Протеомные технологии в диагностике грибовидного микоза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.10, кандидат медицинских наук Братцева, Екатерина Валериевна

• Братцева, Екатерина Валериевна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Братцева, Екатерина Валериевна

Страница

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ И НОВЫЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ГРИБОВИДНОГО МИКОЗА.

1.1.Диагностика грибовидного микоза на современном этапе.

1.2.Разнообразие клинических проявлений грибовидного микоза.

1.2.Гистологическое исследование в диагностике грибовидного микоза.

1.3.Иммунофенотипические методы в диагностике грибовидного микоза.

1.4.Молекулярно-биологические методы в диагностике грибовидного микоза.

1.5.Новые методы диагностики и маркеры ГМ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Клиническая характеристика больных.

2.2. Лабораторные методы исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОТЕОМНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ГРИБОВИДНЫМ МИКОЗОМ.

3.1. Общая клиническая характеристика больных.

3.2. Клинические наблюдения.

3.3. Результаты исследования с применением метода масс-спектрометрии.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ УРОВНЯ ЦИТОКИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ГРИБОВИДНЫМ МИКОЗОМ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ хМАР.

4.1. Результаты исследования цитокинов в сыворотке крови больных ГМ, псориазом и здоровых доноров крови.

4.2.Оценка качества экспериментальной диагностической модели, основанной на определении цитокинов в сыворотке крови.

4.3. Использование панели цитокинов с целью увеличения точности диагностики ГМ.

4.4.Анализ уровня цитокинов в сыворотке крови больных грибовидным микозом на разных стадиях заболевания.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Протеомные технологии в диагностике грибовидного микоза»

Актуальность проблемы

Первичные Т-клеточные лимфомы кожи (ТКЛК) представляют собой клинически и биологически гетерогенную группу неходжкинских лимфом. Они характеризуются клональной пролиферацией и миграцией в кожу атипичных Т-лимфоцитов или NK-клеток, при этом в период обследования пациента с целью постановки диагноза не обнаруживаются внекожные очаги роста опухоли. Классификация Всемирной Организации Здравоохранения и Европейской Организации по Исследованию и Лечению Рака (WHO-EORTC) насчитывает 8 видов первичных Т-клеточных лимфом кожи (Swerdlow S.H. и соавт., 2008). Наиболее распространенной из них является грибовидный микоз (<mycosis fungoides, ГМ), составляющий более 50% первичных лимфом кожи (Y.H. Kim и соавт., 2003).

Диагностика ГМ, особенно на-ранних (1-Й) стадиях заболевания, является одной из наиболее сложных проблем в практике дерматовенеролога (И.Э. Белоусова, 2009, A.A. Каламкарян, 1983). По данным отечественных и зарубежных авторов, от начала заболевания пациента до постановки диагноза ГМ проходит от нескольких месяцев до 7 лет (а по некоторым данным и до 40 лет) (P. Lenane и соавт., 2007, Г.Н. Тарасенко и соавт., 2006). В настоящее время не существует единой точки зрения на диагностический алгоритм ГМ (а, 2007, P. Lenane и соавт., 2007, N. Pimpinelli и соавт., 2005, S.J. Whittaker и соавт., 2003). Однако большинство авторов сходятся во мнении, что диагностика ГМ основывается на клинической картине заболевания, данных гистологического и иммунофенотипического исследований, вспомогательным методом диагностики является ПЦР-анализ клональной перестройки гена Т-клеточного рецептора (N. Pimpinelli и соавт., 2005).

Трудности в диагностике ГМ заключаются в разнообразии его клинических проявлений, а также их сходстве с проявлениями хронических воспалительных дерматозов, особенно на ранних стадиях ГМ (H.S. Zackheim и соавт., 2002). Необходимо также отметить, что грибовидный микоз имеет не только большие клинические сходства с хроническими воспалительными дерматозами, но и некоторые общие иммунопатологические механизмы. Например, на ранних стадиях в иммунопатогенезе грибовидного микоза ведущую роль играют Thl-лимфоциты, и преобладает соответствующий цитокиновый профиль, что сближает это заболевание с псориазом, как Thl-обусловленным заболеванием (С.Е. Griffiths и соавт., 2007, U. Mrowietz и соавт., 2009). Кроме того, в эпидермальном инфильтрате при псориазе в некоторых случаях выявляется клональность Т-лимфоцитов, что дает основание некоторым автором причислять псориаз «клональным дерматозом» (J.C. Chang и соавт., 1997, W.J. Lin и соавт., 2001, S. Vollmer и соавт., 2001).

Точность клинического диагноза ГМ, подтвержденного гистологическим методом, составляет от 50 до 75%. По данным G. Burg и соавт., точность иммунофенотипического исследования на поздних стадиях ГМ достигает 80% (G. Burg и соавт., 2005), однако на ранних стадиях заболевания точность диагностики оказывается ниже(А.Н. Родионов и соавт., 1997, И.Э. Белоусова, 2009, И.Б. Трофимова, 1997).

Все перечисленные исследования требуют проведения биопсии кожи. А с учетом того, что диагноз ГМ на ранних стадиях представляет большие затруднения, биопсии проводятся многократно на протяжении нескольких лет. То есть, для постановки точного диагноза пациент вынужден многократно подвергаться инвазивному вмешательству - биопсии кожи.

С целью совершенствования диагностики наиболее перспективным в настоящее время является поиск сывороточных биомаркеров различных заболеваний, в особенности онкологических (М.А. Tainsky, 2009). На 7 протяжении последних лет появились сообщения об успешном применении протеомного профилирования для поиска биомаркеров с целью совершенствования диагностики и расширения знаний в области патогенеза различных заболеваний (E.F. Petricoin и соавт., 2002, F. Simpkins и соавт., 2005), прогноза течения заболеваний (М. Albitar и соавт., 2006, G. Ricolleau и соавт., 2006), оценки эффективности терапии (V. Espina и соавт., 2004). Преимуществом протеомного профилирования по сравнению с исследованиями генома и транскриптома является то, что за конечную реализацию основных биохимических функций организма отвечают именно белки, поэтому изменения в белковом профиле могут быть непосредственно связаны с патофизиологическими процессами.

Протеомные технологии представлены достаточно широким спектром различных методов. Одной из самых мощных и широко применяемых в целях поиска биомаркеров технологий является масс-спектрометрия MALDI-TOF, позволяющая получать информацию сразу о сотнях белков(В.М. Говорун и соавт., 2002, Т.С. Рооп, 2007). Однако применение масс-спектрометрии ограничивается чувствительностью этого метода, т.е. ограниченной способностью детектировать белки/пептиды, представленные в сыворотке крови в низких концентрациях.

Для изучения таких белков возможно применение технологии хМАР, дающей возможность проводить количественное определение десятков целевых белков одновременно. В качестве целевых белков в настоящем исследовании были выбраны цитокины, так как они играют ведущую роль в патогенезе ТКЛК, в том числе ГМ. В этом случае продукция цитокинов осуществляется как атипичными лимфоцитами, так и различными иммунными клетками окружения. Предложен ряд цитокинов и факторов ангиогенеза в качестве биомаркеров для ранней диагностики или прогноза течения лимфомы Ходжкина (R.O. Casasnovas и соавт., 2007) и некоторых неходжкинских лимфом(Х Cortes и соавт., 1997, L.M. Pedersen и соавт., 2005, Р. Salven и соавт., 2000, S.I. Labidi и соавт., 2009).

