Разработка биотехнологии β-маннаназы на основе рекомбинантного штамма B.Subtilis 168 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат технических наук Анохина, Екатерина Петровна

• Анохина, Екатерина Петровна
• кандидат технических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат технических наук Анохина, Екатерина Петровна

СОДЕРЖАНИЕ

Введение

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Маннаны растительного сырья и их характеристика

1.2. )3-Маннаназы: продуценты, условия биосинтеза

1.2.1. Продуценты (З-маннаназ

1.2.2. Факторы, влияющие на биосинтез маннаназ при культивировании продуцентов

1.3. Генно-инженерные методы в получении высокоактивных продуцентов

1.3.1. Общая характеристика метода рекомбинантных ДНК

1.3.2. Клонирование и экспрессия маннаназных генов

1.4. Получение препаратов (3-маннаназы и их характеристика

1.4.1. Выделение и очистка (З-маннаназ

1.4.2. Физико-химические свойства (З-маннаназ различного происхождения

1.4.3. Продукты деструкции маннанов

1.4.3.1. Функциональные свойства маннозы

и манноолигосахаридов

1.5. Практическое применение (З-маннаназ

Заключение

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объект исследования и условия его культивирования

2.2. Штаммы микроорганизмов, плазмиды и синтетические олигонуклеотиды, используемые в работе

2.3. Методы молекулярного клонирования в бактериях

2.3.1. Выделение хромосомной ДНК

2.3.2. Выделение плазмиды рВ1ие8спр1 кв (+) из грамотрицательных

микроорганизмов - Е. coli

2.3.3. Выделение плазмиды рСВ20 из грамположительных микроорганизмов - В. subtilis

2.3.4. Полимеразная цепная реакция

2.3.5. Создание генетических конструкций

«клонирующий вектор - встроенная ДНК»

2.3.6. Трансформация клеток химическим методом

2.3.7. Электрофорез в агарозном геле

2.3.8. Выделение ДНК из агарозного геля

2.4. Определение активности ферментного препарата

2.4.1. Определение активности ß-маннаназы

2.4.2. Методы определения активности сопутствующих

ферментов

2.5. Получение спиртоосажденного фермента

2.6. Определение физико-химических свойств фермента

2.7. Определение степени гидролиза маннанов

2.8. Определение качественного состава продуктов гидролиза

2.9. Исследование пребиотических свойств маннозосодержащих гидролизатов

2.10. Общие биохимические и микробиологические методы исследования

2.11. Статистическая обработка экспериментальных данных

ГЛАВА 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО

ШТАММА - ПРОДУЦЕНТА ß-МАННАНАЗЫ

3.1. Выбор объекта клонирования и системы экспрессии

3.2. Создание генетических конструкций на основе плазмидного вектора pBlueScript ks (+)

3.3. Создание генетических конструкций на основе вектора рСВ20

3.4. Выбор наиболее эффективного промотора для экспрессии гена

(3-маннаназы

3.5. Исследование стабильности рекомбинантного плазмидного

штамма В.subtilis

ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОЙ (З-МАННАНАЗЫ И ИССЛЕДОВАНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ФЕРМЕНТА

4.1. Подбор оптимальных условий глубинного культивирования рекомбинантного штамма В.subtilis

4.2. Получение спиртоосажденного ферментного препарата (3-маннаназы

4.3. Технология получения ферментного препарата рекомбинантной (3-маннаназы В.subtilis 168

4.4. Исследование влияния рН и температуры на активность (3-маннаназы

4.5. Исследование кинетики кислотной и термической

инактивации (3-маннаназы

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССА ФЕРМЕНТАТИВНОЙ ДЕСТРУКЦИИ МАННАНОВ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРЕБИОТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

МАННОЗОСОДЕРЖАЩИХ ГИДРОЛИЗАТОВ

5.1. Исследование процесса ферментной деструкции маннанов растительного сырья и идентификация продуктов гидролиза

5.2. Изучение пребиотических свойств маннозосодержащих гидролизатов

5.3. Расчет себестоимости (3-маннаназы по предлагаемой технологии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка биотехнологии β-маннаназы на основе рекомбинантного штамма B.Subtilis 168»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. (З-Маннаназы (ЕС 3.2.1.78) - ферменты, относящиеся к классу О-гликозид-гидролаз, расщепляют внутренние (3-1,4-гликозидные связи в маннанах - полисахаридах гемицеллюлозной фракции клеточной стенки растений. Установлено, что образующиеся в результате ферментативного гидролиза манноолигосахариды и моносахарид манноза обладают пребиотическим и иммунотропным действием. Отсутствие или низкий уровень этого моносахарида в крови приводит к анормальному гликозилированию иммуноглобулинов с нарушенной структурой углеводной части, и также нарушению синтеза других гликопротеинов [53]. Поэтому актуальным является создание на основе продуктов гидролиза маннанов лечебно-профилактических средств с иммуностимулирующими свойствами. Кроме того, (3-маннаназы используют для получения высококачественной бумаги, растворимого кофе, комбикормов и некоторых других продуктов.

Спектр микроорганизмов - природных продуцентов (З-маннаназ довольно широк, однако они характеризуются недостаточной активностью для их использования в качестве промышленных продуцентов.

Достижения в области технологии молекулярного клонирования и генной инженерии позволяют решить данную проблему путем создания микроорганизмов с заданными генетическими характеристиками, что позволяет повысить активность и выход целевого фермента по сравнению с нативным продуцентом.

Получением высокоактивных (З-маннаназ занимались в основном зарубежные ученые: Arcand (1993), Tamaru (1997), Sunna (2000), Hatada (2005), Chen (2008) и другие. Однако исследования, направленные на создание рекомбинантных продуцентов (З-маннаназ, немногочисленны, а в отечественной практике отсутствуют вовсе.

В настоящее время на рынке ферментных препаратов представлены коммерческие препараты (3-маннаназ зарубежного производства. Имеющиеся запатентованные отечественные комплексные ферментные препараты, продуцентами которых являются в основном микромицеты, обладают низкой маннаназной активностью, по сравнению с импортными ферментами, поэтому поиск и получение активных продуцентов (З-маннаназ является актуальной задачей современной биотехнологии.

