Прогностическое значение молекулярно-генетических характеристик у больных хроническим миелолейкозом при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Горбунова, Анна Валерьяновна

• Горбунова, Анна Валерьяновна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Горбунова, Анна Валерьяновна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПАТОГЕНЕЗА И ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1.Клиническая и молекулярно-биологическая характеристика хронического миелолейкоза

1.1.1. Клиническая характеристика хронического миелолейкоза

1.1.2. Молекулярная биология хронического миелолейкоз

1.1.3. Молекулярные механизмы прогрессии заболевания

1.2. Ингибиторы тирозинкиназ в терапии хронического миелолейкоза

1.2.1. Структура и механизм действия ингибиторов тирозинкиназ

1.2.2. Молекулярно-биологические механизмы резистентности к ингибиторам тирозинкиназ

1.3. Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток при хроническом миелолейкозе

1.3.1. Эффективность и безопасность аллоТГСК

1.3.2. Прогностические факторы, влияющие на исход трансплантации

1.3.3. Роль аллогенной трансплантации в эпоху ингибиторов тирозинкиназ

ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПАЦИЕНТОВ

2.1. Характеристика пациентов

2.2. Метод исследования уровня относительной экспрессии транскриптов химерного гена ВСЯ-АВЬ

2.3. Методы исследования мутационного статуса гена ВСЯ-АВЬ

2.4. Метод исследования уровня относительной экспрессии гена ЕУ11

2.5. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗЛ. Молекулярно-генетические характеристики больных ХМ Л с

резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ

ЗЛ Л. Уровень экспрессии транскрипта р210 BCR-ABL

ЗЛ .2. Коэкспрессия транскрипта р190 BCR-ABL

ЗЛ.З. Спектр и частота мутаций в киназном домене гена BCR-

ABL

ЗЛ.4. Экспрессия гена EVI1

3.2. Анализ влияния молекулярно-генетических факторов на эффективность аллоТГСК у больных ХМЛ с резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ

3.2.1. Результаты аллоТГСК

3.2.2. Прогностическое значение уровня экспрессии транскрипта р210 BCR-ABL

3.2.3. Прогностическое значение коэкспрессии транскрипта р190 BCR-ABL

3.2.4. Прогностическое значение мутаций в киназном домене гена BCR-ABL

3.2.5. Прогностическое значение уровня экспрессии гена EVI1

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Прогностическое значение молекулярно-генетических характеристик у больных хроническим миелолейкозом при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Хронический миелолейкоз (XMJI) - это заболевание крови опухолевой природы, основным проявлением которого является пролиферация гемопоэтических стволовых клеток, на начальных этапах заболевания способных к созреванию. При XMJT в опухолевых клетках выявляется так называемая Филадельфийская (Ph) хромосома (Nowell Р.С. et al., 1960). Это специфическое нарушение кариотипа возникает вследствие сбалансированной реципрокной транслокации t(9;22)(q34;ql 1). На молекулярном уровне возникновение Ph-хромосомы приводит к возникновению химерного гена BCR-ABL, кодирующего конститутивно активную тирозинкиназу (Meló J.V. et al., 2007). В ряде экспериментов было продемонстрировано, что активность белка BCR-ABL необходима для поддержания лейкемического фенотипа клеток (Daley G.Q. et al., 1990; Kelliher M.A. et al., 1990; Heisterkamp N. et al., 1990).

Исследования патогенеза XMJI на молекулярном уровне позволили подобрать низкомолекулярные соединения, способные специфически связываться с белком BCR-ABL и подавлять его тирозинкиназную активность. Ингибиторы тирозинкиназ показали чрезвычайно высокую эффективность как в исследованиях in vitro и in vivo, так и в клинической практике. С 2001 года ингибитор тирозинкиназ иматиниб используется в качестве первой линии терапии при XMJI.

Открытие и внедрение в клиническую практику таргетных ингибиторов тирозинкиназы BCR-ABL стало одним из наиболее заметных достижений в современной онкологии. Тем не менее, терапия ингибиторами тирозинкиназ эффективна далеко не у всех больных XMJI. Во-первых, не удается получить стойких длительных ремиссий у пациентов в фазе акселерации и бластного криза. Во-вторых, острой проблемой остается первичная и вторичная резистентность к ингибиторам тирозинкиназ, развивающаяся в 20 - 30 % случаев (Cortes J. et al., 2007; Kantarjian H. et al., 2007).

В настоящее время у больных XMJ1 в фазе акселерации и бластного криза, а также при развитии резистентности к ингибиторам тирозинкиназ второго поколения показано проведение аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (аллоТГСК) периферической крови или костного мозга (Gratwohl А. et al., 2006). АллоТГСК является одним из эффективных методов лечения многих злокачественных заболеваний миелоидной и лимфоидной тканей (Афанасьев Б.В. и соавт., 2002, 2007; Абдулкадыров K.M. и соавт., 2004; Зубаровская JI.C. и соавт., 2001; Румянцев А.Г. и соавт., 2003; Савченко В.Г. и соавт., 2010). Накопленный за более чем 30 лет опыт применения аллоТГСК в практике лечения XMJI показал, что, несмотря на огромные достижения в развитии таргетной терапии XMJI ингибиторами тирозинкиназ, аллоТГСК до сих пор остается единственным методом, который позволяет достичь полного излечения у больных XMJI.

На эффективность аллоТГСК у больных XMJI влияют как клинические факторы, характеристики пациента и особенности режима трансплантации, так и молекулярно-биологические свойства опухолевых клеток. Развитие резистентности к ингибиторам тирозинкиназ, также как и прогрессия заболевания, ассоциированы с широким спектром молекулярно-биологических изменений в лейкозных клетках. Наиболее изученным механизмом развития резистентности к ингибиторам тирозинкиназ при XMJI считается появление мутаций в киназном домене гена BCR-ABL. Частота мутаций BCR-ABL, по данным разных исследований, варьирует от 30% до 90% в зависимости от фазы заболевания и методов детекции мутации (Gorre М.Е. et al., 2001; Hochhaus А. et al., 2004). Молекулярно-биологические механизмы, ведущие к развитию резистентности и прогрессии заболевания, во многом схожи между собой. В частности, в проведенных в последнее время исследованиях была выявлена роль гиперэкспрессии гена EVI1 как при прогрессии заболевания, так и при развитии резистентности к ингибиторам тирозинкиназ (Ogawa S. et al., 1996, 1997; Paquette R.L. et al., 2011; Daghistani M. et al., 2010). Показано, что гиперэкспрессия EVI1 ассоциирована с резистентностью к химиотерапии у больных острыми

миелоидными лейкозами и миелодиспластическим синдромом, а также с прогрессией и переходом к метастазированию ряда солидных опухолей (Valk P.J. et al., 2004; Groschel S. et al., 2010).

