Прогнозирование акушерских осложнений и исходов беременностей у женщин с привычным выкидышем на основании молекулярно-генетических исследований тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.01, кандидат наук Парсаданян, Нанэ Геворковна

• Парсаданян, Нанэ Геворковна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Парсаданян, Нанэ Геворковна

ВЕДЕНИЕ........................................................................4

Глава 1. НЕИНВАЗИВНАЯ ПРЕНАТАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ПО УРОВНЯМ СВОБОДНОЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ДНК (СЭ-ДНК) У ЖЕНЩИН С ПРИВЫЧНЫМ ВЫКИДЫШЕМ И ОСЛОЖНЕННЫМ ТЕЧЕНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ (обзор литературы)........................12

1.1 Генетические причины привычного выкидыша................12

1.2 Неинвазивная пренатальная диагностика по уровням сэ-ДНК в прогнозировании гестационных осложнений................................15

1.3 Возможности неинвазивной пренатальной диагностики по

сэ-ДНК в выявлении анеуплоидий.........................................20

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..............28

2.1 Критерии включения и исключения пациенток в группы исследования..........................................................................28

2.2 Методы исследования................................................31

2.3 Специальные методы исследования...............................33

2.4 Статистическая обработка материала.............................42

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ............................................................44

3.1 Определение уровней сэ-ДНК независимо от пола плода для

прогнозирования гестационных осложнений..................................44

3.1.1. Клиническая характеристика женщин исследуемых групп..44

3.1.2. Результаты клинико-лабораторного обследования супружеских пар с привычным выкидышем на ранних сроках беременности.................................................................................51

3.1.3. Течение беременностей у пациенток исследуемых групп....54 3.1.4.0пределение общей и сэ-ДНК в динамике с 6 до 22 недели

беременности..........................................................................58

3.1.5. Исходы наблюдаемых беременностей у женщин основной и контрольной групп...................................................................71

3.1.6. Анализ течения родов, послеродового периода и состояния

новорожденных.....................................................................80

3.2 Диагностика анеуплоидий по сэ-ДНК у пациенток высокого

риска по развитию хромосомной патологии..................................87

Глава 4.ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.......99

ВЫВОДЫ........................................................................120

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.................................123

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...............................................127

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..................................................129

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Прогнозирование акушерских осложнений и исходов беременностей у женщин с привычным выкидышем на основании молекулярно-генетических исследований»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы

Проблема невынашивания беременности, имеющая не только медицинское, но и социальное значение, остается одной из наиболее актуальных в современном акушерстве.

Невынашивание беременности - самопроизвольное прерывание беременности в срок от зачатия до 37 недель беременности, считая от первого дня последней менструации. В Российской Федерации с 2012 года осуществлен переход на международную систему регистрации перинатальной смертности, начиная со срока 22 недели беременности и массы плода более 500 г. Прерывание беременности от зачатия до 22 недель беременности называют самопроизвольным выкидышем, с 22 по 28 неделю ранними преждевременными родами, с 28 до 37 недели -преждевременными родами.

Ранние потери беременности (до 22 недель) составляют практически 85% от всех самопроизвольных гестационных потерь и чем меньше срок беременности, тем чаще выкидышу предшествует гибель эмбриона/плода [2]. Многие исследователи полагают, что спорадические самопроизвольные выкидыши в I триместре являются инструментом естественного отбора, так как при кариотипировании абортусов регистрируются до 60% эмбрионов с хромосомными аномалиями. Для привычных выкидышей, в тех случаях, когда у супружеской пары прерывается более 2 беременностей, хромосомные потери не столь часты, а прерывания беременности обусловлены в большей мере родительскими причинами [48].

Этиологические факторы, приводящие к привычным выкидышам, чрезвычайно разнообразны и помимо генетических причин включают: эндокринные, анатомические, инфекционные, аллоиммунные, аутоиммунные, тромбофилические нарушения [15, 21, 128].

В большинстве случаев в основе привычного выкидыша лежит сочетание нескольких причинных факторов. Поэтому при обследовании и подборе терапии нужно учитывать все факторы, приводящие к прерыванию беременности.

В настоящее время получены убедительные данные, свидетельствующие о том, что у женщин с повторными ранними прерываниями беременностей достоверно чаще встречаются такие осложнения беременности как угрожающий выкидыш, плацентарная недостаточность, задержка роста плода, кровотечения во втором и третьем триместрах беременности, преждевременные роды [3, 11, 12, 23, 38]. Это свидетельствует о реализации плацентарных нарушений с самых ранних сроков беременности, что приводит к развитию поздних гестационных осложнений [39, 152].

При проведении исследований было установлено, что апоптотические изменения трофобласта во время беременности находят отражение в повышении уровней свободной эмбриональной ДНК (сэ-ДНК) [71], что было описано при последующем развитии различных гестационных осложнений, таких как угроза выкидыша, задержка роста плода (ЗРП), преэклампсия, преждевременные роды [60, 76]. При этом происходит высвобождение сэ-ДНК в плазму крови беременной до концентраций значительно превышающих таковую при физиологической беременности задолго до появления клинических признаков осложнений [93, 97, 159]. Предполагается, что сэ-ДНК попадает в кровь матери несколькими путями: из фетальных клеток, переходящих плацентарный барьер и разрушающихся иммунной системой, в результате лизиса клеток плаценты и прямого выброса ДНК плода в кровь матери [102, 106]. Сэ-ДНК обнаруживается уже на первых неделях развития плода, более того у 80% беременных женщин она обнаруживается на 28-й день после зачатия. Эти данные свидетельствуют о том, что сэ-ДНК появляется в крови матери раньше

времени формирования системы кровообращения плода. В настоящее время многие работы подтверждают, что источником ДНК плода в материнском кровотоке являются клетки трофобласта.

Другая важная задача при угрожающем и привычном выкидыше - оценка состояния эмбриона и диагностика хромосомных аномалий, которые наследуются от родителей или возникают de novo. Хромосомные аномалии являются наиболее частыми генетическими нарушениями, встречающимися при привычных выкидышах [141]. В настоящее время, пренатальная диагностика заключается в проведении биохимического и ультразвукового скрининга [14, 42, 45], а также по показаниям - инвазивных процедур. При проведении хориоцентеза материалом для исследования является ткань хориона между 10 и 12 неделями или с помощью плацентоцентеза, амниоцентеза между 14 и 16 неделями гестации — клетки плаценты или амниотической жидкости [13, 72]. При проведении инвазивной пренатальной диагностики отмечается риск потери беременности почти 0,5 - 2%, а у женщин с выкидышами в анамнезе до 5%. Сэ-ДНК может быть полезным маркером для прогнозирования самопроизвольного выкидыша, как в случаях анеуплоидии, так и при нормальном кариотипе плода [7]. В настоящее время не ясно достаточной ли точностью обладают методы неинвазивной пренатальной диагностики, для того чтобы заменить кариотипирование. Многие авторы указывают, что методы неинвазивной пренатальной диагностики до сих пор не могут быть альтернативой или заменить инвазивные процедуры, особенно в случаях мозаицизма, когда число анеуплоидных клеток уступает нормальным [55, 79, 148]. Однако, определение свободных нуклеиновых кислот может быть использовано для скрининга и определения риска у всех беременных независимо от возраста до постановки окончательного диагноза, как самостоятельный метод, так и в дополнение к существующим методам [66, 131]. Исследователи полагают, что

определение свободной ДНК эмбрионального происхождения может заменить или усовершенствовать существующие скрининговые тесты [74,91, 155].

Существующие в настоящее время в нашей стране методы неинвазивной пренатальной диагностики позволяют выявить сэ-ДНК в крови матери при вынашивании плода мужского пола, либо резус-положительного плода при условии, что мать резус-отрицательная [10, 98, 114, 130]. Такое значительное ограничение возможностей методов не позволяет использовать подобные методики, как скрининговые в прогнозировании осложнений беременности или патологии плода.

Исходя из вышеизложенного, определение уровней сэ-ДНК во время беременности, независимо от пола плода, будет значимым в прогнозировании гестационных осложнений и исходов беременностей и в ряде случаев позволит избежать ненужных инвазивных диагностических и лечебных мероприятий [46, 103, 145].