В связи с вышесказанным, получение эффективного продуцента (3-маннаназы методом генной инженерии и разработка на его основе биотехнологии высокоактивной (3-маннаназы являются актуальными.

Данная работа выполнялась в соответствии с научным направлением кафедры микробиологии и биохимии Воронежского государственного университета инженерных технологий по разработке биологических методов получения минорных Сахаров и изучению их функциональных свойств в рамках Федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы», государственный контракт № 02.512.11.2206 от 26.06.2008 г.

Цель диссертационной работы заключалась в разработке биотехнологии высокоактивной (3-маннаназы с использованием методов генной инженерии, исследовании физико-химических свойств ферментного препарата и определении пребиотической способности полученных маннозосодержащих гидролизатов.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

• выбор микроорганизма - источника гена Р-маннаназы и системы экспрессии клонированного гена;

• определение эффективного промотора для экспрессии гена ß-маннаназы;

• получение рекомбинантного штамма - высокоактивного продуцента ß-маннаназы;

• определение оптимальных условий биосинтеза целевого фермента;

• получение ферментного препарата ß-маннаназы и исследование его физико-химических свойств;

• исследование ферментативной деструкции галактоманнана и идентификация продуктов гидролиза;

• определение пребиотических свойств маннозосодержащих гидролизатов в опытах in vivo.

Научная новизна. С применением технологии рекомбинантных ДНК впервые получен отечественный ферментный препарат высокоактивной ß-маннаназы. Путем введения в составе многокопийного вектора рСВ20 дополнительных копий гена ß-маннаназы под контролем регулируемого промотора PST сконструирован штамм В. subtilis 168 -перспективный продуцент ß-маннаназы, превышающий уровень активности нативного продуцента в 20 раз и не уступающий известным рекомбинантным бактериальным продуцентам ß-маннаназ. Выявлены закономерности кислотной и термической инактивации рекомбинантного фермента. Установлены оптимальные параметры процесса ферментативной деструкции галактоманнана камеди рожкового дерева, обеспечивающие степень гидролиза галактоманнана 85 %.

Практическая значимость. Проведена апробация биотехнологии рекомбинантной ß-маннаназы на базе ИБФМ РАН и получена опытная партия фермента. Разработана технология получения маннозосодержащих

гидролизатов, основанная на ферментативном гидролизе галактоманнанов (З-маннаназой, которая может найти применение при производстве функциональных продуктов и кормовых добавок с иммуностимулирующим и пребиотическим действием.

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертационной работы были представлены на отчетных конференциях ВГТА (г. Воронеж, 2009-2011 гг.); «Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых» (2009 г); Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (г. Москва, 2010, 2011 гг.); 2-ом международном конгрессе «ЕвразияБио» (г. Москва, 2010 г.); 4-й всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование 2010»; конференции «Химия и полная переработка биомассы леса» (г. Санкт-Петербург, 2010 г.); II Международной конференции Российского химического общества им. Д. И. Менделеева (г. Москва, 2010 г.) международном форуме «Санкт-Петербург-Гастро-2011» (г.Санкт-Петербург, 2011 г.).

Данная работа была представлена на конкурс молодых ученых, проходивший в рамках VI Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития», где отмечена медалью за лучшую научно-исследовательскую работу.

Работа поддержана грантом Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере по программе «У.М.Н.И.К.».

Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 15 работ, в том числе 4 в журналах из списка ВАК.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения результатов (3 главы), заключения, выводов, списка использованных источников, приложений и представлена на 142 страницах машинописного текста. Иллюстративный материал включает 25 рисунков и 9 таблиц. Библиография включает 160 наименований, в т. ч. 135 иностранных.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Анохина, Екатерина Петровна

выводы

1. Бактерии В. виЫШв 168 являются источником гена р-маннаназы. Установлено, что регулируемый промотор Р8Т является более эффективным, по сравнению с ксиланазным, для экспрессии гена р-маннаназы В. зиЫШв 168 в составе многокопийного вектора рСВ20 в бактериях того же вида.

2. Оптимальными условиями культивирования рекомбинантного штамма В. виЫШв 168, обеспечивающими максимальный синтез Р-маннаназы с активностью 2374 ед/мл культуральной жидкости, следует считать температуру 35 °С, рН 7,0, продолжительность культивирования 24 ч.

3. При разработке технологии получения ферментного препарата показано, что максимальный выход р-маннаназы по активности наблюдался при осаждении этанолом при его концентрации в смеси 75 % и рН 7,0; при этом удельная активность спиртоосажденного фермента составила 116 ед/мг белка.

4. Установлено, что р-маннаназа В. виЬйИв 168 проявляет максимальную активность при температуре 40 °С и рН 7,0. При рН 7,0 и температуре 30 °С фермент обладает наибольшей стабильностью, сохраняя при этом около 70 % активности через 6 ч инкубации.

5. Показано, что максимальная степень деструкции галактоманнана камеди рожкового дерева р-маннаназой В. виЫШз 168 составляет 85% при рН 7,0, температуре 35 °С, дозировке фермента 9 ед/г субстрата, продолжительности гидролиза 3 ч; при идентификации продуктов гидролиза галактоманнана установлено присутствие в гидролизатах преимущественно маннозы и маннобиозы.

6. Применение маннозосодержащих гидролизтов в дозировке 2 мг/мышь в условиях экспериментального дисбиоза и способствующее увеличению количества бифидобактерий и молочнокислых бактерий свидетельствует об их пребиотическом действии. Действие маннозосодержащих гидролизатов сравнимо с коммерческими пробиотическими препаратами «Бифидумбактерин» и «Лактобактерин».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в ходе выполнения работы был проведен скрининг бактериальных продуцентов ß-маннаназ, в качестве объекта клонирования и системы экспрессии выбраны бактерии В. subtilis 168. Показано, что экспрессия гена ß-маннаназы под контролем регулируемого промотора PST более эффективна в данной системе, по сравнению с ксиланазным промотором.

За счет введения в составе многокопийного вектора рСВ20 дополнительных копий гена ß-маннаназы в бактериальные клетки В. subtilis 168 под контролем регулируемого промотора PST получен рекомбинантный штамм В. subtilis 168, активно продуцирующий ß-маннаназу.