Степень разработанности темы исследования

Прогностическое значение клинических факторов и характеристик пациентов в отношении эффективности аллоТГСК у больных XMJI изучено достаточно подробно. В шкалу рисков входят стадия заболевания на момент трансплантации, возраст пациента, длительность периода болезни до трансплантации, а также тип донора и сочетание по полу донора и реципиента (Gratwohl A. et al., 1998).

В то же время, прогностическое значение молекулярно-биологических факторов, ассоциированных с прогрессией заболевания и резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ, в отношении эффективности аллоТГСК у больных ХМЛ изучено значительно меньше. Так, немногочисленны и противоречивы данные о прогностическом значении мутаций в киназном домене гена BCR-ABL, неясно значение уровня экспрессии гена BCR-ABL. Неясно также прогностическое значение уровня экспрессии гена EVI1 при аллоТГСК у больных ХМЛ.

Цель исследования

Изучить молекулярно-генетические характеристики больных хроническим миелолейкозом с резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ и определить их прогностическое значение при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

Задачи исследования

1. Изучить мутационный статус гена BCR-ABL и экспрессию его транскриптов р210 и р190 у больных ХМЛ с резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ

2. Исследовать особенности экспрессии гена EVI1 у больных хроническим миелолейкозом с резистентностью и с оптимальным ответом на терапию ингибиторами тирозинкиназ

3. Изучить взаимосвязь между уровнем экспрессии гена ЕУП и структурным и функциональным состоянием гена ВСЯ-АВЬ

4. Оценить прогностическое значение наличия мутаций в гене ВСЯ-АВЬ и экспрессии его транскриптов при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у больных хроническим миелолейкозом

5. Определить прогностическое значение гиперэкспрессии гена ЕУП при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у пациентов с хроническим миелолейкозом

Научная новизна исследования

Впервые установлено значение высокого уровня экспрессии гена ЕУП как фактора, имеющего неблагоприятное прогностическое значение при аллоТГСК у пациентов с ХМЛ, резистентных к ингибиторам тирозинкиназ в отношении увеличения частоты пост-трансплантационных рецидивов. Впервые обнаружена ассоциация между повышенным уровнем экспрессии гена ЕУП у больных ХМЛ и предшествующей терапией ингибиторами тирозинкиназ второго поколения. Впервые установлено, что повышенный уровень экспрессии ЕУП характерен для пациентов с резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ, не имеющих мутаций в киназном домене гена ВСЯ-АВЬ. Определены также спектр и частота мутаций в киназном домене гена ВСЯ-АВЬ, обнаружены ранее не описанные сложные нарушения структуры (комплексные делеции) ВСЯ-АВЬ, изучена динамика возникновения мутантного клона и предложен метод более чувствительной детекции мутации ТЗ151.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные в результате исследования данные дополняют систему знаний о молекулярно-биологических механизмах патогенеза хронического миелолейкоза и развития резистентности к ингибиторам тирозинкиназ.

Определение уровня экспрессии гена ЕУП перед проведением аллоТГСК у больных ХМЛ позволяет осуществлять дифференцированный подход к планированию терапии в пред- и пост-трансплантационном периоде. В частности, это открывает возможность для выявления пациентов с высоким риском развития

пост-трансплантационных рецидивов, которые нуждаются в своевременной противорецидивной и иммуноадоптивной терапии.

Предложенный метод высокочувствительной детекции мутации ТЗ151 гена ВСЯ-АВЬ с помощью ПЦР в реальном времени позволяет выявить пациентов, имеющих показания к проведению аллоТГСК, на несколько месяцев раньше, чем это может быть сделано стандартным методом прямого секвенирования по Сэнгеру.

Методология и методы исследования

Научная методология исследования основывается на системном подходе к изучаемой проблеме и комплексном рассмотрении процессов патогенеза и терапии заболеваний крови опухолевой природы. В работе использованы молекулярно-биологические, статистические, а также клинические и общенаучные методы исследования.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Высокий уровень экспрессии гена ЕУП характерен для резистентных к терапии ингибиторами тирозинкиназ больных ХМЛ, не имеющих мутаций в киназном домене гена ВСЯ-АВЬ.

2. Высокий уровень экспрессии гена ЕУП имеет неблагоприятное прогностическое значение в отношении частоты развития рецидивов и продолжительности безрецидивной выживаемости после аллоТГСК у больных ХМЛ с резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ.

3. Высокий уровень экспрессии гена ЕУП и поздняя стадия заболевания (фаза акселерации или бластный криз) на момент трансплантации являются независимыми предикторами менее продолжительной безрецидивной выживаемости.

4. Мутации в киназном домене гена ВСЯ-АВЬ, в том числе ТЗ 151, а также высокий уровень экспрессии ВСЯ-АВЬ, в исследованной группе пациентов не имели негативного прогностического значения в отношении общей и безрецидивной выживаемости после аллоТГСК у больных ХМЛ, резистентных к ингибиторам тирозинкиназ.

Внедрение результатов исследования в практику

Основные положения диссертации внедрены в практическую и научно-исследовательскую работу на кафедре гематологии, трансфузиологии и трансплантации Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И.П.Павлова и гематологического отделения Санкт-Петербургского государственного бюджетного учреждения здравоохранения "Детская городская больница №1".

Степень достоверности и апробация результатов работы

Степень достоверности полученных результатов проведенных исследований определяется достаточным количеством выполненных наблюдений с использованием современных методов и подтверждена адекватными поставленным задачам методами статистической обработки данных.

Материалы диссертации представлены на IV симпозиуме «Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток», посвященном памяти P.M. Горбачевой (Санкт-Петербург, 2011), XIX Wilsede Meeting «Modern trends in human leukemia» (Гамбург, 2012), 38 Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation (Женева, 2012), 39 Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation (Лондон, 2013), Всероссийской научно-практической конференции «Молекулярно-генетические и иммуногенетические методы диагностики в практике врача гематолога» (Санкт-Петербург, 2013).

По теме диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура работы

Диссертационная работа изложена на 141 странице текста и состоит из введения, главы обзора литературы, главы описания методики, главы результатов исследования, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и библиографии. Список литературы включает 63 источника на русском языке и 194 источника на иностранном языке. Работа содержит 38 рисунков и 15 таблиц.

ГЛАВА 1. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПАТОГЕНЕЗА И ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА

(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Клиническая и молекулярно-биологическая характеристика хронического мнелолеикоза

1.1.1. Клнннческая характеристика хронического ¡ииелоленкоза

Хронический миелолейкоз (XMJ1) - это миелопролиферативное заболевание, основным проявлением которого является клональная пролиферация гемопоэтических стволовых клеток, на начальных этапах заболевания способных к созреванию. Лейкемические клетки при ХМЛ характеризуются усилением пролиферативной активности, сниженной способностью к апоптозу и нарушением процессов дифференцировки (Волкова М.А. и соавт., 2010).

