Радиочувствительность потомков опухолевых клеток, выживших после γ-облучения в больших дозах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.01, кандидат биологических наук Сланина, Светлана Викторовна

• Сланина, Светлана Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сланина, Светлана Викторовна

список сокращений.

Введение.

I. Обзор литературы.

1.1. Отдаленные эффекты воздействия радиации на клетки млекопитающих.

1.1.1. Летальные и нелетальные эффекты в отдаленном потомстве облученных клеток.

1.1.2. Радиоиндуцированная нестабильность генома.

1.1.3. Отдаленные эффекты излучения в опухолевых клетках.

1.2. Проблема возобновления опухолевого роста после облучения.

1.2.1. Репопуляция опухоли после радиационного воздействия.

1.2.2. Повышение радиоустойчивости опухоли к повторному облучению.

1.3. Исследование радиочувствительности потомков облученных опухолевых клеток в условиях in vitro.

II. Материалы и методы исследования.

11.1. Линии клеток, условия культивирования и облучения.

11.2. Получение линий потомков облученных клеток.

11.3. Подготовка и анализ хромосомных препаратов.

11.4. Радиочувствительность клеток.

11.5. Рост клеток в полужидкой среде.

11.6. Кинетика роста клеточных популяций.

11.7. Подготовка цитологических препаратов для светового и флуоресцентного микроскопирования.

11.7.1. Цитологические препараты для световой микроскопии.

11.7.2. Цитологические препараты для флуоресцентной микроскопии.

II. 8. Распределение клеток по фазам клеточного цикла (метод проточной цитофлуориметрии).

11.9. Восстановление клеток от радиоиндуцированных повреждений.

11.10. Прививка клеток животным.

11.11. Статистическая обработка полученных результатов.

Результаты собственных исследований.

III. Получение и цитоморфологическая характеристика потомков облученных клеток.

III. 1. Динамика изменений в облученной популяции клеток ДХ-ТК".

111.2. Морфологическая характеристика полученных популяций потомков облученных клеток - ПОК-Ю и ПОК-20.

111.3. Хромосомная характеристика линий потомков облученных клеток.

IV. Радиочувствительность потомков облученных клеток.

IV. 1. Дозовые кривые выживаемости линий ДХ-ТК", ПОК-Ю и ПОК-20. 51 IV. 1.1. Зависимость формы дозовых кривых выживаемости от материала подложки.

IV.1.2. Зависимость формы дозовых кривых выживаемости от сохранения межклеточных контактов.

IV.2. Радиочувствительность потомков облученных клеток при росте в полужидкой среде.

V. Репопуляция потомков облученных клеток после радиационного воздействия.

V.l. Кривые роста линий ДХ-ТК", ПОК-Ю и ПОК-20 в норме и после облучения в дозах 8, 10, 12,5 и 15 Гр.

V.2. Динамика цитоморфологических изменений в клеточных популяциях в первые 4 суток после облучения в дозе 10 Гр.

V.3. Распределение клеток по фазам клеточного цикла после облучения в дозе 12,5 Гр.

VI. Эффективность восстановления потомков облученных клеток от радиоиндуцированных повреждений.

VI. 1. Восстановление от ПЛП.

VI.2. Восстановление от СЛП.

VII. Туморогенность клеток.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Радиочувствительность потомков опухолевых клеток, выживших после γ-облучения в больших дозах»

Ионизирующее излучение широко используется при лечении онкологических заболеваний. Наряду с большими успехами, достигнутыми в лучевой терапии (ЛТ) опухоли, многие вопросы до сих пор остаются нерешенными. Как в эксперименте, так и в клинической практике, наряду с регрессией опухолей после больших лучевых нагрузок также отмечали феномен ускоренной репопуляции опухолевых клеток [58, 83, 166, 168, 171, 183] и повышение радиоустойчивости новообразований [3, 48, 129, 137]. Появление рецидивов, повышение их резистентности к повторным курсам облучения является одним из основных факторов, снижающих эффективность ЛТ злокачественных новообразований.

До сих пор нет ясности, за счет каких клеток или процессов происходит возобновление роста опухоли после облучения в высоких дозах. Не ясны и причины повышения резистентности рецидивов к последующему облучению.

Полагают, что репопуляция опухолевых клеток происходит либо за счет предсуществующих, устойчивых к радиации клеток (в состоянии гипоксии или резистентной фазе цикла, обладающих эффективной репарацией повреждений, эндогенными радиопротекторами и т.д.) [93, 138, 141, 149, 170, 186], либо (и) за счет возникших заново под действием радиации новых клонов радиорезистентных клеток, генетически отличных от исходных [18, 22, 131]. Возможно, в результате первого курса лучевой терапии погибает наиболее чувствительная фракция клеток и происходит отбор (селекция) более радиорезистентной субпопуляции. Вероятно также, что большие дозы радиации индуцируют в выживших клетках глубокие качественные изменения. В результате этого потомки клеток, переживших облучение в больших дозах, способны быстро и эффективно восстанавливать опухолевый рост.

Решение проблем возобновления опухолевого роста после больших лучевых нагрузок и повышения резистентности опухоли к повторному 7 облучению непосредственно связано с изучением отдаленных последствий действия ионизирующего излучения на популяцию опухолевых клеток. Этому во многом могло бы способствовать сравнительное исследование свойств исходной опухолевой популяции и потомков облученных опухолевых клеток в условиях in vitro.

Изучению различных свойств потомков облученных опухолевых клеток, полученных в условиях in vitro, посвящено множество работ. Однако лишь в очень немногих из них исследовалась радиочувствительность потомков. Полученные данные весьма противоречивы. Только в единичных работах удавалось получить более радиорезистентное потомство [43, 153], в большинстве же исследований у потомков облученных клеток не отмечалось повышения радиоустойчивости [36, 50, 134]. В указанных работах изучалась выживаемость клеток после радиационного воздействия, но не оценивалась пролиферативная активность выживших клеток, которая в значительной мере определяет скорость постлучевой репопуляции опухоли.

