Пути повышения эффективности ультразвукового воздействия для выделения коклюшных антигенов и конструирования эритроцитарных диагностикумов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Литвинова, Наталья Константиновна

• Литвинова, Наталья Константиновна
• кандидат биологических наук
• 1983

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Литвинова, Наталья Константиновна

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ ПЕРВАЯ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ УЛЬТРАЗВУКОВЫХ ВОЛН

НА МИКРООРГАНИЗМЫ

ГЛАВА П. ПРИМЕНЕНИЕ УЛЬТРАЗВУКА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ

АНТИГЕННЫХ СУБСТАНЦИИ КОКЛШШХ БАКТЕРИЙ И КОНСТРУИРОВАНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ

ЧАСТЬ ВТОРАЯ. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА Ш. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Исследование свойств коклюшных бактерий

3.2. Методы получения коклюшных антигенов

3.3. Методы изучения ультразвуковых коклюшных антигенов

3.4. Изучение химического состава антигенов

3.5. Электронно-микроскопические исследования коклюшных бактерий

3.6. Электронно-микроскопические исследования эритроцитов

3.7. Исследование электрофоретической подвижности эритроцитов

3.8. Методы вариационно-статистического анализа

ГЛАВА 1У. ИЗУЧЕНИЕ УСЛОВИЙ ВЫДЕЛЕНИЯ КОКЛШНЫХ

АНТИГЕННЫХ КОМПЛЕКСОВ ПРИ НИЗКОЧАСТОТНОМ УЛЬТРАЗВУКОВОМ ВОЗДЕЙСТВИИ

4.1. Характеристика ультразвуковых коклюшных дезинтегратов и антигенных комплексов

4.2. Электронно-микроскопическое исследование коклюшных бактерий

4.3. Изучение химического состава ультразвуковых коклюшных антигенных комплексов

4.4. Некоторые пути совершенствования режима ультразвуковой дезинтеграции для выделения коклюшных антигенов

- 3 - стр.

4.5» Изучение особенностей биологического эффекта ультразвука при фракционированном воздействии

ГЛАВА У* КОНСТРУИРОВАНИЕ УЛЬТРАЗВУКОВЫХ КОКЛШНЫХ

АНТИГЕННЫХ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ

5.1. Определение оптимального режима сенсибилизации эритроцитов ультразвуковыми коклюшными антигенами

5.2. Изучение возможности повышения сорбционных свойств эритроцитов при ультразвуковом воздействии

5.3. Изучение некоторых биофизических характеристик мембран эритроцитов при обработке их ультразвуком в различных режимах и в сочетании с танином

5.4. Электронно-микроскопическое изучение морфологии эритроцитов

5.5. Изучение срока хранения ультразвуковых коклюшных антигенных эритроцитарных диагностикумов

5.6. Применение ультразвуковых коклшных антигенных эритроцитарных диагностикумов для исследования сыворотки крови детей

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Пути повышения эффективности ультразвукового воздействия для выделения коклюшных антигенов и конструирования эритроцитарных диагностикумов»

Диапазон биологических эффектов ультразвука и широкое применение его в медицине определяет необходимость изучения особенностей механизма действия этого физического фактора, в частности, значения механического, термического, физико-химического компонентов, а также применяемых частот, интенсивностей, технических и методических приемов воздействия (И.Е. Эльпинер, 1973;Л.Р#Гав-рилов с соавт., 1978,1980; В.Б. Акопян, 1979,1981; А.П. Сарвазян, 1981,1982; Fyborg, 1978; Fry, 1979).

Для исследования закономерностей биологического действия ультразвука микроорганизмы являются одной из доступных и удобных моделей, Интерес к применению данного физического фактора в микробиологических исследованиях обусловлен возможностью варьировать энергетические параметры воздействия на объект, получая в результате различные биологические эффекты: от стимуляции процессов жизнедеятельности клетки до ее разрушения (Е.П. Москаленко с соавт., 1975,1979,1981; Б.А. Фихте с соавт., 1972,1978).

Одним из перспективных направлений практического использования ультразвука в микробиологических исследованиях является дезинтеграция микробных клеток с целью выделения наиболее полного спектра свободных от посторонних химических примесей иммунологи-чески активных субстанций, в том числе коклюшных бактерий (М.С. Захарова с соавт., 1962,1972,1978; Р.П. Чупринина, 1970; И.Я. Мо-шиашвили, 1970; И.А. Лапаева с соавт., 1972,1977; A.A. Гуреева с соавт., 1978; Е.П. Москаленко с соавт., 1976,1979,1981; Sato, 1976, 1977).

При реализации процесса дезинтеграции перед исследователем стоят сложные и противоречивые задачи. С одной стороны, высокая устойчивость микроорганизмов к внешним воздействиям требует приложения значительных сил (~ 10^ дин/см^) в зоне разрушения

Г.А. Гуревич с соавт., 1972,1978). С другой стороны, необходимо выделить полноценные и биологически активные субстанции микробной клетки. Решение этой задачи находится в тесной связи с изучением новых аспектов действия ультразвука на микроорганизмы и разработкой методов щадящего и высокоэффективного воздействия.

Разработка оптимальных методов дезинтеграции осуществима при вариации физических параметров воздействия с учетом особенностей механизма биологического действия ультразвука»

Применение высокоинтенсивного ультразвука приводит к мгновенным структурным нарушениями в объекте, поражая регуляторные связи биосистемы. Поэтому механизм биологического действия ультразвука данных параметров определяется, главным образом, физическими факторами, такими как кавитационные эффекты и сопровождавдие их физико-химические явления (Г. Чедц, 1977; James, I971).

Изучение механизма действия ультразвука малой интенсивности на микроорганизмы является важной биологической проблемой. Выявление и использование закономерностей ответа биосистемы на ультразвук этих параметров может представляться резервом для разработки новых методов дезинтеграции клеток, обеспечивающих получение нативных антигенов.

В микробиологических исследованиях широко используют ультразвуковые уотановки высокой частоты. Применение низкочастотной ультразвуковой аппаратуры для дезинтеграции микроорганизмов является более оправданным и перспективным, так как позволяет значительно уменьшить акустическую мощность установки, необходимую для достижения кавитационных эффектов, снизить энергозатраты, увеличить КПД. При этом трансформация акустической энергии в тепловую на два и более порядка меньше, по сравнению с высокочастотными установками. Это обстоятельство существенно для оптимизации температурного режима и предотвращения инактивации выделяемых антигенных субстанций микробной клетки.

Значительные преимущества низкочастотного ультразвука побудили использовать в исследованиях именно эти частотные параметры воздействия.

Работа проведена в соответствии с планом научных исследований Ростовского ордена Дружбы народов медицинского института по проблеме № 20 "Общая и прикладная иммунология" и целевым заданием Государственного комитета по науке и технике Совета Министров СССР № 175 от 26.05.1975 г. "Исследование процессов дезинтеграции микроорганизмов в поле упругих ультразвуковых колебаний".

Исследования посвящены решению актуальной проблемы - расширению арсенала методов ультразвукового воздействия в микробиологии и прикладной иммунологии и проведены в двух основных направлениях:

- изучение особенностей дезинтегрирунцего низкочастотного ультразвукового воздействия на микроорганизмы на модели возбудителя коклюша;

- определение возможности и перспектив использования ультразвука при конструировании антигенных эритроцитарных диагностических препаратов.

Цель работы - обоснование применения новых методов высокоэффективного низкочастотного ультразвукового воздействия на коклюшные бактерии и формалинизированные эритроциты барана для выделения иммунологически активных антигенных комплексов микробной клетки и конструирования эритроцитарных диагностикумов.

Для достижения указанной цели было необходимо решение следующих основных задач:

1) разработать эффективные методы низкочастотной ультразвуковой дезинтеграции на модели коклюшных бактерий, обеспечивающие выделение иммунологически активных антигенных комплексов;

2) исследовать особенности механизма действия низкочастотного ультразвука на формалинизированные эритроциты барана с целью повышения активности гемосорбента;

3) разработать новый метод конструирования коклюшных антигенных эритроцитарных диагностикумов при использовании низкочастотного ультразвука для повышения активности сорбента и оптимизации условий гемосенсибилизации.

Исследования проведены при использовании дезинтегратора биологического ультразвукового ДБУ-01 (частота 44 кГц, амплитуда колебаний волновода дезинтегратора 10-100 мкм), специально предназначенного для микробиологических исследований.

Научная новизна работы заключается в выявлении и изучении новых аспектов действия ультразвука на микроорганизмы и формалини-зированные эритроциты барана.

Впервые разработанный способ дезинтеграции микроорганизмов с применением в процессе ультразвукового воздействия циркуляторной системы (решение ВНИИГПЗ о выдаче авторского свидетельства на изобретение № 2798202/13, 1981 г.) позволяет существенно снизить нежелательные инактивирущие эффекты действия ультразвука на выделяемые из коклюшных бактерий антигенные комплексы. Предлагаемый методический подход обеспечивает моделирование условий дезинтеграции, представляющих практическую возможность дополнительного выделения активных антигенов в результате последовательного трехкратного ультразвукового воздействия с поэтапным извлечением бактериальных антигенов.

Определена возможность применения новых схем ультразвуковой дезинтеграции при использовании биологических эффектов низких (20 мкм) амплитуд воздействия.

Установлена высокая сенситивная активность коклюшных антигенных комплексов, полученных при применении разработанных методик ультразвуковой дезинтеграции. Впервые выявлена теоретически обоснованная возможность применения низкочастотного ультразвука для повышения сорбционной активности формалинизированных эритроцитов барана (рационализаторское предложение № 257, РОДНМИ, 1976г.). Исследование особенностей механизма воздействия позволило установить зависимость между характером морфологических изменений клеток сорбента (по данным электронной микроскопии), их электро-форетической подвижностью и увеличением сорбционной активности по отношению к ультразвуковым коклюшным антигенам.

Впервые разработан принципиально новый способ конструирования эритроцитарных антигенных диагностических препаратов (решение ВНИИШЭ о выдаче авторского свидетельства на изобретение № 3358302/13, 1982 г.) при использовании низкочастотного ультразвука для повышения активности сорбента и оптимизации процесса гемосенсибилизации.