На долю ХМЛ приходится около 15% всех случаев заболеваний крови опухолевой природы у взрослых. Заболеваемость ХМЛ достигает 1-1,5 на 100 000 населения. ХМЛ встречается во всех возрастных группах, однако у детей заболевание встречается крайне редко, а медиана возраста больных на момент диагноза составляет 50-60 лет (Cortes J. et al., 1996; Давыдов М.И. и соавт., 2009).

ХМЛ в своем развитии проходит 3 фазы - хроническую фазу (ХФ), фазу акселерации (ФА) и бластный криз (БК).

В хронической фазе лейкемические клетки сохраняют способность к дифференцировке, а также морфологическую и функциональную полноценность. Незрелые клетки (бласты, промиелоциты, миелоциты, метамиелоциты) в периферической крови обнаруживаются, но преобладают зрелые элементы миелоидного ростка. У подавляющего большинства пациентов (80%) заболевание диагностируют в хронической фазе, несмотря на то, что в значительном числе случаев оно протекает бессимптомно (Ломаиа Е.Г. и соавт., 2009).

С течением времени заболевание неизбежно прогрессирует в более агрессивную форму. Характерными особенностями фазы акселерации являются

прогрессирующее нарушение дифференцировки, усиление пролиферативноий активности и подавление апоптоза в лейкозных клетках. В организме постепенно накапливаются незрелые предшественники гранулоцитопоэза со склонностью к образованию экстрамедуллярных очагов гемопоэза в разных органах и тканях. Наряду с этим постепенно подавляются эритроцито- и мегакариоцитопоэз.

На стадии бластного криза зрелые клетки почти полностью вытесняются либо миелоидными, либо лимфоидными бластными клетками. Миелоидный вариант БК выявляют у 50% пациентов. Четверти пациентов свойственен лимфоидный вариант БК, а у остальных 25% случаев четко определить линейную принадлежность бластных клеток при БК не удается. Основными причинами смерти больных в БК XMJI являются геморрагические и инфекционные осложнения, а также полиорганная недостаточность, возникающая вследствие нарастающей опухолевой □ интоксикации (Savage D.G. et al., 1997).

Для установления диагноза XMJI необходимо выявление ассоциированного с этим заболеванием специфического генетического нарушения, ассоциированного с этим заболеванием - транслокации t(9;22)(q34;qll) и соответствующего ей химерного гена BCR-ABL. Стандартное цитогенетическое исследование позволяет обнаружить транслокацию t(9;22) у 95% пациентов с XMJI (Домрачева Е.В. и соавт., 2005). С помощью методов ПЦР и FISH химерный ген BCR-ABL детектируется почти у всех больных XMJI (Мисюрин A.B. и соавт., 2007).

Терапия XMJI в настоящее время основана на применении ингибиторов тирозинкиназ (ИТК) и аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (аллоТГСК) (Туркина А.Г. и соавт., 2008; Ломаиа Е.Г. и соавт., 2009, 2010; Волкова М.А. и соавт., 2010). В качестве первой линии терапии у пациентов в хронической фазе используют ИТК первого поколения иматиниб. В случае неудачи терапии иматинибом в качестве второй линии терапии используют ИТК второго поколения дазатиниб и нилотиниб. Пациентам в фазе акселерации и бластного криза или с резистентностью к ИТК показана аллоТГСК.

В современных условиях цитогенетические и молекулярно-биологические методы исследования используются не только на этапе первичной диагностики XMJI, но и при оценке уровня ответа на проводимую терапию. Так, эффективность терапии определяют не только по достижению гематологического, но цитогенетического и молекулярного ответов, причём с учетом сроков их достижения. Полное отсутствие Ph-положительных клеток свидетельствует о достижении полного цитогенетичекого ответа у больного. Критерием достижения полного молекулярного ответа является неопределяемый с помощью метода количественной ПЦР в реальном времени уровень экспрессии мРНК гена BCR-ABL (Мартынкевич И.С. и соавт., 2011, 2012).

1.1.2. Молекулярная биология хронического миелолейкоза

Опухолевые элементы больных хроническим миелолейкозом маркирует так называемая Филадельфийская (Ph) хромосома (Nowell PC. et al., 1960). Это специфическое нарушение кариотипа возникает вследствие сбалансированной реципрокной транслокации t(9;22)(q34;qll). На молекулярном уровне возникновение Ph хромосомы приводит к возникновению химерного гена BCR-ABL, кодирующего конститутивно активную тирозинкиназу (Melo J.V. et al., 2007). Это событие происходит в гемопоэтических стволовых клетках, дающих начало как миелодному, так и лимфоидному росткам кроветворения (рис. 1). Прогрессия заболевания и переход в стадию бластного криза связаны с накоплением дополнительных мутаций в клетках-предшественниках миелодного или лимфоидного ряда.

Онкоген BCR-ABL

В ряде экспериментов было продемонстрировано, что активность белка BCR-ABL необходима и достаточна для поддержания лейкемического фенотипа клеток (Daley G.Q. et al., 1990; Kelliher M.A. et al., 1990; Heisterkamp N. et al., 1990). Так, было показано, что у мышей, трансформированных вирусным вектором с человеческим геном BCR-ABL, возникает ХМЛ-подобное миелопролиферативное заболевание (Daley GQ. et al., 1990). В то же время, у

мышей с экспрессией BCR-ABL с заменой лизина на аргинин в 1176 положении (К1176) в АТФ-связывающем кармане ABL, приводящей к потере тирозинкиназной активности, развития миелопролиферативного заболевания не происходит (Zhang X. et al., 1998), что свидетельствует о критической роли тирозинкиназной активности BCR-ABL.

хмл

миелоидный БК

Предшественники миелоидного ряда

гемопоэтические

стволовые

клетки

/

Предшественники ряда

\

ХМЛ

лимфоидный БК

Дополнительные мутации

Макрофаги Т-лимфоциты В-лимфоциты

Тромбоциты

Гранулоциты

Рис. 1. Развитие хронического миелолейкоза (адаптировано из Ren et al., 2009)

При соединении генов BCR и ABL могут образовываться разные типы химерных белков и транскриптов, в зависимости от точки разрыва в каждом из этих двух генов (Телегеев Г.Д. и соавт., 1999; Богданов К.В. и соавт., 2003). Точки разрыва в гене ABL обычно располагаются или перед экзоном 1Ь, или после экзона 1а, или же между этими двумя экзонами. Разрывы в гене BCR происходят в трех различных участках, имеющих значительную протяженность, что приводит, соответственно, к образованию трёх различных по длине химерных транскриптов

(рис. 2). У большинства пациентов с XMJ1 и у одной трети пациентов с Ph-позитивным B-OJ1JI разрывы происходят между экзонами 12 и 16 (этот участок обозначается как М-bcr), следствием чего является образование химерного белка массой 210 кДа (р210 BCR-ABL). У двух третей больных Ph-позитивным B-OJ1JT и в редких случаях у больных XMJ1 разрыв располагается раньше, между экзонами 1 и 2 (участок m-bcr), что приводит к образованию более короткого химерного белка с массой 190 кДа (р190 BCR-ABL). Наконец, разрыв в третьем участке (fiber) гена BCR приводит к образованию самого длинного химерного белка, р230 BCR-ABL, встречающегося при хроническом нейтрофильном лейкозе.

