Разработка физико-химических подходов к разделению и идентификации пептидных продуктов с антибактериальными свойствами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, кандидат химических наук Федоткина (Срибная), Олеся Сергеевна

• Федоткина (Срибная), Олеся Сергеевна
• кандидат химических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат химических наук Федоткина (Срибная), Олеся Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ (ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ПРИ ВЫДЕЛЕНИИ И ОПРЕДЕЛЕНИИ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ).

1.1. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ РАЗДЕЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ

1.1.1. Гель-проникающая колоночная хроматография и твердофазная экстракция как начальные этапы очистки пептидов.Л

1.1.2. Применение ВЭЖХ для установления физико-химических характеристик удерживания пептидов и условий их определения на силикагеле С18 и пористом графитированном углероде Гиперкарб.

1.1.3. ВЭЖХ исследование пептидов на катионообменных носителях.

1.1.4. Физико-химические основы хроматографической идентификации пептидов.

1.1.5. Физико-химические характеристики удерживания и их корреляции со свойствами исследуемых молекул.

1.2. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ ПЕПТИДОВ.

1.2.1. Основные используемые в масс-спектрометрии пептидов методы ионизации и типы масс-анализаторов.

1.2.2. Пробоподготовка и ионизация пептидов в методе МАЛДИ.

1.2.3. Особенности фрагментации пептидов в условиях получения МАЛДИ-МС/МС спектров.

1.2.4. Структурная информация, получаемая на основе МС/МС спектров и ее использование для идентификации пептидов.

1.2.5. Масс-спектр как физико-химическая характеристика пептида.

1.3. АНТИМИКРОБНЫЕ ПЕПТИДЫ: СВОЙСТВА, ЗНАЧЕНИЕ И МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ.

1.3.1. Значение и свойства антимикробных пептидов.

1.3.2. Пептиды в насекомых.

1.3.3. Биологическое тестирование.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1. Реагенты и оборудование.

2.2. Объекты и пробоподготовка.

2.3. Методики проведения физико-химического эксперимента.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОБОПОДГОТОВКИ.

3.2. АНТИМИКРОБНЫЙ ТЕСТ И ЕГО РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.3. СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ ПЕПТИДОВ И ВЫБОР ОПТИМАЛЬНЫХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ.

3.3.1. Катионообменная гель-хроматография пептидов гусеницы Gallería mellonella на сефадексе СМ-50.

3.3.2. Сравнительное исследование пептидных фракций гусеницы Gallería mellonella методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.

3.3.3. Катионообменное ВЭЖХ исследование пептидов Gallería mellonella.

3.3.4. ВЭЖХ исследование пептидов гусеницы Gallería mellonella на сорбенте Гиперкарб и молекулярно-статистическая оценка теплот адсорбции пептидов

3.3.5. Физико-химические характеристики удерживания, используемые для построения корреляций со свойствами исследуемых пептидов.

3.4. СРАВНИТЕЛЬНОЕ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПЕПТИДОВ.

3.4.1. Изучение антибактериальных пептидных фракций после катионообменной гель-хроматографии методом МАЛДИ.

3.4.2. Изучение пептидного состава фракций после обращенно-фазовой ВЭЖХ для разных пептидных смесей.

3.4.3. Изучение пептидного состава фракций после катионообменной ВЭЖХ для разных пептидных смесей.

3.4.4. Идентификация пептидов Galleria mellonella по базам данных.

3.4.6. Гидролиз пептидов трипсином в антибактериальных фракциях и масс-спектрометрическое изучение продуктов гидролиза.

3.4.7. Применение алгоритмов секвенирования de novo для идентификации пептидов гусеницы Galleria mellonella.

3.4.8. Физико-химическая характеристика пептидов на основе массспектрометрических данных. МС/МС спектры.

3.5. СОЧЕТАНИЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ И МАСС

СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка физико-химических подходов к разделению и идентификации пептидных продуктов с антибактериальными свойствами»

Актуальность исследования. В связи с резким ростом числа новых органических соединений пептидной природы, полученных при секвенировании, проблема установления взаимосвязи между физико-химическими свойствами этих пептидов и их структурой является одной из наиболее актуальных в жидкостной хроматографии. Наиболее информативными в этом плане являются современные варианты высокоэффективной жидкостной хроматографии ВЭЖХ, с применением матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации МАЛ-ДИ и масс-селективного детектирования, особенно в тандемном варианте. В настоящее время теория сорбции и разделения органических, а тем более биоорганических, соединений находится практически в стадии разработки, что требует детального изучения адсорбционных свойств большого числа таких соединений, в частности, пептидов. Физико-химическое обоснование процессов в системе сорбат-сорбент-элюент в основном носит описательный характер. В связи с этим такие исследования важны, поскольку накопление физико-химических данных по удерживанию в условиях ВЭЖХ позволяет создавать модели физико-химического поведения соединений и обосновывать оптимальные условия разделения сложных смесей данным методом, а в сочетании с масс-спектроскопией - проводить идентификацию компонентов сложных смесей пептидов.

Актуальной задачей современной химии, биологии и медицины является поиск эффективных антибактериальных средств. Особый интерес представляют антимикробные пептиды, обнаруженные у млекопитающих, насекомых и растений [1]. Данные пептиды являются компонентами неспецифических врождённых механизмов борьбы с инфекциями.

Очень высок потенциал некоторых насекомых для химической и фармацевтической индустрии: область применения - от модельных систем в фармакологических исследованиях до источников новых антибиотиков, биологически активных веществ для защиты растений и ценных химических соединений. Пептидные продукты, получаемые на основе иммунных реакций насекомых, проявляют широкий спектр биологической активности и могут стать основой для разработки новых фармакологических средств.

Врождённая иммунная система восковой моли (Gallería mellonella) производит множество пептидов для защиты от болезнетворных микробов. Из гусеницы Gallería mellonella выделили ряд пептидов бактерицидного и противогрибкового действия. Перспективным является использование Gallería mellonella в качестве модельной системы биосинтеза антибактериальных пептидных продуктов, благодаря ее легкодоступное™ и тому, что этическая сторона исследований урегулирована законодательно. Однако такое биопроизводство требует комплексного подхода к анализу пептидных продуктов, сочетающего высокоэффективные методы разделения и идентификации.

В настоящее время одним из наиболее информативных методов анализа пептидов является хромато-масс-спектрометрия. Разнообразные масс-спектрометрические методы активно используются в физико-химических исс исследованиях, поскольку позволяют быстро и эффективно устанавливать аминокислотные последовательности полипептидов, используя два подхода к анализу и интерпретации масс-спектров: поиск по базам данных и масс-спектрометрическое установление аминокислотной последовательности {de novo секвенирование). Одним из наиболее привлекательных методов для проте-омного анализа является масс-спектрометрия матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации (МАЛДИ), поскольку обладает чувствительностью, экспрессностью и информативностью.

