Разработка и применение иммуномодулирующих препаратов для профилактики и лечения заболеваний, обусловленных вирусно-бактериальной инфекцией тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, доктор биологических наук Тулева, Надежда Павловна

• Тулева, Надежда Павловна
• доктор биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации доктор биологических наук Тулева, Надежда Павловна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. РОЛЬ ФАКТОРОВ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ПРИ ИНФЕКЦИОННЫХ ПРОЦЕССАХ.

1.1. Факторы естественной резистентности организма.

1.2. Инфекционная бронхопневмония телят: этиология, патогенез, иммунологический статус и лечение.

1.3. Тенденции разработки иммунотропных препаратов.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Разработка иммуномодулирующих препаратов серии Витулин и

Тулимкар.

3.2. Доклиническое изучение иммуномодулирующего препарата

Витулин и растворителей для иммунотропных препаратов № и №2.

3.2.1. Определение острой токсичности препарата Витулин и его растворителей № 1 и № 2.

3.2.2. Определение хронической токсичности препарата Витулин и растворителей № 1 и № 2 (на крысах).

3.2.3. Определение хронической токсичности препарата Витулин и растворителей № 1 и № 2 (на кроликах).

3.2.4. Определение хронической токсичности препарата Витулин и растворителей № 1 и № 2 (на собаках).

3.2.5. Сенсибилизирующее и местно-раздражающее действие препарата Витулин и его растворителей № 1 и № 2 на слизистую оболочку глаза.

3.2.6. Аллергизирующее действие препарата Витулин и растворителей № 1 и № 2.

3.2.7. Испытание на пирогенность препарата Витулин и растворителей № 1 и № 2.

3.2.8. Определение тератогенности и эмбриотоксичности препарата Витулин и растворителей № 1 и № 2.

3.2.9. Мутагенное действие препарата Витулин и растворителей № и №2.

3.2.10. Определение противовоспалительного свойства препарата Витулин.

3.2.11. Действие препарата Витулин на организм облученных животных.

3.2.12. Влияние Витулина, разведенного растворителями № 1 и № 2, на жизнеспособность микроорганизмов in vitro.

3.2.13. Коррекция показателей естественной резистентности больных телят с респираторными болезнями.

3.2.14. Монотерапия собак при диссеминированном папилломатозе ротовой полости.

3.2.15. Применение Витулина при стафилококкозе у собак.

3.3. Клинические испытания эффективности препарата Витулин в послеоперационный период и при онкологических заболеваниях домашних животных.

3.3.1. Онкологические заболевания.

3.3.2. Постоперационные состояния.

3.3.2.1. Постоперационные осложнения.

3.3.2.2. Предотвращение постоперационных осложнений.

3.3.3.Гнойная хирургия.

3.3.4.Инфекционно-деструктивные процессы в костной ткани (ИДП).

3.4. Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики и лечения бронхопневмонии у телят.

3.4.1. Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики респираторных болезней телят.

3.4.1.1. Активная неспецифическая иммунопрофилактика респираторных вирусных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни.

3.4.2. Применение Витулина и Тулимкара для лечения телят, больных бронхопневмонией.

3.4.2.1. Применение Витулина для активной монотерапии больных телят с начальной стадией бронхопневмонии.

3.4.2.2. Применение Витулина и Тулимкара для лечения больных телят с серозно-катаральной формой бронхопневмонии.

ОБСУЖДЕНИЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и применение иммуномодулирующих препаратов для профилактики и лечения заболеваний, обусловленных вирусно-бактериальной инфекцией»

Актуальность темы

Важной проблемой для медицины и ветеринарии являются респираторные болезни, в том числе бронхопневмонии, обусловленные ассоциацией вирусов, бактерий, простейших и грибов.

Во всём мире ежегодно заболевает огромное количество людей.

В США в течение года регистрируют до 4 млн. заболевших, из которых 1 млн. требует госпитализации (цит. по Новикову Ю.К., 2002).

В Российской Федерации ежегодно болеет около 1,5 млн. человек (Чуча-лин А.Г.,2001).

Особую тревогу вызывает перманентная тенденция к нарастанию смертности от респираторных болезней (Иллек Я.Ю и др., 1996; 2000; Воробьев К.В. и др., 2000; Гранитов В.М., 2001; Камышенцев М.В. и др., 2002). По данным Американского торакального общества в США смертность от пневмонии достигает 18-20%; Европейское респираторное общество приводит данные в пределах 10%. В отчете Британского торакального общества врачей смертность от пневмонии с тяжелым течением превышает 30% (цит. по Чучалину А.Г., 2001).