I .к . , . ABL

I lb I !• а!

-L * ,, i

i .» «i BCR el,

«I elt2 i

MBB ■ ш 11 Ii II II

-II—I II I l ll-l l-lll

m-brr

-^ BCR-ABL

' ' ВИШИ IIIIII HIIIIIIIIIIIII

-|cla2 Щ

ЯШШШШШш

■llllll lllllllllll

Рис. 2. Химерный ген BCR-ABL, его транскрипты и белки. Адоптировано из Barnes D.J. et al., 2002

Киназа ABL состоит из нескольких функциональных доменов и имеет высокую степень гомологии с киназой SRC. Высоко консервативные домены SH2 (Src-homology-2) и SH3 служат сайтами связывания для SH3 доменов адаптерных белков, таких как Crk, GRB2 и Nek. Далее следуют киназный домен, ДНК-

ali

шш

} «1-1

lili

е19

М-Дсг

u-Aír t_

р210 BCR-ABL

р190 BCR-ABL р230 BCR-ABL

связывающий домен, актин-связывающий домен и 3 сигнала ядерной локализации, которые определяют локализацию белка в различных клеточных компартментах в зависимости от внешних сигналов.

Протоонкоген c-ABL впервые был идентифицирован как нормальный клеточный гомолог вирусного онкогена v-abl (вируса лейкоза мышей Абельсона Ab-MuLV), кодирующий нерецепторную тирозинкиназу. Белок ABL экспрессируется во всех тканях животных на протяжении всей жизни, а его наивысшая концентрация была отмечена в тимусе и селезенке. Белок ABL в норме постоянно перемещается из цитоплазмы в ядро клетки и обратно, передавая сигнал от рецепторов, расположенных на поверхности клетки. В ядре ABL вовлечен в процессы регуляции клеточного цикла и ответа на генотоксический стресс. Слияние ABL с BCR приводит к прекращению миграции белка и его постоянной локализации в цитоплазме, где он взаимодействует с большим числом белков, вовлеченных в онкогенез.

Ген BCR кодирует белок, состоящий из нескольких функциональных доменов, только один из которых, домен олигомеризации, входит в состав всех химерных форм BCR-ABL и абсолютно необходим для лейкемогенеза. Следствием слияния ABL с доменом олигомеризации BCR является конститутивная активация тирозинкиназы ABL, вызванная димеризацией и тетрамеризацией белка и последующим аутофосфорилированием по остаткам тирозина (Pendergast AM. et al., 1991; Pendergast AM. et al., 1993). Другим необходимым для лейкемогенеза элементом белка В CR является тирозин в позиции 177, который □ фосфорилирован в лейкозных клетках и необходим для связывания адаптерного белка GRB2. Белок GRB2, в свою очередь, связывается с белком GAB2, формируя сложный белковый сигнальный комплекс, необходимый для активации вовлеченных в онкогенез сигнальных путей RAS/MAPK и PI3K/AKT. Было показано, что активация GAB2 является одним из механизмов развития резистентности к ингибиторам тирозинкиназ и может служить мишенью для терапии XMJI при развитии резистентности.

Взаимодействие онкобелка BCR-ABL с другими белками, локализованными в цитоплазме, приводит к нарушению ряда ключевых процессов. Наиболее важны для лейкозной трансформации нарушения в трех основных сигнальных путях. Активация пути RAS/MAPK приводит к усилению пролиферации. Нарушения в пути JAK/STAT ведут к увеличению транскрипционноий активности, а результатом вовлечения в патологию пути PI3K/AKT является подавление апоптоза (Meló J.V. et al., 2004).

Сигнальный путь PI3K/AKT/mTOR

Киназа BCR-ABL в составе комплекса с белками GRB2 и GAB2 активирует сигнальный путь PI3K/AKT/mTOR, многие компоненты которого участвуют в лейкозной трансформации клетки.

Киназа АКТ регулирует активность многих белков, контролирующих процессы апоптоза, в том числе Bad, caspase9, Mdm2 и Askl (Franke T.F. et al., 1997). Фосфорилирование белка Bad препятствует связыванию и ингибированию белка BCL-2, что приводит к подавлению апоптоза. Киназа АКТ фосфорилирует также семейство транскрипционных факторов FOXO, которые вовлечены в контроль клеточного цикла и апоптоза (Ghaffari S. et al., 2003).

Белок mTOR представляет собой серин-треониновую киназу, конститутивно активную в BCR-ABL позитивных клетках и играющую ключевую роль в регуляции процессов трансляции и пролиферации клеток у млекопитающих. Белок mTOR функционирует как отдельная каталитическая субъединица в составе двух белковых комплексов, mTORCl и mTORC2. Было показано, что целый ряд ингибиторов mTOR (рапамицин, эверолимус, РР242 и OSI-027) подавляет рост BCR-ABL позитивных клеточных линий, а также клеток, полученных от пациентов с XMJ1, независимо от их чувствительности или резистентности к иматинибу (Mohi M.G. et al., 2004; Mayerhofer M. et al., 2005; Janes M.R. et al., 2010; Carayol N. et al., 2010). Ингибирующий эффект рапамицина связан с остановкой клеточного цикла в G1 фазе и индукцией апоптоза. Кроме того, рапамицин увеличивает выживаемость мышей с трансплантированными /?С7?-АЯ£-положительными гемопоэтическими стволовыми клетками (Mohi M.G.

et al., 2004; Dengler J. et al., 2005; Mayerhofer M. et al., 2005). Комбинация иматиниба и рапамицина эффективно подавляет рост клеточных линий, резистентных к иматинибу (Ly С. et al., 2003).

Таким образом, через сигнальный путь PI3K/AKT/mTOR тирозинкиназа BCR-ABL обеспечивает более продолжительное премя жизни лейкозных клеток и экспансию опухолевого клона.

Сигнальный путь RAS/RAF/MAPK

В результате взаимодействия BCR-ABL с локализованными в цитоплазме адапторными белками, образуется комплекс BCR-ABL/GRB2/SOS, который стимулирует переход неактивной ГДФ-связывающей формы белка RAS в его активное ГТФ-связывающее состояние (Puil L. et al., 1994). Активация RAS вызывает конститутивную активацию всего сигнального пути RAS/RAF/MAPK с вовлечением митоген-активирующей протеиназы ERK, что в свою очередь приводит к активации факторов транскрипции JUN и FOS. Подавление сигнального пути RAS/RAF/MAPK ингибиторами фарнесилтрансферазы замедляет пролиферацию клеток линии к562 и CD34+ клеток, полученных от пациентов в хронической фазе XMJI (Pellicano F. et al., 2011).

