Разработка элементов технологии получения растений-регенерантов капусты брокколи (Brassica oleracea L. convar. Botrytis (L.) Alef. var. cymosa Duch.) в культуре семяпочек тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат наук Старцев, Сергей Викторович

• Старцев, Сергей Викторович
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Старцев, Сергей Викторович

Оглавление

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие «гаплоид» и его использование в научных исследованиях и селекционном процессе

1.2. Биологическое описание и ботаническая характеристика растений капусты

1.2.1. Характеристика семейства Капустные -Brassicaceae Burnett

1.2.2. Характеристика капусты брокколи

1.2.3. Географическое распространение видов рода Brassica L

1.2.4. История изучения рода Brassica L

1.3. Культура семяпочек и ее использование в селекции сельскохозяйственных растений

1.4. Этапы культуры семяпочек и их особенности

1.4.1. Подбор условий содержания донорных растений и их генетические особенности

1.4.2. Определение стадии развития экспланта

1.4.3. Индукция гаплоидных регенерантов

1.4.4. Перевод гаплоидных растений на диплоидный уровень

1.4.5. Микроклональное размножение

1.4.6. Укоренение растений-регенерантов

1.4.7. Адаптация растений-регенерантов

2. МЕТОДИКА, ЦЕЛИ, ЗАДАЧИ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Цель и задачи исследований

2.2. Схема исследований

2.3. Условия проведения исследований

2.3.1. Почвенные и агрохимические условия проведения исследований42 2.3.2 Погодные условия вегетационных периодов

2

2.4. Материал и методика проведения исследований

2.4.1. Исходный материал

2.4.2. Методика лабораторных опытов

2.4.2.1. Приготовление питательной среды

2.4.2.2. Приготовление концентратов регуляторов роста

2.4.2.3. Условия выращивания донорных растений

2.4.2.4. Подготовка исходных эксплантов (завязей)

2.4.2.5. Укоренение растений-регенерантов

2.4.3. Проведение оценки исходного и полученного в ходе исследований материала

3. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ КАПУСТЫ БРОККОЛИ В КУЛЬТУРЕ ЗАВЯЗЕЙ И СЕМЯПОЧЕК

3.1. Морфогенез изолированных завязей при культивировании in vitro

3.2. Морфогенез изолированных семяпочек в культуре in vitro

3.3. Микроклональное in vitro размножение морфогенных почек и побегов

3.4. Получение растений-регенерантов, их укоренение и адаптация

4. ОЦЕНКА РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ КАПУСТЫ БРОККОЛИ, ПОЛУЧЕННЫХ В КУЛЬТУРЕ ЗАВЯЗЕЙ И СЕМЯПОЧЕК

4.1. Характеристика растений-регенерантов R( по морфологическим признакам

4.2. Биохимический анализ растений-регенерантов Rj

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННОЙ

ПРАКТИКЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

Сокращенное название Полное название

ГНУ ВНИИО Государственное научное учреждение Всероссийский научно — исследовательский институт овощеводства Россельхозакадемии

БА 6-бензиламинопурин (бензиладенин)

ТДА (Ы-фенил-М'-(1,2,3-тиадиазол-5-ил)мочевина)

ИМК индолилмасляная кислота

ИУК Р-индолил-3-уксусная кислота

НУК а-нафтил-уксусная кислота

2,4-Д 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота

2,4,5-Т 2,4,5-трихлорфеноксиуксусная кислота

ХФУ 4-хлорфеноксиуксусная кислота

ТХП (пиклорам) 4-амино-3,5,6-трихлорпиколиновая кислота

кинетин 6-фурфуриламинопурин

2ip 6-(-у, у, диметилаллиламино)-пурин

БДС (BDS) питательная среда (Dunstan D.T., Short К.С., 1977)

MS питательная среда Мурасиге - Скуга (Murashige Т., Skoog F., 1962)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка элементов технологии получения растений-регенерантов капусты брокколи (Brassica oleracea L. convar. Botrytis (L.) Alef. var. cymosa Duch.) в культуре семяпочек»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Капуста брокколи {Brassica oleracea L. convar. Botrytis (L.) Alef. var. cymosa Duch.) была известна людям более 2 тысяч лет назад. Ее возделывали еще во времена Древнего Рима, а родиной брокколи является южная Италия. Само название этой культуры тоже происходит из итальянского языка (cavolo brocolis) и переводится как «короткие побеги» или стеблевая капуста (Пивоваров В.Ф., 2006).

В странах Западной Европы постоянно увеличиваются площади, занимаемые этой разновидностью капусты, что обусловлено ее преимуществом перед другими разновидностями. Это отмечали еще в начале 20-го века русские ученые-овощеводы (рис. 1).

Головки брокколи содержат 4% метионина, 100-160 мг/% витамина С, а также они богаты сахарами и каротином, содержание которого выше, чем в фасоли, зеленом горошке, перце, яблоках и апельсинах. Кроме того, в головках содержится целый поливитаминный комплекс: витамины А, Вь В2, РР, С, К, соли калия, фосфора, кальция, магния. Брокколи по химическому составу занимает ведущее место не только среди разновидностей капусты, но и среди других овощных культур. Количество протеина в ней превышает его содержание в шпинате, сахарной кукурузе, батате. По наличию незаменимых аминокислот брокколи не уступает говяжьему мясу, а лизина, изолейцина и триптофана — белку куриного яйца. В ее составе находятся антисклеротические вещества, такие как метионин и холин, которые препятствуют накоплению холестерина в организме человека, и замедляют старение. Брокколи богата йодом и применяется при лечении и профилактике лучевой болезни. В ней содержатся флавоноиды (Williamson et al, 1996), селен (Finley et al, 2000), глюкозинолаты (Голубкина H.A. и др., 2010), поэтому ее используют в лечебно-профилактическом питании при лечении онкологических заболеваний, гипо- и авитаминоза, колита, болезни желудочно-кишечного тракта и сердца. Капуста брокколи способствует

выведению избытка желчи. Также она рекомендована при заболевании печени и диабете (Пивоваров В.Ф., 2006).

Рисунок 1 - Площади, занимаемые капустой брокколи и цветной капустой в мире, га: Китай - 446 524, Индия - 369 ООО, Эквадор - 97 547, Испания -

31 169, Мексика - 29 010, Франция - 19 700, Италия - 17 637, Великобритания 16 757, Бангладеш - 16 552, США - 15 150, Россия - 600

(FAOSTAT, 2011 г.)

Селекционная работа с капустой брокколи, в первую очередь, направлена на создание в максимально короткие сроки высокопродуктивных, скороспелых сортов и гибридов. Они должны быть устойчивы к фитопатогенам, пригодны к современным механизированным технологиям возделывания и отвечать природно-климатическим условиям регионов выращивания (Литвинов С.С., 2003; Борисов В.А., 2003).

В настоящее время Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию в РФ, за 2013 г. включает 26 наименований сортов и гибридов F) капусты брокколи. Однако среди них только 10 отечественных: 7 сортов и 3 гетерозисных гибрида. Все из представленных сортов являются отечественными, а большинство гибридов -результат иностранной селекции, причем многие из них принадлежит таким агрофирмам как Syngenta Seeds B.V., Bejo Zaden B.V., Monsanto Holland B.V. Эти данные свидетельствуют о том, что за последние годы возрастает

США

Индия'

интерес к капусте брокколи в целом и ее гетерозисным гибридам в частности (рис. 2,3), а это означает, что существует необходимость в усовершенствовании способов более быстрого получении исходного материала для создания отечественных линий, гибридов и сортов.