Сложная ситуация наблюдается и в ветеринарии. Бронхопневмония, совпадающая с возрастным иммунодефицитом телят, является широко распространенным заболеванием на европейском и американском континентах (Уса-ченко А.А. и др., 1991; Карпуть И.М., 1993; Подкопаев В.М. и др., 1985; Куде-сов JI.A., 2001; Мс Geech D.J. et al., 1986; Rotermund H., 1988; Kob E., 1989; Proud D. et al., 1990; Todor 1. et al., 1993; Losinger W.C.,1996). Энзоотии бронхопневмонии поражают до 50% нарождающихся животных и являются причиной потери до 40% от числа заболевших с учетом гибели и вынужденного убоя

Высокопоясный А.И. и др., 2000).

Многообразие различных респираторных вирусов и их многочисленных серотипов создаёт условия для возникновения спонтанных инфекций (Сю-рин В.Н. и др., 1991).

В племенных хозяйствах переболевшие телята в дальнейшем не пригодны для воспроизводства стада. У взрослых особей скрытое вирусоносительство возбудителей инфекционного ринотрахеита и аденовирусной инфекции порождает целый ряд проблем. Одновременно с поражением эпителиальных клеток верхних дыхательных путей они вызывают патологию половых органов. В таких хозяйствах наблюдаются массовые аборты, эндометриты и маститы. Пораженный эпителий верхних дыхательных путей дает возможность активации сапрофитной и условно-патогенной микрофлоры респираторного тракта и проникновению в легкие микроорганизмов, находящихся в воздухе. Таким образом, вирусы, нарушая защитный барьер слизистых, способствуют их колонизации бактериальными патогенами, поэтому любая инфекция в организме человека или животного развивается чаще всего не в моно-, а в ассоциированном t варианте с другими (Домникова Н.П. и др., 2001; Новиков Ю.К., 2002; Таточен-ко В.К.1994; 2002).

Опасным является вирусоносительство у телят в первый возрастной критический период, когда колостральный иммунитет находится на стадии затухания. У данных животных выделение вирусов происходит без проявления клинических признаков болезни, что способствует широкому распространению возбудителей и массовому перезаражению.

Для лечения больных бронхопневмонией в настоящее время используются многочисленные антибиотики. Создано уже более 30 тысяч наименований и постоянно создаются их новые модификации. Но, несмотря на это, количество болезней не уменьшается. Падёж телят остается очень высоким и по Российской Федерации составляет свыше 2 млн. голов в год, что наносит колоссальный экономический ущерб.

В медицине и ветеринарии в подавляющем большинстве случаев анти-биотикотерапия назначается на эмпирической основе, которая не всегда приносит должный терапевтический эффект (Конопелько П.Я. и др., 1990; Синопальников А.И. и др., 1999; Навашин С.М., 1999; Домникова Н.П. и др., 2001; Алек-санян JI.A,2001; Koller M.N. et al, 1995; Vincent J.L., et al., 1995; Fagon J.Y., et al., 1996; Dewan N.A., et al., 2000).

Это становится вполне объяснимым, если учесть, что на вирусы антибиотики вообще не оказывают губительного действия. Микроорганизмы же быстро адаптируются и в дальнейшем беспрепятственно вызывают бактериальные осложнения. Кроме того, при длительном применении антибиотиков происходит их кумуляция в организме животных и человека, что способствует возникновению вторичного иммунодефицитного состояния.

Беспокоит и факт наличия антибиотиков в мясе и молоке, выпускаемых в Российской Федерации (до 40%). Поэтому учёные, как ветеринарии, так и медицины всё чаще стали говорить об экологичности препаратов (Аликин Ю.С. и ДР., 1996).

Поиск средств защиты от ассоциированного комплекса вирусно-бактериальных возбудителей, вызывающих бронхопневмонию, ведётся в трех направлениях:

1) пассивной иммунизации специфическими гипериммунными сыворотками;

2) активной иммунизации живыми ослабленными или инактивированны-ми вакцинами;

3) повышении неспецифической резистентности организма введением иммунотропных препаратов.

