Разработка аналитических методик для изучения факторов, влияющих на кишечную абсорбцию и биотрансформацию фосфазида тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Гребенкин Дмитрий Юрьевич

• Гребенкин Дмитрий Юрьевич
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Гребенкин Дмитрий Юрьевич

Оглавление

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Связь биофармацевтических и клинических свойств фосфазида

1.2. Биофармацевтическая классификационная систем

1.3. Методология определения растворимости по БКС

1.4. Методология определения всасываемости по БКС

1.5. Альтернативные биофармацевтические классификации

1.6. Тест кинетики растворения

1.7. Проблема изучения кишечного метаболизма фосфазида

Выводы к главе

Глава 2. Экспериментальная часть

2.1. ИЗУЧЕНИЕ БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ РАСТВОРИМОСТИ ФОСФАЗИДА

2.1.1. Материалы и методы

2.1.2. Результаты и обсуждение

2.1.3. Выводы к главе

2.2. ИССЛЕДОВАНИЕ КИШЕЧНОЙ ПРОНИЦАЕМОСТИ И Рвр-ТРАНСПОРТА ФОСФАЗИДА С ПРИМЕНЕНИЕМ МОДЕЛИ САСО-2

2.2.1. Материалы и методы

2.2.2. Результаты и обсуждение

2.2.3. Выводы к главе

2.3. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТАБОЛИЗМА ФОСФАЗИДА НА МОДЕЛИ ВЫВЕРНУТОГО КИШЕЧНИКА КРЫСЫ

2.3.1. Материалы и методы

2.3.3. Результаты и обсуждение

2.3.4. Выводы к главе

2.4. ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОКИНЕТИКИ ФОСФАЗИДА НА ЗДОРОВЫХ ДОБРОВОЛЬЦАХ ПРИ ОДНОКРАТНОМ ПЕРОРАЛЬНОМ ПРИЁМЕ

2.4.1. Материалы и методы для исследований фармакокинетики

плазме крови

2.4.3. Результаты и обсуждение

2.4.3. Выводы к главе

Общие выводы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЛИТЕРАТУРА

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка аналитических методик для изучения факторов, влияющих на кишечную абсорбцию и биотрансформацию фосфазида»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Распространение ВИЧ-инфекции является важнейшей проблемой здравоохранения Российской Федерации. Одним из важных шагов по борьбе с ВИЧ и СПИД является развитие и широкое внедрение антиретровирусной терапии.

Фосфазид (АЗТ-фосфонат, коммерческое название Никавир®) - является одним из наиболее эффективных и безопасных лекарственных препаратов из группы нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ. ФФЗ - это оригинальный отечественный препарат, удостоенный Государственной премии Российской Федерации в области науки и техники в 2000-м году. Лекарственный препарат Никавир® (таблетки 200 мг и 400 мг) входит в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, утверждённый распоряжением Правительства Российской Федерации от 07.12.2011 № 2199-р. Согласно клиническим рекомендациям «ВИЧ-инфекция и СПИД» М, ГЕОТАР-Медиа, 2016 - 111 с., ФФЗ характеризуется как препарат, пригодный для терапии больных ВИЧ-инфекцией в составе предпочтительных и альтернативных схем АРВТ первого ряда, для лечения беременных женщин, для лечения больных хроническими вирусными гепатитами, туберкулезом и другими заболеваниями.

Отдельный интерес представляет процесс превращения ФФЗ в АЗТ организме человека. Отметим, что АЗТ является препаратом с высокой токсичностью. Наиболее опасными нежелательными явлениями при приёме АЗТ являются миозит, а также различные проявления миелосупрессии (анемия, нейтропения, лейкопения), и в случае ухудшения гематологических показателей больного необходимо снизить дозу или прекратить лечение. Для ФФЗ, согласно современным данным, эти нежелательные явления не характерны, что позволяет применять его в продолжительной терапии сложных больных, в том числе беременных женщин. Однако, риски, связанные с превращением ФФЗ в АЗТ в ЖКТ, с нашей точки зрения, требуют отдельного детального изучения.

Степень разработанности темы исследования. Фосфазид успешно прошёл весь комплекс доклинических и клинических испытаний, на основании которых зарегистрирован и применяется в клинической практике на территории Российской Федерации. В ранних исследованиях были сделаны важные шаги на пути понимания механизмов метаболизма фосфазида: были предприняты попытки изучить его взаимодействие с некоторыми ферментами in vitro (Куханова М.К. и др. Гидролиз 5'-фосфонатов и фосфатов нуклеозидов фосфатазами различного происхождения и сыворотками крови человека и теленка. Мол.Биол., 1992), на животных (Зайцева Т.М. Изучение фармакокинетики и биоэквивалентности фосфазида. Отчет, ФГБУ «РК-НПК» Минздрава РФ, М., 1994), а также распределение продуктов его метаболизма по органам с использованием изотопно-меченых молекул (Skoblov Y., et al. Intracellular metabolism and pharmacokinetics of 5'-hydrogenphosphonate of 3' azido-2',3'-dideoxythymidine/ a prodrug of 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine. Antivir. Res., 2004). Тем не менее, взаимодействия фосфазида с кишечником не исследованы. Также нельзя не отметить появление в последние годы возможностей для более детального изучения соответствующих процессов: специальных клеточных культур, более совершенных методов анализа проб (ВЭЖХ-МС/МС), позволяющих обнаруживать существенно более низкие количества веществ. В рамках данной работы мы предлагаем оригинальный метод оценки деструкции фосфазида у поверхности кишечника при помощи модели вывернутого тонкого кишечника крысы. Новые, полученные таким образом данные, могут существенно дополнить современные представления о терапии фосфазидом и помочь в разработке новых препаратов АРВТ.

Цель исследования - разработать аналитические методики определения фосфазида in vivo и in vitro для изучения факторов, влияющих на его кишечную абсорбцию и биотрансформацию.

1. Разработать методики анализа и изучить биофармацевтическую растворимость и стабильность ФФЗ в модельных средах, имитирующих основные отделы ЖКТ: pH 1,2, pH 4,5, pH 6,8.

2. Разработать методики анализа и оценить степень кишечной проницаемости ФФЗ и его сродство к активному эффлюкс-транспортёру Pgp in vitro с использованием монослоя культуры клеток Caco-2 и сравнить полученные экспериментальные данные с аналогичными данными из литературы для АЗТ.

3. Разработать оригинальный метод, пригодный для изучения трансформаций веществ в пристеночном пространстве тонкого кишечника in vitro, продемонстрировать с его помощью превращение ФФЗ в АЗТ и 6НР в АЗТ или его отсутствие.

4. Разработать и валидировать аналитические методики и исследовать с их помощью динамику поступления ФФЗ в системный кровоток, оценить степень его превращения в АЗТ при однократном пероральном приёме здоровыми добровольцами. Сравнить экспериментально полученные фармакокинетические параметры ФФЗ с аналогичными данными из литературы для АЗТ и оценить возможный вклад превращения ФФЗ в АЗТ до абсорбции в интенсивность поступления активной молекулы в системный кровоток.

5. Обобщить и систематизировать полученные данные, предположить их значение с точки зрения клинической практики и разработки новых лекарственных препаратов.