Определены оптимальные условия культивирования рекомбинантного штамма для максимальной продукции целевого фермента, а также подобраны оптимальные условия осаждения рекомбинантного ферментного препарата.

Разработана биотехнология ß-маннаназы с использованием рекомбинантного продуцента В. subtilis 168. Достоинством предлагаемой технологии является низкая себестоимость ферментного препарата, обусловленная высокой активностью целевого фермента ß-маннаназы, что позволяет не прибегать к дорогостоящим методам очистки спиртоосажденного фермента.

Установлены оптимальные параметры действия рекомбинантной ß-маннаназы В. subtilis 168 на субстрат, а также определена pH- и термостабильность фермента в условиях, отличных от оптимальных.

Изучена ферментативная деструкция галактоманнана камеди рожкового дерева. Установлены оптимальные параметры гидролитического расщепления галактоманнана с помощью рекомбинантной (3-маннаназы В. subtilis 168 и идентифицированы продукты гидролиза.

В опытах in vivo выявлена бифидогенная и лактогенная активность маннозосодержащих гидролизатов, которые оказывали такое же действие на восстановление микрофлоры мышей на фоне индуцированного дисбиоза, как и коммерческие пробиотические препараты «Бифидумбактерин» и «Лактобактерин».

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Анохина, Екатерина Петровна, 2011 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. р-Маннаназы различного происхождения: получение, характеристика и перспективы практического применения / Д.А. Черенков [и др.] // Успехи современной биологии. - 2010. - Т. 130. -№2.-С. 190-199.

2. Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик, Дж. Пастернак. - М.: «Мир», 2002. - 589 с.

3. Глюкоманнан корней интродуцированного на Урале Егетигш йюсив / О. В. Анулов [и др.] // Прикладная биохимия и микробиология. - 1995. - Т. 31. - № 1. - С. 87-91.

4. Грачев, Ю.П. Математические методы планирования эксперимента / Ю.П. Грачев, Ю.М. Плаксин. - М. : ДеЛи принт, 2005. - 296 с.

5. Егоров, А. В. Установление первичной и тонкой структуры галактоманнана семян вксЦЫа йгасапйюз £ Глетив Ь. / А. В. Егоров, Н. М. Местечкина, В. Д. Щербухин // Прикладная биохимия и микробиология. - 2003. - Т. 39. - № 4. - С. 452-456.

6. Клаг, Уильям С. Основы генетики / Уильям С. Клаг, Майкл Р. Каммингс. - М.: Техносфера, 2007. - 896 с.

7. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. - М: Мир, 1984.-479 с.

8. Местечкина, Н. М. Изучение водорастворимых полисахаридов плодов верблюжьей колючки Alhaagi регвагат Е. / Н. М. Местечкина, К. Довлетмурадов, В. Д. Щербухин // Прикладная биохимия и микробиология. - 1993. - Т. 29. - вып. 1. - С. 170-173.

9. Определитель бактерий Берджи: Справочник: в 2 т. - М.: Мир. - Т.1, 1997.-432 с.

10. Пат. № 2002119059. Галактоманнанолигосахариды и способ их получения, а также их применение. М. Кунц [и др.]. 2004.

11. Пат. № 2007114280. Композиции, обладающие функцией снижения жировой ткани тела, и продукты питания и напитки, содержащие такие композиции. И. Асано [и др.]. 2008.

12. Пат. № 2096974. Способ коррекции углеводного состава пищевых продуктов общего и специального назначения. И.П. Чепурной, С.М. Кунижев. 1997.

13. Пат. № 2097041. Способ лечения сахарного диабета. И.П. Чепурной, К.Э. Больбат. 1997.

14. Полыгалина, Г.В. Определение активности ферментов. Справочник. / Г.В. Полыгалина, B.C. Чередниченко, JI.B. Римарева. - М.: ДеЛи принт, 2003.- 375 с.

15. Рабинович, М.Л. Прогресс в изучении целлюлолитических ферментов и механизм биодеградации высокоупорядоченных форм целлюлозы / М.Л. Рабинович, М.С. Мельник // Успехи биологической химии. - 2000. - Т. 40. - С. 205—266.

16. Ракитин, А. Л. Новые векторы для Bacillus, subtilis / А. Л. Ракитин, Е. О. Добржанская, А. И. Степанов // Биотехнология. - 2000. - № 6. -С. 11-15.

17. Рубин, А.Б. Биофизика: В 2-х т. Т. 1: Теоретическая биофизика / А.Б. Рубин. - М.: Книжный дом «Университет», 1999. - 448 с.

18. Рыбчин, В.Н. Основы генной инженерии / В.Н. Рыбчин. - Спб.: «Студенческая книга», 2002. - 522 с.

19. Ферментные препараты некоторых мицелиальных грибов, расщепляющие полимеры зерна злаков / Н. А. Родионова [и др.] // Прикладная биохимия и микробиология. - 1995. - Т. 31. - вып. 4. -С. 433-440.

20. Характеристика и структура галактоманнана Астрагала сериоплодного (Astragalus falcatus Lam.) / О. В. Аиулов [и др.] // Прикладная биохимия и микробиология. - 1995. - Т. 31. - №. 6. - С. 645-649.

21. Характеристики гибридных плазмид, влияющие на их стабильность и экспрессию целевого продукта у Bacillus subtilis / A.JI. Ракитин [и др.] // Биотехнология. - 2000. - №6. - С. 16-26.

22. Харди К.Г. Методы клонирования в бациллах: Клонирование ДНК. -М: Мир, 1988 - 311 с.

23. Чепурной, И.П. Питание и здоровье человека / И.П. Чепурной. - М.: Медицина, 2003. - 208 с.

24. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т.1. Микрофлора человека и животных и её функции / Б.А. Шендеров. - М.: ГРАНТЪ, 1998. - 287 с.

25. Щербухин, В. Д. Галактоманнаны отечественной флоры / В. Д. Щербухин // Прикладная биохимия и микробиология. - 1993. - Т.

29.-вып. 6.-С. 803-813.

26. A cel44C-man26A gene of endophytic Paenibacillus polymyxa GS01 has multi-glycosyl hydrolases in two catalytic domains / K.M. Cho [et al.] // Appl Microbiol Biotechnol. - 2006. - V. 73. - № 3. - P. 618-630.

