Распространение и молекулярная диагностика наследственных факторов гиперкоагуляции в Азербайджанской популяции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, Джафаров, Тогрул Ахверди оглы

• Джафаров, Тогрул Ахверди оглы
• 2005

Оглавление диссертации Джафаров, Тогрул Ахверди оглы

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ. АКТУАЛЬНОСТЬ

ПРОБЛЕМЫ.!.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Венозный тромбоз как мультифакторная патология.

1.2. Плазменный фактор V системы свертывания крови и мутация гена ГУЬ,ассоциированная с развитием венозного тромбоза.

1.3. Плазменный фактор II системы свертывания крови и мутация гена П1 как фактор риска развития венозного тромбоза.

1.4. Термолабильный вариант метилентетрагидрофолат редуктазы как фактор риска развития венозных тромбозов и сердечнососудистых заболеваний.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Материалы и объекты исследования.

2.2 Методы исследования.

2.2.1. Выделение ДНК из лимфоцитов крови человека.

2.2.2. Определение Лейденской мутации гена ЯУ.

2.2.3. Определение мутации 202100-А гена П1.

2.2.4. Определение мутации 677С-Т гена МТНГ.

2.3. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Разработка метода одновременной диагностики РУЬ и П мутаций.

3.2. Лейденская мутация гена ГУ.

3.2.1. Распространение РУЬ мутации у жителей Азербайджана.

3.2.2. Частота носительства РУЬ мутации у больных с венозными тромбозами.

3.2.3. Мутация РУЬ как возможный фактор риска развития сердечнососудистых заболеваний.

3.3. Мутация 2021(Ю-А гена РП.

3.3.1. Распространение мутации РП в Азербайджане.

3.3.2. Частота носительства мутации П1 у больных с венозными тромбозами.

3.3.3. Мутация 20210С-А гена П1 как фактор риска развития сердечно-сосудистых заболеваний.

3.4. Мутации 677С-Т гена МТНРЯ.

3.4.1. Распространение мутации 677С-Т гена МТНРЯ в Азербайджане.

3.4.2. Частота носительства мутации 677С-Т гена МТНРЯ в группах риска в Азербайджане.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Распространение и молекулярная диагностика наследственных факторов гиперкоагуляции в Азербайджанской популяции»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Изучение роли наследственных факторов в системе свертывания крови представляет большой интерес для современной биологии и медицины.

Многочисленные исследования последних лет посвящены выяснению роли таких наследственных дефектов, как аномалия фактора V (Лейденовская мутация) системы свертывания крови (FVL); гипергомоцистеинемия, вызываемая мутацией 677С-Т гена фермента метилентетрашдрофолатредуктазы (MTHFR); мутация 20210G-А фактора П (FII) системы свертывания крови, в предрасположенности к коагулопатиям (18,27,30,61,62,6366,154).

В последние годы мутации по указанным генам обнаружены во всех основных популяциях Европы, Азии, Америки и Индии

10,12Д4,40,41,62,111,116,134,136,152,158,159,167.) По имеющимся данным частота встречаемости мутаций FVL, MTHFR и FEE наиболее высока во всех основных популяциях Европы, а также у жителей стран Средиземного моря и американцев европейского происхождения (9,11,31,33,68,81,85,88,100,134,192) Исследования, проведенные за последнею декаду, продемонстрировали, что мутации генов FVL и FU системы свертывания крови являются серьезными факторами риска развитая тромбозов( 18,19,27,30,36,47,48,61,62,154,161,166,167,168,176) Первые данные о существовании наследственных факторов, вызывающих склонность к гиперкоагуляции, были представлены Egeberg et al. в 1965 г. В дальнейшем исследования в этом направлении развивались в работах таких исследователей как : Bertina et al.,1994; Dahlback et al.,1994; Franco et al.,1998; Pepe et al.,1997; Poort et al.,1996; Rees et al.,1996; Rosendaal et al.,1999; и др., которые выявили FVL, MTHFR и FII мутации и пришли к заключению о том, что указанные мутации являются потенциальными факторами риска развития венозных тромбозов (ВТ) и обнаруживаются у более, чем 50% больных с ВТ.

Многие исследователи сообщают, что частота встречаемости данных наследственных факторов риска в различных популяциях значительно варьирует, что, несомненно, сказывается на степени их участия в патологическом процессе(27,50,81,21129).

В связи с этим проведение исследований, направленных как на определение частот носителей мутаций генов FVL, MTHFR и FII, так и на изучение их взаимосвязи с венозными и артериальными тромбозами приобретает особую важность для осуществления профилактических мероприятий, и в первую очередь для ранней диагностики тромбозов и определения групп риска.

В Азербайджане до настоящего исследования работ по изучению особенностей распространения мутаций в генах FVL, MTHFR и FII не проводили. Вместе с тем, сведения о частоте встречаемости данных мутаций среди населения Азербайджана в целом и у больных с тромбозами позволят определить степень риска развития патологии гемостаза и разработать профилактические и лечебные мероприятия по борьбе с тромбозами.

Результаты сравнения частот встречаемости мутаций генов FV, FE и MTHFR в Азербайджане и других странах позволят подтвердить или опровергнуть имеющиеся предположения об ареале возникновения и миграции данных мутаций.

Результаты исследования могут послужить основой для дальнейших, более детальных исследований системы свертывания крови, как среди узкоспециализированных групп патологий, так и на уровне популяций и национальных меньшинств в Азербайджане и Закавказье.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Целью настоящей работы являлось изучение частоты распространения мутаций генов FV (Leiden 1691G-A), FE (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) и их роли как фактора риска развития ВТ в Азербайджане. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

- определить частоты распространения данных мутаций в азербайджанской популяции в целом;

- выяснить различия в распределении частот данных мутаций среди этнических групп, населяющих Азербайджан;

- определить частоты вышеуказанных мутаций у больных с венозными и артериальными тромбозами в Азербайджане;

- разработать модификацию метода комплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для одновременного определения FII и FVL мутаций в минимальном количестве исследуемого материала.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

В данной работе впервые установлены частоты распространения мутаций генов FV (Leiden 1691G-A), FD (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) в Азербайджане, как в контрольной группе, так и в группах риска (венозные тромбозы и сердечно-сосудистые заболевания).