Иммунизация телят специфическими гипериммунными сыворотками требует значительных затрат и времени. Кроме того, они могут быть контамини-рованы многочисленными возбудителями, в частности, вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Пассивная иммунизация может быть преодолена высоко вирулентными вирусами инфекционного ринотрахеита в ассоциации с аденовирусной и респираторно-синцитиальной инфекциями.

Применение живых или инактивированных вакцин не предотвращает ла-тенции вирулентных вирусов в организме животных (Сюрин В.Н. и др., 1991).

Использование многочисленных иммунотропных препаратов также представляет серьезную проблему. Так, длительное применение иммуностимуляторов, иммуномодуляторов или иммунокорректоров вызывает активацию Т- и В-клеточного иммунитета. Это может привести в дальнейшем к запуску опухолевой трансформации клеток, механизм которой тот же, что и активация клеток иммунной системы (Агеенко А.И., 1994).

Поэтому, на современном этапе науки для профилактики и лечения респираторных болезней, необходимы иммунотропные препараты с направленным действием: противовирусным, антимикробным, противовоспалительным и не вызывающих запуска опухолевой трансформации клеток даже при их длительном парэнтеральном введении.

Цель и задачи исследований

Целью диссертационной работы является разработка комплекса иммуно-модулирующих препаратов направленного действия: противовирусного, антибактериального, противовоспалительного, антипролиферативного, а также способных индуцировать в организме образование эндогенного гамма-интерферона.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать иммуномодулирующие препараты, используя физические, химические, биологические методы очистки и концентрации активных веществ, обладающие свойствами повышать естественную резистентность организма.

2. Получить иммуномодулирующие препараты с использованием естественных компонентов, индуцирующих эндогенный гамма-интерферон и оказывающих бактериостатическое действие в отношении Гр+, Гр- микроорганизмов.

3. Провести исследование полученных иммуномодулирующих препаратов и растворителей № 1 и № 2 на лабораторных животных с целью определения острой и хронической токсичности, мутагенного, тератогенного, эмбрио-токсического, пирогенного и аллергизирующего действия.

4. Изучить влияние созданных иммуномодулирующих препаратов на активацию иммунного ответа с использованием лабораторных животных.

5. Изучить на домашних животных профилактическое и терапевтическое действие препаратов серии Витулин и Тулимкар при инфекционно-воспалительных и вирусно-бактериальных болезнях.

6. Изучить влияние разработанных иммуномодулирующих препаратов на естественную резистенстность организма телят при активной неспецифической профилактике и монотерапии бронхопневмонии в период энзоотии респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

7. Разработать промышленную технологию выпуска иммуномодулирующих препаратов и растворителей для них.

8. Внедрить разработанный комплекс иммуномодулирующих препаратов в ветеринарную практику для иммунопрофилактики и монотерапии инфекци-онно-воспалительных болезней сельскохозяйственных и домашних животных.

Научная новизна работы:

1. Разработана серия иммуномодулирующих препаратов Витулин: Витулин, Витулин-А, Витулин-В, Витулин-С, Витулин-D, Витулин-Е и Тулимкар, имеющих патентную чистоту в отношении развитых стран: США, Великобритании, Франции, Германии, Японии.

2. Изучено влияние разработанных препаратов на организм лабораторных животных (мыши, крысы, кролики, морские свинки, собаки, дрозофилы). Показана безвредность препаратов и их влияние на формирование в организме животных иммунного ответа по гуморальному типу.

3. Впервые созданы иммуномодулирующие препараты Витулин и Тулимкар, обладающие при инфекционно-воспалительных процессах направленным действием: противовирусным, антибактериальным, противовоспалительным, антипролиферативным.

4. Впервые с применением иммуномодулирующего препарата Витулин в условиях России появилась возможность коррекции неспецифических факторов защиты организма животных в период энзоотии респираторных вируснобактериальных болезней.

5. Разработаны методологические основы активной неспецифической иммунопрофилактики для сохранения племенного молодняка при энзоотиях респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

6. Впервые с использованием иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар появилась возможность проводить активную неспецифическую иммунопрофилактику животных в период энзоотии респираторных вирусно-бактериальных болезней.

7. Впервые разработаны эффективные и экономичные схемы и дозы применения препаратов Витулин и Тулимкар для массового проведения монотерапии ассоциированных вирусно-бактериальных болезней телят. При этом полностью исключается использование отечественных и зарубежных антибактериальных препаратов, экзогенного интерферона, гамма-глобулинов, сывороток крови реконвалесцентов.