27. A cellulose-binding moduleof the Trichoderma reesei p-mannanase Man5A increases the mannan-hydrolysis of complex substrates / P. Hagglund [et al.] // J. Biotechnol. - 2003. - V. 101. - P. 37-48.

28. A dose-response study with the feed enzyme (3-Mannanase in broilers provided with corn-soybean meal based diets in the absence of antibiotic growth promoters / M. E. Jackson [et al.] // Poultry Sci. - 2004. - V. 83. -P. 1992-1996.

29. A family 26 mannanase produced by Clostridium thermocellum as a component of the cellulosome contains a domain which is conserved in

mannanases from anaerobic fungi / JR. Halstead [et al.] // Microbiology. - 1999. -V. 145.-P. 3101-3108.

30. A gene encoding a novel multidomain beta-l,4-mannanase from Caldibacillus cellulovorans and action of the recombinant enzyme on kraft pulp / A. Sunna [et al.] // Appl. Environ Microbiol. - 2000. - V. 66. -P. 664-670.

31. A highly thermostable endo-(l,4)-ß-mannanase from the marine bacterium Rhodotermus marinus / O. Pölitz [et al.] // Appl Microbiol Biotechnol. -2000. - V. 53. - P. 715-721.

32. A new efficient expression system for Bacillus and its application to production of recombinant phytase / J. Kerovuo [et al.] // Biotechnology Letters. -2000. - V. 22. - № 16.-P. 1311-1317.

33. A non-modular endo-beta-1,4-mannanase from Pseudomonas fluorescens subspecies cellulosa / K. L. Braithwaite [et al.] // Biochem J. . 1995.-V. 305.-P. 1005-1010.

34. A simple non-aqueous method for carboxmethylation of galactomannans / K.S. Parvathy [et al.] // Carbohydr Polym. - 2005. - V. 62. - P. 137141.

35. A ß-mannanase from B. subtilis B36: purification, properties sequencing, gene cloning and expression in E. coli / Y. N. Li [et al.] // Z. Naturforsch (C). - 2006. -V. 61. -P. 840-846.

36. Adsorption of hemicellulases onto bleached kraft fibers / P. J. Gerber [et al.] // J. Biotechnol. - 1999. - V. 67. - № 1. - P. 67-75.

37. Akino, T. Characterization of three ß-mannanases of analkalophilic Bacillus sp. / T. Akino, N. Nakamura, K. Horikoshi // Agric. Biol. Chem. - 1988. - V. 52. - № 3. - P. 773-779.

38. Akino, T. The cloned ß-mannanase gene from alkalophilic Bacillus sp. AM-001 produces two ß-mannanases in Escherichia coli. / T. Akino, C. Kato, K. Horikoshi. // Arch. Microbiol. - 1989. - V. 152. - P. 10-15.

39. Araujo, A. Hemicellulases of Bacillus species: preliminary comparative studies on production and properties of mannanases and galactanases / A. Araujo, O. P. Ward // J. Appl. Bacteriol. - 1990. - V. 68. - P. 253261.

40. Beta-mannanase of Streptomyces lividans 66: cloning and DNA sequence of the manA gene and characterization of the enzyme // N. Arcand [et al.] // Biochem J. - 1993. - V. 290. - P. 857-863.

41. Biely, P. Enzymology of hemicellulose degradation / P. Biely, M. Tenkanen // Trichoderma & Gliocladium. - London. - 1998. - V. 2. - P. 25-47.

42. Carbohydrate-deficient glycoprotein syndrome type lb. Phosphomannose isomerase deficiency and mannose therapy / R. Niehues [et al.] // J Clin Invest. - 1998. - V. 101. - № 7. - P. 1414-1420.

43. Characterisation of water-soluble galactoglucomannan from Norway spruce wood and thermomechanical pulp / S. Willför [et al.] // Carbohydr Polym. - 2003. - V. 52. - P. 175-187.

44. Characterization and gene cloning of a novel beta-mannanase from alkaliphilic Bacillus sp. N16-5 / M. Yanhe [et al.] // Extremophiles. -

2004.-V. 8. - P. 447-454.

45. Characterization of galactomannan derivatives in roasted coffee beverages / F. M. Nunes [et al.] // J. Agric. Food Chem. - 2006. - V. 54. -№9.-p. 3428-3439.

46. Charrier, M. Mannan-degrading enzymes purified from the crop of the brown garden snail Helix aspersa Müller (Gastropoda Pulmonata) / M. Charrier, C. Rouland // J Exp Zool. - 2001. - V. 290. - № 2. - P. 125135.

47. Cloning and expression in Saccharomyces cerevisiae of a Trichoderma reesei beta-mannanase gene containing a cellulose binding domain / H.

Stálbrand [et al.] // Appl Environ Microbiol. - 1995. - V. 61. - № 3. - P. 1090-1097.

48. Cloning and sequencing of ß-mannanase gene from Bacillus subtilis NM-39 / N. S. Mendoza [et al.] // Biochim. Biophys. Acta. - 1995. - V. 1243. -№3.-P. 552-554.

49. Cloning, DNA sequencing, and expression of the beta- 1,4-mannanase gene from a marine, Vibrio sp. strain MA-138 / Y. Tamaru [et al.] // J. Ferment. Bioeng. - 1997. - V. 83. - P. 201-205.

50. Cloning, functional expression and characterization of Aspergillus sulphureus beta-mannanase in Pichia pastoris / X. Chen [et al.] // J. Biotechnol. - 2007. - V. 128. -№3.-P. 452-461.

51. Cloning, sequence analysis and heterologous expression of a betamannanase gene from Bacillus subtilis Z-2 / Q. Zhang [et al.] // Mol Biol (Mosk). - 2006. - V. 40. - № 3. - P. 418-424.

52. Cloning, sequence analysis, and expression in Escherichia coli of a gene coding for a beta-mannanase from the extremely thermophilic bacterium "Caldocellum saccharolyticum" / E. Lüthi [et al.] // Appl Environ Microbiol. - 1991. - V. 57. - № 3. - P. 694-700.

53. Congenital disorder of glycosylation type lb. Experience with mannose treatment / E. Martín Hernández [et al.] // An Pediatr (Bare). - 2008. -V. 69. -№ 4. -P. 358-365.

