Разработка и оценка информативности нового способа детекции Ascaris lumbricoides при паразитарных заболеваниях у детей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Фархутдинова, Алсу Мансафовна
- Специальность ВАК РФ03.01.06
- Количество страниц 113
Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фархутдинова, Алсу Мансафовна
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. Методология диагностики аскаридоза (обзор литературы).
1.1. Современные представления об эпидемиологии, патогенезе и клинике аскаридоза. . Ю
1.2. Характеристика существующих методов диагностики аскаридоза
1.3. Перспективные методы диагностики аскаридоза. Метод молекулярной диагностики.
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Методология конструирования диагностической системы.
2.2. Характеристика методов, использованных для специфической детекции Ascaris lumbricoides.
2.3. Методы статистической обработки полученных данных.
ГЛАВА 3. Разработка тест-системы для ПНР детекции Ascaris lumbricoides.
ГЛАВА 4. Обоснование выбора оптимальной возрастной группы обследуемых для сравнительной оценки информативности разработанной тест-системы
ГЛАВА 5. Сравнительная оценка информативности лабораторных методов исследований, применяемых для обнаружения Ascaris lumbricoides.
5.1. Информативность при исследовании клинического материала.
5.2. Экспериментальные исследования с образцами почвы и воды
ГЛАВА 6. Клинические особенности подтвержденного методом ПЦР аскаридоза у детей.
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», 03.01.06 шифр ВАК
Аскаридоз у детей, совершенствование диагностики и лечения2004 год, кандидат медицинских наук Кадочникова, Галина Викторовна
Клинико-эпидемиологические особенности острых кишечных инфекций и кишечных нематодозов у детей2012 год, доктор медицинских наук Талабов, Махмадали Сайфович
Особенности проявления и коррекция микроэлементного дисбаланса у детей с аскаридозной инвазией2018 год, кандидат наук Лохматова, Ирина Анатольевна
Роль биотических и абиотических факторов в распространении Ascaris suum в Ульяновской области2000 год, кандидат биологических наук Губейдуллина, Зейтуня Менавировна
Пути и методы повышения эффективности диагностики нематодозов2000 год, кандидат биологических наук Гаевая, Эмма Анатольевна
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и оценка информативности нового способа детекции Ascaris lumbricoides при паразитарных заболеваниях у детей»
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Одной из основных составляющих состояния здоровья детского населения и взрослых являются протозоонозы и гельминто-зы, на долю которых приходится 99% всех паразитарных заболеваний [59]. По данным Комитета экспертов ВОЗ (2012), аскаридозом в мире ежегодно инфицируется свыше 1 млрд. человек, большинство из которых составляют дети дошкольного и школьного возраста. В Российской Федерации в 2004 году было зарегистрировано 66548 [85] человек. Особое значение при этом приобретают связанные с заболеванием осложнения (задержка физического развития, эпи-лептиформные состояния, токсико-аллергические реакции, а в тяжелых случаях - непроходимость кишечника и даже смерть от асфиксии) у детей.
Несмотря на продолжительный период внимания исследователей к указанной проблеме, реальных успехов в области лечения достичь не удалось. В этой связи наиболее эффективным способом борьбы с данной инвазией во всем мире считают раннюю диагностику заболевания. Однако общепризнанным фактом остается низкая чувствительность и специфичность применяемых в настоящее время методов (методов Като и Миура, методы обогащения (по Фюллеборну, Калантарян или Красильникову), информативных при овоскопии предварительно обогащенных проб больных с низкой интенсивностью инвазии или при диагностике поздних (хронических) стадий заболевания. Причем, даже у больных аскаридозом яйца гельминта не обнаруживаются при паразитировании особей одного пола (3-5%), неполовозрелых самок и старых самок, а также в ряде других случаев.
Ещё большей проблемой является диагностика аскаридоза в период ранней миграционной фазы заболевания, когда это наиболее востребовано клиницистами, поскольку позволяет начать специфическую терапию до появления осложнений заболевания. Для этого предложены рентгенологическая иденти-
фикация эозинофильных инфильтратов, мигрирующих в легочной ткани, а также иммунологические методы, однако, отношение к результатам их практического применения со стороны профессионального сообщества пока достаточно разноречивы [16].
В контексте вышеуказанного достаточно перспективным направлением представляется разработка способов диагностики аскаридоза на основании мо-лекулярно-генетических методов, в частности полимеразной цепной реакции, поскольку её отличает исключительно высокая чувствительность и специфичность, а с учетом небольших временных затрат, возможность использования в качестве экспресс-метода для детекции аскарид в различных клинических образцах и во внешней среде.
Целью исследования является конструирование тест-системы для детекции Ascaris lumbricoides в клиническом материале и сравнительная оценка информативности её практического применения для повышения эффективности лабораторной диагностики аскаридоза у детей на ранних стадиях заболевания.
Задачи исследования:
1. Анализ нуклеотидных последовательностей ДНК Ascaris lumbricoides, представленных в GenBank/DDBJ для выявления фрагментов, применимых в качестве ДНК-мишени и конструирования на этой основе тест-системы для их детекции методом ПЦР.
2. Разработка опытного образца тест-системы для полимеразной цепной реакции Ascaris lumbricoides в исследуемом материале.
3. Эпидемиологический анализ заболеваемости аскаридозом в Республике Башкортостан и обоснование выбора оптимальной возрастной группы обследуемых для адекватной сравнительной оценки информативности разработанной тест-системы и существующих способов прямого обнаружения Ascaris lumbricoides.
4. Сравнительная оценка информативности разработанной тест-системы для обнаружения Ascaris lumbricoides в клиническом материале (фекалии) и в объектах окружающей среды (почва, вода).
5. Составление практических рекомендаций по применению созданной тест-системы для диагностики аскаридозной инвазии и санитарно-паразитологического контроля объектов внешней среды на Ascaris lumbricoides.
Научная новизна. Впервые был проведен сравнительный анализ нук-леотидных последовательностей генов 18S рРНК Ascaris lumbricoides, Diphyl-lobothrium latum, Clonorchis sinensis, Echinococcus granulosus, Fasciola hepatica, Hymenolepis diminuta, Hymenolepis nana, Necator americanus, Opisthorchis viver-rini, Paragonimus westermani, Strongyloides stercoralis, Taenia solium, Trichinella spiralis. При этом были выявлены уникальные последовательности гена 18S рРНК Ascaris lumbricoides, не имевшие гомологии с нуклеотидными последовательностями указанных гельминтов, к которым были подобраны праймеры AscarFor и AscarRev для высокоспецифичной детекции и идентификации Ascaris lumbricoides на разных стадиях их развития.
Впервые создана тест-система для ранней диагностики кишечной стадии аскаридоза, основанная на обнаружении фрагментов гена 18S рРНК Ascaris lumbricoides. Обоснованы оптимальные условия для амплификации искомых фрагментов в различных клинических образцах от пациентов с различными клиническими вариантами аскаридоза, а также - в образцах объектов внешней среды.
Практическая значимость. На основании проведенных исследований предложена диагностическая система, обеспечивающая лабораторную диагностику аскаридоза на ранних стадиях заболевания, при которых специфическая детекция Ascaris lumbricoides рутинными методами проблематична.
Проведена сравнительная характеристика информативности способа специфической детекции Ascaris lumbricoides в клиническом материале на различных стадиях заболевания, определены основные показания к практическому использованию с учетом существующих методов лабораторной диагностики и накопленного при их использовании опыта.
Предложен алгоритм ранней лабораторной диагностики аскаридоза, обеспечивающий максимум диагностических данных при минимуме материальных и временных затрат.
Внедрение результатов исследования в практику. Результаты выполненной работы послужили основой патента на изобретение. Получен патент на изобретение РФ № 2424525 от 20.07.2011 на «Способ специфической детекции Ascaris lumbricoides в клиническом материале на различных стадиях заболевания».
Результаты исследований внедрены в учебный процесс и используются в учебной работе на кафедре фундаментальной и прикладной микробиологии, кафедре лабораторной диагностики института последипломного образования и на кафедре эпидемиологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Праймеры к фрагменту гена 18S рРНК Ascaris lumbricoides обеспечивают надежную специфическую амплификацию ампликонов Ascaris lumbricoides размером 489 пн при исследовании тотальной ДНК, выделенной из клинического материала (кал, отделяемое слизистых, кровь) и из объектов внешней среды.
2. Обоснована группа больных с аскаридозной инвазией, инфицирован-ность в которой характеризовалась наибольшими значениями, для адекватной сравнительной оценки информативности новых методов лабораторной диагностики аскаридоза, в том числе в будущих разработках.
3. «Способ специфической детекции Ascaris lumbricoides в клиническом материале на различных стадиях заболевания» (патент РФ № 2424525 от 20.07.2011) по информативности превосходит существующие методы диагностики аскаридоза и может применяться для раннего обнаружения Ascaris
lumbricoides (личинки, яйца) в клиническом материале вне зависимости от формы и фазы заболевания.
4. Выявление Ascaris lumbricoides с помощью ПЦР - может быть включена в официальный перечень методов диагностики аскаридоза и методов санитар-но-паразитологического контроля состояния объектов внешней среды (почва, вода), что позволит оптимизировать диагностическую подсистему эпидемиологического надзора за данной инвазией.
Апробация работы. Диссертация апробирована на совместном заседании кафедры фундаментальной и прикладной микробиологии и кафедры лабораторной диагностики института последипломного образования ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, протокол№11 от 29 июня 2012 г.
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на «Национальных лабораторных днях» (Москва, 2008); II Конгрессе педиатров стран СНГ «Ребенок и общество: проблемы здоровья, развития и питания» (Астана, 2010); 73-й итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2008), II Международной студенческой научной конференции с участием молодых ученых «Клинические и теоретические аспекты современной медицины» (Москва, 2010).
Публикации. Основные материалы диссертации в полном объеме отражены в 5 публикациях, в том числе в 3 рецензируемых изданиях, 1 статья - в другом издании, 1 - в материалах конференций. Получен патент на изобретение РФ (№ 2424525 от 20.07.2011 «Способ специфической детекции Ascaris lumbricoides в клиническом материале на различных стадиях заболевания»).
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 115 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, глава «Материалы и методы исследования», 5 глав
собственных исследований, заключение, выводы. Список литературы включает 220 источников, в том числе 111 отечественных и 109 зарубежных авторов.
Вклад автора. Диссертация представляет собой обобщение результатов исследований, полученных автором лично. Отдельные эксперименты выполнены совместно с сотрудниками ООО ИЦ «Лаборатория» (директор В.Р. Мав-зютов) при непосредственном участии автора.
ГЛАВА 1. МЕТОДОЛОГИЯ ДИАГНОСТИКИ АСКАРИДОЗА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ОБ ЭПИДЕМИОЛОГИИ, ПАТОГЕНЕЗЕ И КЛИНИКЕ АСКАРИДОЗА
Аскаридоз - геогельминтоз человека, вызываемый Ascaris lumbricoides, характеризуется аллергическим синдромом в ранней фазе, нарушением функций желудочно-кишечного тракта в поздней стадии. Аскаридоз известен со времен глубокой древности. Термин ascaridos ввел Гиппократ.
Гельминтоз широко распространен во влажных зонах умеренного, субтропического и тропического поясов, редко регистрируется в сухих степях, отсутствует в зоне вечной мерзлоты, высокогорья и пустынь. По данным комитета экспертов ВОЗ (2012), аскаридозом в мире ежегодно болеют от 1 до 1,5 млрд. человек, большинство из которых составляют дети дошкольного и школьного возраста [22, 134, 211]. Среди всех известных гельминтозов аскаридоз относится к числу наиболее распространённых паразитарных заболеваний [16, 56, 69, 93, 163]. В Африке и Юго-Восточной Азии аскаридозом поражено практически все население [92]. По данным Центра здоровья совместно с медицинскими университетами Исламской Республики Иран при обследовании 53995 человек в возрасте от 2 лет на долю Ascaris lumbricoides пришлось 1,5% из общего числа проведенных анализов [163].
В Российской Федерации ежегодно регистрируется около 1 млн. больных паразитарными болезнями, более 40 тыс. из них - дети (201 на 100 тыс. детского населения), и это число увеличивается. По экспертным оценкам истинное количество их может достигать 20 млн. человек, а больных нематодами
выявляется более 2 млн. [16, 67, 72, 79]. В 2004 году, в Российской Федерации, было зарегистрировано 66 548 случаев заболевания аскаридозом, что составляет более 25% от общего числа всех больных гельминтозами [11].
В странах ближнего зарубежья по данным медицинской статистики также отмечается рост числа паразитарных заболеваний, это связывают с низком уровнем благосостояния населения этих стран, а также климатическими условиями, благоприятными для распространения данной нозологии [5, 108]. Так, заболеваемость аскаридозом в Республике Кыргызстан с 2002 г. по 2007 г. выросла с 67,5 до 159,9 (на 100 тыс. населения), чему способствовали особые климатические условия этого региона. В течение года наблюдалось повышение заболеваемости аскаридозом в летне-осенний период. Максимальное выявление инвазированных путем исследований фекалий приходится на ноябрь-декабрь после окончания относительно теплого времени года, соответствующего периоду заражения аскаридами (апрель-октябрь) [106].
