Прогнозирование метаболитов рилизинг-пептидов гормона роста в организме человека для разработки методики их определения в целях антидопингового контроля тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат наук Зверева, Ирина Олеговна

• Зверева, Ирина Олеговна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Зверева, Ирина Олеговна

Содержание

Введение

Цели и задачи исследования

Научная новизна работы

Теоретическая и практическая значимость работы

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация работы

Личный вклад автора

Структура и объем работы

Глава 1. Литературный обзор

1.1 Гормон роста и его секретагоги

1.1.1 Физиологическое значение гормона роста

1.1.2 Заболевания, связанные с нарушением секреции гормона роста

1.1.3 Грелин и его рецептор

1.1.4 Рилизинг-пептиды гормона роста

1.2 Особенности метаболизма химически-модифицированных и синтетических белков и пептидов

1.2.1 Замена аминокислот (использование О-, в- и ненатуральных аминокислот)

1.2.2 Замена пептидной связи (псевдопептиды)

1.2.3 Изменение Ы- и С-концевых частей молекулы

1.3 Методы изучения метаболизма соединений пептидной природы

1.3.1 Биологические модели изучения метаболизма

1.3.2 Аналитические подходы идентификации метаболитов

1.4 Методы определения ОИЯР и их метаболитов в допинг-контроле

1.4.1 Хроматомасс-спектрометрические методы

1.4.2 Метод конкурирующего связывания лигандов с рецептором грелина

2.1 Химические реактивы и материалы

2.2 Основное оборудование

2.3 Вспомогательное оборудование

2.4 Методика эксперимента

2.4.1 наноВЭЖХ-МСВР анализ GHRP и их метаболитов

2.4.2 СВЭЖХ-МС/МС анализ GHRP и их метаболитов

2.4.3 Синтез метаболитов GHRP в условиях in vitro

2.4.4 Пробоподготовка проб мочи методом ТФЭ

2.4.5 Пробоподготовка проб сыворотки крови

2.4.6 Изучение метаболитов GHRP в образцах мочи и сыворотки крови после приема препаратов здоровыми добровольцами

Глава 3. Результаты и обсуждения

3.1 Сравнение различных in vitro и in vivo моделей метаболизма синтетических допинговых соединений пептидной природы

3.1.1 Протеолитические ферменты

3.1.2 Сыворотка человеческой крови

3.1.3 Субклеточные фракции

3.1.4 Выбор оптимальной in vitro модели моделирования процессов биотрансформации пептидных соединений в организме человека

3.1.5 Идентификация in vivo метаболитов GHRP в моче человека после назального приема пептидов GHRP-1, GHRP-2, GHRP-6, гексарелина и ипаморелина

3.2 Разработка и валидация методики определения GHRP и их метаболитов в пробах мочи методом СВЭЖХ-МС/МС

3.2.1 Выбор сорбента для ТФЭ

3.2.2 Выбор способа доведения рН

3.2.3 Валидация методики определения GHRP и их метаболитов в пробах мочи методом СВЭЖХ-МС/МС

3.3 Апробация методики определения GHRP и их метаболитов в пробах мочи методом СВЭЖХ-МС/МС

3.3.1 Количественная оценка наиболее интенсивных и долгоживущих метаболитов GHRP в образцах мочи

3.3.2 Оценка влияния особенностей метаболизма на биотрансформацию соединений после назального и внутривенного введения GHRP-2 и назального приема GHRP-6

Заключение

Выводы

Благодарности

Список условных обозначений и сокращений

Список литературы

Приложение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Прогнозирование метаболитов рилизинг-пептидов гормона роста в организме человека для разработки методики их определения в целях антидопингового контроля»

Введение

В современном мире год от года растет значение побед на крупнейших международных спортивных турнирах. Победа является не только профессиональной целью атлетов, но и входит в интересы государства для демонстрации превосходства, мощи и национального престижа [1]. Ради достижения высоких спортивных результатов используются самые последние научные разработки для производства: одежды, спортивных снарядов, специального питания и эксклюзивных медицинских препаратов [2]. Одним из остро стоящих вопросов современного спорта является применение допинга. От спортсменов, с одной стороны, требуют высоких результатов, а с другой стороны, соблюдения правил честной игры (Fair-play), игры без допинга. На фоне ужесточения антидопинговых правил Запрещенный список Всемирного антидопингового агентства (ВАДА) ежегодно пополняется все новыми веществами и методами.

Гормон роста (ГР) является одним из «скандально» известных допинговых препаратов. Увеличение концентрации ГР способствует росту мышечной и костной ткани, уменьшению жировой прослойки, ускоренному заживлению ран и ускорению восстановления работоспособности [3]. Перспективы использования ГР в качестве допинга описаны еще в 1982 году Даном Дюшаном в публикации «Wow - GH is amazing» в книге «Подпольное руководство по стероидам» («Underground Steroid handbook», Dan Duchaine). После нескольких инцидентов приема препаратов ГР, он включен в Запрещенный список в 1989 году, несмотря на отсутствие официально принятого метода определения [3,4]. ГР, как и все лекарственные препараты пептидной природы, характеризуется протеолитической нестабильностью и низкой биодоступностью, поэтому начиная с конца XX столетия активно ведутся поиски его аналогов с более простой химической структурой [5]. Подобными аналогами являются соединения класса рилизинг-пептидов гормона роста (GHRP, от англ. Growth hormone releasing peptides), которые способствуют увеличению концентрации ГР путем стимуляции его выработки. GHRP включены в Секцию S2 «Пептидные гормоны, факторы

роста, подобные субстанции и миметики» Запрещенного списка ВАДА и должны определяться антидопинговыми лабораториями. Для идентификации GHRP разработаны методики с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) и конкурирующего связывания в присутствии изотопно меченого природного

125

агониста грелина ( I-грелин) с рецептором GHS-Ra1, экспрессированного на поверхности клеток HEK-293 [6-9]. В современном антидопинговом контроле применяется метод ВЭЖХ-МС/МС, характеризующийся высокой селективностью, чувствительностью, экспрессностью, надежностью и информативностью, позволяя определять большое количество соединений в ходе одного анализа. Помимо интактных молекул метод позволяет детектировать метаболиты, что особенно актуально для препаратов пептидной природы ввиду их быстрой деградации в организме человека, часто настолько стремительной, что исходное соединение не детектируется в биологических жидкостях уже через 24 ч после приема. Скорость выведения образовавшихся метаболитов может значительно превышать время выведения исходных субстанций, поэтому включение их метаболитов в скрининговые методики может увеличивать окно детектирования после приема допинга и достоверность их идентификации [5]. Однако, в большинстве случаев информация о путях биотрансформации в человеческом организме рилизинг-пептидов гормона роста ограничена в виду их статуса неразрешенных к приему препаратов. Только один из разработанных GHRP - GHRP-2, Pralmorelin с торговым названием GHRP Kaken 100, Kaken Pharmaceutical Co, - разрешен к применению в качестве препарата при лечении заболеваний дефицита ГР в Японии, однако другие аналоги доступны на «черном» рынке [10-12]. Таким образом, изучение метаболизма соединений данного класса и поиск их метаболитов, полученных с помощью различных in vivo и in vitro подходов, является актуальной и важной задачей при разработке методики для эффективной системы антидопингового контроля с целью выявления случаев злоупотребления GHRP спортсменами.

Диссертационная работа посвящена оценке эффективности использования различных подходов in vitro и in vivo при разработке способа определения метаболитов GHRP в биожидкостях человека, который дополнил разработанную ранее методику определения низкомолекулярных соединений пептидной природы методом СВЭЖХ-МС/МС в целях антидопингового контроля. В рамках исследования подобраны оптимальные in vitro модели получения метаболитов, эффективность которых подтверждена изучением метаболитов GHRP in vivo после приема волонтерами. При выполнении работы оптимизированы условия четырех протоколов пробоподготовки образцов мочи и инструментального анализа, проведена валидация антидопинговой методики определения GHRP и их метаболитов в моче человека. Работа позволила повысить эффективность антидопингового контроля и предотвратить злоупотребление данным видом допинга спортсменами.

Данная работа частично выполнена в ходе государственного контракта №458 от 8 сентября 2014 года на научно-исследовательскую работу для Министерства спорта Российской Федерации по лоту №6 по теме «Разработка антидопинговой методики анализа метаболитов рилизинг пептидов гормона роста в биологических жидкостях человека».

Цели и задачи исследования

Цель настоящей работы заключается в оценке эффективности прогнозирования образующихся в организме человека метаболитов GHRP с использованием различных подходов in vitro и in vivo при разработке эффективного способа качественного их определения методом сверхвысокопроизводительной высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (СВЭЖХ-МС/МС) для антидопингового контроля.

Достижение поставленной цели требовало решения следующих задач:

1. Изучение метаболитов GHRP, полученных с использованием различных моделей in vitro: протеолитические ферменты, человеческая плазма крови, микросомы почек и печени, S9 фракция печени человека.

7

2. Идентификация метаболитов GHRP в моче человека, образовавшихся in vivo после назального приема волонтерами пептидов GHRP-1, GHRP-2, GHRP-6, гексарелин и ипаморелин.

3. Сравнение эффективности изученных моделей in vitro и выявление оптимальных для моделирования процессов биотрансформации допинговых пептидных соединений в организме человека.

4. Выбор наиболее интенсивных и долгоживущих диагностически ценных метаболитов GHRP с целью их мониторинга для определения фактов злоупотребления данным видом допинга.

5. Разработка способа хроматомасс-спектрометрического определения метаболитов GHRP в образцах мочи человека. Проведение валидации разработанной методики с определением следующих метрологических характеристик: селективность/специфичность, предел обнаружения (ПО), линейность, прецизионность в условиях одного дня и между днями, а также оценка степени извлечения анализируемых соединений и влияния матрицы.

6. Апробация разработанного способа для определения времени детектирования GHRP и их метаболитов после приема и оценки влияния индивидуальных особенностей человеческого организма и разных способов приема GHRP на их метаболизм после назального и внутривенного введения некоторых представителей этого класса.

Научная новизна работы

В диссертации представлены результаты исследования метаболизма GHRP с использованием различных in vitro моделей, показана эффективность модельных систем in vitro микросомальной почечной и S9 печеночной фракций человека.

Выявлены закономерности биотрансформации in vivo 5 наиболее широко известных препаратов GHRP в человеческом организме (для 4 из 5 препаратов -впервые).