Нам не удалось обнаружить отечественных работ с применением протеомных технологий в изучении ГМ, а число работ иностранных исследователей очень ограничено.

Все изложенное определило цель и задачи работы.

Цель исследования: Установить молекулярные маркеры грибовидного микоза на основании результатов изучения протеомного и цитокинового профилей сыворотки крови с целью разработки алгоритма диагностики заболевания.

Задачи исследования:

1 Провести анализ анамнестических данных больных грибовидным микозом для оценки своевременности диагностики данного заболевания

2 Исследовать протеомные профили сывороток крови больных грибовидным микозом, псориазом и здоровых доноров крови методом масс-спектрометрии MALDI-TOF

3 Изучить уровень цитокинов в сыворотке крови больных грибовидным микозом с помощью технологии хМАР на различных стадиях заболевания

4 Провести сравнительное изучение протеомного и цитокинового профилей сыворотки крови больных грибовидным микозом, псориазом и здоровых доноров с целью выявления молекулярных маркеров грибовидного микоза

5 Разработать алгоритм диагностики грибовидного микоза на основании данных, полученных в результате исследования профилей белков и цитокинов сыворотки крови.

Научная новизна

- впервые в России изучен протеомный профиль сыворотки крови больных грибовидным микозом с применением метода МАГЛИ-ТОБ масс-спектрометрии. При сравнении протеомных профилей сыворотки крови больных грибовидным микозом, больных псориазом и здоровых людей -доноров крови выявлены пики белков, которые достоверно отличаются у обследованных лиц.

- впервые изучен широкий профиль из 27 цитокинов в сыворотке крови больных грибовидным микозом с применением технологии хМАР. Выявлена прямая корреляционная связь концентрации цитокинов 1Р-10 и 1Ь-10, а также обратная корреляционная связь концентрации цитокина КАЫТЕЗ в сыворотке крови больных грибовидным микозом со стадиями заболевания, что подтверждает патогенетическую значимость данных цитокинов.

- впервые в сыворотке крови больных грибовидным микозом установлено достоверное увеличение концентрации цитокина 1Р-10 по сравнению с концентрацией этого цитокина у больных псориазом, а также увеличение концентрации цитокинов ГР-10, 1Ь-4, 1Ь-1га и в-СЯР по сравнению с их концентрацией в сыворотке крови здоровых доноров. На основании проведенных исследований установлено, что цитокин 1Р-10 может использоваться в качестве диагностического маркера грибовидного микоза.

- впервые разработан алгоритм диагностики грибовидного микоза, обладающий высокой точностью и основанный на определении в сыворотке крови концентрации цитокина 1Р-10. При дифференциальной диагностике грибовидного микоза и псориаза алгоритм основывается на последовательном определении концентрации в сыворотке крови концентрации цитокинов 1Р-10 и 1Ь-6 и имеет вид «древа принятия решений».

Практическая значимость:

В сыворотке крови обследованных больных выявлены молекулярные маркеры грибовидного микоза. С применением данных маркеров разработан алгоритм, позволяющий диагностировать грибовидный микоз и, в необходимых случаях, провести его дифференциальную диагностику с псориазом. Применение алгоритма диагностики грибовидного микоза позволит своевременно выявить больных «группы риска» по развитию данного заболевания для диспансерного наблюдения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Установлено, что длительность периода от момента появления первых симптомов заболевания у пациентов до постановки диагноза «грибовидный микоз» составляет от 1 месяца до 23 лет (5,5 лет ± 0,84 года), при этом у 23,1% больных грибовидный микоз диагностируется на третьей стадии заболевания.

2. Выявлены масс-спектрометрические пики белков, являющиеся молекулярными маркерами грибовидного микоза. Точность диагностики с применением данных маркеров составляет 69-75%, качество диагностики по данным 1ЮС-анализа расценивается как хорошее (АЦК>0,7).

3. Выявлены 4 цитокина (1Р-10, 1Ь-4, 1Ь-1га и О-СЗБ), уровень экспрессии которых достоверно отличается у больных грибовидным микозом и здоровых доноров крови (р<0.05). Уровень экспрессии цитокина 1Р-10 у больных грибовидным микозом достоверно выше, чем у больных псориазом (р<0,001), что позволяет использовать его в дифференциальной диагностике этих заболеваний.

4. Установлена прямая корреляция концентрационная связь цитокинов 1Р-10 и 1Ь-10 и обратная корреляционная связь цитокинов КАЫТЕБ в сыворотке крови больных грибовидным микозом со стадиями заболевания, что свидетельствует об их патогенетической роли при данном заболевании.

5. Показана высокая точность разработанного алгоритма диагностики грибовидного микоза, а также возможность выявления с его помощью больных, относящихся к группам риска по развитию грибовидного микоза.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в лекционный курс кафедры дерматовенерологии лечебного факультета Российского государственного медицинского университета и врачей ординаторов ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий».

Апробация и публикация материалов исследования:

Основные материалы диссертации представлены и обсуждены на научно-практической конференции ГУ НИКВИ МЗ РФ «Протеомные технологии в дерматовенерологии» (Москва, 2007 г.)

По материалам диссертации опубликовано 3 работы, из них 1 - в журнале, входящем в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий», рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав с описанием данных литературы и результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, содержащего 16 отечественных и 149 зарубежных источника. Диссертация изложена на 129 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 15 таблицами, 29 рисунками, 10 фотографиями.

Заключение диссертации по теме «Кожные и венерические болезни», Братцева, Екатерина Валериевна

выводы

1. При анализе данных анамнеза больных грибовидным микозом установлено, что длительность периода от момента появления первых симптомов заболевания до постановки диагноза «грибовидный микоз» составила от 1 месяца до 23 лет (5,5 лет ± 0,84 года), при этом 23,1% пациентов уже имели III стадию заболевания.

2. Изучение протеомных профилей сыворотки крови больных грибовидным микозом и псориазом методом MALDI-TOF показало наличие 2 пиков белков с m/z 4326 Да и 7674 Да (р<0,05), позволяющих их использовать для дифференциальной диагностике этих заболеваний с точностью 69% и 75% соответственно. Качество диагностики с применением этих пиков по результатам ROC-анализа расценивается как хорошее (AUC>0,7).

Выявлены 3 масс-спектрометрических пика белков с m/z 14689 Да; 7848 Да и 4184 Да, концентрация которых в сыворотке крови достоверно отличается (р<0,05) у больных грибовидным микозом и здоровых доноров крови. Точность диагностики в этом случае составляет 73%, 75% и 73% соответственно, ее качество по результатам ROC-анализа расценивается как хорошее (AUC>0,7).

3. При изучении уровня цитокинов в сыворотке крови с применением технологии хМАР было показано, что у больных грибовидным микозом определяется значительное увеличение концентрации 4 цитокинов: IL-Ira, G-CSF, IP-10 (р<0,001) и IL-4 (р<0,05) по сравнению с результатами здоровых лиц, и цитокина IP-10 (р<0,001) - по сравнению с больными псориазом.

4. Выявлена прямая корреляционная связь концентрации цитокинов IP-10 и IL-10 (rs=0,52 и 0,5 при р=0,05) и обратная корреляционная связь концентрации цитокина RANTES (rs=0,51 при р=0,05) в сыворотке крови больных грибовидным микозом со стадиями заболевания, что указывает на патогенетическую значимость этих цитокинов при данном заболевании.

