран) фитоплазмы были вынесены в отдельную группу микроорганизмов «phytoplasmas», а в 2000-х их выделили в таксономическую группу «Candidatus Phytoplasma» класса Mycoplasma (Duduk et al., 2008). Развитие молекулярных методов привело к расширению информации о фитоплазмах и возможности их классификации (Bertaccini et al., 2007).

В отличие от микоплазм, фитоплазмы невозможно культивировать на искусственных бесклеточных питательных средах, хотя есть ряд сообщений о том, что это возможно (Myrta et al., 2003). К фитоплазмам неприменимы многие основополагающие принципы классификации бактерий, основанные на описании морфологии, биофизических и биохимических свойствах. Развитие метода ПЦР позволило провести исследование генома этой группы организмов, определить консервативные гены и разработать классификацию, основанную на генетических критериях.

В настоящее время, фитоплазмы являются возбудителями более трёхсот различных заболеваний среди разных видов растений, включая лесные породы деревьев, декоративные растения, злаковые, овощные, плодовые и ягодные культуры (Peusens et. al., 2013). Поражение фитоплазмами наносит ощутимый экономический ущерб производству сельского хозяйства. Болезнь часто приводит к гибели растений, что влечет к полному отсутствию урожая. Борьба с фитоплазмами затруднена, так как фитопатоген паразитирует внутри клеток, что приводит к невозможности его локального уничтожения и оздоровлению зараженных растений (Seemuller et al., 2011).

Восприимчивость сортов плодовых деревьев и ягодных культур и погодные условия являются факторами, влияющим на концентрацию фитопатогена в тканях инфицированных растений. Разные штаммы одного вида фитоплазм также могут иметь разный уровень агрессивности, от чего зависит результат его обнаружения в исследуемом материале. Более агрессивные штаммы обнаруживаются чаще и раньше при проведении диагностики с помощью ПЦР (Kuzmanovic et al., 2011).

Для точной идентификации возбудителя и своевременного применения мер борьбы необходимо знать максимальную концентрацию фитопатогена в отдельных органах в течение года и применять оптимальные методики по выделению его из растительного материала. Из-за сезонной миграции фитопатогена в растении, при экстрагировании и последующем выделении ДНК возможны ложноотрицательные результаты во время проведения фитосанитарной экспертизы.

Особо опасными объектами в насаждениях винограда являются возбудитель золотистого пожелтения Candidatus Phytoplasma vitis (Grapevine Flavescence Dorée, FD) и возбудитель почернения коры Candidatus Phytoplasma solani (Bois Noir phytoplasma, BN), которые заражают виноградные лозы, вызывая существенные потери в производстве винограда (Данкверт и др., 2009; Mori et al., 2002). Угрозу в садах представляют

фитопатогены Candidatus Phytoplasma mali (Apple proliferation, AP), Candidatus Phytoplasma pyri (Pear decline, PD) - основных возбудителей фитоплазмозов плодовых семечковых деревьев, а возбудитель израстания на малине - Candidatus Phytoplasma rubi, малоизученный, но широко распространенный вид фитоплазмы, повреждающий растения рода Rubus (Martini et al., 2005).

В период изучения фитоплазм было разработано достаточное количество протоколов для диагностики фитоплазм (Gundersen, Lee, 1996, Lin, Chen, 1985; Lorenz, 1995; Garcia-Chapaet et al., 2003; Bianco et al., 2004). Предложенные разными авторами методики для идентификации данной группы фитопатогенов не проходили достаточного тестирования в Российской Федерации на предмет частоты ложноположительных и ложноотрицательных реакций и не использовались для изучения локальных изолятов патогенов.

Актуальность темы. В связи с отсутствием апробированных достоверных методов идентификации вышеуказанных фитоплазм, необходимо усовершенствовать молекулярно-генетические методы их выявления и видовой идентификации, в том числе отсутствующих видов на территории Российской Федерации. Актуальная задача - проведение разработки последовательных и точных схем выявления фитоплазм, что поможет вовремя обнаружить фитопатогены и предотвратить распространение в регионы страны с благоприятными условиями развития для них (промышленное производство и личные подсобные хозяйства).

По данным Росстата 2014 года площади плодоносящих садов всех форм собственности составили 205470,1 га, а питомников плодовых культур - 4934,61 га. Из-за создавшейся ситуации на российском рынке перед отечественными садоводами поставлена задача по увеличению площадей садов и их урожая для обеспечения страны собственной продукцией. Для поддержания фитосанитарного состояния в старых плодово-ягодных насаждениях и вновь организованных садах и питомниках необходимо четко

отслеживать возбудителей заболеваний плодовых и ягодных культур, в частности фитоплазм (www.statcustoms.ru).

Степень разработанности темы. На сегодняшний день молекулярно-генетические методы диагностики фитоплазм повсеместно изучаются и развиваются для внедрения в фитосанитарную экспертизу, как в России, так и за рубежом (Mehle et al., 2013; Bertaccini et al., 2007). Точная видовая идентификация фитопатогенов разных групп применяется в европейских диагностических протоколах (EPPO, 2007-2010). С 2008 года в России ведутся научные исследования фитоплазмозов овощных и лесных культур (Girsova et al., 2008; Гирсова и др., 2014), однако для возбудителей болезней плодовых и ягодных культур апробация, совершенствование и разработка новых методов диагностики проводится впервые.

Целью исследований было разработка и совершенствование молекулярно-генетических методов диагностики некоторых видов фитоплазм - возбудителей болезней плодовых и ягодных культур.

Задачи исследований

1. Изучить возбудителей фитоплазмозов плодовых и ягодных культур: почернения коры винограда Candidatus Phytoplasma solani, золотистого пожелтения винограда Candidatus Phytoplasma vitis, пролиферации яблони Candidatus Phytoplasma mali, истощения груши Candidatus Phytoplasma pyri и израстания малины Candidatus Phytoplasma rubi, используя молекулярно-генетические методы диагностики.

2. Усовершенствовать методы подготовки проб и выделения ДНК фитоплазм из растительного материала для их выявления и идентификации.

3. Оптимизировать наиболее достоверные генетические методы для видовой дифференциации исследуемых видов фитоплазм для использования их в карантинной фитосанитарной экспертизе.

4. Разработать методические рекомендации по проведению выявления и идентификации опасных вредных организмов - Candidatus Phytoplasma vitis и Candidatus Phytoplasma mali.

Научная новизна. Впервые проведен анализ состава видов рода Candidatus Phytoplasma, патогенных для плодовых и ягодных насаждений некоторых территорий Российской Федерации. Выявлено 4 фитоплазмоза плодово-ягодных культур в Центральном и Южном округах Российской Федерации: Ca. Ph. solani, Ca. Ph. pyri, Ca. Ph. rubi, Strawberry phyllody ph., а также 8 других видов рода Ca. Phytoplasma.

Найдены наиболее чувствительные методы подготовки проб растительного материала для выявления и идентификации фитоплазм молекулярно-генетическими методами диагностики.

Оптимизированы наиболее достоверные маркеры участков 16S-23S генов rRNA для видовой дифференциации исследуемых видов фитоплазм. Разработан метод анализа длин рестрикционных фрагментов (RFLP) для подгрупповой и видовой дифференциации исследуемых видов фитоплазм, включая карантинный вид Ca. Ph. vitis. Ценность результатов заключается также в достоверной и эффективной апробации представленных методов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработаны и утверждены приказом директора ФГБУ ВНИИКР методические рекомендации по проведению диагностики особо опасных вредных организмов Candidatus Phytoplasma vitis и Candidatus Phytoplasma mali для их использования в фитосанитарной диагностике, которыми в настоящее время пользуются специалисты лабораторий Россельхознадзора. Результаты исследований могут быть также использованы при изучении некоторых дисциплин, например, таких как «Молекулярные методы диагностики фитопатогенов», «Карантин растений».

Методология и методы исследования. При проведении исследований использовали информацию диагностических протоколов по выявлению и идентификации карантинных вредных организмов, стандартные методики проведения молекулярно-генетических исследований, которые подробно изложены в главе «Материалы и методы».

Положения, выносимые на защиту:

1. Видовой состав и распространенность возбудителей фитоплазмозов плодовых и ягодных насаждений, включая виноградники.

2. Оптимизация молекулярно-генетических методов идентификации фитоплазм (методы выделения ДНК, «пев1её»-ПЦР и «геа1-1:1те»-ПЦР) для исключения ложноположительных и ложноотрицательных результатов исследования.

3. Необходимость комплекса молекулярных методов для точной видовой идентификации фитоплазм (КРЬР-анализ и метод секвенирования) в растительном материале.

Степень достоверности и апробация результатов работы. Основные результаты исследований диссертационной работы были представлены на Международной научной конференции «Защита растений для экологической устойчивости агробиоценозов» (г. Алматы, Казахстан, 20-25 апреля 2014г.); 19-й и 20-й Международных Пущинских школах-конференциях молодых ученых «Биология - наука XXI века», секции «Микробиология и вирусология» (г. Пущино, Россия, 20-24 апреля 2015г., 18-22 апреля 2016г.); ХУШ Международном конгрессе по защите растений (г. Берлин, Германия, 23-28 августа 2015г.).