Исходя из вышеизложенного, весьма актуальным является проведение всестороннего и целенаправленного исследования радиочувствительности и способности к постлучевой репопуляции потомков облученных клеток (ПОК).

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было исследование радиочувствительности и способности к постлучевой репопуляции отдаленных потомков опухолевых клеток, выживших после однократного у-облучения в больших дозах.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи.

1. Получить in vitro экспериментальную модель - линии потомков фибробластов джунгарского хомячка, выживших после у-облучения в дозах 10 и 20 Гр - ПОК-Ю и ПОК-20. Дать им морфологическую и хромосомную характеристики.

2. Изучить радиочувствительность потомков облученных клеток и клеток исходной линии.

3. Провести сравнительное исследование способности ПОК и родительских клеток к постлучевой репопуляции.

4. Сравнить эффективность восстановления от радиоиндуцированных повреждений клеток родительской линии и ПОК.

5. Провести сравнительное изучение туморогенной активности исследуемых культур.

Научная новизна полученных результатов. Предложен способ выделения in vitro потомков облученных клеток, с помощью которого после однократного у-облучения в дозах 10 и 20 Гр фибробластов джунгарского хомячка были получены линии ПОК-10 и ПОК-20.

Показано, что ПОК значительно отличаются от исходных клеток по ряду свойств: морфологии, распределению клеток по числу хромосом, клоногенной способности, радиочувствительности, способности к постлучевой репопуляции.

Впервые обнаружена чрезвычайно высокая радиоустойчивость ПОК, значение D0 которых в 2-3 раза превышало D0 родительских клеток. Наличие межклеточных контактов у потомков в момент облучения способствовало выявлению гетерогенности клоногенных клеток ПОК по радиочувствительности. Высокая радиорезистентность потомков облученных клеток была также подтверждена при их росте независимо от субстрата - в полужидкой среде.

При изучении in vitro способности ПОК к постлучевой репопуляции впервые показано, что, в отличие от клеток родительской линии, потомки быстрее и эффективнее восстанавливали свою численность после у-облучения в больших дозах (8-15 Гр).

Впервые обнаружено, что туморогенная способность необлученных и облученных в дозах 5, 10 и 15 Гр ПОК не различалась. Выявленные in vitro свойства ПОК - высокая радиоустойчивость и способность к быстрой и эффективной постлучевой репопуляции, были подтверждены в опытах in vivo.

Научная и практическая значимость работы. Результаты настоящей работы представляют теоретический интерес для разработки проблемы отдаленных последствий действия ионизирующего излучения на опухолевую популяцию.

Полученные в работе данные способствуют пониманию процессов возобновления роста опухоли после больших лучевых нагрузок, а также возможных механизмов повышения радиорезистентности рецидивов к повторному облучению.

Наличие общих количественных закономерностей, выявленных in vitro и in vivo, свидетельствует о том, что предложенная нами экспериментальная клеточная модель может быть полезна для разработки новых и совершенствования имеющихся методов в лучевой терапии опухолей.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации докладывались на заседаниях кафедры "Биофизики, радиационной физики и экологии" Московского государственного инженерно-физического института (технического университета), а также на семинарах Отдела молекулярно-биологических и радиоизотопных методов исследования РОНЦ РАМН им. H.H. Блохина. Основные результаты работы были доложены на I Съезде онкологов стран СНГ (Москва, 3-6 декабря, 1996), 3-м Съезде по радиационным

10 исследованиям (Москва, 14-17 октября, 1997), Научных сессиях МИФИ (Москва, январь, 1998, 1999), II Съезде биофизиков России (Москва, 23-27 августа, 1999).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 9 тезисов, 1 статья принята в печать.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, основных выводов и библиографии; материал изложен на 128 стр., включая 11 фотографий, 12 рисунков и 9 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Радиобиология», Сланина, Светлана Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Получены длительно пассируемые популяции потомков фибробластов джунгарского хомячка линии ДХ-ТК", выживших после у-облучения в дозах 10 и 20 Гр (ПОК-Ю и ПОК-20). Показано, что ПОК значительно отличаются от исходных клеток по ряду свойств: морфологии, распределению клеток по числу хромосом, клоногенной способности, радиочувствительности, способности к пост лучевой репопуляции.

2. Установлено, что потомки у-об лученных клеток являются намного более радиоустойчивыми, чем исходные клетки: значение D0 для ПОК в 2-3 раза превышало D0 родительских клеток линии ДХ-ТК". При облучении контактирующих клеток выявлена гетерогенность по радиочувствительности популяций ПОК-10 и ПОК-20.

3. Высокая радиоустойчивость ПОК была подтверждена в условиях независимого от субстрата роста: выживаемость клеток линии ПОК-20 в полужидкой среде после радиационного воздействия в дозе 10 Гр превышала таковую клеток исходной линии ДХ-ТК" в 20 раз. Обнаружено, что облучение в этой дозе не изменяет пролиферативную активность клоногенных клеток ПОК.

4. Показано, что ПОК способны к более быстрой и эффективной репопуляции после у-облучения в дозах 8, 10, 12,5 и 15 Гр, чем клетки родительской линии ДХ-ТК".

5. Не выявлено различий в эффективности восстановления ПОК-20 и клеток ДХ-ТК" от индуцированных облучением потенциально летальных и сублетальных повреждений.

6. Обнаружено, что туморогенная способность необлученных и облученных в дозах 5, 10 и 15 Гр клеток ПОК-20 не различалась как по частоте индукции опухолей у хомячков, так и по срокам появления опухолей. В то же время, после предварительного облучения родительских клеток в дозе 15 Гр, их прививаемость снижалась на 70% при увеличении латентного периода в 5 раз. Таким образом, в опытах in vivo были подтверждены высокая

109 радиоустойчивость ПОК и их способность к быстрой и эффективной постлучевой репопуляции, выявленные in vitro.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сланина, Светлана Викторовна, 2000 год

1. Алов И.А. Цитофизиология и патология митоза. - М.: Медицина, 1972. - 263с.