54. Construction of a double functional recombinant strain of Pichia pastoris co-expressing phytase and mannanase and the enzymatic analyses / SP. Huang [et al.] // Wei Sheng Wu Xue Bao. - 2007. - V. 47. - № 2. - P. 280-284.

55. Correction of the the ß-mannanase domain of the celC pseudogene from Caldocellulosiruptor saccharolyticus and activity of the gene product on kraft pulp / D. D. Morris [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 1995. - V. 61.-P. 2262-2269.

56. Cui, F. Production of neutral beta-mannanase by Bacillus subtilis and its properties / F. Cui, J. Shi, Z. Lu // Beijing: Institute of Microbiology. -1999,-V. 39.-P. 60-63.

57. de Lonlay, P. The clinical spectrum of phosphomannose isomerase deficiency, with an evaluation of mannose treatment for CDG-Ib / P. de Lonlay, N. Seta // Biochim Biophys Acta. - 2009. - V. 1792. - № 9. - P. 841-843.

58. Dekker, R. F. H. Hemicelluases: their occurrence, purification, properties and mode of actions / R. F. H. Dekker, G. N. Richards // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. - 1976. - V. 32. - P. 277-352.

59. Dong, X. Z. Degradation of galactomannan by a Clostridium butyricum strain / X.Z. Dong, P. J. Schyns, A. J. Stams // Antonie Van Leeuwenhoek. - 1991.-V. 60. - P. 109-114.

60. Dutta, S. Endo-p-mannanase activity present in cell wall extracts of lettuce endosperm prior to radicle emergence / S. Dutta, K. J. Bradford, D. J. Nevins // Plant Physiol. - 1997.-V. 113.-№ l.-P. 155-161.

61. Effect of mannan-endo-1,4-p-mannosidase on the growth performance of turkeys fed diets containing 44% and 48% crude protein soybean meal / N. H. Odetallah [et al.] //Poultry Sci. - 2002. -V. 81. -P. 1322-1331.

62. Effects of P-mannanase addition to corn-soybean meal diets on growth performance, carcass traits, and nutrient digestibility of weaning and growing-finishing pigs / L. A. Pettey [et al.] // Anim. Sci. - 2002. - V. 80.-P. 1012-1019.

63. Effects of p-mannanase in corn-soy diets on commercial leghorns in second-cycle hens / G. Wu [et al.] // Poultry Sci. - 2005. - V. 84. - P. 894-897.

64. Endo-beta-1,4-Mannanases from blue mussel, Mytilus edulis: purification, characterization, and mode of action / B. Xu [et al.] // J. Biotechnol. - 2002. - V. 18. - P. 267-277.

65. Enzymological aspects of microbial hemicellulases with emphasis on fungal systems / M.P. Coughlan [et al.] // Hemicellulose and hemicellulases. - Portland, London. - 1993. - P. 53-84.

66. Ethier, N. Gene Cloning, DNA Sequencing, and Expression of Thermostable b-Mannanase from Bacillus stearothermophilus / N. Ethier, G. Talbot, J. Sygusch // Appl. and Envir. Microbiology. - 1998. -P.4428-4432.

67. Evaluation of an endo-beta-mannanase produced by Streptomyces ipomoea CECT 3341 for for the biobleaching of pine kraft pulps / M.D. Montiel [et al.] // Madrid: Universidad de Alcala. - 2002. - V. 58. - P. 67-72.

68. Expression of CEL2 and CEL4, two proteins from Agaricus bisporus with similarity to fungal cellobiohydrolase I and p-mannanase, respectively, is regulated by the carbon source / E. Yagüe [et al.] // Microbiology. - 1997. - V. 143. - P. 239-244

69. Expression of the Aspergillus aculeatus endo-beta-l,4-mannanase encoding gene (manl) in Saccharomyces cerevisiae and characterization of the recombinant enzyme / M.E. Setati [et al.] // Protein Expr Purif. -2001. - V. 21. - № l.-P. 105-114.

70. Expression, cloning, purification and characterization of a beta-1,4-mannanase from Aspergillus aculeatus / S. Christgau [et al.] // Biochem. Mol. Biol. Int. - 1994. - V. 33. - P. 917-925.

71. Fagerstam, L.G. The l,4-|3-glucan cellobiohydrolases of Trichoderma reesei QM-9414. A new type of cellulolytic synergism / L.G. Fagerstam, L.G. Pettersson // FEBS Lett. - 1980. - V. 119. - P. 97-100.

72. Filho, E.X.F. Hemicellulases and biotechnology / E.X.F. Filho // Recent research developments in microbiology. - 1998. - P. 165-176.

73. Flari, V. Purification and characterization of a p-mannanase from the digestive tract of the edible snail Helix lucorum L. Carbohydr / V. Flari, M. Matoub, C. Rouland // Res. - 1995. - V. 275. - № 1. - P. 207-213.

74. Franco, P. F. Production and characterization of hemicellulase activities from Trichoderma harzianum strain T4 / P. F. Franco, H. M. Ferreira, E. X. Filho // Biotechnol Appl. Biochem. - 2004. - V. 40. - P. 255-259.

75. Galactomannanases Man2 and Man5 from Thermotoga species: growth physiology on galactomannans, gene sequence analysis, and biochemical properties of recombinant enzymes / K.N. Parker [et al.] // Biotechnol Bioeng. - 2001. - V. 75. - № 3. - P. 322-333.

76. Gene cloning, expression and characterization of a novel betamannanase from Bacillus circulans CGMCC 1416 / Y. Li [et al.] // J. Microbiol Biotechnol.-2008.-V. 18.-№1.-P. 160-166.

77. Gherardini, F. Purification and characterization of a cell-associated, soluble mannanase from Bacteroides ovatus / F. Gherardini, M. Babcock, A. Salyers // J. Bacteriol. - 1987. - V. 169. - P. 2038-2043.

78. Glycosidases induced in Aspergillus tamarii. Secreted alpha-D-galactosidase and beta-D-mannanase / A. Civas [et al.] // Biochem J. -1984. - V. 219. - № 3. - P. 857-863.

79. Helow, E. R. The development of a B. subtilis 168 culture condition for enhanced and accelerated beta-mannanase production / E. R. Helow, A. A. Khattab // Acta Microbiol. Immunol. Hung. - 1996. - V. 43. - P. 289-299.