61°/<

□ Сорта отечественной селекции

01 Гибриды отечественной селекции

□ Гибриды иностранной селекции

Рисунок 2 - Доля отечественных и зарубежных сортов и гибридов капусты брокколи в соответствии с Государственным реестром селекционных достижений, допущенных к использованию в РФ, за 2013 г.

5 4 3 2

Количество, шт.

о 11 XXI

1986 1 997 199 9 2002 2 003 200 5 2006 2007 2 008 2009 2010 2 011 2012 2013

В Сорта ■ Гибриды

Год включения в Гос. реестр

Рисунок 3 - Общее количество сортов и гибридов капусты брокколи допущенных к использованию, по состоянию на 31 января 2013 г.

Следуя мировым тенденциям российскими селекционерами уже получена в 2012 г. коллекция линий - удвоенных гаплоидов капусты пекинской и капусты белокочанной. На их основе созданы и с 2013 года включены в Госреестр следующие гибриды капусты пекинской: Г| Маркет, Р| Мохито и Бирюза (Баутин В.М., Монахос Г.Ф. и др., 2013).

Целью исследований являлась разработка технологии получения растений-регенерантов капусты брокколи в культуре семяпочек, на основе

оптимизации условий индукции морфогенеза на всех этапах биотехнологического процесса.

Объект исследований — технология получения растений-регенерантов капусты брокколи в культуре завязей и неоплодотворенных семяпочек.

Предмет исследований — бутоны, завязи, неоплодотворенные семяпочки, морфогенные ткани семяпочек, растения-регенеранты капусты брокколи.

Научная новизна работы. Впервые в России получены растения-регенеранты из изолированных семяпочек капусты брокколи. Разработаны элементы технологии культуры завязей и семяпочек капусты брокколи: установлено, что наилучший результат может быть достигнут при использовании для выделения экспланта бутона длиной 8-9 мм.; выявлен оптимальный тип экспланта для введения в культуру in vitro, состоящий из завязи и не травмированного пестика с фрагментами цветоложа, показано, что наилучший рост изолированных завязей происходит на питательной среде MS (Murashige Т., Skoog F., 1962), содержащей тидиазурон (ТДА) в концентрацией 1,0 мг/л и индолилуксусную кислоту (ИУК) 0,5 мг/л, а так же сахарозу - 30 г/л.

Установлено, что выделение семяпочек из культивируемых in vitro завязей следует проводить на 28 сутки и культивировать их на среде MS, содержащей 1 мг/л ТДА, 0,5 мг/л ИУК, 30 г/л сахарозы.

Показано, что ТДА, используемый в концентрации 0,5 мг/л, ИУК -0,1 мг/л и сахароза — 30 г/л в питательной среде при культивировании морфогенных тканей растущих семяпочек стимулируют образование высокого числа почек и побегов.

Установлено, что наилучший результат при укоренении полученных побегов на среде MS (97-99 % растений-регенерантов), достигается при использовании ИУК в концентрации 0,1 мг/л, а так же торфяных таблеток для рассады в качестве субстрата для адаптации растений-регенерантов к условиям открытого грунта (88-94% адаптированных растений).

Проведенные исследования позволили впервые в России получить из изолированных семяпочек капусты брокколи растения-регенеранты с высоким содержанием питательных веществ, а так же превышающие по большинству хозяйственно-ценных признаков исходный контрольный сорт.

Практическая ценность. Оптимизированные условия культивирования позволяют получать 93-97% растущих завязей, 44-58% растущих семяпочек, 96-98% жизнеспособных конгломератов с почками и побегами, 97% растений-регенерантов. Использование торфяных таблеток на 6-8% повышает число адаптированных растений в почвенном субстрате и на 7-9% в открытом грунте.

Выделены три семьи (№1, №5, №8) существенно превышающие по комплексу хозяйственно-ценных признаков контроль, которые представляют интерес для использования в дальнейшей селекционной работе.

Обоснование и достоверность научных положений. Исследования выполнены по методикам, рекомендованным научными учреждениями страны. Все выводы и предложения подтверждены экспериментальными исследованиями, статистической обработкой полученных данных.

Апробация работы. Основные результаты экспериментальной работы по диссертации, выводы и предложения были доложены и представлены на IV Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов (ФГБОУ ВПО РУДН, Москва, 2012); Международной научно-практической конференции молодых ученых, посвященной 125-летию со дня рождения Н.И. Вавилова (ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, д. Верея, 2012).

Автор выражает глубокую благодарность и признательность научному руководителю - д. б. н., профессору Полякову А. В., заведующему кафедрой генетики, растениеводства и защиты растений аграрного факультета ФГБОУ ВПО РУДН Минобрнауки России к.с.-х.н. Введенскому В.В. за помощь и поддержку в проведении научных исследований.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• культивирование эксплантов, выделенных из бутонов длиной 8,1-9,0 мм на жидкой питательной среде MS, обогащенной ТДА в концентрации 1 мг/л и ИУК - 0,5 мг/л, сахарозой в концентрации 30 г/л, позволяет получать 97,2% растущих завязей и 1,3% семяпочек;

• завязь, включающая пестик и цветоложе, обладает наиболее высокой морфогенетической активностью (95,1±1,2% растущих завязей и 1,8±0,3% семяпочек);

• применение ТДА в концентрации 1,0 мг/л и ИУК - 0,5 мг/л, для пересадки растущих изолированных семяпочек на агаризованную среду MS обеспечивает наибольшую частоту образования жизнеспособных семяпочек (58,2±2,1 %);

• культивирование морфогенной ткани, почек и побегов, полученных из растущих семяпочек на агаризованной среде MS, содержащей ТДА, в концентрации 0,5 мг/л и ИУК - 0,1 мг/л, сопровождается образованием 9698% жизнеспособных конгломератов с почками и побегами;

• полученные на основе семяпочек капусты брокколи семьи растений-реге-нерантов отличаются высокими товарными качествами: пищевой ценностью, массой центральной головки до 193 г и продуктивностью с куста до 327 г.

Публикации результатов исследований

1. Старцев C.B. Совершенствование технологии получения удвоенных гаплоидов брокколи // C.B. Старцев, A.B. Поляков, В.В. Введенский. // Картофель и овощи. М. — 2012. — №5. — С. 24.

2. Старцев C.B. Влияние концентрации регуляторов роста в культуре цветоложа капусты брокколи {Brassica oleraceae var. Italica) // C.B. Старцев, A.B. Поляков. // Вестник Российского университета дружбы народов. М. — 2013 —№2—С.20-26

3. Старцев C.B. Особенности технологии получения двойных гаплоидов, для их дальнейшего применения в совершенствовании селекционного процесса капустных культур // C.B. Старцев, В.В. Введенский

10

// Инновационные процессы в АПК. Сборник статей IV Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов. - М.: РУДН, 2012.-С.88-89.