Научная новизна. Предложен авторский метод для изучения трансформаций веществ в пристеночном пространстве тонкого кишечника in vitro - модель вывернутого кишечника крысы (заявка на патент, регистрационный № 2019113240). При помощи данного метода впервые экспериментально продемонстрирован процесс превращения ФФЗ в АЗТ при

контакте с поверхностью кишечника. Вещество 6НР, являющееся модифицированным по фосфонатной группе аналогом ФФЗ, в тех же условиях оказалось устойчиво к превращению в АЗТ.

Впервые исследована кишечная проницаемость ФФЗ in vitro с использованием монослоя культуры клеток Caco-2 в апикально-базолатеральном (А-В) и базолатерально-апикальном (В-А) направлениях с добавлением и без добавления ингибитора трансмембранного эффлюкс-транспортёра Pgp циклоспорина А.

Показано, что ФФЗ является хорошо растворимой субстанцией с точки зрения биофармации, молекула ФФЗ стабильна в жидкостях, имитирующих среды ЖКТ.

В исследованиях на здоровых добровольцах при помощи чувствительного аналитического метода показано, что ФФЗ обнаруживается в крови человека в виде АЗТ.

Теоретическая и практическая значимость. Следует подчеркнуть, что ФФЗ является препаратом пожизненного применения, а кишечник испытывает влияние самых различных факторов в повседневности: изменения рациона, приём лекарств, алкоголя, заболевания и инфекции ЖКТ, всё перечисленное может тем или иным образом влиять на физиологические параметры кишечника и оказать влияние на превращение ФФЗ в АЗТ в кишечнике и, как следствие, на абсорбцию ФФЗ в виде АЗТ. Таким образом, новые данные способны помочь усовершенствовать клинические рекомендации в отношении существующих препаратов ФФЗ, в том числе комбинированных.

Использование модели вывернутого кишечника крысы может оказать помощь в разработке препаратов, представляющих из себя модифицированные аналоги тимидина и других природных нуклеозидов.

Дальнейшее изучение механизмов взаимодействия ФФЗ с ЖКТ позволит не только улучшить понимание клинических различий между ФФЗ и АЗТ, но также использовать полученные данные в разработке и регистрации новых

препаратов, пролонгированных форм ФФЗ.

6

1. Результаты исследования с использованием модели вывернутого тонкого кишечника крысы, демонстрирующие биотрансформацию фосфазида в азидотимидин.

2. Результаты исследования биофармацевтической растворимости и стабильности в модельных средах (рН 1,2, 4,5, 6,8) фосфазида.

3. Результаты исследования кишечной проницаемости фосфазида in vitro при помощи модели Caco-2: коэффициент кажущейся проницаемости Papp,

соотношение Papp B — A, характеризующее сродство к эффлюкс-транспортеру

A —> B

PgP.

4. Параметры фармакокинетических кривых концентраций азидотимидина в плазме крови здоровых добровольцев (C max, Tmax, T1/2) после однократного приёма пероральных препаратов фосфазида Фосфаладин®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой 150 мг + 400 мг (ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.», Россия) Никавир®, таблетки 400 мг (ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.», Россия) в рамках исследования биоэквивалентности.

5. Разработанные методики аналитики и пробоподготовки фосфазида и азидотимидина при помощи ВЭЖХ-МС/МС, ВЭЖХ-УФ (в плазме крови человека, в пробах модели Сасо-2, в пробах модели вывернутого кишечника крысы, в модельных растворах рН 1,2, 4,5, 6,8).

Методология и методы исследования.

Для оценки растворимости и стабильности ФФЗ в средах, моделирующих жидкости ЖКТ, использовались стандартные для биофармацевтических исследований подходы (встряхивание в буферных растворах pH 1,2, 4,5, 6,8 при 37°С), количественное определение проводилось при помощи ВЭЖХ-УФ.

Для оценки всасываемости ФФЗ использовались стандартные подходы к работе с монослоем культуры клеток Caco-2, количественное определение проводили при помощи ВЭЖХ-МС/МС.

Для получения вывернутого кишечника использовались лабораторные крысы. Количественное определение и идентификация исследуемых веществ проводились при помощи ВЭЖХ-УФ.

Исследования фармакокинетики ФФЗ и его продуктов в плазме крови здоровых добровольцев соответствовали всем этическим и методологическим правилам, действующим в настоящее время на территории России. Концентрация веществ в плазме крови человека определялась валидированным методом при помощи ВЭЖХ-МС/МС.

Достоверность научных положений и выводов. Диссертационная работа выполнена на современном научно-методологическом уровне. В ходе выполнения исследования использованы современные методы (ВЭЖХ-УФ, ВЭЖХ-МС/МС, монослой культуры клеток Сасо-2), соответствующие поставленным целям и задачам. Экспериментальные данные, полученные автором, достоверны, обработаны с применением методов современной статистики. Научные положения и выводы, сформулированные в диссертационной работе, обоснованы, достоверны и логично вытекают из полученных автором экспериментальных данных. Первичная документация исследования проверена и полностью соответствует материалам, содержащимся в работе.

Апробация результатов исследования. Материалы научных исследований по теме диссертации были представлены на X конкурсе проектов молодых ученых, Москва, 20 сентября 2016 года, Второй научно-практической конференции с международным участием «Разработка и регистрация лекарственных средств в соответствии с принципами надлежащих практик GxP», Москва, 29 ноября 2017 года и на Второй научно-практической конференции «Международная интеграция в сфере химической и фармацевтической промышленности», Москва, 27-28 декабря 2017 года.

Личный вклад автора. Диссертантом проведён анализ степени

разработанности темы научной работы, сформулирована гипотеза,

определены цели и задачи исследования, осуществлён поиск ресурсов для их

8

решения. Все этапы теоретической и экспериментальной работы осуществлялись при непосредственном участии диссертанта. Автором осуществлены обобщение и систематизация полученных данных, сформулированы выводы.

Внедрение результатов исследования. Разработанные аналитические методики внедрены в работу ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.», ООО «Центр фармацевтической аналитики», ООО «Экзактэ Лабс» и Федерального государственного учреждения науки «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства».

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Диссертация соответствует формуле специальности 14.04.02 -фармацевтическая химия, фармакогнозия, а именно пункту 3 (разработка методов контроля качества) и пункту 4 (разработка методов анализа лекарственных веществ и их метаболитов в биологических объектах для фармакокинетических исследований) паспорта специальности.

Публикации результатов исследования. Содержание и результаты диссертационного исследования отражены в 7 печатных работах, в том числе

2 статьи в изданиях, индексированных в международной базе данных Scopus,

3 статьи в журналах, входящих в Перечень рецензируемых научных изданий, в которых должны быть опубликованы основные результаты исследований в рамках диссертации, представляемых к защите диссертационных советах РУДН, тезисы доклада, одна зарубежная монография.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов и списка литературы из 108 источников (74 из которых зарубежные). Работа иллюстрирована 22 рисунками и содержит 24 таблицы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Связь биофармацевтических и клинических свойств фосфазида

Терапевтический эффект лекарственного средства зависит от особенностей его доставки в системный кровоток. Для того, чтобы активная молекула достигла цели, она, если речь идёт о пероральном препарате, должна высвободиться из лекарственной формы и преодолеть мембрану ЖКТ - этот процесс является предметом изучения биофармации [5]. Важнейшими биофармацевтическими свойствами субстанции являются её растворимость в средах ЖКТ и всасываемость. Именно сочетания данных свойств часто играют решающую роль в БД пероральных препаратов.

