Протективная активность синтетических пептидных фрагментов белков поверхностной мембраны менингококка серогруппы В и их конъюгатов при менингококковой инфекции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Чибискова, Ольга Владимировна

• Чибискова, Ольга Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Чибискова, Ольга Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Необходимость создания вакцины против инфекции, вызываемой менингококком серогруппы В.

1.2. Менингококковые вакцины серогруппы В на основе капсульного полисахарида.

1.3. Комплексные вакцины против менингококка серогруппы В.

1.4. Конъюгированные вакцины на основе антигенов поверхностной мембраны менингококка.

1.5. Вакцины на основе синтетических пептидов.

1.6. Белки наружной мембраны N. meningitidis серогруппы В как антигены для создания вакцинного препарата.

1.6.1. Белок 1 класса -РогА.

1.6.2. Белки 5 класса - Ора.

1.6.3. Железодефицитный белок NspA.

1.7. Роль клеточного и гуморального иммунитета в защите от менингококковой инфекции.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Протективная активность синтетических пептидных фрагментов белков поверхностной мембраны менингококка серогруппы В и их конъюгатов при менингококковой инфекции»

Актуальность проблемы.

В связи с высокой летальностью и серьезными осложнениями менингококковая инфекция продолжает оставаться актуальной международной проблемой. На долю менингитов серогрупп А, В и С приходится около 90% заболеваемости менингококковой инфекцией. И если в развивающихся странах доминирует серогруппа А этой инфекции, то в европейских странах и регионе Северной Америки преобладает менингит, обусловленный серогруппой В. В Российской Федерации заболеваемость генерализованными формами менингококковой инфекцией серогруппы В в последние годы составляет около 26% от всех случаев заболеваний менингитом трех основных эпидемически значимых серогрупп А, В и С

10], причем наибольшее число заболевших составляют дети до 14 лет (более 70%). Профилактика заболеваемости менингококковой инфекцией в России в настоящее время осуществляется с помощью вакцин, основанных на капсульных полисахаридах менингококков серогрупп А, С, У и АМ135

11]. Высокая эффективность этих вакцин позволяет легко справляться с эпидподъемами инфекции этих серогрупп. Разработка же эффективной вакцины против инфекции, вызываемой менингококками серогруппы В, остается настоящей проблемой. В отличии от капсульных А и С полисахаридов, полисахарид серогруппы В оказался низко иммуногенным и, по мнению ряда авторов, не должен присутствовать в вакцине из-за серологического сродства с ганглиозидами головного мозга человека и гипотетической опасностью аутоиммунного процесса у плода в утробе матери в ответ на его введение [4,7, 27,42,]. Эти данные определили поиск новых подходов для создания вакцин против этой серогруппы, и в первую очередь, изучение основных белков наружной мембраны (БНМ) менингококка.

Начиная с 80-х гг. XX века свойства основных БНМ менингококка активно изучали, и на их основе были предложены различные варианты противоменингококковых вакцин. Первая В-вакцина на основе везикул белков внешней мембраны менингококка, была создана кубинскими исследователями и оказалась высокоэффективной (83%) при иммунизации подростков на Кубе [31]. В Бразилии, где доминировали штаммы других серотипов и серосубтипов серогруппы В, эффективность вакцины составила 74% [35,87]. Эффективной для взрослых оказалась везикулярная В-вакцина норвежских исследователей [24], но для детей младше двух лет она была менее эффективной, что заставило авторов продолжить исследования по ее усовершенствованию. Голландскими исследователями разработана шестивалентная В-вакцина, которая основана на мутанте норвежского вакцинного штамма 44/76, состоящая на 90 % из белка Рог А [32,84,94]. В некоторых европейских странах, в частности, в Греции, представленные в гексавалентной вакцине белки Рог А обнаруживаются лишь у 8% штаммов серогруппы В, циркулирующих в настоящее время, что исключает ее применение в этой стране. Менингококковая новозеландская вакцина (Ме^В), основанная на технологии процесса производства норвежской вакцины, была разработана для остановки эпидемии в Новой Зеландии, вызванной штаммом В:4:Р1.7Ь,4, индуцировала выработку бактерицидных антител, главным образом, специфичных к Рог А [109].