По данным Центра Госсанэпиднадзора в Республике Башкортостан за последние пять лет на долю больных аскаридозом приходится от 3,1 до 4,2% всех случаев больных гельминтозами. В течение 2003-2006 гг. в научно-исследовательской лаборатории «БиоЛаб» кафедры биологии Башкирского государственного медицинского университета проводилось обследование населения РБ на пораженность паразитарными болезнями с применением формалин - эфирного метода исследования фекалий. Из числа обследованных (1458 человек) аскаридоз выявлен в 3,9% случаев [61].
В формировании очагов инвазии основную роль играют неблагоприятные санитарно-бытовые условия [86], исследователи считают почву главным фактором передачи возбудителей аскаридоза. В сельских местностях, где все туалеты выгребного типа, санитарная культура низкая, домовладения неблагоприятно устроенные и обсемененность яйцами гельминтов выше, чем в городах [60, 85].
На долю инфицированных детей приходится 70% всех зарегистрированных случаев аскаридоза, заражение ребенка нематодами происходит фе-
кально-оральным путем (через рот) при непосредственном контакте с землей, песком (на даче, в песочнице), через загрязненные предметы (игрушки, одежду, обувь, постельное белье, пол), при употреблении в пищу растительную продукцию непосредственно с грядок, огородов (ягоды, овощи, фрукты), посредством насекомых (мух, тараканов, муравьев), при контактах с животными (собаки, кошки) [38].
Эпидемиологической особенностью аскаридоза является то, что это классический геогельмитоз, т.к. основным фактором передачи заболевания является земля. При попадании яиц в почву с фекалиями человека начинается их жизненный цикл, продолжительность которого зависит от температуры и влажности окружающей среды. В зоне умеренного климата сезон заражения длится до семи месяцев с апреля по октябрь, в условиях теплого влажного климата - круглый год [97, 114]. По данным литературы считается, что более благоприятны для развития аскариды почвы глинистые, черноземные и илистые, нежели песчаные и супесчаные, а именно в Республике Дагестан, Сахалинской, Томской областях, Республике Алтай, Приморском крае, Чеченской Республике, Кемеровской и Смоленской областях, Эвенкийском автономном округе, Тверской, Брянской и Псковской областях. Яйца аскарид, не закончивших развитие осенью, перезимовывают, и личинки в них становятся инвазионными весной[68]. Большинство яиц концентрируются на глубине 5-10 см и остаются там жизнеспособными свыше 5 лет, есть и такое мнение, что яйца аскарид - самые устойчивые к неблагоприятным факторам окружающей среды и могут выживать в почве более 10 лет [61, 116, 164]. Созревание яиц с развитием в них инвазионной личинки происходит в течение 12-14 суток в почве при температуре 16-28° С и влажности свыше 6% [166].
В исследованиях Токарева М.К. [209] установлено, что на территории Курской области развитие яиц аскарид в почве начинается с 2-3 декады апреля - 1 декады мая, когда почва прогревается до температуры выше +13°С, и заканчивается в 1-2 декаде сентября. Сроки развития яиц аскарид в почве зави-
сят от сезона и глубины попадания их в почву, не следует забывать и о техногенном влиянии загрязнения почвы в регионах Российской Федерации [209].
Наряду с почвой факторами передачи аскаридоза служат загрязненные зрелыми яйцами (личинками) аскарид продукты питания (овощи, фрукты, ягоды), которые попадают на них с почвой, где они сохраняются очень долгий период (более десяти лет) [58] и сырая питьевая вода, вода открытых водоемов. [24,106, 196, 210, 214]. Пораженность аскаридозом особенно высока в тех регионах, где удобряют почву огородов и садов необезвреженными фекалиями человека [62, 96].
Для начала инвазии необходимо попадание в организм зрелых (инвазионных) яиц алиментарным путем. В организме человека аскариды достигают половой зрелости через 2-3 месяца после заражения. Выделение яиц продолжается в течение нескольких месяцев (продолжительность жизни особи аскариды составляет 9-12 месяцев, но к 7-у месяцу овуляция заканчивается, и оплодотворенные яйца перестают выделяться). Таким образом, выделение яиц заканчивается еще до гибели самки. Максимальное число яиц выделяется на 5-6 месяце жизни самки. Одна особь продуцирует до 240 тысяч яиц в сутки [61, 70, 198]. Яйца дозревают в почве. Признаком инвазионного яйца является наличие в нем подвижной личинки. Новые гельминты имеют тенденцию не поселяться в кишечнике до тех пор, пока он не очиститься от старых особей. Следовательно, суперинвазии маловероятны, интенсивность инвазии (число особей в организме человека) является следствием одномоментного заражения. Это вполне объясняет снижение интенсивности инвазии на территории РФ в последние десятилетия [166].
Значение аскаридоза в патологии человека описано в многочисленных работах [25, 39, 47, 65, 66, 71, 79, 84, 85, 94, 96, 104]. Клиническая картина аскаридоза зависит от стадии развития паразита, числа одновременно мигрирующих личинок, количества взрослых особей, паразитирующих в кишечнике, их локализации, адаптационных резервов организма человека, наличия сопут-
ствующей хронической патологии и особенностями иммунного ответа [53, 65, 103, 104]. В развитии болезни выделяют две стадии: раннюю (миграционную, личиночную), которая обусловлена миграцией личинок и позднюю (кишечную), связанную с паразитированием аскарид в кишечнике и возможными осложнениями [23, 31, 193, 195]. В.Л. Гербильский, В.В. Богданович [94].и другие исследователи отмечали, что в миграционную стадию аскаридоза происходят те же патоморфологические процессы, что и при большинстве аллергических заболеваний: гиперемия ткани, отек и набухание соединительной ткани, гиперплазия мезенхимальных элементов, десквамация эпителия, эози-нофилия тканей и периферической крови [67, 69, 91, 92].
Степень и тяжесть повреждения тканей зависит от количества одновременно мигрирующих личинок и интенсивности предыдущих инвазий организма хозяина [90]. Максимов П.И. и Астафьев Б.А. [6, 61] описали изменения в организме при поражении аскаридозом, такие как, интерстициально-паренхиматозный гепатит, интерстициальная пневмония, мелкоочаговый кардиосклероз и др. [6, 61]. В отечественной литературе 60-х годов встречается описание легочного аскаридоза у человека [31]. Это заболевание развивалось, как правило, при интенсивной инвазии и сопровождалось тяжелыми поражениями легких. В настоящее время легочной аскаридоз с тяжелым течением встречается в тропических странах с низким социально-экономическим уровнем жизни [146, 174, 195, 202].
Начало аскаридоза характеризуется наличием интоксикации проявляющееся слабостью, недомоганием, присоединением сухого кашля с незначительным количеством слизистой мокроты, которая иногда приобретает оранжевую окраску и имеет примесь крови. Температура тела обычно нормальная или субфебрильная, резко поднимается до 38°С. В отдельных случаях возникает сухой или выпотной плеврит. В легких могут появляться альвеолярные экссудаты, перибронхиальное эозинофильные инфильтраты, бронхос-пазм с повышенной секрецией слизи [132, 146].
При объективном обследовании отмечаются сухие и скудные влажные хрипы, и обнаруживается укорочение перкуторного звука. Как правило, это наблюдается лишь при обширных, поверхностно расположенных инфильтратах пневмонического типа [76]. На рентгенограммах легких обнаруживаются округлые, овальные, звездчатые, фестончатые инфильтраты, которые могут быть как одиночными, так и множественными, появляться как в одной доле, так и по всему легкому. Контуры их расплывчатые, но при наличии сопутствующего ателектаза становятся ровными. Эозинофильные инфильтраты появляются на 3-7 день после заражения, достигают максимальных размеров и плотности на 2-й неделе и довольно быстро исчезают [23, 91].
В экспериментах на животных отмечалось увеличение печени в личиночную стадию аскаридоза, особенно выраженное при повторном заражении [130]. Подобный симптом описывается в работах некоторых отечественных и зарубежных авторов при аскаридозе у людей [120, 135, 167, 168, 170, 187]. Бе-киш О.Л., Логишинец И.А. [72, 74]. проводили исследования на крысах и доказали, что миграция личинок аскарид вызывает изменения функциональной активности тиреоидного комплекса как на гипофизарном, так и на периферическом уровнях. Это проявляется в снижении уровня тиреотропного гормона гипофиза и гормонов щитовидной железы на 20-^0% уже с 7-го дня инвазии. Степень выраженности гормональных перестроек в организме хозяина зависит от количества инвазионных личинок. Чем больше интенсивность инвазии, тем выраженное угнетение секреции тиреотропного гормона, трийодтиронина и тироксина, и более медленное возвращение показателей к норме [72, 74].
Токсико-аллергическое действие личинок проявляется в возникновении зуда кожи и появлении уртикарных высыпаний в виде крапивницы или мелких пузырьков с прозрачным содержимым на кистях и стопах [52, 53]. В последнее время чаще стали описываться такие симптомы, как отек пальцев рук и лица, исчезающие спонтанно через несколько дней [90, 91]. Иногда, зуд и сыпь на коже являются единственными клиническими проявлениями, связанные с этой
стадией развития заболевания [203]. Интересен факт, что у инфицированных аскаридами лиц, вырабатывающих ^Е-антитела к аскаридным антигенам, тяжелые анафилактические реакции встречаются относительно редко. И, наоборот, часто описываются случаи, когда у лаборантов, работающих с аллергенами аскарид, появлялись бронхоспазм, ангионевротический отек и крапивница [91, 175, 189, 203,210].
Иммунитет при аскаридозе характеризуется относительно слабой степенью напряженности, особенно при однократном заражении, коротким сроком действия, и зависимостью интенсивности иммунного ответа от числа гельминтов, одновременно паразитирующих в организме [68, 120, 131, 152]. Результаты небольшого числа работ, как отечественных, так и зарубежных авторов, выполненных на лабораторных животных, показали, что под воздействием антигенов личинок аскарид, вырабатывается та или иная степень сопротивляемости, ограничивающая интенсивность последующего заражения [12, 45, 175]. Анализ имеющихся данных показал, что напряженность иммунитета выше в личиночную стадию, чем в период паразитирования взрослых червей [1, 12, 67, 69]. Иммунизирующая активность личинок наиболее выражена в период линьки, когда происходит выделение большого количества секретов, обладающих антигенными свойствами[18, 44, 61]. В качестве проявления иммунитета к аскаридам В.И. Зорихина и В.А. Гефтер [31, 51, 62, 72]. показали, что у повторно зараженных людей отмечается преждевременная гибель паразитов или выделение их на ранних стадиях развития, в связи с чем, число случаев личиночного аскаридоза значительно превышает случаи кишечной фазы инвазии [114]. Эозинофилия в крови может достигать высокого уровня - 60-80% [31, 51, 62, 72]. По данным ряда исследователей, у больных со слабой и средней интенсивностью инвазии это случается редко, и уровень эозинофилов колеблется в пределах 10-30% [55, 90].
Экспериментальное исследование сывороточных иммуноглобулинов у мышей показало значительное повышение с 8-го по 25-й день инвазии
с последующим снижением, увеличение в течение 5-и недель с максимальной концентрацией к 25 дню и резкое его снижение в кишечную стадию. Повышение ^А было не значительное [45, 72].
Кишечная стадия аскаридоза характеризуется паразитированием червей в кишечнике. Начало этого периода определить трудно, так как молодые самки еще не откладывают яиц. Однако клинические проявления очень разнообразны и связаны с токсическим (выделяемый аскаридой полипептид аскарон наряду с аллергическим воздействием оказывает токсическое на ЦНС) и механическим действием паразитов [28, 31, 37, 47, 80, 82]. Токсины рефлекторно раздражают рецепторы кишечника и через центральную нервную систему вызывают ряд нарушений в различных органах: секреторные расстройства желудка, рефлекторный спазм кишечника, дисфункциональные расстройства билиарного тракта и поджелудочной железы [28, 31, 37, 47, 80, 82]. Необходимо отметить, что у ряда пациентов отмечается бессимптомное носительство [24, 99, 105, 156].
М.Н. Лебедева и Ф.С. Михайлицина при обследовании больных с аскаридозом установили патологию органов пищеварения у 28% обследуемых [66]. Кишечная стадия аскаридоза характеризуется неспецифическими жалобами, характерными для большинства глистных инвазий: нарушение аппетита, неустойчивый стул, метеоризм, тошноту и рвоту. По данным литературы, эти жалобы отмечаются у 62% больных [54, 55]. Болевой абдоминальный синдром является самым частым и составляет от 40 до 80% [31, 141, 142]. В исследованиях последних лет, при аскаридозе описываются «летучие боли», которые возникают независимо от приема пищи, периодически, не имеют конкретной локализации и проходят самостоятельно [140]. Иногда болевой синдром имеет постоянный характер, часто появляется после еды и купируется только с помощью медикаментов [116, 134]. У некоторых пациентов боли в животе настолько интенсивные, что требуют госпитализации для исключения острой хирургической патологии [55, 128, 206]. Иногда аскаридоз может симулировать хронический энтероколит, аппендицит, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки [181, 194, 198, 199, 204].