4. Старцев C.B. Влияние регуляторов роста и их концентрации на морфогенез микроспор капусты брокколи // C.B. Старцев. //Овощеводство будущего, новые знания и идеи. Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых, посвященной 125-летию со дня рождения Н.И. Вавилова. - М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии - 2012. - С.314-315.

5. Старцев C.B. Усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты брокколи в культуре завязей и семяпочек// C.B. Старцев, A.B. Поляков // Селекция на адаптивность и создание нового генофонда в современном овощеводстве (VI Квасниковские чтения). Международная научно-практическая конференция (8 августа 2013 г.). Материалы докладов, сообщений /ВНИИО - М.: Изд-во ООО «Полиграф-Бизнес», 2013.- С.297-301.

6. Старцев C.B. Основные этапы технологии получения растений-регенерантов капусты брокколи {Brassica oleracea L. convar. Botrytis (L.) Alef. var. cymosa Duch.) в культуре неоплодотворенных семяпочек / C.B. Старцев // Овощи России. Научно-практический журнал./ - М.: ВНИИССОК - №3 (20) -2013.-С. 28-29.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, условий и методов проведения исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, предложения для использования в селекционной практике, списка использованной литературы (115 наименований, в том числе 69 работ иностранных авторов). Работа изложена на 111 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 19 рисунков, 1 приложение.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие «гаплоид» и его использование в научных исследованиях и

селекционном процессе

О гаплоидах и возможностях их использования в селекции и теоретических исследованиях было известно еще в 20-х годах прошлого столетия.

Термин гаплоид широко распространен в таких науках, как генетика, биотехнология и растениеводство. Г.В. Гуляев (1984) дает ему такое определение: гаплоид - это организм, имеющий в своих клетках в 2 раза меньшее количество хромосом (п), чем исходная форма, имеющая, как правило, двойное - диплоидное число хромосом (2п). Во всех клетках организма (как правило, соматических) набор хромосом диплоидный и у разных организмов он разный. Например, у человека диплоидный набор хромосом равен 46, а гаплоидный содержится в половых клетках, которые называют гаметами, и составляет 23 штуки, а у капусты (белокочанной или брокколи) это количество составляет 2п=18, п=9 соответственно.

Гаплоидный набор свойственен половым клеткам организмов именно потому, что затем они сливаются при оплодотворении, при этом не нарушается видовое постоянство числа хромосом, а обеспечивается изменчивость и разнообразие признаков.

Известно, что гены могут быть в доминантном или рецессивном состоянии, выраженном в форме состояния аллелей - «А» и «а». Гены одной пары признаков, содержащиеся в одинаковых локусах (участках) гомологичных (парных) хромосом соматических клеток, могут иметь гомозиготные аллели (АА, аа) или гетерозиготные - (Аа). При размножении особей с гомозиготными аллелями изучаемых генов, расщепления по этим признакам не происходит. Это явление широко используется селекционерами, получающими новые сорта с хозяйственно ценными признаками, традиционными способами. Однако на это уходят годы труда, гаплоиды же, чьё число

хромосом искусственно удваивают, обработав колхицином, получают в

12

лабораториях биотехнологическими методами in vitro (в пробирке) из пыльцевых зерен или неоплодотворенных семяпочек, взятых на определенной стадии развития. Их называют - удвоенные гаплоиды и в отличие от простых гаплоидов они могут давать потомство - т.е. обладают фертильностью. Они равноценны самоопыленным растениям, которые получают с помощью инцухта (скрещивания близкородственных форм).

Роль гаплоидных растений, а в особенности удвоенных гаплоидов в селекции, приобретает с каждым годом все большее значение. Несмотря на гомозиготность, они бывают генетически разнородны, благодаря случайной перекомбинации отцовских и материнских хромосом, т.е. часть признаков берется от матери и от отца и равномерно распределяется в последующих поколениях, благодаря мейозу. Их гомозиготность используют для изучения действия аллелей генов, находящихся в рецессивном состоянии, при создании сортов и линий с хозяйственно ценными признаками, которые могут сохраняться в последующих поколениях. У удвоенных гаплоидов, благодаря гомозиготности, как правило, не наблюдается подавления доминантными аллелями рецессивных (например, аллель «А» подавляет аллель «а», «а» может проявить свой признак лишь при сочетании с точно такой же аллелью, в отличие от аллели «А»), Использование гаплоидов позволяет сократить селекционный процесс как минимум на 4 поколения (Friedt W., Bickert С., Schaub H., 1995). К примеру, канадский сорт ячменя Mingo был создан за 5 лет с момента скрещивания родителей (Но K.M., Jones G.E., 1980). Гаплоиды в настоящее время используются для создания новых сортов риса (Chen Y., 1986), пшеницы (Chuang С.С., et al, 1978), ячменя (De Lafonteyne J., 1993), рапса (lobai M.C., Mollers С., 1991), картофеля (Pretova А., 1993) и других культур. Выведены высокопродуктивные сорта риса, пшеницы, табака, устойчивые к мучнистой росе и желтой ржавчине (Ницше В., Венцель Г., 1980). Значительные успехи достигнуты китайскими учеными. В Китае на площади в несколько миллионов гектаров высевают сорта риса, полученные с помощью гаплоидии (Сене Ж., 1987). В России

создан новый сорт риса Жемчуг (Харченко П.Н., 1997). Таким образом, процесс создания новых сортов занимает минимум в 2-3 раза меньше времени.

1.2. Биологическое описание и ботаническая характеристика

растений капусты

1.2.1. Характеристика семейства Капустные —Brassicaceae Burnett

Семейство Капустные относится к отделу покрытосеменных растений [Magnoliophyta (Angiospermae)], классу двудольных [Magnoliatae (Dicotiledones)] и к порядку Capparales Hutchinson.

Это семейство весьма обширно: в нем 375 родов и более 3200 видов (Лизгунова Т.В., 1984).

Капустные произрастают в разных экологических условиях - в тундрах арктичекой зоны, в лесах, степях, полупустынях, менее распространены в пустынях, на склонах гор, по берегам рек и морских побережий. В тропиках они растут в основном в горах, могут подниматься на высоту 4-6 тыс. м над уровнем моря и доходить почти до снежных границ. Примером являются некоторые виды из родов Draba, Ermania - в центральной Азии, а в Андах -виды рода Draba (Лизгунова Т.В., 1984).

Название рода Brassica может происходить от слова «бразо» — что на греческом языке означает варить. По данным А. Thellung (1919) существуют следующие варианты происхождения этого названия: от кельтского наименования капусты — «брессик» или «брассик» или от греческого слова «брассо» — трещать, хрустеть, которое напоминает звук обламывания листьев капусты (Лизгунова Т.В., 1984).

Растения рода Brassica однолетние, двулетние, иногда многолетние при одревеснении у основания, или полукустарники, голые или опушенные простыми волосками (Лизгунова Т.В., 1984).