На основе полученных результатов разработан хроматомасс-спектрометрический способ определения метаболитов GHRP для выявления и предотвращения использования данного вида допинга в спорте. Разработанная

методика позволяет выявлять случаи злоупотребления GHRP, в том числе быстро метаболизирующими представителями данного класса.

Впервые детектирован самый долгоживущий из описанных ранее метаболитов GHRP-1 (2-4) ОН, мониторинг которого позволяет выявлять случаи злоупотребления GHRP-1, который не обнаруживается в моче в исходном виде.

Проведена оценка влияния физиологических особенностей человеческого организма и способов приема на метаболизм GHRP (на примере приема препаратов GHRP-2 и GHRP-6), показана эффективность включения метаболитов в антидопинговую методику.

Теоретическая и практическая значимость работы

Сравнение различных in vitro моделей метаболизма GHRP показало, что печеночная S9 и почечная микросомальная фракции человека являются наиболее эффективными моделями для моделирования процессов трансформации биоактивных пептидов и прогнозирования образующихся в организме человека метаболитов. Детектирование метаболитов после назального введения наиболее популярных GHRP (in vivo метод исследования) позволило оценить выбранную in vitro модель метаболизма и получить сведения о наиболее интенсивных и долгоживущих диагностически значимых метаболитах. Полученные данные легли в основу способа определения исходных веществ и метаболитов GHRP в биологических жидкостях человека. Определение метаболитов GHRP увеличило временное окно детектирования после приема допинга и достоверность идентификации, что особенно актуально для GHRP-1 и алексаморелина ввиду их быстрой деградации. Разработанный способ валидирован в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО/МЭК 17025 и внесен в область аккредитации (шифр SOP P 1.016) Федерального государственного бюджетного учреждения «Антидопинговый центр» (ФГБУ АДЦ). Опыт успешного применения предложенного способа определения GHRP и их метаболитов позволил специалистам ФГБУ АДЦ выявить случаи злоупотребления соединениями данного класса спортсменами..

Положения, выносимые на защиту

1. Выбор оптимальных моделей in vitro для моделирования процессов биотрансформации допинговых пептидных соединений в организме человека.

2. Выявление наиболее диагностически ценных метаболитов GHRP с целью их мониторинга.

3. Способ определения GHRP и их метаболитов, выделенных из мочи человека, методом СВЭЖХ-МС/МС.

4. Исследование влияния индивидуальных особенностей человеческого организма и разных способов приема GHRP на их метаболизм после назального и внутривенного введения некоторых представителей класса.

Степень достоверности и апробация работы

Основные результаты исследования были представлены на международных конференциях: "33rd Cologne Workshop on Dope Analysis (Manfred Donike Workshop)" (Кельн, Германия, 2014), "The 14th HUPO World Congress" (Ванкувер, Канада, 2015) и III Всероссийской конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез» (Краснодар, Россия, 2017). По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ - 4 статьи в реферируемых научных журналах и 6 в трудах конференций.

Личный вклад автора

Постановка цели и задач исследования, обобщение литературных данных, проведение научных экспериментов и оценка полученных результатов, подготовка и написание научных статей в соавторстве выполнены лично автором.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 1 61 страницах, содержит 24 рисунка, 16 таблиц и список цитируемой литературы из 180 источников.

Глава 1. Литературный обзор

1.1 Гормон роста и его секретагоги

ГР, также известный как соматотропный гормон (СТГ), соматотропин, соматропин, представляет собой гормон пептидной природы, секретирующийся соматотрофными клетками передней доли гипофиза. Ген ГР человека располагается в особом кластере на длинном плече 17 хромосомы (17q24.2). Данный кластер включает пять генов: ген ГР GH-N (N-«normal» или GH1 gene), экспрессия с которого происходит в основном в соматотрофных клетках гипофиза, ген плацентарного гормона роста GH-V(V-«variant» или GH2 gene), два гена плацентарного лактогена (гены CS1 и CS2), кодирующие белковые продукты, вырабатываемые клетками синцитиотрофобласта плаценты при беременности с максимальной концентрацией на 37 неделе, и псевдоген плацентарного лактогена или лактоген-близкородственного белка [3,13-15]. Главный продукт экспрессии гена GH-N представляет собой белковую последовательность, состоящую из 191 аминокислотных остатков, с молекулярной массой 22 124 Да и изоэлектрической точкой pI 5.1. В третичной структуре молекулы ГР имеются две внутримолекулярные дисульфидные связи (Cys53—Cys165 и Cys183—Cys189), формирующие большую и малую петли. Подобная структура ГР является высоко консервативной среди млекопитающих. ГР синтезируется в виде предшественника - прогормона, включающего N-концевую аминокислотную последовательность из 26 аминокислот. В процессе «созревания» происходит отщепление сигнальной последовательности, в результате чего «зрелая» молекула ГР становится чрезвычайно нестабильной [3]. Также идентифицированы две другие изоформы ГР с массами 20 и 17.5 кДа , образующиеся в результате альтернативного сплайсинга мРНК молекулы-предшественника ГР. 20 кДа-изоформа человеческого ГР склонна к димеризации с образованием гомодимеров (20 кДа/20 кДа) и гетеродимеров в комплексе с 22 кДа-изоформой ГР (20 кДа/22 кДа). Кроме того, молекула человеческого ГР может обладать различными посттрансляционными модификациями такими, как дезамидирование по остаткам аспарагиновой кислоты (в положении Asn178),

11

фосфорилирование (Ser77, Seri32 и Seri76), О-гликозилирование (Thr86) [16]. Таким образом, в организме человека представлены более 20 вариантов изоформ ГР [1719].

1.1.1 Физиологическое значение гормона роста

Биологическое действие ГР включает разнообразные метаболические и анаболические эффекты: стимуляция соматического роста, участие в водно-солевом обмене (удержание ионов натрия, фосфора и азота в организме), модуляция иммунного ответа, белкового, углеводного и липидного обменов в организме человека [3,20]. Физиологическое действие ГР начинается со связывания молекулы ГР с внеклеточным доменом своего рецептора GHR (от англ. Growth hormone receptor) цитокинового семейства с последующей активацией тирозиновой протеинкиназы JAK2 (Janus kinase 2). Активация запускает сигнальный каскад с участием различных сигнальных белков, что, в конечном счете, приводит к транскрипции генов, кодирующих инсулиноподобные факторы роста-1 и -2 (ИФР-1, ИФР-2), ИФР-связывающий белок-3 (ИФР-СБ-3) и кислотно-лабильную субъединицу (ALS, от англ. acid-labile subunit) [21]. Несмотря на то, что многие эффекты ГР оказывает напрямую, значительная их часть опосредуется действием инсулиноподобных факторов роста, в основном ИФР-1.

Секреция ГР носит пульсативный характер и регулируется двумя гормонами антагонистами: соматостатином и гипоталамическим рилизинг-гормоном гормона роста (GHRH, от англ. Growth Hormone Releasing Hormone), которые формируют внутренний гипоталамо-соматотрофный ритм [22]. Ряд других соединений (свободные жирные кислоты, некоторые аминокислоты, глюкокортикоиды, нейропептиды, глюкоза и некоторые гормоны) оказывают регуляторное действие на секрецию ГР на гипоталамусном и гипофизарном уровнях [23]. Одной из таких регуляторных молекул является пептидный гормон желудка грелин, о котором более подробно будет рассказано ниже [3].

1.1.2 Заболевания, связанные с нарушением секреции гормона роста

Как было сказано ранее, ГР оказывает влияние на многочисленные процессы в организме, нарушение его секреции вызывает серьезные патологии в соматической, психо-эмоциональной сферах, что сказывается на показателях физической формы. Стимуляция соматического роста, особенно в детском и юношеском возрасте, является одной из основных функций ГР. При недостатке ГР развивается задержка роста, физического и полового развития. Причинами недостаточности ГР могут быть первичная недостаточность самого соматотропина и периферическая нечувствительность к нему (дефекты генов рецепторов ГР и ИФР-1, неактивная форма соматостатина и так далее) [24]. Дефицит соматотропина можно восполнить с применением двух различных подходов: заместительной терапии и стимулирующей терапии.

При заместительной терапии препараты ГР принимаются в течение всей жизни. До 1987 года единственным источником соматотропина человека были ткани гипофиза умерших или погибших людей, из которых экстрагировался гормон [3]. Ограниченность в ресурсах биосырья, а также риск развития болезни Крейцфельда-Якоба, повлекшей несколько летальных исходов, стало основанием официального запрета применения экстрагированного человеческого ГР в 1985 году. Одним из достижений генной инженерии в 1980-ых годах стало получение первых синтетических аналогов человеческого соматотропина. С тех пор препараты рекомбинантного ГР представляют основу заместительной терапии.

Альтернативным подходом является стимулирующая терапия, при которой уровень соматотропина в организме человека повышается косвенно через механизмы регуляции его секреции. Регуляция секреции ГР осуществляется двумя основными гормонами: соматостатином (супрессирующий эффект) и GHRH (стимулирующий эффект) [3]. GHRH, состоящий из 44 аминокислотных остатков, синтезируется дугообразными ядрами гипоталамуса и участвует в регуляции секреции ГР путем связывания со своим G-белок связанным рецептором GHRH-R (от англ. Growth Hormone Releasing Hormone Receptor) [3]. К

настоящему времени разработаны модифицированные аналоги природного GHRH: серморелин, соответствующий фрагменту (1-29) человеческой 44-аминокислотной изоформы GHRH (торговое название Geref®, Serono Laboratories), тезаморелин (торговое название Egrifta®, Theratechnologies), CJC-1295, представляющий собой фрагмент (1-29) человеческого GHRH с 4 аминокислотными заменами, CJC-1295-DAC. Применение рекомбинантного GHRH и его аналогов для стимуляции секреции соматотропина нецелесообразно в виду дороговизны получения, протеолитической нестабильности, низкой биодоступности и других свойств, свойственным всех лекарственным препаратам пептидной природы. Поэтому в конце прошлого столетия активно велись поиски стимуляторов выработки ГР с более простой структурой [5]. В настоящее время перспективно использование низкомолекулярных стимуляторов выработки ГР, в том числе пептидной природы, которые осуществляют потенцирование секреции гормона через альтернативный путь - рецептор грелина.

1.1.3 Грелин и его рецептор

В 1970-ых годах была доказана независимая от GHRH стимуляция выработки соматотропина аналогами энкефалина, что свидетельствовало о существовании альтернативного механизма регуляции. После этого, наряду с активными разработками наиболее эффективных стимуляторов, начались поиски самого триггерного «звена» - рецептора, через который осуществляется стимуляция, и его природного агониста [25-30].