Аскариды питаются переваренной пищей хозяина и шелушащимися клетками эпителия кишечника, лишая организм человека таких пищевых ферментов, как амилаза, протеаза, липаза и др. При этом нарушается процесс нормального пищеварения и всасывания, что нередко приводит к нарушению физического развития детей, полигиповитаминозу и дефицитным состояниям у взрослых [172, 174, 178].
При осмотре у 35-40% больных отмечается обложенность языка, иногда он отечен, на боковых поверхностях видны отпечатки зубов, налет имеет беловатый или светло-серый оттенок и покрывает центр спинки языка, по краям и на кончике языка имеется много гипертрофированных грибовидных сосочков, лишенных налета [55]. При пальпации живота характерна болезненность в эпигастральной или околопупочной области [80, 90, 122, 123]. У большинства больных выявляются положительные симптомы Ортнера, Мюсси, что характеризует воспалительные процессы в желчевыделительной системе [83, 119, 193]. Иногда отмечается болезненность в низу живота и правой подвздошной области [143, 155, 182, 187].
При инвазии аскаридами часто наблюдается поражение нервной системы. У маленьких детей описаны случаи эпилептиформных судорог и явления менингизма [31, 165]. При тяжелой инвазии аскаридоз может симулировать туберкулезный менингит, энцефалит, эпилепсию и ряд других заболеваний [31]. В некоторых случаях отмечаются изменения со стороны глаз: расширение зрачков, анизокория, амблиопия, светобоязнь [47]. Нарушение сна (беспокойное засыпание, кошмарные сновидения, вскрикивания, постанывания) отмечают у 45-54% больных [55]. Проблемы с засыпанием и ночным сном -важный симптом глистной инвазии, так как известно, что нематоды активизируются ночью [31, 53, 61].
При ослабленной функции кишечно-печеночного барьера аскаридные токсины могут проникать в общую циркуляцию и вызывать характерные симптомы хронической интоксикации: повышенную утомляемость, слабость,
субфебрильную лихорадку, раздражительность, головные боли, головокружение, бледность кожных покровов, гиперсаливацию, изменения со стороны сердечно-сосудистой системы в виде снижения АД и появления функционального систолического шума на верхушке сердца [85, 89, 108, 109, 113, 130, 143, 155].
Бруксизм - «скрежетание зубами», симптом, который часто связывают с глистными инвазиями, по мнению современных ученых, является неспецифическим признаком хронической интоксикации центральной нервной системы и отмечается у 10-17% больных [55].
Аллергические проявления при кишечном аскаридозе наблюдаются в виде атопического дерматита, нейродермита, пищевой аллергии и отмечаются у 20-30% больных [45, 52, 67, 91, 92, 203]. Они так же утяжеляют течение таких заболеваний, как псориаз, экзема, бронхиальная астма [107, 210]. Э.Л. Щенников, М.В. Куропатенко, H.A. Безушкина обратили внимание на увеличение числа инвазированных гельминтами детей среди больных бронхиальной астмой [63, 132]. Lynch N.R. (1997), Weiss S.T и другие зарубежные ученые так же отмечают роль кишечного аскаридоза, как этиологического фактора при возникновении бронхиальной астмы [175, 203, 210].
При аскаридозе отмечаются ослабления иммунитета, что проявляется частыми простудными заболеваниями, рецидивирующими стоматитами, гингивитами, рецидивирующими гнойными заболеваниями кожи и слизистых [39, 67]. Исследования последних лет показали, что аскаридоз приводит к снижению поствакцинального иммунитета [18, 77].
Изменения в анализах крови при кишечном аскаридозе выявляются далеко не у всех пациентов, и характеризуются нормальным или слегка повышенным количеством лейкоцитов. Уровень эозинофилии обычно не превышает 20%. СОЭ умеренно повышенное, но чаще находится в пределах нормы. Часто отмечается гипохромная или нормохромная анемия [18, 23, 92, 109, 164, 169, 174, 192, 196, 197].
Инвазия нематодами увеличивает активность АЛТ и АСТ сыворотки крови в 1,5-2 раза. Изменения уровня билирубина сыворотки крови и его фракций, сулемовой и тимоловой проб не выявлены [18]. В иммунограмме больных с кишечной стадией аскаридоза при изучении основных классов иммуноглобулинов было обнаружено значительное увеличение концентрации ^ А до 8,09 г/л при норме 1,78 г/л, ^ М до 6,0 г/л при норме 0,92 г/ и резкое угнетение ^О до 8,8 г/л при норме 17,54 г/л. [18].
Показатели фагоцитарного индекса и фагоцитарное число имеют тенденцию к снижению. При анализе сывороточных ЦИК у больных аскаридозом отмечается значительное их превышение (75,58 ед. оптич. пл.) по сравнению с контрольной группой (33,7 ед. оптич. пл.) [18, 68, 91, 189].
Исследования, проведенные в Индии и Колумбии, показали, что у зараженных аскаридами пациентов повышается экскреция азота, жиров и ксилозы с калом, что проявляется стеатореей [162, 176, 193].
Аскариды, проникая в организм человека, обладают потенциальной способностью нарушать микроэкологическое равновесие в просвете кишечника и вызывать дисбаланс микробной флоры [52, 53, 56, 77]. Исследования микробиоценоза кишечника при гельминтозах проводились в основном в 70-80-х годах [78, 117]. За последнее время опубликован ряд новых научных трудов, касающихся этой проблемы при аскаридозе [52, 56, 106, 117, 121, 122]. По данным Копанева Ю.А. нарушение микробиоценоза кишечника имеется у 78% больных и характеризуется уменьшением кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью в 2 и более раза, увеличение кишечной палочки со сниженной ферментативной активностью, присутствие повышенного количества кокковой флоры, снижение уровня мол очно-кислых бактерий [31, 32].
Стефанская А.Ф. и другие авторы отмечают понижение желудочной секреции более чем у 50% больных аскаридозом [77, 116, 176].
Таким образом, аскаридоз относится к числу самых распространенных гельминтозов на территории Российской Федерации, клинические проявления
и патогенетические факторы болезни многочисленны и неспецифичны. Полиморфизм клинических проявлений заболевания вызывает определенные трудности, как в диагностике, так и в дифференциальной диагностике у врачей поликлинического звена и стационаров, что обосновывает совершенствование лабораторной диагностики аскаридоза.
1.2. ХАРАКТЕРИСТИКА СУЩЕСТВУЮЩИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ АСКАРИДОЗА
Разработке методов лабораторной диагностики гельминтозов уделяли внимание еще в конце XIX века, что обусловлено часто стертой и неспецифичной клинической картиной, варьирующей в зависимости от стадии аскаридоза [58].
Для диагностики личиночной (миграционной) стадии аскаридоза применяется исследование мокроты - патологического отделяемого дыхательных путей. Мокроту просматривают методом нативного мазка, Иногда находящиеся в ней личинки, размером 2,0-2,3 мм видны визуально. По данным различных авторов, такие находки очень редки, и обнаружение яиц и личинок аскарид в мокроте часто носит случайный характер. В середине прошлого столетия, в 1955 году советский учёный-биолог Кротов А.И. предложил применить реакцию оседания эритроцитов с антигеном из аскарид для выявления ранних стадий аскаридоза [47]. Несмотря на очевидную простоту, данное открытие не получило широкого распространения в научных кругах. Лейкина Е.С. в своих работах по выявлению ранней стадии аскаридоза разработала реакцию преципитации и опубликовала работу в 1956 году (Е.С. Лейкина и О.И. Полякова) о применении реакции преципитации с антигеном, адсорбированном на кармане.
Наиболее сложна лабораторная диагностика миграционной стадии аскаридоза, которая к большому сожалению, нередко упускается в связи со скуд-
ностью клинических проявлений, особенно у детей в связи субклиническим, латентным течением [70].
Первые работы по исследованию яиц аскарид принадлежат советскому учёному Завадовскому A.A., который ещё в 1914 году выявил при микроскопическом исследовании аскарид пять оболочек в их строении. Среди первых отечественных учёных, которые занимались исследованием данных гельминтов можно отметить Скрябина К.И., Шихобалову K.M. [108]. Известный советский зоолог Парамонов A.A. впервые выделил нематоды в отдельный класс -круглые черви, насчитывающий около 500 видов [108].
Трудности непосредственно лабораторной диагностики гельминтозов связаны с особенностями их жизненного цикла. У всех нематод имеется личиночная фаза от 1 до 6 месяцев, когда яйца они еще не откладывают, поэтому в ходе лабораторной диагностики их не обнаруживают. Яйцекладки могут происходить нерегулярно, с интервалом от 1 до 14 дней и в относительно не-
3 5
больших количествах (10-10- , при том что они находятся в окружении бакте-
8 12
рий, частиц пищи и прочего, измеряющегося числами 10-10 ). Соответственно, чтобы обнаружить яйца гельминтов в фекалиях, нужно зафиксировать период зрелости. Для этого необходимо стечение целого ряда обстоятельств (время, оптимальный исследуемый материал и др.). При этом вероятность выявления гельминтов составляет от 0 до 10-20%, и практически не зависит от возможностей лаборатории [69].
Первостепенную роль в подтверждении диагнозов паразитозов играют исследования, выполненные на высоком профессиональном уровне, в лабораториях, обеспеченных материально технической базой, использующие разнообразные высокоэффективные методы исследований [29]. Диагноз аскаридоз ставится только при получении положительных результатов лабораторного паразитологического обследования пациента [4]. Однако отрицательное ово-скопическое заключение далеко не всегда позволяет исключить наличие аскарид [95]. Известно, что выявляемость гельминтозов при однократном исследо-
вании при условии соблюдения всех технических требований по сбору, транспортировке и методике исследования составляет лишь 60% случаев, этим обусловлена необходимость проведения исследования не менее трех раз [23]. Выбор наиболее эффективного метода исследований зависит от возможной стадии развития гельминта.
Наиболее простым способом является макроскопическое исследование, направленное на поиск взрослых особей. Чувствительность исследования удается повысить методом отмучивания, заключающийся в просмотре разжиженных фекалий в чашках Петри. Поиск зрелой особи гельминта осуществляется визуально, при необходимости используется лупа [90].
В кишечную фазу инвазии после достижения аскаридами половой зрелости, когда самки ежедневно откладывает более 200000 яиц, распознавание аскаридоза существенно облегчается [71]. При этом проводят исследование фекалий для обнаружения яиц аскарид. Выявляются большие (60x50 мкм) коричневые пятислойные яйца [108]. В тех случаях, когда яйца оплодотворены, их поверхность становится шероховатой за счет мукополисахаридов [25]. Основным методом обнаружения яиц аскаридов в фекалиях является микроскопия нативного препарата. Однако, при слабой интенсивности инвазии чувствительность нативного мазка в отношении обнаружения яиц гельминтов недостаточно высокая. [5].
При небольшом количестве яиц аскарид в испражнениях диагноз аскаридоз не является полноценным и достоверным. В этом случае для постановки диагноза в лабораториях используются копроовоскопический метод Като [8]. Метод Като, основан на обнаружении яиц гельминтов в просветленном глицерином и подкрашенном малахитовым зеленым толстом мазке фекалий. Исследование проб фекалий в мазках любого типа не всегда достаточно эффективно из-за низкой численности яиц в исследуемом материале [109] и непостоянства их выделения из кишечника, и поэтому дополнительно, как правило, проводится обогащение [37].
В качестве методов обогащения наиболее широко используются флотационные методы Фюллеборна и Калантарян [61]. Фекалии суспендируются во флотационном растворе, имеющем больший удельный вес, нежели яйца гельминтов. Последние, всплывая в поверхностную пленку, обнаруживаются при исследовании под микроскопом. Максимальное число яиц аскарид обнаруживается при экспозиции 2-3 часа. Яйца аскарид сложно обнаружить в цельных испражнениях, так как в кишечнике паразитируют только самцы или только самки, у которых уже прекратилась овуляция [114]. Чаще в качестве исследуемого материала используется копрофильтрат пациента [23]. Исследование информативно при достижении гельминтами стадии половой зрелости и наличии в организме больного достаточно большого количества мужских и женских (либо только женских) особей или перед естественной смертью паразита [69]. Эффективность обогащения также варьирует в широких пределах. Так при использовании метода Фюллеборна плохо обнаруживаются неоплодотворенные яйца аскарид, которые лучше выявляются при использовании метода Калантарян.
Эффективность лабораторной диагностики аскаридоза может быть существенно повышена при использовании иммунологических методов, поскольку при паразитарных инвазиях в подавляющем большинстве случаев имеет место формирование нестерильного иммунитета. При аскаридозе у человека синтезируются специфические иммуноглобулины различных классов. Однако гуморальный иммунный ответ на заражение Ascaris lumbricoides, как считают некоторые исследователи, отражает только интенсивность инвазии и не включает протективных механизмов. Другие авторы полагают, что пациент, имеющий антитела к антигенам аскарид, в некоторой степени защищен от последующего реинвазирования данными гельминтами [154, 177]. По мнению третьей группы исследователей, такие антитела только косвенно участвуют в воспалительных процессах, характерных для аскаридоза [55].