80. High-level production, purification and characterization of a thermostable (3-mannanase from the newly isolated Bacillus subtilis WY34 / Z. Jiang [et al.] // Carbohydrate Polymers. - 2006. - V. 66. - № l.-P. 88-96.

81. High-resolution native and complex structures of thermostable betamannanase from Thermomonospora fusca - substrate specificity in glycosyl hydrolase family 5 / M. Hilge [et al.] // Structure. - 1998. - V. 6.-№ ll.-P. 1433-1444.

82. High-precision, whole-genome sequencing of aboratory strains facilitates genetic studies / A. Srivatsan [et al.] // PLoS Genetics. - 2008. - V. 8. -№ 8.-P. 1-14.

83. Hongpattarakere, T. Hyperthermostable cellulolytic and hemicellulolytic enzymes and their biotechnological applications / T. Hongpattarakere // J. Sei. Technol. - 2002. -V. 24. - P. 481-491.

84. Hossain, M.Z. Multiple forms of ß-mannanase from Bacillus sp. KK01 // M.Z. Hossain, J. Abe, S. Hizukuri // Enzyme Microb. Technol. - 1996. -V. 18. - P. 95-98.

85. Hydrolysis of isolated coffee mannan and coffee extract by mannanases of Sclerotium rolfsii / A. Sachslehner [et al.] // J. Biotechnol. - 2000. -V. 80.-P. 127-134.

86. Improved Production of Mannanase by Streptomyces lividans / F. Marga [et al.] // Appl and Envir Microbiol. - 1996. - P. 4656-4658.

87. Isolation and characterization of galactoglucomannan from spruce (Picea abies) / J. Lundqvist [et al.] // Carbohydr Polym. - 2002. - V. 48. - P. 29-39.

88. Isolation of mannan-utilizing bacteria the culture conditions for mannanase production / N. S. Mendoza [et al.] // World Journal of Microbiology & Biotechnology. - 1994. - V. 10. - P. 51-54.

89. Johnson, K.G. Enzymic properties of ß-mannanase from Polyporus versicolor / K.G. Johnson, N.W. Ross // Enzyme Microb Technol. -1990.-V. 12.-P. 960-964.

90. Kansoh, A. L. Xylanase and mannanase enzymes from Streptomyces galbus NR and their use in biobleaching of softwood kraft pulp / A. L. Kansoh, Z. A. Nagieb // Anton, van. Leeuwonhoek. - 2004. - V. 85. P. 103-114.

91. Kataoka, N. Isolation and characterization of an active mannanase-producing anaerobic bacterium, C. tertium KT-5A from lotus soil / N. Kataoka, Y. Tokiwa // J. Appl. Microbiol. - 1998 - V.84. - P. 357-367.

92. Kim, L. A xylose-inducible Bacillus subtilis integration vector and its application / L. Kim, A. Mogk, W. Schumann // Gene. - 1996. - V.181. -№ 1-2. - P. 71-76.

93. Kurakake, M. Production of beta-mannanase and beta-mannosidase from Aspergillus awamori K4 and their properties / M. Kurakake, T. Komaki. // Curr Microbiol. - 2001. - V. 42. - № 6. - P. 377-80.

94. Lee, J. T. (3-Mannanase ameliorates viscosity-associated depression of growth in broiler chickens fed guar germ and hull fractions / J. T. Lee, C. A. Bailey, A. L. Cartwright // Poultry Sci. - 2003. - V. 82. - P. 19251931.

95. Li, W. Purification and characterization of an endo-beta-1, 4-mannanase from Bacillus subtilis BM9602 / W. Li, Z. Dong, F. Cui // Wei Sheng Wu Xue Bao. - 2000. - V. 40. - № 4. - P. 420-424.

96. Linear mannan in the endosperm of Schizolobium amazonicum / C.L.O. Petkowicz [et al.] // Carbohydr Polym. - 2001. - V. 44. - P. 107-112.

97. Mannan-degrading enzymes from Sclerotium rolfsii: Characterization and synergism of two endo (3-mannanases and a (3-mannosidase / G. M. Gubitz [et al.] // Bioresource Technol. - 1996. - V. 58. - P. 127-135.

98. McCleary, B. V. Enzymic analysis of polysaccharide structure / B. V. McCleary, N. K. Matheson // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. - 1986. - V. 44.-P. 147-176.

99. McCleary, B. V. p-D-Mannanse / B. V. McCleary // Methods Enzymol. -1988.-V. 160.-P. 596-610.

100. Molecular cloning of a cDNA encoding a (3-mannan endohydrolase from the seeds of germinated tomato (Lycopersicon esculentum) / J. D. Bewley [et al.] // Planta. - 1997. - V. 203. - № 4. - P. 454-459.

101. Molecular cloning, sequencing, and expression of a novel multidomain mannanase gene from Thermoanaerobacterium polysaccharolyticum /1. K. Cann [et al.] // J. Bacteriol. - 1999. - V. 181.-P. 1643-1651.

102. Moreira, L. R. S. An overview of mannan structure and mannan-degrading enzyme systems / L. R. S. Moreira, E. X. F. Filho // Appl Microbiol Biotechnol-2008.-V. 79.-P. 165-178.

103. Nakajima, N. Purification and characterization of konjac glucomannan degrading enzyme from anaerobic human intestinal bacterium, Clostridium butyricum-Clostridium beijerinckii group / N. Nakajima, Y. Matsuura // Biosci. Biotechnol. Biochem. - 1997. -V. 61. - P. 1739-1742.

104. Nonogaki, H. A germination-specific endo-(3-mannanase gene is expressed in the micropylar endosperm cap of tomato seeds / H. Nonogaki, O. H. Gee, K. J. Bradford // Plant. Physiol. - 2000. - V. 123. -

№4.-P. 1235-1246.

105. Online quantitation of enzymic mannan hydrolyzates in small-volume bioreactors by microdialysis sampling and column liquid chromatography-integrated pulsed electrochemical detection / N. Torto [et al.] //J. Chromatogr.- 1996.-V. 725.-№ l.-P. 165-175.