Практическая ценность работы обусловлена разработкой и внедрением новых эффективных методов ультразвукового воздействия. Способ дезинтеграции микроорганизмов (решение ВНИИШЭ о гыдаче авторского свидетельства на изобретение № 2798202/13) обеспечивает возможность значительного повышения эффективности использования бактериальной массы, существенно увеличивает выход активных антигенных субстанций микробной клетки и может найти практическое применение в исследованиях, направленных на выделение и изучение антигенов микроорганизмов с целью их дальнейшего использования при конструировании вакцинных и диагностических препаратов. Способ низкочастотной ультразвуковой дезинтеграции внедрен в научно-исследовательскую работу кафедры микробиологии и вирусологии № 2, лаборатории инфекционной и неинфекционной иммунологии, иммунологического отдела 1ЩИД РОДНМИ (1980,1981 г.г.); кафедры физиологии растений и микробиологии Ростовского ордена Трудового Красного Знамени государственного университета им. М.А. Суслова

1980,1981 г.г.), лаборатории биохимии Ростовского научно-исследовательского института медицинской паразитологии (1980,1981 г.г,).

Способ получения диагностикума (решение ВНИШИЭ о выдаче авторского свидетельства на изобретение № 3358302/13) определяет перспективность, простоту, высокую экономическую эффективность использования низкочастотного ультразвука при конструировании эритроцитарных диагностических препаратов. Ультразвуковые коклюць ные антигенные эритроцитарные диагностикумы апробированы в научно-исследовательской работе производственного отдела Ростовского научно-исследовательского института эпидемиологии, микробиологии и гигиены (1981,1982 г.г.); в научно-исследовательской работе Киевского научно-исследовательского института эпидемиологии, микробиологии, паразитологии МЗ УССР (1977,1978 г.г.), кафедры микробиологии и вирусологии № 2 и лаборатории инфекционной и неинфекционной иммунологии РОДНМИ.

Для обсуждения на защите автор выдвигает следующие положения работы:

- теоретическое обоснование и экспериментальную разработку эффективного метода дезинтеграции коклюшных бактерии в циркуляционной системе с последовательным трехкратным извлечением антигенов ;

- изучение особенностей биологического действия ультразвука малой интенсивности на модели коклюшных бактерий;

- повышение эффективности импульсного воздействия ультразвука с подобранной длительностью импульсов и интервалов между ними по сравнению с непрерывным;

- выявление особенностей действия низкочастотного ультразвука на формалинизированные эритроциты барана с целью повышения их сорбционной способности по отношению к антигенам коклюшных бактерий;

- применение низкочастотного ультразвука при конструировании коклюшных антигенных эритроцитарных диагностикумов для повышения активности сорбента, сенситина и оптимизации условий их взаимодействия.

ЧАСТЬ ПЕРВАЯ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Литвинова, Наталья Константиновна

ВЫВОДЫ

1. Определены оптимальные режимы ультразвуковой дезинтеграции (частота 44 кГц, амплитуда 70 мкм, экспозиция 15 минут) коклюшных бактерий с целью выделения иммунологически активных антигенных комплексов (12X геом. титров в РПГА - 3,79).

2. Сопоставление качественной и количественной выраженности дезинтеграционного эффекта по данным электронно-микроскопических исследований с результатами серологических испытаний выделенных антигенных комплексов позволяет рекомендовать комплексный подход при выборе оптимальных режимов ультразвукового воздействия.

3. Использование нового способа ультразвуковой дезинтеграции в циркуляторной системе позволяет в 2,6 раза увеличить выход активных коклюшных антигенных комплексов при последовательном,трехкратном ультразвуковом воздействии на микробную взвесь с поэтапным извлечением антигенов.

4. Определена возможность применения новых схем ультразвуковой дезинтеграции при использовании малых амплитуд (20 мкм) ультразвука с определенной длительностью импульсов (60 сек.) и интервалов между ними (120 сек.), что обеспечивает увеличение дезинтеграционного эффекта ультразвука на 19 %,

5. Впервые разработана простая и экономически оправданная методика конструирования эритроцитарных диагностических препаратов.

6. Сравнительное изучение электрофоретической подвижности, морфологии формалинизироЕанных эритроцитов барана и их сорбцион-ной активности в результате ультразвукового воздействия позволяет объяснить повышение активности данного сорбента за счет возможных конформационных изменений поверхностных структур эритро

- 129 цитов и обнажения рецепторных участков.

7. Разработанные ультразвуковые коклюшные антигенные эритро-цитарные диагностикумы позволяют исследовать иммунологический статус вакцинированных детей. Представляется целесообразным полнообъемное исследование возможности их использования в диагностических целях.

Приношу глубокую благодарность научному руководителю работы профессору Екатерине Петровне Москаленко и научному консультанту кандидату технических наук Валентину Михайловичу Лубэ за непосредственное руководство и повседневную консультативную помощь в выполнении работы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Развитие современной экспериментальной и прикладной микробиологии, необходимость выделения и исследования субклеточных структур микроорганизмов, все возрастающая роль практического применения результатов исследования повышают важность и актуальность экспериментальных и теоретических исследовании процессов и механизмов ультразвуковой дезинтеграции, диктуют необходимость разработки современной автоматизированной аппаратуры, специально предназначенной для подобных исследований, создания наиболее эффективных схем и методов воздействия данного физического агента на микробную клетку.

Анализ литературных данных свидетельствует о перспективности использования ультразвуковых волн различной частоты и интенсивности для выделения антигенов, ферментов и отдельных структурных компонентов микроорганизмов (И.А. Лапаева, 1973; И.А. Лапаева с соавт., 1970,1972 ;I977; Sato Д976Д977; Sato et.al. Д972, 1973 Д978).

Успех вакцинопрофилактики многих инфекционных заболеваний и, в частности, коклюша, зависит от степени изученности антигена возбудителя и выявления роли отдельных субстанций в создании напряженного иммунитета* Поэтому проблема выделения и всестороннего изучения антигенов коклюшных бактерий продолжает привлекать внимание и обусловливает необходимость продолжения исследований в этом направлении. Актуальность подобных исследований определяется также необходимостью замены корпускулярного коклюшного компонента в вакцине отдельными иммуногенными компонентами микроба М.С. Захарова, 1973,1974,1977,1981; Е.П. Москаленко с соавт., 1977,1979,1981; E.G. Станиславский, 1979).

Применяемая в настоящее время ассоциированная АКДС-вакцина с корпускулярным коклюшным компонентом сыграла значительную роль в защите детского контингента от такого тяжелого заболевания с многочисленными летальными исходами, как коклюш (М.О. Захарова, 1977,1981,1982; А. Адонайло с соавт., 1977; Д. Дончев с соаЕТ., 1977; С. Мебель, 1977).

Однако окончательно проблема вакцинации детей против коклюша не решена до настоящего времени. Периодические подъемы заболеваемости коклюшем даже среди привитых детей свидетельствуют о недостаточной эффективности применяемого препарата (Н.П. Девяткина, 1972,1970; Л.С. Кузнецова, С.Д. Гимпелевич с соавт., 1972; Р.П. Чупринина с соавт., 1972; А. Адонайло, Б. Андржейчик-Карды-мович, 1977).

Кроме того, коклюшные вакцины обладают выраженной реактогенно-стью и вызывают тяжелые поствакциональные реакции (М.С. Захарова, 1969; В.П. Брагинская, 1972; А.Х. Канчурин, 1976,1977; С.Г. Алексина с соавт., 1976; Н.П. Озерецковский с соавт., 1977).

В связи с вышеизложенным, усилия отечественных и зарубежных исследователей направлены на выделение из микробной клетки субстанций, обладающих высокой иммуногенной активностью, лишенных токсических свойств и создания на их основе вакцинных препаратов, обеспечивающих развитие длительного и напряженного иммунитета без поствакциональных осложнений.

Поэтому для решения проблемы создания эффективной коклюшной вакцины большое внимание уделяется разработке методов выделения протективннх антигенов из микробной клетки.

Перспективность применения ультразвуковых волн как первичного дезинтегрирующего агента, позЕолякзцего выделить наиболее полный набор антигенов из микробной клетки, подтверждается данными ряда исследователей (И.Я. Мошиашвили, 1970; И.А. Лапаева, 1973; Л.В. Жулина, И.П. Багдасарова, 1971; Е.П. Москаленко с соавт.,

1975; Nakase et.al.Д971; Sato, Д976Д977).

Однако, судя по литературным данным, аппаратурное обеспечение микробиологических исследований недостаточно, что заставляет модифицировать имещиеся установки применительно к особенностям микробиологических исследований. Эти аппараты, как правило, остаются уникальными, что создает ситуацию невозможности корректного сравнения и повторения результатов различных экспериментов» Поэтому важным является создание отечественной ультразвуковой аппаратуры, предназначенной для использования в микробиологической практике. Она должна соответствовать общим требованиям, предъявляемым к любым электронным устройствам: обладать высоким КПД и большой экономичностью, иметь малый вес и габариты, низкую стоимость изготовления и доступность для отдельных лабораторий.

В связи с изложенным, совместно с инженерной группой отдела медицинской электроники и акустики РОДНМИ под руководством к.т.н. В.М. Лубэ была проведена работа по разработке подобного аппарата. Сконструированный аппарат ДБУ-01 (дезинтегратор биологический ультразвуковой) состоит из двух блоков - генераторного и технологического, что создает возможность дистанционного управления процессом ультразвукового воздействия и позволяет обеспечить необходимые условия стерильности и техники безопасности исследований.

Транзисторный генераторный блок включает в себя источник питания, усилитель мощности, схему автоподстройки частоты, схему автоматической защиты и сигнализации аварийных состояний генератора. Заключительная выходная мощность генератора (300 Вт) накладывает дополнительные трудности по обеспечению высокой надежности аппарата. Эту проблему позволяет решить введение в прибор системы автоматической защиты и сигнализации аварийных режимов, применение которых не только надежно предохраняет прибор при возникновении аварийной ситуации, но и позволяет в кратчайшие

- 119 сроки устранить неисправность. Все это делает прибор достаточно надежным и простым в эксплуатации.

В генераторный и технологический блоки введены автоматизированные схемы и приспособления для реализации разработанных методик импульсного и непрерывного воздействия на микроорганизмы и формалинизированные эритроциты барана. Согласно результатам апробации прибора е микробиологических исследованиях и прикладной иммунологии, по рекомендации Всесоюзного научно-исследовательского и испытательского института медицинской техники, сформулированы медино-технические требования на серийную конструкцию ДБУ-01.

Несмотря на широкое применение ультразвука в микробиологии и прикладной иммунологии, многочисленные исследования механизма действия данного физического агента на микробную клетку, изучение биологических эффектов и особенностей механизма ультразвукового воздействия, разработка новых схем и методов воздействия продолжает оставаться предметом глубокого и всестороннего внимания исследований.