С использованием различных технологий установлено, что «ключевым звеном» альтернативного механизма стимуляции секреции ГР является рецептор, получивший название рецептора секретагогов гормона роста GHS-R (от англ. Growth-hormone Secretagogues receptor) и относящийся к семейству G-белок связанных рецепторов [31-35]. Описаны две изоформы данного рецептора a1- и bl-типов: GHS-Ra1 и GHS-Rb1, соответственно. Позже, в 1999 году, идентифицировали природный агонист рецептора GHS-Ral, представляющий собой гормон пептидной природы грелин, синтезирующийся в желудке и в

некоторых других органах: гипоталамусе, яичках, плаценте. Агонисты к рецептору GHS-Rb1 до сих пор не выявлены.

Грелин состоит из 28 аминокислотных остатков, один из которых ацилирован остатком каприловой кислоты (Ser3, С8:0). При сравнении биологической активности природного и дезацилированного грелинов показано, что данная модификация является функционально значимой. В то же время, последний является не единственной из минорных форм ацилированного грелина.

Многочисленными опытами показано прямое и косвенное влияние грелина на регуляцию секреции соматотропина. Таким образом, грелин является дополнительным гормоном выработки ГР. Биохимические эффекты грелина не ограничиваются его природой агониста к рецептору GHS-Ra1, желудочный гормон также участвует в регуляции высвобождения ряда других гормонов (АКТГ, пролактина, возможно, инсулина и лютеинизирующего гормона), обладает анаболическим эффектом, влияет на работу желудка и сердечнососудистой системы и участвует в модуляции иммунной системы [35-38].

1.1.4 Рилизинг-пептиды гормона роста

Секретагоги гормона роста (СГР, GHS, от англ. Growth Hormone Secretagogues) представляют собой агонисты рецептора грелина GHS-Ra1 пептидной и непептидной природы [3]. СГР пептидной природы по молекулярной массе подразделяются на две группы: GHRP с молекулярной массой менее 1 кДа и аналоги GHRH, о которых было рассказано выше.

Способность стимулировать секрецию ГР продемонстрирована для производных мет-энкефалина, представляющего собой пентапептид, что подтолкнуло к поиску новых, более эффективных стимуляторов с простой химической структурой [3,5,39]. В частности, первым СГР пептидной природы стал пептидный препарат GHRP-6, синтезированный в 1984 году. В течение десяти лет после изобретения GHRP-6 был разработан ряд его аналогов, среди которых GHRP-1, GHRP-2, гексарелин.

GHRP-6 является производным пентапептида мет-энкефалина, поэтому все представители класса GHRP обладают схожей структурой. За исключением ипаморелина, все GHRP включают мотив Ala-Trp-(D-Phe), в большинстве случаев имеют положительно заряженный концевой аминокислотный остаток лизина и амидированы по С-концу. Среди GHRP наиболее известны гептапептиды GHRP-1 и алексаморелин, гексапептиды GHRP-6, GHRP-2 и гексаморелин, пентапептиды GHRP-5 и ипаморелин, тетрапептид GHRP-4. Среди всех GHRP только GHRP-2, также известный как Pralmorelin, доступен в лекарственной форме для назального приема в Японии. Другие пептиды (GHRP-6, GHRP-2, гексарелин, ипаморелин) доступны на черном рынке и представляют большой интерес для спортсменов [34, 35] (Рисунок 1).

GHRP-1 GHRP-2 GHRP-4

GHRP-5 Туг — (£>-Тф) — Ala —Тф — (D-Phe)-NH2

GHRP-6 алексаморелин гексарелин ипаморелин

Рисунок 1 — Схематическое изображение структуры наиболее популярных

представителей группы GHRP [3,5]

Биологические эффекты соединений класса GHRP изучены на животных разных видов и с участием волонтеров после различных способов приема: внутривенного, подкожного, назального и перорального. Был показан дозо-зависимый ГР-высвобождающий эффект GHRP, превосходящий по потенциалу аналогичной дозы GHRH. Согласно работе [40], эффективность стимуляции

16

Ala — His — (D-S-Nal) - - Ala - Trp — - (D-Phe) — Lys - - NH2

(D-Ala) — (D-S-Nal) — Ala —Trp — (D-Phe) - - Lys — NH2

(D-Trp) — Ala —Trp (D-Phe) NH2

His - ■ (D-Trp) — Ala — Trp — - (D-Phe) — - Lys — NH2

Ala — His — ■ (D-Mrp) — Ala —Trp — (D-Phe) — Lys — NH2

His — (D-Mrp) — Ala — Trp — - (D-Phe) — — Lys — NH2

Aib — His — (D-S-Nal) - — (D-Phe) — — Lys — - NH2

высвобождения ГР не зависит от пола, но зависит от возраста с максимальным ответом на стимуляцию в период полового созревания, возможно, в результате синергетического действия половых гормонов. Стоит отметить, что при старении сохраняется большая эффективность GHRP по сравнению с GHRH.

Отличительными особенностями химической структуры GHRP является С-концевое амидирование, использование ненатуральных и D-аминокислот, что повышает период полураспада пептидных соединений. Кроме того, амидирование в природе имеет функциональное значение и встречается в структуре различных гормонов. Тем не менее, при пероральном приеме биодоступнось GHRP не превышает 1%, что послужило толчком к разработке низкомолекулярных аналогов СГР непептидной природы [36].

Первым аналогом непептидной природы стал L-692,429, синтезированный в 1992 году на основе бензолактамов. Многие из разработанных секретагогов в настоящее время находятся на финальных стадиях клинических исследований: CP-424,391 (в регистре аптечных препаратов - Капроморелин, Pfizer), RM-131, BIM-28131, BIM-28163 (Реламорелин, Rhythm Pharmaceuticals), MK-677 (Ибутаморен), ONO-7643, RC-1291, ST-1291 (Анаморелин, Helsinn Therapeutics) и SM-130,686. Однако ввиду их непептидной природы более подробно на них останавливаться не будем.

В литературных источниках [27,30,38] описаны два механизма передачи сигнала при связывании молекулы СГР с рецептором GHS-Ra1: основной (фосфолипаза С/инозитол-3-фосфатный сигнальный каскад) и минорный (протеинканаза А/циклический аденозинмонофосфат сигнальный путь). При активации основного пути после связывания молекулы агониста с G-белок-связанным рецептором, происходит активация рецептора с последующей миграцией Gaq/11-субъединицы G-белка, которая затем активирует мембраносвязанный фермент фосфалипазу С. Активированная фосфалипаза С индуцирует расщепление фосфоинозитол-4'5'-бифосфата (PIP2, от англ. phosphatidylinositol 4,5-biphosphate) на инозитол-3-фосфат (IP3, от англ. inositol-1,4,5-trisphosphate) и диацилглицерин (ДАГ). Образовавшийся IP3 индуцирует

высвобождение ионов Ca2+ из ^-чувствительных внутриклеточных депо кальция, тем самым происходит начальная деполяризация клетки. Молекулы ДАГ активируют протеинкиназу С, которая ингибирует мембранные ^-каналы, что ведет к возрастанию внутриклеточного потенциала. При деполяризации клетки открываются потенциал-зависимые Са2+-каналы, что влечет внеклеточный приток кальция и последующее высвобождение ГР из секреторных гранул. На Рисунке 2 схематично представлены оба механизма регуляции секреции ГР через GHS-Ra1 и рецептор GHRH [5].

мозг

желудок

печень

другие жировая ткани ткань

Рисунок 2 — Схематичное изображение механизма регуляции секреции ГР [5]

В экспериментах in vitro показано, что GHRP-2 дозо-зависимо повышает уровень циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) в соматотрофах овец и стимулирует секрецию ГР, как это происходит при активации аденилатциклазного сигнального пути при связывании GHRH со своим рецептором [27]. Однако подобный эффект не показан в крысиных

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Зверева, Ирина Олеговна, 2017 год

Список литературы

1) Литинская, Е.А. Допинг в спорте: социально-философский аспект [Текст] / Е.А. Литинская // Известия Волгоградского государственного технического университета. — 2011. — Т. 7. — № 9. — Р. 186—191.

2) Белялетдинов, P.P. "Дивный новый спорт" [электронный ресурс] / Человек. №5, 2005 г.: [сайт] : — URL: http: //vivovoco.astronet.ru/vv/papers/men/quasimodo .htm Дата обращения: 30.05.2016.

3) Разработка антидопинговой методики определения маркеров применения гормона роста и стимуляторов его выработки с позиции эндокринологического паспорта [Текст] : отчет о НИР (заключит.) / Федеральное государственное унитарное предприятие «Антидопинговый центр» ; рук. Кротов Г.И. ; исполн.: Савельева Н.Б., Семенистая Е.Н., Зверева И.О., Журавлева М.М., Якунина Н.Ю., Шестакова К.М., Постников П.В., Мартынова И.Г. — М., 2015. — 257 с. — Библиогр.: с. 130-142. — № ГК-572. — Инв. № 115090470004.

4) Holt, R.I.G. The history of doping and growth hormone abuse in sport [Text] / R.I.G Holt, I. Erotokritou-Mulligan, P.H. Sonksen // Growth Horm. IGF Res. — 2009. — Vol. 19. — No 4. — P. 320—326.

5) Разработка антидопинговой методики анализа метаболитов рилизинг пептидов гормона роста в биологических жидкостях человека [Текст] : отчет о НИР (заключит.) / Федеральное государственное унитарное предприятие «Антидопинговый центр» ; рук. Кротов Г.И. ; исполн.: Семенистая Е.Н., Зверева И.О. — М., 2014. — 167 с. — Библиогр.: с. 130-142. — № ГК-458. — Инв. № 114091940003.

6) Timms, M. A high-throughput LC-MS/MS screen for GHRP in equine and human urine, featuring peptide derivatization for improved chromatography [Text] / M. Timms, N. Hall, V. Levina, J. Vine, R. Steel // Drug Test. Anal. — 2014. — Vol. 6. — P. 985—995.

7) Thomas, A. Determination of growth hormone releasing peptides (GHRP) and their major metabolites in human urine for doping controls by means of liquid

135

chromatography mass spectrometry [Text] / A. Thomas, S. Hoppner, H. Geyer, W. Schanzer, M. Petrou, D. Kwiatkowska, A. Pokrywka, M. Thevis // Anal. Bioanal. Chem. — 2011. — Vol. 401. — No 2. — P. 507—516.