Использование высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для разделения сложных смесей пептидов позволяет разделять смесь на отдельные компоненты, опираясь на закономерности удерживания, оценивать молекулярные массы исследуемых молекул, отделять соли и низкомолекулярные компоненты. Такая хроматографическая пробоподготовка позволяет упростить масс-спектрометрический анализ. Комбинация метода ВЭЖХ с тандемной масс-спектрометрией является эффективным инструментом анализа пептидных смесей, позволяющим идентифицировать биомолекулы с высокой чувствительностью и скоростью.

Физико-химической основой хромато-масс-спектрометрического метода является возможность совместно использовать результаты хроматографических и масс-спектрометрических исследований. В таких исследованиях хроматогра-фическим методом определяют термодинамические характеристики адсорбции, такие как величины удерживания k, AG - изменение свободной энергии, АН -изменение энтальпии, AS - изменение энтропии, отражающие связь между структурой и их хроматографическими и термодинамическими характеристиками (липофильность, lnk, AG). Масс-спектрометрическим методом изучают масс-спектры в разных режимах ионизации, что позволяет получать информацию о массовых числах и фрагментации молекул. Структурные особенности определяют с помощью тандемной масс-спектрометрии.

В связи с этим актуальным является создание физико-химических основ разделения и идентификации пептидных продуктов, полученных на основе иммунных реакций Gallería mellonella, включающее разработку комплекса высокоэффективных методов анализа пептидных продуктов, оптимизацию условий пробоподготовки и выделения целевых продуктов.

Научная новизна:

1. Получены термодинамические характеристики адсорбции антимикробных пептидов, описывающие их разделение в условиях ОФ и катионообменной ВЭЖХ. По результатам сопоставления реальных и расчетных времен удерживания для ряда антибактериальных пептидов проведена их хроматографическая идентификация, в том числе на основании физико-химических характеристик адсорбции и корреляций, связывающих структуру пептидов с удерживанием.

2. Определены условия проведения иммунизации Gallería mellonella и получения пептидных смесей с высоким содержанием антибактериальных пептидов.

3. Изучено несколько хроматографических режимов при исследовании пептидных продуктов на трех различных сорбентах и подобраны оптимальные условия разделения сложных смесей пептидов. Впервые проведена ВЭЖХ пептидных продуктов Galleria mellonella на сильном катеоните.

4. На основе МС/МС масс-спектров изученных пептидных продуктов идентифицированы как известные антимикробные пептиды, так и не описанные ранее в литературе. Масс-спектрометрически установлена аминокислотная последовательность впервые обнаруженных антимикробных пептидов.

5. Сочетание хроматографических и масс-спектрометрических данных позволило подробно изучить состав различных пептидных смесей, прошедших разную пробоподготовку. Показано, что в пептидной смеси, полученной без иммунизации, содержатся три известных антимикробных пептида, а в пептидных смесях, полученных после обработки 1.1-диметилгидразином (НДМГ) и его производным, бактериями В. cereus, детектированы все известные антимикробные пептиды Galleria mellonella и ряд не описанных ранее.

Практическая значимость:

Хроматографическое выделение антибактериальных пептидных продуктов может являться альтернативой многостадийному пептидному синтезу, а совершенствование данных процессов и разработка стандартизированных методик могут стать основой для препаративного, а в перспективе и промышленного выделения и создания лекарственных средств.

Изучение действия токсичных компонентов ракетного топлива (НДМГ) на биологические организмы является важной практической задачей. Использование для таких испытаний модельного организма Galleria mellonella может внести существенный вклад в понимание механизмов токсического действия и в разработку средств повышения безопасности жизнедеятельности.

Цель и задачи исследований:

Целью работы являлось установление закономерностей хроматографиче-ского удерживания антимикробных пептидов Galleria mellonella, полученных с помощью иммунных реакций, в условиях метода ВЭЖХ и выбор оптимальных условий разделения и идентификации, с использованием хромато-масс-спектрометрии.

Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:

1. Определить физико-химические характеристики удерживания исследуемых пептидов (фактора удерживания, разности дифференциальных мольных энергий Гиббса). Оценить соответствие хроматографического поведения пептидов закономерностям двух наиболее надежных подходов к описанию их удерживания в условиях градиентной обращённо-фазовой (ОФ) ВЭЖХ.

2. Определить условия проведения иммунизации Gallería mellonella для получения пептидных смесей с высоким содержанием антибактериальных пептидов.

3. Разработать методологию хроматографического разделения смесей индуцированных пептидов, используя разные режимы и сорбенты; подобрать параметры хроматографического разделения.

4. Масс-спектрометрически идентифицировать антимикробные пептиды. Изучить фрагментацию антибактериальных пептидов методом МАЛДИмс/мс.

5. На основании данных хроматографического и масс-спектрометрического исследования разных пептидных смесей разработать методику определения их состава.

6. Провести антибактериальное тестирование, выявить активные пептиды среди всех полученных фракций и разработать способ идентификации охарактеризованных пептидных продуктов, не предполагающий обязательного проведения антимикробного теста.

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Федоткина (Срибная), Олеся Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Определены физико-химические характеристики удерживания исследуемых антибактериальных пептидов (фактор удерживания, разности дифференциальных мольных энергий Гиббса). Показано, что для ряда антибактериальных пептидов наблюдается удовлетворительная корреляция между расчетными и экспериментальными временами удерживания.

2. Определены условия проведения иммунизации Gallería mellonella и получения пептидных смесей с высоким содержанием антибактериальных пептидов: твердофазная экстракция с использованием картриджа Sep-Pak С18.

3. Подобраны условия разделения антибактериальных пептидов при разных хроматографических режимах с использованием различных сорбентов. Показано, что антибактериальные пептиды следует разделять на катионообменных и обращенно-фазовых силикагелевых сорбентах.

4. Проведена идентификация антимикробных пептидов методом масс-спектрометрии МАЛДИ-МС/МС. Идентифицированы 20 известных антимикробных пептидов и 22 не описанных ранее, для которых установлены аминокислотные последовательности.

1. Установленные физико-химические закономерности хроматографического разделения и масс-спектрометрическая идентификация пептидных продуктов разных пептидных смесей позволили охарактеризовать пептидный состав, детектировать появление не известных ранее пептидных компонентов (94 пептида), установить постоянно присутствующие в гемолимфе Gallería mellonella пептиды (5 пептидов) и выявить пептиды, индукция которых не зависит от варианта иммунизации (7 пептидов).

БЛАГОДАРНОСТИ

Осуществление данной работы оказалось возможным благодаря помощи многих людей, которым автор выражает свою глубокую признательность.

Автор искренне благодарен своему научному руководителю, заведующему кафедрой органической, биоорганической и медицинской химии СамГУ, заслуженному деятелю науки и техники Пурыгину Петру Петровичу.

Хотелось бы также выразить благодарность Кленовой Наталье Анатольевне, профессору кафедры биохимии СамГУ, оказавшей существенную помощь при анализе антимикробной активности.

Большое спасибо Серебряковой Марине Васильевне, специалисту по масс-спектрометрии из Института физико-химической медицины РАМН за обучение базисным методам и непосредственное участие в проведении исследования.