Показано, что данные мутации встречаются в Азербайджане с частотами: FVL -4-12,5%, FE (20210G-A) - 1,25-3,3%, MTHFR (677Т-Т) - 2 - 43%. По сравнению с другими популяциями частоты данных мутаций в Азербайджане отличаются: частота FVL мутации увеличена до 2 раз, в 3-4 раза снижена частота гомозигот по мутации MTHFR (677С-Т), при практически идентичной частоте носительства мутации FTI-2%-3%.

Достоверных различий в частоте распространения FV (Leiden 1691G-A), FII (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) мутаций у этнических групп, населяющих Азербайджан, не наблюдали.

На основании данных, полученных нами, установлено, что мутации в генах FVL и FD являются значимыми факторами риска развития ВТ, и что совместно они могут встречаться практически у 50% больных с ВТ. Также продемонстрировано, что мутация FVL является более значимым фактором риска, чем мутация FH. Вместе с тем показано, что мутация MTHFR (677С-Т) не является самостоятельным фактором риска данной патологии.

Установлено, что мутации БУЬ, МТНРЯ или БП не являются существенными факторами риска артериальных тромбозов.

Впервые разработана модификация метода комплексной ПЦР для одновременного определения мутаций И1 и БУЬ в минимальном количестве исследуемого материала.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Демонстрация существенной роли генетических факторов риска в предрасположенности к ВТ в Азербайджане и сведения об их частоте среди здорового населения и больных позволит вносить изменения в терапевтические мероприятия при ВТ. Несомненно, что в случаях с отягощенным анамнезом по ВТ целесообразно определение как БУЬ, так и П1 мутаций для корректировки терапии антикоагулянтами. Разработанный молекулярно-генетический метод для диагностики наследственно обусловленных форм ВТ основывается на модификации метода комплексной ПЦР и позволяет за 8-10 часов провести точную диагностику совместного носительства РУЬ/РП мутаций при наличии минимального количества исследуемого материала (10-50 мкл крови, взятой на любом антикоагулянте).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Определена частота носителей мутации генов БУЬ, БИ, МТЫРЯ в Азербайджане в популяции в целом и по сравнению с популяциями других стран.

2. Установлены частоты распространения мутации РУЬ, БП и МТЫБЯ и частоты их аллелей РУЬ 1691 в, 1691 А, БП 20010 в, МТИБЯ 677 С и МТИБЯ 677 Т в основных этнических выборках, населяющих территорию Азербайджана - азербайджанцев, лезгинов, талышей и курдов.

3. Исследована роль мутаций FVL, FII и MTHFR как факторов риска в возникновении венозных и артериальных тромбозов .

4.Разработаны и внедрены в практическую медицину модификации высокочувствительного молекулярно-генетического метода, позволяющего одновременное диагностирование FVL, FII мутации при минимальном количестве исследуемого материала и приводящего к сокращению времени проведения реакции, а также к экономии дорогостоящих реактивов.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Джафаров, Тогрул Ахверди оглы

выводы

1. Обнаружены мутации FVL, FII и MTHFR во всех обследованных этнических выборках - азербайджанской, лезгинской, курдской, талышской со следующими частотами: a) в азербайджанской выборке частота распространения мутации FVL - 12,5%, частота аллеля FVL 1691G-0,937, FVL 1691А-0063, частота распространения мутации FD - 1,25%, частота аллеля FII 20210G - 0,994, FII 2021OA - 0,006; частота распространения мутации MTHFR - 44%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,76, MTHFR 677Т-0,24; b) в лезгинской выборке частота распространения мутации FVL — 11,5%, частота аллеля FVL 1691G - 0,942, FVL 1691А - 0,058; частота распространения мутации Fit -3,3%, частота аллеля FII 20210G - 0,984, FII 20210А - 0,016; частота распространения мутации MTHFR - 46%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,74, MTHFR 677Т - 0,26; c) в курдской выборке частота распространения мутации FVL - 10%, частота аллеля FVL 1691G -0,955, FVL 1691А - 0,045, частота распространения мутации FII -2,5%, частота аллеля FII 20210G - 0,978, FH 20210А - 0,022; частота распространения мутации MIHFR 57%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,74-0,72, MTHFR 677Т- 0,28; d) в талышской выборке частота распространения мутации FVL - 4%, частота аллеля FVL 1691G - 0,98, FVL 1691А - 0,020; частота распространения мутации FH -2%, частота аллеля FII 20210G - 0,98, частота аллеля FH 20210А - 0,02, частота распространения мутации MTHFR - 36%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,81, MTHFR 677Т-0Д9.

2. Обнаружено, что разница в частоте носительства мутаций FVL, FII, MTHFR и частоте аллелей между азербайджанской и остальными обследованными выборками из этнических групп незначительна.

3. Показано, что частота носительства FVL мутации в Азербайджане выше, чем во многих странах. В то же время частота гомозигот по MTHFR мутации в

Азербайджане значительно ниже, чем в других странах. Процент носителей и частота аллеля FII в Азербайджане соответствуют среднеевропейским частотам.

4. Установлено, что в обследованной выборке азербайджанских больных мутации FVL и FD являются факторами риска возникновения ВТ. Мутация FD является менее значимым фактором риска, чем мутация FVL. Статистически достоверного повышения частоты гомозигот по мутации MTHFR среди больных не обнаружено.