8. Разработана эффективная и экономичная схема иммунопрофилактики и монотерапии широко распространённых болезней собак - папилломатоза и стафилококкоза.

Теоретическая и практическая значимость работы:

На основании проведённых исследований на домашних животных дано научное обоснование эффективного сочетанного применения иммуномодулирующих препаратов - Витулина с растворителем № 1 и Тулимкара для профилактики респираторных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни при энзоотии бронхопневмонии, обусловленной ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей, в животноводческих хозяйствах России.

Впервые дано научное обоснование эффективного применения иммуномодулирующих препаратов Витулина с растворителем № 2 и Тулимкара для лечения телят, больных респираторными болезнями, вызванными ассоциацией вирусов и бактерий, в животноводческих хозяйствах России.

В результате проведённых экспериментальных исследований дано научное обоснование эффективного применения иммуномодулирующих препаратов - Витулина и Тулимкара для профилактики и лечения па-пилломатоза и стафилококкоза у собак.

Разработана нормативно-техническая документация для промышленного выпуска иммуномодулирующих препаратов серии Витулин для профилактики и лечения домашних животных.

Практическая ценность:

Разработаны методы применения иммуномодулирующих препаратов серии Витулин и Тулимкар в ветеринарной практике.

Показана высокая эффективность препаратов для профилактики бронхопневмонии телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни при энзоотиях респираторных болезней, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий.

Установлена высокая эффективность монотерапии телят при начальной и серозно-катаральной формах бронхопневмонии, вызванных ви-русно-бактериальными возбудителями.

Установлена высокая эффективность сочетанного применения иммуномодулирующих препаратов при лечении стафилококкоза и диссе-минированного папилломатоза ротовой полости собак.

Доказана возможность ограниченного применения антибиотиков в медицине и ветеринарии при использовании иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар, обладающих противовирусным, антибактериальным, противовоспалительным, антипролиферативным действием и корректирующим Т- и В-клеточный иммунитет.

Реализация результатов исследования.

Основные научные положения диссертационной работы и предложения производству вошли в:

1. «Наставление по применению Тулимкара в качестве иммуностимулирующего средства при бактериальных и вирусных болезнях телят, поросят и собак». (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000).

2. Тулимкар. Технические условия (ТУ 9325-009-00493362-00). (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода, 2000).

3. «Временное наставление по применению иммуномодулирующего препарата Витулин с растворителями № 1 и № 2 для иммунопрофилактики и монотерапии животных». (Утверждены Управлением ветеринарии Ленинградской области и Учёным советом ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины», 2002).

4. Пять методических рекомендаций. (Утверждены на Научно-координационном совете по животноводству и ветеринарии Северо-Западного НЦ Рос-сельхозакадемии, 2004): 1) «Фармакологическая коррекция вторичных имму-нодефицитных состояний коров во второй половине стельности и у новорождённых телят». 2) «Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики респираторных вирусных болезней телят». 3) «Применение иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для лечения респираторных вирусных болезней телят». 4) «Применение иммуномодулирующих препаратов: Витулин, Тулимкар, Тулим и Апитулим для профилактики и лечения болезней мелких домашних животных». 5) «Роль биохимических методов исследований для контроля естественной резистентности телят при использовании иммуномодулирующих препаратов».

Апробация работы. Основные положения и результаты исследований доложены и обсуждены: на ежегодных научных конференциях Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1985 -2004); на Юбилейной научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов, посвященной 70-летию Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1990); на VIII Межгосударственной научно-практической конференции: «Новые фармакологические средства в ветеринарии», посвященной 75-летнему юбилею кафедры фармакологии Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 1996); на научно-производственной конференции, посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки (Санкт-Петербург, 1998); на XIII Международной научно-практической конференции: «Новые фармакологические средства в ветеринарии (Санкт-Петербург, 2001); на Международной научно-производственной конференции по акушерству, гинекологии и биотехнологии репродукции животных, посвященной 100-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РСФСР, доктора ветеринарных наук, профессора И.А. Бочарова (Санкт-Петербург, 2001); на XIV Международной межвузовской научно-практической конференции: «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2002); на Международной межвузовской научно-методической конференции «Повышение качества учебного процесса в вузе» (Санкт-Петербург, 2002); на XIV Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2002 г.); на Всемирном конгрессе по клинической и иммунной патологии; ст. «Влияние иммуномодуляторов серии Витулин при раке пищевода» (Сингапур, 2002 г., с. 284).; на Всемирном конгрессе по клинической и иммунной патологии; ст. «Иммуномодуляторы серии Витулин» (Сингапур, 2002 г., с. 250).; на Межвузовской конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (Санкт-Петербург, 2003 г.); на XV Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические препараты» (Санкт-Петербург, 2003 г.); на II Межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей (Санкт-Петербург, 2004 г.); на XVI Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические препараты» (Санкт-Петербург, 2004 г.).