Особую благодарность автор адресует профессору Буряку Алексею Константиновичу, заведующему лабораторией физико-химических основ хроматографии и хромато-масс-спектрометрии ИФХЭ РАН, в которой была выполнена основная экспериментальная часть диссертационной работы; творческая и доброжелательная атмосфера этой лаборатории очень помогла автору при прове- -дении исследований и написании работы. Автор благодарит также сотрудников лаборатории ИФХЭ РАН за обучение методам лабораторной работы и организационную помощь.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выбранные нами объекты исследования - антимикробные пептиды являются сложными веществами для проведения физико-химических исследований из-за гетерогенной и полярной природы, однако представляют интерес в силу потенциальной биологической ценности. Важность выделения антибактериальных пептидов из природных источников связана с тем, что синтетические их аналоги могут не обладать антимикробной активностью из-за отсутствия стабилизации активной конформации посттрансляционными модификациями (т.е. химическими модификациями на последней стадии процесса биосинтеза белка).

Исследование антибактериальных пептидов проводилось по нескольким направлениям: применялись различные хроматографические режимы и сорбенты, для каждого режима оценивались термодинамические и кинетические характеристики сорбции, на основании физико-химических свойств проводился поиск закономерностей разделения, и осуществлялся поиск соответствия хро-матографического поведения современным представлениям о механизме разделения на обращенной фазе в градиентном режиме.

В результате работы подобраны физико-химические условия эффективного разделения антимикробных пептидов, позволяющие их количественно выделить, на двух сорбентах (на силикагеле С18 и сильном катионите). Показано, что применяемые в работе хроматографические режимы не позволяют провести элюирование антибактериальных пептидов с поверхности пористого графити-рованного углерода, поскольку теплоты адсорбции этих пептидов очень велики. Данный вывод подтверждается теоретическим расчетом и экспериментом. Сделано предположение, что разделение может быть достигнуто при переводе пептидов в глобулярную форму.

Полученные в работе корреляционные зависимости отражают закономерности хроматографического поведения сорбатов, а также связь удерживания и первичных структур антибактериальных пептидов.

В работе комплексно решена задача разделения и определения антибактериальных пептидов в составе сложных смесей. Решение этой задачи* основано на совместном использовании результатов хроматографических и масс-спектрометрических исследований и выборе оптимальных условий-разделения и пробоподготовки антибактериальных пептидных продуктов. По результатам работы предложен способ выделения и разделения антибактериальных пептидов, включающий в свою теоретическую часть определение значений физико-химических характеристик удерживания исследуемых антибактериальных пептидов (фактора удерживания, разности дифференциальных мольных энергий Гиббса), корреляционные зависимости между расчетными и реальными временами удерживания, зависимости, отражающие взаимосвязь структура-удерживание и порядок элюирования, а также данные о масс-спектрометрической фрагментации в условиях получения одномерных масс-спектров и масс-спектров МС/МС.

Созданный нами способ выделения антибактериально активных фракций позволяет получать достаточные количества пептидов из этих фракций для проведения широкомасштабных исследований их физико-химических и биолог гических свойств. Результаты проведенных исследований позволяют говорить о том, что разработаны физико-химические основы разделения и идентификации пептидных продуктов с антибактериальными свойствами на примере Galleria mellonella.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Федоткина (Срибная), Олеся Сергеевна, 2010 год

1. Bulet P., Stocklin R., Menin L. Antimicrobial peptides: from invertebrates to vertebrates // Immunol. Rev. 2004. V. 198. - P. 169-184.

2. Bulet P., Dimarcq J. L., Hetru C., Lagueux M., Charlet M., Van Dorsselaer A., Hoffmann, J. A. A novel inducible antibacterial peptide of Drosophila carries a O-glycosylated substitution I I J. Biol Chem. 1993. - V. 268 (14). - P. 893-897.

3. Cociancich S., DuPont A., HCgy G., Lanot R., Holder F., Hetru C., Hoffinann J. A., Bulet P. Novel inducible antibacterial peptides from a hemipteran insect Pyrrhocorls apterus // Biochem. J. 1994. - V. 300. - P. 567-575.

4. Dimarcq J.L., Hoffmann D., Metster M Bulet P., Lanot R., Reichhart J.M., Hoffinann J. A. Characterization and transcriptional profiles of a Drosophila gene encoding an insect defensin // Eur. J. Biochem. 1994. - V. 221. - P. 201-209.

5. Kamysz W., Okroj M., Lempicka E., Ossowski T., Lukasiak J. Fast and efficient purification of synthetic peptides by solid-phase extraction // Acta Chromatographica. -2004.-V. 14. P. 180-186.

6. Selsted M. E., Miller S. I., Henschen A. H., Ouellette A. J. Enteric defensins: antibiotic peptide components of intestinal host defense // J Cell Bio. 1992. - V. 118. - P. 929-936.

7. Harwig S. S. L., Ganz T., Lehrer R. I. Neutrophil defensins purification, characterization, and antimicrobial testing // Meth. in Enzymol. 1994. - V. 236. - P. 160-172".

8. Boman H. G. Peptide antibiotics and their role in innate immunity // Annu. Rev Immunol. 1995. - V. 13. - P. 62-92.

9. Martin E., Ganz T., Lehrer R. I. Defensins and other endogenous peptide antibiotics of vertebrates // J. Leukocyte Biol. 1995.- V. 58.- P. 128-136.

10. Ganz T., Selsted M. E., Szklarek D., Harwig S. S. L., Daher K., Bamton D. F., Lehrer R. I. Defensins. Natural peptide antibiotics of human neutrophils // Z Chn. Invest. 1985. - V. 76. - P. 1427-1435.

11. Lee J. -Y ., Boman A., Chuanxm S., Andersson M., Jornvall H., Mutt V., and Boman H. G. Antibacterial peptides from pig intestine: Isolation of a mammalian cecro-pin // Proc Nat. Acad Sci USA. 1989. - V. 86. - P. 9159-9162.

12. Zasloff M., Magainins, a class of antimicrobial peptides from Xenopus skin. Isolation, characterization of two active forms, and partial cDNA sequence of a precursor // Proc. Nat. Acad. Set USA. 1987. - V. 84. - P. 5449-5453.

13. Gennaro R., Skerlava J.B., Romeo D. Purification, composition, and activity of two bacterecins, antibacterial peptides of bovine neutrophils // Infect. Immun. 1989. -V. 57.-P. 3142-3146.

14. Ouellette A.J., Hsreh M.M., Nosek M.T., Cano-Gauci D.F., Huttner K.M., Buick R.N., Selsted M.E. Mouse paneth cell defensins primary structures and antibacterial activities of numerous cryptdm isoforms // Infect Immun. 1994 - V. 62 - P. 5040-5047.

15. Selsted M.E., Szklarek D., Lehrer R.I. Purification and antibacterial activity of antimicrobial peptides of rabbit granulocytes // Infect. Immun. 1984. - V.45. - P. 150154.

16. Ersenhauer P.B., Harwig S.S., Szklarek D., Ganz T., Selsted M.E., Lehrer R.I. Purification and antimicrobial properties of three defensins from rat neutrophils // Infect. Immun. 1989. - V. 57. - P. 2021-2027.

17. Selsted M.E., Brown D.M., De Lange R.J., Lehrer R.I. Primary structures of MCP-1 and MCP-2, natural peptide antibiotics of rabbit lung macrophages // J Biol. Chem. 1983.-Y. 258 (14).-P. 485-489.