5. Показано, что сочетанное носительство мутаций FVL/FII и FVL/MTHFR в большей степени увеличивает риск развития ВТ, чем наличие каждой мутации в отдельности. Риск развития заболевания у носителей FVL/FII гораздо выше, чем у носителей FVL/MTHFR

6. Установлено, что' ни одна из изученных мутаций не является фактором риска развития артериальных тромбозов в выборке азербайджанцев. Некоторое повышение частоты носительства мутации FII у больных с артериальными тромбозами статистически не достоверно.

7. Разработана и внедрена в практику модификация метода Multiplex PCR - RFLP, позволяющая одновременно определять мутации FVL и FII при минимальном количестве исследуемого материала (до 10 мкл крови) и приводящая к сокращению времени проведения реакции и экономии дорогостоящих реактивов.

Список литературы диссертационного исследования Джафаров, Тогрул Ахверди оглы, 2005 год

1. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. М., Медицина. 1988.

2. Шифман Ф. Патофизиология крови. Binom publiushers. 2000.

3. Снэлл Д., Доссе Ж., Нэтенсон С. Совместимость тканей. Мир, М., 1979.

4. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека. Мир, М., 1986, т. 3, стр. 181184.

5. Adams М., Smith P. D., Martin D., Thompson J. R., Lodwick D., Samani N. J. Genetic analysis of thermolabile methylene-tetrahydrofolate reductase as a risk factor for myocardial infarction. Quart. J." Med., 1998, v. 89, p. 437-444.

6. Adrresino P., Mannucci P., Duca F., Corral J. Prothrombotic Genetic Risk Factors in Young Survivors of Myocardial Infarction. Blood, 1995, v. 94, p. 46-51.

7. Allaart C. F., Poort S. R., Rosendaal F. R., Reitsma P. H., Bertina R.M. Increased risk of venous thrombosis in carriers of hereditary protein С deficiency defect. Lancet, 1993, v. 341, p. 134-138.

8. Alhene-gelas M., Arnaud E., Nicaud V. Venous thromboembolic disease and the prothrombin, methylene tetrahydrofolate reductase and factor V genes. Thromb. Haemost., 1999, v. 81, p. 506-510.

9. Akar N., Akar E., Dalgin Sozuoz A., Omurliu K. Frequency of Factor V Leiden (1691G-A) mutation in Turkish population.Thromb. Haemost., 1997, v. 78, p. 1527-1528.

10. Arruda V., Siquiera L., Chiapariani L., Coelho O., Mansur.A. Prevalence of the prothrombin gene variant 20210 G-A with venous thrombosis and arterial disease. Blood, 1997, v.651, p. 960-961.

11. M.Bancroft J., Schaefer L., Degen S. Characterization of the Alu- rich 5'- flanking region of the human prothrombin-encoding gene: Identification of a positive cis-acting element that regulates liver-specific expression.Gene, 1990, v. 95, p. 253 -264.

12. Banfield D. K., MacGillivra T. A. Partial characterization of vertebrate prothrombin cDNAs: amplification and sequence analysis of the B chain of thrombin from nine different species. Proc. Nac. Acad. Sci., 1992, v.89, p. 27792783.

13. Bertina R.M., Briet E., Veltkamp J.J. Variants of vitamin K dependent coagulation factors. Acta Haemotologica, 1979, v. 62, p. 1-3.

14. Bertina M. Hereditary protein S deficiency. Haemostasis, 1985, v.15, p. 241-245.

15. Bertina R., Koeleman B., Koster T., Rosendaal F., Dirven R., de Ronde H., van der Velden P., Reitsma P. Mutation in Blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C. Nature, 1994, v.369, p.64-67.

16. Bertina R.M., Rosendaal F. R. Venous thrombosis the interaction of genes and environment.New Eng. J. Med., 1997, v.338, p. 1840-1841.

17. Blajchman M. A., Austin R. C., Fernandez-Rachubinski F., Sheffield W. P. Molecular basis of inherited human antithrombin deficiency. Blood, 1992, v.80, p. 2159-2171.

18. Board P. G., Coggan M., Pidcock M. E. Genetic heterogeneity of human prothrombin (FII). Ann. Hum. Genet.,1982, v. 46, p. 1-9.

19. Bock S.C., Prochownik E. V. Molecular genetic survey of 16 kindreds with hereditary antithrombin III deficiency. Blood, 1987, v. 70, p. 1273-1278.

20. Boers G. Hyperhomocysteinemia as a risk factor for arterial and venous disease: of incidence and relevance. Thromb. Haemost.,1997, v.78, p. 520-522.

21. Braun A., Muller B., Rosche A. A. Population study of the G1691A mutation (R506Q, FV Leiden) in the human factor V gene that is associated with resistance to activated protein C. Hum. Genet., 1996, v. 97, p. 263-264.

22. Brey R. L., Coull B. M. Cerebral Venous Thrombosis: Role of Activated Protein C Resistance and Factor V Gene Mutation. Stroke, 1996, v. 27, p. 1719-1720.

23. Broekmans A. W., Veltkamp J. J., Bertina R. M. Congenital protein C deficiency and venous thromboembolism: a study of three Dutch families. New Eng. J. Med., 1983, v. 309, p. 340-344.

24. Brown B. K., Luddington R., Williamson D., Baker P. Riskof venous thromboembolism associated with a G to A transition at position 20210 in the 3'-untranslated region of the prothrombin gene. Brit. J. Haemotology, 1997, v. 98, p. 907-911.

25. Bykowska K., Vertun-Baranowska B., Windyga J. and Lopaciuk S. Prevalence of G20210A prothrombin gene mutation in Poland. Pol. Arch.Med. Wewn., 2002, v. 104(5), p. 729-733.

26. Chaida C., Gialeraki A., Tsoukala C., Mandalaki T. Prevalence of FVQ 506 mutation in the Hellenic population. Thromb Haemost., 1996, v. 76, p. 127-131.