Проведенными экспериментами по выявлннию оптимальной методики ультразвуковой дезинтеграции при низкочастотном воздействии установлена высокая эффективность применения данного агента для выделения коклюшных антигенных комплексов. При этом характер и выраженность дезинтегрирующего действия ультразвука зависят при неизменной частоте и амплитуде от продолжительности действия физического агента. Полученные данные согласуются с математически обоснованными положениями A.A. Кудрявцева (1972) о времени, как основном параметре процесса, от правильного выбора которого зависит количество и качество выделяемых при дезинтеграции функционально активных субстанций клетки.

Установлено, что наиболее активные антигенные комплексы коклюшных бактерий были выделены при действии на микробные клетки низкочастотного (44 кГц) ультразвука, амплитуда колебаний волной вода 70 мкм, экспозиция воздействия 15 минут. Полученные в этом режиме ультразвуковые антигены обладали высокой активностью в РПГА и специфичностью. Изучение антигенограмм ультразвуковых антигенных комплексов коклюшных бактерий, полученных при данном режиме воздействия, свидетельствует об экстракции под действием ультразвука значительного количества парциальных антигенов ( в реакции преципитации выявлено до 4 антигенов и в реакции иммуно-электрофореза - до 7).

Электронно-микроскопические исследования по изучению морфологических изменений коклюшных бактерий при действии ультразвука различной продолжительности позволили получить представление не только о качественной характеристике морфологических изменений возбудителя коклюша, но и зарегистрировать их количественно.При этом сопоставление данных электронной микроскопии и серологических исследований позволило с полной очевидностью выявить оптимальный режим ультразвукового воздействия с учетом направления дальнейших исследований» Так, в результате 15-минутного действия ультразвука описанных параметров отмечена высокая степень дезинтеграции микробных клеток (88,2 %), сопровождащаяся выходом активных антигенных комплексов ( 1$. титра в РПГА составляет 3,78т 0,04). Дальнейшее увеличение экспозиции ультразвукового воздействия (до 20 минут) приводит к дезинтеграции всего 2,6 % микробных клеток. При этом необходимо отметить статистически незначимую тенденцию к снижению серологической активности выделенных антигенных субстанций (1б X титра в РПГА соответствует 3,56* 0,11). Можно предположить, что в данном случае основная энергия ультразвукового воздействия расходуется не на дезинтеграцию микробных клеток, а на инактивацию выделившихся и находящихся в растворе антигенов, Выдвинутое предположение согласуется с дан

- 121 ными других исследователей (И.Е. йльпинер, 1973; Ф.И. Брагинская, 1981). Полученные опытные данные с полной очевидностью свидетельствуют о необходимости строгой дозировки ультразвукового воздействия в зависимости от цели дальнейших исследований»

Анализ литературных данных свидетельствует о том, что дезинтеграцию микроорганизмов осуществляют в основном при использовании ультразвуковых установок высокой частоты с низким коэффициентом полезного действия. При этом разрушение микробных клеток наступает в результате продолжительного ультразвукового воздействия (до I часа). Дезинтеграцию микроорганизмов при этом проводят в так называемой "статической" системе, им'еющей неизменный объем. При таком способе дезинтеграции ультразвук действует как на микробные клетки, осуществляя их дезинтеграцию и выход в раствор заблокированных в них антигенных субстанций, так и на уже выделившиеся в результате действия ультразвука антигены. Выбор оптимального режима при данном способе воздействия сопряжен с определенными трудностями и требует сопоставления результатов исследований с применением различных методик.

Нами предложен и разработан новый метод ультразвуковой дезинтеграции микроорганизмов (решение ВНИИШЬ и выдаче авторского свидетельства на изобретение № 2798202/13, 1981г.). Новый способ дезинтеграции микроорганизмов предусматривает применение специальной системы для принудительной циркуляции микробной взвеси в процессе дезинтеграции низкочастотным ультразвуком. Использование для данных целей низкочастотной ультразвуковой аппаратуры имеет определенные преимущества по сравнению с высокочастотными установками, вак как позволяет значительно уменьшить необходимую для достижения эффекта кавитации акустическую мощность, что существенно повышает коэффициент полезного действия используемой установки, уменьшает в 3-4 раза экспозицию ультразвукового воздействия и, тем самым, увеличивает экономичность исследований» Кроме того, низкая трансформация энергии из акустической в тепловую, принудительная циркуляция микробной Езвеси в процессе ультразвукового воздействия позволяет эффективно термостатировать процесс дезинтеграции, не применяя доростоящих специальных приспособлений. В данном случае дезинтеграция микробных клеток при периодическом действии ультразвука позволяет значительно уменьшить суммарное время озвучивания элементарных объемов микроорганизмов и, следовательно, уменьшить время нахождения выделенных в процессе дезинтеграции антигенов в зоне интенсивного ультразвукового воздействия. Применение данной методики позволяет в 10 раз увеличить объем дезинтегрируемой микробной взвеси при тех же параметрах ультразвука, получив при этом антигенные комплексы, отличающиеся значительной серологической активностью. Различия в титре антигенов, полученных с применением циркуляционной и "статической" систем были несущественны, их величины составляли, соответственно, 3,71 ± 0,26 и 3,77 ± 0,17.

Кроме того, применение данного метода ультразвукового воздействия позволяет при повторном двукратном действии ультразвука на микробные остатки дополнительно выделить активные антигенные комплексы. При этом антигены, полученные при последовательном,"ступенчатом" извлечении из микробной клетки, отличаются достаточно высокой серологической активностью и специфичностью и малой вариабельностью антигенного состава, что свидетельствует о последовательном и более полном высвобождении антигенных комплексов, заблокированных в бактериальной клетке, при использовании данного метода ультразвуковой дезинтеграции микроорганизмов.

Таким образом, десятикратное увеличение объема дезинтегрируемой микробной взвеси при неизменных параметрах ультразвукового воздействия, естественное термостатирование процесса дезинтеграции при циркуляции микробной Езвеои существенно повышают эффективность метода. Кроме того, особенности технологии способа предусматривают последовательное трехкратное извлечение антигенных субстанций микробной клетки, в 2,6 раза увеличивая их суммарный выход по активности и в 2,9 раза по белку. Данные особенности разработанного метода позволяют более целесообразно использовать бактериальную массу, тем самым повышая эффективность и рентабельность метода при снижении трудо-, энергозатрат и себестоимости исследований.

Разработка оптимальных методик ультразвукового воздействия на микробные клетки с учетом особенностей объекта производится эмпирическим путем, варьируя параметры ультразвука. При этом оптимизацию производят, как правило, изменением 1-2 параметров процесса дезинтеграции (A.A. Кудрявцев, 1972). Эти параметры могут быть выбраны на основании результатов исследований, отраженных в литературе, и собственного опыта.

Представляло интерес изучение особенностей действия низкочастотного ультразвука на микробную клетку (модель коклюшного микроба) при изменении таких двух параметров, как амплишуда (20,40, 60,80 мкм) и экспозиция.

В результате проведенных исследований выявлено существование нелинейной зависимости биологического эффекта при использовании малых амплитуд воздействия данного физического фактора.

На основании экспериментальных данных выдвинуто положение о возможности повышения эффективности действия ультразвука на микроорганизмы с целью выделения биологически активных субстанций клетки при использовании малых щадящих амплитуд, данного физического фактора, что позволяет существенно снизить жесткое механо-химическое деструктивное действие ультразвука.

При этом можно предположить, что фракционированное применение

- 124 ультразвука с различной длительностью и частотой следования импульсов может привести к реакциям микроорганизма качественно и количественно отличным от таковых после непрерывного воздействия (А.П. Сарвазян, 1975,1977,1981).

На основании этого предположения была разработана новая методика импульсного ультразвукового воздействия на микробную клетку, позволяющая при использовании нелинейных биологических эффектов малых (20 мкм) амплитуд ультразвукового воздействия на 19 % повысить эффективность дезинтегрирующего действия ультразвука, что коррелировало с увеличением на 10-14 % выхода протеинов клетки. Проведенные исследования позволили разработать новый методический подход к проблеме щадящей дезинтеграции микроорганизмов.

Ультразвуковые коклюшные антигены были с успехом использованы для конструирования эритроцитарных диагностических препаратов. В результате проведенных исследований выявлены высокие сенситивные качества ультразвуковых антигенов и определены оптимальные режимы сенсибилизации (рН среды 7,0, доза сенситина 100 ГЕ на 1,0 мл 2,5 % формалинизированных эритроцитов барана; экспозиция сенсибилизации составляла 2 часа при +37 °С или 18 часов при +5 °С). Специфическая активность полученных в данных условиях диагностических препаратов составляла в среднем 1:870 тыс. - 1:1,1 млн.

Одним из важных вопросов конструирования эритроцитарных диагностических препаратов является повышение сорбционной активности эритроцитов. Для этих целей используют различные химические вещества - таниновую кислоту, глютаровый альдегид, хлорид хрома, твин-40. Существенным недостатком химического метода повышения сорбционной активности эритроцитов является необходимость последующего многоэтапного освобождения от реагента.

Значительный теоретический и практический интерес представля

- 125 ло изучение возможности использования физических методов воздействия на эритроциты с целью повышения гемосорбционной активности. В настоящих исследованиях установлена возможность применения низкочастотного ультразвука для повышения сорбционной активности эритроцитов по отношению к антигенам белковой природы, разработаны оптимальные режимы и схемы воздействия: ультразвук в сочетании с таниновой кислотой, что позволило повысить активность получаемых диагностических препаратов до 1:2,4 млн.

Эти экспериментальные данные согласуются с указаниями А.И. Журавлева, В.Б. Акопяна (1уУУ) о возможном поглощении и трансформации энергии ультразвука в клетке, приводящей к изменению молекулярной подвижности биосистем мембран эритроцитов (И.Е. Эльпинер, 1973). При этом возможно создание условий для обнажения определенных рецепторных участков и увеличения реакционной способности молекулярных систем клетки, играющих роль клеточных рецепторов, ответственных за связывание белковых антигенов.

Изучение природы эритропитарных рецепторов к различным антигенам представляет интерес как с точки зрения анализа рецепторной функции этих клеток, так и с учетом использования эритроцитов в качестве клеточной основы диагностикумов для РИГА (Б.В. Караль-ник, В.А. Шамардин, 1976).

Эмпирические данные подтвердили значительную эффективность низкочастотного ультразвука в повышении специфической активности эритроцитарного сорбента по отношению к коклюшным антигенам, характеризующимся сложным белково-липидным полисахаридным составом.

Для теоретического объяснения полученных данных и их широкого практического использования были предприняты исследования по регистрации возможных конформационных изменений химических структур мембраны эритроцита. Исследования позволили отметить, что зависимость изменений эдектрофоретической подвижности формалинизи

- 126 рованных эритроцитов, косвенно свидетельствующей о конформацион-ных изменениях поверхностных слоев клеточных мембран, является монотонной функцией от экспозиции ультразвукового воздействия. Использование комбинированного режима (ультразвук в сочетании с таниновой кислотой) позволяет повысить гемосорбционную активность эритроцитов, что, вероятно, сопровождается обнажением более значительного количества функционально активных групп, приводит к более выраженному изменению поверхностных свойств эритроцитов.