5. Разработан алгоритм диагностики грибовидного микоза, основанный на определении концентрации цитокина 1Р-10. При уровне 1Р-10 в сыворотке крови выше 5,3 нг/мл, точность диагноза грибовидный микоз составляет 76,9%. Качество алгоритма по результатам ЯОС-анализа расценивается как очень хорошее (АиС>0,8). В случае необходимости дифференциальной диагностики грибовидного микоза и псориаза возможно применение алгоритма, основанного на последовательном определении в сыворотке крови концентрации цитокинов 1Р-10 и 1Ь-6 и имеющего вид «древа принятия решений». Точность данного алгоритма диагностики составляет 90%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы отмечается рост заболеваемости первичными лимфомами кожи, в том числе грибовидным микозом. Единого диагностического алгоритма грибовидного микоза в настоящее время не существует. Большинство отечественных и зарубежных авторов сходятся во мнении, что диагностика должна основываться на клинической картине заболевания, для подтверждения диагноза должны применяться гистологический и иммунофенотипический методы исследования. ПЦР-анализ клональной перестройки гена Т-клеточного рецептора на настоящий момент является вспомогательным методом.

Однако диагностика грибовидного микоза, особенно на ранних (1-Й) стадиях заболевания, является одной из наиболее сложных в практике дерматовенеролога. Все перечисленные исследования требуют проведения биопсии кожи. А с учетом того, что диагноз ГМ на ранних стадиях представляет затруднения, биопсии проводятся многократно на протяжении нескольких лет. То есть, для постановки точного диагноза пациент вынужден многократно подвергаться инвазивному вмешательству - биопсии кожи. По данным отечественных и зарубежных авторов, от начала заболевания пациента до постановки диагноза «грибовидный микоз» проходит от нескольких месяцев до 10 лет, к этому моменту более 20% пациентов уже имеют III стадию заболевания или внекожные очаги распространения патологического процесса.

Поэтому, по-прежнему, остается актуальной проблема поиска новых методов диагностики и биологических маркеров этого заболевания. В последние годы появились сообщения об успешном применении протеомного профилирования для поиска биомаркеров с целью совершенствования диагностики и расширения знаний в области патогенеза различных заболеваний, прогноза их течения и оценки эффективности терапии.

Преимуществом протеомиого профилирования по сравнению с исследованиями генома и транскриптома является то, что за конечную реализацию основных биохимических функций организма отвечают именно белки, поэтому изменения в белковом профиле могут быть непосредственно связаны с патофизиологическими процессами.

Протеомные технологии представлены достаточно широким спектром различных методов. Одной из самых мощных и широко применяемых в целях поиска биомаркеров технологий является масс-спектрометрия МА1ЛЭ1-ТОР, позволяющая получать информацию сразу о сотнях белков. Однако применение масс-спектрометрии ограничивается чувствительностью этого метода, т.е. ограниченной способностью детектировать белки/пептиды, представленные в сыворотке крови в низких концентрациях. Для изучения таких белков возможно применение технологии хМАР, дающей возможность проводить количественное определение десятков целевых белков одновременно.

По нашему мнению в качестве целевых белков наиболее перспективно использовать цитокины, так как они играют ведущую роль в патогенезе Т-клеточных лимфом кожи. При этих заболеваниях продукция цитокинов осуществляется не только атипичными лимфоцитами, но и различными иммунными и неиммунными клетками окружения. Нам не удалось обнаружить отечественных работ с применением протеомных технологий в изучении ГМ, а число работ иностранных исследователей очень ограничено.

Целью нашей работы было выявление диагностически значимых молекулярных маркеров в сыворотке крови больных грибовидным с применением протеомных методов исследования. В основу работы положены результаты комплексного клинико-лабораторного исследования сывороток крови больных грибовидным микозом, псориазом и здоровых доноров крови.

Основу работы составило наблюдение за 39 больными с верифицированным гистологическим и иммунофенотипическим методами

103 диагнозом «грибовидный микоз»: 23 женщины и 16 мужчин (59% и 41% соответственно), в возрасте от 28 до 82 лет, средний возраст которых составил 57,4 ± 2,2 лет [среднее ± ст.ош.ср.]. Возраст дебюта ГМ варьировал от 26 до 71 года (46,1 ± 2,26 лет). Длительность течения заболевания составляла от 2 до 36 лет (10,3 ± 1,23 лет).

Клиническая картина отличалась разнообразием проявлений, особенно на ранних стадиях грибовидного микоза, и у большинства пациентов соответствовала стадии заболевания. При обследовании пациентов тщательно изучался анамнез заболевания, данные о полученном ранее лечении и эффективности проводимой терапии, сведения о перенесенных и сопутствующих заболеваниях.

Длительность заболевания (от момента появления первых симптомов) до постановки диагноза ГМ составила от 1 месяца до 23 лет (5,5 ± 0,84 года). На момент постановки диагноза 43,6% пациентов имели I стадию заболевания, 33,3% пациентов -II стадию и 23,1% - III стадию. При этом только у 18% пациентов диагноз ГМ был поставлен первоначально, у остальных больных неверно диагностировались другие заболевания кожи (15% пациентов имели более 2-х диагнозов). По поводу неверно диагностированных заболеваний кожи пациенты получали лечение такими системными препаратами как метотрексат, неотигазон, циклоспорин, препараты ГКС, плаквенил.

Согласно критериям включения пациентов в лабораторное исследование, из группы больных ГМ в исследования с применением протеомных методов было включено 23 пациента с грибовидным микозом. Контрольную группу составили 29 пациентов с диагнозом псориаз, а также 22 здоровых человека -доноров крови. У всех пациентов проводился забор венозной крови, из которой затем получали сыворотку.

Сыворотки крови больных грибовидным микозом, псориазом и здоровых доноров были проанализированы методом МАЫЛ-ТОР масс-спектрометрии на

104 приборе Autoflex, «Bruker Daltonics». Сравнение групп проводили по 182 пикам. На первом этапе статистической обработки данных проводилась проверка диагностической модели с использованием отдельных масс-спектрометрических пиков. Для определения точности диагностической модели, основанной на выбранных пиках, применяли метод ROC-анализа, рассчитывали точность, чувствительность и специфичность, PPV. На втором этапе проводили разработку диагностической модели с применением панели пиков.

При сравнении протеомных профилей сывороток крови больных ГМ и псориазом были выявлены достоверные различия по 2 белковым пикам с m/z 4326 и 7674 Да (р<0,05). Качество экспериментальной диагоностической модели, с применением этих пиков, по результатам ROC-анализа расценивается как хорошее (AUC>0,7). Чувствительность диагностики составляет 65.2% (60,9%), специфичность — 60,9% (75,9%) соответственно.

При сравнении протеомных профилей сывороток крови больных ГМ и здоровых людей достоверные различия были обнаружены по 3 белковым пикам с m/z 14689Да, 7848 Да и 4184 Да (р<0,05). Качество экспериментальной диагоностической модели, с применением этих пиков, по результатам ROC-анализа расценивается как хорошее (AUC>0,7). Чувствительность диагностики составляет 78.2% (69,5% и 56,5%), специфичность - 77,2% (81,8% и 86,3%) соответственно. В нашей работе не проводилось исследование природы диагностически-значимых пиков, однако применение непараметрических статистических критериев позволяет нам сделать заключение, что они имеют биологический смысл и не являются артефактами.

Точность экспериментальной диагностической модели, основанной на панели пиков, не превышала 77%. Таким образом, было показано, что наиболее перспективным является разработка метода диагностики грибовидного микоза с применением отдельных пиков белков.