Сигнальный путь JAK/STAT

В BCR-ABL позитивных линиях клеток и клетках пациентов с ХМЛ была обнаружена конститутивная активность транскрипционных факторов STAT1 и STAT5, которые в нормальных клетках активны только после связывания рецепторами цитокинов и активации ассоциированной с рецепторами киназы JAK (liaría R.L. et al., 1996). В лейкозных же клетках активация STAT1 и STAT5 происходит независимо от киназы JAK, за счет связывания SH2 домена STAT с фосфорилированными остатками тирозина на BCR-ABL (Carlesso N. et al., 1996), что приводит к независимости клеток от цитокиновых сигналов. В экспериментальной модели у мышей, трансфецированных вирусным вектором с BCR-ABL, потеря STAT5a/b предотвращает развитие ХМЛ-подобного заболевания (Hoelbl A. et al., 2010; Walz С. et al., 2012). Хотя роль киназы JAK в патогенезе ХМЛ до сих пор неясна, тем не менее, в экспериментах in vitro было

показано, что ингибиторы JAK2 (AG490, TG101209 и НВС) индуцируют апоптоз в клетках, полученных от больных XMJI, а комбинация ингибиторов JAK2 и иматиниба вызывает апоптоз в клетках пациентов даже в бластном кризе XMJI (CalabrettaB.et al., 2004).

Сигнальный путь WNT/p-катенина

Сигнальный путь Wnt/p-катенина играет ключевую роль в контроле различных процессов гемопоэза, в том числе пролиферации и самообновления клеток, а нарушения в этом сигнальном пути ассоциированы с развитием заболеваний крови опухолевой природы (Jamieson С. et al., 2004). Важной особенностью BCR-ABL позитивных клеток является активация многих компонентов пути Wnt/p-катенина, в том числе протоонкогена МУС, высокий уровень экспрессии которого был отмечен у пациентов с XMJ1, в особенности при прогрессии заболевания и переходе в бластный криз (Sawyers C.L. et al., 1992). В частности, было показано, что ингибитор Wnt/p-катенина AV65 подавляет пролиферацию BCR-ABL позитивных линий клеток и индуцирует апоптоз (Cattaneo F. et al., 2008).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Горбунова, Анна Валерьяновна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абдулкадыров K.M., Беляков H.A., Селиванов В.А. и др. Реальность и проблемы использования стволовых клеток в клинической практике // Вестн. РАМН. 2004. - N. 9. - С.76-79.

2. Аксенова Е.В., Крутов A.A., Солдатова И.Н. и др. Молекулярный мониторинг у пациентов с хроническим миелолейкозом: корреляция с цитогенетическим ответом, прогностическое значение, оценка ответа на терапию // Клиническая онкогематология. 2010. - Т. 3, № 2. - С. 151-159.

3. Афанасьев Б.В., Зубаровская Л.С. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток крови // Детская онкология: Руководство. СПб, 2002. - С. 90108.

4. Афанасьев Б.В., Зубаровская Л.С., Семенова Е.В. и др. Опыт применения неродственной аллогенной трансплантации стволовых гемопоэтических клеток в клинике трансплантации костного мозга СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова // Тер. архив. 2007. - Т. 79, № 7. - С. 36-43.

5. Богданов К.В., Фролова О.И., Маринец О.В. и др. Клиническое значение вариантов хромосомной транслокации t(9;22) у больных хроническими миелолейкозами // Гематол. и трансфузиол. 2003. - Т. 2, №3. - С.3-9.

6. Виноградова О. Ю. Клиническая эволюция хронического миелолейкоза в процессе лечения ингибиторами тирозинкиназ // Автореферат диссертации доктора мед. наук. М., 2011.

7. Виноградова О.Ю., Асеева Е.А., Воронцова A.B. и др. Влияние различных хромосомных аномалий в ph-позитивных клетках костного мозга на течение хронического миелолейкоза при терапии ингибиторами тирозинкиназ // Онкогематология. 2012. - Т.2 - № 4.- С. 24-35.

8. Виноградова О.Ю., Туркина А.Г., Воронцова A.B. и др. Применение дазатиниба у больных в хронической стадии хронического миелолейкоза, резистентных либо не переносящих терапию иматинибом // Тер. архив. 2009. - Т. 81. №7.-С. 41-46.

9. Владимирская Е.Б., Кисляк Н.С., Румянцев А.Г. Причины и пути преодоления лекарственной резистентности при лейкозах и лимфомах у детей // Гематол. и трансфузиол. 1998. - №6. - С.15-17.

10. Волкова М.А. Гливек при хроническом миелолейкозе - достижения, неудачи, проблемы // Гематол. и трансфузиол. 2004. - Т. 49. № 2. - С. 35-41.

11. Волкова М.А. Гливек революция в терапии хронического миелолейкоза // Фарматека. - 2003. - Т.77, №14. - С. 39-47.

12. Волкова М.А. Новые возможности в терапии хронического миелолейкоза: дазатиниб // Клиническая онкогематология. 2008. - Т. 1 №3.-С. 218-226.

13. Волкова М.А. Хронический миелолейкоз: вчера, сегодня, завтра. К 165-летию первого описания // Клиническая онкогематология. 2010. - Т. 3. № 4. -С. 317-326.

14. Воробьев А.И. Лейкозы: проблемы и достижения // Клин, фармакология и терапия. 1995. - Т. 4 № 4. - С. 16-17.

15. Глянц С. Медико-биологическая статистика //Пер. с англ. д.ф-м.н. Данилова Ю.А. - М.: «Практика». 1999. - стр.424.

16. Горюнова E.H., Ломаиа Е.Г., Алексеева Ю.А. и др. Течение хронического миелолейкоза у пациента с панрезистентной мутацией T315I в фазе акселерации. Всегда ли необходима аллогенная трансплантация костного мозга при мутации ТЗ151?//Клиническая онкогематология. 2009. - Т. 2. № 1. - С. 11-13.

17. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Заболеваемость злокачественными новообразованиями населения России и стран СНГ в 2007 г. // Вестник РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. 2009. - Т. 20 № 3. - С.52-90.

18. Домрачева Е.В., Захарова A.B., Асеева Е.А. Цитогенетика хронического миелолейкоза // Гематол. и трансфузиол. 2005. - Т. 50. № 2. - С. 4449.