Личный вклад автора. Диссертационная работа является результатом экспериментальных исследований, выполненных лично автором или при его непосредственном участии. Автор участвовал в постановке целей и задач, планировании и проведении сборов, экспериментов, обработке и интерпретации полученных данных. Имена соавторов указаны в соответствующих публикациях.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 8 печатных работ, в том числе 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 1 - в других периодических изданиях, 4 - тезисы в сборниках материалов конференций.

Структура и объём работы. Диссертационная работа изложена на 150 страницах и состоит из введения, 3 глав, заключения, включая общие выводы и рекомендации по практическому применению, списка использованной

литературы из 198 источников (из них 190 - зарубежных авторов). В диссертации содержится 48 рисунков, 36 таблиц и 5 приложений.

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю, к.с.-х.н. В.Г. Заецу и к.б.н. Е.С. Мазурину, за научные идеи, помощь и внимание к работе. Автор искренне признателен к.с.-х.н. М.Б. Копиной и к.б.н. К.П. Корневу, к.с.-х.н. Ю.Н. Приходько за интерес к работе и консультации в проведении исследований. Автор благодарен сотрудникам ФГБУ «Всероссийский центр карантина растений» за помощь в сборе образцов и предоставленные растительные и коллекционные материалы. Автор благодарит коллективы научно-экспериментального отдела ФГБУ «ВНИИКР» и аграрно-технологического института РУДН, своих родных и друзей, поддержавших его в период выполнения работы.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Систематическое положение фитоплазм

Развитие молекулярных методов привело к расширению информации о фитоплазмах и, особенно, в группировке систематических таксонов (Lee et al., 1997, 1995). На сегодняшний день генетически определено более сотни заболеваний, вызванных фитоплазмами. Классификация фитоплазм проводилась в первую очередь на основе геномных последовательностей (Schneider et al., 1995, 1998; Bertaccini et al., 2007). Существуют методы, в которых используют различные подходы к дифференциации, классификации и таксономии данной группы фитопатогенов.

Основными методами классифицирования являются филогенетический анализ на основе последовательностей участка 16S рибосомой ДНК фитоплазм и RFPL-анализ.

1.1.1. Классификация на основе филогенетического анализа

В основу первого метода классификации положен анализ последовательностей 16S гена ДНК (Bertaccini et al., 2011a). В зависимости от нуклеотидного состава этого гена ранее не описанных возбудителей фитоплазмозов относят к той или иной существующей подгруппе, иногда выделяя в новую (Kirkpatrick et al., 1994). На сегодняшний день фитоплазмы подразделяют на 28 таксономических подгрупп (рис. 1). С каждым годом по мере изучения новых видов фитоплазм появляются новые подгруппы, а старые редактируются и дополняются (Seemuller et al., 1994). Они обозначаются римскими цифрами (Davies, Lee, 1993). Такие виды фитоплазм, как Candidatus Phytoplasma vitis и Candidatus Phytoplasma rubi относятся к подгруппе 16SrV (Elm yellows). Возбудители болезней яблони Candidatus Phytoplasma mali и груши Candidatus Phytoplasma pyri выделены в подгруппу

16SrX (Apple proliferation). Вид Candidatus Phytoplasma solani выделен в отдельную группу 16SrXII (Stolbur group).

Рисунок 1 - Дендрограмма 28 последовательностей гена 16S рРНК для различных

групп фитоплазм(Бе^асс1ш et al., 2011b)

1.1.2. Классификация на основе RFLP-анализа

Классификация по полиморфизму длин рестрикционных фрагментов (Restriction Fragment Length Polymorphism) основана на получении наборов рестрикционных участков одного фрагмента 16S гена разных видов фитоплазм с последующим их сравнением между собой (рис.2). Виды из одной таксономической группы могут поражать абсолютно разные культуры и иметь различные наборы рестрикционных фрагментов (Schneider et al., 1993; Gundersen, Lee, 1996).

16SrX-A 'Ca. Phytoplasma mali' I6SrX-C 'Ca. Phytoplasma pvri'

(AJ542541) (AJ542543)

Рисунок 2 - Пример таксономической дифференциации двух видов фитоплазм Candidatus Phytoplasma mali и Candidatus Phytoplasma pyri на основе RFLP-анализа

(Schneider et al., 1995)

Такие рестрикционные карты создаются для каждого вида фитоплазм, и служат маркером для проведения идентификации фитопатогена (Rajan, Clark, 1995). Карты строят по однообразной форме с использованием определенного набора ферментов рестрикции. Для удобства применяют стандартный маркер молекулярного веса, который позволяет охарактеризовать все рестрикционные фрагменты (Bertolini et al., 2007; Heinrich et al., 2001).

1.1.3. Таксономическое положение исследуемых видов

фитоплазм

Царство Bacteria Класс Mollicutes Отдел Acholeplasmatales Семейство Acholeplasmataceae Род Candidatus Phytoplasma

1. Candidatus Phytoplasma vitis - группа 16SrV-C (Elm yellows phytoplasma), золотистое пожелтение винограда (рус.). Широко используемое название: Grapevine Flavescence Dorée phytoplasma.

Существует несколько альтернативных названий болезни винограда, вызываемой Ca. Ph. vitis Flavescence dorée: Bacco 22A disease, Flavescence dorée of grapevine (англ.), Flavescence dorée de la vigne, rougeau (франц.), Flavescenza dorata de la vite (итал.), Flavescencia dorada de la vid (исп.).

Возбудитель Ca. Ph. vitis (Flavescence dorée, FD) включает в себя три штамма, которые были классифицированы на основании анализа последовательностей 16S, secY, map и uvrB-degV генов: штамм FD1 (изолят FD70), который имеет низкую генетическую изменчивость; штамм FD2 (изоляты FD92 и FD-D) без генетической изменчивости; штамм FD-3, (изолят FD-C) с наибольшей генетической изменчивостью (Seemüller et al., 1994).

2. Candidatus Phytoplasma solani (Quaglino et al., 2013) - группа 16SrXII-A (Stolbur phytoplasma), почернение коры винограда (рус.).

Распространенное название: Phytoplasma solani Bois Noir. Так же встречаются такие названия возбудителя почернения коры винограда, как Grapevine bois noir phytoplasma, Stolbur phytoplasma (Kollar et al., 1990; Hren et al., 2007).

3. Candidatus phytoplasma mali (Seemüller, Schneider) - группа 16SrX-A (Apple proliferation), пролиферация яблони (рус.).

Изначально возбудителя называли Apple proliferation phytoplasma, но потом сформировалась целая группа болезней, входящих в нее на основании генетических исследований - Apple proliferation группа (Tedeschi et al., 2007).

Синонимы: AP, proliferation of apple, witches' broom of apple (англ.), proliferations du pommier (франц.), Hexenbesenwuchs des Apfels, Triebsucht des Apfels (нем.), proliferaciones del manzano (исп.).

Проведен ряд исследований по изучению генетической вариабельности Candidatus Phytoplasma mali. Анализ нерибосомных фрагментов ДНК выявил наличие у этого вида не менее трех подтипов, названных АТ-1, АТ-2 и АР-15 (Tedeschi et al., 2006; Jarauch et al., 1996, 2003).

4. Candidatus Phytoplasma pyri (Seemüller, Schneider) - группа 16SrX-C (Apple proliferation), истощение груши (рус.).

Другое научное название: Pear decline phytoplasma

Синонимы: decline of pear, leaf curl of pear, moria disease of pear, Parry's disease of pear, PD (англ.), deperissement du Poirier, fletrissement du Poirier (франц.), Birnbaumsterben, Birnenverfall (нем.), decaimiento del peral (испан.). 5. Candidatus Phytoplasma rubi (Malembic-Maher et. al., 2010) - группа 16SrV-C (Elm yellows phytoplasma), израстание малины (рус.). Второе научное название: Rubus stunt phytoplasma Синонимы: Rubus stunt, RuS (англ.).

Возбудитель израстания малины включен в таксономическую группу 16SrV-EYP (Elm yellows phytoplasma), в которую входит карантинный вид Candidatus phytoplasma vitis.

1.2. Морфологические признаки фитоплазм

Морфологические и биологические свойства сближают их одновременно и с бактериями, и с вирусами. Наличие клеточного строения, рибосом и двух типов нуклеиновых кислот (РНК и ДНК), а также устойчивости к антибиотикам группы тетрациклинов отличает фитоплазмы

от вирусов. Размножение их осуществляется почкованием или бинарным делением, что также является отличительным признаком от вирусов.

Фитоплазмы являются самыми маленькими по размеру клетками-прокариотами (Gibb, Padovan, 1994). Клетка микроорганизма состоит из цитоплазмы, рибосом, обоих видов нуклеиновых кислот (ДНК и РНК). Она окружена мембраной, то есть имеет клеточное строение, но клеточная стенка отсутствует (рис. 3).

Рисунок 3 - Полученное при помощи электронной микроскопии изображение клеток фитоплазм внутри растительной ткани (Lee, 1986)

На ультратонких срезах фитоплазмы представляют собой группы нитевидных, сферических или продолговатой формы полиморфных клеток размером начиная от 175-400 нм до 1700 нм в диаметре (Cameron, 1978). Фитоплазмы имеют относительно небольшой геном, величина которого у разных видов колеблется от 530 до 1350 тысяч пар оснований (т.п.о.) (Lee et al., 1993, 1995; Kirson et al., 1997). Размер хромосом у Candidatus Phytoplasma pyri, Candidatus Phytoplasma mali составляет в среднем 660 и 645 т.п.о. соответственно (Seemüller, Schneider, 2004). При этом у Candidatus Phytoplasma mali размер хромосом варьирует от 640 до 680 т.п.о. (Seemüller, Schneider, 2007).