Стебли прямостоячие или приподнимающиеся, ветвистые. Нижние

листья часто собраны в розетку, перисто-раздельные, или лировидно

надрезаные, или цельные, сидячие или с низбегающей пластинкой, средние и

14

верхние в разной степени стеблеобъемлющие или не стеблеобъемлющие. Цветки собраны в кисти или щитки, иногда цветки с прицветниками. Внутренние чашелистики продолговатые, наружные — часто более широкие, яйцевидные, слегка мешковидные, прямостоячие или отстоящие. Лепестки суживающиеся постепенно или внезапно в ноготок разной длины, желтые, реже кремовые и белые. Отгиб обратно-яйцевидный, округлый, овальный, узкоовальный, клиновидный. Тычинок 6 (из них 2 короткие), пыльники желтые, на вершине иногда с антоциановым пятном. Нектарники обычно почковидные, расположенные по бокам коротких тычинок и продолговатые по одному перед каждой парой длинных тычинок. Завязь верхняя, двухгнездная, сидячая, цилиндрическая. Пестик образован двумя сросшимися плодолистиками. Столбик короткий. Рыльце крупное, плоскоголовчатое или более или менее двулопастное. Створки стручка наверху округлые, усеченные, имеют выемки. Стручки узко-широколинейные или цилиндрические, иногда извилистые, присутствует ярко выраженная средняя жилка с менее ясными переплетающимися более мелкими боковыми жилками, часто бугорчатые. Носик шиловидный, конический или клювовидный, 1—2-семянный или бессемянный. Перегородка с толстыми волнистыми стенками клеток эпидермиса, прозрачная, ямчатая от семян. Семена округлые или яйцевидные, расположены в один ряд, очень редко в два ряда, без эндосперма, почти черные, темно-коричневые, коричневато-бурые, красновато-бурые, желто-бурые с фиолетовым оттенком, светло-желтые, охряные, с крупно- или мелкоячеистой или почти гладкой кожурой. Зародыш вдоль складчатый, корешок лежит в желобке, который образуют семядоли. Семядоли на вершине выемчатые. Корни отвесные, веретеновидные. Широко варьирует хромосомный набор (2п): 16, 18, 20, 22, 32, 34, 36, 38) (Волховских З.В., Гриф В.Г., и др., 1969), (НагЬегс! Б. 1972).

1.2.2. Характеристика капусты брокколи

Брокколи {Brassica oleracea L. convar. Botrytis (L.) Alef. var. cymosa Duch.) — является переходной формой к цветной капусте и ее подвидом. Продуктовый орган представлен головкой, которая похожа на головку цветной капусты, но более рыхлая и отличается широким спектром окраски: зеленая, синяя, фиолетовая, белая. Брокколи имеет однолетний цикл развития. Опыление перекрестное. Растение образует раскидистую розетку листьев. Листья лировидные с усечено-яйцевидной пластинкой, край листа надрезанный и слабоволнистый, жилкование III типа, цвет темно-зеленый с голубым или сизым оттенком. Так же на листьях присутствует восковой налет средней величины. Центральный побег заканчивается, как правило, одной головкой, состоящей из большого количества бутонов. Ее размер зависит от сортовых особенностей и мощности самого растения. После срезки центральной головки из пазушных почек начинают развиваться побеги, образующие в свою очередь головки второго порядка, но их размер значительно меньше, чем у центральной. Цветы светло-желтые, стручки средней величины, семена круглые, коричневого цвета. Семенной куст достигает высоты более 0,5 м.

По сравнению с цветной капустой и другими разновидностями Brassica oleracea L. брокколи менее прихотлива к агроклиматическим условиям и более устойчива к болезням и вредителям. Скачки температуры воздуха ниже 16 и выше 25°С, и сухость воздуха во время вегетации могут снизить урожай. Для высокой продуктивности необходима температура воздуха 16-25°С, влажность почвы 70% HB и относительная влажность воздуха 85% (Методические рекомендации и указания по селекции и семеноводству капустных культур, 2007).

1.2.3. Географическое распространение видов рода Brassica L.

Виды рода приурочены к Европе, Африке (особенно к побережьям и островам Средиземноморского бассейна), к Передней, Средней и Восточной

Азии. В культуре произрастают также в Индокитае, на островах Океании, в Австралии, Америке (Лизгунова Т.В., 1984).

Род представлен дикорастущими видами (в том числе прародителями некоторых возделываемых растений), сорными и богат культурными, имеющими важное экономическое значение в мировом растениеводстве. Среди культурных видов есть разносторонне используемые. В качестве овощных и кормовых растений возделываются разнообразные формы европейской капусты, объединяемые чаще в полиморфный вид Brassica oleracea L., а также В. rapa L. (репа, турнепс); масличные, дающие жирные масла и одновременно выращиваемые как овощные растения (зеленные, капустные) — В. juncea (L.) Czern., В. carinata A. Braun (возделывается широко в Эфиопии), В. chinensis Jusl. (возделывается наиболее широко в Китае); масличные, овощные и кормовые формы — В. napus L.; чисто масличные — В. campestris L., В. nigra (L.) Koch, и овощные (капустные и зеленные)—В. pekinensis (Lour.) Rupr., В. japónica Sieb, и другие азиатские виды (Лизгунова Т.В. 1984).

1.2.4. История изучения рода Brassica L.

Ботаники античного мира нечетко различали возделываемые растения. Так, древнегреческий философ Аристотель (IV в. до н. э.) указывает два местных названия капусты: «рафанос» и «крамбе» для одного и того же растения, но невозможно сказать, для формы В. oleracea или представителя рода СгатЪе. Философ и естествоиспытатель Древней Греции Феофраст (IV—III в. до н. э.) обозначает капусту лишь одним термином «рафанос». Но, судя по его наблюдениям и описаниям, под этим названием он описывал растения разных родов — Brassica и СгатЪе (Феофраст, 1951).

В Древнем Риме было известно большее число форм капусты, чем в Греции, но краткость приводимых римскими авторами описаний не всегда дает возможность составить ясное представление о культивируемых видах, а описания их Катоном (И в. до н. э.) в трактате «Земледелие» (Катон М.П.,

1950) сходны с таковыми Феофраста и, вероятно, заимствованы у последнего. Однако римляне, как и греки, к капусте относили и виды СгатЪе.

Встречающиеся также описания крестоцветных корнеплодных растений у римских авторов, в частности у Плиния Старшего в его книгах с названием «напус», что не дает возможности точно установить, к какому ботаническому виду это растение относится (Лизгунова Т.В., 1984).

1.3. Культура семяпочек и ее использование в селекции сельскохозяйственных растений

Широкое распространение в селекции растений приобретает метод культивирования in vitro неоплодотворенных завязей и семяпочек. Это требуется для индукции морфогенеза гаплоидных клеток зародышевого мешка. Однако, чтобы вызвать переход этих клеток с гаметофитного на спорофитный путь развития необходимо подобрать оптимальное сочетание следующих факторов: состав питательной среды, регуляторы роста и их концентрации, условия культивирования донорных растений и эксплантов.

Первые гиногенетические растения были получены из неоплодотворенных завязей ячменя (San Noeum L.H., 1976).