Несмотря на вышеуказанное на протяжении уже нескольких десятилетий сохраняется неоднозначное отношение профессионального сообщества к серо-
диагностике этой инвазии. В частности некоторые исследователи полагают, что серологические реакции к антигенам личинок разработаны, но они еще далеки от совершенства, Другие скептическое отношение к иммунодиагностике аскаридоза обосновывают коротким периодом присутствия антител к аскарид-ным антигенам в организме хозяина [58].
Ранее для выявления антител к антигенам аскарид применяли такие методы, как: реакция непрямой гемагглютинации, микропреципитация на личинках, двойная иммунодиффузия в геле и иммуноэлектрофорез. В настоящее время наиболее эффективным методом определения специфических антител, несомненно, является иммуноферментный анализ (ИФА), который широко используется в большинстве лабораторий для серодиагностики инфекционных заболеваний различной этиологии. Опубликованы результаты исследований, показывающие, что тестирование сыворотки крови методом ИФА, в отличие от копро-овоскопии, позволяет выявить ранние, личиночные стадии аскаридоза. Так, при обследовании 260 детей, с симптомами, характерными для инвазии Ascaris lumbricoides, с использованием различных вариантов метода овоскопии яйца аскарид не были обнаружены ни у одного ребенка, тогда как с помощью ИФА удалось определить специфические иммуноглобулины класса G (IgG) в 15% случаях в [71]. Тем не менее, при кишечной стадии аскаридоза, когда концентрация антител значительно снижается, диагностика заболевания с использованием иммуноферментного анализа не всегда бывает успешной.
Имеющийся опыт серодиагностики аскаридоза показывает, что определение антител в крови к нематодам актуально преимущественно первые 1-2 месяца их присутствия в организме, когда гельминты находятся в личиночной стадии. Затем антитела исчезают из системного кровотока, сосредотачиваясь в просвете кишечника и вырабатываясь непосредственно в кишечной стенке. Определять уровень иммуноглобулинов в просвете ЖКТ для диагностики кишечных гель-минтозов пока не удается, несмотря на то, что в настоящее время ведутся исследования в этом направлении. Сейчас же гельминтозы являются одной из самых плохо диагностируемых болезней - лабораторными методами [69].
Несмотря на то, что роль антител к антигенам Ascaris lumbricoides еще вызывают дискуссию, их определение в комплексе с другими методами все шире начинает использоваться для более эффективной лабораторной диагностики аскаридоза, а также с целью проведения эпидемиологических исследований. Серологический анализ в комплексе с данными анамнеза и учетом клинической симптоматики пациента существенно повысили эффективность лабораторной диагностики аскаридозной инвазии на ранних стадиях [86].
1.3. ПЕРСПЕКТИВНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
АСКАРИДОЗА. МЕТОД МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
На сегодняшний день, всемирно признанными и занимающими лидирующее место в алгоритмах обследования пациентов являются методы молекулярной диагностики. Среди существующих методов молекулярной диагностики наиболее распространен ПЦР-анализ, позволяющий определять генетический материал любого микроорганизма в пробе пациента и оценивать его количество. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - это метод лабораторной диагностики, направленный на выявление генов возбудителей инфекционных заболеваний. Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрел в 1983 году Кэри Мюллис (американский ученый). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является одним из самых точных и чувствительных методов верификации инфекционных заболеваний. ПЦР - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекционных болезней «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя [30].
Таким образом, на сегодняшний день лабораторная диагностика аскаридоза имеет ряд трудностей, которые связаны как с субъективными, так и с объективными причинами. Существующие проблемы не позволяют правильно оценить распространенность заболевания, так и своевременно поставить диагноз. В доступной нам литературе мы не нашли сведений о разработке и использовании в диагностике аскаридоза молекулярно-биологических методов исследования. В связи, с чем является весьма актуальным разработка тест-систем с использование молекулярно-биологических методов исследования. Таким способом диагностирования гельминтозов является применение высокочувствительного молекулярно биологического метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), ПЦР - это метод, который позволяет найти в исследуемом клиническом материале небольшой участок генетической информации любого организма среди огромного количества других участков и многократно размножить его. Данный метод основан на принципе естественной репликации ДНК, включающем расплетение двойной спирали ДНК, расхождение нитей ДНК и комплиментарное дополнение обеих. Репликация ДНК может начаться не в любой точке, а только в определенных стартовых блоках - коротких двунитевых участках. Суть метода заключается в том, что маркировав такими блоками специфический только для данного вида (но не для других видов) участок ДНК, можно многократно воспроизвести (амплифицировать) именно этот участок.
Полимеразная цепная реакция в настоящее время является наиболее совершенным диагностическим методом, позволяющим выявлять единичные клетки возбудителя многих инфекционных заболеваний за счет многократного увеличения количества копий тестируемых специфических последовательностей ДНК. Тест-системы, основанные на принципе амплификации ДНК, позволяют обнаруживать клетки патогена человека даже в тех случаях, когда другими способами (иммунологическим, микроскопическим) их выявление невозможно.
Это преимущество достигается за счет высокой чувствительности ПЦР-системы, которая составляет около 10 клеток патогена. ПЦР-диагностикумы,
в отличие от иммунологических тест-систем, позволяют избежать проблем, связанных с перекрестно-реагирующими антигенами, тем самым обеспечивая абсолютную специфичность.
К достоинствам метода можно отнести следующие его свойства:
- метод прямой и позволяет достичь предельно возможной чувствительности: от нескольких до одной клетки возбудителя в пробе;
- специфичность метода равна 100%;
- для ПЦР - анализа пригоден любой материал, в том числе и гистологические препараты;
- количество исследуемого материала, как правило, составляет несколько десятков микролитров, но при низкой концентрации возбудителя может быть увеличена в сотни и тысячи раз за счет экстракции ДНК;
- исследуемый материал может быть дезинфицирован химической или термической обработкой в момент его забора, и, следовательно, исключается возможность инфицирования персонала в процессе проведения ПЦР;
- простота исполнения и возможность полной автоматизации;
Метод ПЦР имеет большое количество различных модификаций. Говоря о ПЦР, нельзя не упомянуть о полимеразной цепной реакции в реальном времени (Real-Time PCR). Принципиальной особенностью полимеразной цепной реакции в реальном времени [141] является возможность детекции накопления продуктов амплификации непосредственно во время проведения амплификации. Так как кинетика накопления ампликонов напрямую зависит от числа копий исследуемой матрицы, это позволяет проводить количественные измерения ДНК и РНК инфекционных агентов [141]. Полученная информация может быть использована для проведения мониторинга эффективности проводимой терапии, оценки клинического прогноза. В отличие от других методов количественного определения ДНК матрицы в пробе, ПЦР в реальном времени не требует дополнительных манипуляций, связанных с раститровкой ДНК исследуемой пробы или полученных в ходе ПЦР ампли-
конов, которые усложняют постановку анализа и могут приводить к появлению ложноположительных результатов.
В диагностике гельминтозов с применением метода ПЦР в качестве мишени довольно часто применяется гены рибосомальных РНК и разделяющие их транскрибируемые спейсеры. Выбор именно этих генов обусловлен, прежде всего, доступностью огромных массивов данных о структуре генов рРНК у самых разнообразных организмов. Гены рРНК соответствуют ряду требований, которым должны удовлетворять молекулярные филогенетические маркеры:
1. присутствуют у всех представителей исследуемой группы родственных организмов;
2. происходят от общего предка и функционально постоянны;
3. генетически стабильны, т. е. относятся к так называемым генам «домашнего хозяйства» (housekeeping genes), обеспечивающим основу жизнедеятельности клетки. В генах рРНК чередуются константные (консервативные), а также высоко вариабельные области. Поэтому ген 16S рРНК является удобным и информативным маркером для изучения филогенетического родства между организмами, поскольку он имеет высококонсервативные и вариабельные участки.
Подтверждением этого является работа Пексона с соавторами [197], посвященная разработке количественного ПЦР в реальном времени с использованием в качестве мишени региона первого межгенного спейсера рибосомаль-ной ДНК для определения количества общего и жизнеспособных яиц аскариды в сточных водах. В следующей работе [210] авторами статьи метод амплификации генов 18S и 28S рибосомальной и дальнейшее секвенирование ПЦР продуктов был применен для видового определения паразитов на камнях в желчных протоках.
В диагностике гельминтозов с применением ПЦР «тонкими местами» являются низкая обсемененность материала, и трудности связанные с выделением ДНК, т. к. в основном материалом является каловая масса, которая содержит большое количество всевозможных ингибиторов реакции амплификации. Тем
не менее, работы направленные на преодоление данных трудностей ведутся, и порой со значительным успехом. Можно, например, отметить работу, посвященную использованию гнездовой ПЦР (Nested PCR) для увеличения чувствительности, благодаря которой было достигнуто возможность детектирования двух яиц Taenia solium в образце со 100% специфичностью [149]. Также работы ведутся и в направлении разработки новых методик выделения очищенной от ингибиторов ДНК. Одной из таких работ является работа Даенгаи с соавторами [120], где исследователи разработали новый метод выделения ДНК с применением СТАВ, позволяющий существенно снизить количество ингибиторов в ДНК препарате. Это дало возможность повысить чувствительность ПЦР анализа описторхоза с 44,8 до 79,3%.Применение ПЦР в диагностике гельминтозов является перспективным, и в последнее время сильно развивающимся направлением. Относительная дешевизна и высокая специфичность данного метода по сравнению с ИФА делает его весьма привлекательным способом диагностики данной болезни. В патогенезе аскаридоза выделяют 2 основные фазы: раннюю -миграционную (личиночную) и позднюю - кишечную. Среди них наиболее патогенетически значимой является ранняя стадия, которая сопровождается сенсибилизацией макроорганизма продуктами жизнедеятельности личинок Ascaris lumbricoides в процессе их миграции. Основным презентируемым гельминтом антигенным комплексом являются молекулы гликопротеина ES-62, содержащего фосфорилхолин. Однако сила иммунного ответа, впрочем, как степень и тяжесть тканевых повреждений во многом определяются количеством одновременно мигрирующих личинок Ascaris lumbricoides и особенностями иммунного статуса (сенсибилизация макроорганизма, возрастные, профессиональные и другие) конкретного пациента. В силу указанного выявление специфических иммуноглобулинов с помощью иммуноферментного метода (ИФА) не всегда является достаточно информативным.
В этой связи наиболее перспективной представляется высокочувствительная детекция видоспецифических фрагментов нуклеиновых кислот возбу-
дителя при использовании молекулярно-генетических методов, поскольку позволяет выявлять специфические фрагменты даже мертвых особей гельминта вне зависимости от фазы его развития. Учитывая очевидность указанного на начальных этапах исследования нами был проведен поиск такого рода разработок на основании анализа соответствующих литературных данных. Указанное было блестяще подтверждено в работах 181^а1а К. е1 а1. (2004) в ходе сик-венса рибосомальной ДНК, однако, для этих целей использовался гомогенат исследуемой печеночной ткани, что для широкого использования в лабораторной диагностике неприменимо. В связи с вышеуказанным перед нами встала задача создания такой диагностической системы, которая бы совместила чувствительность ПЦР, специфичность ИФА и неинвазивность овоскопии.
Похожие диссертационные работы по специальности «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», 03.01.06 шифр ВАК
Оценка влияния климатических факторов на риск заражения аскаридозом в России2019 год, кандидат наук Турбабина Наталья Александровна
Ларвальный токсокароз человека в Литовской ССР (Сероэпидемиологические исследования)1983 год, Байоринене, Дануте-Янина Вацлавовна
Экологические особенности возбудителя аскаридоза в условиях воздействия техногенных и аномальных природных факторов: на примере Курской области2007 год, кандидат биологических наук Токарева, Марина Константиновна
Описторхоз плотоядных животных в условиях Западной Сибири: распространение, патогенез, диагностика, меры борьбы2013 год, кандидат ветеринарных наук Шибитов, Самат Карабаевич
Клинико – генетическое исследование аскаридоза в Республике Башкортостан2010 год, кандидат медицинских наук МУРЗАГАЛЕЕВА, ЛИРА ВАЛЕРЬЕВНА
Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Фархутдинова, Алсу Мансафовна
выводы
1. Амплификация фрагмента 18S рРНК Ascaris lumbricoides обеспечивает специфическую детекцию Ascaris lumbricoides в клиническом материале у пациентов на различных стадиях заболевания и может использоваться в качестве соответствующего способа диагностики аскаридоза.
2. В отличие от клинико-эпидемиологического, иммунологического и микроскопического методов, полимеразная цепная реакция Ascaris lumbricoides позволяет выявлять и идентифицировать паразитов в клиническом материале в концентрации минимум - 5-8 клеток особи Ascaris lumbricoides в образце.