19. Домрачева Е.В., Захарова А.Е., Асеева Е.А. Прогностическое значение дополнительных цитогенетических аномалий при хроническом миелолейкозе // Гематол. и трансфузиол. 2005. - Т. 50 №4. - С. 37-41.

20. Зарицкий А.Ю., Ломана Е.Г. Перспективы фармакотерапии ХМЛ // Эффективная фармакотерапия. 2006. - № 1. - С. 38-42.

21. Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г., Виноградова О.Ю. и др. Результаты многоцентрового исследования терапии гливеком больных хроническим миелолейкозом в хронической фазе // Гематол. и трансфузиол. 2007. - Т.52, № 2. -С. 13-17.

22. Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г., Виноградова О.Ю. и др. Факторы прогноза при терапии иматиниба мезилатом у больных в хронической фазе Ph-позитивного хронического миелолейкоза: данные многоцентрового нерандомизированного исследования в россии // Тер. архив. 2007. - Т. 79. № 8. -С. 17-22.

23. Зубаровская Л.С., Фрегатова Л.М., Афанасьев Б.В. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток при гемобластозах // Клиническая онкогематология под ред. проф. М.А.Волковой. - М: 2001

24. Копнин Б.П. Опухолевые супрессоры и мутаторные гены // Канцерогенез. М: 2004. - С.125-156.

25. Круглов С.С., Туркина А.Г., Хорошко Н.Д. и др. Резистентность при терапии Гливеком у больных хроническим миелолейкозом в фазе акселерации // Гематол. и трансфузиол. 2007. - №2. - С. 17-24

26. Кутьина P.M., Порешина Л.П., Любимова Л.С. и др. Трансплантация аллогенного костного мозга при хроническом миелолейкозе // Тер. архив, 2004.-N 7.-С. 18-24

27. Куцев С.И., Вельченко М.В. Значение анализа мутаций гена BCR-ABL в оптимизации таргетной терапии хронического миелолейкоза // Клиническая онкогематология. 2008. - Т. 1, №3. - С. 190-199.

28. Куцев С.И., Вельченко М.В., Зельцер А.Н. Молекулярно-генетический мониторинг терапии хронического миелолейкоза ингибиторами тирозинкиназ // Онкогематология. 2008. - № 3. - С. 86-86.

29. Куцев С.И., Вельченко М.В., Морданов C.B. Роль мутаций гена BCR-ABL в развитии рефрактерности к иматинибу у пациентов с хроническим миелолейкозом // Клиническая онкогематология. 2008. - Т.1, №4. - С. 303-309.

30. Куцев С.И., Морданов C.B. Амплификация гена BCR-ABL у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом, рефрактерных к иматинибу // Онкогематология. 2009. - № 3. - С. 57-65

31. Куцев С.И., Морданов C.B., Зельцер А.Н. Прогностическое значение дополнительных хромосомных аномалий в Ph-позитивных клетках в терапии иматинибом хронического миелолейкоза // Медицинская генетика. 2009. - Т. 8. № 10. - С. 23-28.

32. Ломаиа Е.Г., Коноплева М.Ю., Романова Е.Г. и др. Хронический миелолейкоз - до и после иматиниба (часть III) // Онкогематология. - 2010. № 1. -С. 5-20.

33. Ломаиа Е.Г., Лазорко Н.С., Саламатова E.H. и др. Хронический миелолейкоз - до и после применения иматиниба (часть II) // Онкогематология. 2009.-№3.-С. 40-56.

34. Ломаиа Е.Г., Мартынкевич И.С. и др. Влияние Ь2а2 и Ь3а2 транскриптов гена bcr-abl на эффективность направленной терапии гливеком у больных в хронической фазе хронического миелолейкоза // Вестник гематологии. 2006.- Т.2, №3. - С. 7-10.

35. Ломаиа Е.Г., Моторин Д.В., Романова Е.Г. и др. Хронический миелолейкоз - до и после применения иматиниба (часть I) // Онкогематология. 2009.-№2.- С. 4-16.

36. Ломаиа Э.Г., Зарицкий А.Ю. Нилотиниб новый этап успеха в терапии хронического миелолейкоза // Онкогематология. - 2007. - № 4. - С. 6772.

37. Ломана Е.Г., Огородникова Ю.С., Мартынкевич И.С. и др. Прогностические факторы эффективности терапии Гливеком больных хроническим миелолейкозом // Вестник гематологии. 2005. - Т. 1., №1. - С. 14-21.

38. Любимова Л.С. Трансплантация аллогенного костного мозга при хроническом миелолейкозе // Вестник Московского онкологического общества. 2007.- № 2.- С. 6.

39. Любимова Л.С., Кузьмина Л.А., Урнова Е.С. и др. HLA-идентичная трансплантация костного мозга в первой хронической фазе хронического миелолейкоза в ранние сроки заболевания или длительная терапия ингибиторами тирозинкиназ? // Гематол. и трансфузиол. 2012. - N 3. - С.6-10.

40. Любимова Л.С., Савченко В.Г., Демидова И.А. и др. Трансплантация аллогенного костного мозга у больных хроническим миелолейкозом // Гематол. и трансфузиол. 2007. - Т. 52. - № 6. - С. 27-31.

41. Любимова Л.С., Савченко В.Г., Менделеева Л.П. и др. Трансплантация аллогенного костного мозга при хроническом миелолейкозе // Тер. архив. 2004. - Т. 76. - № 7.- С. 18-24.

42. Мамаев H.H., Горбунова A.B., Гиндина Т.Л. и др. Лейкозы и миелодиспластические синдромы с экспрессией гена EVI1: теоретические и клинические аспекты // Клиническая онкогематология. 2012. - Т. 5(4). - С.361-364.

43. Мамаев H.H., Морозова Е.В., Горбунова A.B. Теоретические и клинические аспекты эпигенетических изменений при миелодиспластических синдромах и острых нелимфобластных лейкозах. // Вестник гематол. 2011. - Т.7, №3. - С. 12-21

44. Мартынкевич И.С., Мартыненко Л.С., Иванова М.П. и др. Дополнительные хромосомные аберрации у больных хроническим миелолейкозом // Гематол. и трансфузиол. 2007. - Т. 52 №2. - С. 2835.

45. Мартынкевич И.С.Абдулкадыров K.M. Значимость генетических методов исследования при целенаправленной (таргетной) терапии хронического миелолейкоза ингибиторами тирозинкиназ (Обзор литературы) // Вестник гематол 2011.- Т.7, №3. - С. 5-11.

46. Мартынкевич И.С, Значимость генетических методов исследования при современной целенаправленной (таргетной) терапии хронического

миелолейкоза ингибиторами тирозинкиназ // Вестник гематологии. 2012. - Т.8, № З.-С. 19-23.

47. Менделеева Л.П. Трансплантация аллогенного костного мозга при острых лейкозах и хроническом миелолейкозе // Тер. архив. 2003. - Т. 75. № 7.- С. 89-94.