Все вышеперечисленное определило цель предстоящего исследования.

Целью настоящего исследования является оптимизация программы неинвазивной пренатальной диагностики и прогнозирования исходов беременностей у супружеских пар с привычным выкидышем.

Задачи исследования

1. Провести анализ нарушений репродуктивной функции у супружеских пар с привычным выкидышем на основании комплексного клинико-лабораторного обследования.

2. Определить уровни сэ-ДНК независимо от пола плода в периферической крови женщин в динамике при нормальной и осложненной беременности.

3. На основании анализа течения и исходов наблюдаемых беременностей провести оценку эффективности прогнозирования

гестационных осложнений и исходов беременностей по уровням сэ-ДНК в сроках до 22 недель.

4. Оценить возможность выявления анеуплоидий 21, 18 хромосом, копийности половых хромосом X и У методом высокопроизводительного секвенирования до 18 недель беременности по периферической крови беременных женщин высокого риска.

5. Разработать алгоритм обследования и пренатальной диагностики пациенток с привычным выкидышем для оптимизации акушерской тактики.

Научная новизна

Впервые в стране определены ДНК маркеры для оценки уровней сэ-ДНК вне зависимости от пола плода в периферической крови беременных женщин на когорте супружеских пар с ненарушенной репродуктивной функцией, с угрожающим и привычным выкидышем. Установлено, что апоптотические выбросы сэ-ДНК трофобластического происхождения, поступающие в материнский кровоток, имеют место при угрожающем и начавшемся выкидыше, как универсальный механизм, возникающий при отслойке хориона. Оценка уровней сэ-ДНК у пациенток с угрожающим, привычным выкидышем, нормальным течением гестационного процесса позволила расширить понимание патогенетических механизмов реализации самопроизвольного прерывания беременности.

Установлена возможность неинвазивного определения сэ-ДНК в периферической крови женщин до 18 недель беременности для диагностики анеуплоидий - трисомии 21, 18 а также копийности половых хромосом (X и У) методом высокопроизводительного секвенирования.

Динамическое определение уровней сэ-ДНК у женщин с 6 по 22 неделю беременности независимо от пола плода позволило оценить уровень апоптоза клеток трофобласта, что послужило критерием

успешности процессов имплантации и эффективности проводимого лечения.

Практическая значимость

Проведена оценка клинической значимости выявления анеуплоидий по 21 и 18 хромосомам, а также копийности половых хромосом (X и У) с помощью высокопроизводительного секвенирования по сравнению с общепринятым скринингом беременных. Проведенная валидация метода высокопроизводительного секвенирования показала высокую точность тестов неинвазивного определения трисомий 21, 18, копийности половых хромосом (X и У), что дает основание рекомендовать данную методику для включения в систему скрининга беременных.

Неинвазивное пренатальное определение анеуплоидий у женщин с клинической картиной угрожающего / начавшегося выкидыша позволяет оптимизировать тактику ведения беременности с отказом от ненужных терапевтических мероприятий в случае хромосомной патологии плода.

Разработан алгоритм мониторинга течения беременности и контроля за эффективностью проводимой терапии на основании оценки уровней сэ-ДНК до 22 недель. Согласно полученным данным, высокие уровни сэ-ДНК являются маркерами предикторами самопроизвольного прерывания беременности до 22 недель, анеуплоидий, плацентарной недостаточности. Показано, что нормализация уровней сэ-ДНК в процессе терапии у женщин с начавшимся выкидышем является положительным прогностическим признаком и коррелирует с пролонгированием беременности. Внедрение предложенного алгоритма позволит прогнозировать осложнения и исходы беременностей и оценить эффективность проводимой терапии.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. У беременных с угрожающим и начавшимся выкидышем отмечаются апоптотические выбросы в материнский кровоток сэ-ДНК трофобластического происхождения, как универсальный механизм, возникающий при отслойке хориона.

2. При отсутствии клинических проявлений угрозы прерывания беременности у женщин с привычным выкидышем уровни общей и сэ-ДНК достоверно превышают аналогичные показатели пациенток с неотягощенным акушерским анамнезом, что создает предпосылки к формированию плацентарной недостаточности.

3. Установленная высокая точность тестов неинвазивного определения трисомий 21, 18, копийности половых хромосом (X и У), методом высокопроизводительного секвенирования дает основание рекомендовать данную методику для включения в систему скрининга беременных высокого риска развития хромосомной патологии.

4. Определение высоких уровней общей и сэ-ДНК в периферической крови беременных позволяет прогнозировать угрожающий, начавшийся выкидыш, самопроизвольное прерывание беременности за 2 недели до реализации клинических симптомов.

Личный вклад автора

Автором проведена систематизация литературных данных по теме диссертации, лично разработана анкета для сбора анамнеза, проведен анализ клинико-анамнестических данных и результатов обследования 256 женщин в проспективном исследовании, удовлетворяющих критериям включения в исследование. Автор лично участвовал в ведении беременности и родоразрешении женщин, включенных в исследование. Автором осуществлялись: забор, подготовка, хранение биологического материала на преаналитическом этапе, участие в молекулярно-биологических и генетических исследованиях. Анализ, статистическая обработка полученных данных проведены автором

самостоятельно в соответствии с правилами и обеспечивают достоверность результатов и сформулированных выводов. Написание и публикация результатов выполнены автором лично.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.01.01 - «акушерство и гинекология». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, а именно пунктам 1, 2, 3, 4.

Апробация диссертации Основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции отделения профилактики и терапии невынашивания беременности совместно с лабораторией молекулярно-генетических методов 16.12.2014 года и на заседании апробационной комиссии ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России 22.12.2014 г.

Внедрение результатов работы в практику Основные рекомендации, вытекающие из результатов исследования, используются во 2-м отделении акушерском патологии беременности при обследовании и лечении супружеских пар с привычными потерями плода.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, все в рецензируемых научных изданиях.

Структура работы

Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, изложена на 145 страницах компьютерного текста. Работа содержит 31 таблицу и 12 рисунков. Библиографический указатель включает 159 литературный источник, из них 45 отечественных и 114 иностранных авторов.

Глава 1

НЕИНВАЗИВНАЯ ПРЕНАТАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ПО

УРОВНЯМ СЭ-ДНК У ЖЕНЩИН С ПРИВЫЧНЫМ

ВЫКИДЫШЕМ И ОСЛОЖНЕННЫМ ТЕЧЕНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ (обзор литературы)

1.1. Генетические причины привычного выкидыша

Проблема неинвазивной пренатальной диагностики интересует исследователей и клиницистов в связи с необходимостью своевременной постановки диагноза с минимальным риском для состояния матери и плода.

При осложненном течении беременности возможности назначения инвазивных методов диагностики ограничены и сопряжены с высоким риском потери желанной беременности [64, 95]. В то же время одной из важнейших задач именно в условиях угрожающего выкидыша является оценка состояния плода и диагностика хромосомных аномалий, наследуемых от родителей или возникающих de novo.

Наиболее вероятны генетические причины при привычных потерях беременности в следующих клинических ситуациях:

• Очень ранние потери беременности (анэмбрионии).

• Семейный анамнез - данные о наличии в семье детей с хромосомной патологией или точечными генными мутациями.

• Наличие у супружеской пары случаев анеуплоидий [85, 138, 139].

У исследователей нет единого мнения относительно вопроса, улучшает ли прогноз для последующей беременности наличие анеуплоидии абортуса при цитогенетическом исследовании.

Около 50-70% спорадических ранних потерь беременности обусловлены хромосомными анеуплоидиями, чаще всего это моносомия по X хромосоме, трисомии по 16, 13, 18, 21 хромосомам [85]. При этом в большинстве случаев у родителей имеется нормальный кариотип. В ходе проведенных исследований сделан вывод, что женщины с выкидышами плодом с анеуплоидией находятся в группе повышенного риска для рецидива анеуплоидии при последующих беременностях. Кроме того, было отмечено [138, 139], что анеуплоидии чаще встречаются при спонтанных выкидышах (частота около 50%), чем у женщин с привычным выкидышем (10%-25%).

Если один из партнеров оказывается носителем сбалансированной хромосомной перестройки, прогноз в большей мере зависит от вида хромосомной перестройки [101].