3. В формировании заболеваемости аскаридозом наиболее интенсивно участвует детское население с максимально равным вовлечением в эпидемический процесс детей в возрасте 1-2 и 3-6 лет с кишечной стадией инвазии. У детей больных аскаридозом, диагносцированным при использовании ПЦР основными клиническими проявлениями кишечной стадии являлась общая интоксикация: слабость - 115 (55%), поражение желудочно-кишечного тракта 82 - (39%) и аллергический синдром - 78 (37%).
4. «Способ специфической детекции Ascaris lumbricoides в клиническом материале на различных стадиях заболевания» (патент РФ № 2424525 от 20.07.2011) информативен в различные фазы заболевания (ранний период, хро-низация), что подтверждается чувствительностью исследования 93,8% и специфичностью - 100%. Результаты исследования надежно коррелируют с данными применяемых методов и обеспечивают однозначность их интерпретации.
5. Полимеразная цепная реакция может быть использована для санитар-но-паразитологического контроля за санитарным состоянием объектов внешней среды (почва, вода).
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. На основании проведенных исследований предложена диагностическая система, обеспечивающая лабораторную диагностику аскаридоза на ранних стадиях заболевания, при которых специфическая детекция Ascaris lumbricoides рутинными методами проблематична.
2. Способ специфической детекции Ascaris lumbricoides обеспечивает выявление гельминта в клиническом материале вне зависимости от фазы его развития и получение максимума диагностических данных при минимуме материальных и временных затрат, в связи с чем может использоваться для ранней лабораторной диагностики аскаридоза.
3. Диагностическая подсистема эпидемиологического надзора за аскаридозом может быть существенно оптимизирована, благодаря внедрению прямого обнаружения в объектах внешней среды Ascaris lumbricoides методом ПЦР.
Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фархутдинова, Алсу Мансафовна, 2013 год
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Авдюхина, Т.И Современный взгляд на проблему гельминтозов у детей и эффективные пути ее решения / Т.И. Авдюхина, Т.Н. Константинова, М.Н. Прокошева // Лечащий врач. - 2004. - № 1. - С. 14-18.
2. Аверьянова, Н.И. Энтеробиоз как медико-социальная проблема / Н.И. Аверьянова, И.Л. Хусид // Российский педиатрический журнал. - 2001. -№2.-С. 41-44.
3. Амплификация фрагмента гена, кодирующего иммунодоминантный гликопротеин трихинелл молекулярной массой 53 кДа / И.М. Одоевская, В.В. Асеев, Ю.В. Кушнарева [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2009. - № 1. - С. 37^40.
4. Анализ клинико-эпидемиологических особенностей течения аскаридоза в Ростовской области / Е.П. Хроменкова, Л.А. Ермакова, С.А. Нагорный [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2006. - № 3. - С. 43.
5. Аскерко, А.Ч. Основы паразитологии / А.Ч. Аскерко. - Минск, 2008. - 140 с.
6. Ахапкина, И.Г. Обнаружение антител к антигенам лямблий в сыворотках атопических больных / И.Г. Ахапкина // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - № 4. - С. 47-48.
7. Банержи, А. Медицинская статистика понятным языком: вводный курс / А. Банержи. - М.: Практическая медицина, 2007. - 287 с.
8. Беспятов, В.Ф. Использование модели Адичи для уточнения уровня пораженности кишечными гельминтозами при однократном обследовании населения методом нативного мазка / В.Ф. Беспятов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1996. - № 3. - С. 57-58.
9. Биология / H.B. Чебышев, Г.Г. Тренева, М.В. Козарь, С.И. Гулешов. -М., 2001.-592 с.
10.Биология / Н.В. Чебышев, Г.Г. Гринева, М.В. Козарь, С.И. Гуленков. -М, 2000.-592 с.
11. Бондарь, В.И. Регулярная профилактическая противогельминтная терапия - необходимое условие успешного оздоровления детей в домах ребенка / В.И. Бондарь // Медицинская помощь. - 1997. - № 2. - С. 58-60.
12. Влияние ультрафиолетового излучения на ооцисты криптоспоридий и цисты лямблий в питьевой воде / H.A. Романенко, Г.И. Новосильцев, Ю.А. Рахманин [и др.] // Гигиена и санитария. - 2002. - № 1. - С. 33-36.
13. Вода и кишечные паразитозы / H.A. Романенко, Е.Г. Белова, JI.B. Бабурина [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2004. -№ 3. - С. 3-6.
14. Возвращающиеся паразиты и паразитарные болезни / В.В. Горохов, A.B. Успенский, H.A. Романенко [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2008. - № 1. - С. 54-56.
15. Вспышка лямблиоза в детском дошкольном учреждении г. Перми / Т.В. Кучеря, М.Г. Полушкина, Н.В. Анищенко [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2002. - № 2. - С. 51-53.
16. Выделение из воды возбудителей паразитарных болезней с помощью порошкового фильтра / H.A. Романенко, Т.М. Гузеева, Е.С. Кузьмин [и др.] // Гигиена и санитария. - 2006. - № 6. - С. 79-81.
17.Гинецинская, Т.А. Частная паразитология / Т.А. Гинецинская, A.A. Добровольская. - М.: Высшая школа, 1978. - 303 с.
18. Грачева, Т.И. Случай аскаридозно-миазного заболевания у ребенка 6 лет / Т.И. Грачева // Педиатрия. - 2001. - № 2. - С. 89-90.
19. Гузеева, Т.М. Роль паразитологических лабораторий в осуществлении социально-гигиенического мониторинга / Т.М. Гузеева, В.П. Сергиев,
H.A. Романенко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2006.-№2.-С. 3-5.
20. Гузеева, Т.М. Состояние диагностики паразитарных заболеваний в Российской Федерации / Т.М. Гузеева, В.П. Сергиев // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2011. - № 4. - С. 43-45.
21. Гузеева, Т.М. Состояние заболеваемости паразитарными болезнями в Российской Федерации и задачи в условиях реорганизации службы / Т.М. Гузеева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2008. -№ 1.-С. 3-11.
22. Дарченкова, H.H. Современная ситуация по распространению аскаридоза в Российской Федерации / H.H. Дарченкова, H.A. Романенко, А.И. Чернышенко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2006.-№4.-С. 40-43.
23. Залипаева, Т.Д. Клинические проявления лямблиозной инфекции у детей / Т.Д. Залипаева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2002. - № 3. - С. 29-32.
24. Залипаева, Т.Д. Распространение лямблиоза в г. Перми / Т.Д. Залипаева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2002. - № 1. -С. 35-36.
25.Кадочникова, Г.В. Аскаридоз у детей, совершенствование диагностики и лечения: автореф. дис. канд. мед. наук. - М., 2004. - 20 с.
26. Кадочникова, Г.В. Применение препарата лимфомиозот в терапии кожно-аллергического синдрома при аскаридозе у детей / Г.В. Кадочникова, Н.Б. Мерзлова, Н.В. Колесник // Справочник педиатра. - 2005. - № 6: тезисы докладов 11-го Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - С. 2-3.
27. Касьянов, В.И. Эколого-эпидемиологические основы профилактики аскаридоза в условиях крупномаштабного хранения твердых отходов /
В.И. Касьянов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2005. -№ 1.-С. 12-14.
28. Клайшевич, Г.И. Аскаридоз у детей / Г.И. Клайшевич, В.Н. Лялина,
B.Е. Поляков // Медицинская консультация. - 1996. - № 4. - С. 3-6.
29. Кожура, Г.Ф. Случай отхождения аскарид через рот у ребенка 1 года / Г.Ф. Кожура, В.А. Фигурнов // Вопросы охраны материнства и детства. -1990.-№9.-С. 15-17.
30. Конь, Я.С. Диагностика и лечение гельминтозов человека / Я.С. Конь, М.С. Парецкая. - М.: Медицина, 1964.
31. Копанев, Ю.А. Клинико-микробиологические особенности современного течения аскаридоза и энтеробиоза у детей: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 2001.-25 с.
32. Копанев, Ю.А. Клиническая картина аскаридоза и энтеробиоза у детей на современном этапе / Ю.А. Копанев // Лечащий врач. - 2001. - № 5-6. -
C. 58-60.
33. Коротяев, А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / А. И. Коротяев, С.А. Бабичев. - СПб., 2008. - 767 с.
34. Кочергина, Е.А. Возможности применения албендазола в лечении паразитарных заболеваний у детей / Е.А. Кочергина // Вопросы современной педиатрии. - 2005. - Т. 4, № 1. - С. 111-114.
35. Кочергина, Е.А. Особенности лечения паразитарных заболеваний / Е.А. Кочергина, И.П. Корюкина, Е.В. Зубов // Русский медицинский журнал. -2004. - Т. 12, № 13. - С. 812-814.
36. Крамарь, Л.В. Распространенность лямблиоза среди жителей города Волгограда / Л.В. Крамарь, Е.В. Резников, О.Г. Крамарь Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2003. - № 4. - С. 38-39.
37. Куропатенко, М.В. Влияние паразитозов на течение бронхиальной астмы у детей: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 2003. - 21 с.
38. Куропатенко, M.B. Распространенность паразнтозов у детей, страдающих аллергическими заболеваниями / М.В. Куропатенко // Российский педиатрический журнал. - 2005. - № 4. - С. 26-29.
39. Куропатенко, М.В. Распространенность энтеробиоза, аскаридоза и лямблиоза у детей, больных бронхиальной астмой / М.В. Куропатенко, H.A. Безушкина, J1.A. Желенина // Аллергология. - 2002. - № 4. - С. 38^41.
40. Кучеря, Т.В. Особенности клинических проявлений лямблиоза у детей и эффективность применения тиберала для их лечения / Т.В. Кучеря, М.А. Митерева, О.В. Олисевич // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2002. - № 4. - С. 42-43.
41. Лесневская, Н.В. Применение тиберала для лечения лямблиоза / Н.В. Лесневская, И.А. Пекарева // Клиническая фармакология и терапия. -1997.-№ 1,-С. 28-29.
42. Лечение лямблиоза у детей в современных условиях: эффективность и выбор специфического препарата / Т.В. Кучеря, Т.А. Макарова, Е.А. Кочергина, Т.П. Авдюхина // Медицинская паразитология и болезни. -2008.-№2.-С. 15-17.
43. Лямблиоз у детей и подростков Санкт-Петербурга и опыт противо-лямблиозной терапии Тибералом / М.И. Балаболкин, A.M. Мкртумян, Э.Р. Дасанова [и др.] // Клиническая фармакология и терапия. - 1998. - № 1. -С. 51-52.
44. Маркин, A.B. Анализ факторов риска заболеваемости энтеробиозом детей дошкольного возраста / A.B. Маркин // Педиатрия. - 1995. - № 6. - С. 96.
45. Маркин, A.B. Влияние факторов внутришкольной среды на заболеваемость учащихся энтеробиозом / A.B. Маркин, Т.В. Терехова, A.A. Стругова // Гигиена и санитария. - 1997. - № 5. - С. 16-18.
46. Маркин, A.B. Гигиенические мероприятия в борьбе с энтеробиозом / A.B. Маркин // Гигиена и санитария. - 1997. - № 3. - С. 54-55.
47. Маркин, A.B. Энтеробиоз: влияние возбудителя на состояние здоровья детей / A.B. Маркин // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1996. - № 2. - С. 50-54.
48. Массовые оздоровительные мероприятия среди детских континген-тов в очагах гельминтозов на территориях проживания народов Севера в Хабаровском крае / Р.Н. Либерова, Е.А. Денисов, Т.Г. Козырева [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1998. - № 3. - С. 46^18.
49. Мельникова, Л.И. Геогельминтозы в патологии человека / Л.И. Мельникова//Медицинская помощь. - 1999. -№ 5.-С. 51-53.
50. Меньшиков, В.В. Клиническая лабораторная аналитика / В.В. Меньшиков. - М., 1999. - Т. 2: Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. - 352 с.
51. Мерзлова, Н.Б. Токсокароз в сочетании с другими паразитозами у детей с соматической патологией / Н.Б. Мерзлова // Детские инфекции. -2007. - Т. 6, № 2. - С. 29-33.
52. Методики клинических лабораторных исследований: справочное пособие / под ред. В.В. Меньшова. - М., 2009. - Т. 3. - 303 с.
53. Мирзоева, Р.К. Распространение аскаридоза среди населения Республики Таджикистан / Р.К. Мирзоева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2006. - № 2. - С. 41-42.
54. Мировая статистика здравоохранения / ВОЗ. - Женева, 2012. - 177 с.
55. Новые подходы к оздоровлению детей от энтеробиоза / H.A. Рома-ненко, В.П. Сергиев, А.И. Чернышенко [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1997. - № 1. - С. 3-5.
56. Одинцева, В.Е. Методы диагностики и лечения глистно-протозойных инвазий у детей с заболеваниями желудочно-кишечного тракта /
B.Е. Одинцева, В.А. Александрова // Детские инфекции. - 2010. - Т. 9, № 2. -
C. 58-61.
57. Одинцева, В.Е. Современные особенности диагностики и лечения глистно-паразитарных инвазий у детей: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 2010.-22 с.
58. Озеровская, H.H. Эозинофилия крови и иммуноглобуленимия Е: особенности регуляции при гельминтозах и аллергических болезнях / H.H. Озеровская // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -1997.-№2.-С. 3-7.