2. Альферович A.A., Готлиб В.Я., Пелевина И.И. Влияние облучения в малых дозах на выживаемость клеток и их потомков. // Известия РАН. Серия биология. 1995. - Т.2. - С. 137-141.

3. Балмуханов С.Б., Ефимов М.Л. Радиочувствительность опухолей в эксперименте. Алма-Ата: Наука, 1971. - 170 с.

4. Барамия М.Г. Канцерогенез, старение и продолжительность жизни: потенциал трансформированных клеток и торможение старения (гипотеза). // Успехи современной биологии. 1997. - Т.118, вып.4. - С.421-439

5. Биологические основы лучевой терапии опухолей. / С.П. Ярмоненко, A.A. Вайнсон, Г.С. Календо, Ю.И. Рампан. М.: Медицина, 1976. - 368 с.

6. Выживаемость облученных клеток млекопитающих и репарация ДНК. / И.И. Пелевина, A.C. Саенко, В.Я. Готлиб, Б.И. Сынзыныс. М: Энергоатомиздат, 1985,- 120 с.

7. Готлиб В.Я., Тапонайнен Н.Я., Пелевина И.И. Длительное существующие повреждения ДНК и выживаемость клеток млекопитающих. // Радиобиология. 1985. - T.XXV, вып.4. - С.435-443.

8. Деденков А.Н., Пелевина И.И., Саенко A.C. Прогнозирование реакции опухолей на лучевую и лекарственную терапию. М.: Медицина, 1987. -160с.

9. Дубинин Н.П. Нерешенные вопросы современной молекулярной теории мутаций // Молекулярные механизмы генетических процессов. М.: Наука, 1972. - С.5-35.

10. Ю.Ефимов М.Л. Некоторые аспекты радиочувствительности опухолей (экспериментальное исследование): Диссертация. Алма-Ата, 1967.

11. П.Какпакова E.C., Массино Ю.С. Получение и характеристика линии клеток джунгарского хомячка (ДХ-ТК"), резистентной к 5-бромдезоксиуридину. // Генетика. 1978. - Т. 14, вып. 11 - С.2025-2028.

12. Календо Г.С. Межклеточные взаимодействия и популяционный уровень защиты. // Медицинская радиология. 1975. - Т.1. - С.28-33.

13. Календо Г.С. Может ли пострадиационное слияние клеток быть фактором защиты клеточной популяции? // Радиобиология. Т.ЗЗ, Вып.1. - 1993. -С.76-80.

14. Календо Г.С. Системная защитная реакция популяции опухолевых клеток на облучение в больших дозах. // Радиационная биология. Радиоэкология. -1997. Т.37, вып.4. - С.522-525.

15. Календо Г.С., Демидова Н.И. Кинетика образования поликарионов в культуре клеток HeLa после облучения в дозах 5 и10 Гр. // Радиационная биология. Радиоэкология. -1994. Т.34, вып.1. - С.94-99.

16. Кальман Р.Ф., Тэпли Н. Чувствительность к облучению и характер восстановления спонтанных и изологично трансплантированных опухолей мышей. Труды 8 Международного противоракового конгресса. М., 1963. -Т.4. - С. 166-169.

17. Клиническая радиобиология. / С.П. Ярмоненко, А.Г. Коноплянников, A.A. Вайнсон. М.: Медицина, 1992. - 320 с.

18. Клонально-селекционная концепция опухолевого роста. / Ю.Б. Бахтин, В.Г. Пинчук, И.Н. Швембергер, З.А. Бутенко. Киев: Наукова Думка, 1987. -215 с.

19. Клональный анализ независимости размножения опухолевых клеток от субстрата. / A.A. Ставровская, Т.П. Стромская, P.M. Бродская, Ю.М. Васильев // Генетика. 1982. - Т. 18, вып.З. - С.434-440.

20. Козлова A.B. Лучевая терапия злокачественых опухолей. М.: Медицина, 1971.-351 с.

21. Культура животных клеток. Методы: Пер. с англ. / Д. Конки, Э. Эрба и др.; под ред. Р. Фрешни. М.: Мир, 1989. - 333 с.

22. Лобко Г.Н., Порубова Г.М. Резистентность опухолей: Генетические аспекты. Минск: Наука и техника, 1989. - 143 с.

23. Лушников Е.Ф. Лучевой патоморфоз опухолей человека. М.: Медицина,1977.- 328 с.

24. Марков Г.Г. Исследования приобретенной радиорезистентности асцитной опухоли Эр лиха. Труды 8 Международного противоракового конгресса. М., 1963.-Т.4.-С.112-113.

25. Некоторые аспекты биологического действия малых доз радиации. / В.Я. Готлиб, И.И. Пелевина, Е.Ф. Конопля и др. // Радиобиология. 1991. - Т.31, вып.З.-С.318-32526.0батуров Г.М. Биофизические модели радиобиологических эффектов. М:

26. Энергоатомиздат, 1987. 152 с. 27.0када Ш. Радиационная биохимия клетки: Пер. с англ. / Под ред. Ю.Б. Кудряшова, А.Г. Тарасенко. - М.: Мир, 1974. - 407 с.

27. Пелевина И.И., Афанасьев Г.Г., Готлиб В.Я. Клеточные факторы реакции опухолей на облучение и химиотерапевтические воздействия. М.: Наука,1978.-304 с.

28. Повреждения ДНК, их репарация и апоптоз в отдаленных поколениях клеток L5178Y(R). / Г.Г. Афанасьев, Т. Иваненко, М. Крушевский, И.И. Пелевина // Цитология 1997. Т.39, вып.8. - С.740—746.

29. Пролиферативная активность, синтез ДНК и репродуктивная гибель ближайших и отдаленных потомков облученных клеток / Н.Я. Тапонайнен, В.Я. Готлиб, A.A. Конрадов, И.И. Пелевина // Радиобиология. 1987. -T.XXVII, вып.1. - С.30-36

30. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: Вышэйш. школа, 1967. 328 с.