8) Pinyot, A. On the use of cells or membranes for receptor binding: growth hormone secretagogues [Text] / A. Pinyot, Z. Nikolovski, J. Bosch, J. Segura, R. Gutierrez-Gallego // Anal. Biochem. — 2010. — Vol. 399. — No 2. — P. 174—181.

9) Nicoli, R. Analytical strategies for doping control purposes: needs, challenges, and perspectives [Text] / R. Nicoli, D. Guillarme, N. Leuenberger, N. Baume, N. Robinson, M. Saugy, J.L.Veuthey // Anal. Chem. — 2016. — Vol. 88. — No 1. — P. 508—523.

10) Krug, O. Identification of black market products and potential doping agents in Germany 2010-2013 [Text] / O. Krug, A. Thomas, K. Walpurgis, T. Piper, G. Sigmund, W. Schanzer, T. Laussmann, M. Thevis // Eur. J. Clin. Pharmacol. — 2014. — Vol. 70. — No 11. — P. 1303—1311.

11) Kohler, M. Confiscated black market products and nutritional supplements with non-approved ingredients analyzed in the Cologne Doping Control Laboratory 2009 [Text] / M. Kohler, A. Thomas, H. Geyer, M. Petrou, W. Schanzer, M. Thevis // Drug Test. Anal. — 2010. — Vol. 2. — No 11—12. — P. 533—537.

12) Hartvig, R.A. Identification of peptide and protein doping related drug compounds confiscated in Denmark between 2007-2013 [Text] / R.A. Hartvig, N.B. Holm, P.W. Dalsgaard, L.A. Reitzel, I.B. Muller, K. Linnet // Scand. J. Forensic Sci. — 2014. — Vol. 20. — No 2. — P. 42—49.

13) Growth Hormone 2; GH2 [Электронный ресурс] // OMIM®. Online Mendelian Inheritance in Man : [сайт] : — URL: http://www.omim.org/entry/139240. Дата обращения: 13.04.2016.

14) Chellakooty, M. A longitudinal study of intrauterine growth and the placental growth hormone (GH)-insulin-like growth factor I axis in maternal circulation: association between placental GH and fetal growth [Text] / M. Chellakooty, K. Vangsgaard, T. Larsen, T. Scheike, J. Falck-Larsen, J. Legarth, A.M. Andersson,

K.M. Main, N.E. Skakkebaek, A. Juul // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2004. — Vol. 89. — No 1. — P. 384—391.

15) Baumann, G. Growth hormone heterogeneity: genes, isohormones, variants, and binding proteins [Text] / G. Baumann // Endocr. Rev. — 1991. — Vol. 12.

— No 4. — P. 424—449.

16) Thevis, M. Mass spectrometry in sports drug testing: characterization of prohibited substances and doping control analytical assays [Text] / M. Thevis // John Wiley & Sons. — 2010. — P. 360.

17) Baumann, G.P. Growth hormone doping in sports: a critical review of use and detection strategies [Text] / G.P. Baumann // Endocr. Rev. — 2012. — Vol. 33. — No 2. — P. 155—186.

18) Bidlingmaier, M. Technology insight: detecting growth hormone abuse in athletes [Text] / M. Bidlingmaier, C.J. Strasburger // Nat. Clin. Pract. Endocrinol. Metab. — 2007. — Vol. 3. — No 3. — P. 769—777.

19) Skottner, A. Biosynthesis of growth hormone and insulin-like growth factor-i and the regulation of their secretion [Text] / A. Skottner // The Open Endocrinol. — 2012. — Vol. 6. — Suppl 1: M2. — P. 3—12.

20) Holt R.I.G. Growth hormone, IGF-I and insulin and their abuse in sport [Text] / R.I.G. Holt, P.H. Sonksen // Br. J. Pharmaco. — 2008. — Vol. 154. — No 3. — P. 542—556.

21) Lanning, N.J. Recent advances in growth hormone signaling [Text] / N.J. Lanning, C. Carter-Su // Rev. Endocr. Metab. Disord. — 2006. — Vol. 7. — No 12. — P. 225—235.

22) Jansson, J.O. Sexual dimorphism in the control of growth hormone secretion [Text] / J.O. Jansson, S. Eden, O. Isaksson // Endocr. Rev. — 1985. — Vol. 6.

— No 2. — P. 128—150.

23) Devesa, J. Neuroendocrine control of growth hormone secretion in humans [Text] / J. Devesa, L. Lima, J.A. Tresguerres // Trends Endocrinol. Metab. — 1992. — Vol. 3. — No 3. — P. 175—183.

24) Глава 3 - Заболевания, связанные с нарушением секреции гормона роста гормона роста- заболевания, связанные с недостаточностью гормона роста [Электронный ресурс] // Учебник "Эндокринология" : [сайт] : — URL: http: //www.kuban. su/medicine/shtm/baza/endok/part3 - 12.htm. Дата обращения: 17.04.2016.

25) Giustina, A. Hexarelin, a novel GHRP-6 analog, stimulates growth hormone (GH) release in a GH-secreting rat cell line (GH1) insensitive to GH-releasing hormone [Text] / A. Giustina, C. Bonfanti, M. Licini, G. Ragni, B. Stefana // Regul. Pept. — 1997. — Vol. 70. — No 1. — P. 49—54.

26) Lin-Su, K. Growth Hormone Releasing Hormone (GHRH) and the GHRH Receptor [Text] / K. Lin-Su, M.P. Wajnrajch // Rev. Endocr. Metab. Disord. — 2002. — Vol. 3. — No 4. — P. 313—323.

27) Chen, C. Growth hormone secretagogue actions on the pituitary gland: multiple receptors for multiple ligands? [Text] / C. Chen // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. — 2000. — Vol. 27. — No 5—6. — P. 323—329.

28) McCormick, G.F. Dose-response characteristics of various peptides with growth hormone-releasing activity in the unanesthetized male rat [Text] / G.F. McCormick, W.J. Millard, T.M. Badger, C.Y. Bowers, J.B. Martin // J. Endocrinol. — 1985. — Vol. 117. — No 1. — P. 97—105.

29) Clark, R.G. The rebound release of growth hormone (GH) following somatostatin infusion in rats involves hypothalamic GH-releasing factor release [Text] / R.G. Clark, L.M. Carlsson, B. Rafferty, I.C. Robinson // J. Endocrinol. — 1988. — Vol. 119. — No 3. — P. 397—404.

30) Cunha, S.R. Ghrelin and growth hormone (GH) secretagogues potentiate GH-releasing hormone (GHRH)-induced cyclic adenosine 3',5'-monophosphate production in cells expressing transfected GHRH and GH secretagogue receptors [Text] / S.R. Cunha, K.E. Mayo // Endocrinology. — 2002. — Vol. 143. — No 12. — P. 457—4582.

31) Howard, A.D. A receptor in pituitary and hypothalamus that functions in growth hormone release [Text] / A.D. Howard, S.D. Feighner, D.F. Cully, J.P. Arena,

P.A. Liberator, C.I. Rosenblum, M. Hamelin, D.L. Hreniuk, O.C. Palyha, J. Anderson, P.S. Paress, C. Diaz, M. Chou, K.K. Liu, K.K. McKee, S.S. Pong, L.Y. Chaung, A. Elbrecht, M. Dashkevicz, R. Heavens, M. Rigby, D.J. Sirinathsinghji, D.C. Dean, D.G. Melillo, A.A. Patchett, R. Nargund, P.R. Griffin, J.A. DeMartino, S.K. Gupta, J.M. Schaeffer, R.G. Smith, L.H. Van der Ploeg // Sci. — 1996. — Vol. 273. — No 5277. — P. 974—977.

32) Dean, D.C. Development of a high specific activity sulfur-35-labeled sulfonamide radioligand that allowed the identification of a new growth hormone secretagogue receptor [Text] / D.C. Dean, R.P. Nargund, S.S. Pong, L.Y. Chaung, P. Griffin, D.G. Melillo, R.L. Ellsworth, L.H. Van der Ploeg, A.A. Patchett, R.G. Smith // J. Med. Chem. — 1996. — Vol. 39. — No 9. — P. 1767—1770.

33) Pong, S.S. Identification of a new G-protein-linked receptor for growth hormone secretagogues [Text] / S.S. Pong, L.Y. Chaung, D.C. Dean, R.P. Nargund, A.A. Patchett, R.G. Smith // Mol. Endocrinol. — 1996. — Vol. 10. — No 1. — P. 57— 61.

34) McKee, K.K. Molecular analysis of rat pituitary and hypothalamic growth hormone secretagogue receptors [Text] / K.K. McKee, O.C. Palyha, S.D. Feighner, D.L. Hreniuk, C.P. Tan, M.S. Phillips, R.G. Smith, L.H. Van der Ploeg, A.D. Howard // Mol. Endocrinol. — 1997. — Vol. 11. — No 4. — P. 415—423.

35) Yin, Y. The growth hormone secretagogue receptor: its intracellular signaling and regulation [Text] / Y. Yin, Y. Li, W. Zhang // Int. J. Mol. Sci. — 2014. — Vol. 15. — No 3. — P. 4837—4855.

36) Isidro, M. Growth hormone secretagogues [Text] / M. Isidro, F. Cordido // Comb. Chem. High Throughput Screen. — 2006. — Vol. 9. — No 3. — P. 175—180.

37) Kojima, M. Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach [Text] / M. Kojima, H. Hosoda, Y. Date, M. Nakazato, H. Matsuo, K. Kangawa // Nature. — 1999. — Vol. 402. — No 6762. — P. 656—660.

38) Hosoda, H. Biological, physiological, and pharmacological aspects of ghrelin [Text] / H. Hosoda, M. Kojima, K. Kangawa // J. Pharmacol. Sci. — 2006. — Vol. 100. — No 5. — P. 398—410.

39) Laron, Z. Growth hormone secretagogues. Clinical experience and therapeutic potential [Text] / Z. Laron // Drugs. — 1995. — Vol. 50. — No 4. — P. 595—601.

40) Camanni, F. Growth hormone-releasing peptides and their analogs [Text] / F. Camanni, E. Ghigo, E. Arvat // Front. Neuroendocrinol. — 1998. — Vol. 19. — No 1. — P. 47—72.

41) Di, L. Strategic approaches to optimizing peptide ADME properties [Text] / L. Di // AAPS J. — 2015. — Vol. 17. — No 1. — P. 134—143.

42) Mitchell, M.D. Peptide-based in vitro assay for the detection of reactive metabolites [Text] / M.D. Mitchell, M.M. Elrick, J.L. Walgren, R.A. Mueller, D.L. Morris, D.C. Thompson // Chem. Res. Toxicol. — 2008. — Vol. 21. — No 4. — P. 859—868.