Исходы беременностей у пар со сбалансированной транслокацией, как правило, благоприятные. В таблице 1 приведен общий риск аномального рождения и привычного невынашивания беременности у пар, которые являются носителями сбалансированной транслокации. В 2-5% случаев у пар с повторными выкидышами, один из партнеров является носителем Робертсоновской транслокации. При этом вероятность рождения живого ребенка достигает 70%, особенно если только один из партнеров является носителем сбалансированной транслокации [56]. В этой связи парам со сбалансированными хромосомными перестройками необходимо предлагать инвазивную пренатальную диагностику (хориоцентез или амниоцентнез), что занесено в клинические рекомендации ведения подобных пациентов [49, 70].

Хромосомные аномалии эмбриона при спорадических выкидышах присутствуют у 50% абортусов. Многие исследователи связывают это со старшим репродуктивным возрастом женщины и преждевременным истощением яичников. Однако повторяющиеся потери беременностей, в

результате анеуплоидии встречаются гораздо чаще. Одиночные дефекты генов и неслучайная инактивация Х-хромосомы могут быть причиной повторных выкидышей, которые нельзя обнаружить при рутинном кариотипировании. Исходы беременностей при носительстве сбалансированных перестроек представлены в таблице 1.

Таблица 1

Исходы беременностей при носительстве сбалансированных

перестроек

Перестройка Риск

Родились живыми Неразвивающиеся беременности

Перестройка у одного из родителей До 10% 30-50%

- Робертсоновская (0;0&0;С), отец, мать - по 21 хромосоме у одного из родителей 10-15% 5-10% До 30%

Инверсия (перицентрическая) - парацентрическая - у одного из родителей 5-10% 0,1-0,5 % 50%

В отдельных исследованиях получены данные о том, что в случае выявления анеуплоидии абортуса прогноз вынашивания следующей беременности лучше, чем у пар с привычным выкидышем и нормальным кариотипом погибшего эмбриона [77, 100]. В другом исследовании, напротив, показано, что у пар с привычным выкидышем и наличием подтвержденной анеуплоидии в исходе беременности вероятность повторения подобной ситуации выше, чем при нормальном кариотипе абортуса [153]. Во всех случаях, подобные ситуации нечасто обусловлены сбалансированными хромосомными перестройками у матери или отца, как правило, кариотип родителей нормальный. Вместе с тем, частота сбалансированных хромосомных перестроек в парах с привычным выкидышем составляет 4,1 - 11%, по сравнению с популяционными данными - 0,6%. Наиболее часто встречаются

сбалансированные реципрокные транслокации и Робертсоновская транслокация, реже инверсии и мозаицизм. В этой связи кариотипирование пар с привычным выкидышем входит в стандарт обследования в программе предгестационной подготовки [104, 144]. Кариотипирование родителей и дальнейшее консультирование генетика является важной частью обследования пар с повторными потерями беременности, в результате чего ставится вопрос о возможности планирования беременности и в необходимости инвазивной пренаталыюй диагностики во время беременности.

1.2. Неинвазивная пренатальная диагностика по уровням сэ-ДНК в прогнозировании гестационных осложнений

Открытие свободной (внеклеточной) эмбриональной ДНК (сэ-ДНК), циркулирующей в плазме крови матери, положило начало новым возможностям неинвазивной пренатальной диагностики во время беременности [129, 134].

Пионерами в данной области были группа авторов под руководством Dennis Lo, с 1997 года непрерывно совершенствующие методы выявления сэ-ДНК [105]. Тем не менее, детальные исследования в неинвазивной пренатальной диагностике были проведены в течение последних пятнадцати лет, что связано с прогрессивным развитием технологии секвенирования.

Доля сэ-ДНК в плазме крови матери составляет 1-2% от всей циркулирующей ДНК [76, 98], что ограничивало ее выявление и диагностические возможности методов.

Задача, стоящая перед исследователями состоит в количественном определении ДНК плода на фоне большого количества ДНК матери. Некоторые локусы, такие как У хромосома или ген RHD (Rhesus D), у беременной с резус-отрицателыюй принадлежностью крови, позволяют

детектировать количество ДНК в плазме матери методом ПЦР. Определение наличия Y хромосомы и гена RHD описано в мировой литературе и применяется в клинической практике. Однако таким образом можно определить ДНК плода только у 50% беременных женщин. На данный момент сэ-ДНК используется для неинвазивного пренатального определения пола плода при сцепленных с полом заболеваниях и резус-принадлежности плода у резус-отрицательных беременных женщин [68, 87, 120, 158].

Новые открытия в эпигеномике сделали возможным использовать определения сэ-ДНК в течение беременности вне зависимости от пола плода [53, 73, 108, 90, 118]. Существует несколько способов определения доли свободной эмбриональной ДНК в крови матери вне зависимости от пола и Rh-фактора плода. Все они основаны на обнаружении различий между ДНК принадлежащей матери и ДНК плода.

Одним из методов является определение ДНК плода на основании профиля метилирования. Данный метод основан на эпигенетических различиях между плодовой и материнской ДНК, а именно на различиях в метилировании плодовой ДНК и ДНК матери. В качестве мишеней используются гены гиперметилированные у плода и гипометилированные у матери, что позволяет использовать чувствительные к метилированию рестриктазы. Подобные ферменты специфично разрушают неметилированную ДНК матери и оставляют только гиперметилированную ДНК плода. После этого становится возможной специфичная детекция свободной ДНК плода методом ПЦР в режиме реального времени [ 132, 135, 137].

К другим методикам относятся определение мутаций унаследованных от отца методом MALDI-TOF MS, матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация, анализ коротких тандемных повторов. Клиническое применения данных методик

описано для неинвазивной пренатальной диагностики талассемии, ахондроплазии, миодистрофии, муковисцидоза и врожденной гиперплазии коры надпочечников.

Внедрение массивного параллельного геномного секвенирования в научные и клинические исследования открыло новую эру в неинвазивной пренатальной диагностике, как в исследовательском, так и в практическом направлении [157].

Клиническое использование количественного измерения сэ-ДНК в настоящее время активно развивается. Еще в 1999 году было обнаружено почти 5-кратное повышение сэ-ДНК плода в кровотоке матери при преэклампсии по сравнению с группой женщин с нормально протекающей беременностью [136]. Было установлено, что при преэклампсии происходит выброс в материнский кровоток клеток синцитиотрофобласта, микрочастиц, ДНК и РНК молекул. Анализ данного материала может расширить понимание вклада плацентарных факторов в этиологию преэклампсии. При дальнейшем изучении этой патологии выявлен не только рост уровней сэ-ДНК, но и значительное повышение общего уровня ДНК матери, причем увеличение обоих показателей соответствовало степени тяжести преэклампсии [127]. Кроме того, было показано, что концентрация сэ-ДНК возрастает задолго до появления первых клинических симптомов. Так как ДНК плазмы является маркером клеточной гибели, повышенный уровень фетальной ДНК может быть результатом некроза и апоптоза клеток плаценты. С другой стороны, нарушение функции почек и печени, наблюдаемое при преэклампсии, ослабляет выведение циркулирующей ДНК из материнской крови. Кроме преэклампсии, были описаны и другие акушерские осложнения, при которых имеет место повышение уровня сэ-ДНК: преждевременные роды, тяжелая рвота беременных, плотное прикрепление плаценты или ее врастание, ЗРП,

внутриматочные гематомы, многоводие, плацентарная недостаточность [84, 89, 94, 147].

Связь повышенных уровней сэ-ДНК с развитием плацентарной недостаточности была продемонстрирована в нескольких исследованиях. Так во Франции, определены уровни сэ-ДНК у женщин с задержкой роста плода (ЗРП) в связи с преэклампсией (группа А, 19 женщин), при ЗРП вследствие других причин (группа В, 31 пациентка). Контрольная группа состояла из 28 женщин (группа С). В результате исследования были сделаны выводы, что уровни как общей, так и сэ-ДНК были достоверно выше при плацентарной недостаточности и ЗРП [151].