27. Chan W. P., Lee C. K., Kwong Y. L., Lam C. K., Liang R. A novel mutation of arg306 of factor V gene in Hong Kong Chinese. Blood, 1998, v. 191, p. 11351139.

28. Corral J., Zuaro-Jausoro J., Rivera R., Gonzalez-Conejero F. Clinical and analytical relevance of the combination of prothrombin 20210 A/A and factor V Leiden : results from large family. Brit. J. Haemotology, 1999, v. 105, p. 560563.

29. Cosgriff T. M., Bishop D. T., Hershgold E. J., Skolnick M. H., Martin B. A., Baty B. J., Carlson K. S. Familial antithrombin III deficiency: its natural history, genetics, diagnosis and treatment. Medicine, 1983, v. 62, p. 209-220.

30. Couturaud F., Oger E., Abalain J.H., Chenu E., Guias B., Floch H.H., Mercier B., Mottier D. and Leroyer C. Methylenetetrahydrofolate reductase C677T genotype and venous thromboembolic disease. Respiration, 2000 , v. 67(6), p. 657-661.

31. Cumming A., Keeney S., Salden A., Bhavani M.The prothrombin gene 20210 G-A : Prevalence in a U.K anticoagulant clinic population. Brit. J. Haemotology, 1997, v. 98, p. 566-569.

32. Dahlback B., Stenflo J. Binding ov bovine coagulation factor Xa to platelets. Biochemistry, 1978, v. 117, p. 4948-4951.

33. Dahlback B., Hildebrand B. Inherited resistance to activated protein C is corrected by anticoagulant cofactor activity found to be a property of factor V. Proc. Nat. Acad. Sci., 1994, v. 91, p. 1396-1400.

34. Dahlback B., Hansson C., Islam M., Szpirer J., Szpirer C,. Lundwall A., Levan

35. G. Assignment of gene for coagulation factor V to chromosome 1 in man and to chromosome 13 in rat. Somat. Cell Molec. Genet., 1998, v. 14, p 509-514.

36. De Bruijn S., Stam J., Koopman M., Vandenbroucke J. Case-control study of risk of cerebral sinus thrombosis in oral contraceptive users who are carriers of hereditary prothrombotic conditions. Brit. Med. J., 1998, v. 316, p. 589-592.

37. Debus O., Koch H., Kurlemann G., StraterR., Vielhaber H., Weber P., Nowak-Gottl U. Factor V Leiden and genetic defects of thrombophilia in childhood porencephaly. Arch. Dis. Child (Fetal Neonatal Ed.), 1998, v. 78, p. 121-124.

38. Degen S. F., MacGillivray R. T., Davie E. W. Characterization of the complementary deoxyribonucleic acid and gene coding for human prothrombin. Biochemistry, 1983, v. 22, p. 2087-2097.

39. De Maat M., Bladbjerg E., Johansen L., Gram J., Jesperson.J. Absence of prothrombin mutation in Inuit. Thromb. Haemost., 1998, v. 79, p. 882- 883.

40. Den Heijer M., Blom H., Gerrits W., Rosendaal F., Haak H., Wijermans P., Bos

41. H. Is hyperhomocysteinaemia a risk factor for reccurent venous thrombosis?. Lancet, 1995, v. 345, p. 882-885.

42. Den Heijer M., Koster T., Blom H., Bos H., Reitsma P., Rosendaal F. Hyperhomocysteinemia as a risk factor for deep-vein thrombosis. N. Eng. J. Med., 1997, v. 334, p. 759-762.

43. De Stefano V., Leone G.Antithrombin III congenital defects: revising classification system. Thromb. Haemost., 1989, v. 62, p. 820-821.

44. Dimino G., Grandone E., Margaglione M .Clinical relevance ofpolymorfic markers of arterial thrombosis. Thromb. Haemost., 1997, v.78, p. 462-463.

45. Eekhoff EM, Rosendaal FR, Vandenbroucke JP Minor events and the risk of deep venous thrombosis. Thromb Haemost., 2000, v. 83, p. 408-411.

46. Egan Robert. Prothrombic and vascular risk factors in NAION. Ophthalmology,2000, v. 107, p. 2116-2117.

47. Egeberg O.Thrombophilia caused by inheritable deficiency of Blood antithrombin. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 1965, v.17, p. 92-93.

48. Engbersen A., Franken D., Boers G., Stevens E., Trijbels F., Blom H.Thermolabile 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase as a cause of mild hyperhomocysteinemia. Am. J. Hum. Genet., 1995, v. 56, p. 142-150.

49. Fassett MJ, Bohn YC, Wing DA Longitudinal evaluation of activated protein C resistance among normal pregnancies of Hispanic women. Am J Obstet Gynecol 2000 Jun 182:6 1433-6.

50. Fletcher O., Kessling A. MTHFR association wiTh arteriosclerotic vascular disease? Hum. Genet., 1998, v. 103, p. 11-21.

51. Franco R.F,. Santos S.E., Elion J., TavellaM.H., Zago F.Prevalence of the G20210A Polymorphism in the 3-Untranslated Region of the Prothrombin Gene in Different Human Populations. Acta Haemotologica, 1998, v.100, p. 9-12.

52. Franco R., Araujo A., Zago M., Elion. Analysis of the C677T mutation of the methylentetra hydrofolate reductase gene in different ethnic groups. Thromb and Haemost., 1998, v. 79,p. 119-121.

53. Freeman J. M., Finkelstein J. D., Mudd S. H., Uhlendorf B. W. Homocystinuria presenting as reversible 'schizophrenia': a new defect in methionine metabolism with reduced methylene-tetrahydrofolate-reductase activity. Pediat. Res., 1972, v. 6, p. 423.

54. Friedline JA., Ahmad E.,Garcia D., Blue DD., Ceniza N., Mattson JC. and Crisan D. Combined factor V Leiden and prothrombin genotyping in patients presenting with thromboembolic episodes. Arch. Pathol. Lab. Med., 2001, v. 125(1), p. 105-111.