43) PeptideCutter tool. [Электронный ресурс] // ExPASy. Bioinformatic resource portal: [сайт]: — URL: http://web.expasy.org/peptide_cutter/peptidecutter_enzymes.html. Дата обращения 29.02.2016.

44) Markert, Y. Proline versus charge concept for protein stabilization against proteolytic attack [Text] / Y. Markert, J. Koditz, R. Ulbrich-Hofmann, U. Arnold // Protein Eng. — 2003. — Vol. 16. — No 12. — P. 1041—1046.

45) Sharma, R. In vitro metabolism of the glucagon-like peptide-1 (GLP-1)-derived metabolites GLP-1(9-36)amide and GLP-1(28-36)amide in mouse and human hepatocytes [Text] / R. Sharma, T.S. McDonald, H. Eng, C. Limberakis, B.D. Stevens, S. Patel, A.S. Kalgutkar // Drug Metab. Dispos. — 2013. — Vol. 41. — No 12. — P. 2148—2157.

46) Martin, R.A. Dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) from pig kidney cleaves analogs of bovine growth hormone-releasing factor (bGRF) modified at position 2 with Ser, Thr or Val. Extended DPP-IV substrate specificity? [Text] / R.A. Martin, D.L. Cleary, D.M. Guido, H.A. Zurcher-Neely, T.M. Kubiak // Biochim. Biophys. Acta. — 1993. — Vol. 1164. — No 3. — P. 252—260.

47) Grossman, T.H. Spontaneous cAMP-dependent derepression of gene expression in stationary phase plays a role in recombinant expression instability [Text] / T.H. Grossman, E.S. Kawasaki, S.R. Punreddy, M.S. Osburne // Gene. — 1998. — Vol. 209. — No 1—2. — P. 95—103.

48) Bercu, B.B. Growth hormone secretagogues [Text] / B.B. Bercu, R.F. Walker // New-York.: Springer. — 1996. — P. 416.

49) Kubiak, T.M. Position 2 and position 2/Ala15-substituted analogs of bovine growth hormone-releasing factor (bGRF) with enhanced metabolic stability and improved in vivo bioactivity [Text] / T.M. Kubiak, A.R. Friedman, R.A. Martin, A.K. Ichhpurani, G.R. Alaniz, W.H. Claflin, M.C. Goodwin, D.L. Cleary, C.R. Kelly, R.M. Hillman, R.T. Downs, L.A. Frochman, W.M. Moseley // J. Med. Chem. — 1993. — Vol. 36. — No 7. — P. 888—897.

50) Ogasahara, K. Effect of single amino acid substitutions on the protease susceptibility of tryptophan synthase alpha subunit [Text] / K. Ogasahara, S. Tsunasawa, Y. Soda, K. Yutani, Y. Sugino // Eur. J. Biochem. — 1985. — Vol. 150. — No 1. — P. 17—21.

51) Yutani, K. Effect of amino acid substitutions on conformational stability of a protein [Text] / K. Yutani, K. Ogasahara, Y. Sugino // Adv. Biophys. — 1985. — Vol. 20. — P. 13—29.

52) Bolli, G.B. Insulin analogues and their potential in the management of diabetes mellitus [Text] / G.B. Bolli, R.D. Di Marchi, G.D. Park, S. Pramming, V.A. Koivisto // Diabetologia. — 1999. — Vol. 42. — No 10. — P. 1151—1167.

53) Noble, S.L. Insulin Lispro: A Fast-Acting Insulin Analog [Text] / S.L. Noble, E. Johnston, B. Walton // Am. Fam. Physician. — 1998. — Vol. 57. — No 2. — P. 279—286.

54) Ollivaux, C. Biogenesis of D-amino acid containing peptides/proteins: where, when and how? [Text] / C. Ollivaux, D. Soyez, J.Y. Toullec // J. Pept. Sci. — 2014. — Vol. 20. — No 8. — P. 595—612.

55) Panatier, A. Glia-derived D-serine controls NMDA receptor activity and synaptic memory [Text] / A. Panatier, D.T. Theodosis, J.P. Mothet, B. Touquet, L.

Pollegioni, D.A. Poulain, S.H. Oliet // Cell. — 2006. — Vol. 125. — No 4. — P. 775— 784.

56) Huang, A.S. D-aspartate regulates melanocortin formation and function: behavioral alterations in D-aspartate oxidase-deficient mice [Text] / A.S. Huang, A. Beigneux, Z.M. Weil, P.M. Kim, M.E. Molliver, S. Blackshaw, R.J. Nelson, S.G. Young, S.H. Snyder // J. Neurosci. — 2006. — Vol. 26. — No 12. — P. 2814—2819.

57) Белки против РНК — кто первым придумал сплайсинг? [Электронный ресурс] // Биомолекула.ру : [сайт]: — URL: http://biomolecula.ru/content/199/. Дата обращения: 15.04.2016.

58) Gentilucci, L. Chemical modifications designed to improve peptide stability: incorporation of non-natural amino acids, pseudo-peptide bonds, and cyclization [Text] / L. Gentilucci, R. De Marco, L. Cerisoli // Curr. Pharm. Des. — 2010. — Vol. 16. — No 28. — P. 3185—3203.

59) Matuszewska, B. In vitro study of intestinal absorption and metabolism of 8-l-arginine vasopressin and its analogues [Text] / B. Matuszewska, G.G. Liversidge, F. Ryan, J. Dent, P.L. Smith // Int. J. Pharm. — 1988. — Vol. 46. — No 1—2. — P. 111—120.

60) Fjellestad-Paulsen, A. Metabolism of vasopressin, oxytocin, and their analogues in the human gastrointestinal tract [Text] / A. Fjellestad-Paulsen, C. Söderberg-Ahlm, S. Lundin // Peptides. — 1995. — Vol. 16. — No 6. — P. 1141— 1147.

61) Fjellestad-Paulsen, A. Metabolism of vasopressin, oxytocin and their analogues [Mpa1, D-Arg8]-vasopressin (dDAVP) and [Mpa1, D-Tyr(Et)2, Thr4, Orn8]-oxytocin (antocin) in human kidney and liver homogenates [Text] / A. Fjellestad-Paulsen, S. Lundin // Regul. Pept. — 1996. — Vol. 67. — No 1. — P. 27—32.

62) Pressinoic acid (ab142354). [Электронный ресурс] // ABCAM : [сайт]: — URL: http://www.abcam.com/pressinoic-acid-ab142354.html. Дата обращения: 21.02.2016.

63) Diao, L. Pharmacokinetics and pharmacokinetic-pharmacodynamic correlations of therapeutic peptides [Text] / L. Diao, B. Meibohm // Clin. Pharmacokinet. — 2013. — Vol. 52. — No 12. — P. 855—868.

64) Kjolbye, A.L. Pharmacological modulation of gap junction function with the novel compound rotigaptide: a promising new principle for prevention of arrhythmias [Text] / A.L. Kjolbye, K. Haugan, J.K. Hennan, J.S. Petersen // Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. — 2007. — Vol. 101. — No 4. — P. 215—230.

65) Kjolbye, A.L. Pharmacological characterization of the new stable antiarrhythmic peptide analog Ac-D-Tyr-D-Pro-D-Hyp-Gly-D-Ala-Gly-NH2 (ZP123): in vivo and in vitro studies [Text] / A.L. Kjolbye, C.B. Knudsen, T. Jepsen, B.D. Larsen, J.S. Petersen // J. Pharmacol. Exp. Ther. — 2003. — Vol. 306. — No 3. — P. 1191—1199.

66) Rafferty, B. Pharmacokinetic evaluation of superactive analogues of growth hormone-releasing factor (1-29)-amide [Text] / B. Rafferty, D.H. Coy, S. Poole // Peptides. — 1988. — Vol. 9. — No 1. — P. 207—209.

67) Darlak, K. Dermorphin analogs: resistance to in vitro enzymatic degradation is not always increased by additional D-amino acid substitutions [Text] / K. Darlak, D.E. Benovitz, A.F. Spatola, Z. Grzonka // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1988. — Vol. 156. — No 1. — P. 125—130.

68) Aguilar, M.-I. Beta-amino acid-containing hybrid peptides--new opportunities in peptidomimetics [Text] / M.-I. Aguilar, A.W. Purcell, R. Devi, R. Lew, J. Rossjohn, A.I. Smith, P. Perimutter // Org. Biomol. Chem. — 2007. — Vol. 5. — No 18. — P. 2884—2890.

69) Steer, D.L. Beta-amino acids: versatile peptidomimetics [Text] / D.L. Steer, R.A. Lew, P. Perlmutter, A.I. Smith, M.I. Aguilar // Curr. Med. Chem. — 2002. — Vol. 9. — No 8. — P. 811—822.

70) Wiegand, H. The outstanding metabolic stability of a 14C-labeled beta-nonapeptide in rats-in vitro and in vivo pharmacokinetic studies [Text] / H. Wiegand, B. Wirz, A. Schweitzer, G.P. Camenisch, M.I. Rodriguez Perez, G. Gross // Biopharm. Drug Dispos. — 2002. — Vol. 23. — No 6. — P. 251—262.

71) Kasperkiewicz, P. Current and prospective applications of non-proteinogenic amino acids in profiling of proteases substrate specificity [Text] / P. Kasperkiewicz, A.D. Gajda, M. Dr^g // Biol. Chem. — 2012. — Vol. 393. — No 9. — P. 843—851.

72) Gonadotropin-releasing Hormone (GnRH) and the GnRH receptor (GnRHR). [Электронный Ресурс] // GLOWM : [сайт]: — URL: http://www.glowm.com/section_view/heading/Gonadotropin-

releasing%20Hormone%20(GnRH)%20and%20the%20GnRH%20Receptor%20(GnRH R)/item/284. Дата обращения 04.03.2016.

73) Schally, A.V. Luteinizing hormone-releasing hormone analogs: their impact on the control of tumorigenesis [Text] / A.V. Schally // Peptides. — 1999. — Vol. 20. — No 10. — P. 1247—1262.

74) Moradi, S.V. Evaluation of the biological properties and the enzymatic stability of glycosylated luteinizing hormone-releasing hormone analogs [Text] / S.V. Moradi, P. Varamini, I. Toth // AAPS J. — 2015. — Vol. 17. — No 5. — P. 1135— 1143.