В Бристольском университете проводили оценку уровней сэ-ДНК в плазме крови матери во время нормальной беременности и сравнивали с осложненной беременностью (плацентарная недостаточность, преэклампсия и / или ЗРП). В исследование вошли 138 женщин, вынашивающих плод мужского пола, из них у 77 женщин беременность протекала нормально, у 49 - осложнилась преэклампсией, у 12 - были признаки ЗРП. Уровни сэ-ДНК были значительно выше у женщин с преэклампсией и с ЗРП, чем у женщин с нормальной беременностью, а также наблюдалась взаимосвязь высоких уровней сэ-ДНК со степенью тяжести преэклампсии.

Группой ученых из Копенгагена было проведено исследование, в котором проанализирована взаимосвязь повышенных уровней сэ-ДНК у женщин с высоким риском преждевременных родов [92]. Была обнаружена значительная связь между преждевременными родами и повышенным уровнем сэ-ДНК, точность метода составляла 95%.

Другое исследование было посвящено определению взаимосвязи между уровнями сэ-ДНК в крови матери и сроками родоразрешения [89]. Установлена взаимосвязь высоких уровней сэ-ДНК в крови у

женщин с развитием спонтанных преждевременных родов. Это наблюдение требует дальнейшего исследования для понимания патогенетических механизмов, лежащих в основе данного состояния.

Кроме того, сэ-ДНК и общая ДНК матери были предложены в качестве потенциальных маркеров для неинвазивной пренатальной диагностики во время беременности. Тем не менее, соотношение изменений уровней сэ-ДНК и материнской ДНК при самопроизвольном выкидыше плодом с анеуплоидией еще не до конца изучены. Так в Корее было проведено исследование, где определялись уровни свободной эмбриональной ДНК и общей ДНК в кровотоке женщин с самопроизвольным выкидышем плодом с анеуплоидией [61]. В исследование вошло 268 женщин в первом триместре беременности, из них 41 женщина с самопроизвольным выкидышем и нормальным кариотипом плода, 26 женщин с самопроизвольным выкидышем плодом с анеуплоидией, и 201 женщина контрольной группы. Неметилированный РВЕ9А ген был использован для измерения уровней свободной эмбриональной ДНК в материнской плазме. Уровни свободной эмбриональной ДНК и общей ДНК были значительно выше у женщин с самопроизвольным выкидышем, как с нормальным кариотипом плода, так и с анеуплоидиями по сравнению с контрольной группой ( Р <0,001 в обеих группах). В результате был сделан вывод, что высокие уровни сэ-ДНК и общей ДНК матери были выявлены у женщин с самопроизвольным выкидышем плодом с анеуплоидией [96, 154]. Эти результаты показывают, что свободная эмбриональная ДНК может быть полезным маркером для прогнозирования самопроизвольного выкидыша, как в случаях анеуплоидии, так и при нормальном кариотипе плода.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Парсаданян, Нанэ Геворковна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Айламазян, Э. К. Гестоз : теория и практика / Э. К. Айламазян, Е. В. Мозговая. - М.: Медпресс-информ, 2008.

2. Акушерство. Национальное руководство / Под ред. Э.К. Айламазяна, В.И. Кулакова, В.Е. Радзинского, Г.М. Савельевой. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 1218 с.

3. Александрова, Н. В. Ранние этапы становления системы мать -плацента - плод / Н. В. Александрова, О. Р. Баев // Акушерство и гинекология. -2011.- №8.-С. 4-10.

4. Баев, О. Р. Особенности состояния венозной гемодинамики плода при нарушениях артериального кровотока в фетоплацентарной системе / О. Р. Баев // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2004. - Т.З, № 1. -С. 30-36.

5. Баранов, В. С. Цитогенетика эмбрионального развития человека / В. С. Баранов, Т. В. Кузнецова. - СПб. : Изд-во Н-Л, 2007. - 620 с.

6. Баранов, В. С. Новое в пренатальной диагностике и профилактике наследственных и врожденных болезней у плода человека / В. С. Баранов // Акушерство и гинекология. - 2007. - № 5. - С. 45-50.

7. Баранов, В. С. Экологические и генетические причины нарушения репродуктивного здоровья и их профилактика / В. С. Баранов, Э. К. Айламазян // Журнал акушерства и женских болезней. - 2007. - Т. LVI, вып.1. - С. 3 - 10.

8. Баранов, В. С. Прикладное и фундаментальное направления пренатальной диагностики / В. С. Баранов, Э. К. Айламазян. — // Журнал акушерства и женских болезней. - 2012. - Т. LXI, вып. 1. - С. 54-61.

9. Бахарев, В.А. Неинвазивный скрининг беременных / В.А. Бахарев, H.A. Каретникова, A.M. Стыгар // Акушерство и гинекология. - 2012. - № 4. -С. 26-31.

10. Благодатских, Е. Г. Использование циркулирующих ДНК и мРНК для неинвазивного пренатального определения пола, резус фактора и

диагностики синдрома Дауна у плода : автореф. дис. ... канд.биол. наук / Е. Г. Благодатских. - М., 2010. - 23 с.

11. Ведение беременности у женщин с невынашиванием в анамнезе : пособие для врачей / В.И. Краснопольский, О.Ф. Серова, Л.И. Титченко [и др.]. -М., 2007.-24 с.

12. Зайнулина, М. С. Тромбофилия: этиологический фактор или патогенетический аспект осложненного течения беременности? / М. С. Зайнулина, Е. А. Корнюшина, Д. Р. Бикмуллина // Журнал акушерства и женских болезней. - 2010. - Т. ЫХ, № 1. - С. 18-30.

13. Золотухина, Т.В. Пренатальная цитогенетика: вчера, сегодня, завтра / Т. В. Золотухина // Медицинская генетика. - 2007. - Т. 6, №10 (64). - С. 17-20.

14. Кащеева, Т.К. Биохимический скрининг маркерных белков в сыворотке крови беременных / Т.К. Кащеева // Клиническая лабораторная диагностика. - 2008. - №2. - С.25-32.

15. Клиническое значение морфофункционального состояния эндометрия при нарушениях репродуктивной функции / О.Ф. Серова, Г.В. Тамазян, Н.И. Соваев [и др.] // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии . - 2010. -Т. 9, № 4. - С. 43 - 48.

16. Малышева, О. В. Неинвазивная пренатальная диагностика / О. В. Малышева, В. С. Баранов // Проблемы, подходы и перспективы. - 2012. - Т. ЬХ1, № 3. - С. 83-93.

17. Нарушения внутриматочного кровообращения и их прегравидарная коррекция у пациенток с тяжелым гестозом в анамнезе / Г. М. Савельева, Е. Ю. Бугеренко, О. Б. Панина [и др.] // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. -2010. — № 3. - С. 5-10.

18. Особенности продукции простагландинов у пациенток с невынашиванием беременности / О. Ф. Серова, С. Ю. Марченко, И. М. Айларова [и др.] // Российский вестник акушера - гинеколога. - 2007. - № 5. — С. 5-8.

19. Оценка перинатальных факторов риска у недоношенных с экстремально низкой и очень низкой массой тела / М. В. Нароган, Л. В. Малютина, О. Ф. Серова [и др.] // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2011. - № 3. - С. 20-24.

20. Оценка функции адгезии к эндотелиальным клеткам различных субпопуляций мононуклеаров периферической крови беременных женщин в норме и при гестозе / Д. И. Соколов, М. В. Лесничия, А. В. Селютин [и др.] // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2008. - Т. 7, № 4. - С. 3441.

21. Оценка цитокинового профиля при химиосенсибилизированной фотомодификации крови у пациенток с привычным невынашиванием беременности вирусного генеза в анамнезе / О. В. Макаров, А. 3. Хашукоева, О. А. Свитич [и др.] // Акушерство и гинекология. - 2014. - № 8. - С. 19-26.

22. Радзинский, В. Е. Преждевременные роды / В. Е. Радзинский, И. Н. Костин // Акушерство и гинекология. - 2009. - № 4. - С. 16-19.

23. Роль ангиогенных факторов роста в патогенезе преэклампсии и плацентарной недостаточности / О. В. Макаров, Е. В. Волкова, Е. Ю. Лысюк [и др.] // Акушерство и гинекология. -2014. - № 12. - С. 64-70.

24. Роль хронического эндометрита в генезе ранних репродуктивных потерь / В. Н. Юдаев, О. Ф. Серова, И. А. Трифонова [и др.] // Вестник последипломного медицинского образования. - 2010. - № 1. - С. 36-38.