Личный вклад диссертанта. Все исследования по разработке препаратов, схемам и дозам их применения, интерпретация результатов и публикации выполнены соискателем самостоятельно.

Публикации результатов проведённых исследований. Основные научные результаты, включенные в материалы диссертации, опубликованы в 59 печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 272 страницах машинописного текста, содержит 39 таблиц, 74 рисунка, 1 фотографию. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов и рекомендаций. Список литературы включает 301 работу отечественных и 191 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Тулева, Надежда Павловна

выводы

1. На основе продуктов пчеловодства и экстрактов из растений семейства сложноцветных (Compositae), астровых (Asteraceae) и барбарисовых (Berberidaceae) разработана технология получения иммуномодулирующих препаратов серии Витулин (Витулин, Витулин-А, Витулин-В, Витулин-С, Виту-лин-D, Витулин-Е) и Тулимкар, обладающих выраженным иммуномодули-рующим действием и предназначенных для профилактики и лечения патологии иммунной системы при инфекционно-воспалительных процессах. Получено 7 патентов на изобретение.

Для парэнтерального введения Витулина и Тулимкара созданы два растворителя (№ 1 и № 2), содержащие производные циклопентаноидных монотерпенов, усиливающие иммуномодулирующее действие препаратов, их антимикробную и антигрибковую активность.

2. Иммуномодуляторы серии Витулин индуцируют при парэнтеральном введении эндогенный гамма-интерферон, титр которого не выходит за пределы эволюционно закреплённого оптимума.

3. В процессе приготовления препаратов серии Витулин флавоноидные фракции растений, находящиеся в гликозидированном виде, ферментируются до агликонов. Образующиеся при этом радикалы обладают бактериостатиче-ским действием в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, что позволяет ограничить использование в ветеринарии антибиотиков, а следовательно и появление антибиотикорезистентных штаммов патогенных микроорганизмов.

4. Проведено комплексное изучение препаратов и их растворителей на лабораторных животных (мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, дрозофилы). Показано отсутствие острой и хронической токсичности, сенсибилизирующего, местно-раздражающего, мутагенного, тератогенного, эмбриотокси-ческого, пнрогенного и аллергнзнрующего действия. Выявлено наличие у них противовирусных, антибактериальных, противовоспалительных и антипроли-феративных свойств.

5. Гистологические исследования фрагментов тканей лабораторных животных, получавших Витулин, при изучении хронической токсичности свидетельствуют о формировании в организме подопытных животных иммунного ответа по гуморальному типу.

6. Изучено влияние иммуномодулятора Витулин на организм облучённых животных. Установлено радиопротективное действие препарата, что является основанием для его применения в качестве профилактического и лечебного средства при лучевой болезни.

7. Тулимкар, содержащий 3-окси-флавон-силибин в концентрации свыше 35 масс%, тормозит лектинининдуцированный митогенез.

8. Проведены широкомасштабные испытания иммуномодулирующих препаратов Витулина и Витулина в сочетании с Тулимкаром на домашних животных. Установлены оптимальные дозы и схемы применения препаратов для активной неспецифической иммунопрофилактики респираторных вирусных болезней телят первого, второго и третьего возрастных критических периодов жизни, когда формирование иммунной системы ещё не завершено. Сохранность животных при их применении во время энзоотии респираторных вирусных болезней составила до 98,4%, в то время как при традиционно используемых методах профилактики - до 57,9%.

9. Препараты Витулин и Тулимкар, введённые в схему лечения телят, больных начальной и серозно-катаральной формами бронхопневмонии при респираторно-вирусной инфекции, способствуют клиническому выздоровлению животных без рецидивов и возможных осложнений при полном исключении антибиотиков и других антибактериальных препаратов.