Зарегистрирована большая электрофоретическая подеижность эритроцитов, обработанных в данном режиме (увеличение на 73 % по сравнению с контролем) и значительная активность диагностических препаратов, в качестве сорбентов при конструировании которых были использованы эритроциты.

Отмечено, что при сенсибилизации эритроцитов ультразвуковыми коклюшными антигенами их ЭФП уменьшалась, вероятно, за счет образования химических связей между сорбентом и сенситином и частичной экранизации антигенами отрицательно заряженных ионных групп поверхности эритроцита. Полученные данные согласуются с результатами других исследователей (С.А. Угримов, В.И. Райкис с соавт., 1978) по измерению Ш1 нативных эритроцитов животных при сенсибилизации различными аллергенами.

Паралдельно проведенные исследования. ; по изучению морфологических изменении поверхности эритроцитов при изучаемых химических и физических воздействиях позволили отметить качественные и количественные морфологические изменения формы поверхности эритроцитов, характерные для каждого режима.

Анализ морфологических изменений эритроцитов и специфической активности получаемых на их основе антигенных диагностикумов позволяет предположить связь данных изменений с обнажением определенных рецепторных участков на эритроците и в результате - повышение его сорбционных свойств.

Б результате проведенных исследований разработан принципиально новый, более простой и эффективный способ конструирования эритроцитарных диагностикумов при использовании низкочастотного ультразвука для повышения активности сорбента и оптимизации условий сенсибилизации. При этом кратковременное воздействие ультразвука на смесь эритроцитов и антигена в начальный период гемосенсибилизации способствует более равномерному распределению сен-ситина, улучшению условий его контакта с сорбентом и возможной активации под действием ультразвука, что согласуется с данными т^/агб-э е-Ь,а1.(1976).

Исследования 264 сывороток детей с помощью разработанного ультразвукового коклюшного антигенного эритроцитарного диагности-кума позволяет отметить высокую информативность данных контроля напряженности противококлюшного иммунитета у вакцинированных детей разных Еозрастных групп в зависимости от срока вакцинации.

Проведение ограниченных испытаний разработанных препаратов для исследования 22 парных сывороток крови детей с подозрением на коклюш позволяет отметить перспективность проведения дальнейших исследований в данном направлении.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Литвинова, Наталья Константиновна, 1983 год

1. Абелев Г.И., Цветков A.C. Выделение специфического антигенаперевиваемой гепатомы мышей методом иммунофильтра-ции. Вопросы онкологии, i960, № 6, с. 62-66.

2. Аболина Т.А. Микроэлектрофорез как метод изучения поверхностной структуры бактериальных клеток. МЭИ, 1980, № 4, с. 21-28.

3. Адонайло А. Эпидемиологическая ситуация по коклюшу в Польшев 1955-1975 г.г. с учетом профилактических прививок.- В сб. "Коклюш". Матер. Всес. симп. по иммун. и эпи-деы. Минск, 1977, с. 6-7.

4. Адонайло А., Анджейчик-Кардымович М. Оценка поствакциональных реакций у детей, привитых против коклюша. В кн.: Коклюш. Матер. Всес. симп. по эпид. Минск, 1977, с. 52-53.

5. Акопян В.Б. Пороги биологического действия ультразвука поэлектрофизическим характеристикам клеточных мембран.- В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой. Тез. докл. Всес. симп. Пущино, 1979, с. 2223.

6. Акопян В.В., Сарвазян А.Г1. Исследование механизмов действияультразвука на биологические среды и объекты. Акус-тич. журнал, 1979, т. 25, ^ 3, с. 462-469.

7. Александров В.А. Клетки, макромолекулы и температура. -Акустич. журнал, 1975, т.14, № 2, с. 329.

8. Алексина С.Г., Брагинская В.Н., Соколова А.Ф., Озерецковский H.A., Ковалевская С.Я. Патология вакцинального процесса при вакцинации детей против коклюша, дифтерии, столбняка. Межд. симп. по станд. мед. биопреп. М., 1976, с.43-45.- 132

9. Баранов А.П., Кирдеев В.П., Ефимцева Е.П. Влияние ультразвуковых колебаний различной интенсивности на Proteus vulgaris . МЭИ, 1973, № 10, С. 86-88.

10. Басова Л.Н. Влияние ультразвука на прорастание покоящихся

11. CHOP Entomoplithora apiculata than-. В Сб.: Патогенterные микроорганизмы вредители растений. Рига,1972, с. 4.

12. Басова Л.Н., Максимова Н.Ф., Бургасов Ю.О. Корреляционный анализ показателей токсиннейтрализувдей активности сывороток и титров антител в ШГА. ЖМЭИ, 1975, № 2, с. 89-94.

13. Байер В., Дернер Э. Ультразвук в биологии и медицине. Л.,1. Медгиз, 1958, с. 165.

14. Белинская Л.Г., Шильников А.К. Акустическая релаксация в водных растворах аминокислот и белков. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой* Тез.докл. Всес. симп. Пущино, 1979, с. 81-83.

15. Бернасовская E.H., 1*уревич М.И. Опыт изучения действия ультразвуковых колебаний на некоторые микроорганизмы.

16. В кн.: Вопросы микробиол. и эпидем. кишечных инфекций. Киев, Наукова думка, I960, с. 100.

17. Бернасовская E.H., 1*уревич М.И. Особенности действия ультра- 133 звука на микроорганизмы различной формы. МЭИ, 1961, т. 23, № 4, с. 57-58.

18. Борискина К.И. Озвученные микробные антигены в реакцияхиммунитета, В кн.: Труды Куйбышевского мед. ин-та, 1971, т. 69, с. 8-11.

19. Брагинская Ф.И., Гендель Л.Н., Зорина О.Н., Круглякова К.Е.

20. Акустическое исследование мембран эритроцитов. Акустический журнал, 1979, т. 25, № 6, с, 836-843.

21. Брагинская Ф.И., Зорина О.Н., Садыкова С.Х. Исследованиемембран эритроцитов ультразвуковыми методами. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой. Тез. докл. Всес. симп. Пущино, 1980, с. 89-91.

22. Бурианова Н., Мейснерова Н., Новакова Е. Наблюдения по коклюшу в Чехословакии. В кн.: Коклюш, Матер. Всес, симп. по иммун. и эпид. Минск, 1977, с. 5.

23. Бурик В.В., Отаровская И.В., Флора В.Ф. Изучение влиянияультразвука на микроорганизмы кишечно-паратифозной группы. В кн.: Исследования в области ветеринарии. Одесса, 1975, с. 36.

24. Валиева С.З,, Литвинова Н.К., Чернавская Л.Н. Влияние ультразвука и твин-40 на способность эритроцитов сорбировать коклюшные и паракоклюшные антигены. В кн.: Коклш, 1977, с. 81-82.

25. Васильев Ю.Н., Маленков А.Г. Клеточная поверхность и реакция клеток. Л., Медицина, 1968, с. 291.

26. Вернигора П.Ф., Литвинова Н.К., Москаленко Е.П. Методы ультразвуковой дезинтеграции в микробиологических исследованиях. Акуст. журн., 1975, 1.21, с. 316-317.

27. Вернигора В.Ф., Литвинова Н.К., Москаленко Е.П., Устинов

28. В.А, Некоторые итоги и перспективы ультразвуковойдезинтеграции микроорганизмов для получения растворимых антигенов. В кн.: Ультразвук в физиологии и медицине. Ульяновск, 1975, с. 51-54.

29. Верезуб А.Г., Вельвовская P.M., Палант Б.А. Изменение формыкоклюшного микроба и их роль в прорыве противококлюш-ного иммунитета. Тез. ХУ1 Всес. съезда микробиол» и эпидем. М., 1977, с. 286-287.

30. Гавашели Т.В., Акопян В.Б. Оценка состояния рыбы при ртутном отравлении по скорости ультразвукового гемолиза. Тез. докл. Всес. симп. с межд. уч. "Ультразвук в биол. и медицине", У ШОМЕД-У. Пущино, 1981, с.6-7.

31. Галыгин Л.Н., Литвинова Н.К., Москаленко Е.П., Санки на Е.И.

32. Состояние и перспективы использования акустических методов в микробиологии. Акустический журнал, 1979, т. 25, вып. 3, с. 466-467.

33. Голубева О.С., Кушнарев В.М. Злектронномикроскопическое изучение Bordetella pertussis при культивировании на разных средах. ИУ1ЭИ, 1974, № 6, с. I0I-I03.

34. Гуревич Г.А., Фихте Б.А. 0 некоторых механизмах и артефактах дезинтеграции микроорганизмов ультразвуком. В кн.: Взаимодействие ультразвука с биологической средой. Пущино, 1979, с. 50-52.

35. Гуревич Г.А., Фихте Б.А., Кудрявцев A.A. Инженерно-физические аспекты и феноменология процессов дезинтеграции микроорганизмов. Е сб.: Дезинтеграция микроорганизмов. Пущино, 1972, с. 15-50.

36. Даринская Н.Г. Относительная биологическая эффективность излучений. M.î Атомиздат, 1968, с. 257-328.

37. Дворкин H.A. Влияние УЗ волн на физико-химические и ферментативные свойства поверхностных слоев эритроцитов. -В кн.: Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. Красноярск, i960, с. 35-46.

38. Джемухадзе Г.К., Григорьева Т.И., Харатьян Е.А., Дегтева

39. Г.К., Лукьянова М.А., Ермаченко В.А. Действие УЗ волн на клетках Bordetella с целью получения энзима-тически активных мембран. В кн.: Взаимодействие УЗ с биологической средой. Тез. докл. Всес. симп. Пущино, 1979, с. 52-54.

40. Доливо-Добровольский Г.Б., Кузнецов С.И. Бактериальное действие УЗ колебаний в воде. Гигиена и санитария, 1943, № 7, с. I.

41. Дончев Д., Михайлова В., Сарафова В., Гачева И., Квосев Б.

42. Динамика эпидемиологических параметров этиологической структуры коклюша в НРБ в условиях массовой иммунизации. В кн.: Коклюш. Мат. Всес. симп. по иммунол. и эпидемиол. Минск, 1977, с. 7-8.

43. Жук Е.И., Файтельберг-Бланк В.Р. Влияние УЗ колебаний наклетки и субклеточные структуры. Вопр. курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. М.: Медицина, 1972, в.З, с. 198-201.