25. Роль хронического эндометрита в ранних репродуктивных потерях / О. Ф. Серова, Т. Б. Добровольская, Н. В. Зароченцева [и др.] // Репродуктивные технологии сегодня и завтра : материалы XV международной конференции. -Чебоксары, 2005. - С. 86 - 87.

26. Роль цитокинов в контроле развития плаценты в норме и при гестозе / Д. И. Соколов, М. В. Лесничия, А. В. Селютин [и др.] // Иммунология. — 2009. - № 1.-С. 22-27.

27. Румянцева, В. П. Роль лейкоцитов и цитокинов в развитии и регуляции родовой деятельности / В. П. Румянцева, О. Р. Баев, В. Н. Верясов // Акушерство и гинекология. - 2011. - № 8. - С. 11-15.

28. Савельева, Г. М. Какой классификации гестозов (преэклампсии) должен придерживаться врач в повседневной работе? / Г. М. Савельева, В. И. Краснопольский, А. Н. Стрижаков // Российский вестник акушера-гинеколога. -2013.-№2.-С. 73-76.

29. Савельева, Г. М. Материнская смертность и пути ее снижения / Г. М. Савельева, М. А. Курцер, Р. И. Шалина // Акушерство и гинекология. - 2009. -№ 3. - С. 11-15.

30. Свободная эмбриональная ДНК в плазме крови как предиктор самопроизвольных потерь беременности у женщин с привычным выкидышем / Н. И. Федорова, Н. К. Тетруашвили, Л. 3. Файзуллин [и др.] // Акушерство и гинекологии. - 2012. - № 6. - С. 4-8.

31. Серов, В. Н. Клинико-иммунологические факторы в формировании аутоиммунной овариальной недостаточности воспалительного генеза / В. Н. Серов, М. В. Царегородцева, А. А. Кожин // Акушерство и гинекология. - 2007. - № 6. - С. 28-33.

32. Серов, В. Н. Пути снижения акушерской патологии / В. Н. Серов // Акушерство и гинекология. - 2007. - № 5. - С. 8-12.

33. Серов, В. Н. Эффективность профилактики преждевременных родов / В. Н. Серов, О. И. Сухорукова // Акушерство и гинекология. - 2013. -№3.- С.48-53.

34. Серова, О. Ф. Иммунотропная терапия урогенитальных инфекций у беременных / О. Ф. Серова, Н. В. Зароченцева, Н. С. Меньшикова // Вестник последипломного медицинского образования. - 2009. - № 1. - С. 23-27.

35. Серова, О. Ф. Новые аспекты генеза ранних репродуктивных потерь / О. Ф. Серова, Н. В. Зароченцева, С. Ю. Марченко // АГ-Инфо. - 2007. - № 1. -С. 12-14.

36. Сидельникова, В. М. Преждевременные роды. Недоношенный ребенок / В. М. Сидельникова, А. Г. Антонов. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2006. -448 с.

37. Сидельникова, В. М. Невынашивание беременности / В. М. Сидельникова, Г. Т. Сухих. - М. : МИА, 2010. - 536 с.

38. Сидельникова, В. М. Привычная потеря беременности / В. М. Сидельникова. - М. : Триада-Х, 2005. - 304 с.

39. Сидорова, И. С. Особенности плацентации при преэклампсии и эклампсии / И. С. Сидорова, А. П. Милованов, Н. А. Никитина // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2014. - № 3. - С. 4 - 10.

40. Сидорова, И. С. Патоморфологические особенности повреждений мозга при тяжелой преэклампсии и эклампсии / И. С. Сидорова, А. П. Милованов, Н. А. Никитина // Акушерство и гинекология. - 2013. - № 3. - С. 44-48.

41. Сидорова, И. С. Роль плода в развитии преклампсии / И. С. Сидорова, М. А. Курцер, Н. А. Никитина // Акушерство и гинекология — 2012. — № 5. - С. 23-28.

42. Тимошевский, В. А. Технологии молекулярного кариотипирования в практике быстрой пренатальной диагностики клинически значимых анеуплоидий / В. А. Тимошевский, И. Н. Лебедев // Медицинская генетика. -2010.-Т. 9, №8.-С. 13-23.

43. Шуршалина, А. В. Хронический эндометрит у женщин с патологией репродуктивной функции : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / А. В. Шуршалина. - М., 2006. - 38 с.

44. Экстраэмбриональные и околоплодные структуры при нормальной и осложненной беременности: монография / В.Е. Радзинский, А.П. Милованов, И.М. Ордиянц [и др.] / Под ред. В.Е. Радзинского, А.П. Милованова. - М. : Медицинское информационное агентство, 2004. - 393 с.

45. Юдина, Е. В. Основы пренатальной диагностики / Е. В. Юдина, М. В. Медведев. -М.: РАВУЗДПГ, Реальное Время, 2002. - 184 с.

46. A new non-invasive prenatal diagnosis of Down syndrome through epigenetic markers and real-time qPCR / P. C. Patsalis, E. Tsaliki, G. Koumbaris [et al.]//Expert Opin. Biol. Ther. - 2012. - Vol. 12(Suppl. 1).-P. 155-161.

47. ACMG statement on noninvasive prenatal screening for fetal aneuploidy / A. R. Gregg, S. J. Gross, R. G. Best [et al.] // Genet. Med. - 2013. - Vol. 15. - P. 395-398.

48. Allison, J. L. Recurrent first trimester pregnancy loss: revised definitions and novel causes / J. L. Allison, D. J. Schust // Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes Obes. - 2009. - Vol. 16, № 6. - P. 446 - 450.

49. American College of Obstetricians and Gynecologists. Invasive prenatal testing for aneuploidy : ACOG Practice Bulletin № 88 // Obstet. Gynecol. - 2007. -Vol. 110.-P. 1459-1467.

50. Ashoor, G. Trisomy 13 detection in the first trimester of pregnancy using a chromosome-selective cell-free DNA analysis method / G. Ashoor // Ultrasound Obstet. Gynecol. - 2013. - Vol. 41, № 1. - P. 21 -25.

51. Avent, N. D. Non-invasive diagnosis of fetal sex; utilisation of free fetal DNA in maternal plasma and ultrasound / N. D. Avent, L. S. Chitty // Prenat. Diagn. - 2006. - Vol. 26. - P. 598-603.

52. Avent, N. D. RHD genotyping from maternal plasma: guidelines and technical challenges / N. D. Avent // Methods in Molecular Biology. - 2008. — Vol. 444.-P. 185-201.

53. Barrett, A. N. Stability of cell-freeDNA from maternal plasma isolated following a single centrifugation step / A. N. Barrett, H. A. Thadani, C. Laureano-Asibal // Prenat. Diagn. -2014. - Vol. 34. - P. 1283-1288.

54. Benn, P. Non-invasive prenatal testing for aneuploidy: current status and future prospects / P. Benn, H. Cuckle, E. Pergament // Ultrasound Obstet. Gynecol. -2013.-Vol. 42.-P. 15-33.

55. Bianchi, D. W. Integration of noninvasive DNA testing for aneuploidy into prenatal care: what has happened since the rubber met the road? / D. W. Bianchi, L. Wilkins-Haug // Clin. Chem. - 2014. - Vol. 60. - P. 78-87.

56. Branch, W. D. Recurrent Miscarriage / W. D. Branch, M. Gibson, M. Silver // Engl. J. Med. - 2010. - Vol. 363. - P. 1740-1747.

57. Can detection of late-onset PE at triage by sflt-1 or P1GF be improved by the use of additional biomarkers? / I. Kaufmann, C. Rusterholz, I. Hösli [et al.] // Prenat. Diagn. - 2013. - Vol. 32. - P. 1288-1294.

58. Can the quantity of cell-free fetal DNA predict preeclampsia: a systematic review / A. Martin, I. Krishna, B. Martina [et. al.] // Prenat. Diagn. - 2014. -Vol. 34.-P. 685-691. 108

59. Cell free DNA is more sensitive than cell-free mRNA as a marker for evaluation of fetal-maternal hemorrhage / K. Miura, K. Yoshiura, S. Miura [et al.] // Clin. Chem. - 2006. - Vol. 52. - P. 2121-2123.