18. Schonwetter B.S., Stolzenberg E.D., Zasloff M.A. Epithelial antibiotics induced at sites of inflammation // Science. 1995. -V. 267. - P. 1645-1648.

19. Harwig S.L., Swiderek K.M., Kokryakov V.N., Tan L., Lee T.D:, Panyutich E.A., Aleshma G.M., Shamova O.V., Lehrer R.I. Gallmacins cysteine-rich antimicrobial peptides of chicken leukocytes // FEBS Lett. 1994. - V. 342. - P. 281-285.

20. Hultmark D., Steiner H., Rasmuson Т., Boman H.G. Purification and properties of three inducible bactericidal proteins from hemolymph of immunized pupae of Hyalo-phora cecropia 11 Eur. J Biochem Insect immunity. 1980. - V. 106. - P. 7-16.

21. Romeo D., Skerlava J.B., Bolognesi M., Gennaro R. Structure and bactericidal activity of an antibiotic dodecapeptide purified from bovine neutrophils // J Biol. Chem. — 1988.- V. 263,- P. 9573-9575.

22. Selsted M.E., Novotny M.J., Morris W.L., Tang, Y.-Q., Smith W., Cullor J.S. In-dolicidin, a novel bactericidal tridecapeptide amide from neutrophils // J. Biol Chem. -1992. V. 267. - P. 4292 - 4295.

23. Mendol S., Faustinol N.A., Sarmentol A.C., Amado F., Moir A.J. Purification and characterization of a new peptide antibiotic produced by a thermo tolerant Bacillus li-cheniformis strain I I Biotechnology Letters. 2004. - V. 26. - P. 115-119.

24. Grande C., Falcon M.S., Perez-Lamela C., Cornesana M.R., Gandara J.S. Quantitative Analysis of Colistin and Tiamulin in Liquid and Solid Medicated Premixes by HPLC with Diode-Array Detection // Chromatographia. 2001. - V. 53. Suppl. - P. 460-463.

25. Guo D., Mant C.T., Hodges R.S. Effects of ion-pairing reagents on the prediction of peptide retention in reversed-phase high performance liquid chromatography // J. Chrom. 1987. - V. 386. - P. 205-222.

26. Щатц В.Д., Сахартова O.B. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. Рига: Зинат-не.-1988.-390 с.

27. Guiochon G., Mriziq К., Shalliker R.A. Implementations of two-dimensional liquid chromatography // Journal of Chromatography A. 2008.- V. 1189.- P. 109-168.

28. Roller A., Washburn M. P., Lange В. M., Andon N.L., Deciu C., Haynes P. A., Hays L., Schieltz D., Ulaszek R., Wei J., Wolters D., Yates J.R. Proteomic survey of metabolic pathways in rice // Plant biology. 2002- V. 99 (18). - P. 11969-11974.

29. Mikulikova K., Miksika I., Deyl Z. Non-enzymatic posttranslational modifications of bovine serum albumin by oxo-compounds investigated by chromatographic and elec-trophoretic methods // Journal of Chromatography B. 2005.- V. 815.- P. 315-3 31.

30. Lasserre J.-P., Nicaud J.-M., Pagot Y., Joubert-Caron R., Caron M., Hardouin J. First complexomic study of alkane-binding protein complexes in the yeast Yarrowia li-polytica II Talanta. 2010. - V. 80. - P. 1576-1585.

31. Gardner J.G., Grundy F.J., Henkin T.M., Escalante-Semerena J.C. Control of Acetyl-Coenzyme A Synthetase (AcsA) Activity by Acetylation/Deacetylation without NAD-Involvement in Bacillus subtilis II J. of Bacteriology. 2006. - V. 188 (15).- P. 5460-5468.

32. Trusch M., Bohlick A., Hildebrand D., Lichtner B., Bertsch A., Kohlbacher O., Bachmann S., Schluter H. Application of displacement chromatography for the analysis of a lipid raft proteome II Journal of Chromatography B. 2010. - V. 878. - P. 309-314.

33. Zachertowska A., Brewer D., Evans D.H. MALDI-TOF mass spectroscopy detects the capsid structural instabilities created by deleting the myxoma virus cupro-zinc SOD1 homolog M131R // Journal of Virological Methods. 2004. - V. 122. - P. 63-72.

34. Xiao N., Yu Y. B. Separation of fluorinated amino acids and oligopeptides from their non-fluorinated counterparts using high-performance liquid chromatography // Journal of Fluorine Chemistry. 2010. - V. 131. - P. 439^45.

35. Stoll D. R., Li X., Wang X., Carr P. W., Porter S. E., Rutan S.C. Fast, comprehensive two-dimensional liquid chromatography // Journal of Chromatography A. 2007 — V. 1168.-P. 3-43.

36. Zahariev S., Guarnaccia C., Pongor C.I., Quaroni L., Cemazar M., Pongora S. Synthesis of 'difficult' peptides free of aspartimide and related products, using peptoid methodology // Tetrahedron Letters. 2006. - V. 47. - P. 4121-4124.

37. Ho S.V., Mc Laughlin J.K., Thomas K.E., Suda E., Herberg J.T., Dufield R.L., Hunter A.K. Reaction kinetics and optimization of the copper-catalyzed oxidation of ApoA-lM // Chemical Engineering Science. 2009. - V. 64 (11). - P. 2623-2630.

38. Sirtori E., Resta D., Brambilla F., Zacherl C., Arnoldi A. The effects of various processing conditions on a protein isolate from Lupinus angiistifolius I I Food Chemistry. 2010. - V. 120. - P. 496-504.

39. Mandal S.M., Dey S., Mandal M., Sarkar S., Maria-Neto S., Franco O.L. Identification and structural insights of three novel antimicrobial peptides isolated from green coconut water // Peptides. 2009. - V. 30. - P. 633-637.

40. Ahmad C., Natascha C., Haiqin C., Jianxin Z., Jian T., Hao Z., Wei C. Bifidin I. A new bacteriocin produced by Bifidobacterium infantis BCRC 14602: Purification and partial amino acid sequence I I Food Control. 2010. - V. 21. - P. 746-753.

41. Shibue M., Mant C.T., Hodges R.S. Effect of anionic ion-pairing reagent concentration (1-60 mM) on reversed-phase liquid chromatography elution behavior of peptides // Journal of Chromatography A. 2005.- V. 1080.- P. 58- 67.

42. Careri M., Mangia A. Analysis of food proteins and peptides by chromatography and mass spectrometry // Journal of Chromatography A. 2003. - V. 1000. - P. 609635.

43. Prata-Vidal M., Bouhallab S., Henry G., Aimar P. An experimental study of case in o macropeptide hydrolysis by trypsin in a continuous membrane reactor // Biochemical Engineering Journal. 2001. - V. 8. - P. 195-202.

44. Nemeth-Kiss V., Forgacs E., Cserhati T. Anomalous retention behavior of peptides on porous graphitized carbon column // J. Chromatogr. A. 1997. - V. 776. - P. 147-152.