В реестре разрабатываемых вакцин [103] содержится описание более 10 вакцинных препаратов, содержащих различные компоненты наружной мембраны менингококка и прошедших разные фазы исследования. Однако, до настоящего времени в практике здравоохранения не существует вакцины, характеризующейся высокой эффективностью против различных штаммов менингококка серогруппы В. Разнообразие вирулентных штаммов менингококка серогруппы В диктует необходимость включения в вакцину большого числа маркеров и содержания других компонентов микробной клетки для обеспечения ее поливалентности.

В свете изложенного, в настоящий момент остается актуальной задача поиска новых антигенов N. meningitidis для изучения их протективных и иммуногенных свойств, с целью разработки эффективного иммунопрофилактического препарата, защищающего, в первую очередь, от инфекции, вызываемой менингококком серогруппы В. Этой проблеме и посвящена настоящая диссертация.

Успехи иммунологии и молекулярной биологии последней четверти XX века привели к появлению новых стратегических подходов к созданию вакцин. В том числе была разработана концепция, включающая использование в вакцинных препаратах синтетических пептидов, моделирующих фрагменты белков возбудителя. Достоинствами подобных вакцин является безопасность при получении, отсутствие токсичности и побочных эффектов при вакцинации, а также возможность сфокусировать иммунный ответ на тех консервативных участках структуры возбудителя, которые не варьируют от штамма к штамму.

Для конструирования менингококковой В-вакцины, нами было выбрано направление, основанное на включении в создаваемый препарат синтетических пептидных фрагментов основных БНМ менингококков [6,7,8]. Установленная ныне аминокислотная последовательность этих белков позволяет синтезировать как В, так и Т- комплементарные участки пептидов, которые, кроме того, являются консервативными участками указанных белков, а значит общими для всего вида нейссерий. Актуальность такого подхода к конструированию нового поливалентного вакцинного противоменингококкового препарата несомненна.

Цель исследования: Цель данного исследования заключалась в выборе синтетических пептидных фрагментов БНМ менингококка серогруппы В, оценке их протективных и иммуногенных свойств и создании на их основе препаратов для профилактики менингококковой инфекции в опытах на животных.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать протективную активность синтетических пептидных фрагментов БНМ РогА, ОраВ и №рА менингококка серогруппы В.

2. Отобрать пептиды, относящиеся к консервативным участкам БНМ серогруппы В и обладающие иммуногенными и протективными свойствами в отношении менингококковой инфекции этой серогруппы.

3. Оценить иммуногенные и протективные свойства выбранных пептидных фрагментов БНМ менингококка серогруппы В в отношении менингококков серогрупп А и С.

4. Исследовать роль клеточного и гуморального факторов при постинфекционном и поствакцинальном иммунитете у мышей, иммунизированных синтетическими пептидами, в защите от менингококковой инфекции.

5. Изучить иммуногенные и протективные свойства синтетических пептидов БНМ менингококка серогруппы В после конъюгации их с капсульным полисахаридом менингококка серогруппы А.

Научная новизна. Впервые в эксперименте на животных показана протективная активность синтетических пептидных фрагментов консервативных участков БНМ РогА, ОраВ и №рА менингококка серогруппы В в отношении менингококковой инфекции трех основных серогрупп А, В и С.

Показано, что напряженность иммунитета, возникающая у мышей при иммунизации синтетическими пептидами, сопоставима с таковой у мышей после заражения их живой вирулентной культурой менингококка серогруппы В.

Выявлена ведущая роль клеточного звена в формировании иммунитета к менингококковой инфекции при иммунизации синтетическими пептидами.

Установлено, что свободные синтетические пептиды консервативных участков основных БНМ менингококка серогруппы В после конъюгации их с капсульным полисахаридом менингококка серогруппы А сохраняют свою протективную активность при защите мышей от заражения живой вирулентной культурой менингококка серогрупп А и В.

Практическая значимость. На основе синтетических пептидов консервативных участков БНМ менингококка серогруппы В, конъюгированных с капсульным полисахаридом менингококка серогруппы А, в перспективе, может быть сконструирована поливалентная вакцина против менингококковой инфекции.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Синтетические пептидные фрагменты БНМ РогА, ОраВ и №рА менингококка серогруппы В обладают протективной активностью в отношении менингококка серогруппы В с различной серотиповой и серосубтиповой принадлежностью.

2. Синтетические пептидные фрагменты консервативных участков БНМ РогА, ОраВ и №рА обладают протективностью в отношении менингококков серогрупп А, В и С.

3. Ведущую роль в защите от менингококковой инфекции играет клеточное звено иммунитета, в частности Т-лимфоциты.