С целью обнаружения молекулярных маркеров, представленных в сыворотке крови в более низких концентрациях, чем это возможно определить методами масс-спектрометрии, нами был проведен анализ ряда целевых белков с применением технологии хМАР. В качестве целевых белков были выбраны цитокины, так как они играют ведущую роль в патогенезе ТКЛК. На приборе BioPlex-200, «BioRad», в сыворотках крови больных ГМ, псориазом и здоровых людей было проанализировано содержание 27 цитокинов: PDGF-bb, IL-lb, IL-lra, IL-2, EL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, Eotaxin, FGF basic, G-CSF, GM-CSF, IFN-y, IP-10, MCP-1(MCAF), MIP-la, MIP-lb, RANTES, TNF-a, VEGF. Для разработки диагностической модели грибовидного микоза проводилось сравнение концентраций перечисленных выше цитокинов в трех группах пациентов. Для оценки диагностической значимости обнаруженных маркеров использовали ROC-анализ, рассчитывали точность, чувствительность и-специфичность, PPV.

При сравнении данных в группах больных грибовидным микозом и псориазом было установлено достоверное увеличение концентрации IP-10 (р=0,00029) у больных грибовидным микозом. При сравнении сывороток крови больных гриьбовидным микозом и по сравнению с здоровых людей выявлено увеличение концентрации 4 цитокинов: IL-lra, G-CSF, IP-10 (р<0,001) и IL-4 (р<0,05).

В работе проводилась оценка корреляция концентрации 27 цитокинов цитокинов в сыворотке крови со стадией грибовидного микоза. Нами выявлено, что концентрация цитокинов IL-10 и IP-10 в крови больных грибовидным микозом повышается по мере увеличения тяжести заболевания (коэффициент корреляции (rs) 0,52 и 0,51 соответственно, при р=0,05). Напротив, концентрация цитокина RANTES снижается при увеличении тяжести заболевания (rs=0,5, при р=0,05). Полученные данные позволяют сделать заключение о важной роли цитокинов, в особенности IP-10, в патогенезе

106

I * грибовидного микоза и подтверждают перспективность их использования в качестве маркеров ГМ.

Таким образом, наибольший интерес в качестве биологического маркера грибовидного микоза, на наш взгляд, представляет хемокин 1Р-10. С применением этого маркера нами было разработано несколько алгоритмов диагностики грибовидного микоза.

Первый диагностический алгоритм заключается в определении концентрации 1Р-10 в сыворотке крови. Грибовидный микоз возможно дифференцировать от псориаза при концентрации 1Р-10 выше 5264 пг/мл. Чувствительность диагностики в этом случае составляет 65%, специфичность -86,2%. Качество данной диагностической модели по результатам ЯОС-анализа расценивается как очень хорошее (АиС>0,8).

Распространенным подходом к увеличению точности диагностики является совместное использование нескольких маркеров, поэтому два следующих алгоритма основаны на определении в сыворотке крови двух и более цитокинов.

В основу второго алгоритма положенпринцип «древа принятия решений», который заключается в последовательном определении в сыворотке крови концентрации двух цитокинов: ГР-10 и 1Ь-6. Точность диагностики с применением этого алгоритма составляет 90%. Кроме того, он позволяет выявлять пациентов из «группы риска», которые далее могут быть направлены на дополнительное обследование или поставлены на диспансерный учет.

Третий диагностический алгоритм ГМ основана на определении в сыворотке крови концентрации 27 цитокинов и статистической обработке данных с применением линейного дискриминанта Фишера. Точность диагностики при этом составляет 80%.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Братцева, Екатерина Валериевна, 2010 год

1. Белоусова И.Э. Клинико-морфологическая дифференциальная диагностика первичных лимфом кожи, псевдолимфом кожи и парапсориазов./Белоусова И.Э. Автореф. дис. . докт. мед. наук, СПб., 2009. - 36 с.

2. Вавилов A.M. Морфологическая диагностика злокачественных опухолей кожи (Опухоли придатков кожи, злокачественные лимфомы кожи). Методические рекомендации / Вавилов A.M., Персина И.С., Аковбян В.А. идр.-М., 1989.

3. Власов В.В. Эпидемиология. Учебное пособие для вузов. / Власов В.В., -М.: Изд. группа «ГЭОТАР-Медиа», 2005. .

4. Говорун В.М. Протеомные технологии в современной биомедицинской науке / Говорун В.М., Арчаков А.И. // Биохимия. 2002. - № Ю. - С. 134159.

5. Каламкарян A.A. Клиника и лечение ретикулезов кожи / Каламкарян A.A. Ереван: Айастан, 1983.

6. Кубанова A.A. Клинические рекомендации. Дерматовенерология. / Под ред. A.A. Кубановой. М.: ДЭКС-Пресс, 2007.

7. Овсянникова Г.В. Современные методы комплексной диагностики злокачественных лимфом кожи / Овсянникова Г.В. Автореф. дис. . канд. мед. наук, М., 2009. 25 с.

8. Пробатова H.A. Основные принципы и диагностические критерии "Пересмотра Европейско-Американской классификации лимфоидныхопухолей. / Пробатова H.A., Тупицын К.Н., Флейишан Е.В.// Арх. патологии. -1998. -№4. С.61-70.

9. Ю.Тарасенко Г.Н. Лимфома кожи в практике врача-дерматолога / Тарасенко Г.Н., Ламоткин И.А., Тарасенко Ю.Г. и др.// Рос. журн. кожных и венерич. болезней. 2006. - №2. - С.6-9.

10. Тарасенко Ю.Г. Структура больных с Т-клеточными лимфомами кожи в Главном военном госпитале МО РФ / Тарасенко Ю.Г., Ламоткин И.А., Бурлаченко О.В. и др.// Тез. науч. раб. IX Всерос. съезда дерматовенерол. 7-10 июня 2005 г. М.,2005. - Т. I. - С.48.

11. Трофимова И.Б. Современные представления о диагностике, классификации и лечении лимфом кожи./Трофимова И.Б.//Русский медицинский журнал.- 1997.-№11.- С. 704-08.

12. З.Трофимова И.Б. Т-клеточные злокачественные лимфомы кожи: иммунофенотипические особенности и терапия. /Трофимова И.Б. Автореф. дис. докт. мед. наук, М.,1994. 34с.

13. Н.Родионов А.Н. Гистологическая диагностика лимфом кожи (достижения и проблемы). /Родионов А.Н., Барбинов В.В., Казаков Д.В.//Журнал дерматовенерологии и косметологии. 1997. - №1. - С.5-14.

14. Трофимова И.Б. Иммунологический фенотип и иммунограмма периферической крови больных злокачественными лимфомами кожи./ Трофимова И.Б., Авербах Е.В., Куршакова Т.С. // Тез. докл. девятого Всесоюзного съезда дерматовенерологов. -М., 1991. С.350-51.

15. Трофимова И.Б. Моноклональные антитела в изучении кожных злокачественных лимфом./ Трофимова И.Б., Тупицын К.Н., Шолохова E.H. и др.// Вестн. дерматологии и венерологии. 1989. - №8. -С.9-14.

16. Albanesi С. Pathobiology of chronic inflammatory skin diseases: interplay between keratinocytes and immune cells as a target for anti-inflammatorydrugs. Albanesi C., Pastore S.// Curr. Drug Metab. 2010. - V.l 1, n.3. - P.210-27.