48. Мисюрин A.B., Аксенова Е.В., Крутов A.A. и др. Молекулярная диагностика хронического миелолейкоза // Гематол. и трансфузиол. 2007. - N.2. -С.35-40.

49. Овсянникова Е.Г., Капланов К.Д., Клиточенко Т.Ю. и др. Мутационный статус резистентных к иматинибу больных хроническим миелолейкозом // Онкогематология. 2012. - № 4. - С. 16-24.

50. Румянцев А.Г., Масчан A.A. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток у детей: Руководство для врачей. - Москва: Медицинское информационное агентство, 2003. - 912 с.

51. Савченко В.Г. Трансплантация костного мозга в онкогематологии // Клиническая онкогематология. 2010. - Т. 3. № 4. - С. 410-411.

52. Ставровская A.A., Стромская Т.П. Транспортные белки семейства авс и множественная лекарственная устойчивость опухолевых клеток // Биохимия. 2008. - Т. 73. № 5. - С. 735-750.

53. Стромская Т.П., Рыбалкина Е.Ю., Круглов С.С. и др. Участие р-гликопротеина в эволюции популяций клеток хронического миелолейкоза при воздействии иматиниба // Биохимия. 2008. - Т. 73. № 1. - С. 36-46.

54. Телегеев Г.Д. и соавт. Роль белка BCR-ABL в лейкозогенезе // Экспериментальная онкология. 1999. - N. 21. - С. 182-194.

55. Туркина А.Г. Ингибитор сигнальных путей STI571 (Signal Transductor Inhibitor) новое направление в лечении хронического миелолейкоза // Современная онкология. - 2001. - Т.З, N.2. - С.46- 48.

56. Туркина А.Г. Патогенетическое лечение хронического миелолейкоза: препарат гливек блокирует активность специфического BCR-ABL онкопротеина //

Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2002. - Т.1, № 2. - С. 60-65.

57. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д. Практические рекомендации по лечению больных хроническим миелолейкозом. М:Из-во Триада, 2008. - 36 с.

58. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А. и др. Эффективность терапии иматиниба мезилатом (Гливеком) в хронической фазе хронического миелолейкоза// Тер. архив. 2003. - Т. 75, № 8. - С. 6267.

59. Туркина А.Г., Челышева ЕЛО. Цитогенетический и молекулярный ответ ранние маркеры эффективности терапии Гливеком больных Pin-хроническим миелолейкозом // Фарматека. - 2004. - №18 (95). - С. 48-53.

60. Хорошко Н.Д., Виноградова О.Ю., Туркина А.Г. Терапия дазатинибом больных хроническим миелолейкозом, резистентных к лечению иматинибом // Гематол. и трансфузиол. 2008. - Т. 53, № 3. - С. 29-34.

61. Хорошко Н.Д., Туркина А.К., Кузнецов С.В. и др. Хронический миелолейкоз успехи современного лечения и перспективы // Гематол. и трансфузиол. 2001. - №4. - С.3-8.

62. Челышева Е.Ю., Туркина А.Г., Мисюрин А.В. и др. Мониторинг минимальной остаточной болезни у больных хроническим миелолейкозом: клиническое значение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени // Тер. архив. 2007. - № 4. - С. 49-53

63. Челышева Е.Ю., Шухов О.В., Лазарева О.В., Туркина А.Г. Мутации киназного домена гена BCR-ABL при хроническом миелолейкозе // Клиниическая онкогематол. 2012. - Т.5, №1. - С. 13-21.

64. Arai S., Yoshimi A., Shimabe М. et al. Evi-1 is a transcriptional target of MLL oncoproteins in hematopoietic stem cells // Blood. 2010. - V.101, № 11. - P.4611-4614.

65. Azam M., Latek R., Daley G. Mechanisms of autoinhibition and STI-571/imatinib resistance revealed by mutagenesis of BCR-ABL II Cell. 2003. - V.l 12, № 6. -P.831-843.

66. Baccarani M., Cortes J., Pane F. et al. Chronic myeloid leukemia: an update of concepts and management recommendations of European LeukemiaNet. J Clin Oncol 2009. - V. 27. - P. 6041-6051

67. Bacher U, Klyuchnikov E, Zabelina T. et al. The changing scene of allogeneic stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia - a report from the German Registry covering the period from 1998 to 2004. // Ann Hematol 2009. - V.88. -P. 1237-1247.

68. Bao X., Hou L., Sun A. et al. The impact of KIR2DS4 alleles and the expression of KIR in the development of acute GVHD after unrelated allogeneic hematopoietic SCT // Bone Marrow Transplant. 2010 - V.45, № 9. - P. 1435-1441.

69. Barnes D., Palaiologou D., Panousopoulou E., et al. BCR-ABL expression levels determine the rate of development of resistance to imatinib mesylate in chronic myeloid leukemia // Cancer Res. 2005. - V.65, № 13. - P.8912-8919.

70. Barthe C., Cony-Makhoul P., Melo J. et al. Roots of clinical resistance to STI-571 cancer therapy // Science. 2009. - V 293, № 5538.- P. 2163 -2001

71. Beachy P., Karhadkar S.S., Berman D.M. Mending and malignancy // Nature. 2004. - V.431. - P.1435-1441.

72. Beck Z., Kiss A., Toth F.D., et al. Alterations of p53 and RB genes and the evolution of the accelerated phase of chronic myeloid leukemia // Leuk Lymphoma. 2000.-V.38.-P. 587-597

73. Beisel C., Paro R. Silencing chromatin. - P. comparing modes and mechanisms // Nat Rev Genet 2011. - V. 12. - P. 123-135.

74. Bensinger W.I., Martin P.J., Storer B. et al. Transplantation of bone marrow as compared with peripheral-blood cells from HLA-identical relatives in patients with hematologic cancers // N Engl J Med. 2001. - V.344, № 3. - P. 175-181.

75. Bracken A.P., Helin K. Polycomb group proteins: navigators of lineage pathways led astray in cancer // Nat Rev Cancer 2009. - V. 9. - P.773-784.

76. Breccia M., Frustaci A.M., Cannella L et al. Sequential development of mutant clones in an imatinib resistant chronic myeloid leukaemia patient following

sequential treatment with multiple tyrosine kinase inhibitors: an emerging problem? Cancer Chemother//Pharmacol. 2009. - V.64, № 1.- P. 195-197

77. Buonamici S., Li D., Mikhail L. et al. EVI1 abrogates interferon-alpha response by selectively blocking PML induction // J Biol Chem 2005. - V. 280. - P.428-436.