75) Walters, K. Luteinizing hormone-releasing hormone I (LHRH-I) and its metabolite in peripheral tissues [Text] / K. Walters, I.N. Wegorzewska, Y.-P. Chin, M.G. Parikh, T.J. Wu // Exp. Biol. Med. — 2008. — Vol. 233. — No 2. — P. 123— 130.

76) Wilson, A.C. Leuprolide acetate: a drug of diverse clinical applications [Text] / A.C. Wilson, S.V. Meethal, R.L. Bowen, C.S. Atwood // Expert Opin. Investig. Drugs. — 2007. — Vol. 16. — No 11. — P. 1851—1863.

77) Zoladex. [Электронный Ресурс] // Highlights Of Prescribing Information : [сайт]: — URL: http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2013/020578s034,020578s035lbl. pdf. Дата обращения: 10.03.2016.

78) Approval package for: application number NDA 21-732 [Электронный Ресурс] // Center for drug evaluation and research : [сайт]: — URL:

http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/nda/2004/021732s000_Vantas_ClinPha rmR.pdf. Дата обращения: 10.03.2016.

79) Stop Testosterone (T) at its main source. [Электронный Ресурс] // Firmagon® | Official Site: Advanced Prostate Cancer : [сайт]: — URL: http://www.firmagon.us/#/how-its-designed-to-work. Дата обращения: 10.03.2016.

80) Sonesson, A. Metabolite profiles of degarelix, a new gonadotropin-releasing hormone receptor antagonist, in rat, dog, and monkey [Text] / A. Sonesson, W. Koechling, J. Stalewski, L.B. Tanko, B.B. Rasmussen // Drug Metab. Dispos. — 2011. — Vol. 39. — No 10. — P. 1895—1903.

81) Samant, M.P. Structure-activity relationship studies of gonadotropin-releasing hormone antagonists containing S-aryl/alkyl norcysteines and their oxidized derivatives [Text] / M.P. Samant, R. White, D.J. Hong, G. Croston, P.M. Conn, J.A. Janovick, J. Rivier // J. Med. Chem. — 2007. — Vol. 50. — No 9. — P. 2067—2077.

82) Jones, D.A. Metabolism of the anticancer peptide H-Arg-D-Trp-NmePhe-D-Trp-Leu-Met-NH2 [Text] / D.A. Jones, J. Cummings, S.P. Langdon, A.J. MacLellan, T. Higgins, E. Rozengurt, J.F. Smyth // Peptides. — 1995. — Vol. 16. — No 5. — P. 777—783.

83) Sandberg, B.E. Synthesis and biological properties of enzyme-resistant analogues of substance P [Text] / B.E. Sandberg, C.M. Lee, M.R. Hanley, L.L. Iversen // Eur. J. Biochem. — 1981. — Vol. 114. — No 2. — P. 329—337.

84) Bruehlmeier, M. Stabilization of neurotensin analogues: effect on peptide catabolism, biodistribution and tumor binding [Text] / M. Bruehlmeier, E.G. Garayoa, A. Blanc, B. Holzer, S. Gergely, D. Tourwe, P.A. Schubiger, P. Blauenstein // Nucl. Med. Biol. — 2002. — Vol. 29. — No 3. — P. 321—327.

85) Kawai, M. Preparation and opioid activities of N-methylated analogs of [D-Ala2,Leu5]enkephalin [Text] / M. Kawai, N. Fukuta, N. Ito, T. Kagami, Y. Butsugan, M. Maruyama, Y. Kudo // Int. J. Pept. Protein Res. — 1990. — Vol. 35. — No 5. — P. 452—459.

86) Haviv, F. Effect of N-methyl substitution of the peptide bonds in luteinizing hormone-releasing hormone agonists [Text] / F. Haviv, T.D. Fitzpatrick,

R.E. Swenson, C.J. Nichols, N.A. Mort, E.N. Bush, G. Diaz, G. Bammert, A. Nguyen, N.S. Rhutasel, H.N. Nellans, D.J. Hoffman, E.S. Johnson, J. Greer // J. Med. Chem. — 1993. — Vol. 36. — No 3. — P. 363—369.

87) Biondi, L. Synthesis, conformation and biological activity of dermorphin and deltorphin I analogues containing N-alkylglycine in place of residues in position 1, 3, 5 and 6 [Text] / L. Biondi, E. Giannini, F. Filira, M. Gobbo, M. Marastoni, L. Negri, B. Scolaro, R. Tomatisc, R. Rocchi // J. Pept. Sci. — 2003. — Vol. 9. — No 10. — P. 638—648.

88) Pollaro, L. Strategies to prolong the plasma residence time of peptide drugs [Text] / L. Pollaro, C. Heinis // Med. Chem. Comm. — 2010. — Vol. 1. — No 5. — P. 319—324.

89) Tal-Gan, Y. Metabolic stability of peptidomimetics: N-methyl and aza heptapeptide analogs of a PKB/Akt inhibitor [Text] / Y. Tal-Gan, N.S. Freeman, S. Klein, A. Levitzki, C. Gilon // Chem. Biol. Drug Des. — 2011. — Vol. 78. — No 5. — P. 887—892.

90) Spatola, A.F. In chemistry and biochemistry of peptides and proteins [Text] / A.F. Spatola, B. Weinstein // New-York.: Marcel Dekker. — 1983. — Vol. 7. — P. 267—357.

91) Adessi, C. Converting a peptide into a drug: strategies to improve stability and bioavailability [Text] / C. Adessi, C. Soto // Curr. Med. Chem. — 2009. — Vol. 9.

— No 9. — P. 963—978.

92) Proulx, C. Azapeptides and their therapeutic potential [Text] / C. Proulx, D. Sabatino, R. Hopewell, J. Spiegel, Y. Garcia Ramos, W.D. Lubell // Future Med. Chem.

— 2011. — Vol. 3. — No 19. — P. 139—164.

93) Patch, J.A. Mimicry of bioactive peptides via non-natural, sequence-specific peptidomimetic oligomers [Text] / J.A. Patch, A.E. Barron // Curr. Opin. Chem. Biol. — 2002. — Vol. 6. — No 6. — P. 872—877.

94) Fowler, S.A. Structure-function relationships in peptoids: recent advances toward deciphering the structural requirements for biological function [Text] / S.A.

Fowler, H.E. Blackwell // Org. Biomol. Chem. — 2009. — Vol. 7. — No 12. — P. 1508—15024.

95) Proulx, C. Méthodologie pour la synthèse combinatoire d'azapeptides: application à la synthèse d'analogues aza-GHRP-6 en tant que ligands du récepteur CD36 [Text] : Electronic thesis or dissertation, chemistry : degree granted 03.12.2012 / C. Proulx // Montreal. — 2012. — P. 4—5.

96) Zega, A. Azapeptides as pharmacological agents [Text] / A. Zega // Curr. Med. Chem. — 2005. — Vol. 12. — No 5. — P. 589—597.

97) Dutta, A.S. Polypeptides. Part XIV. A comparative study of the stability towards enzymes of model tripeptides containing alpha-aza-amino-acids, L-amino-acids, and D-amino-acids [Text] / A.S. Dutta, M.B. Giles // J. Chem. Soc. Perkin 1. — 1976. — Vol. 2. — P. 244—248.

98) ZOLADEX® (goserelin acetate implant) [Электронный ресурс] // AstraZeneca Pharmaceuticals LP: [сайт]: — URL: http://dailymed.nlm.nih. gov/dailymed/archives/fdaDruglnfo. cfm?archiveid=4532. Дата обращения: 21.02.2016.

99) Cockshott, I.D. Clinical pharmacokinetics of goserelin [Text] / I.D. Cockshott // Clin. Pharmacokinet. — 2000. — Vol. 39. — No 1. — P. 27-48.

100) Farajallah, A. Antiviral Drugs [Text] / A. Farajallah, R. Bunch, M.N.A. Todd // USA: John Wiley & Sons, Inc. — 2011. — P. 3—17.

101) Lunt B., Olivier G., Pavinatto F., Zuckermann R., Investigation of peptoid thin films and their potential use in a biosensor [Электронный ресурс] // Electrical Engineering and Computer Sciences University of California at Berkeley: [сайт]: — URL: https://www.eecs.berkeley.edu/Pubs/TechRpts/2013/EECS-2013-111.html. Дата обращения: 21.02.2016.

102) Hooks, J.C. Development of homomultimers and heteromultimers of lung cancer-specific peptoids [Text] / J.C. Hooks, J.P. Matharage, D.G. Udugamasooriya // Biopolymers. — 2011. — Vol. 96. — No 12. — P. 567—577.

103) Zuckermann, R.N. Peptoids as potential therapeutics [Text] / R.N. Zuckermann, T. Kodadek // Curr. Opin. Mol. Ther. — 2011. — Vol. 11. — No 5. — P. 299—307.

104) Miller, S.M. Proteolytic studies of homologous peptide and N-substituted glycine peptoid oligomers [Text] / S.M. Miller, R.J. Simon, S. Ng, R.N. Zuckermann, J.M. Kerr, W.H. Moos // Bioorg. Med. Chem. Lett. — 1994. — Vol. 4. — No 12. — P. 2657—2662.

105) Miller, S.M. Comparison of the proteolytic susceptibilities of homologous L-amino acid, D-amino acid, and N-substituted glycine peptide and peptoid oligomers [Text] / S.M. Miller, R.J. Simon, S. Ng, R.N. Zuckermann, J.M. Kerr, W.H. Moos // Drug Dev. Res. — 1995. — Vol. 35. — No 1. — P. 20—32.

106) Simon, R.J. Using peptoid libraries [Oligo N-substituted glycines] for drug discovery [Text] / R.J. Simon, E.J. Martin, S.M. Miller, R.N. Zuckermann, J.M. Blaney // Techniqies in protein chemistry V — 1994. — P. 533—539.

107) Wang, Y. Absorption and disposition of a tripeptoid and a tetrapeptide in the rat [Text] / Y. Wang, H. Lin, R. Tullman, C.F. Jewell, M.L. Weetall, F.L. Tse // Biopharm. Drug Dispos. — 1999. — Vol. 20. — No 2. — P. 69—75.

108) Marraud, M. Modifications of the amide bond and conformational constraints in pseudopeptide analogues [Text] / M. Marraud, V. Dupont, V. Grand, S. Zerkout, A. Lecoq, G. Boussard, J. Vidal, A. Collet, A. Aubry // Biopolymers. — 1993.

— Vol. 33. — No 7. — P. 1135—1148.

109) Weiner, D.B. Biologically active peptides: Design, synthesis and utilization [Text] / D.B. Weiner, W.V. Williams // CRC Press. — 1993. — P. 374.