44. Жулина Л.В., Багдасарова И.П. Выделение комплекса агглютиногена коклюшных бактерий разных серологических типов. 2ШЭИ, 1971, й 6, с. 23-26.

45. Журавлев И.Т., Акопян В.Б. Ультразвуковое свечение. М.:- 136 -Наука, 1977. 134 о.

46. Захарова М.С. Эпидемиология коклюша и некоторые предпосылкик оценке экономического эффекта вакцинации. МЭИ, 1974, № 4, с. 3-9.

47. Захарова М.С. Влияние вакцинации на мировое распространениекоклюша. В кн.: Коклюш. Мат. Всес. симп. по иммунол. и эпидемиол. Минск, 1977, с. 3-5.

48. Захарова М.С., Яулина-Златева Л.В., Лапаева И.А. Глютаминсинтетаза Bordetella pertussis . В кн.: Коклюш. Мат. Всес. симп. по иммунол. и эпвдем., Минск, 1977, с. 85.

49. Захарова М.С., Гуреева A.A., Переверзев H.A. Выделение отдельных структурных Элементов бактерий рода Bordetella и изучение их свойств (сообщ.1). ЖМЭИ, 1975, № 8, с. 45.

50. Звягина О.И. Иммунологические реакции организма крыс в ответ на многократное облучение малыми дозами УЗ. -В кн.: Роль иммунных механизмов в развитии различных заболеваний. Пермь, 1976, с. 105-107.

51. Иванова С.П. Гемагглютинин коклюшной палочки. Сообщ.1.

52. Условия образования гемагглютинина в культурах коклюшной палочки и некоторые его свойства. ЙМЭИ, 1955, № 9, с. 30-34«- 137

53. Иванова СЛ. Гемагглютинин коклюшной палочки: Автореф.дис.канд. мед. наук. М., 1955. 27 с,

54. Изместьева В.И. Защитная фракция, полученная методом ионообменной хроматографии из дезинтегрированных коклюшных микробов. МЭИ, 1968, № 2, с. 17-21,

55. Кадзяускене К.В., Кулис Ю.Ю. Разрушение клеток дрожжейультразвуком. В кн.: Методы получения высоко-очищенных ферментов. Вильнюс, 1978, с. 17-18.

56. Канатов Ю.В. Системы серологических реакций с сенсибилизироуванными эритроцитами для обнаружения антигенов и антител. Автореф. дис. докт. Саратов, 1964.35 с,

57. Карасевич Ю.В. О механизмах регуляции клеточного метаболизма у микроорганизмов в связи с задачами селекции, В кн.: Генетические основы селекции микроорганизмов. М., 1973, с.20.

58. Карасевич Ю.В. Экспериментальная адаптация микроорганизмов.1. М., 1975, с. 94.

59. Каральник Б.В, Свойства фиксированных эритроцитов и их применение в реакции непрямой гемагглютинации (обзор литературы). Лаб. дело, 1973, № 3, с. 155.

60. Каральник В.Б. Научные основы изготовления эритроцитарныхдиагностикумов. МЭИ, 1977, № 4, с. 29-34.

61. Кикучи Е. Ультразвуковые преобразования. М.: Мир, 1972,с. 48-56.

62. Кирицева А.Д. Реакция пассивной гемагглютинации в модификации Рыцая для обнаружения коклюшных бактерий. -В кн.: Докл. П объединен, научн. конф. мед. ин-тов г. Ростова-на-Дону, 1965, с. 309,- 138

63. Кирицева А.Д. Реакция пассивной гемагглютинации при коклюше. МЭИ, 1966, № I, с. 132.

64. Клариксон Д. Транспорт ишнов и структура растительной клетки. М.: Мир, 1978, с. 368.

65. Ковалев Л.В. Изучение свойств бруцелл, подвергавшихся действию ультразвука. В сб.: Научн. тр. Сиб. научн, ин-та. Омск, 1966, № 14, с. 341.

66. Кодзов М.Б., Акопян В.Б., Василевич И.П. Влияние низкочастотного ультразвука на микрофлору возбудителей тканевой инфекции. Тез. докл. Всес. симп. "У-био-мед -У". Пущино, 1981, с. 43-44.

67. Комолова Г.С., Левинсон М.С. Роль образующихся в озвученной воде химических веществ в поражающем действии ультразвука на дрожжевые кдетки. Изв. Сиб*отд. АН СССР, 1961, № 5, с. 80-83.

68. Комолова Г.С., Левинсон М.С. К вопросу о механизме действия ультразвука на микробную клетку. В кн.: Вопр. биофиз. и механизм действия ионизирующей радиации. Киев, 1964, с. 139.

69. Кондратьева В.Ф., Рогозин В.В. Использование ультразвукадля получения антигена из микробных клеток. -В сб.: Тез. докл. I научн. конф. по ультразвуку. Ростов-на-Дону, 1972, т. I, с. 107.

70. Кулаев И.С. 0 механизмах регуляции биохимических процессов у микроорганизмов. Успехи современной биологии, 1974, т.77, й 2, с. 91-101.

71. Кушнарев В.М., Миненкова И.Б. Электронно-микроскопическоеизучение препаратов дифтерийного токсина и анатоксина. ЖМЭИ, 1974, № 7, с. 30-35.- 139

72. Кушнир Л.П., Хмара Л.Е. Иммуноэлектрофоретический анализкоклюшных растворимых антигенных комплексов. -В сб.: Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии. Ростов-на-Дону, 1975, с. 16-19.

73. Лапаева И.А. Серологическое изучение коклюшных микробов иих защитных антигенов. Дне. канд. мед. наук. М., 1963.

74. Лапаева И.А. Протективный антиген Bordetella pertussis

75. Методы выделения, характеристика и локализация в микробной клетке): Автореф. дис. докт. мед.наук. М., 1973. 26 с.

76. Лапаева И.А. Применение иммунохимической гель-преципитационной техники для изучения очищенных препаратов Bordetella pertussis -Тез. докл. ХУ1 Всесоюзн. съезда микробиол. и эпидемиол. М., 1977, с. 303-304.

77. Лапаева И.А., Переверзев H.A. Выделение из ультразвуковыхдезинтегратов тонких структур бактериальной клетки, Тез. докл. Всес. конф. по дезинтеграции микроорганизмов. Пущино, 1972, с. 219-222.

78. Леви М.И. Общие закономерности классификации серологических реакций. ЯМЭИ, 1967, № 7, с. 104-109.

79. Леви М.И. Серология как наука о взаимодействии антигеновсо специфическими антителами. В кн.: Актуальн. вопр. иммунол. и иммунопатол. Ростов-на-Дону, 1976, с. 4-6.

80. Леви М.И. 0 классификации серологических реакций. Вопр»вирусологии, 1971, с. 630-632.

81. Леви М.И., Басова И.И. Эритроцитарные диагностикумы и ихприменение в серологии. Лабор. дело, 1968, * II, с. 674-679.

82. Леви Н.И., Басова Н.Н., Сучков Ю.Г., Орлова Г.М., Герасюк

83. Л.Г., Момот А.Г, Реакция пассивной гемагглютина-ции и реакция нейтрализации антител при некоторых инфекциях. МЭИ, 1962, №10, с. 40-45,

84. Леви М.И., Момот А.Г. Серологические исследования при чуме,

85. Сообщ. 7. Реакция нейтрализации антител. В сб. научн. работ Элистинской противочумной станции. Элиста, 1961, с. 207-214.

86. Леви М.И., Сучков Ю.Г. Использование формалинизированныхэритроцитов в серологических исследованиях, -Докл. I объедин. конф. мед. и научн.-исслед. ин-тов г. Ростова-на-Дону, 1964, с. 136-137.

87. Литвинова Н.К., Лубэ В.М., Москаленко Е.П. Ультразвуковыеэритроцитарные антигенные тесты. В кн.: Мат. I съезда ВНМТ0. М., 1975, с. 102-105.

88. Литвинова Н.К., Лубэ В.М. 0 биологическом эффекте при фракционированной ультразвуковой дезинтеграции микроорганизмов. Тез. IX Всес. акустич, конф, М., 1977, с. 21-24.

89. Маргулис М.А. Зависимость скорости звукохимических реакций- 141 от интенсивности ультразвуковых волн. Ж. физ.-хим., 1974, т.49, № 9, с. 2333-2335.

90. Маргулис М.А. О некоторых состояниях кавитационно-диффузной модели распределения радикалов в ультразвуковом поле. Акуст. ж., 1975, т. 21, в. 5, с. 768770.

91. Маргулис М.А. Современные представления о природе звукохимических реакций. Ж. физ. химии, 1976,т.50, № I, с. I-I8.

92. Маргулис М.А. Зависимость скорости химических реакций ифизикохимических процессов, вызываемых кавитацией, от интенсивности ультразвуковых волн. -Акуст. ж., 1976, т.22, с. 558-567.

93. Маргулис М.А., Акопян В.Б. Экспериментальное исследованиезависимости скорости звукохимических реакций и потока оополюминеоцент от интенсивностиультразвука. Ж. физ. химии, 1978, т. 52, $ 3, с. 601-605.

94. Мебель С. Итоги мировой иммунизации против коклюша в ГДР.

95. В сб.: Коклюш. Минск, 1977, с. 22-23. 81. Медведева Т.А., Элышнер И.Е. Действие ультразвуковых волн на дрожжевые клетки. Ж. общ. биол., 1975,т.16, № 4, с. 315.

96. Медведев B.C., Гладышев В.Н. Некоторые данные об идентификации дут преципитации, получаемых методом им-муноэлектрофореза. ШЭИ, 1974, № 6, с.59-61.

97. Мейнелл Дж., Мейнелл 3. Экспериментальная микробиология.1967. 296 с.

98. Мешалова А.Н., Леонтьева Н.Ф., Фролов Е.П., Захарова М.С.- 142

99. Состояние проблемы специфической профилактики коклюша (Обзор литературы). Экспресс-информация. Новости медицины и мед. техники. М., 1975, с.9-18.

100. Мирошников А.И., Фомичев В.М., Габуев И.С., Пекалов В.А.,

101. Разделение клеточных суспензий. М., Наука, 1977, о. 30-44.

102. Москаленко Ё.П. Материалы к изучению растворимых антигенов коклюшных бактерий. Автореф. дис. докт. мед. наук. Ростов-на-Дону, 1969. - 33 с.

103. Москаленко Е.П. Проблемы ультразвуковой дезинтеграции вмикробиологии. В сб.: Тез. докл. П Всес. научн. конф. "Ультразвук в физиологии и мед.". Ульяновск, 1975, т.1, с. 21.