17. Albitar M. Proteomic-based prediction of clinical behavior in adult acute lymphoblastic leukemia. / Albitar M., Potts S.J., Giles F.J. et al.// Cancer. -2006.- V.106, n.7.- P. 1587-94.

18. Berger C.L., Cutaneous T-cell lymphoma: malignant proliferation of T-regulatory cells./ Berger C.L., Tigelaar R., Cohen J., et al. // Blood. 2005. -V.105,n.4.-P. 1640-7.

19. Bergman R. Immunophenotyping and T-cell receptor gamma gene rearrangement analysis as an adjunct to the histopathologic diagnosis of mycosis fungoides. / Bergman R., Faclieru D., Sahar D. et al.// J.Am. Acad. Dermatol. 1998.- V.39,n.4.- P.554-9.

20. Bernier C. CD13 and TCR clone: markers of early mycosis fungoides. / Bernier C., Nguyen J.M., Quereux G. et al.// Acta. Derm. Venereol. 2007.- V.87, n.2.-P.155-9.

21. Berti E. Primary cutaneous CD8-positive epidermotropic cytotoxic T-cell lymphomas. A distinct clinicopathological entity with an aggressive clinical behavior. / Berti E., Tomasini D., Vermeer M.H. et al.// Am. J. Pathol.- 1999.-V.155, n.2.- P.483-92.

22. Bonecchi R. Differential expression of chemokine receptors and chemotactic responsiveness of Type 1 T-helper cells (This) and Th2s./ Bonecchi R., Bianchi G., Bordignon P.P. et al.// J.Exp. Med. -1998.- n.l. P. 129-34.

23. Bonta M.D., Rapidly progressing mycosis fungoides presenting as follicular mucinosis. / Bonta M.D., Tannous Z.S., Demierre M.F. et al. // J. Am. Acad. Dermatol. 2000. - n.4.- P.635-40.

24. Boorsma D.M. Chemokine IP-10 expression in cultured human keratinocytes./ Boorsma D.M., Flier J., Sampat S. et al.// Arch. Dermatol. Res. -1998.- n.6.-P.335-41.

25. Bunn P.A. Jr. Report of the committee on staging and classification of cutaneous T-cell lymphomas./ Bunn P.A. Jr., Lamberg S. I.// Cancer Treat. Rep.-1979.- n.4.-P.725-8.

26. Burg G. Cutaneous Lymphomas (Basic and Clinical Dermatology) 1 edition ed. / Burg G, Kempf W. - Informa Healthcare, 2005.

27. Campanella G.S. A Chemokine-mediated in vivo T-cell recruitment assay./ Campanella G.S., Luster A.D. // Methods Emsymol. 2009.- n.461.- P.397-412.

28. Cerroni L. Monoclonality of intraepidermal T lymphocytes in early mycosis fungoides detected by molecular analysis after laser-beam-based microdissection./ Cerroni L, Arzberger E, Ardigo M. et al.// J. Invest. Dermatol. -2000.- n.6.- P. 1154-7.

29. Cerroni L. Clinicopathologic and immunologic features associated with transformation of mycosis fungoides to large-cell lymphoma./ Cerroni L., Rieger E., Hodl S. et al. // Am. J. Surg. Pathol.- 1992.-n. 6.- P. 543-52.

30. Chang J.C. Persistence of T-cell clones in psoriatic lesions./ Chang J.C., Smith L.R., Froning K.J. et al.//Arch. Dermatol.- 1997.-n.6.-P.703-8.

31. Choi T.S. Clinicopathological and genotypic aspects of anticonvulsant-induced pseudolymphoma syndrome./ Choi T.S., Doh K.S., Kim S.H. et al. //Br. J. Dermatol.-2003.-n.4.-P.730-6.

32. Ciree A. Expression and activity of IL-17 in cutaneous T-cell lymphomas (mycosis fungoides and Sezary syndrome)./ Ciree A., Michel L., Camilleri-Broet S. et al.// Int. J. Cancer.-2004.- n.l.-P.l 13-20.

33. Cortes J. Interleukin-10 in Non-Hodgkin's lymphoma / Cortes J., Kurzrock R.// Leuk. Lymphoma.- 1997.-n.3-4.-P.251-9.

34. Cowen E.W. Differentiation of tumour-stage mycosis fungoides, psoriasis vulgaris and normal controls in a pilot study using serum proteomic analysis / Cowen E.W., Liu C.W., Steinberg S.M. // Br. J. Dermatol. -2007.- n.5. P.946-53.

35. Criscione V.D. Incidence of cutaneous T-cell lymphoma in the United States, 1973-2002./ Criscione V.D., Weinstock M.A.//Arch. Dermatol. -2007. n.7.-P.854-9.

36. Crum N.F. Disseminated coccidioidomycosis with cutaneous lesions clinically mimicking mycosis fungoides./ Crum V.D.// Int. J. Dermatol.- 2005. n.ll.-P.958-60.

37. Deeva I., Mariani S., De Luca C. et al. Wide-spectrum profile of inflammatory mediators in the plasma and scales of patients with psoriatic disease./ Deeva I., Mariani S., De Luca C. et al. // Cytokine 2010.- n.2.- P. 163-70.

38. Delfau-Larue M.H. Prognostic significance of a polymerase chain reaction-detectable dominant T-lymphocyte clone in cutaneous lesions of patients with mycosis fungoides./ Delfau-Larue M.H., Dalac S., Lepage E. et al.// Blood -1998.-n.9.-P. 3376-80.

39. Delfau-Larue M.H. Diagnostic value of dominant T-cell clones in peripheral blood in 363 patients presenting consecutively with a clinical suspicion of cutaneous lymphoma. / Delfau-Larue MH, Laroche L, Wechsler J. et al.// Blood 2000.- n.9.-P.2987-92.

40. Dereure O. Correlations between clinical, histologic, blood, and skin polymerase chain reaction outcome in patients treated for mycosis fungoides./ Dereure O., Balavoine M., Salles M.T. et al.// J. Invest. Dermatol.- 2003.- n.3.-P.614-7.

41. Doherty S.D. Abnormal expression of Interleukin-23 in mycosis fungoides/Sezary syndrome lesions/Doherty S.D., Ni X., Doherty C.B. et al.// Arch. Dermatol. Res.-2006.- n.7.-P.353-6.

42. Donach M. Combined use of biomarkers for detection of ovarian cancer in high-risk women /Donach M., Yu Y., Artioli G. et al. // Tumour. Biol.-2010.-n.3.-P. 209-15.

43. Dummer R. Junctional CD8+ cutaneous lymphomas with nonaggressive clinical behavior: a CD8+ variant of mycosis fungoides? / Dummer R., Kamarashev J., Kempf W. et al. // Arch. Dermatol. -2002.-n.2.- P. 199-203.

44. Edelson R.L. Cutaneous T cell lymphoma: mycosis fungoides, Sezary syndrome, and other variants / Edelson R.L.// J. Am. Acad. Dermatol. 1980.-V.2, n.2.- P.89-106.

45. El-Darouti M.A. Microscopic study of normal skin in cases of mycosis fungoides / El-Darouti M.A., Marzouk S.A., Bosseila M. et al. // Int. J. Dermatol. 2006. -V.45, n.9.- P. 1043-6.

46. EscherN. Posttranslational modifications of transthyretin are serum markers in patients with mycosis fungoides / Escher N., Kaatz M., Melle C. et al.// Neoplasia 2007.- V.9, n.3.- P.254-9.