31. Роль межклеточных контактов в радиочувствительности клеток культуры HeLa. / Г.С. Календо, В.А. Журбицкая, Н.П. Винская, Г.Р. Восканян // Радиобиология. 1975. - Т. 15, вып.З. - С.348-355.

32. Свойства потомков облученных клеток. / И.И. Пелевина, В.Я. Готлиб, О.В. Кудряшова и др. // Цитология. 1998. - Т.40, вып.5. - С.467-477.

33. Сравнение закономерностей отдаленной гибели клеток после воздействия генотоксических агентов. / В.Я. Готлиб, A.M. Серебряный, С.Б. Черникова и др. // Цитология. 1996. - Т.38, вып.9. - С.974-982

34. Тапонайнен Н.Я., Готлиб В.Я., Пелевина И.И. Чувствительность к воздействиям ингибиторов пострадиационной репарации и повторного облучения потомков облученных клеток. // Радиобиология. 1986. - Т.26, вып.6. - С.755-760.

35. Тапонайнен Н.Я. Нерепарированные повреждения ДНК в потомках облученных клеток млекопитающих: Автореферат дис. канд. биол. наук. Л., 1987.-23 с.

36. Урбах В. Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975. - 295 с.

37. Урываева И.В. Полиплоидизирующие методы и биологический смысл полиплоидии в клетках печени. // Цитология. 1979. - Т. 12. - С. 1427-1437.

38. Хансон К.П., Комар В.Е. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток. М: Энергоатомиздат, 1985. - 152 с.

39. Эммануэль Н.М., Евсеенко Л.С. Количественные основы клинической онкологии. М.: Медицина, 1976. - 264 с.

40. Марков Г.Г. Изучивания върху придобитата лъчерезистентность на туморите. I. Получаване на подлинии от асцитная карциномы на Ерлих с повышена лъчеустойчивость. // Известия института биологии. Бълг. АН. -1961.-Т.П.-С.301-311.

41. A mammalian cell cycle checkpoint pathway utilizing p53 and GADD45 is defective in ataxia-telengiectasia / M.B. Kastan, Q. Zhan, W.S. El-Deiry et al. // Cell. 1992. - Vol.71. - P.587-597.

42. Alper T., Mothersili C.B., Seymour C.B. Lethal mutations attributable to misrepair of Q-lesions // International Journal of Radiation Biology. 1988. -Vol.54. - P.525-530.

43. Alpha-particle-induced chromosomal instability in human bone marrow cells / M.A. Karhim, S.A. Lorimore, M.D. Hepburn et al. // Lancet. 1994. - Vol.344. -P.987-988.

44. Alpha-particle-induced p53 protein expression in a rat lung epithelial cell strain./ A.B. Hickman, R.J. Jaramillo, I.F. Lechner, N.F. Johnson // Cancer Research. 94.- Vol.54. P.5797-5800.

45. Bailly M., Bertrand S., Dore J. F. Increased spontaneous mutation rates and prevalence of karyotype abnormalities in highly metastatic human meanoma cell lines. // Melanoma Research. 1993. - Vol.3. - P.51-61.

46. Balmukhanov S. B., Yefimov M. L., Kleinbock T. S. Acquired radioresistance of Tumor cells. //Nature 1967. - Vol.216. - P.709-711.

47. Born R., Trott K. R. Clonogenicity of the progeny of surviving cells after irradiation. // International Journal of Radiation Biology. 1988. - Vol.53, no.2 -P.319-330.

48. Brown D. C., Trott K. R. Clonal heterogeneity in the progeny of HeLa cells which survive X-irradiation. // International Journal of Radiation Biology. 1994. -Vol.66. -P.151-155.

49. Cancer of the prostate: results of radiotherapy. Multicenter study. / Y.M. Allain, M. Bolla, J. Douchez et al. // Bulletin du Cancer. 1985. - Vol.72, no.6. -P.559-567.

50. Cell population kinetics of the rhabdomyosarcoma R1H of the rat after single doses of X-rays / H. Jung, H.J. Kruger, I. Brammer et al. // International Journal of Radiation Biology. 1990. - Vol.57, no.3. - P.567-589.

51. Chan G.L., Little J.B. Induction of ouabain-resistant mutations in C3H 10T1/2 mouse cells by ultraviolet light. // Proceedings of the National Academy of Sciences of USA. 1978. - Vol.75. - P.3363-3366.

52. Chang W.P., Little J.B. Delayed reproductive death as a dominant phenotype in cell clones surviving X-irradiation // Carcinogenesis. 1992. - Vol.13, no.6. -P.923-928

53. Chang W.P., Little J.B. Delayed reproductive death in X-irradiated Chinese hamster ovary cells. // International Journal of Radiation Biology. 1991. -Vol.60, no.3.-P.483-496.

54. Chang W.P., Little J.B. Evidence that DNA doubl-strand breaks initiate the phenotype of delayed reproductive death in Chinese hamster ovary cells. // Radiation Research. 1992. - Vol.131. - P.53-59.

55. Chang W.P., Little J.B. Persistently elevated frequency of spontaneous mutation in progeny of CHO clones surviving X-irradiation: association with delayed reproductive death phenotype // Mutation Research. 1992. - Vol.270. - P. 191199.

56. Changes in TCD50 as a measure of clonogen doubling time in irradiated and unirradiated tumors. 7 L. Milas, S. Yamada, N. Hunter et al. // International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 1991. - Vol.21. - P. 1195-1202.

57. Chatterjee A., Hodgkiss R.J., Rojas A. Contribution of lethal mutations to excision assays for tumour cell survival. // Acta Oncologica. 1995. - Vol.34. - P.493-498.

58. Chatterjee A., Rojas A., Hodgkiss R.J. Induction of lethal mutations in experimental tumours after single and fractionated irradiations in vivo. // International Journal of Radiation Biology. 1998,- Vol.74, no.l - P. 119-127.