55. Gallus A. S. Familial venous thromboembolism and inherited abnormalities of the Blood clotting system. Aust. New Zeal. J. Med., 1984, v. 14, p. 807-810.

56. Garsia-Gala J., AlvarezV., Pinto C., Soto I. Factor V Leiden (R506Q) and risk of venous thromboembolism: a case control study based on the Spanish population. Clin Genet., 1997, v. 152, p. 206-207.

57. Gerhard A., Scharf R.E., Struve S., Zotz R.B. Prothrombin and factor V mutations in women with a history of thrombosis during pregnancy and the puerperium. New. Engl. J. Med., 2000, v. 342, p. 374-380.

58. Glueck C. J., Glueck H. I., Greenfield D., Freiberg R., Kahn A., Hamer T., Stroop D., Tracy T. Protein C and S deficiency, thrombophilia, and hypofibrinolysis: pathophysiologic causes of Legg-Perthes disease. Pediat. Res., 1994, v. 35, p. 383-388.

59. Gomez E., Sonja C.Rapid Simultaneous Screening Of Factor V Leiden and G20210A Prothrombin Variant by Multiplex Polymerase Chain Reaction on Whole Blood. Blood, 1997, v. 91, p. 2210-2211.

60. Goyette P., Sumner J. S., Milos R., Duncan A. M. V, Rosenblat D. S., Matthews R. G., Rozen R. Human methylenetetrahydrofolate reductase: isolation of cDNA, mapping and mutation identification. Nature Genet., 1994, v. 7, p. 195-200.

61. Goyette P,. Christensen B., Rosenblatt D. S., Rozen R. Severe and mild mutations in cis for the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, and description of five novel mutations in MTHFR. Am. J. Hum. Genet., 1995, v. 59, p. 12681275.

62. Goyette P., Pai A., Milos R., Frosst P.,Tran P., Chen Z., Chan M., Rozen R.Gene structure of human and mouse methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR). Mammalian Genome, 1998, v. 9, p. 652-656.

63. Griffin J., Evat B., Zimmerman T., Kleiss J., Wideman C. Deficiency of protein C in congenital thrombotic disease. J. Clin. Invest., 1981, v. 68, p. 1370-1373.

64. Greer,A. The challenge of thrombophilia in maternal-fetal medicine. New Eng. J. Med., 2000, v. 342, p. 424-425.

65. Greengard J., Sun X., Xu X., Fernandez J., Griffin J., Evatt B. Activated protein C resistance caused by arg506gln mutation in factor Va. Lancet, 1994, v. 343, p. 1361-1362.

66. Griffin A., Griffin H. Rapid DNA isolation.Current Innovations and Future., 1995, v. 32,p. 341-350.

67. Gruenberg J. C., Smallridge R. C., Rosenberg R. D. Inherited antithrombin III deficiency causing mesenteric venous infarction: a new clinical entity. Ann. Surg., 1975, v. 181, p. 791-794.

68. Grundy C. B., Holding S., Millar D. S., Kakkar V. V., Cooper D. N. A novel missense mutation in the antithrombin III gene (ser349-to-pro) causing recurrent venous thrombosis. Hum. Genet., 1992, v. 88, p. 707-708.

69. Gurgey A., Mesci L. The prevalence of factor V Leiden mutation in Turkish population. Turk. J. Pediat., 1997, v.39, p. 37-39.

70. Gurgey A., Balta G. and Boyvat A. Factor V Leiden mutations and PAI-1 gene 4G/5G genotype in thrombotic patients with Behcet's disease. Blood Coagul. Fibrinolysis, 2003, v. 14(2), p. 121-124.

71. Gurgey A., Hicsonmez G., Parlak H., Balta G. Prothrombin Gene 20210 G-A mutation in Turkish Patients with Thrombosis. Am.J.Haemotology, 1998, v. 89, p. 179-200.

72. Gyde O. H., Middleton M. D.,Vaughan G. R., Fletcher D. J.Antithrombin III deficiency, hypertriglyceridaemia, and venous thrombosis. Brit. Med. J., 1978, v. l,p. 621-622.

73. Hakime-Iraki N, Tamim H, Kreidy R, Almawi WY The prevalence of factor V R506Q mutation-Leiden among apparently healthy Lebanese. Am. J. Hematol., 2000, v. 65, Nol, p. 45-49.

74. Hasstedt S. J., Bovill E. G., Callas P. W. An unknown genetic defect increases venous thrombosis risk, through interaction with protein C deficiency. Am. J. Hum. Genet., 1998, v. 63, p. 569-576.

75. Hillarp A je Zaller B., Svrensson P.,. Dahlback B. The 20210 G-A allele of the prothrombin gene is a common risk factor among Swidish outpatients with verified deep vein thrombosis. Thromb Haemost., 1997, v. 78, p. 990-996.

76. Ho ward T.E., Marusa M., Channell C., Duncan A. A patient homozygous for a mutation in the prothrombin gene 3-untranslated region associated with massive thrombosis. Blood Coagul Fibrinolysis., 1997, v. 8, p. 316.

77. Hultin M. B., Grimson R. C., Doggen C. M., Rosendaal F. R., Cats V. M., Bertina R. M. Factor V Leiden, Prothrombin 20210 Gene Variant, and Risk of Myocardial Infarction. Circulation, 1999, v. 99, p. 457-460.

78. Humpert P. M., Isermann B., Rudofsky G., Ziegler R., Bierhaus A., Ritz E., Nawroth P. P. The 20210 G to A prothrombin polymorphism and late complications in type 1 diabetes mellitus.Thromb. Haemost., 1999, v. 81, No. 164, p. 64-67.