47. Espina V. Use of proteomic analysis to monitor responses to biological therapies / Espina V., Dettloff K.A., Cowherd S. et al. // Expert Opin. Biol. Ther. -2004.- V.4, n.l.- P.83-93.

48. Feng J.T. Heat-Shock Protein 27: a potential biomarker for hepatocellular carcinoma identified by serum proteome analysis / Feng J.T., Liu Y.K., Song H.Y. et al. // Proteomics 2005.- V.5, n.17. - P. 4581-8.

49. Fink-Puches R. Lichen aureus: clinicopathologic features, natural history, and relationship to mycosis fungoides / Fink-Puches R., Wolf P., Kerl H et al. // Arch. Dermatol. -2008.- V.144, n.9. P.l 169-73.

50. Forgber M. Proteome-based analysis of serologically defined tumor-associated antigens in cutaneous lymphoma / Forgber M., Gellrich S., Sharav T. et al.// PLoS One 2009. - V.4, n. 12 - P. e8376.

51. Fraser-Andrews E.A. Molecular staging of lymph nodes from 60 patients with mycosis fungoides and Sezary syndrome: correlation with histopathology and outcome suggests prognostic relevance in mycosis fungoides / Fraser-Andrews

52. EA, Mitchell T, Ferreira S. et al. // Br. J. Dermatol. -2006.- V.155, n.4.- P.756-62.

53. Gantcheva M. Vesicular mycosis fungoides /. Gantcheva M., Lalova A., Broshtilova V. et al.// J. Dtsch. Dermatol. Ges. -2005.- V.3, n.l 1.- P.898-900.

54. Gerami P. Interleukins in the treatment of mycosis fungoides / Gerami P., Guitart J., Rosen S. et al. // G. Ital. Dermatol. Venereol. -2008.- V.143, n.l-P.55-8.

55. Gottlieb A.B. Detection of a gamma interferon-induced protein IP-10 in psoriatic plaques / Gottlieb A.B., Luster A.D., Posnett D.N. et al.// J. Exp. Med. -1988.- V.168, n.3.- P.941-8.

56. Griffiths C.E. Pathogenesis and clinical features of psoriasis / Griffiths C.E., Barker J.N// Lancet-2007.- V.370, n. 9583.-P.263-71.

57. Guitart J. Histologic criteria for the diagnosis of mycosis fungoides: proposal for a grading system to standardize pathology reporting / Guitart J., Kennedy J., Ronan S. et al. // J. Cutan. Pathol. -2001.- V.28, n.4.- P. 174-83.

58. Gyuon I. Gene selection for cancer classification using Support Vector Machines / Gyuon I., Weston J., Barnhill S. et al. // Machine learning.-2002.-n.46.- P.389-422.

59. Hamerlinck F.F. Increased serum neopterin levels in mycosis fungoides and Sezary syndrome / Hamerlinck F.F., Toonstra J., van Vloten W.A. // Br. J. Dermatol. -1999.- V.141, n.6 P.l 136-7.

60. Hanley J.A. The meaning and use of the Area Under a Receiver Operating Characteristic (Roc) Curve / Hanley J.A., McNeil B.J.// Radiology 1982.-V.143, n.l.- P. 29-36.

61. Hanna S. Mycosis fungoides presenting as pigmented purpuric dermatitis / Hanna S., Walsh N., D'Intino Y. et al. // Pediatr. Dermatol. -2006.- V.23, n.4. -P.350-4.

62. Harwix S. T-cell clones from early-stage cutaneous T-cell lymphoma show no polarized Th-1 or Th-2 cytokine profile / Harwix S., Zachmann K., Neumann C. // Arch. Dermatol. Res. 2000.- V.292, n.l. - P. 1-8.

63. Hassel J.C. Serological immunomarkers in cutaneous T cell lymphoma / Hassel J.C., Meier R., Joller-Jemelka H. et al.// Dermatology 2004.-V.209, n.4. -P.296-300.

64. Heliot I. Cutaneous T-cell lymphoma bullosa: 2 cases / Heliot I., Beylot-Barry M., Vergier B. et al. // Ann. Dermatol. Venereol. 2003. - V.130, n.6-7. -P.639-42.

65. Hilkens C.M. Differential responses to IFN-alpha subtypes in human T cells and dendritic cells / Hilkens C.M., Schlaak J.F., Kerr I.M.// J. Immunol. 2003. - V.171,n.l0. -P.5255-63.

66. Hino R. Treatment with IFN-gamma increases serum levels of Thl chemokines and decreases those of Th2 chemokines in patients with mycosis fungoides / Hino R., Shimauchi T., Tokura Y.// J. Dermatol. Sci. 2005.- V.38, n.3.- P. 189-95.

67. Iscovich J. Cutaneous lymphoma in Israel, 1985-1993: a population-based incidence study / Iscovich J., Paltiel O., Azizi E. et al. // Br. J. Cancer. 1998. -V.77, n. 1.- P. 170-3.

68. Jinquan T. CXCR3 expression and activation of eosinophils: role of IFN-gamma-inducible protein-10 and monokine induced by IFN-gamma / Jinquan T., Jing C., Jacobi H.H. et al. //J. Immunol.- 2000.- V.165, n.3. P.1548-56.

69. Jones D. The current state and future of clonality studies in mycosis fungoides / Jones D., Duvic M.// J. Invest. Dermatol. 2003. - V. 121, n.3. - P.ix-x.

70. Kallinich T. Chemokine receptor expression on neoplastic and reactive T cells in the skin at different stages of mycosis fungoides / Kallinich T., Muche J. M., Qin S., et al. // J. Invest. Dermatol. 2003. - V.121, n.5. - P.1045-52.

71. Kaplan G. The expression of a gamma Interferon-Induced Protein (IP-10) in delayed immune responses in human skin / Kaplan G., Luster A.D., Hancock G. et al. // J. Exp. Med. 1987. - V.166, n.4. - P. 1098-108.

72. Keehn C.A. The diagnosis, staging, and treatment options for mycosis fungoides / Keehn C.A., Belongie LP., Shistik G. et al. // Cancer Control. -2007.-V. 14, n.2. P. 102-11.

73. Khan N. Cytomegalovirus seropositivity drives the CD8 T cell repertoire toward greater clonality in healthy elderly individuals / Khan N., Shariff N., Cobbold M. et al // J. Immunol. 2002. - V.169, n.4. - P. 1984-92.

74. Kim E.J., Lin J., Junkins-Hopkins M.J. Mycosis fungoides and Sezary syndrome: an update / Kim E.J., Lin J., Junkins-Hopkins M.J.// Curr. Oncol. Rep. 2006. - V.8, n.5. - P.376-86.

75. Kim S.T., Jeon Y.S., Sim H.J. et al. Clinicopathologic features and T-cell receptor gene rearrangement findings of mycosis fungoides palmaris et plantaris / Kim S.T., Jeon Y.S., Sim H.J. et al. // J. Am. Acad. Dermatol. -2006. V.54, n.3. - P.466-71.

76. Labidi S.I. Serum cytokines in follicular lymphoma, correlation of TGF-beta and VEGF with survival / Labidi S.I., Menetrier-Caux C., Chabaud S. et al. // Ann. Hematol. 2009. Epub ahead of print.

77. LeBoit P. Granulomatous Slack Skin / LeBoit P. // Dermatol. Clin. 1994. -V.12, n.2. - P.375-89.

78. Lee B.N. Dysregulated synthesis of intracellular Type 1 and Type 2 cytokines by T cells of patients with cutaneous T-cell lymphoma / Lee B.N., Duvic M., Tang C.K. et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1999. - V.6, n.l. - P.79-84.