45. Nazir T., Gould L. A., Marriott C., Martin G.P., Brown M.B. High Performance Liquid Chromatography of a Cyclosporin A Formulation on a Porous Graphitic Carbon Column // Chromatographia. 1997. V. 46 (11/12). - P. 628-636.

46. Antibacterial Peptide Protocols. In Methods in Molecular Biology / edited by W.M. Shafer. Totowa: Humana Press, 2007. V. 78. - 250 p.

47. Stanton P. Ion-Exchange Chromatography. In HPLC of peptides and proteins: methods and protocols / edited by Marie-Isabel Aguilar // Methods in molecular biology. Humana Press. 2004. 251 p.

48. Snyder L.R., Kirkland J.J., Glajch J.L. Practical HPLC. Method Development, 2nd edn, Wiley-Interscience, New York. 1997.

49. Cin M.D., Davalli S., Marchioro C., Passarini M., Perini O., Provera S., Zaramel-laet A. Analytical methods for the monitoring of solid phase organic synthesis // I Farmaco. 2002. - V. 57. - P. 497-510.

50. Klampfl C.W. Review coupling of capillary electrochromatography to mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2004. - V. 1044. - P. 131-144.

51. Mirzaei H., Regnier F. Identification and quantification of protein carbonylation using light and heavy isotope labeled Girard's P reagent // J. Chromatogr. A. 2006. -V. 1134.-P. 122-133.

52. Hubbard B. K., Chen H., O'Connor S.E., Walsh C.T. Formation of Hydroxy His-tidine in the Biosynthesis of Nikkomycin // Antibiotics Chemistry & Biology. 2002. -V. 9.-P. 103-112.

53. Hesse A.M., Marcelo P., Rossier J., Vinh J. Simple and universal tool to remove on-line impurities in mono- or two-dimensional liquid chromatography-mass spectrometry analysis // Journal of Chromatography A. 2008.- V. 1189 - P. 175-182.

54. Lichtenstein A., Ganz T., Selsted M.E., Lehrer R.I. In vitro tumor cell cytolysis mediated by peptide defensins of human and rabbit granulocytes // Blood. 1986. - V. 68.-P. 1407-1410.

55. Bianco L., Lopez L., Scalone A.G., Di Carli M., Desiderio A., Benvenuto E., Per-rotta G. Strawberry proteome characterization and its regulation during fruit ripening and in different genotypes // J. of Proteomics. 2009. - V. 72. - P. 586 - 607.

56. Liu C., Zhang X. Multidimensional capillary array liquid chromatography and matrix-assisted laser desorption/ionization tandem mass spectrometry for high-throughput proteomic analysis // J. Chromatogr. A. 2007. V. 1139. - P. 191-198.

57. Nagele E., Vollmer M., Horth P. Two-dimensional nano-liquid chromatography-mass spectrometry system for applications in proteomics // J. Chromatogr. A. 2003. V. 1009.-P. 197-205.

58. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии: Пер. с англ. / Под ред. А. Хеншен и др.- М.: Мир, 1988. 688 с.

59. Hanai Т. HPLC: A Practical Guide // Health Research Foundation, Kyoto, Japan. 1999.-P. 144.

60. Meek J.L. Prediction of peptide retention times in high pressure liquid chromatography on the basis of amino acid composition // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. -V. 11.-P. 1632-1636.

61. Meek J.L., Rossetti Z.L. Factors affecting retention and resolution of peptides in high performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1981. V.211 (1). - P. 1528.

62. Su S.J., Grego B., Niven B., Hearn M.T. Analysis of Group retention contributions for peptides separated by reversed-phase high performance liquid chromatography // J. Liq. Chromatogr. 1981. V. 4. - P. 1745-1764.

63. Wilson K.J., Honegger A., Slottzel R.P., Hughes G.H. The behavior of peptides on reversed phase supports during high pressure liquid chromatography // Biochem. J.1981.- 199 (31).

64. Browne C.A., Bennett H.P., Solomon S. The isolation of peptides by highperformance liquid chromatography using predicted elution positions // Anal. Biochem.1982.-V. 124.-P. 201-208.

65. Sasagawa T., Okuyama T., Teller D.C. Prediction of peptide retention times in reversed phases high performance liquid chromatography during linear gradient elution // J. Chromatogr. 1982. V. 240 (2). - P. 329-340.

66. Sasagawa T., Ericsson L.H., Teller D.C., Titani K., Walsh K.A. Separation of peptides on a polystyrene resin column // J. Chromatogr. 1984. V. 307. - P. 29-38.

67. Sakamoto Y., Kawakami N., Sasagawa T. Prediction of peptide retention times // J. Chromatogr. 1988. V. 442. - P. 69-79.

68. Mant C.T., Burke T.W., Black J.A., Hodges R.S. Effect of peptide chain length on peptide retention behavior in reversed-phase chromatography // J Chromatogr. 1988. V. 458.-P. 193-205.

69. Тарасова А.И., Зубарев P.A., Голобородько AA, Горшков A.B., Горшков М.В. Идентификация пептидов по хромато-масс-спектрометрическим данным с использованием расчета времен удерживания // Масс-спектрометрия, 2008. Т. 5 (№. 1). - С. 7-22.

70. Scott P.W., Cases J. Chromatography Theory // Marcel Dekker, Inc. New Jork. -2002. P. 475.

71. Palmblad M., Ramstrom M., Markides K.E., Hakansson P., Bergquist J. Prediction of Chromatography Retention and Protein Identification in Liquid Chromatography/Mass Spectrometry // Anal. Chem. 2002. V. 74. - P. 5826-5830.

72. Palmblad M., Ramstrom M., Bailey C.G., Mc-Cutchen-Maloney S.L., Bergquist J., Zeller L.C. Protein identification by liquid chromatography using retention time prediction // J. Chromatogr. B. 2004.- V. 803. P. 131-135.

73. Baczek T., Wiczling P., Marszall M., Heyden Y.V., Kaliszan R. Prediction of peptide retention at different HPLC conditions from multiple linear regression models // J Proteome Res. 2004. V. 3. - P. 555-63.

74. Prediction of retention volumes and UV spectra of peptides in reversed phase HPLC // Russ. J. Bioorg. Chem. 2006. V. 32. - P. 50-56.

75. Klammer A.A., Yi X., Mac Coss M.J., Noble W.S. Peptide retention time prediction yields improved tandem mass spectrum identification for diverse chromatography conditions // Recomb. 2007. P. 459^172.

76. Буряк A.K. Применение молекулярно-статистических методов расчета термодинамических характеристик адсорбции при хромато-масс-спектрометрической идентификации органических соединений // Успехи химии. 2002. Т. 71. - № 8. -С. 788-800.

77. Mann M., Hendrickson R., Pandey A. Analysis of proteins and proteomes by mass spectrometry // Annu. Rev. Biochem. 2001. V. 70. - P. 437-473.

78. Лебедев A.T. Масс-спектрометрия в органической химии M.: Бином. Лаборатория знаний. 2003. 493 с.

79. Hillenkamp F., Karas M., Beavis R.C., Chait B.T. Matrix-assisted laser desorp-tion/ionization mass spectrometry of biopolymers // Anal. Chem. 1991. V. 63 (24). -P. 1193-1203.