Геном фитоплазмы состоит из одной хромосомы и нескольких небольших плазмид с уникальным геном репликации (Кигшапоую е1 а1., 2008; Ьаиег, БеешиПег, 2000). В генетическом коде присутствуют кластеры повторных генных последовательностей, чья роль еще до конца не изучена (ТоггеБ, 2005).

В геноме присутствуют основные универсальные гены, которые характерны для всех подгрупп и являются консервативными для диагностики фитоплазм. Есть и другие гены, которые являются узкоспецифическими вплоть до наличия лишь у конкретных штаммов (Магйт е1 а1., 2008, 2009).

По сравнению с другими организмами, у фитоплазм проявляется редукция участков генов, кодирующих синтез ряда веществ. У фитоплазм отсутствует большинство генов, отвечающих за синтез нуклеотидов, за F0F1-тип АТФ-синтазы, которое ранее считалось одним из компонентов минимального набора генов, необходимых для всех живых организмов (Маг1те7 е1 а1., 2000). Выявлены различные биосинтетические пути и транспортные механизмы, которые занимаются импортом важных соединений от растений-хозяев и насекомых-переносчиков к клеткам фитоплазм (Ьаиег е1 а1., 2000).

1.3. Биологические признаки фитоплазм

Фитоплазмы являются облигатными внутриклеточными фитопатогенами. Они размножаются во флоэме растений, хотя о самом механизме размножения информации мало (СюсоШ е1 а1., 2008). Биологический цикл представлен на рисунке 4. Фитоплазмы также развиваются в желудочно-кишечном тракте, гемолимфе, слюнных железах и внутриклеточно в различных органах насекомых (БеешиПег е1 а1., 1994). При питании насекомого на инфицированном растении фитоплазма через слюнные каналы попадает в кишечный тракт и там размножается. При

перелете насекомого на здоровое растение фитоплазма через слюнные железы попадает в растительные клетки и заселяет их.

Возбудители фитоплазмозов имеют высокий репродукционный потенциал, способны сохраняться долгое время в латентном состоянии. Латентный период фитоплазмы зависит от сроков ее передачи насекомым неинфицированному растению и может составлять 10 - 45 дней (рис.4). При этом насекомое остается переносчиком весь срок, даже во время линьки вплоть до своей гибели. Естественное распространение заболевания может происходить на небольшие расстояния и зависит от перелета вектора. Резкие вспышки численности насекомого-переносчика той или иной фитоплазмы способны вызывать эпифитотии (Lefol et.al., 1993, 1994).

Температура в 25 - 26 0С способствует развитию фитоплазм по сравнению с температурой, равной 20 - 22 0С, то есть является оптимальной для жизнедеятельности фитопатогена (Galetto et.al., 2011; Salar et.al., 2013).

Проникновение патогена Перенос инфекции в

Рисунок 4 - Схема развития и переноса фитоплазм от растения к насекомому и наоборот (www.sporometrics.com с изменениями автора)

В период вегетации фитоплазма распространяется по флоэме надземных частей растений, а во время зимы мигрирует по ситовидным трубкам в корневую систему (Christensen et al., 2004). Из-за естественного отмирания ситовидных трубок, которое происходит осенью в надземных органах растений (Evert, 1963), возбудитель фитоплазмоза зимует преимущественно в корнях. Весной с током растительного сока от корней фитоплазма повторно заселяет дерево (куст) или же заносится насекомыми. (Seemüller et al., 1998; Seemüller et al., 1984). В корнях зараженных деревьев фитоплазму можно выявить в течение всего года, но наиболее высокая концентрация фитопатогена наблюдается в период с декабря по май (Baric et al., 2011; Delic et al., 2007). В побегах максимальное размножение фитоплазмы приходится на конец лета - начало осени (Pedrazzoli et al., 2008; Baric et al., 2008). Концентрация фитоплазмы в клетках флоэмы корней варьирует от 6.6х106 до 6х109 клеток на 1 г растительных тканей в зависимости от вирулентности изолятов патогена и устойчивости сорта растения (Seemüller, Schneider, 2004).

Фитоплазмы передаются насекомыми из семейств Cocadellidae, Cixidae, Psyllidae, Delphacidae и Derbidae. Как только вектор становится носителем патогена, инфекция внутри него сохраняется на всю его жизнь, хотя есть исключения (Lethmayer et al., 2011). Известны случаи, когда насекомое было заражено возбудителем фитоплазмоза, но при этом не являлось его переносчиком (Sugio et al., 2008).

Фитоплазма Ca. Ph. vitis распространяется цикадой Scaphoideus titanus Ball (рис.5), центром происхождения которой является Северная Америка (США, Канада). S. titanus проводит весь свой жизненный цикл на винограде. Этот достаточно мобильный и агрессивный вектор является причиной эпидемий FD в Европе (Duduk et al., 2008).

Рисунок 5 - Scaphoideus titanus на виноградном листе (www.efsa.europa.eu)

Во время питания на стадии нимфы и имаго насекомые могут заражаться фитоплазмой. После прохождения инкубационного периода, они способны передавать фитопатоген, вплоть до своей гибели. Цикадка зимует на стадии яйца, имаго откладывает группами в трещины коры винограда в конце лета - с августа по сентябрь. Плодовитость самки составляет 10-15, иногда до 20 яиц в кладке (Eriksson et al., 2012). Вероятно, число яиц занижено, так как часть теряется при вскрытии коры для отбора кладок и самок (Chuche and Thiery, 2012). Яйца находятся в диапаузе в течение 6-8 месяцев.

Рисунок 6 - Нимфа первого возраста Scaphoideus titanus (Mori et al., 2002)

Нимфа проходит пять возрастов, в течение которых погибает до 50% личинок (рис.6). Они достаточно подвижны, что позволяет им перемещаться с растения на растение. Питание в основном протекает на более низких,

защищенных от внешних воздействий (ветер, дождь) и внутренних листьях. При благоприятных условиях личинок можно обнаружить на верхушках побегов (Bernard, Fretay, 1987). Первые взрослые насекомые появляются в летнее время, в июне-июле. После 6 суток самки способны к спариванию, самцы - в течение 24 часов после появления. После отрождения самки начинают откладывать яйца через 10 дней. При благоприятных условиях первые нимфы могут появиться уже в августе (Bernard et al., 1987,1988), что может говорить о появлении второго поколения из яиц, не требующих диапаузы (рис.7). Но развитие личинок во взрослое насекомое может не завершиться. Схема жизненного цикла приведена на рисунке 14.

Рисунок 7 - Жизненный цикл Scaphoideus titanus (Posenato et al., 2001)

Цикадка Scaphoideus titanus - полифаг, и была обнаружена на растениях таких семейств как: Amaranthaceae, Convolvulaceae, Asteraceae, Rosaceae, (Posenato et al., 2001), Fabaceae, Salicaceae, Ulmaceae (Caudwell et al., 1970).

Было зафиксировано, что в популяциях цикадки на территории распространения фитопатогена в Сербии фитоплазмой FD инфицировано от 12.5 до 45% особей от общего числа отловленных насекомых (Jovic et al., 2007).

Также возможен перенос данного вида фитоплазмы следующими видами насекомых: Dictyophara europea, Orientus ishidae, Oncopis alni (Filippin et al., 2009; Mehle et al., 2006). В видах цикад Anoplotettix fuscovenosus, Euscelidius variegatus, Euscelis incises при искусственном

заражении фитоплазма FD сохраняла свою жизнеспособность, однако, передачу инфекции здоровым растениям доказать не удалось (Bressan et al., 2005).

Основным переносчиком Ca. Ph. solani Bois noir является цикадка Hyalesthes obsoletus Segnoret (рис.8). Местом происхождения вида обозначают центральную и южную Европу. Также переносчиком BN служат Reptalus panzer и Pentastiridius leporinus L. (рис.9). Ареалом его распространения являются страны Балканского полуострова: Сербия, Хорватия, Болгария, Греция, Албания (Maixner, 2001; Cvrkovic et al., 2014).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Матяшова, Галина Николаевна, 2017 год

БИБЛИОГРАФИЯ

1. Вердеревская Т.Д., Маринеску В.Г. Вирусные и микоплазменные заболевания плодовых культур и винограда. - Кишинев: Штиинца. - 1985. - 311 с.

2. Гирсова Н.В., Богоутдинов З.Д., Можаева К.А., Кастальева Т.Б. Фитоплазмозы деревьев и кустарников в Поволжье // Известия ТСХА. -2014. - №5. - С. 36-49.

3. Данкверт С.А., Маслов М.И., Магомедов У.Ш. Вредные организмы, имеющие карантинное фитосанитарное значение для Российской Федерации. Воронеж. - 2009. - C. 253-259.

4. Коничев А.С., Цветков И.Л. Практикум по молекулярной биологии. - Москва. - 2012. - 151с.