10. Монотерапия животных, больных респираторными вирусными болезнями, с использованием иммуномодулирующих препаратов Витулина в сочетании с Тулимкаром, нормализует основные биохимические показатели, отражающие естественную резистентность организма. При биохимических исследованиях сыворотки крови у всех животных достоверно выявлено повышение бактерицидной и лизоцимной активности, увеличение концентрации общего белка, IgA, витамина А, установлена нормализация показателей глобулиновых фракций и уменьшение количества билирубина, холестерина, креатинина, мочевины. Полученные данные свидетельствуют о восстановлении обмена веществ, повышении гепатотропных свойств функции печени и иммунной защиты слизистых оболочек эпителия верхних дыхательных путей.

11. Иммуномодулирующие препараты серии Витулин обладают рядом уникальных свойств, по фармакологической активности и механизмам действия значительно отличаются от имеющихся иммунологически активных средств и являются высокоэффективными не только при профилактике и монотерапии респираторных болезней телят, обусловленных ассоциацией вирусно-бактериальных возбудителей, но и при инфекционно-вирусных и бактериальных болезнях собак - папилломатозе и стафилококкозе.

АКТ - ЗАКЛЮЧЕНИЕ о внедрении в производство иммуномодулирующих препаратов Витулин и Тулимкар для профилактики и лечения инфекционно-воспалительных процессов у мелких домашних животных.

Иммуномодулирующие препараты Витулин и Тулимкар разработаны на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО "Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины" (разработчики -доценты кафедры Тулева Н.П. и Тулев Ю.В.).

Препараты представляют собой безбелковые фракции специальных и экспрессных сортов пчелиного меда, полученного из нектара растений нескольких семейств: "Сложноцветные", "Астровые", "Барбарисовые".

Испытания препаратов проводили на базе городской ветеринарной клиники "Ветпрофи" с 2000 по 2004 г.г.

Витулин и Тулимкар использовали для лечения больных животных (собаки, кошки - в количестве 475 голов) с различными инфекционно-воспалительными процессами, доброкачественными и злокачественными опухолями. Обладая бактериостатическими и противовоспалительными свойствами, они с высоким положительным эффектом применялись для лечения больных животных с постоперационными осложнениями после проведения тяжёлых полостных операций, при инфекционнодеструктивных процессах в костной ткани, а также инфекционных болезнях.

При стафилококкозе собак, после двух курсов проведения монотерапии Витулином, положительный эффект наблюдался у 95% животных. В контрольной группе, где использовали антибиотики, он не превысил 53%.

Широко испытаны препараты при диссеминированном папилломатозе ротовой полости собак. Под действием Витулина и Тулимкара эти опухоли прекращали рост и процесс регрессии начинался в первые 3 ± 1 сутки. Под наблюдением находилось 25 собак, получен 100% положительный эффект

Мы считаем, что препараты Витулин и Тулимкар обладают выраженными противовоспалительными, антипролиферативными свойствами и являются высокоэффективными при инфекционно-воспалительных процессах, бактериальных болезнях собак и кошек, при хирургических операциях для предотвращения постоперационных осложнений, для быстрого восстановления организма при проведении тяжёлых полостных операций, при хирургическом вмешательстве по поводу удаления доброкачественных и злокачественных опухолей, инфекционно-деструктивных процессах в костной ткани и других.

Ветврач клиники

Д.К.Тошина

Ветврач клиники

Н.Ю.Клименко

Ветврач клиники

Л.В.Есина

ФГОУВПО «САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ»

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Тулева, Надежда Павловна, 2004 год

1. Эндогенные природные (цитокины);

2. Экзогенные природные (микроорганизмы и их компоненты);

3. Нриродные интерфероны: а) человеческий лейкоцитарный интерферон альфа-интерферон (виллферон, эгиферон); б) человеческий фибробластный интерферон (ферон); в) человеческий иммунный интерферон гамма-интерферон.

4. Качественная реакция на оксиметилфурфурол отрицательная. Механические примеси не допускаются. Признаки брожения не допускаются. Массовая доля олова не более 0,01%. Общая кислотность не более 4 см. Изучение общего анализа крови, биохимических, иммунологических показателей и эндогенного гамма-интерферона. Кровь получали стерильно из яремной вены и исследовали:

5. Общий анализ крови и форменные элементы: СОЭ скорость оседания эритроцитов (методом Панченкова). Содержание

7. Оборудование, материалы, реактивы: а) суточная культура Micrococcus lyzodeicticus; б) 0,5%-й раствор хлорида натрия; в) рН-метр (иономер); г) ФЭК с кюветами (рабочая длина 10 мм); д) пипетки стеклянные градуированные на 1 и 10 мм. 65

8. Нолученную стандартизированную бактериальную суспензию разливали в бактериологические пробирки по 4,5 мл и в них вносили исследуемые сыворотки крови телят, разведённые 1:

9. Контролем служила суспензия тест-культуры, внесённая в пробирки по 5 мл. 1.2.