79. Lee E.Y. CXCR10 and autoimmune diseases / Lee E.Y., Lee Z.H., Song Y.W. // Autoimmun. Rev. 2009. - V.8, n.5. - P.379-83.

80. Lenane P. Mycosis fungoides~a review of the management of 28 patients and of the recent literature / Lenane P., Powell F.C., O'Keane C. et al. //Int. J. Dermatol. 2006. - V.46, n.l. - P. 19-26.

81. Lessin S.R. Th2 cytokine profile in cutaneous T-cell lymphoma / Lessin S.R., Vowels B.R., Rook A.H.// J. Invest. Dermatol. 1995. - V.105, n.6. - P.855-6.

82. Lin WJ. Oligoclonal expansion of intraepidermal T cells in psoriasis skin lesions / Lin W.J., Norris D.A., Achziger M. et al. // J. Invest. Dermatol. -2001,- V.l 17, n.6. P.1546-53.

83. Liotta E.A. Unusual presentation of secondary syphilis in 2 HIV-1 positive patients / Liotta E.A., Turiansky G.W., Berberian B.J. et al.// Cutis -2000. -V.66, n.5. P.383-6, 89.

84. Liu J.Screening of Serum Protein Biomarkers by Surface-Enhanced Laser Desorption and Ionization with Time-of-Flight Detection Mass Spectrometry in

85. Patients with Mycosis Fungoides. / Liu J., Zheng Y.H., Zhang, J.Z. et al. // Zhongguo. Yi. Xue. Ke. Xue. Yuan. Xue. Bao. 2009. - V.31, n.l - P. 13-6.

86. Luster A.D. Biochemical characterization of a gamma Interferon-Inducible Cytokine (IP-10) Luster A.D., Ravetch J.V.// J. Exp. Med. 1987.- V.166, n.4. -P. 1084-97.

87. Marten N. W. Effect of dietary protein restriction on liver transcription factors / Marten N.W., Sladek F.M., Straus D.S.// Biochem. J. 1996/ - n.317.- - P.361-70.

88. Mielke V. Localized and disseminated pagetoid reticulosis. Diagnostic immunophenotypical findings / Mielke V., Wolff H.H., Winzer M. et al. // Arch. Dermatol. 1989. - V.125, n.3. - P.402-6.

89. Mrowietz U. Psoriasis—new insights into pathogenesis and treatment / Mrowietz U., Reich K // Dtsch. Arztebl. Int. 2009.-V.106, n.1-2. - P.: 11-8, quiz 19.

90. Muche J.M. Demonstration of frequent occurrence of clonal T cells in the peripheral blood of patients with primary cutaneous T-cell lymphoma / Muche J.M., Lukowsky A., Asadullah K.et al.// Blood 1997. - V.90, n.4. - P. 1636-42.

91. Murr C. Neopterin as a marker for immune system activation / Murr C., Widner B., Wirleitner B. //Curr. Drug. Metab. 2002. - V.3, n.2. - P. 175-87.

92. Narikawa K. CSF-chemokines in HTLV-I-associated myelopathy: CXC10 up-regulation and therapeutic effect of Interferon-alpha / Narikawa K., Fujihara K., Misu T. et al.// J. Neuroimmunol.- 1988/ V.159, n.1-2. - P. 17782.

93. Nickoloff B.J. Light-microscopic assessment of 100 patients with patch/plaque-stage mycosis fungoides / Nickoloff B.J.// Am. J. Dermatopathol. 1988. - V.10, n.6. - P.469-77.

94. Novelli M. CD26 expression on cutaneous infiltrates from patients with cutaneous T-cell lymphoma (GTCL) CD26 in cutaneous T-cell lymphoma patients / Novelli M., Comessati A., Quaglino P. et al.// Adv. Exp. Med. Biol. -2003. n.524. - P.223-34.

95. Papadavid E. The relevance of peripheral blood T-helper 1 and cytokine pattern in the evaluation of patients with Mycosis Fungoides and Sezary syndrome / Papadavid E., Economidou J., Psarra A. et al.// Br. J. Dermatol. -2003. -V.148, n.4. P.709-18.

96. Pedersen L.M. Early changes in serum IL-6 and VEGF levels predict clinical outcome following first-line therapy in aggressive non-Hodgkin's Lymphoma / Pedersen L.M., Klausen T.W., Davidsen U.H. et al.// Ann. Hematol. 2005. - V.84, n.8. - P.510-6.

97. Petricoin E.F. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer/ Petricoin E.F., Ardekani A.M., Hitt B.A., et al. // Lancet 2002. -V.359, n. 9306. - P.572-7.

98. Pimpinelli N. Defining early Mycosis Fungoides / Pimpinelli N., Olsen E.A., Santucci M. et al.// J. Am. Acad. Dermatol. 2005. - V.53, n.6 - P.1053-63.

99. Poon T.C. Opportunities and limitations of SELDI-TOF-MS in biomedical research: practical advices Poon T.C/// Expert. Rev. Proteomics. -2007.-V.4, n.l. P.51-65.

100. Poszepczynska-Guigne E. Minimal residual disease in mycosis fungoides •follow-up can be assessed by polymerase chain reaction / Poszepczynska-Guigne E., Bagot M., Wechsler J. et al. // Br. J. Dermatol. 2003. - V.148, n.2. - P.265-71.

101. Pyatnitskiy M. Clustering mass spectral peacs increases recognition accuracy and stability of SVM-based feature selection Pyatnitskiy .M, Karpova M., Moshkovskii S. et al. // J. Proteomics. Bioinform. 2010. - Vol.3, n.2. -P.48-54.

102. Read S. Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 plays an essential role in the function of CD25(+)CD4(+) regulatory cells that control intestinal inflammation / Read S., Malmstrom V., Powrie F. // J. Exp. Med. 2000. -V.192, n.2. - P.295-302.

103. Rook A.H. Pathogenesis of cutaneous T-cell lymphoma: implications for the use of recombinant cytokines and photopheresis / Rook A.H., Gottlieb S.L., Wolfe J.T. et al.// Clin. Exp. Immunol. 1997. - V.107 Suppl 1. - P. 16-20.

104. Rosen S.T. Primary cutaneous T-cell lymphomas / Rosen S.T., Querfeld C.// Hematology. Am. Soc. Hematol. Educ. Program 2006 P. 323-30, 513.

105. Saada D. Mycosis fungoides presenting as annular erythema / Saada D., Lami M.C., Vabres P. et al.// Ann. Dermatol. Venereol. 2005. - V.132, n.l. -P.35-7.

106. Saed G. Mycosis fungoides exhibits a Thl-type cell-mediated cytokine profile whereas Sezary syndrome expresses a Th2-type profile / Saed G., Fivenson D.P., Naidu Y. et al.// J. Invest. Dermatol. 1994. - V. 103, n.l. -P.29-33.

107. Sallusto F. The role of chemokine receptors in primary, effector, and memory immune responses / Sallusto F., Mackay C. R., Lanzavecchia A .// Annu. Rev. Immunol. 2000. - nl8. - P.593-620.

108. Saunes M., Nilsen T.I., Johannesen T.B. Incidence of primary cutaneous T-cell lymphoma in Norway / Saunes M., Nilsen T.I., Johannesen T.B.// Br. J. Dermatol. 2009. - V.160, n.2. - P.376-9.