ФФЗ является главным образом пероральным препаратом и применяется в лекарственной форме таблеток. Это с одной стороны делает его удобным для повседневного приёма пациентами с ВИЧ, с другой стороны -поднимает вопросы изучения поведения как лекарственной формы, так и самой молекулы ФФЗ в ЖКТ, тем самым актуализирует в его отношении концепцию биофармации. А именно, отдельного изучения требуют: биофармацевтическая растворимость субстанции, кишечная всасываемость, стабильность в ЖКТ, а также скорость и степень высвобождения ФФЗ из лекарственной формы в жидкости желудка и кишечника.

В соответствии с опубликованными данными ФФЗ характеризуется как субстанция с высокой растворимостью и низкой всасываемостью [11]. Однако, такая характеристика является недостаточной, так как не учитывает взаимодействий ФФЗ с ферментными системами кишечника, что в данном случае не менее или даже более важно с точки зрения биофармации.

Необходимо отметить, что по результатам доклинических и клинических испытаний ФФЗ можно отнести к пролекарствам [81].

Несмотря на то, что биологической активностью обладает и сама

молекула ФФЗ, при пероральном приёме препарат обнаруживается в крови

главным образом в виде своего метаболита - АЗТ [10, 15]. Показательны в

10

этом смысле исследования фармакокинетики капсул АЗТ и таблеток ФФЗ в сыворотке крови кроликов, которые проводились Зайцевой Т. М. [10]. Отметим в этой работе два интересующих нас результата. Во-первых, было продемонстрировано, что ФФЗ при внутрижелудочном введении кроликам обнаруживается в системном кровотоке в виде АЗТ, при этом авторы оценили степень этой трансформации выше 90% и на этом основании изучали фармакокинетику ФФЗ по создаваемым им концентрациям АЗТ. Соответствующая фармакокинетическая кривая (2) приведена на Рисунке 1. Подчеркнём, что кривая (2) построена на основании концентраций АЗТ, а не ФФЗ, несмотря на то, что введены были именно таблетки ФФЗ. Во-вторых, было показано, что при внутрижелудочном введении кроликам непосредственно АЗТ, динамика его поступления в системный кровоток значительно отличалась от таковой для ФФЗ: она характеризуется более резким нарастанием концентраций АЗТ, а также меньшим удерживанием в системном кровотоке. Соответствующая фармакокинетическая кривая (1) приведена на Рисунке 1. На основании этих данных авторы делают вывод о более благоприятном действии АЗТ именно в форме перорального препарата ФФЗ. Отметим существенное различие значений Стах, создаваемых одноразовым внутрижелудочным введением капсул АЗТ и таблеток ФФЗ кроликам в дозе 1 г/кг: 128 мкг/мл и 30 мкг/мл соответственно. Резкий рост концентрации препарата в крови после перорального приёма непосредственно АЗТ создаёт повышенный риск превышения терапевтического диапазона концентраций и достижения токсического диапазона. Здесь будет уместно привести другие данные клинических исследований АЗТ, которые свидетельствует о зависимости проявлений нежелательных явлений АЗТ от дозы [50]. Это даёт нам основание предположить, что пониженная токсичность АЗТ, принятого в виде ФФЗ, связана с пониженным риском достижения токсического диапазона концентраций.

Рисунок 1 - Динамика изменения концентрации АЗТ в сыворотке крови кроликов после внутрижелудочного введения капсул АЗТ (1) и таблеток ФФЗ (2) в дозе 1 г/кг [10].

Несмотря на факт превращения в АЗТ, ФФЗ достоверно проявляет выраженные клинические преимущества, по-видимому, как было сказано ранее, за счёт того, что не создаёт высоких концентраций в крови и дольше остаётся в терапевтическом диапазоне концентраций. Обратимся к данным по сравнительной токсичности АЗТ и ФФЗ [15, стр. 40]. При внутрибрюшинном введении мышам линии БЛЬБ/е величина ЛД50 составила для ФФЗ 2400-2800 мг/кг и для АЗТ 1300-1650 мг/кг. Ещё более показательная разница обнаружена при внутрижелудочном введении: величина ЛД50 составила для ФФЗ 9000-11000 мг/кг и для АЗТ 2500-2730 мг/кг. Видим, что величины ЛД50 при внутрижелудочном введении для АЗТ и ФФЗ отличаются почти в 4 раза.

Также отметим, что изменение способа введения ФФЗ с внутрибрюшинного на внутрижелудоный снижает величину ЛД50 в 3-5 раз, что может служить дополнительным свидетельством в пользу важной специфической роли ЖКТ в снижении токсичности ФФЗ при пероральном приёме.

Существует большой объём клинических данных, демонстрирующих превосходство ФФЗ над АЗТ [15, стр. 81], ярким примером с точки зрения токсичности и безопасности является исследование, целью которого было изучение возможности замены АЗТ на ФФЗ, вследствие развития нежелательных явлений 2-4 степени токсичности [102]. В исследование было включено 47 пациентов, для которых АЗТ был заменен на ФФЗ из-за развития тошноты и рвоты (40,4 %), анемии (46,8 %) и гранулоцитопении (12,8 %). После смены терапии лишь у 2,1 % пациентов сохранились проявления анемии 1 степени токсичности, 6,4 % пациентов продолжили жаловаться на тошноту, однако степень её проявления уменьшилась. На момент изменения схемы лечения количество СЭ4+ - лимфоцитов составляло 270 клеток/мкл, а через 36-48 недель терапии ФФЗ обнаружено увеличение их числа на 70-100 клеток/мкл. Таким образом, замена АЗТ на ФФЗ по причине нежелательных явлений позволяет успешно продолжать терапию в большинстве случаев.

Таким образом, данные по доклиническому и клиническому изучению

фармакокинетики ФФЗ могут свидетельствовать о том, что значительная часть

принимаемой дозы препарата подвергается деструкции с образованием

азидотимидина ещё до попадания в кровь, то есть в желудочно-кишечном

тракте. Так как кишечная всасываемость азидотимидина значительно выше

всасываемости ФФЗ, деструкция ФФЗ может вносить существенный вклад в

скорость попадания активного вещества в кровоток. В этом случае

стандартные подходы к изучению биофармацевтических свойств,

заключающиеся в количественной оценке биофармацевтической

растворимости и биодоступности, для ФФЗ оказались бы недостаточны и

малоинформативны. По всей видимости, разница в терапевтическом эффекте

ФФЗ и азидотимидина имеет фармакокинетическую природу, и изучение

13

путей превращения ФФЗ в АЗТ способно не только дать дополнительную информацию для клинического применения препарата, но и помочь в поиске путей для дальнейшей разработки препаратов НИОТ.

Структурно ФФЗ представляет из себя натриевую соль азидотимидина 5Л-фосфоната (Рисунок 2). Таким образом, превращение ФФЗ в АЗТ является ничем иным как отщеплением фосфонатного фрагмента в 5Л-положении.