59. Онищенко, Г.Г. Заболеваемость паразитарными болезнями в Российской Федерации / Г.Г. Онищенко // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2007. - № 6. - С. 3-10.
60. Опыт оздоровления от гельминтозов в Ханты-Мансийском районе / Е.В. Воробьев, А.Я. Лукас, В.И. Янзинов [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1998. - № 3. - С. 51-54.
61. Османов, P.O. Био-экологические особенности возбудителей и эпидемиологические аспекты аскаридоза и энтеробиоза детей дошкольного возраста в Республике Дагестан: автореф. дис. ... канд. биол. наук. - М., 2003. - 20 с.
62. Ошевская, З.А. Изучение влияния различных факторов на эпидемический процесс при аскаридозе (на примере Тульской области) / З.А. Ошевская // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1995. - № 3. - С. 28-31.
63. Паразитарные инвазии в практике детского врача / В.Н. Тимченко [и др.]. - СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2005. - 287 с.
64.Пекарева, H.A. Частота и особенности побочных эффектов Тиберала при лечении лямблиоза у детей / H.A. Пекарева, Н.В. Лесневская, A.B. Супрова // Клиническая фармакология и терапия. - 1997. - № 3. - С. 58.
65.Петровский, A.B. Паразитология / A.B. Петровский. - Минск, 2007. -
354 с.
66. Платонов, А.Е. Статистический анализ в медицине и в биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы / А.Е. Платонов. - М.: Издательство РАМН, 2000. - 52 с.
67. Поляков, В.Е. Гельминтозы у детей и подростков: [монография] /
B.Е. Поляков, А.Я. Лысенко. - М.: Медицина, 2003. - 256 с.
68. Поляков, В.Е. Аскаридоз у детей и подростков / В.Е. Поляков, А.Я. Лысенко // Медицинская помощь. - 2004. - № 2. - С. 52-54.
69. Поляков, В.Е. Тениаринхоз / В.Е. Поляков, И.А. Иванова, Н.Р. Полякова // Педиатрия. - 2006. - № 4. - С. 87-93.
70. Распространенность и клинико-лабораторная характеристика лямб-лиозной инвазии в Пермском регионе / Н.Б. Мерзлова, H.A. Романенко, Л.В. Бабурина, В.Н. Фукалова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2004. - № 2. - С. 24-27.
71. Распространенность паразитозов у детей, страдающих аллергическими заболеваниями (по данным статистики) / М.В. Куропатенко [и др.] // Российский педиатрический журнал. - 2005. - № 4. - С. 26-29.
72. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. - М.: Медиа Сфера, 2003.-312 с.
73. Редкие случаи микст инвазий аскаридоза / Л.А. Ермакова, Е.П. Хро-менкова, С.А. Нагорный [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2006. - № 3. - С. 44^6.
74. Роль водной растительности в механизме передачи адолескариев Fasciola heratica / B.B. Горохов, В.П. Сергиев, A.B. Успенский [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2006. - № 3. - С. 53-55.
75. Романенко, H.A. Гигиенические вопросы профилактики паразитарных болезней / H.A. Романенко // Гигиена и санитария. - 2003. - № 3. -
C. 16-18.
76. Романенко, H.A. Диагностика, лечение и профилактика гельминто-зов / H.A. Романенко // Справочник фельдшера и акушерки. - 2005. - № 1. -С. 23-29.
77. Романенко, H.A. Диагностика, лечение и профилактика гельминто-зов / H.A. Романенко // Справочник фельдшера и акушерки. - 2004. - № 6. -С. 29-36.
78. Романенко, H.A. Методы дезинвазии жидких и твердых отходов в Республике Таджикистан / H.A. Романенко, Р.К. Мирзоева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2007. - № 1. - С. 31-32.
79. Романенко, H.A. О необходимости включения ооцист криптоспори-дий в число показателей эпидемической безопасности питьевой воды / H.A. Романенко, В.П. Сергиев, Ю.А. Рахманин // Гигиена и санитария. - 2001. -№ 1.-С. 18-19.
80. Романенко, H.A. Ооцисты криптоспоридий и эпидемическая безопасность питьевой воды в Российской Федерации / H.A. Романенко, В.П. Сергиев, Ю.А. Рахманин // Медицинская паразитология и паразитарные болезни.-2001.-№2.-С. 11-13.
81. Романенко, H.A. Оценка связи заболеваемости населения паразитарными болезнями с обсемененностью окружающей сферы их возбудителями / H.A. Романенко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2000.-№ 1.-С. 12-15.
82. Романенко, H.A. Роль рук в передаче яиц аскарид в республике Таджикистан / H.A. Романенко, Р.К. Мирзоева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2006. - № 4. - С. 60.
83. Романенко, H.A. Роль санитарно-паразитологического надзора в социально-гигиеническом мониторинге / H.A. Романенко, Т.А. Семенова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2002. - № 2. - С. 3-5.
84. Романенко, H.A. Санитарно-паразитологический контроль качества питьевой воды / H.A. Романенко // Справочник фельдшера и акушерки. - 2004. -№ 4.-С. 56-61.
85.Романенко, H.A. Совершенствование системы санэпиднадзора - необходимое условие повышения эффективности профилактических мероприятий при паразитозах / H.A. Романенко, Т.А. Семенова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2007. - № 1. - С. 3-8.
86. Санитарно-паразитологическая характеристика объектов окружающей среды на юге России. Сточные воды и их осадки / Е.П. Хроменкова, Ю.И. Васерин, H.A. Романенко [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2008. - № 2. - С. 25-29.
87. Сергиев, В.П. Значение паразитарных болезней в патологии человека / В.П. Сергиев // Медицинская паразитология. - 1991. - № 5. - С. 3-6.
88. Сергиев, В.П. Первый в мире опыт массового лечения детей от гель-минтозов в Камбодже / В.П.Сергиев // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2005. - № 4. - С. 41-42.
89. Серологические методы в оценке пораженности тканевыми гельминтами детей в экстремальных природных условиях Севера / О.Г. Полетаева, Т.В. Старкова, Е.А. Коврова [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1998. - № 3. - С. 29-32.
90. Случай аскаридозно-миазного заболевания у ребенка 6 лет / Н.С. Абдукаева, Т.Б. Корженевская, Т.Н. Грачева, И.В. Торопова // Педиатрия. -2001.-№2.-С. 89-90.
91. Смирнова, Т.М. Атипические клинические проявления лямблиоза у взрослых / Т.М. Смирнова, В.Б. Берман // Екатеринбургский диагностический центр: итоги 10-летнего пути и перспективы развития: сборник научных трудов. - Екатеринбург, 1999. - С. 125-128.
92. Совершенствование комплекса санитарно-оздоровительных мероприятий среди детей детских учреждений и школ при энтеробиозе / А.И. Чернышенко, Г.Л. Плющева, H.A. Романенко [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2003. - № 2. - С. 43—45.
93.Современная ситуация по паразитарным болезням собак и кошек в мегаполисе Москвы / В.П. Сергиев, A.B. Успенский, В.В. Горохов [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2007. -№ 1. - С. 17-20.
94. Сопрунов, Ф.Ф. Гельминтозы человека / Ф.Ф. Сопрунов, Е.С. Шуль-ман, Е.С. Лейкина. - М., 1985. - 365 с.
95. Состояние здоровья и заболеваемость энтеробиозом и аскаридозом детей в Свердловском районе г. Перми / М.Н. Прокошева, Е.А. Кочергина, М.А. Митирева, Т.И. Авдюхина // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2005. - № 1. - С. 24-26.
96. Способ детекции Ascaris lumbricoides в клиническом материале на различных стадиях заболевания: пат. п 242425 Рос. Федерация / Мавзютов А.Р., Баймиев А.Х., Мирсаяпова И.А., Фархутдинова A.M., Янбарисова Э.А.
97. Сыскова, Т.Г. Гельминтозы у детей / Т.Г. Сыскова // Здоровье населения и среда обитания. - 2005. - №6. - С. 23-26.
98. Сыскова, Т.Г. Паразитарные заболевания в Российской Федерации в условиях миграции населения / Т.Г. Сыскова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2004. - № 1. - С. 3-5.
99. Токарева, М.К. Прогнозирование сроков развития и выживаемости яиц / М.К. Токарева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2008.-№2.-С. 21-25.
100. Турьянов, А.Х. Новый подход к диагностике и оценке эффективности дегельминтизации при аскаридозе / А.Х. Турьянов, Д.А. Валишин,
Е.Р. Валинурова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2008.-№ 1. - С. 43-46.
101. Федотова, Г.П. Энтеробиоз в дошкольных учреждениях / Г.П. Федотова // Гигиена и санитария. - 1999. - № 2. - С. 28-30.
102. Халафли, Х.Н. Анализ распространения гельминтозов среди детей / Х.Н. Халафли // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 3 - С. 138-143.
103. Хусид, И.Л. Роль паразитарной сенсибилизации в формировании аллергозов у детей: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 2000. - 23 с.
104. Чебышев, Н.В. Гистологическое и электронно-микроскопическое исследование почек при миграционном аскаридозе / Н.В. Чебышев, В.В. Королев, Г.Г. Гринева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1996. - № 1. - С. 37-40.
105. Чернышева, Е.С. Значение гельминтозов в развитии острого аппендицита / Е.С. Чернышева // Хирургия. - 2001. - № 10. - С. 30-32.
106. Чистенко, Г.Н. Оптимизация сроков обследования населения на пораженность аскаридозом / Г.Н. Чистенко // Здравоохранение. - 1997. - № 6. -С. 38-39.
107. Шакаров, А.Г. Эффективность иммунорефлексодиагностики в оценке некоторых показателей иммунного статуса у лиц с кишечной паразитарной инвазией / А.Г. Шакаров // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2002. - № 4. - С. 40-41.
108. Щенников, Э.Л. Паразитарные инвазии и бронхообструктивный синдром / Э.Л. Щенников, А.Г. Отцова // Клиническая медицина. - 1996. -№ 7. - С. 48-50.
109. Энтеробиоз у детей и подростков / В.Е. Поляков, А .Я. Лысенко, Т.Н. Константинова, Т.П. Авдюхина // Эпидемиология и инфекционные болезни.-2005,-№ 1,- С. 48-50.
110. Эпидемиологические аспекты паразитарных болезней в Республике Кыргызстан / Ж.М. Усурбалиева, B.C. Тойгомбаева, К.А. Ногойбаева, А.Е. Мергенов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2009. -№ 2. -С. 27-30.
111. Ющук, Н.Д. Лекции по инфекционным болезням: в 2-х т. / Н.Д. Ющук, Ю.Я. Венгеров. - М., 1999. - 433 с.
112. A lange community outreac of waterborne giardiasis-delayed detection in a non -endemic urban area / K. Nygard, B. Schimmer, O. Sobstad [et al.] // BMC Public Health.-2006.-№6.-P. 141.
113. A survey of Enterobius vermicularis infection among children on western and southern coastal islands of the Republic of Korea / J.H. Park, E.T. Han, W.H. Kim [et al.] // Korean J. Parasition. - 2005. - Vol. 43, № 4. - P. 129-34.
114. Acute phase protein levels, T. trichiura, and maternal education are predictors of serum zinc in a cross-sectional study in Bangladeshi children / K. Kongsbak, M.A. Wahed, H. Friis, S.H. Thilsted // J. Nutr. - 2006. - Vol. 136, № 8.-P. 2262-8.
115. Age patterns in undernutrition and helminth infection in a rural area of Brazil: associations with ascariasis and hookworm / A. Jardim-Botelho, S. Brooker, S.M. Geiger [et al.] // Trop. Med. Int. Health. - 2008. - Vol. 13, № 4. - P. 458-67.
116. Aggarwal, B. Acute eosinophilic pneumonia due to round worm infestation / B. Aggarwal, M. Sharma, T. Singh // Ind. J. Pediatr. - 2008. - Vol. 75, № 3. - P. 296-7.
117. Albright, J.W. Instruction in behavior modification can significantly alter soil-transmitted helminth (STH) re-infection following therapeutic de-worming / J.W. Albright, J. Basaric-Keys // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. -2006. - Vol. 37, № 1. - P. 48-57.
118. Anderson, T.J. Ascaris infections in humans from Amerika: molecular evidence for cross-infection / T.J. Anderson // Parasitology. - 1995. - Vol. 110. I'. 215- 9.
119. Antibody response to Ascaris lumbricoides among the children population in the Usti Region / J. Richter, I. Stiborova, J. Pohorska [et al.] // Epidemiologie, Mikrobiologie, Imunologie. - 2005. - Vol. 54, № 4. - P. 143-7.
120. Antibody responses to Ascaris-derived proteins and glycolipids: the role of phosphorylcholine / E. van Riet, M. Wuhrer, S. Wahyuni [et al.] // Parasite Immunol. - 2006. - Vol. 28, № 8. - P. 363-71.
121. An unceasing problem: soil-transmitted helminthiases in rural Malaysian communities / M.S. Al-Mekhlafi, A.S. Atiya, Y.A. Lim [et al.] // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. - 2007. - Vol. 38, № 6. - P. 998-1007.