4. Защита мышей, иммунизированных пептидными фрагментами консервативных участков БНМ РогА, ОраВ и №рА сопоставима с защитой мышей после их контакта с живой вирулентной культурой менингококка.

5. Синтетические пептиды БНМ менингококка серогруппы В, конъюгированные с капсульным полисахаридом серогруппы А, способны защищать мышей от менингококковой инфекции серогрупп А и В.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: — XI Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов» (г. Москва, 2004г.); - XVIII зимней молодежной научной школе «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (г. Москва, 2006г.); - XV Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии. Достижения современной биологической химии и перспективы их применения» (г. Геленджик, 2007г.); - XI Всероссийской конференции «Дни иммунологии в С.-Петербурге» (2007г.). Апробация диссертации состоялась на заседании кафедры микробиологии медицинского факультета РУДН (г. Москва, 2007г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работы, из них 4 в журналах рекомендованных ВАК РФ и получен патент (Способ приготовления бивалентной вакцины для профилактики менингококковой инфекции, № 2250113, 2003).

Работа выполнялась в рамках МНТП «Вакцины нового поколения и диагностические системы будущего», госконтракт №43.269.11.0103.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Чибискова, Ольга Владимировна

Выводы:

1 .Синтетические пептидные фрагменты консервативных участков БНМ РогА, ОраВ и №рА менингококка защищают мышей от заражения вирулентными штаммами менингококка серогруппы В с различной серотиповой и серосубтиповой принадлежностью.

2. Пептидные фрагменты консервативных участков БНМ менингококка серогруппы В обладают протективными свойствами в отношение менингококка серогрупп А и С.

3. Формирование защиты от менингококковой инфекции у мышей, иммунизированных синтетическими пептидами, обусловлено, в первую очередь, участием клеточного звена иммунитета, в частности иммунных Т-лимфоцитов.

4. Защита мышей от менингококковой инфекции, иммунизированных синтетическими пептидами, сопоставима с защитой мышей после введения им сублетальной дозы живой вирулентной культуры менингококка («переболевшие» животные).

5. Синтетические пептидные фрагменты консервативных участков БНМ менингококка, конъюгированные с капсульным полисахаридом, защищают иммунизированных мышей от заражения менингококком серогрупп А, В и С без применения адъюванта.

6. Пептидные фрагменты консервативных участков БНМ менингококка, конъюгированные с капсульным полисахаридом менингококка серогруппы А, могут рассматриваться в качестве кандидата поливакцины при менингококковой инфекции.

Список работ опубликованных по теме диссертации.

1. Чибискова О.В (в соавторстве с Несмеяновым В.А., Котельниковой О.В., Вольпиной О.М, Феоктистовым K.M., Жмаком М.Н., Короевым Д.О., Аллилуевым А.П., Ивановым В.Т.) / Способ приготовления бивалентной вакцины для профилактики менигококковой инфекции // Патент №2250113, 2003.

2. Котельникова О.В., Чибискова О.В., Несмеянов В.А., Аллилуев А.П., Вольпина О.М., Короев Д.О., Жмак М.Н., Титова М.А., Иванов В.Т. / Протективные свойства синтетических пептидов наружной мембраны менингококков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2005, № 5, С. 553-556.

3. Котельникова О.В., Чибискова О.В., Феоктистов K.M., Королева И.С,. Несмеянов В.А., Аллилуев А.П., Короев Д.О., Вольпина О.М., Иванов

B.Т. / Конструирование противоменингококковых вакцин на основе синтетических пептидов белков поверхностной мембраны менингококка серогруппы В // Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2005, № 6(25), С. 28-32.

4. Котельникова О.В., Чибискова О.В., Феоктистов K.M., Лахтина O.E., Несмеянов В.А., Аллилуев А.П., Королева И.С,. Короев Д.О., Вольпина О.М., Иванов В.Т. / Перспективы создания вакцинного препарата для профилактики менингококковой инфекции серогруппы В на основе синтетических пептидов // Биопрепараты, 2005, № 4(20),

C. 2-6.

5. Аллилуев А.П., Аваков А.Э., Чибискова О.В. / Вакцинопрофилактика менингококковой инфекции // Биопрепараты, 2006, № 3, С. 6-8.

6. Чибискова О.В., Котельникова О.В., Несмеянов В.А., Вольпина О.М., Короев Д.О., Филатова М.П. / Механизмы формирования защиты от менингококковой инфекции у мышей, иммунизированных синтетическими пептидами // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2007,№ 6, С. 663-666.