80. Karas M., Kriiger R. Ion Formation in MALDI: The Cluster Ionization Mechanism // Chem. Rev. 2003. V. 103 (2). - P. 427-439.

81. Fenn J.B., Mann M., Meng C.K., Wong S.F. Whitehouse C.M. Electrospray ioni-zation-principles and practice // Mass Spectrom. Rev. 1990. -V. 9 (1). P. 37-70.

82. Hjerno K., Jensen O.N. MALDI-MS in Protein Chemistry and Proteomics. In: Hillenkamp F., Katalinic, J-P., editors. MALDI MS. A Practical Guide to Instrumentation, Methods and Applications // Munster: Wiley-vch. 2007. P. 83-104.

83. Jonscher K.R. and Yates J.R., 3rd. The quadrupole ion trap mass spectrometer a small solution to a big challenge // Anal Biochem. 1997. V. 244 (1). - P. 1-15.

84. Burlingame A.L., Boyd R.K., Gaskell S.J. Mass Spectrometry // Anal. Chem. 1994. -V.66 (12).-P. 634-683.

85. O'Connor P. B., Hillenkamp F. MALDI Mass Spectrometry Instrumentation. In: Hillenkamp F., Katalinic, J-P., editors. MALDI MS. A Practical Guide to Instrumentation, Methods and Applications // Münster: Wiley-vch. 2007. P. 29-75.

86. Karas M., Bachmann D., Hillenkamp F. Influence of the wavelength in high-irradiance ultraviolet laser desorption mass spectrometry of organic molecules // Anal. Chem. 1985. V. 57. - P. 2935-2939.

87. Hillenkamp F. Laser desorption mass spectrometry. A review. In: A. Benninghoven, R.J. Colton, D.S. Simons, H.W. Werner (Eds.), Secondary Ion Mass Spectrometiy SIMS V // Springer Series in Chemical Physics. 1986. V. 44. - P. 471-475.

88. Karas M., Hillenkamp F. Laser desorption ionization of proteins with molecular masses exceeding 10000 daltons // Anal. Chem. 1988. V. 60. - P. 2299-2301.

89. Deisewerd K. The desorption process in MALDI // Chem. Rev.2003. V. 103.-P. 395-425.

90. Knochenmuss R., Zenobi R. MALDI ionization: The role of in-plume processes // Chem. Rev.2003. V. 103. - P.441-452.

91. Jensen O.N., Mortensen P., Vorm O., Mann M. Automation of matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry using fuzzy logic feedback control // Anal. Chem. 1997.-V. 69.-P. 1706-1714.

92. Vorm O., Roepstorff P., Mann M. Improved resolution and very high sensitivity in MALDI TOF of matrix surfaces made by fast evaporation // Anal. Chem. 1994. V. 66.-P. 3281-3287.

93. Yu-Chie C. In Situ Determination of Organic Reaction Products by Combining Thin Layer Chromatography with Surface-assisted Laser Desorption/ionization Time-offlight Mass Spectrometry // Rapid Commun. Mass Spectrom. 1999. V. 13. - P. 821— 825.

94. Wan E. Chun-hong H.C., Wai-mei Sin D., Wong Yiu-Chung. Detection of residual bacitracin A, colistin A, and colistin B in milk and animal tissues by liquid chromatography tandem mass spectrometry // Anal Bioanal. Chem., 2006. V. 385. - P. 181188.

95. Gimon-Kiusel H., Preston-Schaffter L.M., Kinsel G.R., Russell D.H. Effects of Matrix Structure/Acidity on Ion Formation in Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass Spectrometry // J. Am. Chem. Soc. 1997. V. 119 (10). - P. 2534-2540.

96. Katayama H., Nagasu T., Oda Y. Improvement of in gel digestion protocol for peptide mass fmgeiprinting by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2001. V. 15. - P. 1416-1421.

97. Rappsilber J., Ishihama Y., Mann M. Stop and go extraction tips for matrixassisted laser desorption/ionization, nanoelectrospray, and LC/MS sample pretreatment in proteomics // Anal. Chem. 2003. V. 75. - P. 663-670.

98. Gliickmann M., Pfenniger A. at all. Mechanisms in MALDI analysis: surface interaction or incorporation of analytes? // International Journal of Mass Spectrometry. 2001.-V.210/211.-P. 121-132.

99. Strumpet K., Karas M., Hillenkamp F. 2.5-Dihydroxybenzoic acid: a new matrix for laser desorption-ionization mass spectrometry // Int. J. Mass Spectrom. Ion Processes. 1991.-V. 111.-P. 89-102.

100. Strupat K., Kampmeier J., HornefFer V. Investigations of 2.5-DHB and succinic acid as matrices for UV and IR MALDI // Intern. J. of Mass Spectroscopy and ion Processes. 1997. V. 169. - P.43-50.

101. Allwood D.A., Dreyfus R.W., Perera I.K. Optical absorption of matrix compounds for laser-inducted desorption and ionization (MALDI) // Applied Surface Science. 1997.-V. 109/110.-P. 154-157.

102. Meier M.A., Adams N., and Schubert U.S. Statistical approach to understand maldi-tof ms matrices: discovery and evaluation of new maldi matrices // Anal. Chem. 2007.-V. 79.-P. 863-869.

103. Beavis R.C., Chait B.T. Matrix-assisted laser desorption ionization mass-spectrometry of proteins // Methods Enzymol. 1996. V. 270. - P. 519-551.

104. Cohen S.L., Chait B.T. Influence of matrix solution conditions on the MALDI-MS analysis of peptides and proteins //Anal. Chem. 1996. -V. 68. P. 31-37.

105. Beavis R.C., Chait B.T. Rapid, sensitive analysis of protein mixtures by mass spectrometry // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. - P. 6873-6877.

106. Kussmann M., Roepstorff P. Sample preparation techniques for peptides and proteins analyzed by MALDI-MS // Methods Mol. Biol. 2000. V. 146. - P. 405-424.

107. Laugesen S., Roepstorff P. Combination of two matrices results in improved performance of MALDI-MS for peptide mass mapping and protein analysis // J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2003. V. 14. - P. 992-1002.

108. Kjellstrom S., Jensen O.N. In situ liquid-liquid extraction as a sample preparation method for matrix-assisted laser desorption/ionization MS analysis of polypeptide mixtures // Anal. Chem. 2003. V. 75. - P. 2362-2369.

109. Sunner J., Dratz E., Chen Yu-Chie. Graphite surface-assisted laser desorp-tion/ionization time-of-flight mass spectrometry of peptides and proteins from liquid solutions // Anal. Chem. 1995. -V. 67 (23). P. 4335-4342.

110. Beavis R.C., Bridson J.N. Epitaxial protein inclusion in sinapic acid crystals // Appl. Phys. 1993. -V. 26. P. 442-447.

111. Horneffer V. Matrix-Analyt-Wechelwirkungen bei der Matrix-Unterstutzten Laser desorptions/ionisations Mass spektrometrie (MALDI-MS). Dissertation, University of Munster. 2002.