59. Clonal analisis of delayed kariotipic abnormalities and gene mutations in radiation-induced genetic instability / A.J. Grosovsky, K.K. Parks, C.R. Giver, S.L. Nelson // Molecular and Cellular Biology. 1996. - Vol.16. - P.6252-6262.

60. Clonal chromosomal aberrations and genomic instability in X-irradiated human T-lymphocyte cultures. / K. Holmberg, S. Fait, A. Johannson, B. Lambert. // Mutation Research. 1993. - Vol.286. - P.321-330.

61. Clone size analysis in the study of cell growth following single or during continious irradiation. / A.H.W. Nias, C.W. Gilbert, L.G. Lajtha, S. Lange // International Journal of Radiation Biology. 1965. - Vol.9. - P.275-290.

62. Conger A.D., Luippold H. Studies on the mechanism of acquired radioresistance in cancer. // Cancer Research. 1957. - Vol.17. - P.897.

63. Delayed chromosomal instability in human T-lymphocyte clones exposed to ionizing radiation. / K. Holmberg, A. E. Meijer, G. Auer, B. Lambert. // International Journal of Radiation Biology. 1995. - Vol.68 - P.245-255.

64. Division probability and division delay in diploid Syrian hamster cell following a range of X-ray doses. / G.P. Joshi, W.J. Nelson, S.H. Revell, C.A. Shaw // International Journal of Radiation Biology. 1982. - Vol.41, no.4. - P.443-448.

65. Durand R.E., Sutherland R.M. Effects of intercellular contact on repair of radiation damage. // Experimental Cell Research. 1972. - Vol.71. - P.75-80.

66. Durand R.E., Sutherland R.M. Growth and radiation survival characteristics of V7(1716) Chinese hamster cells: a possible influence of intercellular contact. // Radiation Research. 1973. - Vol.56 - P.513-527.

67. Expression of lethal mutations is suppressed in neoplastically transformed cells and after treatment of normal cells with carcinogens. / C. Mothersill, F. Lyng, S. O'Reilly et al. // Radiation Research. 1996. - Vol.145. - P.714-721.

68. Ferroux R., Regaud C., Samsonow L. Increase of radioresistance of seminal epitelium by small doses of roentgen rays. // Radiophysiology. 1927. - Vol.3. -P.278-296.

69. Fitzek M., Trott K.R. Clonal heterogeneity in delayed decrease of plating efficiency of irradiated HeLa cells. // Radiaton and Enviromental Biophysics. -1993. Vol.32. -P.33-40.

70. Fowler J.F. Potential for increasing the differential response between tumors and normal tissues: can proliferation rate be used? // International Journal of Radiation, Oncology, Biology, Physics. 1986.- Vol.12. - P.641-645.

71. Genomic instability in Chinese hamster cells after exposure to X rays or alpha particles of different mean linear energy transfer. / L. Manti, M. Jamali, K. M. Prise et al. // Radiation Research. 1997. - Vol.147. - P.22-28.

72. Genomic instability induced by ionizing radiation / W.F. Morgan , I.P. Day, M.L. Karlan et al. // Radiation Research. 1996. - Vol.146. - P.247-258.

73. Gorgojo L., Little J.B. Expression of lethal mutations in progeny of irradiated mammalian cells. // International Journal of Radiation Biology. 1989. - Vol.55, no.4. - P.619-630.

74. Grosovsky A.J. Radiation-induced mutations in irradiated DNA // Proceedings of the National Academy of Sciences of USA. 1999. - Vol.96. - P.5346-5347.

75. Harper K., Lorimore S. A., Wright E. G. Delayed appearance of radiation-induced mutations at the hprt locus in murine haemopoietic cells. // Experimental Hematology. 1997. - Vol.16. - P.263-269.

76. Hermans A. F., Barendsen G. W. Changes of all proliferation characteristics in a rat rhabdomyosarcoma before and after x-radiation. // European Journal of Cancer. -1969. Vol.5. - P. 173-189.

77. Hopwood L.E., Tolmach L.J. Manifestation of damage from ionizing radiation in mammalian cells in the postirradiation generation. In: Advances in Radiation Biology. Academic Press, 1979. - Vol.8. - P.317-362.

78. Horikawa M., Dolida I., Sugahara T. Cytogenetic studies on radioresistant cells derived from mouse strain L cells in cell culture. // Radiation Research. 1964. -Vol.22. - P.478-488.

79. Hornsey S. The relationship between total dose, number of fractions and fraction size in the response of malignant melanoma in patients. // British Journal of Radiology. 1978 - Vol.51 - P.905-909.

80. Hurwitz C., Tolmach L.J. Tame-lapse cinematographic studies of X-irradiated HeLa cells. I. Cells progression and cell disintegration. // Biophysical Journal. -1969.-Vol.9. P.607-633.

81. Increased mutation rate at the hprt locus accompanies microsatellite instability in colon cancer. / J.R. Eshleman, E.Z. Lang, G.K. Bowerfind et al. // Oncogene. -1995. Vol.10. -P.33-37.

82. Jaffe D.R., Williamson J.F., Bowden G.T. Ionizing radiation enhances malignant progression of mouse skin tumors. // Carcinogenesis. 1987. - Vol.8. - P. 17531755.

83. Jamali M., Trott K. R. Persistent increase in the rates of apoptosis and dicentric chromosomes in surviving V79 cells after X-irradiation. // International Journal of Radiation Biology. 1996. - Vol.70, no.6. - P.705-709.

84. Jamali M., and Trott K. R. Persistent micronucleus frequency in the progeny of irradiated Chinese hamster cells. // International Journal of Radiation Biology.1996.-Vol.69.-P.301-307.

85. Kadhim M.A., Marsden S.J., Wright E.G. Radiation-induced chromosomal instability in human fibroblasts: temporal effects and the influence of radiation quality // International Journal of Radiation Biology. 1998. - Vol.73, no.2. -P.143-148.