7. Аллилуев А.П., Котельникова О.В., Лахтина O.E., Чибискова О.В., Несмеянов В.А., Вольпина О.М., Короев Д.О., Филатова М.П., Королева И.С. / Роль антител к пептидным фрагментам белков наружной мембраны менингококка в защите от менингококковой инфекции // Вестник Российского университета дружбы народов, 2007, Т. 35, №2, С. 24-30.

8. Филатова М.П., Котельникова О.В., Чибискова О.В., Несмеянов В.А., Аллилуев А.П., Короев Д.О., Волкова Т.Д., Вольпина О.М., Иванов В.Т. / Новый подход к созданию синтетических вакцин путем конъюгации пептидов с полисахаридами на примере менингококковой вакцины// Материалы международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии. Достижения современной биологической химии и перспективы их применения», Геленджик, 2007, С. 303-304.

9. Котельникова О.В., Чибискова О.В., Несмеянов В.А., Аллилуев А.П., Филатова М.П., Короев Д.О., Волкова Т.Д., Вольпина О.М., Иванов В.Т. / Протективная активность синтетических пептидов и их конъюгатов в защите от менингококковой инфекции // Материалы международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии. Достижения современной биологической химии и перспективы их применения», Геленджик, 2007, С. 300-301.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вакцина против менингококка серогрупп В в различных вариантах разрабатывается фактически с 1969 г., т.е. почти 60 лет. И пока, нет оснований констатировать, что такая вакцина существует и может быть рекомендована для профилактики менингококковой инфекции этой серогруппы.

Проведенная работа по созданию препаратов против этой инфекции на основании синтетических пептидных фрагментов, аналогов консервативных участков основных белков наружной мембраны менингококка РогА, ОраВ и №рА открыла новые возможности для конструирования такой вакцины. Приведенные в работе результаты исследования синтезированных пептидов показали их способность защищать мышей от смертельного заражения всеми эпидемически опасными штаммами менингококка серогрупп А, В и С. Сублетальные дозы этих микробов интенсивно элиминируются у животных, вакцинированных синтетическими пептидами, представленными в работе. Причем в качестве иммуногена могут быть использованы как пептиды в чистом виде, так и их конъюгаты с капсульным полисахаридом менингококка серогруппы А.

Используемые в настоящее время вакцины, основанные на капсульных полисахаридах менингококка серогрупп А, С, У и иммуногенны, обладают выраженной протективной активностью, подтвержденной многолетними исследованиями, в отношении соответствующей серогруппы менингококка, апирогенны и безвредны для людей.

Использование в качестве вакцинного препарата конъюгированных синтетических пептидов позволяет отказаться от применения каких - либо адъювантов при вакцинации, что сильно упрощает процесс вакцинации и резко снижает антигенную нагрузку на организм вакцинируемого.

Элиминация менингококковых микробов из организма определяются в первую очередь клеточным компонентом создаваемого иммунитета. Роль антител в этом процессе не так однозначна. Отсутствие специфических антител к синтетическим пептидам, определяемых классическим методом ИФА не всегда свидетельствует об отсутствии активности к этому антигену. То же было описано в литературе ранее и в отношении других антигенов.

Отсутствие в настоящее время эффективных вакцин против менингококкового менингита серогруппы В в значительной мере отражает недостаток имеющихся экспериментальных данных о механизмах формирования иммунитета при этой инфекции. Для создания эффективной комплексной вакцины против менингококков различной этиологии требуется знание клеточных основ формирования защиты от данного возбудителя, так как именно они обеспечивают формирование иммунологической памяти. Использование синтетических пептидных фрагментов основных белков поверхностной мембраны менингококков с выраженной протективной активностью и относящихся к их консервативным участкам является перспективным направлением как в области создания вакцин нового поколения, так в области теоретической иммунологии при изучении механизмов защиты от этой инфекции. Имеющийся в наличие набор моделей позволяет всесторонне изучить формирование иммунитета на всех стадиях его развития при создании вакцинного препарата, защищающего от всего разнообразия циркулирующих штаммов менингококка.

Таким образом, с полным основанием можно констатировать, что выполнен первый важный этап конструирования принципиально новой менингококковой вакцины серогруппы В, обладающей, кроме того, качествами поливакцины. Созданы все предпосылки для доработки полученных препаратов в качестве кандидата вакцины по принятым во всем мире схемам.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Чибискова, Ольга Владимировна, 2008 год

1. Волкова Т.Д., Вольпина О.М., Иванов В.Т., Рубин С.Г., Семашко И.В., Караванов А.С. / Изучение антигенной структуры вируса клещевого энцефалита с помощью синтетических пептидов // 1998 г.