112. Hillenkamp, F. Karas, M. The MALDI Process and Method. In: Hillenkamp F., Ka-talinic, J-P., editors. MALDI MS. A Practical Guide to Instrumentation, Methods and Applications // Münster: Wiley-vch. 2007. P. 1-23.

113. Schuerenberg M., Luebbert C., Eickhoff H., Kalkum M., Lehrach H., Nordhoff E. Prestructured MALDI-MS sample supports // Anal. Chem. 2000.- V. 72 P. 34363442.

114. Woods A.S., Huestis M.A. A Study of Peptide-Peptide Interaction by MatrixAssisted Laser Desorption/Ionization // J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2001. V. 12. - P. 88-96.

115. Krause E., Wenschuh H., Jungblut P.R. The dominance of arginine-containing peptides in MALDI-derived tryptic mass fingerprints of proteins // Anal. Chem. 1999. -V. 71.-P. 4160-4165.

116. Aebersold R., Goodlett D.R. Mass spectrometry in proteomics // Chem. Rev 2001. -V. 101 (2).-P. 269-95.

117. Chaurand P., Lützenkirchen F., Spengler B. Peptide and protein identification by matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) and MALDI-post-source decay time-of-flight mass spectromeüy // J Am Soc Mass Spectrom. 1999. V. 10 (2). - P. 91-103.

118. Jensen O.N., Podtelejnikov A., Mann M. Delayed extraction improves specificity in database searches by matrix-assisted laser desorption/ionization peptide maps // Rapid Commun. Mass Spectrom. 1996. -V. 10. P. 1371-1378.

119. Артеменко К.А., Самгина Т.Ю., Лебедев A.T. Масс-спектрометрическое de novo секвенирование пептидов // Масс-спектрометрия. 2006- Т. 3 (4).- С. 225254.

120. Suckau D., Resemann A., Schuerenberg М., Hufhagel P., Franzen J., Holle A. A novel MALDI lift-TOF/TOF mass spectrometer for proteomics // Anal. Bioanal. Chem. 2003. V. 376. - P. 952-965.

121. Papayannopoulos I. A., The interpretation of collision-induced dissociation tandem mass spectra of peptides // Mass Spectrom. Rev. 1995. V.14 (1). - P. 49-73.

122. Johnson R.S., Martin S.A., Biemann K. Collision-induced fragmentation of (M+H)+ ions of peptides side-chain specific sequence ions // Int. J. Mass Spectrom. Ion Processes. 1988.-V. 86.-P. 137-154.

123. Qin J., Chait B.T. Preferential fragmentation of protonated gas-phase peptide ions adjacent to acidic amino acid residues // J. Am. Chem. Soc. 1995. V. 117. - P. 54115412.

124. Wysocki V.H., Tsaprailis G., Smith L.L., Breci L.A. Mobile and localized protons: a framework for understanding peptide dissociation // J. Mass Spectrom. 2000. V. 35.-P. 1399-1406.

125. Keough Т., Youngquist R.S., Lacey M.P. Sulfonic acid derivatives for peptide sequencing // Anal. Chem. 2003. V. 75. - P. 156-165.

126. Мильман Б.Л. Введение в химическую идентификацию. СПб.: ВВМ, 2008. -180 с.

127. James P., Quadroni М., Carafoli Е., Gonnet G. Protein identification by mass profile fingerprinting // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. V. 195. - P. 58-64.

128. Mann M., Hojrup P., Roepstorff P. Use of mass spectrometric molecular weight information to identify proteins in sequence databases // Biol. Mass Spectrom. 1993. -V. 22.-P. 338-345.

129. Pappin D.J., Hojrup P., Bleasby A.J. Rapid identification of proteins by peptide-mass fingerprinting // Curr. Biol. 1993. V. 3. - P. 327-332.

130. Jensen O.N., Larsen M.R., Roepstorff P. Mass spectrometric identification and microcharacterization of proteins from electrophoretic gels: Strategies and applications // Proteins Structure Function Genet. 1998. V. 2. - P. 74-89.

131. Kinter M. Protein Sequencing and Identification Using Tandem Mass Spectrometry. New Jork: Wiley-vch. 2000.

132. Sechi S. Quantitative Proteomics by Mass Spectrometry. Totowa: Humana Press, 2007.-218 p.

133. Schroder J. M. Epithelial peptide antibiotics // Biochem. Pharmacol. 1999. V. 57.-P. 121-134.

134. Harder J., Bartels J., Christophers E., Schroder J.M. A peptide antibiotic from human skin // Nature. 1997. V. 387. - P. 861.

135. Stolzenberg E.D., Anderson G.M., Ackermann M.R., Whitlock R.H., Zasloff M. Epithelial antibiotic induced in states of disease // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. -V. 94.-P. 8686-8690.

136. Murphy C.J., Foster B.A., Mannis M.J., Selsted M.E., Reid T.W. Defensins are mitogenic for epithelial cells and fibroblasts // J. Cell Physiol. 1993. V. 155. - P.408-413.

137. Schroder J.M. Epithelial antimicrobial peptides: innate local host response elements // Cell Mol. Life Sci. 1999. V. 56. - P.32-46.

138. Li J., Post M., Volk R., Gao Y., Li M., Metais C., Sato K., Tsai J., Aird W., Rosenberg R. D., Hampton T. G., Sellke F., Carmeliet P., Simons M. PR-39, a peptide regulator of angiogenesis // Nat. Med. 2000.- V. 6.- P. 49-55.

139. Huang H. J., Ross C. R., Blecha F. Chemo attractant properties of PR-39, a neutrophil antibacterial peptide // J. Leukoc. Biol. 1997. V. 61. - P. 624-629.

140. Yang D., Chertov O., Oppenheim J.J. The role of mammalian antimicrobial peptides and proteins in awakening of innate host defenses and adaptive immunity // Cell Mol. Life Sci. 2001. -V. 58. P. 978-989.

141. Bulet P, Hetru C, Dimarcq J.L, Hoffmann D. Antimicrobial peptides in insects; structure and function // Dev Comp Immunol. 1999. V. 23. - P. 329-44.

142. Matsuzaki K. Why and how are peptide-lipid interactions utilized for self-defense? Magainins and tachyplesins as archetypes // Biochim Biophys Acta. 1999. V. 1462.-P. 1-10.

143. Yeaman M.R., Yount N.Y. Mechanisms of antimicrobial peptide action and resistance // Pharmacol Rev. 2003. V. 55. - P. 27-55.

144. Casteels P. Immune response in Hymenoptera. In: Brey P.T, Hultmark D., editors. Molecular mechanisms of immune responses in insects // London: Chapman & Hall. 1998.-P. 92-110.

145. Otvos J. L. The short proline-rich antibacterial peptide family // Cell Mol Life Sci. 2002.-V. 59.-P. 1138-50.

146. Brogden K.A., Ackermann M., Mc Cray J.P., Tack B.F. Antimicrobial peptides in animals and their role in host defences // Int J Antimicrob Agents. 2003. V. 22. - P. 465-78.

147. Lai R, Liu H., Hui Lee W., Zhang Y. An anionic antimicrobial peptide from toad Bombina maxima II Biochem Biophys Res Commun. 2002. V. 295. - P. 796-9.