Рисунок 2 - Структурные формулы фосфазида (I) и азидотимидина (II)

Метаболизм ФФЗ, меченого радиоактивным тритием, изучался на мышах [81]. Было показано, что основным метаболитом ФФЗ в как при внутрижелудочном, так и при парентеральном введении, является АЗТ, причём другой метаболит АЗТ-фосфат и собственно ФФЗ обнаруживаются в малом количестве лишь в желудке. Также авторы продемонстрировали важную роль печени в метаболизме ФФЗ: при добавлении к гомогенату мышиной печени, ФФЗ уже через 90 минут на 90 % превращался в АЗТ. Данные о роли факторов ЖКТ в биотрансформации ФФЗ в указанной работе не приводятся.

Опубликованы данные исследований способности очищенных ферментов различного происхождения, а именно - фосфатаз из плазмы крови человека, Е.соН, кишечника телёнка и 5'-нуклеотидазы кобры, разрушать ФФЗ [7]. Установлено, что дефосфорилирование ФФЗ способен осуществлять только один фермент из указанного перечня - 5'-нуклеотидаза кобры, на

основании чего сделан вывод о устойчивости ФФЗ к дефосфорилированию в организме человека. Однако, для окончательной верификации подобного заключения необходимо принять во внимание некоторые физиологические особенности кишечного метаболизма. Щёточная кайма тонкого кишечника содержит большое разнообразие ферментов, в том числе собственные разновидности 5'-нуклеотидазы, которые предположительно могли бы осуществлять дефосфорилирование ФФЗ, это предположение в указанных выше работах не проверялось. С нашей точки зрения, для установления устойчивости ФФЗ к метаболизму в ЖКТ более удобно использовать не конкретные очищенные ферменты, а методы in situ, то есть, фрагменты органов лабораторных животных, в которых всё разнообразие активных факторов представлено в достаточной полноте. К этому вопросу мы вернёмся в разделе обзора литературы, посвящённому проблемам изучения кишечного метаболизма ФФЗ.

В следующих главах будут рассмотрены стандартные современные подходы к изучению биофармацевтических свойств лекарственных препаратов, оценена их информативность и применимость к ФФЗ, будет проведён поиск дополнительных возможностей уточнить природу и локализацию превращения ФФЗ в АЗТ в организме.

1.2. Биофармацевтическая классификационная систем

В 1995 году в области биофармации была опубликована фундаментальная работа авторского коллектива под началом Гордона Амидона по разработке Биофармацевтической Классификационной Системы (Biopharmaceutics Classification System, BCS, БКС) [40]. Сегодня данная классификация широко применяется в разработке и регистрации лекарственных средств. В БКС лекарственные субстанции классифицируются по двум качествам: растворимость в водных растворах и всасываемость в желудочно-кишечном тракте. По растворимости субстанции могут быть либо хорошо растворяющимися, либо плохо растворяющимися, так же, как и по

всасываемости - хорошо всасывающимися и плохо всасывающимися. В комбинации эти два параметра образуют четыре класса субстанций: I -хорошо растворяющиеся, хорошо всасывающиеся; II - плохо растворяющиеся, хорошо всасывающиеся; III - хорошо растворяющиеся, плохо всасывающиеся; IV - плохо растворяющиеся, плохо всасывающиеся. Важно понимать, что это не просто формальное деление: фармакокинетика АФИ подчиняется некоторым закономерностям, присущим соответствующему классу БКС. Принадлежность субстанции к тому или иному классу помогает спрогнозировать поведение препарата в организме -это может быть полезно на стадиях разработки ЛС, а также это может играть важнейшую роль в процессе регистрации препаратов, являющихся воспроизведёнными. Остановимся на этом подробнее.

В 2000 году выходит первое основанное на БКС руководство FDA, посвящённое возможности регистрации препарата на основании результатов испытаний in vitro без проведения фармакокинетических исследований in vivo на здоровых добровольцах, этот подход обозначается термином «биовейвер на основе БКС» ("BCS based biowaiver"). На сегодняшний день регуляторную процедуру «биовейвер» с некоторыми различиями допускают НД FDA (с 2000 г.) [71], ВОЗ (с 2006 г.) [89], Агентство по фармацевтической продукции и медицинским приборам (PMDA) (с 2006 г.) [73], МЗ Украины (с 2007 г.) [27], Европейское медицинское агентство (EMA) (с 2010 г.) [74], Руководство по биовейверу Канады (2014 г.) [70], а также документ «О Правилах проведения исследований биоэквивалентности воспроизведенных лекарственных средств в сфере обращения лекарственных средств на территории Евразийского экономического союза» (2016 г.), который в настоящее время (2018 год) создаёт возможность для этой процедуры в России [28]. Биовейвер на основе БКС позволяет производителю сэкономить массу ресурсов и времени.

БКС также применяется при разработке препаратов с

модифицированным высвобождением. БКС позволяет спрогнозировать БД

препарата на стадии поиска активной молекулы и на стадии разработки

16

лекарственной формы [56]. Отметим, что способность ФФЗ (и, возможно, других сходных по структуре препаратов) к активным взаимодействиям с кишечником значительно усложняет использование в его отношении биовейвера.

1.3. Методология определения растворимости по БКС

Целью определения биофармацевтической растворимости является выяснить, способна ли фармацевтическая субстанция в том количестве, в котором она находится в препарате, полностью раствориться при приёме внутрь.

При определении биофармацевтической растворимости важную роль играет физиологическая релевантность, поэтому используют среды с рН в диапазоне 1,2 - 6,8 (или 1,0 - 7,2), что соответствует pH сред человеческого ЖКТ.

Не следует путать биофармацевтическую растворимость с фармакопейной растворимостью, которая показывает, какое количество растворителя нужно для полного растворения 1 г вещества безотносительно к средам ЖКТ и размерам высших зарегистрированных дозировок. Фармакопейная и биофармацевтическая растворимость могут значительно отличаться друг от друга.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гребенкин Дмитрий Юрьевич, 2020 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Государственная Фармакопея РФ, XIII издание, Том 2, 2015

2. Перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных средств (ЖНВЛП): распоряжением Правительства Российской Федерации от 07.12.2016 N 2199-р // Собрание законодательства РФ. — 2011. — №2 51. — Ст. 7544.

3. Арзамасцев, А. П. Эквивалентность воспроизведенных лекарственных средств: фармацевтические аспекты / А. П. Арзамасцев, В. Л. Дорофеев // Ведомости НЦЭСМП. — 2007. — №1. — С. 6-12.

4. Биофармацевтическая модель оценки взаимозаменяемости воспроизведенных ЛС по их растворимости, метаболизму и элиминации (BDDCS) / Г. В. Раменская [и др.] // Биомедицина. - 2011. - Т. 1. - №. 2.

5. Важнейшие биофармацевтические свойства лекарственных веществ на стадии абсорбции в ЖКТ (обзор) / Шохин И. Е. [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 45. - №. 7. - С. 37-40.

6. Важнейшие биофармацевтические свойства лекарственных веществ на стадии абсорбции в ЖКТ (обзор) / И. Е. Шохин [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Т. 45. - №. 7. - С. 37-40.

7. Гидролиз 5'-фосфонатов и фосфатов нуклеозидов фосфатазами различного происхождения и сыворотками крови человека и теленка / М. К. Куханова [и др.] // Мол.Биол. - 1992. - № 26. - С.1148-1159.

8. Гойзман. М. С. Тест «Растворение». Некоторые аспекты и цели его практического использования / М. С. Гойзман // Тест «Растворение»: прикладные и регуляторные аспекты: Доклад на конференции-семинаре с международным участием. — Химки, 2012.