На сегодняшний день в культуре семяпочек получены гаплоиды и дигаплоиды таких культур как пшеница (Sibi M.L., Kobaissi A, Shekafandeh А., 2001), белена (Chand S., Basu P., 1998), ячмень (Jähne A, Lazzeri P.A., Jagergussen M., Lörz H., 1991), просо (Kashin A.S., Blyudneva E.A., Silkin M.A., 2000), сахарная свекла (Lux H., HerrmannL., Wetzel С., 1990), кукуруза (Truong-Andre I., Demarly Y., 1984), табак (Encheva Y., Macheva V., 2003) , рис (Rongbai Li, Pandey M.P., Pandey S.K., Dwivedi D.K., 1999), лен (Поляков A.B., 2010), тыква (Metwally E.I, Moustafa S.A., El-Sawy B.I., Haroun S.A., Shalaby T.A., 1998), гербера (Sitbon M., 1981), лук (Campion В., Azzimonti M.T., Vicini E., Schiavi M., Falavigna A., 1992), огурец (Gemes-Juhasz A., Balogh P., Ferenczy A., Kristof Z., 2002), морковь (Тюкавин Г.Б., 2007), подсолнечник (Gelebart P., San L.H., 1987), тефф (травянистое растение

семейства злаковых) (Gugsa L., Ashok K.S., Lörz H., Kumlehn J, 2006), лилия (Ramsay J.L., Galitz D.S., Lee C.W., 2003), дрема (Mol R., 1992), спатифиллум (Eeckhaut T., Werbrouck S., Dendauw J., Van Bockstaele E., Debergh P., 2001), гевея (Guo F., Jia Xj, Chen L.X, 1982) и шелковица (Thomas T.D., Bhatnagar A.K., Razdan M.K., Bhojwani S.S., 1999).

Исторически, первые гаплоидные растения, полученные с использованием женского гаметофита, были описаны у дурмана обыкновенного (Datúra stramonium), они появлялись спонтанно и частота этого явления была не высока (Blakeslee A.F., et al. 1922). Самопроизвольное образование гаплоидных растений из женских половых клеток отмечалось у кукурузы, риса, табака, ячменя. На эту тему имеется соответствующий обзор (Palmer С.Е., Keller W.A., 2005).

С момента первого искусственного получения гаплоидных гиногенети-ческих растений ячменя (1976), имелся так же ряд экспериментов с отрицательным результатом (Laksmi-Sita G., 1997; Mukhambetzhanov S.K., 1997).

Если для микроспор поздняя одноклеточная стадия развития - самая приемлемая для переключения на спорофитный путь развития с гаметофитного, то главным отличием гиногенеза является то, что семяпочки разных культур могут иметь широкий диапазон стадий развития, пригодных для получения гаплоидных растений. На это влияют так же и приспособления к перекрестному опылению: протандрия (лук, подсолнечник, сахарная свекла, морковь) и протогиния (капуста, злаки). В целом, по сравнению с культурой микроспор и пыльников, имеется гораздо меньше данных относительно оптимального возраста клеток семяпочек и возраста бутонов, откуда их извлекают. Но для некоторых видов эти сроки все же определены. У сахарной свеклы за 1-3 суток до цветения бутоны обладают зрелым зародышевым мешком (Ferrant V., Bouharmont J., 1994). У подсолнечника аналогичная картина наблюдается за 2-3 суток до цветения (Yang H. et al., 1986). У риса зародышевые мешки, содержащие от 1 до 4

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Старцев, Сергей Викторович, 2013 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аветисян, В.Е. Семейство крестоцветные (Brassicaceae, Cruciferae)/ Жизнь растений. Под. редакцией А.Л. Тахтаджяна. / В.Е. Аветисян - М.: Просвещение, 1981.-Т.5(2), С.67-74.

2. Атанасов, А. Биотехнология в растениеводстве / А. Атанасов под ред. Колосовой Л.Д., Дейнеко Е.В.; Пер. с болг. Е.В. Дейнеко.-Новосибирск.:Институт цитологии и генетики СО РАН, 1993 - 241 с.

3. Баутин, В.М. Селекция и семеноводство капусты в России на современном этапе /В.М. Баутин, Г.Ф. Монахос, С.Г. Монахос, Д.В. Пацурия / Картофель и овощи № 2.- М: 2013. - с. 2-3.

4. Болховских, З.В. Хромосомные числа цветковых растений. / З.В. Болховских, В.Г. Гриф, О.И. Захарьева, Т.С. Матвеева - Л.: Наука -1969.-927 с.

5. Борисов, В.А. Качество и лежкость овощей / В.А. Борисов, С.С. Литвинов, A.B. Романова.-М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2003.- С. 148-149

6. Бунин, М.С. Методы репродуктивной биологии в селекции овощных культур рода Brassica L./M.C. Бунин, H.A. Шмыкова, В.А. Степанов, В.И. Старцев, Л.Л. Бондарева. -М.: Минсельхоз, 2003.- С.37-39.

7. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных тканей как метод изучения процессов роста и морфогенеза растений. / Р.Г. Бутенко - М.: Наука. - 1964. -256 с. ,

8. Бутенко, Р. Г. Методические указания по получению вариантных клеточных линий и растений у разных сортов картофеля / Р. Г.Бутенко, Л. М. Хромова, Г. В. Седнина. М.: ВАСХНИЛ, 1984. - 28 с.

9. Гавриленко, В.Ф. Большой практикум по физиологии растений / В.Ф. Гавриленко, М.Е. Ладыгина, Л.М. Хандобина. — М. : Высш. школа, 1975.-327 с.

Ю.Голубкина, Н. А. Биологически активные соединения овощей /Н. А.

Голубкина, С. М. Сирота, В. Ф. Пивоваров, А.Я. Яшин, Я.И. Яшин. -М.: ВНИИССОК, Россельхозакадемии 2010. -199 с.

11. Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию. Том 1. Сорта растений. М: Министерство сельского хозяйства Российской Федерации, 2013 - С. 118.

12.Гуляев, Г.В. Генетика/ В.Г. Гуляев,3-е изд., перераб. и доп.-М.:Колос,1980.-351с.

13. Диксон, P.A. Изолирование и поддержание каллусных и суспензионных культур клеток. Биотехнология растений: культура клеток / P.A. Диксон, Пер. с англ. В. И. Негрука; С предисл. Р. Г. Бутенко. - М.: Агропромиздат, 1989.-С.8-17.

14.Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. / под ред. Б.А. Доспехова -М.: Агропромиздат, 1985-351 с.

15.Знаменская, В.В. Принципы и методы создания и поддержания исходного материала, на современном этапе селекции сахарной свеклы: Автореф. дисс... д-ра с.-х. наук /Рамонь.: ГНУ ВНИИСС, Россельхозакадемии, 1999. -40 с.

16.Ермаков, А.И. Методы биохимического исследования растений. / А.И. Ермаков, В.В. Арасимович, М.И. Смирнова-Иконникова, И.К., Мурри.- М.: 1972.- 400 с.

17.Зонтиков, Д.Н. Усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор: Автореф. дисс... канд. с.-х. наук /М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2009. - 27 с.

18. Катон, М.П. Земледелие/ М.П. Катон. Перевод и комментарии М.Е Сергиенко. - М.: Наука, 2008. - 222с.

19. Кидин, В.В. Практикум по агрохимии. / В.В. Кидин, И.П. Дерюгин, В.И. Кобзаренко и др.; Под ред. В.В. Кидина.-М.:КолосС, 2008.- 599с.

99

20.Колосова, • Н. Н., Атлас Московской области. /H.H. Колосова, Е.А.Чурилова.— М.: Просвещение, 2004. — 48 с.