148. Chen H.M., Wang W., Smith D., Chan S.C. Effects of the antibacterial peptide cecropin B and its analogs, cecropins B1 and B2, on liposomes, bacteria and cancer cells // Biochim Biophys Acta. 1997. V. 1336. - P. 171-179.

149. Moore A.J., Devine D.A., Bibby M.C. Preliminary experimental anticancer activity of cecropins // Pept Res. 1994. V. 7. - P.265-269.

150. Cruciani R.A., Barker J.L., Zasloff M., Chen H.C., Colamonici O. Antibiotic ma-gainins exert cytolytic activity against transformed cell lines through channel formation // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1991. V. 88. - P. 3792-3796.

151. Papo N., Shai Y. Host defense peptides as new weapons in cancer treatment // Cell Mol Life Sei. 2005. V. 62. - P. 784-90.

152. Boman H.G. Antibacterial peptides: basic facts and emerging concepts // J Intern Med. 2003.-V. 254.-P. 197-215.

153. Hetru C., Hoffmann D., Bulet P. Antimicrobial peptides from insects. In: Brey P.T., Hultmark D., editors. Molecular mechanisms of immune responses in insects. London: Chapman & Hall. 1998. P. 40-66.

154. Irving P., Troxler L., Hetru C. Is innate enough? The innate immune response in Drosophila II CR Biol. 2004. V. 327. - P. 557-570.

155. Tzou P., De Gregorio E., Lemaitre B. How Drosophila combats microbial infection: a model to study innate immunity and host-pathogen interactions // Curr Opin Microbiol. 2002. V. 5. - P. 102-110.

156. Boman H.G. Antibacterial peptides: key components needed in immunity // Cell. 1991.-V. 65.-P. 205-207.

157. Bulet P., Stocklin R. Insect antimicrobial peptides: structures, properties and gene regulation // Protein Pept. Lett. 2005. V. 12. - P. 3-11.

158. Jarosz J. Identification of immune inhibitor from Pseudomonas aeruginosa of inducible cell-free antibacterial activity in insects // Cytobios. 1997. -V. 89 P. 73-80.

159. Jarosz J., Glinski Z. Selective inhibition of cecropin-like activity of insect immune blood by protease from American foulbrood scales // J. Invertebr. Pathol. 1990. V. 56. -P. 143-149.

160. Lemaitre B., Reichhart J.M., Hoffmann J.A. Drosophila host defense: differential induction of antimicrobial peptide genes after infection by various classes of microorganisms // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1997. -V. 94. P. 14614-14619.

161. Barbault F., Landon C., Guenneugues M., Meyer J.P., Schott V., Dimarcq J. L., Vovelle F. Solution structure of Alo-3: a new knottin-type antifungal peptide from the insect Acrocinus longimanus II Biochemistry. 2003. V. 42. - P. 14434-14442.

162. Diamond G., Bevins C.L. beta-Defensins: endogenous antibiotics of the innate host defense response // Clin. Immunol. Immunopathol. 1998. V. 88. - P. 221-225.

163. Reeves E.P., Messina C.G., Doyle S., Kavanagh K. Correlation between gliotoxin production and virulence of Aspergillus fumigatus in Galleria mellonella II Mycopatho-logia. 2004. -V. 158. P. 73-9.

164. Leger R.J., Screen S.E., Shams-Pirzadeh B. Lack of host specialization in Aspergillus flavus II Appl. Environ Microbiol. 2000. V. 66. - P. 320-4.

165. Brennan M., Thomas D.Y., Whiteway M.3 Kavanagh K. Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae // FEMS Immunol Med Microbiol. 2002. V. 34. - P.153-157.

166. Cotter G., Doyle S., Kavanagh K. Development of an insect model for the in vivo pathogenicity testing of yeasts // FEMS Immunol Med Microbiol. 2000. V. 27. - P. 163-9.

167. Dunphy G.B., Oberholzer U., Whiteway M., Zakarian R.J., Boomer I. Virulence of Candida albicans mutants toward larval Galleria mellonella (Insect, Lepidoptera, Galleridae) // Can J Microbiol. 2003. V. 49. - P. 514-24.

168. Mylonakis E., Moreno R.E. Khoury J.B., Idnurm A., Heitman J., Calderwood S.B., et al. Galleria mellonella as a model system to study Cryptococcus neoformans pathogenesis. Infect Immun. 2005. V. 73. - P. 3842-50.

169. Kavanagh K., Reeves E.P. Exploiting the potential of insects for in vivo pathogenicity testing of microbial pathogens // FEMS Microbiol Rev. 2004. V. 28. - P. 101— 112.

170. Kim С., Lee J., Kim I., Seo S., Son S., Lee K., et al. Purification and cDNA cloning of a cecropin-like peptide from the great wax moth Gallería mellonella II Mol Cells. 2004.-V. 17.-P. 262-6.

171. Lee Y., Yun E., Jang W., Kim I., Lee J., Park S., et al. Purification, cDNA cloning and expression of an insect defensin from the great wax moth, Gallería mellonella И Insect Mol. Biol. 2004. V. 13. - P. 65-72.

172. Phipps D. Gallysin-1, an antibacterial protein isolated from hemolymph of Gallería mellonella II Dev. Сотр. Immunol. 1994. -V. 18 (1). P. 13-23.

173. Мак P., Chmiel D., Gacek G.J. Antibacterial peptides of the moth Gallería mellonella II J. Acta Biochimica Polonica. 2001. V. 4. - P. 1191-1195.

174. Cytrynska M., Мак P., Zdybicka-Barabas A., Suder P., Jakubowicz T. Purification and characterization of eight peptides from Gallería mellonella immune hemolymph //Peptides Rev. 2007.-V. 285.-P. 33-546.

175. Jarosz J. Simultaneous induction of protective immunity and selective Synthesis of hemolymph lysozyme protein in larvae of Gallería mellonella II Biol. Zentral. 1979. -V. 98-P.459-471.239. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/proteins/

176. Фролов Ю.П. Математические методы в биологии. ЭВМ и программирование: Теоретические основы и практикум. Самара: Самарский университет. 1997. -256 с.

177. Парамонов С.А., Ульянов А.В, Буряк А.К. Анализ 1.1-диметилгидразина в виде производных с изотиоционатами методом офф-лайн ВЭЖХ-МАЛДИ-МС // Сорбционные и хроматографические процессы, 2008. Т. 10. (Вып. 3) — С. 440449.

178. Султанов 3.3., Кулакова Л.С., Перепелица Л.Г., Абдулганиева С.К. Селективная питательная среда для выделения Bacillus cereus II Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2004. № 4. - С. 74-76.

179. Ross P., Knox J.H. Carbon-Based Packing Materials for Liquid Chromatography, Applications // In Advances in Chromatography. V. 37. Marcel Dekker, Inc., New York. 1997.-P. 120.

180. Койков B.B. Состояние окислительной модификации белков в крови растущих крыс при однократном введении несимметричного диметилгидразина на фоне алиментарного дисбаланса // Теоретическая и экспериментальная медицина246. http://www.uniprot.ors:/