5. Матяшова Г.Н., Мазурин Е.С. Заец В.Г., Камаев И.О. Исследование праймерных систем, разработанных на участок 16S-23S гена ДНК, для выявления и идентификации фитоплазм // Сборник тезисов 19-й Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века», секция «Микробиология и вирусология». Пущино, Россия - 2015. - С. 187.

6. Мугол Хан Г.Н. Исследование универсальных праймерных систем, разработанных на участки ДНК 16S и 23S генов, для идентификации фитоплазм молекулярно-генетическими методами // Отчет ФГБУ «ВНИИКР». - 2013. - 22 с.

7. Муханин И.В., Дорохова Е.В. Причины покраснения листьев у груши. Ежедневный интернет-журнал «Садоводство и питомниководство». -2016.

8. СТО ВНИИКР // Возбудитель золотистого пожелтения винограда Flavescence dorée phytoplasma. Порядок проведения карантинных фитосанитарных мероприятий в очагах 4.007- Москва. - 2011. - 11 с.

9. Angelini E., Squizzato F., Lucchetta G., Borgo M. Detection of a phytoplasma associated with grapevine Flavescence dorée in Clematis vitalba // European Journal of Plant Pathology. - 2004. - Vol. 110. - P. 193-201.

10. Angelini E., Luca Bianchi G, Filippin L, Morassutti C, Borgo M. A new TaqMan method for the identification of phytoplasmas associated with grapevine yellows by real-time PCR assay // Journal of Microbiological methods. - 2007. - Vol. 68(3). - P. 613-622.

11. Arismendi N., N. Andrade R. Riegel R. Carrillo R. Presence of a phytoplasma associated with witches'broom diseases in Ugni molinae Turcz. and Gaultheria phillyreifolia (Pers.) Sleumer determined by DAPI, PCR and DNA sequencing. - 2010. - Vol. 70(1). - P. 26-33.

12. Baric S., Berger J., Cainelli C., Kerschbamer C., Letschka T., Dalla Via J. Seasonal colonization of apple trees by 'Candidatus Phytoplasma mali' revealed by a new quantitative TaqMan real-time PCR approach // European Journal of Plant Pathology. - 2011. - Vol. 129(3). - P. 455-467.

13. Baric S., Kerschbamer C., Vigl J., Dalla Via J. Translocation of apple proliferation phytoplasma via natural root grafts - a case study // European Journal of Plant Pathology. - 2008. - Vol. 121. - P. 207-211.

14. Berg M., Davies D. L., Clark M. F., Vetten H. J., Maie G., Marcone C., Seemuller E. Isolation of the gene encoding an immunodominant membrane protein of the apple proliferation phytoplasma, and expression and characterization of the gene product // Microbiology. - 1999. - Vol. 145(8). -P.1937-1943.

15. Berger J., Schweigkofler W., Kerschbamer C., Roschatt C., Dalla Via J., Baric S. Occurrence of Stolbur phytoplasma in the vector Hyalesthes obsoletus, herbaceous host plants and grapevine in South Tyrol (Northern Italy) // Vitis. - 2009. - № 48. - P. 185-192.

16. Berges R., Rott M., Seemuller E. Range of phytoplasma concentrations in various plant hosts as determined by competitive polymerase chain reaction // Phytopathology. - 2000. -Vol.90. - P. 1145-1152.

17. Bernard P., Du Fretay G. Dynamique de population de Scaphoideus titanus, vecteur de la Flavescence dorée dans l'Aude. - 1987. -433(434). - P. 457-464.

18. Bernard P., Du Fretay G., Gorguos M., Tassart V. Hypothèse d'une deuxième génération de Scaphoideus titanus. - 1988. - № 251. - P.17-21.

19. Bertaccini A., Davis R.E., Lee I-M. In vitro micropropagation for maintenance of mycoplasma-like organisms in infected plant tissues // Horticultural Science. - 2007. - Vol. 27(9). - P. 1041-1043.

20. Bertaccini A., Contaldo N., Benni A., Curini M., Genovese S., Epifano F., Bellardi M. G. Effects of 'Candidatus Phytoplasma asteris' infection on volatile secondary metabolites of Grindelia robusta Nutt. // Journal of Phytopathology. - 2011a. - № 159. - P. 124-126.

21. Bertaccini A., Duduk B. Phytoplasma classification: Taxonomy based on 16S ribosomal gene, is it enough? // Phytopathogenic Mollicutes. - 2011b. -Vol. 1(1). - P. 3-13.

22. Bertaccini A., Paltrinieri S., Martini M., M. Tedeschi, N. Contaldo. Micropropagation and maintenance of phytoplasmas in tissue culture. // Phytoplasma, Humana press. - 2013. - P. 33 - 39.

23. Bertolini E., Torres E., Olmos A., Martin M.P., Bertaccini A., Cambra M. Co-operational PCR coupled with dot blot hybridization for detection and 16SrX grouping of phytoplasmas // Plant Pathology. - 2007. -Vol.56. - P.677-682.

24. Bianco P. A., Casati P., Marziliano N. Detection of phytoplasmas associated with grapevine flavescence dorée disease using real-time PCR // Plant Pathology. - 2004. - 86. - P. 257-261.

25. Blodgett, E. C., Schneider, H., Aichele M. D. Behavior of pear decline disease on different stock-scion combinations // Phytopathology. - 1962. - № 52. - P. 679-684.

26. Boben J., Mehle N., Ravnikar M. Optimization of extraction procedure can improve phytoplasma diagnostics // Bulletin of Insectology. -2007. - Vol. 60. -P.249-250.

27. Boudon-Padieu E., Bejat A. Grapevine Yellows: Comparison of different procedures for DNA extraction and amplification with PCR for routine diagnosis of phytoplasmas in grapevine // Vitis journal. - 2003. - P. 141-149.

28. Bressan A., Girolami V., Boudon-Padieu E. Reduced fitness of the leafhopper vector Scaphoideus titanus exposed to Flavescence dorée phytoplasma // Entomology Exp. Applied. - 2005. - № 115. - P. 83-290.

29. Brzin J., Ermacora P., Osler R., Loi N., Ravnikar M., Petrovic N. Detection of apple proliferation by ELISA and PCR in growing and dormant apple trees // Plant Diseases Prot. - 2003. - Vol.110. - P. 476-483.

30. Carraro L., Ferrini F., Ermacora P., Loi N. Infectivity of Cacopsylla picta (syn. Cacopsylla costalis), vector of 'Candidatus Phytoplasma mali' in north east Italy // Acta Horticulturae. - 2008. - №781. - P. 403-407.

31. Caudwell A., Kuszala C., Fleury A. Antigen preparation from plant tissues of pathogenic mycoplasmas (MLO) causing flavescence dorée // Phytopathology. - 1970. - Vol. 123. - P. 124-132.

32. Chang C. J. Pathogenicity of aster yellows phytoplasma and Spiroplasma citri on periwinkle. Phytoplasma genetics, diagnosis, and interactions. // Phytopathology. - 1982. - P. 1347-1350.

33. Chireceanu C., Cieslinska M. Molecular characterization of Candidatus Phytoplasma mali and Candidatus Phytoplasma pyri isolates from Romania // COST Action FAO 0807 Final Meeting. - 2013. - P.33-34.

34. Chiykowski L. N., Sinha R. C. Some factors affecting the transmission of eastern peach X-mycoplasma-like organism by the leafhopper Paraphlepsius irroratus // Plant Pathology. - 1988. - Vol. 10. - P. 85-92.

35. Christensen N.M., Nicolaisen M., Hansen M., Schulz A. Distribution of phytoplasmas in infected plants as revealed by real-time PCR

and Bioimaging // Molecular Plant-Microbe Interactions. - 2004. - Vol.17. -P.1175-1184.

36. Chuche J., Thiéry D. Egg incubation temperature differently affects female and male hatching dynamics and larval fitness in a leafhopper // Ecological Evolution. - 2012. - Vol. 2. - P. 732-739.

37. Ciccotti A.M., Bianchedi P.L., Bragagna P., Deromedi M., Filippi M., Forno F., Mattedi L. Natural and experimental transmission of Candidatus Phytoplasma mali by root bridges // Acta Horticulturae. - 2008. - № 781. - P. 459-464.

38. Cieslinska M., Morgas H. Detection and identification of 'Candidatus Phytoplasma prunorum', 'Candidatus Phytoplasma mali', and 'Candidatus Phytoplasma pyri' in stone fruit trees in Poland // Phytopathology. -Vol.159. - 2011. - P. 217-222.

39. Cvrkovic T., Jovic J., Mitrovic M., Krstic O., Tosevski I. Experimental and molecular evidence of Reptalus panzeri as a natural vector of bois noir // Plant Pathology. - 2014. - №63. - P. 42-53.

40. Dai Q., He F.T., Liu P.Y. Elimination of phytoplasma by stem culture from mulberry plants (Morus alba) with dwarf disease // Plant Pathology. - 2007. - № 46. - P. 56-61.

41. Davies D.L., Lee I.M. Cluster-specific polymerase chain reaction amplification of 16S rDNA sequences for detection and identification of mycoplasma-like organisms // Phytopathology. - 1993. - Vol. 83. - P. 10081011.