21.Лизгунова, Т.В. Культурная флора СССР /Т.В. Лизгунова. - Л.: Колос. Ленингр. Отд, 1984. - Т.П. - С.238-239.

22.Литвинов, С.С. Научные основы овощеводства /С.С. Литвинов. —М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2008.—776 с.

23.Лях, В.А. Ботанические и цитогенетические особенности видов рода Linum L. и биотехнологические пути работы с ними /В.А. Лях, А.И. Сорока. -Запорожье.: Запорожский национальный университет, 2008.-182 с.

24.Май Дык Чунг. Совершенствование технологии получения гаплоидных и дигаплоидных растений рапса и белокочанной капусты in vitro: Автореф. дис. канд. биолог, наук / М.: МСХА, 2010. - 22с.

25.Марьяхина, И.Я. Методические указания по размножению кочанной капусты в культуре тканей для использования в селекции/Под ред. Пухальского A.B./ И .Я Марьяхина И.Я. -М.: ВАСХНИЛ, 1985.- 21с.

26.Метеоданные, станции Домодедово (Москва), Официальный сайт ГНУ ВНИИО, Россельхозакадемии. - http://vniioh.ru/.

27.Методические рекомендации и указания по селекции и семеноводству капустных культур. Методические рекомендации /Коллектив авторов. — М.: ГНУ ВНИИССОК Россельхозакадемии, 2007. — С.95-96.

28.Никитина, Н. И. Культура неоплодотворенных семяпочек подсолнечника // Н. И. Никитина, Т. С. Федоренко, А. Ю. Боровков, Научно - технич. бюлл. ВНИИМК . - 1989. - Вып. 3. - No 106.- С . 14-16.

29.Ницше, В. Гаплоиды в селекции растений / Пер. С англ. В.В. Попова; Предисл. Ю.П. Лаптева. / В. Ницше, Г. Венцель.-М.:Колос, 1980.-128с.

ЗО.Оразова, .С. Б. Культура неоплодотворенных завязей кукурузы с различными типами ЦМС/Материалы научной генетической конференции// С. Б. Оразова, К.К. Богуспаев. - М.: МСХА, 2002. - С.251-252.

31.Павлова, M.K. Культура неоплодотворенных завязей и семяпочек: возможности и перспективы // М.К. Павлова Сельскохозяйственная биология.- 1987.-N 1.- С. 27-33.

32.Пивоваров, В.Ф. Капуста, ее виды и разновидности. / В.И.Пивоваров, В.И. Старцев. - М.: ГНУ ВНИИССОК Россельхозакадемии, 2006. - 191 с.

33.Поляков, A.B. Получение растений огурца с повышенной устойчивостью к фузариозному увяданию методами in vitro. Методические рекомендации /A.B. Поляков, A.A. Ткачева, И.И. Тарасенков, Н.К. Бирюкова. — М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2006. — 28 с.

34.Поляков, A.B. Методические рекомендации по получению трансгенных растений капусты белокочанной, устойчивых к фитопатогенам. Методические рекомендации /A.B. Поляков, О.Ф Шарафова, С.А. Зонтикова. — М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2009. — 35 с.

35.Поляков, A.B. Биотехнология в селекции льна. / A.B. Поляков .- М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2010.-201 с.

36. Пухальский, В.А. Практикум по цитологии и цитогенетике растений. / В.А. Пухальский, А. А. Соловьев, Е. Д. Бадаева, В. Н. Юрцев.М.: КолосС-2007.-461с.

37.Пухальский, В.А. Цитология и цитогенетика растений. / В.А. Пухальский,

A.A. Соловьев, В.Н. Юрцев. М.: - Издат-во МСХА, 2004.- 118с.

38. Сельскохозяйственный энциклопедический словарь. /Коллектив авторов. Гл. ред. В.К. Месяц. М.: - Советская энциклопедия, 1989.- С.493.

39. Сене, Ж. Биотехнология: Биотехнология: результаты и перспективы. / Ж. Сене.- Париж.: Курьер ЮНЕСКО, 1987.-С. 4-12.

40.Справочник по климату СССР. - 1964. - Вып.8. - 4.2.

41.Тиссера, Б. Эмбриогенез, органогенез и регенерация растений. Биотехнология растений: культура клеток/ Б. Тиссера., Пер. с англ.

B.И. Негрука; С предисл. Р. Г. Бутенко. - М.: Агропромиздат, 1989. -280с.

42.Тюкавин, Г.Б. Основы биотехнологии моркови./ Г.Б. Тюкавин, Монография. М.: ГНУ ВНИИССОК Россельхозакадемии, 2007. - 480с.

43.Феофраст. Исследования о растениях. /Феофраст., Перевод с древнегреческого и примечания М.Е. Сергиенко. Кн. 1—9. Приложения.-М.: Издательство Академии наук СССР, 1951-591с.

44.Харченко, П.Н. Цитологические, анатомо-морфологические и физиолого-биохимические признаки регенерантов, каллусов и протопластов риса в связи с хозяйственно-ценными свойствами растений в целях создания новых и совершенствования существующих методов и приемов селекционно-семеноводческой работы: Докл. дис... д-ра биол. наук. Краснодар, 1997. — 41с.

45.Хасси, Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro. Биотехнология сельскохозяйственных растений. /Пер. с англ. В.И. Негрука; С предисл. Р.Г. Бутенко.-М.: Агропромиздат, 1987.-3 01 с.

46. Шмыкова- Н.А., Разработка системы биотехнологических методов, направленных на ускорение селекционного процесса овощных культур: Автореф. дисс... д-ра с.-х. наук /М.: ГНУ ВНИИССОК Россельхозакадемии, 2006.-с. 19-21.

47.Ammirato, P. V. in Handbook of Plant Cell Culture/ P. V/ Ammirato/ Evans, D. A., Sharp, W. R., Ammirato, P. V. and Yamada, Y. (eds.), Macmillan Publishing Co., New York. - 1983. - P. 82.

48.Blakeslee, A.F. A haploid mutant in the Jimson weed, 'Datura stramonium'. / A.F. Blakeslee, J. Belling, M.E.Farnham; A.D. Bergner, Science 55: -1922.-p.646-647.

49.Campion, B. Advances in haploid plant induction (Allium сера L.) through in vitro gynogenesis. B. Campion, M.T. Azzimonti, E.Vicini, M. Schiavi, A. Falavigna, Plant Sci. 86: -1992- P.97-104.

50.Chand, S. Embryogenesis and plant regeneration from callus cultures derived from unpollinated ovaries of Hyoscyamus muticus L. / S. Chand, P. Basu, Plant Cell Rep 17.: 1998.- p.302-305.

51.Chase, S.S. Monoploid frequencies in a commercial double crass hybrid maize and its components single cross hybrids and inbred lines /S.S. Chase //Genetics. -1951- V.34 - p.328-332.

52.Chen, Y. Anther and pollen culture of rice // Chen, Y. In: Hu H., Yang H (eds). Haploids of higher plants in vitro - Springer. Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo, 1986.-P. 3-25.

53.Chuang, C.C. A set of potato medium for wheat anther culture // C.C. Chuang, T.W.Quyang, M. Chia, S.M. Chou, S.K. Chiang. Proc. of Symposium on plant Tissue Culture. Beijing.- China.- 1978.- P. 51.