2. Дельвиг А.А., Семёнов Б.Ф., Розенквист Э., Робинсон Д.Г. / Neisseria meningitidis: от антигенной структуры к новому поколению вакцин // М. Медицина. 2000.

3. Демина А.А. /Бактериальные менингиты: эпидемиологический надзор и прогноз // Вакцинация. 1999. - №2. - С.5.

4. Дж. Клаус. / Иммунологические методы // 1990.

5. Ирун P.KoxeHUS. Матитьяху Фридкин[1Ь] Стефани Конен-Вайсман|Т)Е]. / Конъюгат, вакцина, способы усиления иммуногенности, способы иммунизации // RU 95105991 А1, 27.02.1997.

6. Королева И.С., Булошицкий Г.В., Спирихина Л.В., Закроева И.М., Грачева A.M., Королева М.А. / Современные особенности менингококковой инфекции // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2006. №4(29). С. 16-20.

7. Манько В.М., Скворцов В.Ю и др. / Эксперементальное изучение иммуномоделирующего действия глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП). //Иммунология, 1988 г., № 6, С. 34-37.

8. Платонов А.Е., Королева И.С., Миронов К.И. / Эпидемиология менингококковой инфекции в России и мире на современном этапе //Вакцинация. 2004, №1(31), 6-7.

9. Ройт А. Основы иммунологии. 2000 г.

10. Стентон Гланц. Медико-биологическая статистика. 2003г.

11. Таточенко В.К., Озерецковский Н.А. /Иммонопрофилактика // 2007.

12. Терри-Молинерт Г., Демина А.А., Валькацер Н.М. / Эпидемиологическая характеристика инфекции на Кубе // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1992. - № 2. - С. 27-30.

13. Abdillahi H., Poolman J.T. Whole-cell ELISA for typing Neisseria meningitidis with monoclonal antibodies // FEMS Microbiol. Lett. -1987.-V. 48.-P. 367-371.

14. Achtman M., Neibert M., Crowe B.A., Strittmatter W. et.al. / Purification and characterization of eight class 5 outer membrane protein variants from a clone of Neisseria meningitidis serogroup A // J. Exp. Med. -1998.-V. 168.-P. 507-525.

15. Achtman M., Wall R.A., Bopp M., Kusecek B. et. al. / Variation in Class 5 protein expression by serogroup A meningococci during a meningitis epidemic // J. Infect. Dis. 1991. - V. 164. - P. 375-382.

16. Achtman M., (DE); Moreau M. (FR) / IgAl protease fragment as carrier peptides // US 7235242 2004-10-14

17. Aho E.L., Dempsey J.A., Hobbs M.M. et al./ Characterization of the opa (class 5) gene family of Neisseria meningitidis.// Mol. Microbiol., 1991, Vol. 5, P. 1429-1437.

18. Alexander, H.L., Rasmussen, A.W., Stojiljkovic I. / Identification of Neisseria meningitidis Genetic Loci Involved in the Modulation of Phase Variation Frequencies // Infection and Immunity-2004.-Vol. 72, No. 11-P. 6743 6747.

19. Bjune G., Hoiby E.A., Gronnesby J.K., Arnesen O. et al. / Effect of outer membrane vesicle vaccine against group B meningococcal disease in Norway // Lancet. 1991. - V. 338. - P. 1093-1096.

20. Cadieux N., Plante M.5 Rioux C.R., Hamel J. / Bactericidial and cross-protective activity of a monoclonal antibody directed against Neisseriameningitidis NspA outer membrane protein // Infect. Immun. 1999. V. 67. P. 4955-4959.

21. Chen T., Gotschlich E.G. / CGMla antigen of neutrophils, a receptor of gonococcal opacity proteins //PNAS. 1996. - V.93. - P. 14851-14856.

22. Christodoulides M., Heckels J.E. / Immunization with a multiple antigen peptide containing defined B- and T-cell epitopes: production of bactericidal antibodies against group B Neisseria meningitidis II Microbiol-UK. 1994. - V. 140. P. - 2951-2960.