42. Davis R. E., Lee I.-M., Douglas S. M., Dally E. L. Molecular cloning and detection of chromosomal and extrachromosomal DNA of the mycoplasma-like organism (MLO) associated with little leaf disease in periwinkle (Catharanthus roseus) // Phytopathology. - 2003. - № 80. - P. 78993.

43. Del Serrone P., La Starza S., Krystai L., Kolber M., Barba M. Occurrence of apple proliferation and pear decline phytoplasmas in diseased pear trees in Hungary // Plant Pathology. - 1998. - Vol.80. - P.53-58.

44. Delic D., Martini M., Ermacora P., Myrta A. Carraro L. Identification of fruit tree phytoplasmas and their vectors in Bosnia and Herzegovina // EPPO Bulletin. - 2007. - Vol.37. - P. 444-448.

45. Deng S., Hiruki C. Amplification of 16S rRNA genes from culturable and nonculturable mollicutes // Microbiological Methods. - 1991. -Vol.14. — P.53-61.

46. Doyle J.J., Doyle J.L. Isolation of plant DNA from fresh tissue // Focus. - 1990. - Vol.12. - P.13-15.

47. Duduk B., Bertaccini A. Phytoplasma classification: Taxonomy based on 16S ribosomal gene, is it enough? // Phytopathogenic Mollicutes. - 2004. - Vol. 1(1). - P. 3-13.

48. Duduk B., Paltrinieri S., Ivanovic M., Bertaccini A. Phytoplasmas infecting fruit trees in Serbia // Acta Horticulturae. - 2008. - № 781. - P.351-358.

49. EPPO, Bulletin 37 // Diagnostic of Grapevine Flavescence dorée phytoplasma. - 2007. - P. 536-542.

50. EPPO. Standards PM 3/57(1) Phytoplasmas in fruit trees and grapevine. Inspection and test methods. - 1998. - 7 p.

51. EPPO/CABI. Quarantine Pests for Europe // 2nd edn. CAB International, Wallingford (GB). - 1997. - P. 959-962.

52. Eriksson A., Anfora G., Lucchi A., Lanzo F., Virant-Doberlet M., Mazzoni V. Exploitation of insect vibrational signals reveals a new method of pest management // PLoS ONE. - 2012. - P. 7-5.

53. Evert R. F. The cambium and seasonal development of the phloem in Pyrus and Malus // American Journal of Botany. -1963. - P. 149-159.

54. Fialova R., Navratil M., Valova P. Molecular tests to determine apple proliferation phytoplasma presence in psyllid vectors from apple tree

orchards in the Czech Republic // Acta Horticulturae. - 2008. - № 781. - P. 471-475.

55. Fialova R., Navratil M., Valova P. Phytoplasma occurrence in apple trees in the Czech Republic // Plant Protection Science. - 2003. - Vol.39. - P. 712.

56. Filippin L., Jovic J., Cvrkovic T., Forte V., Clair D., Tosevski I., Boudon-Padieu E., Borgo M., Angelini E. Molecular peculiarities of phytoplasmas associated with Flavescence dorée in clematis and grapevine and preliminary results on the role of Dictyophara europaea (L.) as a vector // Plant Pathology. - 2009. - 58. - P. 826-837.

57. Firrao G., Gobbi E., Locci R. Rapid diagnosis of apple proliferation mycoplasma-like organism using a polymerase chain reaction procedure // Plant Pathology. - 2001. - Vol.43. - P. 669-674.

58. Fluiter H.J., Van der Meer F.A. Rubus stunt virus // University of California. - 1970. - P. 23-27.

59. Franova J. Difficulties with conventional phytoplasma diagnostic using PCR/PFLP analysis // Bulletin of Insectology. - 2011. - Vol.64. - P.287-288.

60. Galetto L., Bosco D., Merzachi C. Universal and group-specific real-time PCR diagnosis of flavescence dorée (16Sr-V), bois noir (16Sr-XII) and apple proliferation (16Sr-X) phytoplasmas from field-collected plant hosts and insect vectors // Annals of Applied Biology. - 2011. - Vol.147. - P.191-205.

61. Garcia-Chapa M., Medina M.A., Viruel M.A., Lavina A., Battle A. Seasonal detection of Pear decline phytoplasma by nested PCR in different pear cultivars // Plant Pathology. - 2003. - Vol.52. - P.513-520.

62. Gibb, K. S., Padovan A. DNA extraction method that allows reliable PCR amplification of MLO DNA from 'difficult' plant host species // PCR Methods Applied. - 1994. - P. 56-58.

63. Girsova N.V., Bottner K.D, Mozhaeva K.A., Kastalyeva N.B., Owens R.A., Lee I.-M. Molecular detection and identification of group 16Sr1

and 16SrX11 phytoplasmas associated with diseased potatoes in Russia // Plant Disease Journal. - 2008. - Vol. 92. - P. 654.

64. Green M.L., Thompson D.A., Mac Kenzie D.J. East and efficient DNA extraction from woody plants for the detection of phytoplasmas by polymerase chain reaction // Plant Disease. - 1999. - Vol.83. - P.482-485.

65. Gundersen D.E., Lee I.M. Ultrasensitive detection of phytoplasmas by nested-PCR assays using two universal primer pairs // Phytopathologia Mediterranea. - 1996. - Vol.35. - P.144-151.

66. Hee-Young J., Young-Il H., Joon-Tak L., Tadaaki H., Shigetou N. Characterization of a phytoplasma associated with witches' broom disease of potatoes in Korea. // General Plant Pathology. - 2003. - Vol. 69.1. - P. 87-89.

67. Heinrich M., Botti S., Caprara L., Arthofer W., Strommer S., Hanzer V., Katinger H., Bertaccini A., Laimer M. Improved detection methods for fruit tree phytoplasmas // Plant Molecular Biology Reporter. - 2001. -Vol.19. - P.169-179.

68. Heintz W. Cuscuta odorata - an effective vector for mycoplasma-like organisms (MLO) // Deutschen Pflanzenschutzdienstes. - 1986. - Vol.38. -P.138-141.

69. Hodgetts J., Boonham N., Mumford R., Dickinson M. Panel of 23S rRNA gene-based real-time PCR assays for improved universal and group-specific detection of phytoplasmas // Applied Environ. Microbiology. - 2009. -Vol.75. - P.2945-2950.

70. Holeva M.C., Glynos P.E., Karafla C.D., Koutsioumari E.M., Simoglou K.B., Eleftheriadis E. First report of 'Candidatus Phytoplasma solani' associated with potato plants in Greece // Plant Disease. - 2014. - Vol. 98(12). - P. 1739.

71. Hren M., Boben L., Rotter A., Kralj P., Gruden K., Ravnikar M. Real-time PCR detection systems for Flavescence dorée and Bois noir phytoplasmas in grapevine: comparison with conventional PCR detection and application in diagnostics // Plant Pathology. - 2007. - Vol.56. - P.785-796.

72. Jacoli G.G. Sequential degeneration of mycoplasma like bodies in plant tissue cultures infected with aster yellows. - 1978. - Vol. 56. - P. 133-140.

73. Jarausch B., Fuchs A., Konig D., Krczal G., Jarausch W. Analysis of the acquisition and multiplication efficiency of different strains of Ca. Phytoplasma mali by the vector Cacopsylla picta // 21nd Int. Conf. Virus and other Transmissible Diseases of Fruit Crois. - 2010. - Vol.427. - P.175-177.

74. Jarausch B., Schwind N., Jarausch W., Krczal G. First report of Cacopsylla picta as a vector of apple proliferation phytoplasma in Germany // Plant Disease. - 2003. - Vol.87. - P.101.

75. Jarausch W., Lansac M., Dosba F. Long-term maintenance of nonculturable apple-proliferation phytoplasmas in their micropropagated natural host plant // Plant Pathology. - 1996. - Vol. 45. - P. 778-786.

76. Jensen D.D., Griggs W.H., Gonzales C.Q., Schneider H. Pear decline virus transmission by pear psylla // Phytopathology. - 1964. - Vol.54. -P.1346-1351.

77. Johannsen J., Foissac X., Kehrli P., Maixner M. Impact of vector dispersal and host-plant fidelity on the dissemination of an emerging plant pathogen // PLoS ONE. -2012. - P. 7.

78. Jovic J., Asc Z., Ember I., Cvrkovic T., Nagy Z., Talaber C., Gergely L., Totevski I., Kolber M. First report of maize redness disease in Hungary // Bulletin of Insectology. - 2011. - №64. - P. 229-230.

79. Jovic J., Cvrkovic T., Mitrovic M., Krnjajic S., Petrovic A., Redinbaugh M.G., Pratt R.C., Hogenhout S.A., Tosevski I. Stolbur phytoplasma transmission to maize by Reptalus panzeri and the disease cycle of maize redness in Serbia // Phytopathology. - 2009. - № 99 (9). - P. 1053-1061.

80. Jovic J., Cvrkovic T., Mitrovic M., Krnjajic S., Petrovic A., Redinbaugh M. G., Pratt R. C., Hogenhout S. A., and Tosevski I. Maize redness in Serbia caused by Stolbur phytoplasma is transmitted by Reptalus panzer // Bulletin of Insectolgy. - 2007. - № 60. - P. 397-398.