54.Conger, B.V. Cloning Agricultural Plants Via In Vitro Techniques. /B.V. Conger (ed) CRC Press,Inc. Boca Raton, Florida.: - 1981. - p. 141-164.

55.Davis, G. Systematic embryology of Angiosperms. / G. Davis, N.Y - London, Sydney, - 1966.- 528p.

56. Debergh, P.C. A scheme for the commercial propagation of ornamental plants by tissue culture. / P.C. Debergh, L.J. Maene./ Plant Physiol. - 1981.- p. 14, 335.

57.De Fossard, R.A. Clonal propagation of Eucalyptus by nodal culture. / R.A., De Fossard, R.A. Bourne. Third World Consultation on Forest Tree Breeding. Australia, Canberra -1977.- p 1023-1029.

58.De Lafonteyene, J. Genetic manipulation of burley and wheat embryos using microspote culture and partocle delivery system // J. De Lafonteyene. Proc. of Seminar on Genetic Embryogenesis (As Norway. 24-27 June, 1993).- 1993.

59.Diederichsen E., The Use of Ovule Culture in Reciprocal Hybridization between B. campestris L. and B. oleracea L./ E. Diederichsen, M.D. Sacristan, Berin.: Plant Breeding 113, 1994 - p.79-82.

60.Dunstan, D.I. Improved growth of tissue cultures of the onion, Allium cepa L. // D.I. Dunstan, K.C. Short, Physiol. Plant. - 1977.- V.41.- P.70-72.

61.Dunwell, J.M. Anther culture of Solanum tuberosum L / J.M Dunwell, N. Sunderland, Euphytica, 1973 -V.22 - p. 317-323.

62.Encheva Y. Doubled haploid generations of Oriental tobacco lines obtained in vitro by induced androgenesis and gynogenesis./ Y. Encheva, V. Macheva. Plovdiv.: Genetics and breeding. -2003.- V. 32.- № 1-2 - p. 55-59.

63.Eeckhaut, T. Induction of homozygous Spathiphyllum wallisii genotypes through gynogenesis./ T. Eeckhaut, S. Werbrouck, J. Dendauw, E. Van Bockstaele, P. Debergh. Plant Cell Tiss Org Cult 67: -2001-p.l 81-189.

64.Evans, D.A. In Plant Tissue Culture -Methods and Applications in Agriculture/ D.A. Evans, W.R. Sharp, C.E. Flick // Thorpe, T.A. (ed.). Academic Press, New York. -1981.- p. 45.

65.Ferrant, V. Origin of gynogenetic embryos of Beta vulgaris L. / V.Ferrant, J. Bouharmont, Sex Plant Reprod 7: -1994 - p. 12-16.

66.Finley, J.W. Selenium from high selenium broccoli protects rats from colon cancer//J.W. Finley, C.D. Davis, Y.J. Feng. Nutr.- 2000-Vol.l30-p.2384-2389.

67.Flick, C.E. In Handbook of Plant Cell Culture./ C.E. Flick, D.A. Evans, W.R. Sharp // Vol. 1, Evans, D.A., Sharp, W.R., Ammirato, P.V. and Yamada, Y. (eds.), Macmillan Publishing Co., New York. - 1983. - p. 13.

68.Friedt, W. In vitro breeding of high linolenic, doubled-haploid lines of linseed (Linum usitatissimum L.) via androgenesis // W. Friedt, C. Bickert, H. Schaub. Plant breeding.- 1995.-V. 114.-P. 322-326.

69.Gamborg, O.L. Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells / O.L. Gamborg, R.A. Miller, K. Ojima // Exp. Cell. Res. 21. 1968. P. 359368.

70.Gamborg O.L. Culture method and detection of gluconate in suspension cultures of wheat and barley / O.L.Gamborg, D. Eveling // Can.J.Biochem. — 1968. -46.-P. 417-421.

71.Gelebart, P. Production of haploid plants of sunflower (Helianthus annuus L) by in vitro culture of non-fertilized ovaries and ovules./ P. Gelebart, L.H. San, Agronomie 7: - 1987. - p.81-86.

72.Gemes-Juhasz, A. Effect of optimal stage of female gametophyte and heat treatment on in vitro gynogenesis induction in cucumber (Cucumis sativus L.). / A. Gemes-Juhasz, P. Balogh, A. Ferenczy, Z. Kristof. Plant Cell Rep. 21: - 2002,-p. 105-111.

73.Gugsa, L. Gynogenic plant regeneration from unpollinated flower explants of Eragrostis tef (Zuccagni) / L. Gugsa, K.S. Ashok, H. Lörz, J. Kumlehn, Trotter. Plant Cell Rep 25: - 2006.-p. 1287-1293.

74. Guo, F. Induction of plantlets from isolated ovules of Hevea brasiliensisJ F. Guo, Xj. Jia, L.X. Chen, Hereditas 4: -1982-p.27-28

75.Harberd, D.G. A contribution to the cytotaxonomy of Brassica (Cruciferae) its allies. / D.G. Harberd. Bot. J. Linn.Soc. - 1972. - Bd.25 №1.

76.Ho, K.M. Mingo barley / K.M. Ho, Jones G.E. // Canadian Journal of Plant Science.-1980-V.4.-P.412-420

77.Hu, C. Y.,Wang, P. J. In Handbook of Plant Cell Culture./ C. Y. Hu, P. J. Wang / Vol. 1, Evans, D. A., Sharp, W. R., Ammirato, P. V. and Yamada, Y. (eds.), Macmillan Publishing Co., New York. - 1983 - p. 177.

78.Huang, Q.T. Embryological observations on ovary culture of unpollinated young flowers in Hordeum vulgare L. / Q.T. Huang, H.Y. Yang, C. Zhou Acta Bot Sin 24: 1982- p.295-300.

79.Iobal, M.C., Selection for low glucosinolate content in rape-seed (Brassica napus) using haploid embryoids from microspore culture // M.C. Iobal, C. Mollers. Abstr.

Vll-th Int. Rapeseed Congreee, July 9-11, Saskatoon Saskatchewan, Canada.-1991.- P. 14.

80.Jähne, A. Plant-regeneration from embryogenic cell-suspensions derived from anther cultures of barley (Hordeum vulgare L.) / A. Jähne, P.A. Lazzeri, M. Jagergussen, H. Lörz, Theor. Appl. Genet. 82.: 1991-p.74-80.

81.Kashin, A.S. Megagamete activation and regulation of in vitro embryogenesis in unpollinated millet ovaries. / A.S. Kashin, E.A. Blyudneva, M.A. Silkin, Russ. J. Plant. Physjol. 47.: 2000. - p.260-269.

82.Kartha, K. K. In Plant Tissue Culture - Methods and Applications in Agriculture/ K. K. Kartha/ Thorpe, T. A. (ed.). Academic Press, New York. - 1981.- p. 181.

83.Laksmi-Sita, G. Gynogenic haloids in vitro. /G.Laksmi-Sita. In: S.M. Jain, S.K. Sopory, R.E. Veilleux (eds) In vitro haploid production in higher plants. Vol. 5. Dordrecht.: -Kluwer, 1997. -p.175-193.