106. Optimization for beta-mannanase production of a psychrophilic bacterium, Flavobacterium sp. / Zakaria, M. M. [et al.] // Biosci. Biotechnol. Biochem. . 1998. -V. 62.-P. 655-660.

107. Optimization of agitation, aeration, and temperature conditions for maximum (3-mannanase production / F. Yaoyu [et al.] // Enzyme and Microbial Technology. - 2003. - V. 32. - P. 282-289.

108. Painter, T.J. Structural evolution of glycans in algae / T.J. Painter // Pure Appl Chem. - 1983. - V. 55. - P. 677-694.

109. Paradis, F. W. (3-Mannanase of Streptomyces lividans 66: cloning and DNA sequencing of the manA gene and characterization of the enzyme /

F. W. Paradis, R. Morosoli, F. Sharek // J. Biochem. - 1993. - V. 290. -P. 857-863.

110. Pason, P. Paenibacillus curdlanolyticus strain B-6 xylanolytic-cellulolytic enzyme system that degrades insoluble polysaccharides / P. Pason, KL. Kyu, K. Ratanakhanokchai // Appl Environ Microbiol. -2006. - V. 72. - № 4. - P. 2483-2490.

111. Pat. № 5,661,021. Mannanase enzymes, genes coding for them and a method for isolating the genes, as well as a process for bleaching of lignocellulosic pulp. J. Buchert [et al.]. 1997.

112. Pat. № 6,566,114. Mannanases. M. S. Kauppinen [et al.]. 2003.

113. Pat. № 6376445. Detergent compositions comprising a mannanase and a protease. J. P. Bettiol, M. S. Showell. 2002.

114. Perlin, A.S. The action of (3-glucanases on |3-glucans of mixed linkage / A.S. Perlin // Advance in enzymic hydrolysis of cellulose and related materials. - 1963.-P. 185-195.

115. Production and properties of beta-mannasase by free and immobilized cells of Aspergillus oryzae NRRL 3488 / A.M. Hashem [et al.] // Cytobios. -2001.-V. 105.-P. 115-130.

116. Production of galacto-manno-oligosaccharides from guar gum by betamannanase from Pénicillium oxalicum SO / M. Kurakake [et al.] // J Agric Food Chem. - 2006. - V. 54. P. 7885-7889.

117. Production, partial purification and properties of (3-mannanases obtained by solid substrate fermentation of spent soluble coffee wastes and copra paste using Aspergillus oryzae and Aspergillus niger / C. Regalado [et al.] // J. Sci. Food Agric. - 2000. - V. 80. - P. 1343-1350.

118. Production, purification and characterization of an esterase liberating phenolic acids from lignocelluloses / M. Tenkanen [et al.] // J. Biotechnol. - 1991. -V. 18. -№ 1-2.-P. 69-83.

119. Prokaryotic expression, purification and characterization of Aspergillus sulphureus beta-mannanase and site-directed mutagenesis of the catalytic residues / X. Chen [et al.] // Appl Biochem Biotechnol. - 2008. - V. 149. - № 2. - P. 139-144.

120. Protein estimation with folin phenol reagent / O.H. Lowry [et al.] // J. Biol.Chem. - 1951. - V.193. № 1. - P. 265-275.

121. Puls, J. Chemistry of hemicellulose: relationship between hemicellulose structure and enzyme required for hydrolysis / J. Puls, J. Schuseil // Hemicellulose and hemicellulases. - Portland, London, 1993. - P. 1-27.

122. Purification and characterization of novel mannanases used in pulp bleaching / W. A. Cuevas [et al.] // Biotechnology in the pulp and paper Industry. - Vienna, Austria: Facultas-Universitatsverlag. - 1996. - P. 123-126.

123. Purification and characterization of two forms of endo- ß-l,4-mannanase from a thermotolerant fungus, Aspergillus fiimigatus IMI 385708 (formerly T. lanuginosus IMI 158749) / V. Puchart [et al.] // Biochimica et biophysica Acta. - 2004. - V. 1674. - P. 239-250.

124. Purification and characterization of two ß-mannanases from Trichoderma reesei / H. Stelbrand [et al.] // J. Biotechnol. - 1993. - V. 29.-P. 229-242.

125. Purification and characterization on extremely thermostable betamannanase, beta-mannosidase, and alpha-galactosidase from the hyperthermophilic eubacterium Thermotoga neapolitana 5068 / G.D. Duffaud [et al.] // Appl. Environ Microbiol. - 1997. - V. 63. - P. 169177.

126. Purification and properties of Bacillus subtilis SA-22 endo-1,4-beta-D-mannanase / Y. M. Sun [et al.] // Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao. -2003. - V. 19. - № 3. - P. 327-330.

127. Purification and properties of beta-mannanases I and II from the germinated seeds of Trifolium repens. Mode of galactomannan degradation in vitro / H. Villarroya [et al.] // Biochem J. - 1978. - V. 175.-№3.-P. 1079-1087.

128. Purification and some properties of an endo-1,4-beta-D-mannanase from a marine mollusc, Littorina brevicula / I. Yamaura [et al.] // J. Biotechnol. - 1996. - V. 60. - P. 674-676.

129. Purification and some properties of beta-mannanase from Pénicillium purpurogenum / G.G. Park [et al.] // J. Agric. Biol. Chem. — 1987. - V. 51.-P. 2709-2716.

130. Reese, E.T. beta-Mannanases of fungi / E.T. Reese, Y. Shibata // Can. J. Microbiol. - 1965.-V. 11.-P. 167-181.

131. Sachslehner, A. Efficient production of mannan-degrading enzymes by the basidiomycete Sclerotium rolfsii / A. Sachslehner [et al.] // Appl Biochem Biotechnol. - 1998. -V. 70. - P. 939-953.

132. Sachslehner, A. Purification and some properties of a thermostable acidic endo-ß-l,4-D-mannanase from Sclerotium (Athelia) rolfsii / A. Sachslehner, D. Haltrich // FEMS Microbiol. Lett. -1999. - V. 177. - № l.-P. 47-55.

133. Sambrook J. Molecular cloning: Laboratory manual / J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis. - New York: Cold Spring Harbor Laboratory

Press,1989. - 452 p.