104. Москаленко Е.П., Литвинова Н.К., Вернигора П.Ф. К характеристике ультразвуковых коклюшных растворимых антигенов. В сб.: Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии. Ростов-на-Дону, 1975, с.5-11.

105. Москаленко Е.П,, Литвинова Н.К., Лубэ В.М., Галыгин Л.Н.,

106. Пономарев В.П. Некоторые ультразвуковые методы и аппаратура для микробиологических лабораторных исследований. Тезисы I Всес. конф. по созданию аппаратуры для медицинских лаб. исслед. Л., 1979, т.1, с. 34-37.

107. Москаленко Е.П., Литвинова Н.К., Санкина Е.И. Состояниеи перспективы использования акустических методов в микробиологии. Акустич. журн.,1979, т.ХХУ, в. 2, с. 655-656.

108. Москаленко Е.П., Лубэ В.М., Сарвазян А.П., Литвинова Н.К.ультразвуковые методы дезинтеграции в микробиологии. Акустич. ж., 1978, $ 5, с. 794.- 143

109. Москаленко Е.П., Фоменко Г.А., Чернавская I.A., Литвинова

110. Н.К. 0 механизме ультразвуковой дезинтеграции микроорганизмов. Акустич. ж., 1977, т» 23, в.1, с. 178.

111. Москаленко Е.П., Чернавская Л.А., Литвинова Н.К. Оптимизация условий получения ультразвуковых коклюшных и паракоклкшых растворимых антигенов. Б с б.: Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии, вып. 2. Ростов-на-Дону, 1976, с. 8-12.

112. Мошиашвили И.Я. Изменение антигенной активности бордетеллпри воздействии культразвука. МЭИ, 1969, № 7, с. 143.

113. Мошиашвили И.Я. Использование ультразвука с целью получения эритроцитарных диагностикумов из микробов рода Bordetella . Актуальные вопр. эпидем. М., 1970, вып. 2, с. 196-198.

114. Мошиашвили И.Я., Селезнев С.Н., Сандулова С.А. Электронномикроскопическое изучение морфологии коклюшных микробов, обработанных ультразвуком. МЭИ, 1969, № 6, с. 126-128.

115. Ниборг В. Физические течения. В кн.: Физическая акустика (под ред. У. Мэзона). М.: Мир, 1969, т.2, с. 302-377.

116. Опарин А.И., Юркевич В.В. Об адсорбции ферментов дрожжевыми клетками. Докл. АН СССР, 1959, в.66, с. 247.

117. Орлова Б.В., Басова H.H. Использование стабильных взвесейбараньих эритроцитов в реакции гемагглютинации свирусом паротита и стандартизации некоторых условий ее постановки микрометодом, Лаб. дело,1974, Л 6 с. 368-370.

118. Ойвин И.Д. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований. Патол. физиол. и эксп. тер., I960, 1У, с. 76-85.

119. Насонов Д.Н., Александров В.П. Реакция живого вещества навнешние воздействия, М.-Л., Наука, 1942. -234 с.

120. Печников Н.В., Федорова A.M., Райтнер E.H., Лебедева Е.И.,

121. Мелентьева Т.М., Кудрявцева Л.В., Афиногенова A.B., Лезнебина В.А. Визуализация процессов дезинтеграции микроорганизмов. Мат. Всес. конф. по дезинтеграции микроорг. Пущино, 1972, с.34-36.

122. Печулис И., Саулевичуте А. Влияние ультразвуковых волн нажизнеспособность и размножение дрожжей. В сб.: Научн. тр. высш. уч. завед. Лит. ССР. Биол., 1968, вып.8, с. 75.

123. Петрова М.С., Сухарева Н.Ё., Окиншевич Ё.П., Наумова М.К.

124. Диагностическое значение РИГА при коклюше в очагах инфекции. В сб.: Коклюш. Матер. Всес. симп. по иммунологии и эпидемиологии. Минск, 1977, с. 27-29.115« Пирсол И. Кавитация. М.: Мир, 1975, с. 69-71.

125. Поверенный A.M., Леви М.И. Общие закономерности и имессификация серологических реакций. ШЛЭИ, 1967, Л 7, с. 104-109,

126. ПЭ.Рубан E.H., Русяев В.Ф., Кужинский В.Е., Шефтель И.Е.

127. Электролитические свойства форменных элементов крови при воздействии физических факторов, -Биофиз., 1976, т.2, в. 4, с. 679-683.

128. Сарвазян А.П. Взаимодействие ультразвука с биологическойсредой. Акустич. ж., 1977, т.25, в.1, с.178-179.

129. Сарвазян А.П. Специфические механизмы биологического действия импульсного ультразвука, связанные с динамикой биологических систем. В кн.: Молекулярная и клеточная биофизика. М., 1977, с. I07-II3.

130. Сарвазян А.П. Некоторые общие вопросы биологического действия ультразвука. Пущино, 1981. 28 с.

131. Сарвазян А.П., Барсегян В.О. Новый ультразвуковой методисследования биологических систем. Мат. 2-й Всес. конф. по вопр. методики и техники ультразвуковой спектроскопии. Вильнюс, 1973, с. 81-84.

132. Семина H.A., Демина A.A., Фикс Л.И., Грачева A.M., Езепчук Ю.В. Использование реакции пассивной гемагглю-тинации при коклюше и паракоклюше. Детские инфекции, 1972, вып.2, с. 91.

133. Станиславский Е.С. Антигенные субстанции коклюшного микроба. В кн.: Вакцины и сыворотки. М., 1972, с. 148-157.- 146

134. Станиславский Е.С., Жванецкая M.И. Использование методовдезинтеграции в научных исследованиях и производстве бактериальных препаратов. Б кн.: Дезинтеграция микроорганизмов. Пущино-на-Оке, 1972, с.52-60.

135. Станиславский Е.С., Рогожин C.B., Мамцис A.M., Вальковский

136. Д.Г. Дезинтеграция микроорганизмов в производстве бактерийных препаратов и пищевого белка. В кн.: Итоги науки и вехники. Микробиология, М.( 1978, т.8, с. 94-144.

137. Скард И., Строд И. Зависимость от температуры вызываемыхультразвуком повреждений клеток кишечной бактерии.- Изв. АН Латв. ССР, 1973, #6, с. 101.

138. Скрябин Г.К. Дезинтеграция микроорганизмов. ВИНИТИ,

139. Микробиология, т. 8, M., 1978, с. 5.

140. Смык М.И. Методика воздействия ультразвуком на клетки.

141. Бюл. экспер. биол. и мед., 1977, 84, tè II, с. 635-637.

142. Сохин A.A., Мошиашвили И.Я., Кучерявенко B.C., Заплатников

143. И.Т., Свечник В.Н., Лейко A.ÏÏ. Опыт применения реакции пассивной гемагглютинации для ретроспективной серологической диагностики коклюша (пара-коклюша) и оценки состояния иммунитета у привитых.- ЖМЭИ, 1970, № 9, с. 95-98.

144. Тихончук B.C. Кумулятивные эффекты при микроволновом облучении. Изв. АН СССР, сер. биол., 1978, № 3, с. 458-460.

145. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков. M., 1963, с. 178.- 147

146. Фихте Б.А. Дезинтеграция микроорганизмов. Задачи и перспективы. Мат. Всес. конф. по дезинтеграции микроорганизмов. Пущино-на-Оке, 1972, с. 5-14,

147. Фихте Б.А., Гуревич Г.А., Кудрявцев A.A. Дезинтеграциямикроорганизмов. ВИНИТИ, Микробиология, 1978, т.8, с. 7-91.

148. Фрай Ф. Дж. Биологические эффекты ультразвука. Обзор

149. ТИИЭР, 1979, т.67, 4, с. 180-209.

150. Чедщ Т. Звук. М.: Мир, 1975, с. 129-130.

151. Чернавская JI.H., Литвинова Н.К., Бурика Н., Гогоберидзе

152. A.A. Химический состав коклюшных и паракоклюшных антигенов, Сб. трудов ИМИ, 1979, в. 5, с,9-14.

153. Чупринина Р.Н. Серологические и превентивные свойства антигенов коклюшных и паракоклюшных микробов, полученных методом ультразвуковой дезинтеграции. -Тр. Томск. НИИВС, 1970, в. 8, с. 65-67.

154. Эльпинер И.Е, Ультразвук. Физико-химическое и биологическое действие, М., Физматиздат, 1963. 364 с.

155. Эльпинер И.Е. Биофизика ультразвука. М., Наука, 1973. ~384 с.

156. Эесель А.Е. Реакция непрямой гемагглютинации. Л., Медицина, 1965, с. 23-34.

157. Adamson R.H., Fabro S. Le proprieta autitumoralli della

158. Z-asparaginasi. Acta Vitaminol. et enzymol., 1969, v.23, N 3, p.III.

159. Akiyama S. Uber die bakterizide Wirkung der Ultraschallweiten. Tohoku.J.Exp.Med., 1936, v.30,p.192.

160. Akopian V. The ultrasonic vibropotential in the biological action of ultrasound. Abstracts symposium Ultrasound in biological and medicine./UBIOMED-VI, Nove mesto na Morave, 1977, p.II.

161. Alsobrook D., Larkin J.M., Sega H.W. Effect of temperature on the cellular integrity of Bacillus psych-rophillus. Can.J.Microbiol., 1972, v.I8,N II, p.1671.

162. Anderson J.M. Effect of ultrasonic radiation on growthand fermentation in the yeast Saccharomyces ce-revisial. Biochim.,Biophys.Acta, 1953, N II, p.122.

163. Beard P.J., Gantvoort W.E. Observation and supersonic Vibration. J.Bacteriol., 1938, v.36, p.36.

164. Beckwith I.D., Weaver C.E. Sonic energy as a lethal agentfor yeast and bacteria. J.Bacteriol., 1936, H 32, p.361.

165. Bergmann Z. Der Ultraschall und Seine Aniwending in Wissenschaft und Technik. Zurich, 1954, p.7263.

166. Birch C.J., Glaun B.P., Hunt V., Irving L.G., Gust I.D.

167. Comparison of passive haemagglutination and haemagglutination-inhibition techniques for detection of antibodies to rubella virus. -J.Clin.Pathol., 1979, V.32, N 2, p.I28-I3I.

168. Bordet J., Gengou 0. L'Endotoxine coqueluche. Ann.Inst.

169. Pasteur, 1909, v.23, N 5, p.415-419«

170. Boyden S.V. The absorbtion of proteins on erythrocytestreated with tannic acid and subsequent haemaggluti-nation by antiprotein sera. J.Exp.Med., 1951, v.93, p.107-120.

171. Brading J. The use of tannic acid to link blood group 0red cells. Austral.J.exp. biol. and med., 1956, v.34, H 2, p.157-163.