9. Головенко, Н. Я. Биофармацевтическая классификационная система-экспериментальная модель прогнозирования биодоступности лекарственных средств / Н. Я. Головенко, И. Ю. Борисюк // Биомедицинская химия. - 2008. - Т. 54. - №. 4. - С. 392-407.

10. Зайцева, Т. М. Изучение фармакокинетики и биоэквивалентности фосфазида (5'-Н-фосфонат натриевая соль азидотимидина): / Т. М. Зайцева // - Отчет, ФГБУ «РК-НПК» Минздрава РФ, - М., - 1994, -С. 27.

11. Изучение кинетики растворения инновационного антиретровирусного препарата Никавир® и его фиксированной комбинации с ламивудином (Фосфаладин®) / И. Е. Шохин [и др.] // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2016. - №. 2. - С. 136-145.

12. Изучение метаболизма фосфазида на модели вывернутого кишечника крысы / Д. Ю. Гребенкин [и др.] // Биофармацевтический журнал. - 2019. - № 2 (11). - С. 3-7.

13. Изучение равновесной биофармацевтической растворимости субстанций лекарственных средств, применяемых для лечения ВИЧ / Т. А. Ярушок [и др.] // Биофармацевтический журнал. — 2013. — № 5(1). — С. 35-43.

14. Исследование кишечной проницаемости и Pgp-транспорта фосфазида с применением модели Сасо-2 / Д. Ю. Гребенкин [и др.] // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2017. - №.4 (21). - С. 238-242.

15. Кравченко, А. В. Фосфазид / А. В. Кравченко, Г. А. Галегов, В. Г. Канестри. - М.: ИД «МЕДПРАКТИКА-М», 2017. - 208 с.

16. Леонидов, Н. Б. Научный фундамент фармацевтики - полиморфизм субстанций. Открытие / Н. Б. Леонидов // Разработка и регистрация лекарственных средств. — 2013. — №3. — С. 8-11.

17. Метаболизм лекарственных средств. Научные основы персонализированной медицины / С. В. Грачев [и др.]. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 304 с.

18. Методические рекомендации по изучению сравнительной кинетики растворения генерических лекарственных средств для произаодителей / В.Г. Кукес и др.- М.: Ремедиум. 2010.

19. Методические Указания Минздравсоцразвития России «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств», приложение 4. - М.,2008.

20. Миронов, А. Н. Экспертные подходы к планированию и анализу результатов сравнительного теста кинетики растворения воспроизведённых лекарственных препаратов в твёрдых лекарственных формах с немедленным высвобождением / А. Н. Миронов [и др.] // Ведомости научного центра экспертизы средств медицинского применения. М., 2014. - №2. - С. 3-8.

21. Определение биофармацевтической растворимости субстанции ондансетрона / Т. А. Ярушок [и др.] // Человек и лекарство: Материалы сборника тезисов докладов XVII Российского национального конгресса. — М., 2012. — С. 604-605.

22. Определение биофармацевтической растворимости субстанции темозоломида / Т. А. Ярушок [и др.] // Человек и лекарство: Материалы сборника тезисов докладов XVII Российского национального конгресса. — М., 2012. — С. 604.

23. Определение равновесной биофармацевтической растворимости на примере субстанции пироксикама / И. Е. Шохин [и др.] // Биофармацевтический журнал. — 2011. — №3. — С. 39-42.

24. Определение равновесной биофармацевтической растворимости субстанции флутамида / Т. А. Ярушок [и др.] // Разработка и регистрация лекарственных средств. — 2012. — № 1(1). — С. 30-36.

25. Оценка биофармацевтической растворимости (в условиях, моделирующих физиологические) лекарственных средств из Перечня ЖНВЛП (обзор) / Т. А. Ярушок [и др.] // Биофармацевтический журнал. — 2012. — №2. — С. 25-33.

26. Покровский, В. В. ВИЧ-инфекция и СПИД: клинические рекомендации / В. В. Покровский. — 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 608 с.

27. Порядок проведения дополнительных исследований лекарственных средств при проведении экспертизы регистрационных материалов: Приказ

МЗ Украины от 17.04.2007 г. № 190.

118

28. Правила проведения исследований биоэквивалентности лекарственных средств Евразийского экономического союза, версия 2.0. от 20.02.2015 г. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http : //www. eurasiancommission. org/ru/act/texnre g/deptexreg/konsultComitet/ Documents/ Правила БЭИ итог 20.02.2015 на сайт.pdf (дата обращения 06.07.2017)

29. Применение биологической модели для оценки кишечной проницаемости in vitro-монослоя эпителиальных клеток Сасо-2 / Шохин И. Е. [и др.] //Биомедицина. - 2012. - Т. 1. - №. 1-3.

30. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Том I. - М.: Гриф и К., 2013. - 328с, глава 7.

31. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Том III. - М.: Полиграф-плюс, 2014. - 344с, глава 11.

32. Тест «Растворение» в разработке и регистрации лекарственных средств. Научно-практическое руководство для фармацевтической отрасли / Под ред. И.Е. Шохина - М. Изд-во Перо, 2015

33. Шохин, И. Е. Методы прогнозирования кишечной проницаемости лекарственных веществ с применением компьютерного моделирования / И. Е. Шохин, Г. В. Раменская // Биомедицина. - 2011. - Т. 1. - №. 2.

34. Ярушок, Т. А. Биофармацевтическая растворимость жизненно необходимых и важнейших лекарственных средств / Т. А. Ярушок, И. Е. Шохин // Аспирантские и докторантские чтения: дерзания нового времени - поиск инноваций. Сборник тезисов научно-практической конференции. Под. ред. Николенко В.Н. и др. - М.: Изд-во Первого МГМУ им. И.М. Сеченова. - 2012. - С. 213-214.

35. Ярушок, Т. А. Определение биофармацевтической растворимости субстанции оланзапина / Т. А. Ярушок, И. Е. Шохин, Ю. В. Медведев // Татьянин день: Тезисы итоговой научной студенческой конференции с международным участием. — М., 2012. — С. 87-88

36. Ярушок, Т. А. Разработка методики определения равновесной биофармацевтической растворимости малорастворимого вещества на примере субстанции арипипразола / Т. А. Ярушок, И. Е. Шохин, А. Ю. Савченко // Разработка и регистрация лекарственных средств. — 2012. — №2 1(1). — С. 14-18.

37. Ярушок, Т. А. Разработка методики определения равновесной биофармацевтической растворимости малорастворимого вещества на примере субстанции арипипразола / Т. А. Ярушок, И. Е. Шохин, А. Ю. Савченко // Разработка и регистрация лекарственных средств. — 2012. — № 1(1). — С. 14-18.

38. A log P calculator [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.vcclab.org/web/alogps - (дата обращения 08.2017)

39. A provisional biopharmaceutical classification of the top 200 oral drug products in the United States, Great Britain, Spain, and Japan / T. Takagi [et al.] // Molecular pharmaceutics. - 2006. - V. 3. - №. 6. - P. 631-643.

40. A theoretical basis for a biopharmaceutic drug classification: the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability / Amidon G. L. [et al.] // Pharmaceutical research. - 1995. - V. 12. - №. 3. - P. 413-420.

41. Absorption classification of oral drugs based on molecular surface properties / C. A. S. Bergstrom [et al.] // Journal of medicinal chemistry. - 2003. - V. 46. -№. 4. - P. 558-570.