122. Appendiceal ascariasis in children / I. Wani, M. Maqbool, A. Amin [et al.] // Ann. Saudi Med. - 2010. - Vol. 30, № 1. - P. 63-6.
123. Application of genotyping during an extensive outbreak of waterborne giardiasis in Bergen, Norway, during Autumn and winder 2004 / LJ. Robertson, L. Hermansen, B.K. Gjerde [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 2006. - Vol. 72, № 3. - P. 2212-7.
124. Ascariasis in zoonosis in Denmark-secondary publication / P. Nejsum, E.D. Parker, J. Frydenberg [et al.] // Ugeskr. Laeger. - 2006. - Vol. 168, № 4. -P. 384-7.
125. Ascariasis-associated worm encephalopathy in a young child / K.R. Jat, R.K. Marwaha, I. Panigrahi, K. Gupta // Trop. Doctor. - 2009. - Vol. 39, № 2. -P. 113-4.
126. Ascaris liver abscess in children / S. Bari, K.A. Sheikh, M. Ashraf [et al.] // J. Gastroenterol. - 2007. - Vol. 42, № 3. - P. 236^10.
127. Ascaris lumbricoides infection and polyparasitism associated with poor cognitive performance in Brazilian schoolchildren / A. Jardim-Botelho, S. Raff,
R.A. de Rodrigues [et al.] // Trop. Med. Int. Health. - 2008. - Vol. 13, № 8. -P. 994-1004.
128. Ascaris lumbricoides-induced interleukin-10 is not associated with atopy in schoolchildren in a rural area of the tropics / P.J. Cooper, E. Mitre, A.L. Moncayo [et al.] // J. Infect. Dis. - 2008. - Vol. 197, № 9. - P. 1333^0.
129. Ascaris, co-infection and allergy: the importance of analysis based on immunological variables rather than egg excretion / J.E. Fincham, M.B. Markus, L. van der Merwe [et al.] // Transact. Royal Soc. Trop. Med. Hygiene. - 2007. -Vol. 101, №7.-P. 680-2.
130. Association between total immunoglobulin E and antibody responses to naturally acquired Ascaris lumbricoides infection and polymorphisms of immune system-related LIG4, TNFSF13B and IRS2 genes / N. Acevedo, D. Mercado, C. Vergara [et al.] // Clin. Exp. Immunol. - 2009. - Vol. 157, № 2. - P. 282-90.
131. Association of atopy, asthma, allergic rhinoconjunctivitis, atopic dermatitis and intestinal helminth infections in Cuban children / M. Wordemann, R.J. Diaz, L.M. Heredia [et al.] // Trop. Med. Int. Health. - 2008. - Vol. 13, № 2. -P. 180-6.
132. Association of polymorphisms in the beta2-adrenoreceptor gene with higher levels of parasitic infection / C.E. Ramsay, C.M. Hayden, K.J. Tiller [et al.] // Human Genetics. - 1999. - Vol. 104, № 3. - P. 269-74.
133. Atopic dermatitis and ascariasis in children aged 2 to 10 years / M.T. Silva, V.M. Souza, G. Bragagnoli [et al.] // J. Pediatr. - 2010. - Vol. 86, № 1. -P. 53-8.
134. Baba, A.A. Intestinal ascariasis: the commonest cause of bowel obstruction in children at a tertiary care center in Kashmir / A.A. Baba, S.M. Ahmad, K.A. Sheikh // Pediatr. Surg. Int. - 2009. - Vol. 25, № 12. - P. 1099-102.
135. Banerjee, A.N. A method of estimating the average derivative / A.N. Banerjee // J. Econometrics. - 2007. - Vol. 136, № 1. - P. 65-88.
136. Benefit of vitamin A supplementation on ascaris reinfection is less evident in stunted children / L.G. Payne, K.G. Koski, E. Ortega-Barria, M.E. Scott // J. Nutrition. - 2007. - Vol. 137, № 6. - P. 1455-9.
137. Biliary ascariasis: the value of ultrasound in the diagnosis and management / M. Al Absi, A.M. Qais, M. Al Katta [et al.] // Ann. Saudi Med. - 2007. -Vol. 27, №3.-P. 161-5.
138. Biliary ascaris-induced obstructive jaundice: a case of acute abdomen / H. Ozturk, H. Ozturk, H. Duran, S. Otcu // Turkish J. Trauma Emerg. Surg. - 2009. -Vol. 15, № 1. - P. 88-90.
139. Castro-Hermida, J.A. Prevalence and intensity of infection Of Giardia duodenalis in diary cattle in Galicia (NW Spain) / J.A. Castro-Hermida, C. Carro-Corral, M. Gonzalez-Warleta // J. Vep. Med. B Infect. Dis. - 2006. - Vol. 53, № 5. -P. 244-6.
140. Chatterjee, K.D. Parasitology (Protozoology and Helminthology): in relation to clinical medicine / K.D. Chatterjee. - Calcutta, 2001. - 238 p.
141. Confirmation of the protective effect of Ascaris lumbricoides on Plasmodium falciparum infection: results of a randomized trial in Madagascar / L. Brutus, L. Watier, V. Hanitrasoamampionona [et al.] // Amer. J. Trop. Med. Hygiene. - 2007. - Vol. 77, № 6. - P. 1091-5.
142. Contrasting patterns in the small-scale heterogeneity of human helminth infections in urban and rural environments in Brazil / S. Brooker, N. Alexander, S. Geiger [et al.] // Int. J. Parasitology. - 2006. - Vol. 36, № 10-11. - P. 1143-51.
143. Critical contribution of sanitation infrastructure and primary medical care to child health status in Japan from 1955 to 2000 / S. Ishitani, K. Nakamura, Y. Fukuda [et al.] // J. Med. Dent. Sci. - 2005. - Vol. 52, № 4. - P. 213-22.
144. Death due to an unrecognized ascariasis infestation: two medicolegal autopsy cases / M. Maletin, I. Veselinovic, G.B. Stojiljkovic [et al.] // Am. J. Forensic Med. Pathol. - 2009. - Vol. 30, № 3. - P. 292-4.
145. Dryden, M.W. Accurate diagnosis of Giardia spp and proper fecal examination procedures/ M.W. Dryden, P.A. Paynte, V. Smiith // Vet. Ther. - 2006. -Vol. 7, № 1. - P. 4-14.
146. Effect of vitamin A and zinc supplementation on gastrointestinal parasitic infections among Mexican children / K.Z. Long, J.L. Rosado, Y. Montoya [et al.] // Pediatrics. - 2007. - Vol. 120, № 4. - P. e846-55.
147. Effects of chronic ascariasis and trichuriasis on cytokine production and gene expression in human blood: a cross-sectional study / M. Reina Ortiz, F. Schreiber, S. Benitez [et al.] // PLoS Neglected Tropical Diseases [electronic resource]. -2011.-Vol. 5, №6.-P. el 157.
148. Egg positive rate of Enterobius vermicularis and Taenia spp. By cellophane tare method in primary school children in Sivas, Turcey / A. Celiksoz, M. Ac-cioz, S. Degerli, A. Alim, C. Aygan // Korean J. Parasitol. - 2005. - Vol. 43, № 2. -P. 61—4.
149. El Kettani, S. Prevalence of helminths in a rural population using wastewater for agricultural purposes at Settat / S. El Kettani, M. el Azzouzi // Sante. - 2006. - Vol. 16, № 4. - P. 245-51.
150. Enterobiasis and its relationship with anal itching and Enuresis among school-age children in Calabar, Nigeria / I.B. Oti-Bassey, G.C. Ejezie, J. Epoke, M.F. Useh // Ann. Tropical Med. Parasitiol. - 2005. - Vol. 99, № 6. - P. 611-6.
151. Epidemiologic and molecular study of Entamoeba histolytica and Entamoeba dispar strains in pacients / L. Mora, A. Garcia, M. De Donato, H. Urdaneta // Investig. Clin. - 2008. - Vol. 49, № 2. - P. 225-37.
152. Epidemiological studies of intestinal helminthes and malaria among children in Lagos, Nigeria / G.O. Adeoye, C.O. Osayemi, O. Oteniya, S.O. Onyemekeihia // Pakistan J. Biol. Sciences. - 2007. - Vol. 10, № 13. -P. 2208-12.
153. Epidemiology of giardiasis and cryptosporidiosis in Jamaica / J.F. Lindo, V.A. Levy, M.K. Baum, C.J. Palmer // Am. J. Trop. Med. Hyg„ - 1998. -Vol. 59, №5.-P. 717-21.
154. Frequency of intestinal helminthiasis and its association with iron deficiency and malnutrition in children from western Mexico / C. Gutierrez-Rodriguez, B. Trujillo-Hernandez, A. Martinez-Contreras [et al.] // Gaceta Med. Mexico. -2007. - Vol. 143, № 4. - P. 297-300.
155. Garrcia, L.S. Evaluation of nine immunoassay kits (enzyme immunoassay and direct fluorescence) for detection of Giardia lamblia and Cryptosporidium parvum in human fecal specimens / L.S. Garrcia, R.Y. Shimizu // J. Chin. Microbiol. - 1997. - Vol. 35, № 6. - P. 1526-9.
156. General malaise and diarrhea as the main manifestations of Giardia lamblia infection / O. Nantes, J.M. Zozaya, C. Prieto [et al.] // Gastroenterol. Hepatol. - 2005. - Vol. 28, № 9. - P. 558-60.
157. Genetic haplotypes of Th-2 immune signalling link allergy to enhanced protection to parasitic worms / M. Moller, M.B. Gravenor, S.E. Roberts [et al.] // Human Mol. Genet. - 2007. - Vol. 16, № 15. - P. 1828-36.
158. Genetic variation in sympatric Ascaris populations from humans and pigs in China / W. Peng, T.J. Anderson, X. Zhou, M.W. Kennedy // Parasitology. -1998.-Vol. 117.-P. 355-61.
159. Geng, M.Q. Improved immunofluorescence assay for detection of Giardia and Cryptosporidium from asymptomatic aduli corvine animals / M.Q. Geng, D.O. Cliver // Parasitol. Res. - 1999. - Vol. 85, № 8-9. - P. 733-6.
160. Giardia duodenalis infection and wastewater irrigation in Pacistan / J.H. Ensink, W. van der Hoek, F.P. Amerasinghe // Trans R. Soc. Trop. Med. Hyg. -2006. - Vol. 100, № 6. - P. 538^12.
161. Giardiasis:recent programess in chemothepary and drug development / T. Minenoa, M.A. Avery // Curr. Pharm. Des. - 2003. - Vol. 9, № 11. - P. 841-55.
162. Gupta, S.K. Ventriculoperitoneal shunt catheter masquerading as asca-riasis / S.K. Gupta, A.K. Jaiswal, S. Kumar // J. Clin. Neurosci. - 2005. - Vol. 12, № 8. - P. 966-7.
163. Haburchak, D.R. Ascarisis / D.R. Haburchak. - URL: http://medinfa.ru/article/7/3348/
164. High titre of anti-Ascaris immunoglobulin E associated with bronchial asthma symptoms in 5-year-old rural Bangladeshi children / H. Takeuchi, K. Zaman, J. Takahashi [et al.] // Clin. Exp. Allergy. - 2008. - Vol. 38, № 2. - P. 276-82.
165. Holland, C.V. Predisposition to ascariasis: patterns, mechanisms and implications / C.V. Holland // Parasitology. - 2009. - Vol. 136, № 12. - P. 1537^7.
166. Impact of health educational programmes on the prevalence of enterobiasis in schoolchildren in Thailand / C. Nithikathkul, N. Akarachantacyote, S. Wannapinyosheep [et al.] // Helminthol. - 2005. - Vol. 79, № 1. - P. 61-5.
167. Infection by Ascaris lumbricoides and bronchial hyper reactivity: an outstanding association in Venezuelan school children from endemic areas / I. Hagel, M. Cabrera, M.A. Hurtado [et al.] // Acta Tropica. - 2007. -Vol. 103, № 3. -P. 231-41.
168. Intestinal ascariasis in children / I. Wani, M. Rather, G. Naikoo [et al.] // World J. Surg. - 2010. - Vol. 34, № 5. - P. 963-8.
169. Intestinal helminths in a population of children from the Kashmir valley, India / S.A. Wani, F. Ahmad, S.A. Zargar [et al.] // J. Helminthol. - 2008. -Vol. 82, №4.-P. 313-7.
170. Intestinal parasitic diseases in children / A. Mare, A. Man, F. Toma [et al.] // Bacteriologia, Virusologia, Parazitologia, Epidemiología. - 2007. -Vol. 52, №3-4.-P. 157-62.
171. Levin, M.E. Total IgE in urban Black South African teenagers: the influence of atopy and helminth infection / M.E. Levin, P.N. Le Souef, C. Mótala // Pediatr. Allergy Immunol. - 2008. - Vol. 19, № 5. - P. 449-54.
172. Localization of multiple quantitative trait loci influencing susceptibility to infection with Ascaris lumbricoides / S. Williams-Blangero, J.L. Vandeberg, J. Subedi [et al.] // J. Infect. Dis. - 2008. - Vol. 197, n 1. - P. 66-71.