10. Нсследуемые и контрольные пробы переносили в кюветы с рабочей длиной 10 мм и с помопц>ю ФЭК определяли процент светопропускания. 1.2.

11. Пробирки с исследуемыми и контрольными пробами помещали в термостат на 1 час, после чего вновь определяли процент светопропускания. 1.2.

12. Лизоцимную активность высчитывали по формуле: ЛА ЛА лизоцимная активность; До и Д1 оптическая плотность испытуемых проб до и после инкубации, соответственно; к константа, равная для сыворотки крови крупного рогатого скота 1,0.

13. Определение бактерицидной активности сыворотки крови Бактерицидную активность определяли фотонефелометрическим методом действия сывороток крови на тест-культуру (Смирнов П.Н. и др., 1989). Учёт проводили на основании изменений оптической плотности питательной среды при добавлении в неё исследуемых сывороток крови. 66

14. Замеры оптической плотности суспензии всех пробирок проводили дважды через 3 и 5 часов после начала реакции. Напряжённость бактерицидной активности сывороток крови рассчитывали по формуле: 67

15. Методы статистической обработки. Математическая обработка данных производилась с помощью программных пакетов StatSoft Statistica 6.0, SPSS 12 и NCSS Statistical and Data Analysis Software 2

16. Второй этап. Получение экспрессных сортов пчелиного мёда первого вида. Рис.

17. Третий этап. Получение экспрессных сортов пчелиного мёда второго вида. Рис. 7. 72

18. Пятый этап. Дополнительная биологическая очистка экспрессных сортов пчелиного мёда третьего вида. Рис.

19. Шестой этап. Получение безбелковых фракций экспрессных сортов пчелиного мёда третьего вида. Рис.

20. Седьмой этап. Стандартизация и предварительный контроль иммуномодулирующих препаратов серии Витулин перед промышленным выпуском. Рис.

21. Восьмой этап. Стерильная разливка на биокомбинате. Рис.

22. Девятый этап. Контроль изготовленных препаратов серии Витулин. Рис.

23. Технология получения натурального монофлёрного нчелиного мёда из нектара растений семейства Сложноцветные. Для получения натурального монофлёрного пчелиного мёда (фото 1) Фото

24. Рамка с монофлерным медом. 73

28. Цвет, прозрачность. Препарат должен быть прозрачным, с коричневатым оттенком. 2.РП. Показатель водородных ионов должен быть в пределах 4-5. 3. LD50 (Средняя летальная доза). Препарат не должен быть токсичным. 4. ТЦД50 (Титр цитопатического действия) Дегенерации клеток не должно быть.

29. Антимикробные свойства. 85

30. Индукция эндогенного гамма-интерферона. Препарат должен индуцировать эндогенный гамма-интерферон.

31. Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Контроль растворителей J» 1 и J» 2 оценивали по тем же показателям, что и препарат (индукцию эндогенного гамма-интерферона не определяли). Растворители должны отвечать следующим требованиям:

32. Цвет и прозрачность. Они должны быть прозрачными и иметь слегка желтоватый оттенок. 2. РН. Показатель водородных ионов должен быть в пределах 4-5. 3. ЛД50 (Средняя летальная доза). Растворители не должны быть токсичными. 4. ТЦЦ50 (Титр цитопатического действия). Цитопатического действия не должно быть.

33. Антимикробные свойства. Должно быть выявлено бактериостатическое действие в отношении условно-патогенных и патогенных грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов {Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Pasteurella multocida и др.).

34. Стерильность. Растворители должны быть стерильными. 86

35. Полисахариды >20 масс%. 2. 3-окси-флавон-силибин >30±5 масс%.

36. Флавоноловые агликоны >20 масс%.

37. Гликозид арбутин >10 масс%. 5. РП 4-5.

38. Цвет слабо коричневый.

39. Прозрачность прозрачный. 88