172. Branton D., Deamer D.W. Membran Structus. Ann.Reev.Pl.

173. Physiol., 1969, v.20, N 2, p.209-238.

174. Buchanan T., Peeley J., Hayes P., Brachman P. Antrax indirect microhaemagglutination tests. J.Immunol., 1971, v.I07, N 6, p.1631-1636.

175. Burns V.W. Effect of sonic irridation on yeast. Radial1. Res., 1967, N 7, p.231.

176. Caselitz J.H. Ultraschall-Wirkung bei Bakterien der Salmonella Gruppe. Z.Hyg.u.Infectionskrankh., 1951» v.I33, P.II3.

177. Cerny A., Wibranolt W. Untersuchungen über Strahlen-Mmolyse, Strahlentherapie, 1942, v.72, p.202.

178. Chapman D., Kamat V.B., I. de Gier, Benkett S.A. Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopic Studies of Erythrocyte Membranes. Nature, 1967, v.213, p.82-83.

179. Chapman J.V., MacITally N.A. , Tucker S. Ultrasound induced changes in rats of influx and efflux of potassium ions in rat thymocytes in vitro. Ultrasound Med.Biol., 1980, v.6, N I, p.47-48.

180. Goakley W.T., Hampton D., Dunn P. Quantitative relationship between ultrasonic cavitation and effects upon amoebae at IMNZ. J.Acorst.Soc.America, I97I,v.50, N 6, Pt.2, p.I546-I553.

181. Crawford A. Ultrasonic engineering Biological and Medicalapplications. London Butierworths Scientific publications, 1955, p.45.

182. Csiky I. Tanninhaemagglutination-immunhaemagglutination.

183. Kiserl.ovostud., 1956, IT 3, p.I8I-I86.

184. Csizmas Z. Preparation of formalinizes erythrocytes.

185. Proc.Soc.Exp.Biol, a Med., 1968, v.103, p.160-167.

186. Dakubu S. Cell innactivation by ultrasound. Biotechnol.

187. Bio engineering, 1976, v. 18, IT 4, p. 465-471.

188. Dalsell R.C., Kinsloe H., Reid J., Ackerman E. Exposureof fields. J.Bact., 1957, v.73, p.499.

189. Davidson B.J., Riley N. Cavitation microstreaming. J.

190. Sound and Vibrat., 1971, v.15, N 2, p.217-233.

191. Deutsch K. Coating of red blood cells with antigenic substances. Nature, 1959, v.184, N 4545, p.278-279

192. Edelberg R. The action of tannic acid in model systemformed of constituens of the erythrocyte membrane.-J.cell com.physiol., 1952, v.40, N 3, p.37-50.

193. Eldering G. Symposium on pertussis immunisation. Health1. Zas.Sci., 1971, p.200.

194. Filpczynski Z. Ultrasonic in biology and medicine. Y/arsawa, 1972. 274 p.

195. Fuchtbauer H., Theismann H. Zur Wirkung des Ultraschallsauf Bacterien. Naturwiss., 1949, v.36, p.346.

196. Ghun P., Rennert 0., Saffen M., Eugene E. Effect of polyamines on the electrokinetic properties of cells.

197. Biochem. and Biophys. Res.Communs, 1976, v.69,N 4, p.1095-1101.

198. Grabar P., Royer M. La désintégration des microbes parles ultrasons. Ann.Inst.Pasteur, 1945, v.71,p.154.

199. Griffits B., Mason M.Ii. Immunochemical studies on the antigenes of Bordetella pertussis. Canad.J.Microbiol., 1964, v.10, N 2, p.138. 177* Grün Z. Zum Kiemablötung durch Ultraschall. - Funk.u.Ton., 1954, N 8, p.333.

200. Hall A. Colloquium on ultrasound bioeffects and dosimetry.1.ndon. Ultrasonics., 1975, v.13, N 2, p.89-90.

201. Hamuck P.E., Butler B.F. Exposur of Bacteria to 2450

202. MNZraicrowave radiation. J.Microwave Power, 1973, v.8, N 3, p.227.

203. Harme D. The effect of US-waves upon Klebsiella pneumonial, Sachromyces cevrevisiae Miyagavanella felis and Influenz virus. J.Bact., 1949, v.57, p.279.

204. Harold A., Annell K., Janine A. Protein synthesis en sonieally damaged. E.coli. J.Bacterid., 1967, v.94, N I, p.232.

205. Harvey E.N., Loomis A.Z. The destruction of Zuminous bacteria by high frequency sound waves. J.Bacteriol., 1928, V.I7, p.373.

206. Harvey E.K., Loomis A.Z. High Frequency Sound Waves of

207. Small Intensity and Theit Biological Effects. Nature, 1928, V.I2I, p.622.

208. Hausmann H.G., Kahler H., Koch D. Electronen-microscopische

209. Beobachtungen an Wärme und Ultraschallgeschadigten Bacterien. Z.Hyg.u.Infectionskrank., 1952,v.134,p.565.

210. Hesselberg J. Investigation on the effect of ultrasonicson bacteria. Irans of to Scandinavian Congress. -Acta pathol. et microbiol., 1952, v.93, p.389.

211. Holmes R.K., Perlow R.B. Quantitative assay of diphtherial toxin and of immunologically cross-reacting proteins by reversed passive haemagglutination. Infect. and Immun., 1975, v.12, N 6, p.I392-I400.

212. Hompesch H. Uber den Mechanismus der bacteriziden Wirkungder Ultraschallwellen. Der Ultraschall in der Medizin, 1949, N I, p.2I8.

213. Hompesch H. Untersuchungen zur Mechanismus der Bacteriziden Wirkung des Ultraschalls. îluove Cimento, 1950, v.7, N 2, p.498.

214. Horton J.P. The Effects of Intermolecular Bond Strengthon the Ovset of Cavitation. J.A.J.A., 1953, v.25, U 3, p.480-484.

215. Horwood M.P., Horton J.P., Minch Y.A. Factors influencingbactericidal action of ultrasonic waves. J.Am.Wa-ler Works Association, 1951, v.43, p.152.

216. Hrazdira J. Physical-chemical and biological effectivenessof pulse ultrasound. Proc. of SI D40II, Brno. 24-26V, 1967, p.147-151.

217. Hughes D.E. The désintégration of Bacteria and other microorganisms by the MSE. Mullard ultrasonic desintegrator. J.Biochem.Microbiol.Tech.Eng., 1961, v.3, II 4, p.405-443.

218. Hughes D.E. Biological Effects of ultrasound. Brit.J.Radiol. , 1967, v.40, II 472, p.317.

219. Hughes D.E., Hyborg W.Z. Cell disruption by Ultrasound.

220. Science, 1962, v.138, N 3537, p.l08-II4.

221. Hugo W.B. The preparation of cell free enzymes from microorganisms. Bar.rev., 1954, U 18, p.IOI.

222. Isao S., Hiroko H., Buny M. A simplified colorimetry without incineration of phosphorus in phosphorus in phosphatides. Agric. and Biol.Chem., 1967, v.31, N I, p.III-114.

223. Jark H. Thermisch und lytisch Wirkungen des Ultraschalls.- Frequens, 1952, N 6, p.255.

224. Kasahara M., Joshida K., Kambayashi H. Uber den Einflussder Ultraschall Wellen auf den Kehehmstenlaullus. -Machr.Kinderheikunde, 1938, p.72II.

225. Kasahara N., Ogata S., Kabayashi H., Joschida K. Uber den

226. Einfluss der Ultraschallwellen auf das Poliomutius virus in vitro. Monatschr.Kinderheikunde, 1937, v.73, p.79.

227. Kasahara M., Jatsumi T. Uber den Einfluss der ultraschallwellen auf den Kenchustenbazillus. Msch.k.Kinderheilkunde, 1938, V.72, p.II.

228. Kikuchi V. Ultrasonic in Medicine. Tokyo, 1973, 618 p.

229. Kimloe H., Ascerman E., Reid T. Exposur of microorganismto measured sonnd field. S.J.Bash., 1954, v.63, N 3, p.373.

230. Knapp W. Die Wirkung von Ultraschall auf Typus Bacterien.

231. Arch.Hyg., 1952, v.136, p.319.

232. Koegh E.V., North E.A., Warburton M.F. Haemagglutinins ofthe Haemophilus group. Nature, 1947, v.l60,N 4054, p.63-64.

233. Kowalska E., Kowalska W., Biccer I. Changes of some physical properties of sonated suspensions. Acustica, 1979, v.43, N 4, p.260-265.

234. Kress F. Uber die Wirkung von Ultraschall auf Brucellaabortus. Wien Tierarztl.Mschr., I947,v.34,p.639.

235. Lautrop H. Laboratory diagnosis of whooping caugh of

236. Bord.infection. Bull.Sorid.Organ., I960, v.29,H I, p.15-35.

237. Lowry O.H., Rosebrough C.J., Fair A.L., Bandale R.J. Protein measurement with the Folin phend reagent. -J.Biol.Chem., 1951, v.193, N I, p.256-279.

238. Manne1 D., Mayer H. Serological and immunological properties of isolated enterobacterial common antigen. -Eur.J.Biochem., 1978, v.86, N 2, p.371-379.

239. Mebel S. On the serology of Bordetella pertussis 3 Biological investigations of antigen fractions of ultrasonic extract obtained by columu chromatography on DEAE-cellulose (Orig A). 1974, p.241-247.

240. Miller M.W., Lange C., Griffits T.D. Ultrasound lethalityto synchronous and asynchronous Chinese hamster V-79 cells. Ultrasound in Med. and Biol., 1980, v.6, Ii I, p.39-46.

241. Millman J., Schuchardt L. purification and concentrationof pertussis protective antigen. Rond Table conference on Pertussis immunisation, Prague, 1962, p.I.

242. Millman J., Schuchardt L.P., Gray A. Purification and concentration of pertussis protective antigen. Round Table conference on pertussis Immunisation. Praha, 1962, N I, p.43-58.

243. Müller D.L. Disagregation of vacinia virus with ultrasoniccleaners. Arch.Vird., 1976, v.51, Ii 4, p.365-367.

244. Müller D.L. Cell desth thresholds in dodea for 0,45-10 muzultrasound compared to gas-bodyresonance theory. -Ultrasound in Hed. and Biol., 1979, v.5, N 4,p.351-357.

245. Hakase V., Doi M., Kasuga T. Hemagglutinogen Substance of

246. Bord.pertussis. International symposium on bacterial toxins, 1974, p.8-14.

247. Hakase Y., Doi M., Kasuga T. Hemagglutinating substanceof Bordetella pertussis. Jap.J.Med.Sci.Biol.,1975, v.28, H I, p.57-58.