134. Sequence of the Clostridium thermocellum mannanase gene man26B and characterization of the translated product / J. Kurokawa [et al.] // Biosci Biotechnol Biochem. - 2001. - V. 65. - № 3. - P. 548-554.

135. Sequence of the gene for a high-alkaline mannanase from an alkaliphilic Bacillus sp. strain JAMB-750, its expression in Bacillus subtilis and characterization of the recombinant enzyme / Y. Hatada [et al.] // Extremophiles. - 2005. - V. 9. - № 6. - P. 497-500.

136. Sequencing and expression of a (3-mannanase gene from the extreme thermophile Dictyoglomus thermophilum Rt46B.l, and characteristics of the recombinant enzyme / M. D. Gibbs [et al.] // Curr. Microbiol. - 1999. -V. 39. -№ 6.-P. 351-357.

137. Sequencing, cloning and expression of a (3-1,4-mannanase gene, manA, from the extremely thermophilic anaerobic bacterium, Caldicellulosiruptor Rt8B.4 / M. D. Gibbs [et al.] // FEMS Microbiol. Lett. - 1996.-V. 141. -№ 1.-P. 37-43.

138. Smith, M.A. Bacterial fitness and plasmid loss: the importance of culture conditions and plasmid size / M. A. Smith, M. J. Bidochka, U. Can // J. Microbiol. - 1998,- V. 44. - P. 351-355.

139. Softwood hemicellulose-degrading enzymes from Aspergillus niger: Purification and properties of a beta-mannanase / P. Ademark [et al.] // J. Biotechnol. - 1998. - V. 63. - P. 199-210.

140. Somogyi, M. J. Determination of reducing sugar / M. J. Somogyi // J. Biol. Chem. - 1952. - V. 195. - P. 19-28.

141. Stoll, D. Mannan-degrading enzymes from Cellulomonas fimi / D. Stoll, H. Stalbrand, R. A. Warren // Appl. Environ. Microbiol. - 1999. - V. 65. -№ 6.-P. 2598-2605.

142. Structural aspects of watersoluble galactomannan from the seeds of Retama raetam / O. Ishurd [et al.] // Carbohydr Polym. - 2004. - V. 58. P. 41-44.

143. Structural characterization of a highly branched galactomannan from the lichen Peltigera canina by methylation analysis and NMR-spectroscopy / S. Omarsdottir [et al.] // Carbohydr Polym. - 2006. - V. 63. - P. 54-60.

144. Structural of a glucomannan from Lupinus varius seed / O. Ishurd [et al.] //Carbohydr Polym. - 2006. - V. 65. - P. 410-413.

145. Study on the production of beta-mannanase by Bacillus M50 / Y. Chen [et al.] // Wei Sheng Wu Xue Bao.- 2000. - V. 40. - P. 62-68.

146. Stelbrand, H. Enzymology of endo-l,4-(3-Mannanases / H. Stelbrand // Handbook of Food Enzymology. - Marcel Dekker, Inc., New York. -2002. - P. 961-969.

147. Talbot, G. Purification and characterization of thermostable [3-mannanase and a-galactosidase from Bacillus stearothermophilus / G. Talbot, J. Sygusch // Appl. Environ. Microbiol. - 1990. - V. 56. - P. 3505-3510.

148. Tenkanen, M. Action of Trichoderma reesei and Aspergillus oryzae esterases in the deacetylation of hemicelluloses / M. Tenkanen // Biotechnol. Appl. Biochem. - 1998. - V. 27. - P. 19-24.

149. The cel4 gene of Agaricus bisporus encodes a (3-mannanase / C.M. Tang [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 2001. - V. 67. - P. 2298-2303.

150. The conserved noncatalytic 40-residue sequence in cellulases and hemicellulases from anaerobic fungi functions as a protein docking domain / C. Fanutti [et al.] // J Biol Chem. - 1995. - V. 270. - № 49. P. 29314-29322.

151. Towards designer cellulosomes in Clostridia: mannanase enrichment of the cellulosomes produced by Clostridium cellulolyticum / S. Perret [et al.] // Biotechnol. Appl. Biochem. - 2004. - V. 40. - P. 255-259.

152. Transglycosidase activity of Bifidiobacterium adolescentis DSM 20083 galactosidase / K. M. Laere [et al.] // Appl. Microbiol. Biotechnol. -1999. -V. 52.-P. 681-688.

153. Viscometric studies on xanthan and galactomannan systems / T.M. Bresolin [et al.] // Carbohydr Polym. - 1997. - V. 33. - P. 131-138.

154. Wong, K.K.Y. Applications of hemicellulases in the food, feed, and pulp and paper industries / K.K.Y. Wong, J.N. Saddler // Hemicellulose and hemicellulases. - Portland, London. - 1993. - P. 127-144.

155. Wu, J. Purification and properties of beta-D-mannanase from Nocardioform actinomycetes / J. Wu, B. He // Wei Sheng Wu Xue Bao. - 2000. - V. 40. - № 1. - P. 69-74.

156. Xu, B. Cloning and expression in Pichia pastoris of a blue mussel (Mytilus edulis) ß-mannanase gene / B. Xu, D. Seilos, J.C. Janson // J. Biochem. - 2002. - V. 269. - № 6. - P. 1753-1760.

157. Yamaura, I. Purification and some properties of endo-l,4-beta-D-mannanase from a mud snail, Pomacea insularus (de Ordigny) / I. Yamaura, T. Matsumoto // Biosci Biotechnol Biochem. - 1993. - V. 57. - № 8. - P. 1316-1319.

158. Yang, W. Purification and characterization of a beta-mannanase from Bacillus licheniformis / W. Yang, Q. Tong, Q. Shen // Microbiology. -1995. -V. 22.-P. 338-342.

159. Yoon, K.H. Characterization of the Bacillus subtilis WL-3 mannanase from a recombinant Escherichia coli / K.H. Yoon, S. Chung, B.L. Lim // J. Microbiol. - 2008. - V. 46. - № 3. - P. 344-349.

160. Yoshida, S. Cloning, sequence analysis, and expression in Escherichia coli of a gene coding for an enzyme from Bacillus circulans K-l that degrades guar gum / S. Yoshida, Y. Sako, A. Uchida // Biosci. Biotechnol. Biochem. - 1998. -V. 62. - № 3. - P. 514-520.