42. Artursson, P. Caco-2 monolayers in experimental and theoretical predictions of drug transport / P. Artursson, K. Palm, K. Luthman. // Advanced drug delivery reviews. - 2012. - V. 64. - P. 280-289.

43. Association of intestinal peptide transport with a protein related to the cadherin superfamily / A. H. Dantzig [et al.] // Science-AAAS-Weekly Paper Edition-including Guide to Scientific Information. - 1994. - V. 264. - №. 5157. - P. 430-432.

44. Attenuation of Intestinal Absorption by Major Efflux Transporters: Quantitative Tools and Strategies Using a Caco-2 Model / X. Lin [et al.] // The FASEB Journal. - 2012. - V. 26. - №. 1 Supplement. - P. 291.1-291.1.

45. Avdeef, A. pH-Metric Solubility. 2: Correlation between the Acid-Base Titration and the Saturation Shake-flask Solubility-pH methods / A. Avdeef, C. M. Berger, C. Brownell // Pharmaceutical Research. — 2000. — V. 17(1). — C. 85-89.

46. Barrett, K. E. Gastrointestinal transport: molecular physiology / K. E. Barrett, M. Donowitz // Gulf Professional Publishing, 2001. - V. 4.

47. Benet, L. The use of BDDCS in classifying the permeability of marketed drugs / L. Benet, G. L. Amidon, D. Barends // Pharmaceutical research. - 2008. - Т. 25. - №. 3. - С. 483-488.

48.Bioequivalence and pharmacokinetics of two zidovudine formulations in healthy Brazilian volunteers: An open-label, randomized, single-dose, two-way crossover study / C. H. dos Reis Serra [et al.] // Clinical therapeutics. - 2008. -V. 30. - №. 5. - P. 902-908.

49. Biopharmaceutics Classification System (BCS) [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.ddfint.org/ (дата обращения 17.10.2016).

50. Biowaiver monographs for immediate-release solid oral dosage forms: Zidovudine (azidothymidine) / K. C. C. Soares [et al.] // Journal of pharmaceutical sciences. - 2013. - V. 102. - №. 8. - P. 2409-2423.

51. Brief Review of the FDA Dissolution Methods Database / I. E. Shohin [et al.] // Dissolution Technologies. - 2016. - V. 23. - № 3. - P. 6-9; dx.doi.org/10.14227/DT230316P6

52. Butler, J. M. The developability classification system: application of biopharmaceutics concepts to formulation development / J. M. Butler, J. B. Dressman // Journal of pharmaceutical sciences. - 2010. - V. 99. - №. 12. - P. 4940-4954.

53. Cabana, B. FDA Report on Drug dissolution / B. Cabana, R. O'Neil //

Pharmaceutical forum, -1980, - P. 71-75.

121

54. Caco-2 cells, biopharmaceutics classification system (BCS) and biowaiver / L. Smetanova [et al.] // Acta Medica (Hradec Kralove). - 2011. - V. 54. - №. 1. -P. 3-8.

55. Caco-2/TC7 cell line characterization for intestinal absorption: how reliable is this in vitro model for the prediction of the oral dose fraction absorbed in human? / L. Turco [et al.] // Toxicology in vitro. - 2011. - V. 25. - №. 1. - P. 13-20.

56. Chavda, H. Biopharmaceutics classification system / H. Chavda, C. Patel, I. Anand // Systematic reviews in pharmacy. - 2010. - V. 1. - №. 1. - P. 62.

57. Cheng, K. C., Prediction of oral drug absorption in humans-from cultured cell lines and experimental animals / K. C. Cheng, Li C., A. S. Uss // Expert opinion on drug metabolism & toxicology. - 2008. - V. 4. - №. 5. - P. 581-590.

58. Comparison of bidirectional lamivudine and zidovudine transport using MDCK, MDCK-MDR1, and Caco-2 cell monolayers / J. De Souza [et al.] // Journal of pharmaceutical sciences. - 2009. - V. 98. - №. 11. - P. 4413-4419.

59. Comparison of human duodenum and Caco-2 gene expression profiles for 12,000 gene sequences tags and correlation with permeability of 26 drugs / D. Sun [et al.] // Pharmaceutical research. - 2002. - V. 19. - №№. 10. - P. 1400-1416.

60. Dixit P. Standardization of an ex vivo method for determination of intestinal permeability of drugs using everted rat intestine apparatus / P. Dixit, D. K. Jain, J. Dumbwani // Journal of pharmacological and toxicological methods. - 2012. - V. 65. - №. 1. - P. 13-17

61. Dokoumetzidis, A. Modelling and simulation in drug absorption processes / A. Dokoumetzidis, G. Valsami, P. Macheras // Xenobiotica. - 2007. - V. 37. - №. 10-11. - P. 1052-1065.

62. Dressman, J. B. Oral drug absorption: Prediction and assessment / J. B. Dressman, C. Reppas - CRC Press, 2016. - P. 193.

63. Enzymatic assay of 5 nucleotidase. [Электронный ресурс]. Режим доступа: https: //www. sigmaaldrich. com/technical-documents/protocols/biology/ enzymatic-assay-of-5-nucleotidase.html - (дата обращения 10.2018)

64. Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development settings / C. A. Lipinski [et al.] // Advanced drug delivery reviews. - 2012. - V. 64. - P. 4-17.

65. Exploring the role of different drug transport routes in permeability screening / P. Matsson [et al.] // Journal of medicinal chemistry. - 2005. - V. 48. - №. 2. -P. 604-613.

66. FDA-Recommended Dissolution Methods [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/dissolution/index.cfm -(дата обращения 10.10.2016).

67. Focus Group on BCS (Biopharmaceutics Classification System) and Bio-waiver [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://fip.org/bcs. (дата обращения 17.10.2016).

68. Functional expression of P-glycoprotein in apical membranes of human intestinal Caco-2 cells. Kinetics of vinblastine secretion and interaction with modulators / J. Hunter [et al.] // Journal of Biological Chemistry. - 1993. - V. 268. - №. 20. - P. 14991-14997.

69. Gene expression profiling of systems involved in the metabolism and the disposition of xenobiotics: comparison between human intestinal biopsies and colon cell lines / Bourgine J. [et al.] // Drug Metabolism and Disposition. - 2012. - P. dmd. 111.042465.

70. Guidance Document Biopharmaceutics classification system based biowaiver / Minister of public works and government services Canada. 2014. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //www. canada. ca/content/dam/hc-sc/migration/hc-sc/dhp-mps/alt_formats/pdf/prodpharma/applic-demande/guide-ld/bcs_guide_ld_scb-eng.pdf (дата обращения 27.10.2016).

71. Guidance for Industry: Waiver of In vivo Bioavailability and Bioequivalence Studies for Immediate-Release Solid Oral Dosage Forms Based on a Biopharmaceutics Classification System. - Rockville, MD: U.S. Department of

Health and Human Services, FDA, Center for Drug Evaluation and Research.

123

(CDER), 2000. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //www. fda. gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm070246.pdf (дата обращения 27.10.2016).

72. Guidance for Industry: Waiver of In vivo Bioavailability and Bioequivalence Studies for Immediate-Release Solid Oral Dosage Forms Based on a Biopharmaceutics Classification System. U.S. Departament of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). U.S. Government Printing Office: Washington, DC, 2015. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //www. fda. gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm070246.pdf (дата обращения 27.10.2016).