248. Hakase Y., Kasuga T. Purifiend K-agglutinogen of Bordetel .la pertussis and its properties. Jap.J.Microbiol., 1971, v.I5, H 3, p.247-256.

249. Iiermut M.V. Structural Arrangement of Bacterial all Walls.- Folia microbiologica, 1967, v. 12, IT 3, p.201-203.

250. Hyborg W.L. Cavitation in biological systems. In:Tiniteamplitude ware effects in fluids. Sci. and Tech-nol.Press.London, 1974, p.245-251.

251. Nyborg W.Z. Structural mechanisms for biological effectsof ultrasound. DHEW publ.(PDA) 1978, v.78,p.8062.

252. Paul S. The method determination of nitrogen-Analyst,1958,v.83, p.37.

253. Perlov R., Holmes R. Quantitative assay of diphtherial toxin and of immunologically cross-reacting proteins by reversed passive hemagglutination. Infect.and Immun., 1975, v.12, H 6, p.1392-1400.

254. Pillemer L. Adsorption of protective antigen of H.pertussis on human red cell stromata. Proc.Soc.Exp.Biol. Med., 1950, v.75, H 3, p.704-705.

255. Pillemer L., Blum L., Lepow S. Protective antigen of H.pertussis. The Lancet, 1954, v.68251, H 266,p.1257-1260.

256. Pinamonti S., Usalengo P.E., Mozzeo V. Further experiments in pulse-chysonication of erytrocytes in vitro ultrasound in Medicine. Plenum Press.New York, London, 1976, v.315, P.2I0I-2II0.

257. Pinamonti S., Mozzeo V., Uzalengo P.E. Effects of Pulse

258. Ultrasound in vitro of lymphocytes Membrane Antigens 4th Wared Congs on Ultrasonics in Medicine. -Megazaki, Japan (Abstract) 1979, p.419.

259. Purified K. Agglutinogen of Bordetella pertussis and itsproperties. Jap.J.Microbiol., 1971, N 15, p.247-256.

260. Pustai Z., Eckhardt E., Jaszovsky J., Joo J. Fractionation of B.p. Symp.Series immunol.Stanar. Kargen, Basel, 1966, Ii 7, p.3.

261. Pustai Z., Eckhardt E., Jaszovsky J., Joo Z. Fractionationof Bordetella pertussis antigens. Annales immunologie, Hungarical, 1967, v.10, p.55-62.

262. Reid F.M., Sikow M.K. Interaction of ultrasound and biological tissues us Depr. Health, Maryland, 1972. -318 p.

263. Reiman K., Lind J. An indirect haemagglutination test fordemonstration of gonococcal antibodies using gonococcal puli os antigen. Acta pathol. et microbiol. scand., 1977, v.85, N 2, p.II5-I22.

264. Ribi E., Larson S. Antigens of Bordetella pertussis I Adivitus of cellwalls and protoplasm. J.Immunol.,1959 N 13, p.68.

265. Rooney J.A. Hemolysis near an ultrasonically pulsating gasbubble. Science, 1970, v.169, N 3, p.869-871.

266. Rooney J.A. Biological effects from sonic shearing. A.Review. Interaction of ultrasound and biological tissues. Proc.workspop U.S.Department of Health, Education and Welfare.Washington, 1972, p.93-98.

267. Royer M., Grabar P., Prudhomme R. Adion des ultrasons surantigens. Compl.Rend.Conor.Int. de Microbiol, de Copenhague, 1947, p.141.

268. Sakane T., Green Z. J.Immunol., 1977, v.II9,p.H69-H78.

269. Salton M.R.J. In the bacteria, N.Y.-London, I960,v.I,p.97.

270. Salton M.R.J. The bacterial cell wall. Amsterdam.Ii.Y.1.ndon, 1964, p.149-163.

271. Sato V. Toxic factors of Bord.pertussis with special reference to leucocytosis-promoting factor histamine-sensitizing factor and hemagglutinins. J.Protein Nucleic Acid and Enzyme, 1976, v.21, p.164-183«241. Sato V.

272. Sato V., Arai H. Partial purification and some propertiesof the leucocytosis-promoting material from Bord. pertussis. Jap.J.med.Sci.and Biol., 1970, v.23, N 4, p.273-276.

273. Sato V., Arai H. Leucocytosis-promoting factor of Bord.pertussis. I. Purification and characterisation. -Infect.Immun., 1972, v.6, p.899-904.

274. Sato V., Arai H. Cell components of B.pertussis and theirbiological activities. Protein Nucleic Acid Enzyme 1972, v.I7, p.139-141.

275. Sato V., Arai H., Suzuki K. Leucocytosis-promoting factorof Bord.pertussis. II.Biological properties.-Infect, and Immun., 1973, v.7, N 6, p.992-999.

276. Sato V., Arai H., Suzuki K. Leucocytosis-promoting factorfrom Bord.pertussis. III. Its Identity with Protective Antigen. Infect, and Immun., 1974, v.9, N 5, p.801-810.

277. Sato Y., Nakase K. Isolation of protective antigen from

278. Bord.pertussis. Biophys.Biochem.Res.Commun., 1967, v.27, p.195-201.

279. Saut J.M., Brisset G. The diagnosis of aspergilles by passive hemagglutination. Biomedicine, 1973, v.19, N 8, p.365-368.

280. Schmidt 7/.A. Ein Latex-Agglutinations test (Latest) zur

281. Typen bestimmung von Enteroviren. Arch, des Virus-foesch., 1973, v.43, N 3, p.213-220.

282. Schubert J.H., Eleff M.C., Hermann G. Hemagglutinationtest for pertussis antibody with a soluble extract of Bordetella pertussis. Amer.J.Publ.Health,1961, v.51, N 3, p.441-445.

283. Sherbet G.V. Biophysical Characterisation of the Cell Surface Acad.Press.Z., N.Y.J.Francisco, 1978,- 298 p.

284. Seaman G.V.P., Wassar P.S. Changes in the Electrokineticproperties of platelek during their aggregation. -Arch.Biochem. and Biophys., 1966, v.117, p.10.

285. Stephens R.J., Hart L.P., Forbit C.A., Edmons P.D. Reproductible subcellular alterations in hepatocyte resul ting from ultrasound. Ultrasound in Medicine and Biology, 1980, v.6, N 3, p.239-249.

286. Sutchffe E.M. Selective medium for the isolation of Bordetella pertussis and. parapertussis. Journal of Chemical Pathology, 1972, v.25, p.732-733.

287. Takahashi V. Hemagglutination reaction by the phosphatideof the tubercule bacillus. Science, I960, v.127» N 33, p.1053-1054.

288. Tannenberg W.J.K. Induction of I9S antibody synthesis without stimulation of cellular proliferation. Nature, 1967, v.2I4, p.293.

289. Tokuda G., Warrington R. Detection of Poet and Mouth Disese varus Antibodies I Passive Hemagglutination Test. Appl.Microbiol. , 1970, IT 20, p.35-39.

290. Tympner R.D., Wenhaus P. Der IgM-Latex-Test. Ein einfaches

291. Verfahren zur schnellen llachweis vor Infektionen in der Neugeborenenperiode. Deutsch. und Wochenschr., 1972, V.97, N 52, p.2003-2006.

292. Ultrasound in Medicine. Proc. of the II World Congress Rotterdam, 1973, Publ.Exerhla Medica Amsterdam, 1974, -364 p.

293. Ultrasound in Medicine. Val. I. Proc. 19th Annual Meetingof the Amer.Inst, of Ultrasound in Med. Ed. by D.White. Plenum Press. New York-London, 1975, 5H p.

294. Ungar J., Muggleton P.W., Stevens W.R. The type specificity of H.pertussis. The J. of Hygiene, I964, v.52, N 4, p.475-485.

295. Vanra H., Uakagara W. Effect of short exposure to supersonie woves on vaccine virus and some bacteria. -J.Bacteriol., 1934, Ii 12, p.131.

296. Veitmann G., Woeber K. Beitrag zur bacteriziden Wirkungdes Ultraschalls Stahentheraf, 1949, v.79, p.587.

297. Veitmann G., Woeber K. Untersuchungen über die biologische

298. Dosierung des Ultraschalls an Bacteria. Nuovo Cimento, 1950, v.7, N 2, p.525.

299. Ven A.K.S., Szu-Chin-Lui. Effect of supersonic Waves on

300. Bacteria. Proc.Soc.Exp.Biol, a Med., 1934, v.31, p.1250.267» Veress E. On the factors which determine the destruction of the erytrocytes in the ultrasonic fields. Symposium UBIOMED-3 Nove Mesto na Morave, 1977, p.12.

301. Veress E., Vineze J. The haenulysing action of ultrasoundon erythrocytes. Acustica, 1976, v.36, N 2,p.100-103.

302. Wardlaw A.C., Parton R., Hooker M.J. Loss of protectiveantigen, histamine sensitizing factor and envelope polypeptides in cultural variants of Bord.pertussis. J.Med.Microbiol., 1976, N 9, p.89-100.

303. Wardlaw A.C., Parton R. Changes in envelope proteins andcorrelation with biological activities in Bordetella pertussis. Conference Abstac.Intern.Symp. on pertussis. Maryland, 1978, p.179-182.

304. Warneke B. Bacteriologische Ultraschallstadies. L.Hug.1.fektionskr., 1953, v.17, p.138.

305. Webster D.K., Pokil J.B., Dyson M., Horvey W. Role of cavitation in the in vitro stimulation of protein synthesis in human fibroblasts by ultrasound. Ultraso und in Med. and Biol., 1978, 1J 4, p.343-351.

306. Weinbach R. Die Verwendbarkeit formalbehandetter Erythrozyten als Antigenträge in der indirekten Haemagglu-tination. J.Mitteilung, Schw.Ztschr.,Allg.Pathol., Bacteriol., I960, v.2I, p.I043-I052.

307. White D.M. The current and future role of ultrasound inmedicine. In: Ultrasonics symposium proceesings.Uew York, 1972, p.44-53.

308. White D.M. Ultrasound in medical diagnosis. Canada, 1976,400 p.

309. Wiethe D.M. Klinische Erfahrungen mit Ultraschall. Wien.

310. Klin.U., 1979, N 2, p.134-136.

311. Williams A.K. A possible alteration in the permeability ofascitas cell membranes after exposure to acoustic microstreaming. J.Cell.Sei., 1973, N 12, p.875-885

312. Williams A.K., Sykes S.M., O'Briln N.D. Ultrasonic exposure modifres, platelet morphology and function in vitro. Ultrasound in Med. and Biol., 1976, v.2, N 4, p.311-317