81. Jung H. Y., Sawayanagi T., Kakizawa S., Nishigawa H., Wei W., Oshima K., Miyata S., Ugaki M., Hibi T., Namba S. 'Candidatus Phytoplasma ziziphi', a novel phytoplasma taxon associated with jujube witches'-broom disease // System Evolutionary Microbiology. - 2003. - № 53. - P.1037-1041.

82. Kaminska M., Sliwa H. First report of 'Candidatus Phytoplasma mali' in oriental lilies and its association with leaf scorch in Poland // Plant Pathology. -2008. -Vol.57. - P. 363.

83. Kirkpatrick B.C., Smart C., Gardner S., Gao J.L., Ahrens U., Maurer R., Schneider B., Lorenz K.H., Seemüller E., Harrison N.A., Namba S., Daire X. Phylogenetic relationship of plant pathogenic MLOs established by 16/23S rDNA spacer sequences // IOM Let. - 1994. - Vol.3. - P.233-237.

84. Kison H., Kirkpatrick C., Seemüller E. Genetic comparison of the peach yellow leaf roll agent with European fruit tree phytoplasmas of the apple proliferation group // Plant Pathology. - 1997. - Vol.46. - P. 538-544.

85. Kollar A., Seemüller E., Bonnet F., Saillard C., Bove J.M. Isolation of the DNA of various plant pathogenic mycoplasma-like organisms from infected plants // Phytopathology. - 1990. - Vol. 80. - P. 1346-1351.

86. Krczal G., Krczal H., Kunze L. Fieberiella florii (Stal), a vector of apple proliferation agent // Acta Horticulturae. - 1988. - № 235. - P. 99-106.

87. Krizanac I., Mikec I., Budinscak Z., Seruga Music M., Skoric D. Diversity of phytoplasmas infecting fruit trees and their vectors in Croatia // Journal of Plant Diseases and Protection. - 2010. - Vol.117 (5). - P. 206-213.

88. Kuszala C. Influence du milieu d'extraction sur la detection du Bois noir et de la Flavescence dorée de la vigne, par des anticorps poly et monoclonaux diriges contre les phytoplasmes du stolbur et de la Flavescence dorée // Agronomie. - 1996. - № 16. - P. 355-365.

89. Kuzmanovic S, Martini M, Ermacora F, Ferrini F, Starovic M, Carraro L, Osler R, Tosic M. Incidence and molecular characterization of Flavescence dorée and stolbur phytoplasma in grapevine cultivars from different viticultural areas of Serbia // Vitis. - 2008. - №47 (2). - P. 105-111.

90. Kuzmanovic S. Stavretovic M., Pavlovic S., Gavrilovic V., Aleksic G., Stojanovic S., Josic D. Detection of stolbur phytoplasma on blackberry - a new natural host in Serbia // Genetika. - 2011. - Vol 43. - No. 3. - P. 559 -568.

91. Langer M., Maixner M. Molecular characterization of grapevine yellows associated phytoplasmas of the Stolbur-group based on RFLP-analysis of non-ribosomal DNA // Vitis. - 2004. -№ 43(4). - P. 191-200.

92. Lauer U., Seemuller E. Physical map of the chromosome of the apple proliferation phytoplasma // Journal of Bacteriology. - 2000. - Vol.182 (5). - P. 1415-1418.

93. Lee I.M., Davis R.E., Hiruki C. Genetic interrelatedness among Clover proliferation mycoplasma-like organisms (MLOs) and other MLOs investigated by nucleic acid hybridization and restriction fragment length polymorphism analyses //Applied and Environmental Microbiology. - 1986. -Vol.57. - P.3565-3569.

94. Lee I.M., Gundersen D.E., Davis R.E., Bartoszyk I.M. Revised classification scheme of phytoplasmas based on RFLP analyses of 16S rRNA and ribosomal protein gene sequences // International Journal of Systematic Bacteriology. - 1998. - Vol.48. - P.1153-1169.

95. Lee I.M., Hammond W., Davis R.E., Gundersen D.E. Universal amplification and analysis of pathogen 16S rDNA for classification and identification of mycoplasma-like organisms // Phytopathology. - 1993. - Vol. 83. - P. 834-842.

96. Lee I.M., Vibio M., Gundersen D.E. Detection of multiple phytoplasmas in perennial fruit trees with decline symptoms in Italy // Phytopathology. - 1995. - Vol. 85. - P. 728-735.

97. Lee I.M., Zhao Y., Davis R.E., Wei W., Martini M. Prospects of DNA-based systems for differentiation and classification of phytoplasmas // Bull. Insectology. - 2007. - Vol.60. - P.239-244.

98. Lefol C., Caudwell A., Lherminier J., Larrue J. Attachment of the flavescence dorée pathogen (MLO) to leafhopper vectors and other insects // Ann Applied Biology. - 1993. - № 123. - P. 611-622.

99. Lefol C., Lherminier J., Boudon-Padieu E., J. Larrue A., Louis C., Caudwell A. Propagation of Flavescence dorée MLO (mycoplasma-like organism) in the leafhopper vector Euscelidius variegatus Kbm. // Invert Pathology. - 1994. - № 63. - P. 285-293.

100. Lethmayer C., Hausdorf H., Suarez-Mahecha B., Reisenzein H. The importance of psyllids (Hemiptera, Psyllidae) as vectors of phytoplasmas in pome and stone fruit trees in Austria // Bull. Insectology. - 2011. - Vol.64. -P.255-255.

101. Li R., Mock R., Huang Q., Abad J., Hartung J., Kinard G. A reliable and inexpensive method of nucleic acid extraction for the PCR-based detection of diverse plant pathogen // Virological Methods. - 2008. - Vol.154. -P.48-55.

102. Lin T.C., Chen C.P. Evaluation of universal PCR primers for the detection of phytoplasmas // Plant Pathology Bull. - 1985. - Vol.7. - P.33-42.

103. Loi N., Ermacora P., Carraro L., Osler R., Chen T.A. Production of monoclonal antibodies against apple proliferation phytoplasma and their use in serological detection // European Journal of Plant Pathology. - 2002. - Vol.108.

- P. 81-86.

104. Lorenz K.H., Schneider B., Ahrens U., Seemuller E. Detection of the apple proliferation and pear decline phytoplasmas by PCR amplification ribosomal and non-ribosomal DNA // Phytopathology. - 1995. - Vol.85. -P.771-776.

105. Maixner M. Recent advances in Bois noir research // Petria. - 2011.

- P. 17-32.

106. Maixner M., Ahrens U., Seemuller E. Detection of the German grapevine yellows (Vergilbungskrankheit) MLO in grapevine, alternative hosts

and a vector by a specific PCR procedure // European Journal of Plant Pathology. - 1999. - № 101(3). - P. 241-250.

107. Maixner M., Johannsen J., Michel K., Lux B., Seitz A. Host plant specificity of Hyalesthes obsoletus and consequences for "bois noir" epidemiology // Bulletin of Insectology. - 2001. - № 60. - P. 399-400.

108. Maixner M., Reinert W., Darimont H. Transmission of grapevine yellows by Oncopsis alni (Schrank) // Vitis. - 2000. - № 39(2). - P. 83-84.

109. Maixner M., Reinert W. Oncopsis alni (Schrank) (Auchenorrhyncha: Cicadellidae) as a vector of the alder yellows phytoplasma of Alnus glutinosa (L. Gaertn.) // Plant Pathology. - 1999. - № 105. - P. 87-94.

110. Malembic-Maher S., Salar P., Filippin L., Carle P., Angelini E., Foissac X. Genetic diversity of European phytoplasmas of the 16SrV taxonomic group and proposal of 'Candidatus Phytoplasma rubi' // Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. - 2010. - Vol. 10. - P. 1099.

111. Malisano G., Firraro G., Locci R. 16S rDNA-derived oligonucleotide probes for the differential diagnosis of plum leptonecrosis and apple proliferation phytoplasmas // EPPO Bulletin. - 1996. - Vol.26. - P. 421428.

112. Marcone C., Ragozzino A., Seemuller E. Association of phytoplasmas with the decline of European hazel in southern Italy // Plant Pathology. - 1996. - Vol.45. - P. 857-863.

113. Martin R., Carazo G., Arribas C., Colino I., Santiago R., De Blas C. Four Spanish isolates of pear decline phytoplasma are related to other European phytoplasmas of the apple proliferation group // Journal of Phytopathology. -2001. - Vol.149. - P.481-484.

114. Martinez S., Cordova I., Maust B. E., Trejo C., Oropeza C., Santamaria J. M. Is abscissae acid responsible for abnormal stomatal closure in coconuts palms showing lethal yellowing // Plant Pathology. - 2000. - № 156. -P. 319-322.

115. Martini M., Ermacora P., Delic D., Moruzzi, S., Loi N., Carraro L. Spreading and characterization of 'Candidatus Phytoplasma mali' subtypes in different growing areas // Petria. - 2005. - Vol.15. - P. 105-107.

116. Martini M., Ermacora P., Falginella L., Loi N., Carraro L. Molecular differentiation of 'Candidatus Phytoplasma mali' and its spreading in Friuli Venezia Giulia Region (north-east Italy) // Acta Horticulturae. - 2008. -№ 781. - P. 395-402.

117. Martini M., Ermacora P., Loi N., Carraro L., Osler R. Specific detection of Candidatus Phytoplasma mali by a new real-time PCR based method on ribosomal protein gene // COST Action FAO 0877. - 2009. - P.23-24.