23. Claassen I., Meylis J., Van der Ley P., Peeters C.C.A.M. et al. / Production, characterization and control ofa Neisseria meningitides hexavalent class 1 outer membrane protein containing vesicle vaccine // Vaccine. 1996. - V. 14. - P. 1001-1008.

24. Cohen IRUN R. (Israel) Fridkin M. (Israel) Konen-Waisman S. (Israel) / Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic peptide carriers and vaccines comprising them // CA, 2141454 1994-02-17.

25. Delvig A., Donders E.M.L.M., Achtman, Poolman J.T. et al. / T-cell response to outer membrane proteins of Neisseria meningitidis: Comparative study of the Opa, Opc, and PorA proteins // Infect, and Immun. 1996. - P. 298-304.

26. Dyet K. H., and D. R. Martin / Sequence variation in the porB gene from B:P1.4 meningococci causing New Zealand's epidemic // J. Clin. Microbiol.

27. Expanded Program on Immunization. Vaccines against meningococcal meningitis: Current status // EPI Newsletter. 1994. V.16. P.4-5.

28. Figarella-Branger D., Durbec P., Bianco N., Gambarelli D., Pellissier J.F., Rougon G. / Expression des moleculer d1 adhesion NCAM, LI et de 1' epitope HNK1 par les medulloblastomas // Rev. Neurol. -1992. V.148. P. 417-422.

29. Norwegian meningococcal outer membrane vesicle vaccine MenBvac // Infect. Immun. 2006. V. 74. P.4557-4565.

30. Frasch C.E., Tsai C.M., Mocca L.F. / Outer membrane proteins of Neisseria meningitides: structure and importance in meningococcal disease // Clin. Invest. Med. 1986. - V. 9. - P. 101-107.

31. Frasch C.E. / Vaccines for prevention of meningococcal disease // Clin. Microbiol. Rev.-1989.-V.2 Suppl.- P. 134-138.

32. Frasch C.E., Coetzee G.J., Zahradnik J.M., Feldman H A., Kornhof H.J. / Development and evaluation of group B serotype 2 protein vaccines: report of a group B Field trial // Medecine Tropicale. 1983. V.43. P. 177183.

33. Frasch C.E., Zollinger W.D., Poolman J.T. / Serotype antigens of Neisseria meningitides and a proposed scheme for designation of serotypes // Rev. Infect. Dis. 1985. - V. 7. - P. 504-510.

34. Geysen H.M., Meloen R.H., Barteling S.J. / Use of peptide synthesis to probe viral antigens for epitopes to a resolution of a single amino acid // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - V.81.-P. 3998-4002.

35. Gotschlich E. C., Goldschneider I., Artenstein M.S. / Human immunity to the meningococcus. IV. Immunogenicity of serogroup A and serogroup C meningococcal polysaccharides in human volunteers // J. Exp. Med. -1969.-V. 129.-P. 1367-1384.

36. Gotschlich E. C., Goldschneider I., Lepow M.L. / Raven Press. NewYork.-1977.

37. Gotschlich E. C., Liu T.-Y., Artenstein M.S. / Human immunity to the meningococcus. III. Preparation and immunochemical properties of the group A, group B, and group C meningococcal polysaccharides // J. Exp. Med.-1969.- V.129. ?P. 1349-1365.

38. Gotschlich E.G., Goldschneider I., Artenstein M.S. / Human immunity to the meningococcus IV. Immimogenicity of group A and group C meningococcal polysaccharides in human volunteers // J. Exp. Med. -1969.-V.129.-P. 1367-1384.

39. Granoff D.M. et al. / A modified eenzyme-linkked immunosorbent assay for measurement of antibody responses to meningococcal C polysaccharide that correlate with bactericidal responses. // Clin. diag. lab. Immunol., 1998. - V. 5. P. 479-485.

40. Greenwood B: Manson Lecture. / Meningococcal meningitis in Africa // Trans R Soc Trop Med Hyg 1999, 93(4):341-353.

41. Grunow R., Jaahn S., Porstmann T., Kiessig S.T., Steindl F., Mattanovich D., Gurtler L., Deinhardt F., Katinger H., von Baehr R. / The high efficiency, human B cell immortalizing heteromyeloma CB-F7 // J. Immunol. Methods. 1988. - V. 106. - P. 257-265.

42. Jarvis G.A., Vedros N.A. / Sialic acid of group B Neisseria meningitidis regulates alternative complement pathway activation // Infect. Immun. -1987.-V.-55.-P. 174-180.