79. Jenny R., Pittman D., Toole J., Kriz R., Aldape R., Hewick R., Kaufman R., Mann K. Complete cDNA and derived amino acid sequence of human factor V. Proc. Nac. Acad. Sci., 1987, v. 84, p. 4846-4850.

80. Johnson E. J., Prentice C. M., Parapia L. A. Premature arterial disease associated with familial antithrombin III deficiency. Thromb. Haemost., 1990, v. 63, p. 13-15.

81. Juul, Tybja=rg-Hansen, Steffensen R., Kofoed S., Jensen G., and Nordestgaard. Factor Leiden: The Copenhagen City Heart Study and 2 meta-analyses. Blood, 2002, v. 100, No. 1, p. 3-10.

82. Kalafatis M., Rand M., Mann K. The mechanism of inactivation of human factor V and human factor Va by activated protein C. J.BioI.Chem., 1994, v. 269, p. 31869-31874.

83. Kang S.-S., Wong P. K., Bock H.-G. O., Horwitz A., Grix A. Intermediate hyperhomocysteinemia resulting from compound heterozygosity of methylenetetrahydrofolate reductase mutations. Am. J. Hum. Genet., 1991, v.48, p. 546-551.

84. Kang S.-S., Wong P. K., Susmano A., Sora J.,Norusis M., Ruggie N. Thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase: an inherited risk factor for coronary artery disease. Am. J. Hum. Genet., 1991, v. 48, p. 536-545.

85. Kluijtsman L., den Heijer M., Reitsma P., Heil S., Blom H., Rosendaal F. Thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase and factor V Leiden in the risk of deep-vein thrombosis.Thromb. Haemost., 1998, v. 79, p, 254-258.

86. Kodaira H., Ishida F., Shimodaira S., Takamiya.O., Furihata K., Kitano K. Resistance to Activated Protein C and Arg 506 Gin Factor V Mutation are Uncommon in Eastern Asian Population. Acta Haemotologica, 1997, v. 981, p. 22-25.

87. Koeleman B, Reitsma P, Allaart C, Bertina R. Activated protein C resistance as an additional risk factor for thrombosis in protein C-deficient families. Blood, 1994, v. 84, p. 1031-1035.

88. Kupfermine M., Eldor A., Steinman N., Many A., Bar-Am A., Jaffa A., Fait G., Lessing. Increased frequency of genetic thrombophilia in women with complications of pregnancy. New Eng. J. Med., 1999, v. 340, p. 9-12.

89. Lane D.A., Olds R. J., Thein S. L. Antithrombin III: summary of first database update. Nucleic Acids Res., 1994, v. 22, p. 3556-3559.

90. Lane D. A., Grant P. J. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease. Blood, 2000, v. 95, p. 1517-1532.

91. Lanchantin G. F., Hart D. W., Friedmann J. A., Saavedra N. V., Mehl J. W. Amino acid composition of human plasma prothrombin. J. Biol. Chem., 1968, v. 243, p. 5479-5485.

92. Lalouchek W., Aull W., Zeiler K. The Prothrombin G2021 OA Mutation and Factor V Leiden Mutation In Patients with Cerebrovaskular Disease.Blood., 1997, v. 87, p. 704-705.

93. Lensen R.P., Bertina R. M. de Ronde H.,Vandenbroucke J.P. and Rosendaal F.R. Venous thrombotic risk in family members of unselected individuals with factor V Leiden. Thromb. Haemost., 2000, v. 83 (6), p. 817-821.

94. Lensing A., Prandoni P., Prints M., Buller H. Deep-vein thrombosis. Lancet, 1999, v. 353, p. 479-485.

95. Liang R., Lee C. K., Wat M. S., Kwong Y. L., Lam C. K., Liu H. W. Clinical significance of arg306 mutations of factor V gene. Blood, 1998, v. 92, p. 25992600.

96. Lin J., She M., Tsay W.The mutation at position in the 3'-untraslated region is extremely rare in Taiwanese Chinese patients with venous thrombophilia. Thromb. Haemost., 1998, v. 80, p. 343.

97. Lindqvist P., Svensson P., Dahlback B., Marsal K. Factor V Q-506 mutation (activated protein C resistance) associated with reduced intrapartum Blood loss: a possible evolutionary selection mechanism. Thromb. Haemost., 1998, v. 79, p. 69-73.

98. Mahmoud A., Elias E., Beauchamp N., WildeJ.Prevalence of the factor V Leiden mutation in hepatic and portal vein thrombosis. Gut., 1997, v. 40, p. 798800.

99. Maly J, Dulicek P, Safarova M Risk of thrombosis in patients homozygous and heterozygous for factor V Leiden in the East Bohemian region. Clin. Appl. Thromb. Hemost., 2000, v. 6, No. 2, p. 87-89.

100. Marciniak E., Farley C. H., DeSimone P. A. Familial thrombosis due to antithrombin III deficiency. Blood, 1974, v. 43, p. 219-231.

101. Margaglione M., D'Andrea G., Giuliani N., Brancaccio V., De Lucia D., Grandone E., De Stefano V., Tonali P. A., Di Minno G. Inherited Prothrombotic

102. Conditions and Premature Ischemic Stroke : Sex Difference in the Association With Factor V Leiden. Arterioscler Thromb. Vase. Biol., 1999, v. 19, p. 17511756.

103. Markus H., Zhang Y., Jeffery S. Screening for the Factor-V Arg 506 Gin Mutation in Patients with TIA and Stroke. Cerebrovascular Diseases, 1996, v. 6, p. 360-362.

104. Marlar R. A. Protein C in thromboembolic disease. Semin. Thromb. Hemost., 1986, v. 11, p. 387-393.

105. Martineiii I., Sacchi E., Landi G., Taiol E., Duca F., Mannucci P. M. High risk of cerebral-vein thrombosis in carriers of a prothrombin-gene mutation and in users of oral contraceptives. New Eng. J. Med., 1998, v.338, p. 1793-1797.