118. Merzachi C., Bosco D. Relative quantification of phytoplasma in their plant and insect hosts: a real time PCR based method to quantify CY (16Sr I) phytoplasma in infected daisy and leafhopper vector // Molecular Biotechnology. - 2005. - Vol. 30. - P. 117-127.

119. Merzachi C., Veratti F., Bosco D. Direct PCR detection of phytoplasmas in experimentally infected insects // Annals of Applied Biology. -1998. - Vol. 133. - P. 45-54.

120. Mattedi L., Forno F., Cainelli C., Grando M.S., Jarausch W. Research on Candidatus Phytoplasma mali transmission by insect vectors in Trentino // Acta Horticulturae. - 2008. - Vol.781. - P. 369-374.

121. Mayer C.J., Jarausch B., Jarausch W., Jeklmann W., Vilcinskas A., Gross J. Cacopsylla melanoneura has no relevance as vector of apple proliferation in Germany // Phytopathology. - 2009. - Vol.99. - P.729-738.

122. Mehle N., Brzin J., Boben J., Hren M., Frank J., Petrovic N., Gruden K., Dreo T., Zezlina I., Seljak G., Ravnikar M. First report of 'Candidatus Phytoplasma mali' in Prunus avium, P. armeniaca, and P. domestica // New Disease Reports. - 2006. - Vol. 14. - P. 42.

123. Mori M., Marini L., Rampin E., Zanetti F., Mosca G., Contaldo N., Bertaccini A. First report of 'Candidatus Phytoplasma asteris' associated with

several cultivars of oilseed rape in Italy // Current status and perspectives of phytoplasma disease research and management. - 2010. - P. 25.

124. Mori N., Pavan F., Bondavalli R., Reggiani N., Paltrinieri S., Bertaccini A. Factors affecting the spread of "Bois Noir" disease in north Italy vineyards // Vitis. - 2002. - № 47. - P. 65-72.

125. Morone C., Boveri M., Giosue S., Gotta P., Rossi V., Scapin I., Merzachi, C. Epidemiology of Flavescence dorée in vineyards in Northwestern Italy // Phytopathology. - 2007. - №97. - P. 1422-1427.

126. Musetti R., Grisan S., Polizzotto R., Martini M., Padano C., Osler R. Interactions between 'Candidatus Phytoplasma mali' and the apple endophyte Epicoccum nigrum in Catharanthus roseus plants // Applied Microbiology. -2011. - Vol. 110. - P.746-756

127. Myrta A., Ermacora P., Stamo B., Osler R. First report of phytoplasma infections in fruit trees and grapevine in Albania // Journal of Plant Pathology. - 2003. - Vol.85 (1). - P. 64.

128. Navratil M., Valova P., Fialova R., Petrova K., Franova J., Nebesarova J., Poncarova-Vorackova Z., Karesova R. Survey for stone fruit phytoplasmas in the Czech Republic // Acta Horticulturae. - 2001. - № 550. - P. 377-382.

129. Nemeth M. Virus, Mycoplasma, and Rickettsia Diseases of Fruit Trees. Budapest, Hungary. - 1986. - P. 496-540.

130. Nicolaisen M. Phytoplasmas and phytoplasma vectors in Denmark, Finland, Lithuania and Norway // COST Action FAO 0807 Final Meeting. -2013. - P.1-2.

131. Irimia N., Ulea E., Balau A. M. Detection of pathogen flavescence dorée phytoplasma in some grapevine varieties using elisa test // Lucrari Stiintifice, Agronomie. - 2010. - Vol. 53. - P. 2.

132. Nyland G., Moller W.I. Control of pear decline with a tetracycline // Plant Diseases. - 1973. - Vol.57. - P.634-637.

133. Oberhansli T., Altenbach D., Bitterlin W. Development of a duplex TaqMan real-time PCR for the general detection of phytoplasmas and 18S rRNA host genes in fruit trees and other plants // Bull. Insectology. - 2011. -Vol.64. - P.37-38.

134. Palmano S. A comparison of different phytoplasma DNA extraction methods using competitive PCR // Phytopathology Mediterrian - 2001. - № 40.

- P. 99-107.

135. Paltrinieri S., Martini M., Stefani E., Pondrelli M., Fideghelli, C., Betaccini A. Phytoplasma infection in peach and cherry in Italy // Acta Horticulturae. - 2001. - № 550. - P. 365-370.

136. Pappalardo G., Di Vita G., D'Amico M. Profitability of Wine Grape Growing in the European Union: An Empirical Analysis. China-USA // Business Review. - 2012. - Vol. 11 (6). - P. 729-738.

137. Pasquini G., Pacifico D., Alma A., Bagnoli B., Foissac X., Tessitori M., Merzachi C. Characterization of bois noir isolates by restriction fragment length polymorphism of a stolbur-specific putative membrane protein gene // Phytopathology. - 2009. - Vol. 99 (6. - P.711-715.

138. Pedrazzoli F., Ciccotti A.M., Bianched, P.L., Salvadori A., Zorer R. Seasonal colonization behavior of Candidatus Phytoplasma mali in apple trees in Trentino // Acta Horticulturae. - 2008. - № 781. - P. 483-488.

139. Pedrazzoli F., Gualandri V., Forno F., Mattedi L., Malagnini V., Salvadori A., Stoppa G., Ioriatti C. Asquisition capacities of the overwintering adult of the psyllid vectors of Candidatus Phytoplasma mali // Bull. Insectology.

- 2007. - Vol.60. - P.195-196.

140. Peusens G., Duchene C., Leporivre, P., Oliver T., Steyer S., Demonty E., Laurent P., Belien T. Fruit tree phytoplasmas and their vectors in pome fruit growing in Belgium: overview of current status and recent research efforts // COST Action FAO 0807 Final Meeting. - 2013. - P.43-44.

141. Pollini P. C., Giunchedi L., Bissani R. Immunoenzymatic detection of PCR products for the Phytoplasma genetics, diagnosis, and interactions

identification of phytoplasmas in plants // Phytopathology. - 1997. - № 145. -P. 371-374.

142. Posenato G., Mori N., Bressan A., Girolami V., Sancassani G.P. Scaphoideus titanus, vettore della flavescenza dorata: conoscerlo per combatterlo // Inf Agrarie. - 2001. - № 57. - P. 91-93.

143. Quaglino F., Zhao Y., Casati P., Bulgari D., Bianco P.A., Wei W., Davis R.E. 'Candidatus Phytoplasma solani', a novel taxon associated with stolbur and bois noir related diseases of plants // International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. - 2013. - № 63. - P. 2879-2894.

144. Rajan J., Clark M.F. Detection of apple proliferation and other MLOs by immune-capture PCR (IC-PCR) // Acta Horticulturae. - 1995. -№386. - P. 511-514.

145. Rui D., Ciferri R., Refatti E. La virosi degli "scopazzi del melo" nel Veronese // Notiziario delle Malattie delle Piante. - 1950. - Vol.13. - P.7-11.

146. Rumbou A., Carraro L., Nanos G., Boutla I., Rumbos I.C. First report of Candidatus Phytoplasma mali in Greece and correlation with small apple fruit disorder occurring in the orchards of the Pelion Mountain // Acta Horticulturae. - 2008. - №781. - P. 505-509.

147. Ryan P.R., Germaine K., Franks A., Ryan J.D., Dowling N.D. Bacterial endophytes: recent developments and applications // FEMS Microbiological Lett. - 2007. - № 278. - P. 1-9.

148. Safarova D., Zemanek T., Valova P., Navratil M. 'Candidatus Phytoplasma cirsii', a novel taxon from creeping thistle Cirsium arvense (L.) // System of Evolutionary Microbiology - 2016. - Vol. 66(4). - P. 1745-53.

149. Salar P., Clair D., Foissac X., Boudon-Padieu E., Malembic-Maher S. Comaprison of prevalance, geographic distribution and biological properties of two flavescence dorée phytoplasma strains // Le Progres agricole et viticole HS, 16th Meeting ICVG. - 2013. - P. 137-138.

150. Salem N.M., Quaglino F., Abdeen A., Casati P., Bulgari D., Alma A., Bianco P.A. First report of 'Candidatus Phytoplasma solani' strains

associated with grapevine bois noir in Jordan // Plant Disease. - 2013. - № 97 (11). - P. 1505.

151. Schneider B., Ahrens U., Kirkpatrick B.C., Seemuller E. Classification of plant-pathogenic mycoplasma-like organisms using restriction site analysis of PCR-amplified 16S rDNA // Genetically Microbiology. - 1993. - Vol.139. - P.519-527.

152. Schneider B., Marcone C., Kampmann M., Ragozzino A., Lederer W., Cousin M.T., Seemuller E. Characterization and classification of phytoplasmas from wild and cultivated plants by RFLP and sequence analysis of ribosomal DNA // European Journal of Plant Pathology. - 1997. - Vol.103. - P. 675-686.

153. Schneider, B., Seemuller, E., Smart, C.D., Kirkpatrick, B. Phylogenetic classification of plant pathogenic mycoplasma-like organisms or phytoplasmas. In: Razin S., and Tully // Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmatology. - 1995. - P. 369-380.