73. Guideline for Bioequivalence Studies of Generic Products. 2006. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.nihs.go.jp/drug/be-guide(e)/be2006e.pdf (дата обращения 27.10.2016).

74. Guidelines on the investigation of bioequivalence. CPMP/EWP/QWP/1401/98 Rev. 1/ Corr. EMA. 2010. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http: //www. ema. europa. eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/ 2010/01/WC500070039.pdf (дата обращения 27.10.2016).

75. Hanson, R. Handbook on Dissolution Testing. 3rd edition / R. Hanson, V. Gray // Diss. Tech: — Hockesin, DE, USA. — 2004.

76. High-permeability criterion for BCS classification: segmental/pH dependent permeability considerations / A. Dahan [et al.] // Molecular pharmaceutics. -2010. - V. 7. - №. 5. - P. 1827-1834.

77. Hosey, C. M. BDDCS predictions, self-correcting aspects of BDDCS assignments, BDDCS assignment corrections, and classification for more than 175 additional drugs / C. M. Hosey, R. Chan, L. Z. Benet // The AAPS journal. - 2016. - V. 18. - №. 1. - P. 251-260.

78. Hubatsch, I. Determination of drug permeability and prediction of drug absorption in Caco-2 monolayers / I. Hubatsch, E. G. E. Ragnarsson, P.

Artursson // Nature protocols. - 2007. - V. 2. - №. 9. - P. 2111.

124

79. In vitro models for the blood-brain barrier / P. Garberg [et al.] // Toxicology in vitro. - 2005. - V. 19. - №. 3. - P. 299-334.

80. Interaction of pristinamycin I A with P-glycoprotein in human intestinal epithelial cells / V. Phung-Ba [et al.] // European Journal of Pharmacology: Molecular Pharmacology. - 1995. - V. 288. - №. 2. - P. 187-192.

81. Intracellular metabolism and pharmacokinetics of 5'-hydrogenphosphonate of 3'-azido-2', 3'-dideoxythymidine, a prodrug of 3'-azido-2', 3'-dideoxythymidine / Skoblov Y. [et al.] // Antiviral research. - 2004. - V. 63. - №. 2. - P. 107-113.

82. Khandazhinskaya, A. Anti-HIV therapy with AZT prodrugs: AZT phosphonate derivatives, current state and prospects / A. Khandazhinskaya, E. Matyugina, E. Shirokova // Expert opinion on drug metabolism & toxicology. - 2010. - V. 6. - №. 6. - P. 701-714.

83. Knutson, L. A new technique for segmental jejunal perfusion in man / L. Knutson, B. Odlind, R. Hallgren // American Journal of Gastroenterology. -1989. - V. 84. - №. 10.

84. Lipinski, C. A. Lead-and drug-like compounds: the rule-of-five revolution / C. A. Lipinski // Drug Discovery Today: Technologies. - 2004. - V. 1. - №. 4. - P. 337-341.

85. Lozoya-Agullo I. In-situ intestinal rat perfusions for human Fabs prediction and BCS permeability class determination: Investigation of the single-pass vs. the Doluisio experimental approaches / I. Lozoya-Agullo [et al.] // International journal of pharmaceutics. - 2015. - V. 480. - №. 1-2. - P. 1-7

86. Matsumoto, S. Transcellular transport of oral cephalosporins in human intestinal epithelial cells, Caco-2: interaction with dipeptide transport systems in apical and basolateral membranes / S. Matsumoto, H. Saito, K. Inui // Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. - 1994. - V. 270. - №. 2. - P. 498-504.

87. Miret, S. Comparison of in vitro models for the prediction of compound absorption across the human intestinal mucosa / S. Miret, L. Abrahamse, E. M.

de Groene // Journal of biomolecular screening. - 2004. - V. 9. - N°. 7. - P. 598606.

88. Molecular properties of WHO essential drugs and provisional biopharmaceutical classification / N. A. Kasim [et al.] // Molecular pharmaceutics. - 2004. - V. 1. - №. 1. - P. 85-96.

89. Multisourse (Generic) Pharmaceutical Products: Guidelines on registration Requirements to Establish Interchangeability. - WHO Technical Report Series, 2006. № 937. Annex 7. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http: //www. who. int/medicines/areas/quality_safety/quality_assurance/Annex7-TRS992.pdf (дата обращения 27.10.2016).

90. Non-animal approaches for toxicokinetics in risk evaluations of food chemicals / A. Punt [et al.] //ALTEX. - 2017. - V. 34. - №. 4. - P. 501-514.

91. Paixao P. Prediction of the in vitro permeability determined in Caco -2 cells by using artificial neural networks / P. Paixao, L. F. Gouveia, J. A. G. Morais // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2010. - V. 41. - №2. 1. - P. 107117.

92. Phillips, J. Optimization of Caco-2 cell growth and differentiation for drug transport studies / J. Phillips, A. Arena // Millipore Corporation Protocol Note PC1060EN00. - 2003.

93. Quevedo, M. A. P-glycoprotein limits the absorption of the anti-HIV drug zidovudine through rat intestinal segments / M. A. Quevedo, L. E. Nieto, M. C. Briñón // European journal of pharmaceutical sciences. - 2011. - V. 43. - №. 3. - P. 151-159.

94. Regional jejunal perfusion, a new in vivo approach to study oral drug absorption in man/ Lennernas H. [et al.] // Pharmaceutical research. - 1992. - V. 9. - №. 10. - P. 1243-1251.

95. Rinaki, E. Quantitative biopharmaceutics classification system: The central role of dose/solubility ratio / E. Rinaki, G. Valsami, P. Macheras // Pharmaceutical research. - 2003. - V. 20. - №. 12. - P. 1917-1925.

96. Role of Caco-2 cell monolayers in prediction of intestinal drug absorption / P. Shah [et al.] // Biotechnology progress. - 2006. - V. 22. - №. 1. - P. 186-198.

97. ScanFinder® official web-site [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://scifinder.cas.org/ (дата обращения 17.10.2016).

98. Simulation plus® official web-site [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.simulations-plus.com/(дата обращения 17.10.2016).

99. The BCS, BDDCS, and regulatory guidances / M. L. Chen [et al.] // Pharmaceutical research. - 2011. - V. 28. - №. 7. - P. 1774-1778.

100. The utility of rat jejunal permeability for biopharmaceutics classification system / Zakeri-Milani P. [et al.] // Drug development and industrial pharmacy. - 2009. - V. 35. - №. 12. - P. 1496-1502.

101. Theoretical considerations in the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability: a basis for a biopharmaceutics drug classification / Amidon G. L. [et al.] // Pharm. Res. - 1995. - V. 12. - P. 413420.

102. Treatment of the patients with intolerance to AZT by phosphazid / O. Yurin [et al.] //5 International Congress on drug therapy in HIV-infection, Glasgow, UK. - 2000. - V.14. - Suppl. 4.

103. Validation of the 96 well Caco-2 cell culture model for high throughput permeability assessment of discovery compounds / A. M. Marino [et al.] // International journal of pharmaceutics. - 2005. - V. 297. - №2. 1-2. - P. 235-241.