106. Meinardi J.R., Pelsma P.M., Koning H., and van der Meer J.Double-Homozygosity for FactorV Leiden and the Prothrombin Gene G20210A Variant in a Young patient With idiopathic Venous Thrombosis. Blood, 1999, v. 94, No. 5, p. 1828-1829.

107. McAndrew P., Brandt J., Pearl D., Prior T.The incidence of the gene for thermolabile methylene tetrahydrofolate reductase in African Americans. Thromb. Res., 1996, v. 83, p. 195-198.

108. Meinardi J. R., Pelsma P. M., Koning H., van der Meer J., Hamulyäk K. Double-Homozygosity for Factor V Leiden and the Prothrombin Gene G20210A Variant in a Young Patient With Idiopathic Venous Thrombosis. Blood, 1999, v. 94, p. 1828-1829.

109. Mercier G, Lucotte G. Population genetics of factor v leiden in Europe. Am. J. Reprod. Immunol., 2001, v. 45, p. 65-71

110. Meyer M., Kutscher G., Vogel G. Simultaneous genotyping for factor V Leiden and prothrombin G20210A variant by a multiplex PCR-SSCP assay on whole Blood. Thromb. Haemost., 1999, v. 81, p. 162-163.

111. Meyer-Michel S., Gerotziafas G., Conard J., Marie-Hélène Horellou., Elalamy. Clinical Aspects and Laboratory Problems in Hereditaiy Thrombophilia. Haemostasis, 1999, v. 29, p. 76-99.

112. Miyata T., Kawasaki T., Fujimura H., Uchida K., Tsushima M. The prothrombin gene G20210 mutation is not found among Japanese patients with thrombosis and healthy individuals. Blood Coagulation and Fibrinolysis, 1998, v. 9, p. 451-452.

113. Motulsky A. G. Nutritional ecogenetics: homocysteine-related arteriosclerotic vascular disease, neural tube defects, and folic acid. Am. J. Hum. Genet., 1996, v. 58, p. 17-20.

114. Nagayama T., Nagayama M., Tsuda M., Yoshii F., Shinohara.Y.Low Prevalence of Activated Protein C Resistance and Factor V Leiden in Ischemic Stroke in Japan. Cerebrovascular Diseases, 1996, v. 6, p. 356-359.

115. Nishio H., Lee M., Fujii M., Kario K., Kayaba K., Shimada K., Matsuo M., Sumino K.A common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase gene among the Japanese population Jpn. J. Hum. Genet., 1996, v. 41, p. 247-251.

116. Oner A. F., Arslan S., Caksen H., Ceylan A. Budd-Chiari syndrome in a patient heterozygous for both factor V Leiden and the G20210A mutation on the prothrombin gene. Thromb. Haemost., 1999, v. 82, p. 1366-1367.

117. Ozbek N., Atac F.B., Verdi H. and Kayiran S.M. Purpura fulminans in a child with combined heterozygous prothrombin G20210A and factor V Leiden mutations. Ann. Hematol. 2003, v. 82, p. 118-120.

118. Ozbek U., Tangun Y. Freguency of Factor V Leiden in Turkey. Br. J. Haemot., 1997, v. 97,p.504-505.

119. Penick G. D. Blood states that predispose to thrombosis.In: Sherry S.; Brinkhous K. M., Genton E., Stengle J. M. Thrombosis. Washington, D. C.: National Academy of Sciences (pub.) 1969.

120. Pepe G., Riccards O., CamachoV., BrunneliT. Prevalence of factor V Leiden in Non-European populations. Thromb Haemost., 1997, v. 77, p .329-331.

121. Perry D. J., Carrell R. W. Molecular genetics of human antithrombin deficiency. Hum. Mut., 1996, v. 7, p. 7-22.

122. Prondiznski C., Wermes G., Sykora R. The prothrombin G20210 mutation detected by a PCR-based method in Patients with thrombosis. Conn Med., 1998, v. 62, p. 519-525.

123. Ranguelov RD., Rosenthal N., Bromley C. and Vasef M. A. Detection of factor V Leiden and prothrombin gene mutations in patients who died with thrombotic events. Arch. Pathol. Lab. Med., 2002, v. 126(10), p. 1193-1996.

124. Raziel A, Kornberg Y, Friedler S, Schachter M, Sela BA, Ron-El R. Hypercoagulable thrombophilic defects and hyperhomocysteinemia in patients with recurrent pregnancy loss. Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol., 2001, v. 45, p. 62-71.

125. Rees D.C., Cox M., Clegg J. World distribution of factor V Leiden. Lancet, 1995, v. 348, p. 1133-1134.

126. Rees D. C., Chapman N. H., Webster M. T., Guerreiro J. F., Rochette J., Clegg J. B. Born to clot: the European burden. Brit. J. Haemat., 1999, v. 105, p. 564566.

127. Ridker P., Miletich J., Stampfer M., Goldhaber S., Lindpaintner K., Hennekens C. Factor V Leiden and risks of recurrent idiopathic venous thromboembolism. Circulation, 1995, v. 92, p. 2800-2802.

128. Ridker P., Miletich J., Hennekens C., Buring J. Ethnic Distrebution of Factor V Leiden in 4047 Men and Women. JAMA., 1997, v. 277, p. 1305-1308.

129. Rosendaal F., Siscovick D., Schwatrz R., Reitsma P. Factror V Leiden increases the risk of venous and artherial thrombosis in young women. Blood, 1997, v. 89, p. 2817-2818.

130. Rosendaal F. R. Venous Thrombosis: Prevalence and Interaction of Risk Factors. Haemostasis, 1999, v. 29, p. 1-9.

131. Rosendaal F.Venous Thrombosis: a multicausal disease. Lancet, 1999, v. 353, p. 1167-1173.

132. Rosing J., Hoekema L., Nicolaes G. Effects or protein S and factor Xa and factor Va and factor Var506q by activated protein C. J. Biol.Chem., 1995, v. 270, p. 27852-27855.