154. Seemuller E., Carraro L., Jarausch W., Schneider B. Apple proliferation phytoplasma // Virus and virus-like diseases of pome and stone fruits. - 2011. - P. 67-73

155. Seemuller E., Kampmann M., Kiss E., Schneider B. HfIB gene-based phytopathogenic classification of Candidatus Phytoplasma mali strains and evidence that strain composition determines virulence in multiply infected apple trees // Mol. Plant-Microbe Interaction. - 2011. - Vol.24. - P.1258-1266.

156. Seemuller E., Marcone C., Lauer U, Ragazzino A., Goschl M. Current status of molecular classification of the phytoplasmas // Journal of Plant Pathology. - 1998. - Vol.80. - P.3-26.

157. Seemuller E., Schaper U., Zimbelmann, F. Seasonal variation in the colonization patterns of mycoplasma-like organisms associated with apple proliferation and pear decline // Zeitschriffur Pflanzenkrankheiten und Pflanzenschutz. - 1984. - Vol.91. - P.371-382.

158. Seemuller E., Schneider B. 'Candidatus Phytoplasma mali', 'Candidatus Phytoplasma pyri' and 'Candidatus Phytoplasma prunorum', the causal agents of apple proliferation, pear decline and European stone fruit yellows, respectively // Intern. J. Systematic and Evolutionary Microbiology. -2004. - Vol.54. - P.1217-1226.

159. Seemuller E., Schneider B. Differences in virulence and genomic features of strains of 'Candidatus Phytoplasma mali' the apple proliferation agent // Phytopathology. - 2007. - Vol.97. - P. 964-970.

160. Seemuller E., Schneider B., Maurer R., Ahrens U., Daire X., Kison H., Lorenz K.-H., Firrao G., Avinent L., Sears B.B., Stackebrandt E. Phylogenetic classification of phytopathogenic mollicutes by sequence analysis of 16S ribosomal DNA // International Journal of Systematic Bacteriology. -1994. - Vol.44 (3). - P. 440-446.

161. Seemuller E., Sule S., Kube M., Jelkmann W., Schneider B. The AAA+ ATPases and HfIB/FtsH proteases of Candidatus Phytoplasma mali: Phylogenetic diversity, membrane topology, and relationships to strain virulence // Plant-Microbe Interaction. - 2013. - Vol.26. - P.367-376.

162. Shao J., Zhao Y., Wei W., Lee I-M., Suo X., Davis R. E. Construction of an interactive online phytoplasma classification tool and its application in analysis of the peach X-disease phytoplasma group (16SrIII) // Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. - 2006. - № 59. - P. 2582-2593.

163. Singh U. P., Sakai A., Singh A. K. White leaf disease of Cynodon dactylon Pers., a mycoplasmal disease in India // Cellular and Molecular Life Sciences. - 1992. - №34. - P. 1447-1448.

164. Singh, S. J. Electron microscopic evidence of the association of mycoplasma-like organism with phyllody disease of bottlegourd // Plant Disease Research. - 1991. - № 6. - P.117-20.

165. Skoric D. Overview of the phytoplasma and vector research in Austria, Croatia and Slovenia since 2009 // COST Action FAO 0807 Final Meeting. - 2013. - P.10-11.

166. Sugio A., Yang B., Zhu T., White F.F. Two type III effector genes of Xanthomonas control the induction of the host genes OsTFIIAg1 and OsTFX1 during bacterial blight of rice // Science. - 2008. - № 104. - P.1720-1725.

167. Tedeschi R., Alma A. 'Candidatus Phytoplasma mali': The current situation of insect vectors in northwestern Italy // Bulletin of Insectology. -2007. - Vol.60 (2). - P.187-188.

168. Tedeschi R., Alma A. Fieberiella florii (Homoptera: Auchenorrhyncha) as a vector of "Candidatus Phytoplasma mali" // Plant Disease. - 2006. - Vol.90. - P. 284-290.

169. Tedeschi R., Alma A. Transmission of apple proliferation phytoplasma by Cacopsylla melanoneura (Homoptera: Psyllidae) // Econ. Entomology. - 2004. - Vol.91 (1). - P. 8-13.

170. Tedeschi R., Bosco D., Alma A. Population dynamics of Cacopsylla melanoneura (Homoptera: Psyllidae), a vector of apple proliferation phytoplasma in Northwestern Italy // Econ. Entomology. - 2002. - Vol.95 (3). -P. 544-551.

171. Tedeschi R., Lauterer P., Brusetti L., Tota F., Alma A. Composition, abundance and phytoplasma infection in the hawthorn psyllid fauna of northwestern Italy // European Journal of Plant Pathology. - 2009. -Vol.123. - P. 301-310.

172. Tedeschi R., Visentin C., Alma A., Bosco D. Epidemiology of apple proliferation (AP) in northwestern Italy: evaluation of the frequency of AP-positive psyllids in naturally infected populations of Cacopsylla melanoneura (Homoptera: Psyllidae) // Ann. Applied Biology. - 2003. -Vol.142. - P. 285-290.

173. Thilagavathi R., Ramjegathesh R., Rajendran L. First report of little leaf disease associated with phytoplasma on sugar beet (Betavulgaris L. subsp. vulgaris var. altissima Doll) in India // Gen Plant Pathology. - 2011. - Vol. 77 (139). - P. 139-141.

174. Tomlinson J. A., Boonham N., Dickinson M. Development and evaluation of a one-hour DNA extraction and loop-mediated isothermal amplification assay for rapid detection of phytoplasmas // Plant Pathology. -2010. - Vol. 59 (3). - P.465-471.

175. Torres E. European interlaboratory comparison and validation of detection methods for Candidatus Phytoplasma mali, Candidatus Phytoplasma prunorum and Candidatus Phytoplasma pyri: preliminary results // Bull. Insectology. - 2011. - Vol.64. - P.281-284.

176. Torres E., Bertolini E., Cambra M., Monton C., Martin M.P. Realtime PCR for simultaneous and quantitative detection of quarantine phytoplasmas from apple proliferation (16SrX) group // Molecular Cell Probes. - 2005. - Vol.19. - P.334-340.

177. Van der Meer F.A. and Fluiter H.J. Rubus stunt, a leafhopper borne virus disease // Tijdschr Plantenziekten. - 1953. - Vol. 59. - P. 195-197.

178. Van der Meer F.A. Virus and virus-like diseases of Rubus (raspberry and blackberry) // Agriculture Handbook. - 1987. - No 631. - P. 197203.

179. Wagner E. The leafhopper vectors of phytopathogenic viruses // Technical Bulletin. - 1964. - Vol 123. - P. 8-24.

180. Wang M. Q., Maramorosch K. Earliest historical record of a tree mycoplasma disease: beneficial effect of mycoplasma-like organisms on peonies // Springer. - 1998. - P. 349-356.

181. Weintraub P.G., Jones P. Phytoplasmas: genomes, plant hosts, and vectors // CAB International. - 2010. - 330 p.

182. Международная база генетических данных [Электронный ресурс]. URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov (дата обращения: 06.11.2015).

183. База данных по диагностике вредных организмов [Электронный ресурс]. URL: http://www.q-bank.eu/Phytoplasmas (дата обращения: 11.04.2014).

184. Природа Средиземноморья, иллюстрации [Электронный ресурс]. URL: http://www.naturamediterraneo.com (дата обращения: 23.05.2013).

185. Сельскохозяйственное бюро Содружества наций [Электронный ресурс]. URL: http://www.cabi.org (дата обращения: 17.02.2014).

186. Онлайн-программа по филогенетическому анализу [Электронный ресурс]. URL: http://www.phylogeny.fr (дата обращения: 15.09.2014).

187. Европейская организация по карантину и защите растений [Электронный ресурс]. URL: https://www.eppo.int (дата обращения:

01.03.2013).

188. Портал прогнозирования и новостей службы защиты растений Республики Словения [Электронный ресурс]. URL: https://www.pissrbija.com (дата обращения: 06.10.2015).

189. Иллюстрации вредных организмов [Электронный ресурс]. URL: https://www.sportometrics.com (дата обращения: 27.11.2013).

190. Европейская организация по продовольственной безопасности [Электронный ресурс]. URL: https://www.efsa.europa.eu (дата обращения:

18.10.2014).

191. Энтомологический портал Германии [Электронный ресурс]. URL: https://www.insectservices.de (дата обращения: 08.02.2015).

192. Таможенная статистика РФ [Электронный ресурс]. URL: https://www.stat.custom.ru (дата обращения: 26.01.2016).

193. Онлайн-определитель насекомых отряда Hemiptera [Электронный ресурс]. URL: https://www.britishbugs.org (дата обращения: 19.05.2014).

195. Электронная научная онлайн-библиотека [Электронный ресурс]. URL:https:// www.scielo.br (дата обращения: 09.08.2014).

196. Научный портал CABI [Электронный ресурс]. URL: http://www.plantwise.org

(дата обращения: 14.11.2013).

197. Иллюстрации карантинных объектов ЕОКЗР [Электронный ресурс]. URL: https:// www.eppo.int/quarantine/images.htm (дата обращения: 21.05.2014).

198. Информационный ресурс фитоплазмологов [Электронный ресурс]. URL: http:// www.fitoplasmi.it/index1.htm (дата обращения: 13.04.2016).