43. Jeanteur D., Lakey J.H., Pattus F. / The bacterial porin superfamily: sequence alignment and structure prediction // Mol. Microbiol. 1991. -V. 5.-P. 2153-2164.

44. Jennings H.J., Gamian A., Ashton F.E. / N- propionylated group B meningococcal polysaccharide mimics a unique epitope on group B Neisseria meningitidis // J. Exp. Med. 1987. - V. 165, - P. 1207-1211.

45. Jennings H.J. (CA); Pon R. (CA); Lussier M. (CA); Michon F. (US) / Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines // US 5811102, 22.09.1998.

46. Jennings H.J. (CA); Michon F. (CA) / Meningococcal polysaccharide conjugate vaccine // US 5902586, 11.05.1999.

47. Jennings H.J. (CA); ); Pon R. (CA); Lussier M. (CA); Michon F. (US) / Antibodies to meningococcal polysaccharide conjugate vaccines // US 6350449 B 1,26.02.2002.

48. Lifely M.R., Rogers M.V., Esdaile J., Payne M., Tite J.P. / Murine cross-reactive T-cell epitopes of Neisseria meningitides outer membrane proteins // Vaccine. 1992.- V.10. P. 159-163.

49. Lynch E.C., Blake M.S., Gotschlich E.C., Mauro A. / Studies of porins spontaneously transferred from whole cells and reconstituted from purified proteins of Neisseria gonorrhoea and Neisseria meningitidis II Biophys. J. 1984.-V.45. P. 104-107.

50. Lystad A., Aasen S. / The epidemiology of meningococcal disease in Norway 1975-91 //NIPH Ann. 1991. V.14. P.57-66.

51. Malorny B., Morelli G., Kusecek B., Kolberg J., Achtman M. / Sequence diversity, predicted two-dimensional protein structure, and epitope mapping of neisserial Opa proteins // J.Bacteriol. 1998. - V. 180. - P. 1323-1330.

52. Marburg S. (United States) Tolman R.L. (United States) Emini E.A. (United States) / Peptide polysaccharide-protein conjugate vaccines // CA 2047031 1992-01-20

53. Martin D., Brodeur B. R., Hamel J., Couture F.,. Alwis U., Lian Z., Martin S., Andrews D., Ellis R.W. // J.Biotechnol. 2000. - V. 83. - P. 27-31.

54. Martin D., Cadieux N., Hamel J., Brodeur B.R. / Highly conserved Neisseria meningitidis surface, protein confers protection against experimental infection // J. Exp. Med. 1997. - V. 185. - P. 1173-1183.

55. Moe G.R., Tan S., Granoff D.M. / Differences in surface expression of NspA among Neisseria meningitides group B strains // Infect. Immun. 1999. V.67. P.5664-5675.

56. Moe G.R., Tan S., Granoff D.M. / Differences in surface expression of NspA among Neisseria meningitides group B strains // Infect. And Immun., 1999, P. 5664-5675.

57. Moreau M. (FR); Mistretta N. (FR) / Polysaccharide-peptide-conjugates //US 6472506 Bl, 29.10.2002

58. Naess L.M.,Oftung F., Aase A.,Wetzler L.M. et al. / Human T-cell responses after vaccination with the Norwegian group B meningococcal outer membrane vesicle vaccine // Infect. And Immun. 1998. V.66. P.959-965.

59. Oftung F., Naess L.M., Wetzler L.M.,Aase A., Hanenberg B. et al. / Antigen-specific responses in humans after intranasal immunization witha meningococcal serogroup B outer membrane vesicle vaccine // Infect. And Immun. 1999. V.67. P.921-927.

60. Peters C.C.A.M., Rumke H.C., Sundermann L.C., Rouppe van der Voort E. et al. / Fhase I clinical trial with a hexavalent PorA containing meningococcal outer membrane vesicle vaccine // Vaccine. 1996. - V. 14. -P.1009-1015.

61. Pillai S. (United States) Insel R. (United States) Bixler G. (United States) / Synthetic peptides representing a T-cell epitopi as a carrier molecule for conjugate vaccines // CA 1340958 2000-04-11.

62. Plante M., Cadieux N., Rioux C.R., Hamel J., Brodeur B.R., Martin D. / Antigenic and molecular conservation of the gonococcal NspA protein // Infect. Immun. 1999. V. 67. P. 2855-2861.