110) Peter, A.S Liquid chromatography studies on the enzymatic degradation of luteinizing hormone-releasing hormone analogues with off-line identification by mass spectrometry [Text] / A.S. Peter, S. Devadder, G. Laus, D. Tourwe // J. Chromatogr. A.

— 1996. — Vol. 729. — No 1—2. — P. 137—142.

111) Zhong, X. Biological insights into therapeutic protein modifications throughout trafficking and their biopharmaceutical applications [Text] / X. Zhong, J.F. Wright // Int. J. Cell Biol. 2013. — Vol. 2013. — No 273086.

112) Prigge, S.T. New insights into copper monooxygenases and peptide amidation: structure, mechanism and function [Text] / S.T. Prigge, R.E. Mains, B.A. Eipper, L.M. Amzel // Cell. Mol. Life Sci. — 2000. — Vol. 57. — No 12. — P. 1236— 1259.

113) Hruby, V.J. Design of peptide and peptidomimetic ligands with novel pharmacological activity profiles [Text] / V.J. Hruby, M. Cai // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. — 2013. — Vol. 53. — No 8—9. — P. 557—580.

114) Jones, D.A. Characterization of the deamidase enzyme responsible for the metabolism of the anticancer peptide: H-Arg-D-Trp-NmePhe-D-Trp-Leu-Met-NH2 [Text] / D.A. Jones, J. Cummings, S.P. Langdon, A. MacLellan, J.F. Smyth // Biochem. Pharmacol. — 1995. — Vol. 50. — No 5. — P. 585—590.

115) Jones, D.A. Metabolism of the broad-spectrum neuropeptide growth factor antagonist: [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-substance P [Text] / D.A. Jones, J. Cummings, S.P. Langdon, A.J. Maclellan, T. Higgins, E. Rozengurt, J.F. Smyth // Br. J. Cancer. — 1996. — Vol. 73. — No 6. — P. 715—720.

116) Thomas, A. Metabolism of growth hormone releasing peptides [Text] / A. Thomas, P. Delahaut, O. Krug, W. Schänzer, M. Thevis // Anal. Chem. — 2012. — Vol. 84. — No 23. — P. 10252—10259.

117) Esposito, S. In vitro models for metabolic studies of small peptide hormones in sport drug testing [Text] / S. Esposito, K. Deventer, L. Geldof, P. Van Eenoo // J. Pept. Sci. — 2015. — Vol. 21. — No 1. — P. 1—9.

118) Rink, R. To protect peptide pharmaceuticals against peptidases [Text] / R. Rink, K.A. Arkema-Meter, I. Baudoin, E. Post, A. Kuipers, S.A. Nelemans, M.H. Akanbi, G.N. Moll // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. — 2010. — Vol. 61. — No 2. — P. 210—218.

119) Nestor, J.J. The medicinal chemistry of peptides [Text] / J.J. Nestor // Curr. Med. Chem. — 2009. — Vol. 16. — No 33. — P. 4399—4418.

120) Dennis, M.S. Albumin binding as a general strategy for improving the pharmacokinetics of proteins [Text] / M.S. Dennis, M. Zhang, Y.G. Meng, M.

Kadkhodayan, D. Kirchhofer, D. Combs, L.A. Damico // J. Biol. Chem. — 2002. — Vol. 277. — No 38. — P. 35035—35043.

121) Kwok, W.H. Doping control analysis of seven bioactive peptides in horse plasma by liquid chromatography-mass spectrometry [Text] / W.H. Kwok, E.N.M. Ho, M.Y. Lau, G.N.W. Leung, A.S.Y. Wong, T.S.M. Wan // Anal. Bioanal. Chem. — 2013.

— Vol. 405. — No 8. — P. 2595—2606.

122) Ho, E.N.M. Doping control analysis of TB-500, a synthetic version of an active region of thymosin ß4, in equine urine and plasma by liquid chromatography-mass spectrometry [Text] / E.N.M. Ho, W.H. Kwok, M.Y. Lau, A.S.Y. Wong, T.S.M. Wan, K.K.H. Lam, P.J. Schiff, B.D. Stewart // J. Chromatogr. A. — 2012. — Vol. 1265. — No 12. — P. 57—69.

123) Lim, S.I. Site-specific fatty acid-conjugation to prolong protein half-life in vivo [Text] / S.I. Lim, Y. Mizuta, A. Takasu, Y.S. Hahn, Y.H. Kim, I. Kwon // J. Control. Release. — 2013. — Vol. 170. — No 2. — P. 219—225.

124) Scarth, J.P. The use of in vitro technologies coupled with high resolution accurate mass LC-MS for studying drug metabolism in equine drug surveillance [Text] / J.P. Scarth, H.A. Spencer, S.E. Timbers, S.C. Hudson, L.L. Hillyer // Drug Test. Anal.

— 2010. — Vol. 2. — No 1. — P. 1—10.

125) Fenwick, S.J. In vitro metabolism of tiletamine, zolazepam and nonbenzodiazepine sedatives: Identification of target metabolites for equine doping control [Text] / S.J. Fenwick, J.P. Scarth // Drug Test. Anal. — 2011. — Vol. 3. — No 10. — P. 705—716.

126) Wilk-Zasadna, I. Biotransformation in vitro: An essential consideration in the quantitative in vitro-to-in vivo extrapolation (QIVIVE) of toxicity data [Text] / I. Wilk-Zasadna, C. Bernasconi, O. Pelkonen, S. Coecke // Toxicology. — 2015. — Vol. 332. — P. 8—19.

127) Wrighton, S.A. The Use of in vitro metabolism techniques in the planning and interpretation of drug safety studies [Text] / S.A. Wrighton, B.J. Ring, M. Vandenbranden // Toxicol. Pathol. — 1995. — Vol. 23. — No 2. — P. 199—208.

128) Fasinu, P. Liver-based in vitro technologies for drug biotransformation studies - a review [Text] / P. Fasinu, P.J. Bouic, B. Rosenkranz // Curr. Drug Metab. — 2012. — Vol. 13. — No 2. — P. 215—224.

129) Zhang, D. Preclinical experimental models of drug metabolism and disposition in drug discovery and development [Text] / D. Zhang, G. Luo, X. Ding, C. Lu // Acta Pharm. Sin. B. — 2012. — Vol. 2. — No 6. — P. 549—561.

130) Liu, X. The conduct of drug metabolism studies considered good practice (I): analytical systems and in vivo studies [Text] / X. Liu, L. Jia // Curr. Drug Metab. — 2007. — Vol. 8. — No 8. — P. 815—821.

131) Mire-Sluis, A.R. Progress in the use of biological assays during the development of biotechnology products [Text] / A.R. Mire-Sluis // Pharm. Res. — 2001. — Vol. 18. — No 9. — P. 1239—1246.

132) Tang, L. Pharmacokinetic aspects of biotechnology product [Text] / L. Tang, A.M. Persky, G. Hochhaus, B. Meibohm // J. Pharm. Sci. — 2004. — Vol. 93. — No 9. — P. 2184—2204.

133) Christin-Maitre, S. Bioassays of gonadotropins [Text] / S. Christin-Maitre, C. Vasseur, B. Fauser, P. Bouchard // Methods. — 2000. — Vol. 21. — No 1. — P. 51—57.

134) Tyrkko, E. In silico methods in prediction of drug metabolism, mass fragmentation, and chromatographic behavior: application to toxicological drug screening by liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry [Text] / E. Tyrkko // Rapid Commun. Mass Spectrom. — 2009. — Vol. 23. — No 4. — P. 506— 514.

135) Shityakov, S. In silico, in vitro and in vivo methods to analyse drug permeation across the blood-brain barrier: A critical review. [Text] / S. Shityakov, E. Salvador, C. Forster // OA Anaesthetics. — 2013. — Vol. 1. — No 2. — P. 13.

136) Czodrowski, P. Computational approaches to predict drug metabolism [Text] / P. Czodrowski, J.M. Kriegl, S. Scheuerer, T. Fox // Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. — 2009. — Vol. 5. — No 1. — P. 15—27.

137) Wishart, D.S. Improving early drug discovery through ADME modelling [Text] / D.S. Wishart // Drugs. — 2007. — Vol. 8. — No 6. — P. 349—362.

138) Ekins, S. In silico pharmacology for drug discovery: applications to targets and beyond [Text] / S. Ekins, J. Mestres, B. Testa // Br. J. Pharmacol. — 2007. — Vol. 152. — No 1. — P. 21—37.

139) Prakash, C. Analytical strategies for identifying drug metabolites [Text] / C. Prakash, C.L. Shaffer, A. Nedderman // Mass Spectrom. Rev. — 2007. — Vol. 26.

— No 3. — P. 340—369.

140) Willette, R.E. Development of assays for drugs of abuse [Text] / R.E. Willette // Control. Clin. Trials. — 1984. — Vol. 5. — No 4 (Suppl). — P. 466—471.

141) Toon, S. The relevance of pharmacokinetics in the development of biotechnology products [Text] / S. Toon // Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. — 1996.

— Vol. 21. — No 2. — P. 93—103.

142) Lim, H.K. A nonradioactive approach to investigate the metabolism of therapeutic peptides by tagging with127I and using inductively-coupled plasma mass spectrometry analysis [Text] / H.K. Lim, Y. Cao, X. Qiu, J. Silva, D.C. Evans // Drug Metab. Dispos. — 2015. — Vol. 43. — No 1. — P. 17—26.

143) Katsila, T. Peptide and protein drugs: the study of their metabolism and catabolism by mass spectrometry [Text] / T. Katsila, A.P. Siskos, C. Tamvakopoulos // Mass Spectrom. Rev. — 2012. — Vol. 31. — No 1. — P. 110—133.

144) Whitehouse, C.M. Electrospray interface for liquid chromatographs and mass spectrometers [Text] / C.M. Whitehouse, R.N. Dreyer, M. Yamashita, J.B. Fenn // Anal. Chem. — 1985. — Vol. 57. — No 3. — P. 675—679.

145) Horning, E.C. Atmospheric pressure ionization (API) mass spectrometry. Solvent-mediated ionization of samples introduced in solution and in a liquid chromatograph effluent stream [Text] / E.C. Horning, D.I. Carroll, I. Dzidic, K.D. Haegele, M.G. Horning, R.N. Stillwell // J. Chromatogr. Sci. — 1974. — Vol. 11. — No 12. — P. 725—729.

146) Tanaka, K. The origin of macromolecule ionization by laser irradiation (Nobel lecture) [Text] / K. Tanaka // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. — 2003. — Vol. 42. — No 33. — P. 3860—3870.