84.Lux, H. Production of haploid sugar-beet (Beta vulgaris L) by culturing unpollinated ovules./ H. Lux, L. Herrmann, C. Wetzel, Plant Breed 104.: 1990-p.177-183.

85.Masuda, K. Revision of the Medium for Somatic Embryogenesis in Carrot Suspension Culture/ K. Masuda, Y. Kikuta // J. Fac. Agr. Hokkaido Univ. - 1981. -V. 60.-P. 183-193.

86.Metwally, El. Production of haploid plants from in vitro culture of unpollinated ovules of Cucurbita pepo.l S.A. Moustafa, B.I. El-Sawy, S.A. Haroun, T.A. Shalaby, Plant Cell Tiss Org Cult 52: - 1998 - p.l 17-121.

87.Mol, R. In vitro gynogenesis in Melandrium album - from partenogenetic embryos to mixoploid plants./ R. Mol, Plant Sei. 8: - 1992 - p.261-269.

88.Mukhambetzhanov, S.K. Culture of nonfertilized female gametophytes in vitro./ S.K. Mukhambetzhanov Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 48: - 1997 - p.l 11-119.

89.Murashige, T. Revised Medium for Rapid Growth and Bioassays with Tobacco Tissue Cultures / T. Murashige, F. A. Skoog // Physiol. Plant. - 1962. - Vol. 15. P. 473-497.

90.Murashige, T. Plant propagation through tissue cultures./ T. Murashige, Annu. Rev. Plant Physiol. 25.:- 1974-p.l35-166.

91.Musial, K. Embryological study on gynogenesis in onion (Allium cepa L.)./ K. Musial, B. Bohanec, L. Przywara, Sex Plant Reprod. 13: -2001. - p.335-341.

92.Musial, K. The development of onion (Allium cepa L.) embryo sacs in vitro and gynogenesis induction in relation to flower size./ K. Musial, B. Bohanec, M . Jakse, L. Przywara, In vitro Cell. Dev. Biol -Plant 41: - 2005- p.446-452.

93.Palmer C.E., Overview of haploidy.// C.E. Palmer, W.A. Keller. In: T. Nagata, H. Lorz, J.M. Widholm (eds) Biotechnology in agriculture and forestry - Haploids in crop improvement II. Berlin/Heidelberg - Springer, 2005 p. 3-10.

94.Pierik, R.L.M. Vegetative propagation of horticultural crops in vitro with special attention to shrubs and trees. / R.L.M. Pierik, Acta Hortic., 54: - 1975.- p.71-82.

95.Pretova A. Androgenic response in potato // A. Pretova, Proc. of Seminar on gametic embryogenesis (Norway, 24-27 June, 1993).-1993.

96.Ramsay, J.L. Basal medium and sucrose concentration influence regeneration of easier lily in ovary culture./ J.L. Ramsay, D.S. Galitz, C.W. Lee Hortscience 38: -2003.- p.404-406.

97.Rongbai, Li. Agro-morphological characterization of ovary culture-derived plants of rice (Oryza sativa L.). / Li Rongbai, M.P. Pandey, S.K. Pandey, D.K. Dwivedi, Euphytica 106: - 1999 -p.197-203.

98.San Noeum, L.H. Haploides d'hordeum vulgare L. par culture in vitro non fecondes. / L.H. San Noeum, Ann Amelior Plant 26.: - 1976. - p.751-754.

99. San Noeum, L.H. In vitro induction of gynogenesis in higher plants. Broadening genetic base of crops./ L.H. San Noeum, Proceeding of the conference, The Netherlands, Wageningen.: -1979.- p 327-329.

100. Sibi, M.L. Green haploid plants from unpollinated ovary culture in tetraploid wheat (Triticum durum Defs.). / M.L. Sibi, A. Kobaissi, A. Shekafandeh, Euphytica 122.: - 2001.- p.351-359.

101. Sitbon, M. Production of haploid Gerbera jamesonii plants by in vitro culture of unfertilized ovules./ M.Sitbon, Agronomie 1: -1981- p. 807-812.

102. Skoog, F. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissue cultured in vitro./ F. Skoog, C. O. Miller, Symposia Soc. Exp. Biol., 11: -1957.- p.118-131.

103. Slama-Ayed, O. Production of Doubled Haploids in Tunisian Durum Wheat (Triticum durum Desf.) Cultivars through unpollinated Ovary Culture/ Y. Trifa, S. Ayed, H. A. Slim, J. De Buyser, E. Picard, Plant Mutationn Reports, 2010. - V.2, № 2 — p.33-39.

104. Street, H.E. Plant Tissue and Cell Culture/ H.E. Street, , London.: - Oxford. Blackwell Scientific, Publications, 1977.- p.l 1-30.

105. Sunderland, N. In Plant Tissue and Cell Culture/ N. Sunderland, J.M. Dunwell H. E. Street, (ed.) Oxford.:, Blackwell -1977 -p. 223.

106. Thomas, T.D. A reproducible protocol for the production of gynogenic haploids of mulberry, Morus alba L./ T.D. Thomas, A.K. Bhatnagar, M.K. Razdan, S.S. Bhojwani Euphytica. 110: -1999- p.169-173.

107. Thompson, R. C. A morphological study of flower and seed development in cabbage. / R. C.Thompson, J. Agr. Res., — 1933. — v. 47, N 4. - p.237.

108. Thorpe, T.A. Plant Tissue Culture. Methods and Applications in Agriculture, ed. / T.A. Thorpe. New York : -Academic Press, Incorporated, 1981.-p. 253-271.

109. Touraev A. Advances in Haploid Production in Higher Plants/ A. Touraev, Brian P. Forster , S. Mohan Jain / Springer Science.- 2007.-p.348.

110. Truong-Andre, I. Obtaining plants by in vitro culture of unfertilized maize ovaries {Zea mays L.) and preliminary studies on the progeny of a gynogenetic plant. / I.Truong-Andre,Y.Demarly. Z Pflanzenzucht 92: - 1984- p. 309-320.

111. Williamson, G. Dieta. quercetin glycosides: Antioxidant activity and induction of the anticarcino genie phase II marker enzyme quinone reductase in Hepalclc7 cells// G. Williamson, G.W. Plumb, Y. Uda, K.R. Price, M.J. Rhodes. Carcinogenesis-1996-Vol.l7-P.2385-2387.

112. Wu, B.J. Cytological and embryological studies on haploid plant production from cultured unpollinated ovaries of Nicotiana tabacum L./ B.J. Wu, K.C. Chen, Acta Bot Sin 24: -1982- p. 125-129.

113. www.faostat.fao.org

114. Yang, H. In vitro culture of unfertilized ovules in Helianthus annum L./ H. Yang, C. Zhou, D. Cai, H. Yan, Y. Wu, X. Chen. In: H. Hu, H. Yang (eds) Haploids of higher plants in vitro. Berlin.: - Springer, 1986p.l82-191.

115. Zhou, C. In vitro culture of unpollinated ovaries in Oryza saliva L./ C. Zhou, H. Yang, H. Tian, Z. Liu, H. Yan. In: Hh H, Yang H (eds) Haploids of higher plants in vitro. Berlin.: - Springer, 1986 - p. 167-181.