63. Poolman J.T. / Clinical trials with outer membrane protein vaccines and PorA recombinant vaccine // Proceedings of the Tenth International Pathogenic Neisseria Conference. Eds. Zollinger W.D., Frasch C.E., Deal C.D. 1996. Baltimore, USA. P.l 17-122.

64. Poolman J.T., van der Ley P., Wiertz E.J.H.J., Hoogerhout P. / Second generation meningococcal OMP-LPS vaccines // NIPH Ann. 1991. -V.14. - P. 233-241.

65. Rieger F.M., Grumet M., Edelman G.M. / N-CAM at the vertebrate neuromuscular junction // J. Cell Biol. -1985. V.101. ?P. 285-293.

66. Romero J.D., Outschoorn I.M. / Current status of meningococcal group Bvaccine candidates: capsular or noncapsular? // Clin. Microbiol. Rev. -1994.- V.7. ?P. 559-575.

67. Rosenqvist E., Hoiby E.A., Wedege E., Kusecek B., Achtman M. / The 5C protein of Neisseria meningitidis is highly immunogenic in humans and stimulates bactericidal antibodies // J. Infect. Dis. 1993. V.167. P.1065-1073.

68. Rosenqvist, E., K. Bryn, K. Harbak, J. Hoist, E. A. Hiby, P. Kristiansen,

69. H. Lange, D. Martin, K. M?yner, K. Nord, L. M. N?ss, A. G. Skryten, I. Aaberge, A. Aase, and H. Nkleby // Abstr. 13th Int. Pathogenic Neisseria Conf. 2002. P. 64.

70. Rouppe Van der Voort E. / Meningococcal vaccines. A continuous crusade? // Vrije Universiteit, Amsterdam, the Netherlands. 1998. P.l-157.

71. Rudel T., Schmid A., Benz R., Kolb H.A., Lang F., Meyer T.F. / Modulation of Neisseria porin (PorB) by cytosolic ATP/GTP of target cells: parallels between pathogen accommodation and mitochondrial endosymbiosis // Cell. 1996. - V. 85. - P. 391-402.

72. Snape M.D., Pollard A.J. / Meningococcal polysaccharide-protein conjugate vaccines // Lancet. Infect. Dis. 2005. - P. 21-30.

73. Stevens V. C. (United States) / Vaccines and antigenic conjugates // CA 2145391 1994-04-14.

74. Tsirpouchtsidis A., Hurwitz R., Brinkmann V. / Neisserial immunoglobulin Al protease induces specific T-cell responses in humans // Infec. and Immun. Jan. 2002. - V. 70. - P. 335-344.

75. Udenfriend S., Meienhofer J. / The Peptides. Analysis, Synthesis, Biology // London. Academic Press. Inc. 1987. - V. 9. - P. 27-30.

76. Vieusseux G. / Memoire sur la maladie qui a regne a Geneve au printemps de 1805 (in French) // J. Med. Chir Pharm. 1806. - V. 11.163-182.

77. Virji M., Makepeace K., Ferguson D.J.P., Achtman M., Moxon E.R. / Meningococcal Opa and Opc proteins: their role in colonization and invasion of human epithelial and endothelial cells // Mol. Microbiol. -1993.-V. 10.-P. 499-510.

78. Volpina O.M., Yarov A.V., Zhmak M.N., Kuprianova M.A., Chepurkin A.V., Toloknov A.S., Ivanov V.T. // Vaccine. 1996. - V. 14. - P. 13751380.

79. Weichselbaum A: Ueber die Aetiologie der akuten meningitis cerebrospinalis / Fortschr Med. 1887. - V. 5. - C. 573-583.

80. Wiertz E.J.H.J., Delvig A.A., Donderss E.M.L.M., Brugghe H.F. et al. / T cell response to outer membrane proteins of Neisseria meningitides: comparative study of the Opa, Opc and PorA proteins // Infect, and Immun. 1996. - V. 64. - P. 298-304.

81. Wyle F.A., Artenstein M.S., Brandt B.L., Tramont E.C., Kasper D.L., Altieri P., Berman S.L., Lowenthal J.P. / Immunological response of man to g group B meningococcal polysaccharide vaccines // J. Infect. Dis. -1972.-V. 126.-P. 514-522.

82. Zollinger W.D., Moran E. / Meningococcal vaccines present and future // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. - 1991. - V. 85. Suppl. 1. - P. 37-43.

83. Zollinger W.D., Boslego J., Frasch C.E., Froholm L.O. Safety of vaccines containing meningococcal group B polysaccharide // Lancet. -1984.-P. 166.