60. Cell-free fetal DNA (SRY locus) concentration in maternal plasma is directly correlated to the time elapsed from the onset of PET to the collection of blood / A. Farina, A. Sekizawa, N. Rizzo [et al] // Prenatal Diagnostic. - 2004. - Vol. 24.-P. 293-297.

61. Cell-free fetal DNA and cell-free total DNA levels in spontaneous abortion with fetal chromosomal aneuploidy / J. H. Lim, M. H. Kim, Y. J. Han [et al.] // PLoS One. - 2013. - Vol. 8, № 2. - P. e56787.

62. Cell-free fetal DNA concentration in plasma of patients with abnormal uterine artery Doppler waveform and intrauterine growth restriction-a pilot study / E. Caramelli, N. Rizzo, M. Concu [et al.] // Prenat. Diagn. - 2003. - Vol. 23. - P. 367371.

63. Cell-free nucleic acids as potential markers for preeclampsia / S. Hahn, C. Rusterholz, I. Hosli [et al.] // Placenta. - 2011. - Vol. 32. - P. 17-20.

64. Characterization of first trimester fetal erythroblasts for non-invasive prenatal diagnosis / M. Choolani, K. O'Donoghue, D. Talbert [et al.] // Molecular Human Reproduction. - 2003. - Vol. 9, № 4. - P. 227 - 235.

65. Chromosome abnormalities identified in 347 spontaneous abortions collected in Japan / M. Nagaishi, T. Yamamoto, K. Iinuma [et al.] // J. Obstet. Gynaecol. Res. - 2004. - Vol. 30. - P. 237-241.

66. Clinical application of fetal sex determination using cell-free fetal DNA in pregnant carriers of X-linked genetic disorders / K. Miura, A. Higashijima, T. Shimada [et. al.] // J Human Genetic. - 2011. - Vol. 56, № 4. - P. 296 - 299.

67. Clinical evaluations of cell-free fetal DNA quantities in preeclamptic pregnancies / Y. G. Zeybek, T. Gunel, A. Benian [et al.] // J. Obstet. Gynaecol. Res. -2013. - Vol. 39. - P. 632-640.

68. Costa, J. M. New strategy for prenatal diagnosis of X-linked disorders / J. M. Costa, A. Benachi, E. Gautier // N. Engl. J. Med. - 2002. - Vol. 346. - P. 1502.

69. Dan, S. Clinical application of massively parallel sequencing-based prenatal noninvasive fetal trisomy test for trisomies 21 and 18 in 11,105 pregnancies with mixed risk factors / S. Dan // Prenat. Diagn. - 2012. - Vol. 32, №13. - P. 12251232.

70. DEGUM guidelines for amniocentesis and chorionic villus sampling / C. Kahler, U. Gembruch, K. S. Heling [et. al.] // Ultrasound Med. - 2013. - Vol. 34. - P. 435-440.

71. Derivation of a prediction rule for posttraumatic organ failure using plasma DNA and other variables / T. H. Rainer, Y. M. Lo, L.Y. Chan [et al.] // Ann. N.Y. Acad. Sci. - 2001. - Vol. 945. - P. 211-220.

72. DNA identification of fetal cells isolated from cervical mucus: potential for early non-invasive prenatal diagnosis / G. Mandy, D. Mantzaris, S. David [et al.] // Br. J. Obstet. Gynecol. - 2005. - Vol. 112. - P. 595 - 600.

73. DNA sequencing of maternal plasma reliably identifies trisomy 18 and trisomy 13 as well as Down syndrome: an international collaborative study / G. E. Palomaki, C. Deciu, E. M. Kloza [et al.] // Genet. Med. - 2012. - Vol. 14. - P. 296 -305.

74. DNA sequencing of maternal plasma to detect Down syndrome: an international clinical validation study / G.E. Palomaki, E.M. Kloza, G.M. Lambert-Messerlian [et al.] // Med. Genet. - 2011. - Vol. 13. - P. 913-920.

75. DNA sequencing versus standard prenatal aneuploidy screening / D. W. Bianchi, R.L. Parker, J. Wentworth [et al.] // N. Engl J Med. - 2014. - Vol. 370. - P. 799-808.

76. Elevation of both maternal and fetal extracellular circulating deoxyribonucleic acid concentrations in the plasma of pregnant women with PET / X. Y. Zhong, H. Laivuori, J.C. Livingston [et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2001. -Vol.-184.-P. 414-419.

77. Embrionic karyotype of abortuses in relation to the number of previous miscarriages / M. Ogasawara, K. Aoki, S. Okada [et. al.] // Fertil Steril. - 2000. -Vol. 73.-P. 300-304.

78. Fauzdar, A. Non-invasive prenatal testing (NIPT): a better option for patients / A. Fauzdar // Mol. Cytogenet. - 2014. - Vol. 7. - P. 17.

79. Feasibility of noninvasive prenatal testing for common fetal aneuploidies in an early gestational window / X. Shi, Z. Zhang, D.S. Cram [et al.] // Clin. Chim. Acta. - 2015. - Vol. 439. - P. 24-28.

80. Fetal DNA in maternal plasma in preeclamptic pregnancies / B. Vlkova, J. Turna, P. Celec [et.al.] // Hypertens Pregnancy. - 2014. - Vol. 7. - P. 1-14.

81. Fetal fraction in maternal plasma cell-free DNA at 11-13 weeks' gestation : effect of maternal and fetal factors / G. Ashoor, L. Poon, A. Syngelaki [et al.] // Fetal. Diagn. Ther. - 2012. - Vol. 31. - P. 237-243.

82. Fetal fraction in maternal plasma cell-free DNA at 11-13 weeks' gestation : relation to maternal and fetal characteristics // G. Ashoor, A. Syngelaki, L. C. Y. Poon [et al.] // Ultrasound Obstet. Gynecol. -2013. - Vol. 41. - P. 26-32.

83. Fetal fraction of cell-free DNA in maternal plasma in the prediction of spontaneous preterm delivery / M.S. Quezada, C. Francisco, D. Dumitrascu-Biris [et al.] // Ultrasound Obstet. Gynecol. - 2015. - Vol. 45. - P. 101-105.

84. First-trimester maternal plasma cell-free fetal DNA and preeclampsia / S. Sifakis, A. Zaravinos, N. Maiz [et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2009. - Vol. 201, №5.-P. 472-477.

85. Gardner, R. Chromosome abnormalities and Genetic Counseling / R. Gardner, G. Sutherland. - Oxford University Press Inc., 2011.

86. Genetic counseling, prenatal screening and diagnosis of Down syndrome in the second trimester in women of advanced maternal age: a prospective study / Q.W. Qi [et al.] // Chin. Med. J. Engl. - 2007. - Vol. 126, № 11. - P. 10.

87. Hall, A. Non-invasive prenatal diagnosis using cell-free fetal DNA technology: applications and implications / A. Hall, A. Bostanci, C.F. Wright // Public Health Genomics. - 2010. - Vol. 13, № 4. - P. 246-255.

88. High levels of circulatory erythroblasts and cell-free DNA prior to intrauterine fetal death / X. Y. Zhong, A. Steinborn, C. Sohn [et al.] // Prenat. Diagn. -2006.-Vol. 26.-P. 1272-1273.

89. High levels of fetal cell-free DNA in maternal serum: a risk factor for spontaneous preterm delivery / A. Farina, S. E. Leshane, R. Romero [et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. -2005. - Vol. 193 - P. 421-425.

90. High-Throughput Massively Parallel Sequencing for Fetal Aneuploidy Detection from Maternal Plasma / T. J. Jensen, T. Zwiefelhofer, R.C. Tim [et al.] // PLoS ONE. - 2013. - Vol. 8, № 3. - P. e57381.

91. How do women of diverse backgrounds value prenatal testing outcomes? / M. Kuppermann, R. Nease Jr., E. Gates [et al.] // Prenat. Diagn. - 2004. - Vol. 24. -P. 424-429.

92. Identifying mild and severe preeclampsia in asymptomatic pregnant women by levels of cell-free fetal DNA / T. R. Jakobsen, F.B. Clausen, L. Rode [et. al.] // Prenat. Diagn. - 2012. - Vol. 32. - P. 840- 845.