86. Kennedy A.R. Is there a critical target gene for the first step in carcinogenesis? // Environmental Health Perspectives. 1991. - Vol.93. - P. 199-203.

87. Kennedy A.R., Cairns J., Little J.B. Timing of the steps in transformation of C3H 10T 1/2 cells by X-irradiation. //Nature. 1984. - Vol.307 - P.85-86.

88. Kennedy A.R., Little J.B. Evidence that a second event in X-ray-induced oncogenic transformation in vitro occurs during cellular proliferation. // Radiation Research. 1984. - Vol.99. - P.228-248.

89. Kennedy A.R., Little J.B. Investigation of the mechanism for enhancement of radiation transformation in vitro by 12 O - tetradecanoylphorbol - 13 - acetate. // Carcinogenesis. - 1980. - Vol.1. - P.1039-1047.

90. Kronenberg A. Radiation-induced genomic instability. // International Journal of Radiation Biology. 1994. - Vol.66, no.5. - P.603-609.

91. Kwok T.T., Sutherland R.M. The influence of cell-cell contact on radiosensitivity of human squamous carcinoma cells. // Radiation Research. -1991. Vol.126.-P.52-57.

92. Latent expression of p53 mutations and radiation-induced mammary cancer. / C.S. Selvanayagam, C.M. Davis, M.N. Comforth, R.L. Ullrich. // Cancer Research. 1995. - Vol.55. - P.3310-3317.

93. Lehnert S. Changes in radiosensitivity of V79 cells accompanying growth and cell division. // Radiation Research. 1975. - Vol.63 - P.326-335.

94. Little J.B. Changing views of cellular radiosensitivity. // Radiation Research. -1994. Vol.140. -P.299-311.

95. Little J.B. Radiation-induced genomic instability // International Journal of Radiation Biology. 1998. - Vol.74, no.6. - P.663-671.

96. Little J.B. Repair of sub-lethal and potentially lethal radiation damage in plateu phase cultures of human cells. // Nature. 1969. - Vol.224 - P.804-806.

97. Little J.B., Gorgojo L., Vetrovs H. Delayed appearance of lethal and specific gene mutations in irradiated mammalian cells. // International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 1990 - Vol.19. - P. 1425-1429.

98. Loeb L.A. Mutator phenotype may be required for multistage carcinogenesis. // Cancer Research. 1991. - Vol.51. - P.3075-3079.

99. Maity A., McKenna G.W., Muschel R.J. The molecular basis for cell cycle delays following ionizing radiation: a review. // Radiotherapy and Oncology. -1994.-Vol.31.-P.l-13.

100. Manifestations and mechanisms of radiation-induced genomic instability in V-79 Chinese hamster cells. / K.R. Trott, M. Jamali, L. Manti, A. Teibe. // International Journal of Radiation Biology. 1998. - Vol.74, no.6. - P.787-791.

101. Marder B.A., Morgan W.F. Delayed chromosomal instability induced by DNA damage. // Molecular Cell Biology. 1993. - Vol.3. - P.6667-6677.

102. McMillan T.J., Peacock J.H. Molecular determinants of radiosensitivity in mammalian cells. // International Journal of Radiation Biology. 1994. - Vol.65. -P.49-55.

103. Mendonca M.S., Redpath J.L. Isolation of human cell hybrids (HeLa x skin fibroblast) expressing a radiation-induced tumour-associated antigen. // British Journal of Cancer. 1989. - Vol.60. - P.324-326.

104. Mitchell J.B., Glatstein E. Radiation Oncology: past achievements and ondoing controversies. // Cancer Research. 1991. - Vol.51. - P.5065-5073.

105. Modrich P. Mismatch repair, genetic stability, and cancer. // Science. 1994. -Vol.266.-P. 1959-1960.

106. Morgan W.F., Murnane J.P. A role for genomic instability in cellular radioresistance? // Cancer and Metastasis Reviews. 1995. - Vol.14, no.l. - P.49-58.

107. Mothersill C., Seymour C.B. Survival of human epithelial cells irradiated with cobalt 60 as microcolonies or single cells. // International Journal of Radiation Biology. 1997. - Vol.72. - P.597-606.

108. Mothersill C., Seymour C.B. The influence of lethal mutations on the quantification of radiation transformation frequencies. // International Journal of Radiation Biology. 1987. - Vol.51. - P.723-729.

109. Mulcahy R.T., Gould M.N., Clifton K.H. Radiogenic initiation of thyroid cancer: a common cellular event. // International Journal of Radiation Biology and Related Studies in Physics, Chemistry and Medicine. 1984. - Vol.45. - P.419-426.

110. Murnane J.P. Role of induced genetic instability in the mutagenic effects of chemicals and radiation // Mutation Research. 1996. - Vol.367. - P.l 1-23.

111. Murnane J.P. The role of recombinational hotspots in genome instability in mammalian cells: a historical perspective. // Cancer and Metastasis Reviews. -1990.-Vol.12.-P.577-581.

112. Murray A.W. The genetics of cell cycle checkpoints. // Current Opinion in Genetics and Development. 1995. - Vol.5. - P.5-11.

113. Mutation rate of normal and malignant human lymphocytes. / R. Seshadri, R.J. Kutlaca, K. Trainor et al. // Cancer Research. 1987. - Vol.47. - P.407-409.

114. Mutator phenotypes in human colorectal carcinoma cell lines. / N.P. Bhattacharyya, A. Skandalis, A. Ganesh et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences of USA. 1994. - Vol.91. - P.6319-6323.

115. Nice C.M. Radioresistance in limphosarcoma. 8th internat. Congr. Radiol. Mexico, 1956. P.248-249.

116. No association between p53 status and a-particle-induced chromosomal instability in human lymphoblastoid cells / M.A. Kadhim, C.A. Walker, M.A.

117. Plumb, E.G. Wright. // International Journal of Radiation Biology. 1996. -Vol.69. -P.167-174.

118. Nowell P.C. The clonal evolution of tumor cell progression for multistage carcinogenesis. // Science. 1976. - Vol.194. - P.23-28.