109. Scala E. T cell receptor-Vbeta analysis identifies a dominant CD60+ CD26- CD49d- T cell clone in the peripheral blood of Sezary syndrome patients / Scala E., Narducci M.G., Amerio P. et al. // J. Invest. Dermatol. -V.119, n.l. -P.193-6.

110. Simpkins F. Seldi-Tof Mass Spectrometry, for cancer biomarker discovery and serum proteomic diagnostics / Simpkins F., Czechowicz J.A., Liotta L. // Pharmacogenomics. 2005. - V.6, n.6. - P.647-53.

111. Smoller B.R. Role of histology in providing prognostic information in mycosis fungoides / Smoller B.R,, Detwiler S.P., Kohler S. et al. // J. Cutan. Pathol. V.25, n.6. - P.311-5.

112. Smoller B.R. Fixed drug eruptions: evidence for a cytokine-mediated process / Smoller B.R., Luster A.D., Krane J.F. et al. // J. Cutan. Pathol.- 1991. V.18,n.l.-P.13-9.

113. Smoller B.R. Histopathology and genetics of cutaneous T-cell lymphoma / Smoller B.R., Santucci M., Wood G.S. et al.// Hematol. Oncol. Clin. North. Am. 2003. - V.17, n.6. - P.1277-311.

114. Speron S. Toxic epidermal necrolysis syndrome versus mycosis fungoides / Speron S., Gamelli R. // J. Burn. Care. Rehabil. 1997. - V.18, n.5. -P.421-3.

115. Su F. Validation of candidate serum ovarian cancer biomarkers for early detection / Su F., Lang J., Kumar A. et al.// Biomark. Insights. 2007. - n.2. -P.369-75.

116. Swerdlow S.H. WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues. Fourth Edition. / Swerdlow S.H., Campo E., Harris N.L. et al. Lyon, France: IARC Press, 2008.

117. Tainsky M.A. Genomic and proteomic biomarkers for cancer: a multitude of opportunities / Tainsky M.A.// Biochim. Biophys. Acta. 2009. -V.1796, n.2. - P. 176-93.

118. Taub D.D. Biological responses to chemokine superfamily members / Taub D.D., E.Schaffer. // Curr. Protoc. Immunol. Chapter 6. 2001. - Unit 6. -P.12.

119. Tiemessen M.M. Lack of suppressive CD4+CD25+Foxp3+ T cells in advanced stages of primary cutaneous T-cell lymphoma / Tiemessen M.M., Mitchell T.J., Hendry L. et al.// J. Invest. Dermatol. 2003. - V.126, n.10/ -P.2217-23.

120. Tracey L. Mycosis fungoides shows concurrent deregulation of multiple genes involved in the TNF signaling pathway: an expression profile study / Tracey L., Villuendas R., Dotor A.M. et al.// Blood 2003. - V.2, n.3. -P. 1042-50.

121. Tsianakas A. Infantile-onset cutaneous T-cell lymphoma / Tsianakas A., Kienast A.K., Hoeger P.H. / Br. J. Dermatol. 2008. - V.159, n.6. - P.1338-41.

122. Vega F. Clonal heterogeneity in mycosis fungoides and its relationship to clinical course / Vega F., Luthra R., Medeiros L.J. et al.//.Blood 2002. -V.100, n.9. - P .3369-73.

123. Vergier B. Transformation of mycosis fungoides: clinicopathological and prognostic features of 45 cases. French Study Group of Cutaneious Lymphomas / Vergier B., de Muret A., Beylot-Barry M. et all. // Blood 2000. - V.95, n.7. - P.2212-8.

124. Vestergaard C. A Th2 chemokine, TARC, produced by keratinocytes may recruit Cla+CCR4+ lymphocytes into lesional atopic dermatitis skin / Vestergaard C., Bang K., Gesser B. et al.// J. Invest. Dermatol. 2000. - V.l 15, n.4. -P.640-6.

125. Vonderheid E.C. Lymph node histopathologic findings in cutaneous T-cell lymphoma. A prognostic classification system based on morphologic assessment / Vonderheid E.C., Diamond L.W., Lai S.M.// Am. J. Clin. Pathol. -1992. V.97, n.l. - P.121-9.

126. Vowels B.R. Aberrant cytokine production by Sezaiy syndrome patients: cytokine secretion pattern resembles murine Th2 cells./ Vowels B.R., Cassin M., Vonderheid E.C. et al.// J. Invest. Dermatol. 1992 - V.99, n.l. - P.90-4.

127. Vowels B.R. Th2 cytokine mRNA expression in skin in cutaneous T-cell lymphoma / Vowels B.R., Lessin S.R., Cassin M. et al.// J. Invest. Dermatol. -1994.-V.103, n.5 P.669-73.

128. Weaver C.T. Thl7: The ascent of a new effector T-cell subset. Preface / Weaver C.T. // Eur. J. Immunol. 2009. - V.39, n.3. - P.634-6.

129. Willemze R. WHO-EORTC classification for cutaneous lymphomas / Willemze R., Jaffe E. S., Burg G. et al.// Blood. 2005. - V.105, n.10. - P.3768-85.

130. Willemze R. Classification of cutaneous T-cell lymphoma: from Alibert to WHO-EORTC / Willemze R., Meijer C.J.// J. Cutan. Pathol. 2006. - V.33 Suppl 1.-P. 18-26.

131. Wong H.K. Increased expression of CTLA-4 in malignant T-cells from patients with mycosis fungoides/cutaneous T cell lymphoma / Wong H.K., Wilson A.J., Gibson H.M. et al. // J. Invest. Dermatol. 2006. - V.126, n.l. - P. 212-9.

132. Wu X.S. Cutaneous T-cell lymphoma: roles for chemokines and chemokine receptors / Wu X.S., Lonsdorf A.S., Hwang S.T.//J. Invest. Dermatol. 2009. - V. 129, n.5. - P. 1115-9.

133. Xiao Z. Proteomic patterns: their potential for disease diagnosis / Xiao Z., Prieto D., Conrads T.P. et al.// Mol. Cell. Endocrinol. 2005. - V.230, n. 12. - P.95-106.

134. Yamashita T. IP-10 in atopic dermatitis / Yamashita T., Akamatsu H., Tomitaka A. et al.//Allergy 2003. - V.58, n.3. - P.261.

135. Yoo S.S.,Unilesional mycosis fungoides mimicking Boweris disease / Yoo S.S., Viglione M., Moresi M. et all.// J. Dermatol. 2003. - V.30, n.5. -P.417-9.

136. Yoon J.S. IL-21 enhances antitumor responses without stimulating proliferation of malignant T cells of patients with Sezary syndrome / Yoon J.S., Newton S.M., Wysocka MII J. Invest. Dermatol. 2008. - V.128, n.2. - P.473-80.

137. Yurkovetsky Z.R. Multiplex analysis of serum cytokines in melanoma patients treated with interferon-alpha2b / Yurkovetsky Z.R., Kirkwood J.M., Edington H.D / Clin. Cancer. Res. 2007. - V.13, n.8. - P.2422-8.

138. Zackheim H.S. Mycosis Fungoides: The great imitator / Zackheim H.S., McCalmont T.H.// J. Am. Acad. Dermatol. 2002. - V.47, n.6. -P.914-8.

139. Zweig M.H. Receiver-Operating Characteristic (ROC) plots: a fundamental evaluation tool in clinical medicine / Zweig M.H., Campbell G.// Clin. Chem. 1993. - V.39, n.4. -P.561-77.