133. Royle N. J., Irwin D. M., Koschinsky M. L., MacGillivray R. T. A., Hamerton, J. L.Human genes encoding prothrombin and ceruloplasmin map to 1 lpl l-ql2 and 3q21-24, respectively. Somat. Cell Molec. Genet., 1987, v. 13, p. 285-292.

134. Sarasin F., Bounameaux H. Decision analysis model of prolonged oral anticoagulant treatment in factor V Leiden carriers with first episode of deep vein thrombosis. Brit. Med. J., 1998, v. 316, p. 95-99.

135. Schafer A. I.Venous thrombosis as a chronic disease. New Eng. J. Med., 1999, v. 340, p. 955-956.

136. Schneider J. A., Rees D. C., Liu Y.-T., Clegg J. B. Worldwide distribution of a common methylenetetrahydrofolate reductase mutation. Am. J. Hum. Genet., 1998, v. 62, p. 1258-1260.

137. Selingsohn U., Zavelin A. Thrombophilia as a multigenic disorder. Thromb. Haemost., 1997, v. 79, p. 297-301.

138. Shen L., Dahlberg B. Factor V and protein S as synergistic cofactors to activated protein C in degradation of factor Villa. J. Biol. Chem., 1994, v. 269, p. 18735-18736.

139. Sorja J,. Almasy L., Tirado L., Borell M. Linkage analysis demonstrates that the prothrombin G20210A mutation jointly influences plasma prothrombin levels and risk of thrombosis. Blood, 2000, v.95, p. 2780-2785.

140. Svensson J., Dahlback B. Resistance to activated protein С as a basis for venous thrombosis. New Eng. J. Med., 1994, v. 330, p. 517-522.

141. Sun X., Evatt В., Griffin J. Blood coagulation factor Va abnormality associated with resistance to activated protein С in venous thrombophilia. Blood, 1994, v. 83, p. 3120-3125.

142. Sykes T.F., Fegan C., Mosquera D. Thrombophilia, polymorphisms, and vascular disease. Mol. Pathol., 2000, v. 53, p. 300-306.

143. Talmon T., Scharf J., Mayer E., Lanir N., Miller В., Brenner B. Retinal arterial occlusion in a child with factor V Leiden and thermolabile methylene tetrahydrofolate reductase mutations. Am. J. Ophthal., 1997, v. 124, p. 689-691.

144. Thorelli E., Kaufman R., Dahlberg B.Cleavege requirment for activation factor V by factor Xa. Eur. J. Biochemistry, 1997, v. 247, p. 12.

145. Thorelli E., Kaufman R., Dahlback B. The C-terminal region of the FV B-domain is crucial for the anticoagulation for the anticoagulant activity of FV. J. BioI.Chem., 1998, v. 273, p. 169148-169155.

146. Thorelli E., Randal J., Kaufman R., Dahlback B. Cleavege of Factor V at Arg 506 by Activated Protein С and the protein S. ССЫЛКА

147. Tripodi A., Chantarangkul V., Mannucci P. Hyperprothrombinemia may result in acquired activated protein С resistance. Blood, 2000, v. 96, p. 3295-3296.

148. Voorberg J., Roelse J., Koopman R., Buller H., Berends F., ten Cate J., Mertens K., van Mourik A. Association of idiopathic venous thromboembolismwith single point-mutation at arg506 of factor V. Lancet, 1994, v. 343, p. 1535153624.

149. Wang H., Riddel D., Guinto E., MacGillivray R., Hamerton J. Localization of the gene encoding human factor V to chromosome lq21-25. Genomics, 1998, v. 2, p. 324-328.

150. Wendel U., Bremer H. J. Betaine in the treatment of homocystinuria due to 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase deficiency. Europ. J. Pediat., 1984, v. 142, p. 147-150.

151. Westendorp R., Reitsma P., Bertina R. Inherited prethrombotic disorders and infectious purpura. Thromb. Haemost., 1996, v. 75, p. 899-901.

152. Williamson.D., Brown. K., Luddington R., Baglin C., Baglin T. Factor V Cambridge: a new mutation (arg306-to-thr) associated with resistance to activated protein C. Blood, 1998, v. 91, p. 1140-1144.

153. Winter J. H., Fenech A., Ridley W., Bennett B., Cumming A. M., Mackie M., Douglas A. S. Familial antithrombin III deficiency. Quart. J. Med., 1982, v. 51, p. 373-395.

154. Zandra R., Lesly R., Chilcot I.The C677T MTHFRgene mutation is not predictive of risk for recurrent fetal loss. Brit. J. Haemotology., 1999, v. 1, p. 98-101.

155. Zimmerman H., Cameron A., Fisher L.Myocardial infarction in young adults:Angiographic characterization, risk factors and prognosis.!!. Am. Coll. Cardiol., 1995, v. 26, p. 654-655.

156. Zivelin A., Rosenberg N., Faier S., Kornbrot N., Peretz H. Mannhalter C,. Horellou M. H.,Seligsohn U.A single genetic origin for the common prothrombotic G20210A polymorphism in the prothrombin gene. Blood, 1998, v. 92, p. 1119-1124.

157. Zivelin A., Griffin H., Samama M., Eldor A. A single genetic origin for a common Caucasian risk Factor for venous thrombosis. Blood, 1997, v. 89, p. 397-401.

158. Zoller B., Dahlback B. Linkage between inherited resistance to activated protein C and factor V gene mutation in venous thrombosis. Lancet, 1994, v. 343, p. 1536-1538.

159. Zoller B., Svensson P., He X., Dahlback B. Identification of the same factor V gene mutation in 47 out of 50 thrombosis-prone families with inherited resistance to activated protein C. J. Clin. Invest., 1994, v. 94, p. 2521-2524.