119. Olive P.L., Durand R.E. Drug and radiation resistance in spheroids: cell contact and kinetics. // Cancer and Metastasis Reviews. 1994. - Vol.13. - P. 121138.

120. O'Reilly S., Mothersill C., Seymour C. B. Postirradiation expression of lethal mutations in an immortalized human keratinocyte cell line. // International Journal of Radiation Biology. 1994. - Vol.66. - P.77-83.

121. Overexpression of P-glycoprotein in mammalian tumor cell lines after fractionated X-irradiation in vitro. / B.T. Hill, K. Deuchars, L.K. Hosking et al. // Journal of National Cancer Institute. 1990. - Vol.82, no.7. - P.607-612.

122. Pampfer, Streffer C. Increased chromosome aberration levels in cells from mouse fetuses after zygote X-irradiation. // International Journal of Radiation Biology. 1989. - Vol.55. - P.85-92.

123. Paquette B., Little J.B. In vivo enhancement of genomic instability in minisatellite sequences of mouse C3H/10T1/2 cells transformed in vivo by X-rays. // Cancer Research. 1994. - Vol.54. - P.3173-3178.

124. Pearson A.E. Serial irradiation of mouse tumours: changes in radiosensitivity. // British Journal of Cancer. 1959. - Vol.13. - P.477-485.

125. Peters L.J., Ang K.K., Thames H.D.Jr. Accelerated fractionation in the radiation treatment of head and neck cancer. // Acta Radiológica. 1988. - Vol.27. - P.185-194.

126. Pigott K, Dische S., Saunders M.I. Where exactly does failure occur after radiation in head and neck cancer? // Radiotherapy and Oncology. 1995. -Vol.37, no. 1 - P. 17-19.

127. Plating efficiency as a function of time post-irradiation: evidence for the delayed expression of lethal mutations. / M.S. Mendonca, W. Kurohara, R. Antoniono, J.L. Redpath. // Radiation Research. 1989. - Vol.119. - P.389-393.

128. Powell S.N., Abraham E.H. The biology of radioresistance: similarities and interactions with drug resistance. // Cytotechnology. 1993. - Vol.12. - P.325-345.

129. Puck T.T., Marcus P.I. Action of X-rays on mammalian cells. // Jornal of Experimental Medicine. 1956. - Vol.103. - P.653-666.

130. Quiet C.A., Weichselbaum R.R., Grdina D.J. Variation in radiation sensitivity during the cell cycle of two human squamous cell carcinomas. // International Journal of Radiation, Oncology, Biology, Physics. 1991. - Vol.20. - P.733-738.

131. Radiation induced genomic instability and persisting oxidative stress in primary bone marrow cultures. / S.M. Clutton, K.M.S. Townsend, C. Walker et al. // Carcinogenesis. 1996. - Vol.17. - P. 1633-1639.

132. Radiation therapy for early stage (T1-T2) sarcomatoid carcinoma of true vocal cords: outcomes and patterns of failure. / M.T. Ballo, A.S. Garden, A.K. El-Naggar et al. // Laryngoscope. 1998. - Vol.108, no.5. - P.760-763.

133. Radiation therapy for giant cell tumor of bone. / C.J.Jr. Bennett, R.B.Jr. Marcus, R.R. Million, W.F. Enneking. // International Journal of Radiation, Oncology, Biology, Physics. 1993. - Vol.26, no.2 - P.299-304

134. Radiation-induced genomic instability: delayed cytogenetic aberrations and apoptosis in primary human bone marrow cells. / M.A. Kadhim, S.A. Lorimore, K.M. Townsend et al. // International Journal of Radiation Biology. 1995. -Vol.67.-P.287-293.

135. Radiation-induced genomic instability: delayed mutagenic and cytogenetic effects of X rays and alpha particles. / J. B. Little, H. Nagasawa, T. Pfenning, H. Vetrovs // Radiation Research. 1997. - Vol.148. - P299-307.

136. Ramsamooj P., Notario V., Dritschilo A. Enhanced expression of calreticulin in the nucleus of radioresistant squamous carcinoma cells in response to ionising radiation. // Cancer Ressearch. 1995. - Vol.55. - P.3016-3021.

137. Relationship berween X-ray exposure and malignant transformation in C3N 10T1/2 cells./ A.R Kenedy, M. Fox, G. Murphy, J.B. Little. // Proceedings of the National Academy of Sciences of USA. 1980. - Vol.77. - P.7262-7266.

138. Relationship between x-ray exposure and malignant transformation in C3H 10T 1/2 cells. / A.R. Kennedy, M. Fox, G. Murphy, J.B. Little // Proceedings of the National Academy of Sciences of USA. 1984. - Vol.77 - P.7262-7266.

139. Revesz L., Norman U., Richards B. Variation of radiosensitivity in tumour cell populations. // Svedish Cancer Soc., Yearbook. 1963. - Vol.4. - P.360-362.

140. Russell J., Wheldon T.E., Stanton A. Radioresistant variant derived from a human neuroblastoma cell line is less prone to radiation-induced apoptosis. // Cancer Research. 1995. - Vol.55, no.21. - P.4915-4921.

141. Sabatier L., Dutrillaux B., Martin M.B. Chromosomal instability. // Nature. -1992.-Vol.357.-P.548.

142. Sasaki H. Cell killing and division delay in asynchronous and synchronized HeLa cells irradiated with alpha paticles or X rays. // Radiation Research. 1984. -Vol.99. -P.311-323.

143. Seymour C.B., Mothersill C. All colonies of CHO-K1 cells surviving y-irradiation contain non-viable cells. // Mutation Research. 1992. - Vol.267. -P. 19-30.

144. Seymour C.B., Mothersill C. Lethal mutations, the survival curve shoulder and split-dose recovery. // International Journal of Radiation Biology. 1989 -Vol.56, no.6. -P.999-1010.