147) Okano, M. Determination of growth hormone secretagogue pralmorelin (GHRP-2) and its metabolite in human urine by liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry [Text] / M. Okano, M. Sato, A. Ikekita, S. Kageyama // Rapid Commun. Mass Spectrom. — 2010. — Vol. 24. — No 14. — P. 2046—2056.

148) Thomas, A. Comprehensive plasma-screening for known and unknown substances in doping controls [Text] / A. Thomas, S. Guddat, M. Kohler, O. Krug, W. Schanzer, M. Petrou, M. Thevis // Rapid Commun. Mass Spectrom. — 2010. — Vol. 24. — No 8. — P. 1124—1132.

149) Thomas, A. Determination of prohibited, small peptides in urine for sports drug testing by means of nano-liquid chromatography/benchtop quadrupole orbitrap tandem-mass spectrometry [Text] / A. Thomas, K. Walpurgis, O. Krug, W. Schanzer, M. Thevis // J. Chromatogr. A. — 2012. — Vol. 1259. — P. 251—257.

150) Gil, J. Development and validation of a bioanalytical LC-MS method for the quantification of GHRP-6 in human plasma [Text] / J. Gil, A. Cabrales, O. Reyes, V. Morera, L. Betancourt, A. Sanchez, G. Garcia, G. Moya, G. Padron, V. Besada, L.G. Gonzalez // J. Pharm. Biomed. Anal. — 2010. — Vol. 60. — P. 19—25.

151) Pinyot, A. Growth hormone secretagogues: out of competition [Text] / A. Pinyot, Z. Nikolovski, J. Bosch, G. Such-Sanmartin, S. Kageyama, J. Segura, R. Gutiérrez-Gallego // Anal. Bioanal. Chem. — 2012. — Vol. 402. — No 3. — P. 1101— 1108.

152) Ferro, P. Fit-for-purpose radio receptor assay for the determination of growth hormone secretagogues in urine [Text] / P. Ferro, R. Gutierrez-Gallego, Z. Bosch, M. Farre, J. Segura // J. Biomol. Screen. — 2015. — Vol. 20. — No 10. — P. 1268—1276.

153) Ferro, P. Comparison of three chemiluminescence detection methods for growth hormone secretagogues competitive receptor assay in urine [Text] / P. Ferro, R.

Gutierrez-Gallego, Z. Bosch, J. Segura, X.X. Shao, Y.L. Liu, Z.G. Xu, Z.Y. Guo, N. Oueslati, L. Nicolas, N. Tinel, C. Boisseau, P. Yverneau, F. Charrier-Savournin, M. Fink, E. Trinquet // Anal. Methods. — 2016. — Vol. 8. — No 23. — P. 4600—4607.

154) Turner, A.J. Are there neuropeptide-specific peptidases? [Text] / A.J. Turner, R. Matsas, A.J. Kenny // Biochem. Pharmacol. — 1985. — Vol. 34. — No 9. — P. 1347—1356.

155) Bocci, V. Catabolism of therapeutic proteins and peptides with implications for drug delivery [Text] / V. Bocci // Adv. Drug Deliv. Rev. — 1989. — Vol. 4. — P. 149—169.

156) EC 3.4.17.2 [Электронный ресурс] // IUBMB Enzyme Nomenclature : [сайт]: — URL: http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/4/11/2.html. Дата обращения: 16.05.2016.

157) Carboxypeptidase B [Электронный ресурс] // Worthington Biochemical Corporation : [сайт]: — URL: http://www.worthington-biochem.com/COB/. Дата обращения 16.05.2016.

158) Deiteren, K. Carboxypeptidase M: Multiple alliances and unknown partners [Text] / K. Deiteren, D. Hendriks, S. Scharpe, A.M. Lambeir // Clin. Chim. Acta. — 2009. — Vol. 399. — No 1—2. — P. 24—39.

159) Farmer, S.G. The kinin system [Text] / S.G. Farmer // Academic Press. — 1997. — P. 349.

160) ENZYME entry 3.4.11.2 [Электронный ресурс] // Expasy bioinformatic resource portal : [сайт]: — URL: http://enzyme.expasy.org/EC/3.4.11.2. Дата обращения: 03.12.2014.

161) EC 3.4.11.2 [Электронный ресурс] // ExplorEnz Database : [сайт]: — URL: http://www.enzyme-database.org/query.php?ec=3.4.11.2. Дата обращения 03.12.2014.

162) EC 3.4.11.2 [Электронный ресурс] // IUBMB Enzyme Nomenclature : [сайт]: — URL: http://www.chem.qmul.ac.Uk/iubmb/enzyme/EC3/4/11/2.html. Дата обращения: 16.05.2016.

163) Wentworth, D.E. Molecular determinants of species specificity in the coronavirus receptor aminopeptidase N (CD13): influence of N-linked glycosylation [Text] / D.E. Wentworth, K.V. Holmes // J. Virol. — 2001. — Vol. 75. — No 20. — P. 9741—9752.

164) Raijmakers, R. Cleavage specificities of the brother and sister proteases Lys-C and Lys-N [Text] / R. Raijmakers, P. Neerincx, S. Mohammed, A.J.R. Heck // Chem. Commun. (Camb). — 2010. — Vol. 46. — No 46. — P. 8827—8829.

165) Semenistaya, E. Determination of growth hormone releasing peptides metabolites in human urine after nasal administration of GHRP-1, GHRP-2, GHRP-6, Hexarelin, and Ipamorelin [Text] / E. Semenistaya, I. Zvereva, A. Thomas, M. Thevis, G. Krotov, G. Rodchenkov // Drug Test. Anal. — 2015. — Vol. 7. — No 12. — P. 919—925.

166) Zhang, D. Preclinical experimental models of drug metabolism and disposition in drug discovery and development [Text] / D. Zhang, G. Luo, X. Ding, C. Lu // Acta Pharm. Sin. B. — 2012. — Vol. 2. — No 6. — P. 549—561.

167) Krondahl, E. In vitro metabolism of opioid tetrapeptide agonists in various tissues and subcellular fractions from rats [Text] / E. Krondahl, H. von Euler-Chelpin, A. Orzechowski, G. Ekstrom, H. Lennernas // Peptides. — 2001. — Vol. 22. — No 4.

— P. 613—621.

168) Ferro, P. Structure-activity relationship for peptidic growth hormone secretagogues [Text] / P. Ferro, G. Krotov, I. Zvereva, G. Rodchenkov, J. Segura // Drug Test. Anal. — 2017. — Vol. 9. — No 1. — P. 87—95.

169) Matsumoto, M. Structural similarity of ghrelin derivatives to peptidyl growth hormone secretagogues [Text] / M. Matsumoto, Y. Kitajima, T. Iwanami, Y. Hayashi, S. Tanaka, Y. Minamitake, H. Hosoda, M. Kojima, H. Matsuo, K. Kangawa // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 2001. — Vol. 284. — No 3. — P. 655—659.

170) Benfenati, E. Comparing in vivo, in vitro and in silico methods and integrated strategies for chemical assessment: problems and prospects [Text] / E. Benfenati, G. Gini, S. Hoffmann, R. Luttik // Altern. Lab. Anim. — 2010. — Vol. 38.

— No 2. — P. 153—66.

171) Johansen, P.B. Pharmacokinetic evaluation of ipamorelin and other peptidyl growth hormone secretagogues with emphasis on nasal absorption [Text] / P.B. Johansen, K.T. Hansen, J.V. Andersen, N.L. Johansen // Xenobiotica. — 1998. — Vol. 28. — No 11. — P. 1083—1092.

172) Pihoker, C. Treatment effects of intranasal growth hormone releasing peptide-2 in children with short stature [Text] / C. Pihoker, T.M. Badger, G.A. Reynolds, C.Y. Bowers // J. Endocrinol. — 1997. — Vol. 155. — No 1. — P. 79—86.

173) Hayashi, S. Intranasal administration of His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-LysNH2 (growth hormone releasing peptide) increased plasma growth hormone and insulin-like growth factor-I levels in normal men [Text] / S. Hayashi, Y. Okimura, H. Yagi, T. Uchiyama, Y. Takeshima, S. Shakutsui, S. Oohashi, C.Y. Bowers, K. Chihara // Endocrinol. Jpn. — 1991. — Vol. 38. — No 1. — P. 15—21.

174) Ghigo, E. Growth hormone-releasing activity of hexarelin, a new synthetic hexapeptide, after intravenous, subcutaneous, intranasal, and oral administration in man [Text] / E. Ghigo, E. Arvat, L. Gianotti, B.P. Imbimbo, V. Lenaerts, R. Deghenghi, F. Camanni // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 1994. — Vol. 78. — No 3. — P. 693—698.

175) Okano, M. Influence of intravenous administration of growth hormone releasing peptide-2 (GHRP-2) on detection of growth hormone doping: growth hormone isoform profiles in Japanese male subjects [Text] / M. Okano, Y. Nishitani, M. Sato, A. Ikekita, S. Kageyama // Drug Test. Anal. — 2010. — Vol. 2. — No 11-12. — P. 548— 556.

176) TD 2015 MRPL Minimum required performance levels for detection and identification of non-threshold substances [электронный ресурс] // World Anti-Doping Agency : [сайт] : — URL: https://www.wada-ama.org/en/resources/science-medicine/td2015-mrpl. Дата обращения: 22.03.2017.

177) TDSSA - Technical document for sport specific analysis [электронный ресурс] // World Anti-Doping Agency : [сайт] : — URL: https://www.wada-ama.org/sites/default/files/resources/files/wada-tdssa_v3.0_final.pdf. Дата обращения: 22.03.2017.

178) ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к конмпетенстности испытательных и калибровочных лабораторий [электронный ресурс] // Реестр ГОСТ РФ: [сайт]: — URL: http://www.rustehsert.ru/docs/gost170252009.pdf. Дата обращения: 15.05.2016

179) International Standart for Laboratories [электронный ресурс] // World Anti-Doping Agency : [сайт]: — URL: https://wada-main-prod.s3.amazonaws.com/resources/files/isl_june_2016.pdf. Дата обращения 16.10.2016.

180) TD2015IDCR Minimum criteria for chromatographic-mass spectrometric confirmation of the identity of analytes for doping control purposes [электронный ресурс] // World Anti-Doping Agency : [сайт] : — URL: https:// https://www.wada-ama.org/sites/default/files/resources/files/td2015idcr_-_eng.pdf. Дата обращения: 22.03.2017.