104. van de Kerkhof, E. G. In vitro methods to study intestinal drug metabolism / E. G. van de Kerkhof, I. A. M. de Graaf, G. M. M. Groothuis // Current drug metabolism. - 2007. - V. 8. - №. 7. - P. 658-675.

105. Varma, M. V. S. Functional role of P-glycoprotein in limiting intestinal absorption of drugs: contribution of passive permeability to P-glycoprotein mediated efflux transport / M. V. S. Varma, K. Sateesh, R. Panchagnula // Molecular pharmaceutics. - 2005. - V. 2. - №. 1. - P. 12-21.

106. Why is it challenging to predict intestinal drug absorption and oral bioavailability in human using rat model / Cao X. [et al.] // Pharmaceutical research. - 2006. - V. 23. - №. 8. - P. 1675-1686.

107. Wilding, I. R. Evolution of the Biopharmaceutics Classification System (BCS) to oral Modified Release (MR) formulations; what do we need to consider? / I. R. Wilding // European journal of pharmaceutical sciences. - 1999. - V. 8. - №. 3. - P. 157-160.

108. Wilkinson G. R. Prediction of in vivo parameters of drug metabolism and distribution from in vitro studies / G. R. Wilkinson // Drinking Water and Health, Volume 8: Pharmacokinetics in Risk Assessment. - 1987. - V. 8. - P. 80.

ПРИЛОЖЕНИЯ

АЗТ ФАРМА К.Б.

aztpharma.ru

Юридический адрес 111(133, г Москва, ул Самокатная. ,1.2А, стр. I Почтовый алрес 123458. г. Москва, ул. Твардовского, д. 8. стр.1 «Технопарк «Строгино» ллд ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.» Тел. [phone] Е-пш! ал:д адГагта ш

АКТ ВНЕДРЕНИЯ

Предмет внедрения: методика подготовки проб и условия анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детекцией для количественною определения фосфазида и азндотимидина в растворах, получаемых в экспериментах на модели вывернугого кишечника крысы.

Кем предложен: Гребенкиным Д.Ю., аспирантом 2015-2019 гг, Институга биохимической технологии и нанотехнологии ФГАОУ ВО Российский университет дружбы народов очной формы обучения.

Кем и где выдано: Общество с Ограниченной Ответственностью «АЗТ ФАРМА К.Б.», 109033, г. Москва, ул. Самокатная, д. 2А, стр. I, ч пом/к/оф 007/1/1.

Цель внедрения: обеспечение возможности проведения анализов проб фосфазида и азидотимидина в биологической матрице «кишечник».

Результаты внедрения: разработанные методики внедрены в деятельность лаборатории.

Заместитель Генерального дирсктооа

ООО «АЗТ ФАРМА К Б.»

Бровченко Б.В.

ЦФА1

центр

фармацевтическом аналитики

Общество с ut ряиичеыной ответственностью «ЦЕНТР ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ АНАЛИТИКИ»

ЮрУфакт. адрес: 117246, Россия, Москва, Научный проезд, д. 20, стр. 3, пом. 1, комн. 38,39.

ИМН 9701010444, КПП 772801001, ОГРН 1157746853780, ОКПО 49285758, Р/с 40702810300070032084 в ПАО АКБ «Авангард», г. Москва, к/с 30101810000000000201, I ел [phone] website: cpha.ru

«УТВЕРЖДАЮ»

«Центр Фар

д

АКТ ВНЕДРЕНИЯ

шректор ООО налитики», охнн И.Е. ^.2019 г.

Предмет внедрения: методика нробоподготовки и методика ВЭЖХ-УФ анализа растворов фосфазида и азидотимидина ири различных значениях рН растворов (рН 1,2; рН 4,5; рН 6,8; рН 9,0).

Кем предложен: Гребенкиным Д.Ю., аспирантом 2015-2019 гг, Института биохимической технологии и нанотехнологии ФГАОУ ВО Российский университет дружбы народов очной формы обучения.

Кем и где выдано: Общество с ограниченной ответственностью «Центр Фармацевтической Аналитики», 117246, Москва, Научный проезд, дом 20, строение 3.

Цель внедрения: проведение количественных анализов при испытаниях фармацевтических препаратов, содержащих фосфазид или зидовудин в качестве действующего вещества.

Результаты внедрения: разработанная методика включена в перечень средств, используемых в исследованиях лекарстве!шых препаратов, содержащих фосфазид или зидовудин в качестве действующего вещества.

Зав.лабораторисй ЬФИ к. фарм. наук Медведев Ю.В.

I ЭкзактэЧлабс

!)йщЕстза с йграннч&ннС'й огвегстае нностъю "ЭкгакгЭ Лабе" <000 "Экмкта Лабе")

«УТВЕРЖДАЮ»

Генеральный ддобктор ООО Лабе», к.б.н.

_КУ__В-.И. Кепсй

« » 2019 г.

АКТ ВНЕДРЕНИЯ

Предмет кнедреннн: методика условия анализа при помощи иыео неэффективной жидкостной хроматографии с тандем нын масс-спектрометрн чески м дете ктнроаан и ем для количественного определения фосфазнди и растворах. получаемых и экспериментах на модели Саео-2.

Кем прсдлоикен; Гребенкнкым Д.Ю., аспирантом 2015-2019 гг. Институтабнохитинческой технологии и налотсхнологии ФГАОУ ВО Российский университет дружбы народов очной формы обучения.

Кем и где выдано: Общество с ограниченной ответственностью «Экзактэ Лабе», 117246, Москва,! 1аучнин проезд, дом 20, строение 2.

Цель внедрения: исследования кишечной проницаемости фосфазида при помощи монослоя культуры клеток Сасо-2,

Результаты внедрен им: ризработ^лщдя цеюдш внедрена в деятельность лаборатории.

Гсжршлый директор К.fi.ii. Насн.пгн Игоревич Казеп

ооо чЭкэак г» льбе-

Адрес. 117246, РюСсин, т. Москва, Научный проезд. д, 20, Стр. 2

ПКПО 92713151 ОГРт< Ш504701ЭСВй ИШ1ЖГШ 504712?05Й1|Т73«01001

Телефон »7 (4991 963-9001 Е-тай п*о®ечассе1аЬ5.согп №чиасК?!э Ь5-согтт

министерс тво здравоохранения российской федерации

РАЗРЕШЕНИЕ .V* 541 на проведение клинических исследовании от 28 сентября 21)15 I.

Насюящим разрешается проведение клинических исследований фосфаладннс»: (. 1амнвуднн+ФосФ:иил)

(наименование лекарственного препарата)

Перечень медицинских организаций, и которых клиническое исследование лекарственного препарата применения: согласно приложению ,У»1 на 1 л.

удет проводиться ятя медицинского

Данное разрешение действительно в течение всего ерика проведения клинических исследовании.

003391

........

Приложение Л« 1

к Разрешению на проведение клинического исследования № 541 от 28.09.2015 г.

Перечень медицинских организаций, в ^шишческое исследование лекарственного /применения.

которых будет проводиться препарата для медицинскою

Государственное—бюджетное учреждение здравоохранения тополя Москвы Городская клиническая больница .У* 1 им. Н.И.Пипоюва Лепартамента здравоохранении города Москвы, 119049 |. .Москва. Ленинский проспект, I. X.

¿Директор Департамента государственною регулирования Обращения лекарственных средств

идымеев

¡¡ййзулу.