173. Malaria and helminth co-infection in children living in a malaria endemic setting of mount Cameroon and predictors of anemia / T.K. Nkuo-Akenji, P.C. Chi, J.F. Cho [et al.] // J. Parasitol. - 2006. - Vol. 92, № 6. - P. 1191-5.
174. Malik, A.H. Management of hepatobiliary and pancreatic ascariasis in Children of an endemic area / A.H. Malik, B.D. Saima, M.Y. Wani // Pediatr. Surg. Int. - 2006. - Vol. 22, № 2. - P. 164-8.
175. Management of biliary ascariasis in children living in an endemic area / A.A. Baba, A.H. Shera, M.A. Bhat [et al.] // Eur. J. Pediatr. Surg. - 2010. - Vol. 20, № 3. - P. 187-90.
176. Management of biliary ascariasis in pregnancy / O.J. Shah, I. Robanni, F. Khan [et al.] // World J. Surg. - 2005. - Vol. 29, № 10. - P. 1294-8.
177. Maraha, B. Evaluation of four enzyme immunoassays for the detection of Giardia lamblia antigen in stool specimens / B. Maraha, A.G. Buiting // Eur. Microbiol. Infect. Dis. - 2000. - Vol. 19, № 6. - P. 485-7.
178. Mass treatment for intestinal helminthiasis control in an Amazonian endemic area in Brazil / M.N. Boia, F.A. Carvalho-Costa, F.C. Sodre [et al.] // Rev. Inst. Med. Trop, de Sao Paulo. - 2006. - Vol. 48, № 4. - P. 189-95.
179. MONRATE: A descriptive tool for calculation and prediction of reinfection of Ascaris lumbricoides (Ascaridida: Ascarididae) / S.O. Sam-Wobo, C.F. Mafiana, S.A. Onashoga, O.R. Vincent // Rev. Biol. Tropical. - 2007. -Vol. 55, № 3-4. - P. 755-60.
180. Mullis, K. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction / K. Mullis // Cold Spring Harb. Symp. Quant Biol. - 1986. -Vol. 51.-P. 263-273.
181. Nitazoxanide in the treatment of Ascaris lumbricoides in a rural zone of Colima, Mexico / M.L. Galvan-Ramirez, N. Rivera, M.E. Loeza [et al.] // J. Helminthol. - 2007. - Vol. 81, № 3. - P. 255-9.
182. Nowak, P. Occurrence of human intestinal parasites in selected populations of Cracow region in the years 2000-2006 on the basis of parasitological stool examinations performed in the Laboratory of Parasitology of the District Sanitary-Epidemiological Center / P. Nowak, M. Jochymek, A. Pietrzyk // Wiadomosci Para-zytologiczne. - 2007. - Vol. 53, № 4. _ p. 285-93.
183. Observations and immunolohistochemical Detection of Coronavi-rus,Cryptosporidium parvum and Giardia intestinalis in neonatal diarrhea in lambs and kids / O. Ozmen, B.A. Yukari, M. Haligur, S. Sahinduran // Schweiz Arch. Tierheilkd. - 2006. - Vol. 148, № 7. _ p. 357-64.
184. Obstructive biliary ascariasis with cholangitis and hepatic abscesses in Laos: a case report with gall bladder ultrasound video / G. Slesak, P. Phantha-vong, O. Rasphone [et al.] // J. Infect. - 2007. - Vol. 54, № 4. - P. e233-5.
185. Parasitic co-infections: does Ascaris lumbricoides protect against Plasmodium falciparum infection? / L. Brutus, L. Watier, V. Briand [et al.] // Amer. J. Trop. Med. Hygiene. - 2006. - Vol. 75, № 2. - P. 194-8.
186. Pattern and predictors of soil-transmitted helminth reinfection among aboriginal schoolchildren in rural Peninsular Malaysia / M. Hesham Al-Mekhlafi, J. Surin, A.S. Atiya [et al.] // Acta Tropica. - 2008. - Vol. 107, № 2. - P. 200-4.
187. PCR detection of Giardia iamblia In stool: targeneting intergenic spacer region of multicopy rRNA gene / S. Ghosh, A. Debnath, A. Sil [et al.] // Mol. Cell Probes. - 2000. - Vol. 14, № 3. - P. 181-9.
188. Poor sanitation and helminth infection protect against skin sensitization in Vietnamese children: A cross-sectional study / C. Flohr, L.N. Tuyen, S. Lewis [et al.] // J. Allergy Clin. Immunol. - 2006. - Vol. 118, № 6. - P. 1305-11.
189. Prevalence and distribution of soil-transmitted helminthiases among Orang Asli children living in peripheral Selangor, Malaysia /M.S. Al-Mekhlafi, M. Azlin, U. Nor Aini [et al.] // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. -2006. - Vol. 37, № 1. - P. 40-7.
190. Prevalence of Giardia intestinalis infection In household cats of Tohoku districi in Japan / N. Itoh, N. Muraoka, J. Kawamata [et al.] // J. Vet. Med. Sei. -2006. - Vol. 68, № 2. - P. 161-3.
191. Prevalence of intestinal parasites and associated risk factors among schoolchildren in Srinagar City, Kashmir, India / S.A. Wani, F. Ahmad, S.A. Zargar [et al.] // J. Parasitol. - 2007. - Vol. 93, № 6. - P. 1541-3.
192. Prevalence of intestinal Parasitic infection in the Islamic Republic of Iran / A.A. Sayyari, F. Imanzadeh, S.A. Yazdi Badheri [et al.] // East Meiterr. Health. - 2005. - Vol. 11, № 3. - P. 377-83.
193. Pulmonary lesions associated with visceral larva migrans due to Ascaris suum or Toxocara canis: imaging of six cases / S. Sakai, Y. Shida, N. Takahashi [et al.] // Amer. J. Roentgenol. - 2006. - Vol. 186, № 6. - P. 1697-702.
194. Rapid and simple method for purification of nucleic acid / R. Boom, C.J. Sol, M.M. Salimans [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 1990. - Vol. 28. - P. 495-503.
195. Recall of intestinal helminthiasis by HIV-infected South Africans and avoidance of possible misinterpretation of egg excretion in worm/HIV co-infection analyses / V.J. Adams, M.B. Markus, Z.L. Kwitshana [et al.] // BMC Infect. Dis. -2006.-№6.-P. 88.
196. Repeated treatments with albendazole enhance Th2 responses to Ascaris Lumbricoides, but not to aeroallergens, in children from rural communities in the Tropics / P.J. Cooper, A.L. Moncayo, I. Guadalupe [et al.] // J. Infect. Dis. - 2008. -Vol. 198, №8. -P. 1237-42.
197. Respiratory atopic disease, Ascaris-immunoglobulin E and tuberculin testing in urban South African children / C.C. Obihara, N. Beyers, R.P. Gie [et al.] // Clin. Exp. Allergy. - 2006. - Vol. 36, № 5. - P. 640-8.
198. Role of the employment status and education of mothers in the prevalence of intestinal parasitic infections in Mexican rural schoolchildren / L. Quihui, M.E. Valencia, D.W. Crompton [et al.] // BMC Public Health. - 2006. - № 6. -P. 225.
199. Sensitivity of microscopy versus enzyme immunoassay in the laboratory diagnosis of giardiasis / T.G. Mank, J.O. Zaat, A.M. Deelder [et al.] // Official Publ. Eur. Soc. Clin. Microbiol. - 1997. - Vol. 16, № 8. - P. 615-9.
200. Serum iron status in Orang Asli children living in endemic areas of soil-transmitted helminths / U.N. Aini, M.S. Al-Mekhlafi, M. Azlin [et al.] // Asia Pacific J. Clin. Nutr. - 2007. - Vol. 16, № 4. - P. 724-30.
201. Single low-dose mebendazole administered quarterly for ascaris treatment / J.D. Cleary, D. Graham, W.B. Lushbaugh [et al.] // Amer. J. Med. Sciences. -2007. - Vol. 333, № 6. - P. 340-5.
202. Socio-environmental factors and ascariasis infection among school-aged children in Ilobu, Osun State, Nigeria / U.S. Ugbomoiko, V. Dalumo, I.E. Ofoezie, R.N. Obiezue // Transact. Royal Soc. Trop. Med. Hygiene. - 2009. -Vol. 103, №3,-P. 223-8.
203. Soil transmitted helminthes prevalence in school children of Pauri Garhwal District, Uttaranchal state / D. Bora, V.R. Meena, H. Bhagat [et al.] // J. Commun. Dis. - 2006. - Vol. 38, № 1. - P. 112-4.
204. Soil-transmitted helminth infection, skin infection, anaemia, and growth retardation in schoolchildren of Taveuni Island, Fiji / M. Thomas, G. Woodfield, C. Moses, G. Amos //N. Z. Med. J. - 2005. - Vol. 118, № 1216. - P. U1492.
205. Soil-transmitted helminth infections: ascariasis, trichuriasis, and hookworm / J. Bethony, S. Brooker, M. Albonico [et al.] // Lancet. - 2006. - Vol. 367, №9521.-P. 1521-32.
206. Soil-transmitted helminthiasis among mothers and their pre-school children on Unguja Island, Zanzibar with emphasis upon ascariasis / J.R. Sto-thard, E. Imison, M.D. French [et al.] // Parasitology. - 2008. - Vol. 135, № 12. -P. 1447-55.
207. Soil-transmitted helminths and haemoglobin status among Afghan children in World Food Programme assisted schools / A.F. Gabrielli, M. Ramsan, C. Naumann [et al.] // J. Helminthol. - 2005. - Vol. 79, № 4. - P. 381-4.
208. Soil-transmitted helminths in relation to hemoglobin status among school children of the Kashmir Valley / S.A. Wani, F. Ahmad, S.A. Zargar [et al.] // J. Parasitology. - 2008. - Vol. 94, № 3. - P. 591-3.
209. Status of intestinal helminthic infections of borderline residents in North Korea / S. Li, C. Shen, M.H. Choi [et al.] // Korean J. Parasitol. - 2006. -Vol. 44, №3.-P. 265-8.
210. Targeting newly enrolled low-age school children for the control of the intestinal helminth infection in rural Nepal / A.K. Poudyal, M. Jimba, R.C. Silwal [et al.] // Trop. Doctor. - 2006. - Vol. 36, № 1. - P. 16-9.
211. The effect of iron and multi-micronutrient supplementation on Ascaris lumbricoides reinfection among Zambian schoolchildren / M. Nchito, P.W. Geissler, L. Mubila [et al.] // Transact. Royal Soc. Trop. Med. Hygiene. - 2009. - Vol. 103, № 3. - P. 229-36.
212. The effect of vitamin A supplementation on the intestinal immune response in Mexican children is modified by pathogen infections and diarrhea / K.Z. Long, T. Estrada-Garcia, J.L. Rosado [et al.] // J. Nutr. - 2006. - Vol. 136, №5.-P. 1365-70.
213. The half-life of Ascaris lumbricoides prevalence in Japanese school children / C.M. Kurosawa, T. Ito, J. Takaki [et al.] // Acta Med. Okayama. - 2008. -Vol. 62, №5.-P. 303-12.
214. The impact of the Catholic Jubilee in 2000 on infectious diseases. A case-control study of giardiasis, Rome, Italy2000-200L / A. Faustini, C. Marinac-ci, E. Fabrizi [et al.] // Epidemiol. Infect. - 2006. - Vol. 134, № 3. - P. 649-58.
215. The role of dogs in transmission of gastrointestinal parasites in a remote tea-growing community in northeastern India / R.J. Traub, I.D. Robertson, P. Irwin [et al.] // Amer. J. Trop. Med. Hygiene. - 2002. - Vol. 67, № 5. - P. 539-45.
216. The role of parasitic infections in atopic diseases in rural schoolchildren / B. Karadag, M. Ege, J.E. Bradley [et al.] // Allergy. - 2006. - Vol. 61, № 8. -P. 996-1001.
217. The use of real-time PCR to identify Entamoeba histolytica and E. dispar infections in prisoners and primary-school children in Ethiopia / A. Kebede, J.J. Verweij, T. Endeshaw [et al.] // Ann. Trop. Med. Parasitol. - 2004. - Vol. 98, № 1. - P. 43-8.
218. Unusual endoscopic and microscopic view of Enterobius vermicularis: a case report with a review of the literature / M. Petro, K. Iavu, A. Minocha [et al.] // South Med. J. - 2005. - Vol. 98, № 9. - P. 927-9.
219. Valencia, L.I. Spatial ascariasis risk estimation using socioeconomic variables / L.I. Valencia, B.P. de Fortes, R.A. de Medronho // Int. J. Environ. Health Res. - 2005. - Vol. 15, № 6. - P. 411-24.
220. Vargas-Gonzalez, R. Clinical images in gastroenterology. Perforation of Meckel's diverticulum by Ascaris Lumbricoides / R. Vargas-Gonzalez, C. Camacho-Gonzalez, A. Garcia Galicia // Rev. Gastroenterol. Mexico. - 2005. -Vol. 70, №3.-P. 324.
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.