145. Seymour C.B., Mothersill C., Alper T. High yields of lethal mutations in somatic mammalian cells that survive ionizing radiation. // International Journal of Radiation Biology. 1986. - Vol.50. - P. 167-179.

146. Sherr C.J. Cancer cell cycles. // Science. 1996. - Vol.274. - P. 1672-1677.

147. Sinclair W.K X-ray-induced heritable damage (small colony formation) in cultured mammalian cells. // Radiation Research. 1964. - Vol.21. - P.584-611.

148. Sinclair W.K. Sensitivity to mitotic delay and stage in the cycle. // Current Topics in Radiation Research. 1972. - Vol.7. - P.323-327.

149. Smith B.D., Haffty B.G. Molecular markers as prognostic factors for local recurrence and radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma. // Radiation Oncology Investigations. 1999. - Vol.7, no.3. - P. 125-144.

150. Specific chromosome instability induced by heavy ions: a step towards transformation of human fibroblasts? / M. B. Martins, L. Sabatier, M. Ricoul et al. // Mutation Research. 1993. - Vol.285. - P.229-237.

151. Spontaneous mutation rates of tumorigenic and nontumongenic Chinese hamster embryo fibroblast cell lines. / D. Kaden, I.K. Gadi, L. Bardwell et al. // Cancer Research. 1989. - Vol.49. - P.3374-3379.

152. Su N.L., Little J.B. Prolonged cell cycle delay in radioresistant human cell lines transfected with activated ras oncogene and/or simian virus T-antigen. // Radiation Research. 1993. - Vol.133. - P.73-79.

153. Suit H. D., Urano M. Repair of sublethal radiation injury in the hypoxic cells of a C3H mouse mammary carcinoma. // Radiation Research. 1969. - Vol.37. -P.423-434.

154. Suit H.D. Radiation biology: the conceptual and practical impact on radiation therapy. // Radiation Research. 1983. - Vol.94. - P. 10-40.

155. Suit H.D., Howes A.E., Hunter N. Dependence of response of a C3H mammary carcinoma to fractionated irradiation in fraction number and intertreatment interval. // Radiation Research. 1977. - Vol.72. - P.440-454.

156. Tarnawski R., Kummermehr J., Trott K.R. The radiosensitivity of recurrent clones of an irradiated murine squamous cell carcinoma in the in vitro megacolony system. // Radiotherapy and Oncology. 1998. - Vol.46, no.2. - P.209-214.

157. Terasima R., Tolmach L. J. X-ray sensitivity and DNA synthesis in synchronous populations of HeLa cells. // Science. 1963. - Vol.140. - P.490-492.

158. The accelerated repopulation during the fractionated irradiation of a murine fibrosarcoma, FSa-II, and linear quadratic model. / Y. Abe, L. Kenton, M. Urano,

159. C. G. Willet. // International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. -1991.-Vol.21. -P.1529-1534.

160. The effect of combined modality therapy on local control and survival. / V.T. De Vita, M. Lippman, S.M. Hubbard et al. // International Journal of radiation Oncology, Biology, Physics . 1986. - Vol.12. - P.487-501.

161. The evolution of chromosomal instability in Chinese hamster cells: a changing picture? / B. Ponnaiya, C.L. Limoli, J. Corcoran et al. // International Journal of Radiation Biology. 1998. - Vol.74, no.6. - P.765-770.

162. The human mutator gene homolog MSH2 and its association with hereditary nonpolyposis colon cancer. / R. Fishel, M.K. Lescoe, M.R.S. Rao et al. // Cell. -1993.- Vol.75. -P.1027-1038.

163. The influence of local tumor ulceration on the effectiveness of endocavitary radiation for patients with early rectal carcinoma. / W. P. Reed, P. A. Cataldo, J. L. Garb et al. // Cancer. 1995. - Vol.76. - P.967-971.

164. Thompson L.H., Suit H.D. Proliferation kinetics of X-irradiated mous L cells studied with time-lapse photography. II // International Journal of Radiation Biology. 1969. - Vol.15. - P.347-362

165. Todd P. Defective mammalian cells isolated from X-irradiated cultures. // Mutation Research 1968. - Vol.5. - P. 173-183

166. Transmission of chromosomal aberrations and genomic instability after plutonium a -particle irradiation. / M.A. Kadhim, D.A. McDonald, D.T. Goodhead et al. // Nature. 1992. - Vol.355. - P.738-740.

167. Trott K.R., Hug O. Intraclonal recovery of division probability in pedigrees of single X-irradiated mammalian cells. // International Journal of Radiation Biology. 1970.-Vol.17.-P.483-486.

168. Tubiana M. L.H. Gray medal lecture: cell kinetics and radiation oncology. // International Journal of Radiation, Oncology, Biology, Physics. 1982.- Vol.8. -P.1471-1489.

169. Tubiana M. The combination of radiotherapy and chemotherapy a review. // International Journal of Radiation Biology. 1989. - Vol.55, no.4. - P.497-511.

170. Ullrich R.L., Ponnaiya B. Radiation-induced instability and its relation to radiation carcinogenesis. // International Journal of Radiation Biology. 1998. -Vol.74, no.6. - P.747-754.

171. Van Peperzeel H.A. Effects of single doses of radiation on lung metastases in man and experimental animals. // European Journal of Cancer. 1972. - Vol.8. -P.665-675.

172. West C.M., Keng P.C., Sutherland R.M. Growth phase related variation in the radiation sensitivity of human colon adenocarcinoma cells. // International Journal of Radiation Oncology, Biology and Physics. 1988. - Vol.14. - P.1213-1219.

173. Westra A., Barendsen G.W. Proliferation characteristics of cultured mammalian cells after irradiation with sparsely and densely ionizing radiation. // International Journal of Radiation Biology. 1966,- Vol.11. - P.477-485

174. Withers H.R., Taylor J.M.G., Maciejewski B. The hazard of accelerated tumor clonogen repopulation during radiotherapy. // Acta Oncologica. 1988. -Vol.27-P.131-146.