93. Increased apoptosis in the syncytiotrophoblast in human term placentas complicated by either PET or intrauterine growth retardation / N. Ishihara, H. Matsuo, H. Murakoshi [et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2002. - Vol. 86. - P. 158 -166.

94. Increased cell-free fetal DNA in plasma of two women with invasive placenta / A. Sekizawa, M. Jimbo, H. Saito [et al.] // Clin. Chem. - 2002. - Vol. 48. -P. 353-354.

95. Increased fetal DNA concentrations in the plasma of pregnant women carrying fetuses with trisomy-21 / Y.M.D. Lo., T.K. Lau, J. Zhang [et al.] // Clinical Chem. - 1999. - Vol. 45, № 10. - P. 1747 - 1751.

96. Increased free fetal DNA levels in early pregnancy plasma of women who subsequently develop preeclampsia and intrauterine growth restriction / S. Illanes, M. Parra, R. Serra [et al.] // Prenat. Diagn. - 2009. - Vol. 29, № 12. - P. 1118 -1122.

97. Increased maternal plasma fetal DNA concentrations in women who eventually develop PET / T.N. Leung, J. Zhang, T.K. Lau [et al.] // Clinical Chem. -2001.-Vol. 47.-P. 137- 139.

98. Incremental cost of non-invasive prenatal diagnosis versus invasive prenatal diagnosis of fetal sex in England / M. Hill, S. Taffinder, L.S. Chitty [et al.] // Prenatal Diagnostic. - 2011. - Vol. 31. - P. 267 - 273.

99. Kagan, K. O. Combined first trimester screening and cell-free fetal DNA - "next generation screening" / K. O. Kagan, B. Eiben, P. Kozlowski // Ultrasound Med. - 2014. - Vol. 35. - P. 229 - 236.

100. Karyotype of the abortus in recurrent miscarriage / J. Carp, V. Toder, A. Aviram [et al.] // Fertil. Steril. - 2001. - Vol. 75. - P. 678-682.

101. Langman, S. Medical Embryology / Ed. T. W. Sadler. - Lippincott Williams and Wilkins, 2009. - 414 p.

102. Leung, T. N. Thalassaemia screening in pregnancy / T. N. Leung, T. K. Lau, T. K. Chung // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. - 2005. - Vol. 17, № 2. - P. 129 -134.

103. Li, Y. Recent developments in the detection of fetal single gene differences in maternal plasma and the role of size fractionation / Y. Li, S. Hahn, W. Holzgreve // Ann. NY Acad. Sei. - 2006. - Vol. 1092. - P. 285 - 292.

104. Lichtenbelt, K. D. From karyotyping to array-CGH in prenatal diagnosis / K. D. Lichtenbelt, N. V. Knoers, G. H. Schuring-Blom // Cytogenetic Genome Res. -2011.-Vol. 135, №4.-P. 241 -250.

105. Lo, Y. PCR-Based Noninvasive Prenatal Diagnosis Using Fetal Cells in Maternal Circulation / Y. Lo // Methods Mol. Med. - 1998. - Vol. 16. - P. 265 - 274.

106. Masuzaki, H. Detection of cell free placental DNA in maternal plasma: direct evidence from three cases of confined placental mosaicism / H. Masuzaki, K. Miura // J. Med. Genet. - 2004. - Vol. 41. - P. 289 - 292.

107. Maternal plasma cell-free DNA in the prediction of pre-eclampsia / D. L. Rolnik, N. O'Gorman, M. Fiolna, [et al.] // Ultrasound Obstet. Gynecol. - 2015. -Vol. 45. - P. 106-111.

108. Maternal plasma cell-free fetal and maternal DNA at 11-13 weeks' gestation: relation to fetal and maternal characteristics and pregnancy outcomes / L. C. Poon, T. Musci, K. Song [et al.] // Fetal. Diagn. Ther. - 2013. - Vol. 33, № 4. -P. 215-223.

109. Melamed, N. Fetal gender and pregnancy outcome / N. Melamed, Y. Yogev, M. Glezerman // J. Matern. Fetal. Neonatal Med. - 2010. - Vol. 23, № 4. - P. 338-344.

110. Microfluidics digital PCR reveals a higher than expected fraction of fetal DNA in maternal plasma / F. M. Lun, R. W. Chiu, K. C. Allen Chan [et al.] // Clin. Chem.- 2008. -Vol. 54.-P. 1664-1672.

111. Mujezinovic, F. Procedure-related complications of amniocentesis and chorionic villous sampling: a systematic review / F. Mujezinovic, Z. Alfirevic // Obstet. Gynecol. - 2007. - Vol. 110, № 3. - P. 687-694.

112. Musci, T.J. Non-invasive prenatal testing with cell-free DNA: US physician attitudes toward implementation in clinical practice / T. J. Musci, G. Fairbrother, A. Batey // Prenat Diagn. - 2013. - Vol. 33. - P. 424-428.

113. Neyt, M. Introducing the non-invasive prenatal test for trisomy 21 in Belgium: a cost-consequences analysis / M. Neyt, F. Hulstaert, W. Gyselaers // Br. Med. J. - 2014. - Vol. 4. - P. e005922.

114. Non-invasive fetal sex determination in maternal plasma: a prospective feasibility study / F. J. Fernández-Martínez, A. Galindo, A. Garcia-Burguillo [et al.] // Genet. Med.-2012.-Vol. 14.-P. 101-106.

115. Non-invasive prenatal chromosomal aneuploidy testing—clinical experience: 100,000 clinical samples / R. M. McCullough [et al.] // PLoS One. -

2014. - Vol. 9. -№10. - P. el09173.

116. Non-invasive prenatal detection of achondroplasia in size-fractionated cell-free DNA by MALDI-TOF MS assay / Y. Li, G. C. Page - Christiaens, J. J. Gille [et al.] // Prenat. Diagn. - 2007. - Vol. 27, № 1. - P. 11 - 17.

117. Non-invasive prenatal detection of chromosomal aneuploidies using different next generation sequencing strategies and algorithms / M. Entezami, N. Trunk, M. Beck [et al.] // Prenat. Diagn. - 2012. - Vol. 32. - P. 569-577.

118. Non-invasive Prenatal Detection of Sex Chromosomal Aneuploidies by Sequencing Circulating Cell-Free DNA from Maternal Plasma / A. R. Mazloom , Z. Dzakula, P. Oeth [et al.] // Prenat. Diagn. - 2013. - Vol. 33. - P. 591-597.

119. Non-invasive prenatal determination of fetal sex: translating research into clinical practice / M. Hill, K. Finning, P. Martin [et. al.] // Clinical Genet. -2011.-Vol. 80. - P. 68-75.

120. Non-invasive prenatal exclusion of congenital adrenal hyperplasia by maternal plasma analysis: a feasibility study / R. W. K. Chiu, T. K. Lau, P. T. Cheung [et al.] // Clin. Chem. - 2002. - Vol. 48. - P. 778-780.

121. Non-invasive prenatal screening for fetal trisomies 21, 18, 13 and the common sex chromosome aneuploidies from maternal blood using massively parallel genomic sequencing of DNA / R. P. Porreco, T. J. Garite, K. Maurel [et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. -2014. - Vol. 211. - P. 1-12.

122. Non-invasive prenatal testing for fetal aneuploidies in the first trimester of pregnancy / Y. Song, S. Huang, X. Zhou [et. al.] // Ultrasound Obstet. Gynecol. -

2015. - Vol. 45, № 1. - P. 55-60.

123. Non-invasive prenatal testing : a replacement for chorionic villus sampling and amniocentesis for advanced maternal age? / K. E. Pettit, A. D. Hull, L. Korty [et al.]// Obstet. Gynecol. -2014. - Vol. 123.-P. 165-166.

124. Non-invasive tool for fetal sex determination in early gestational age / M. Mortarino, I. Garagiola, L.A. Lotta [et al.] // Haemophilia. - 2011. - Vol. 17, № 6.-P. 952-956.

125. Ohno, M. The role of noninvasive prenatal testing as a diagnostic versus a screening tool—a cost-effectiveness analysis / M. Ohno, A. Caughey // Prenat. Diagn. - 2013. - Vol. 33. - P. 630-635.

126. Placenta increta : postpartum monitoring of plasma cell-free fetal DNA / M. Jimbo, A. Sekizawa, Y. Sugito [et al.] // Clin. Chem. - 2003. - Vol. 49. - P. 1540-1541.

127. Placental microparticles, DNA, and RNA in preeclampsia / C. Rusterholz, M. Messerli, I. Hoesli [et al.] // Hypertens Pregnancy. - 2011. - Vol. 30. -P. 364-375.

128. Porter, T.F. Evidence-based care of recurrent miscarriage / T.F. Porter, J.R. Scott // Best Practice Res Clinal Obstetrics Gynaecology. - 2005. - Vol. 19., №. l.-P. 85-101.

129. Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum / Y. Lo, N. Corbetta, F. Chamberlain [et al.] // Lancet. - 1997 - Vol. 350. - P. 485 - 487.

130. Prospective register of outcomes of free fetal DNA testing (PROOF)— results of the first year's audit / L. Chitty, G. Daniels, K. Finning [et al.] // J Med Genetic. - 2007. - Vol. 44. - P. 28.

131. Puszyk, W. M. Non-invasive prenatal diagnosis of aneuploidy using cellfree nucleic acids in maternall blood: promises and unanswered questions / W. M. Puszyk, F. Crea, R. W. Old // Prenatal Diagnostic. - 2008. - Vol. 28. - P. 1-6.

132. Quantification and application of the placental epigenetic signature of the RASSF1A gene in maternal plasma / Z. Fuxi, L. Runhua, Y. Jing [ et. al.] // Prenat. Diagn. - 2010. - Vol. 30. - P. 778-782.

133. Quantification of circulating fetal DNA as a tool for potential monitoring of pregnant patients with antiphospholipid antibodies / M. Korabecna, Z. Ulcova-Gallova, A. Horinek [et al.] // Autoimmunity. - 2014. - Vol. 47. - P. 473-477.

134. Quantification of fetal and total circulatory DNA in maternal plasma samples before and after size fractionation by agarose gel electrophoresis / 1. Hromadnikova, L. Zejskova, J. Doucha [et. al.] // DNA Cell Biology. - 2006. - Vol. 25.-P. 635-640.

135. Quantification of Fetal DNA by Use of Methylation-Based DNA Discrimination / A. O. Nygren, J. Dean, T. J. Jensen [et al.] // Clin. Chem. - 2010. — Vol. 56.-P. 1627- 1635.

136. Quantitative abnormalities of fetal DNA in maternal serum in preeclampsia / Y. Lo, T. N. Leung, M. S. C. Tein [et al.] // Clin. Cem. - 1999. - Vol. 45.-P. 184- 188.

137. Quantitative analysis of fetal DNA in maternal plasma in gestational diabetes mellitus, iron deficiency anemia and gestational hypertension pregnancies / M. Zamanpoor, R. Rosli, M. N. Yazid [ et al.] // J. Matern. Fetal. Neonatal. Med. -2013. - Vol. 26. - P. 960-966.

138. Recurrent fetal aneuploidy and recurrent miscarriage / A. E. Sullivan, R. M. Silver, Y. la Coursiere [et al.] // Obstet. Gynocol. - 2004. - Vol. 104. - P. 784788.

139. Recurrent miscarriage : aetiology, management and prognosis / T. C. Li, M. Markis, M. Tomsu [et al.] // Hum. Reprod. Update. - 2002. - Vol. 104. - P. 784 -788.

140. Redman, C. W. Placental debris, oxidative stress and preeclampsia / C. W. Redman, I. L. Sargent // Placenta. - 2000. - Vol. 21. - P. 597-602.

141. Reindollar, R. H. Contemporary issues for spontaneous abortion. Does recurrent abortion exist? / R. H. Reindollar // Obstet. Gynecol. Clin. NA. - 2000. -Vol. 27.-P. 541.

142. Relationships between Cell-Free DNA and Serum Analyses in First and Second Trimesters of Pregnancy / L. Neeta, M.D. Vora, L. Kirby [et al.] // NIH Public Access.-2010.-Vol. 116.-P. 673-678.

143. Role of circulating cell-freeDNA levels in patients with severe preeclampsia and HELLP syndrome / M. L. Miranda, H. C. Macher, R. Muñoz-Hernández [et al.] // Am. J. Hypertens. - 2013. - Vol. 26. - P. 1377-1380.

144. Royal College of Obstetricians and Gynecologists Guideline / Ed. L. Regan, M. J. Backos, R. Rai. - London, 2003. - № 17.

145. SAFE—The Special Non-invasive Advances in Fetal and Neonatal Evaluation Network: aims and achievements / S. Lyn, I. C. Chitty, E. van der Schoot [et al.] // Prenatal Diagnostic. - 2008. - Vol. 28. - P. 83 - 88.

146. Scheffer, P. G. Noninvasive fetal blood group genotyping of rhesus D, C, E and of K in alloimmunised pregnant women: evaluation of a 7-year clinical experience / P. G. Scheffer, C. E. Schoot, M. Haas // Br. J. Obstet. Gynaecol. - 2011. -Vol. 118.-P. 1340-1348.

147. Sifakis, S. Cell-freefetalDNA and pregnancy-related complications / S. Sifakis, Z. Koukou, D.A. Spandidos // Mol. Med. Rep. - 2015. - Vol. 11. - P. 23672372.

148. Six consecutive false positive cases from cell-free fetal DNA testing in a single referring centre / N. Dugo, F. Padula, L. Mobiii [et al.] // J. Prenat. Med. -2014.-Vol. 8.-P. 1-2.

149. Taglauer, E. S. Review: cell-free fetal DNA in the maternal circulation as an indication of placental health and disease / E. S. Taglauer, L. Wilkins-Haug, D. W. Bianchi // Placenta. - 2014. - Vol. 35. - P. 64-68.

150. The Balance of the Immune System between T Cells and NK Cells in Miscarriage. / A. Nakashima, T. Shima, K. Inada [et al.] // Am. J. Reprod. Immunol. -2012. -Vol. 67, № 4. - P. 304-310.

151. Total and fetal cell-free DNA analysis in maternal blood as markers of placental insufficiency in intrauterine growth restriction / M. Al Nakib, R. Desbriere, N. Bonello [et al.] // Fetal. Diagn. - 2009. - Vol. 26. - P. 24-28.

152. Translational utility of next-generation sequencing / F. S. Ong, J. C. Lin, K. Das [et al.]// Genomics. -2013. -Vol. 102.-P. 137-139.

153. Trisomy recurrence: a reconsideration based on North American data / D. Warburton, L. Dallaire, M. Thangavelu [et al.] // Am. J. Hum. Genet. - 2004. -Vol. 75.-P. 376-385.

154. Trophoblast deportation in pre-eclamptic pregnancy / S. Chua, T. Wilkins, I. Sargent [et al.] // Br. J. Obstet. Gynaecol. - 1991. -Vol. 98. - P. 973 -979.

155. Wagner, A. J. Use of Cell-Free Fetal DNA in Maternal Plasma for Noninvasive Prenatal Screening / A. J. Wagner, M. E. Mitchell, A. Tomita-Mitchell // Clin. Perinatol. -2014. - Vol. 41. - P. 957-966.

156. Wang, E. Gestational age and maternal weight effects on fetal cell-free DNA in maternal plasma / E. Wang // Prenat. Diagn. - 2013. - Vol. 33, № 7. - P. 662-666.

157. Wapner, R. J. The impact of new genomic technologies in reproductive medicine / R. J. Wapner, B. Levy // Discov. Med. - 2014. - Vol. 17. - P. 313-318.

158. Wright, C. F. The use of cell-free fetal nucleic acids in maternal blood for non-invasive prenatal diagnosis / C. F. Wright, H. Burton // Hum. Reprod. Update. - 2009. - Vol. 5, № 1. - P. 139 - 151.

159. Zhong, X. Y. The levels of circulatory cell free fetal DNA in maternal plasma are elevated prior to the onset of PET / X. Y. Zhong, W. Holzgreve, S. Hahn // Hypertens Pregnancy. - 2002. - Vol. 21. - P. 77 - 83.