78. Burgess M.R., Skaggs B.J., Shah N.P. et al. Comparative analysis of two clinically active BCR-ABL kinase inhibitors reveals the role of conformation-specific binding in resistance // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2005. - V. 102, № 9. -P.3395-3400

79. Calabretta B., Perrotti D. The biology of CML blast crisis // Blood. 2004. -V.103. - P.4010-4022.

80. Carayol N., Vakana E., Sassano A., et al. Critical roles for mTORC2 and rapamycin-insensitive mTORCl-complexes in growth and survival of BCR-ABL-expressing leukemic cells //Proc Natl Acad Sci US A. 2010. - V.107. - P.12469-12474

81. Carlesso N., Frank D.A., Griffin J.D. Tyrosyl phosphorylation and DNA binding activity of signal transducers and activators of transcription (STAT) proteins in hematopoietic cell lines transformed by Bcr/Abl // J Exp Med. 1996. - V.183. - P.811-820.

82. Carter T.A., Wodicka L.M., Shah N.P., et al. Inhibition of drug-resistant mutants of ABL., KIT., and EGF receptor kinases // Proc Natl Acad Sci USA. 2005. -V.102, № 31. - P.l 1011-11016.

83. Cattaneo F., Nucifora G. EVI1 recruits the histone methyltrans- ferase SUV39H1 for transcription repression // J Cell Biochem. 2008. - V.105. - P.344-352.

84. Clift R.A., Buckner C.D., Thomas E.D. et al. Marrow transplantation for patients in accelerated phase of chronic myeloid leukemia // Blood. 1994 - V.84, № 12. - P.4368-4373.

85. Clift R.A., Buckner C.D., Thomas E.D. et al. Treatment of chronic granulocytic leukaemia in chronic phase by allogeneic marrow transplantation // Lancet 1982. - V.2. - P.621-623.

86. Collins S., Groudine M. Amplification of endogenous mycrelated DNA sequences in a human myeloid leukaemia cell line // Nature. 1982. - V.298. - P.679-681.

87. Collins S.J., Groudine M.T. Chronic myelogenous leukemia: amplification of a rearranged c-abl oncogene in both chronic phase and blast crisis // Blood. 1987. -V.69. - P.893-898

88. Corbin A.S., La Rosee P., Stoffregen E.P. et al. Several BCR-ABL kinase domain mutants associated with imatinib mesylate resistance remain sensi- tive to imatinib//Blood. 2003. - V.101, № 11. - P.4611-4614.

89. Cortes J., Kantarjian H.M., O'Brien S. Result of interferon-alpha therapy in patients with chronic myelogenous leukemia 60 years of age and older. // Am J Med 1996. - V.100. - P.452^455.

90. Cortes J., Rousselot. P, Kim D.W. et al. Dasatinib induces complete hematologic and cytogenetic responses in patients with imatinib-resistant or intolerant chronic myeloid leukemia in blast crisis // Blood. 2007. - V 109. - P. 3207-3213

91. Couban S., Simpson D.R., Barnett M.J. et al. - V. Canadian Bone Marrow Transplant Group. A randomized multicenter comparison of bone marrow and peripheral blood in recipients of matched sibling allogeneic transplants for myeloid malignancies // Blood. 2002. - V.100, № 5. - P.1525-1531.

92. Cuenco G.M., Ren R. Cooperation of BCR-ABL and AML1/MDS l/EVIl in blocking myeloid differentiation and rapid induction of an acute myelogenous leukemia. // Oncogene 2001. - V.20. - P. 8236-8248

93. Daghistani M., Marin D., Khorashad J.S. et al. EVI-1 oncogene expression predicts survival in chronic-phase CML patients resistant to imatinib treated with second-generation tyrosine kinase inhibitors // Blood. 2010. - V.116, № 26. - P.6014— 6017.

94. Daley G.Q., Van Etten R.A., Baltimore D. Induction of chronic myelogenous leukemia in mice by 210 BCR-ABL gene of the Philadelphia chromosome // Science 1990. - V.87. - P.6649-6653.

95. De Weer A., Poppe B., Vergult S. et al. Identification of two critically deleted regions within chromosome segment 7q35-q36 in EVI1 deregulated myeloid leukemia cell lines // PLoS One 2010. - V. 5. - P.8676-8680.

96. Deininger M., Schleuning M., Greinix H. et al. - V. European Blood and Marrow Transplantation Group. The effect of prior exposure to imatinib on transplant-related mortality // Haematologica. 2006, - V.91, № 4. - P.452-459.

97. Delhommeau F., Dupont S., Delia Valle V. et al. Mutation in TET2 in myeloid cancers // N Engl J Med 2009. - V. 360. - P.2289-2301.

98. Dengler J., von Bubnoff N., Decker T. et al. Combination of imatinib with rapamycin or RAD001 acts synergistically only in 5Ci?-AßL-positive cells with moderate resistance to imatinib // Leukemia. 2005. - V.19. - P.1835-1838.

99. Devergie A., Reiffers J., Vernant J.P. et al. Long-term follow-up after bone marrow transplantation for chronic myelogenous leukemia: factors associated with relapse // Bone Marrow Transplant. 1990 - V.5, № 6. - P.379-386.

100. Dickinson A.M., Pearce K.F., Norden J., et al. Impact of genomic risk factors on outcome after hematopoietic stem cell transplantation for patients with chronic myeloid leukemia // Haematologica. 2010. - V.95, № 6. - P.922-927.

101. Donata N.J., Wu J.Y., Stapley J. et al. BCR-ABL independence and LYN kinase overexpression in chronic myelogenous leukemia cells selected for resistance to STI571 //Blood. 2003, - V. 101, № 2. -P.690-698.

102. Druker B.J., Guilhot F., O'Brien S.G., et al. Five-year follow-up of patients receiving imatinib for chronic myeloid leukemia // N Engl J Med. 2006. -V.355, № 23. - P. 2408-2417.

103. Druker B.J., Sawyers C.L., Kantarjian H. et al. Activity of a specific inhibitor of the BCR-ABL tyrosine kinase in the blast crisis of chronic myeloid leukemia and acute lymphoblastic leukemia with the Philadelphia chromosome // N Engl J Med. 2001. - V.344, № 14. - P. 1038-1042.

104. Druker B.J., Talpaz M., Resta D.J. et al. Efficacy and safety of a specific inhibitor of the BCR-ABL tyrosine kinase in chronic myeloid leukemia // N Engl J Med. 2001.-V.344.-P.1031-1037.

105. Druker B.J., Tamura S., Buchdunger E., et al. Effects of a selective inhibitor of the Abl tyrosine kinase on the growth of BCR-ABL positive cells // Nat Med. 1996. - V.2. - P.561-566.

106. Enright H., Daniels K., Arthur DC. et al. Related donor marrow transplant for chronic myeloid leukemia: patient characteristics predictive of outcome // Bone Marrow Transplant. 1996. - V.17, № 4. - P.537-542.

107. Ernst T., Chase A. J., Score J. et al. Inactivating mutations of the histone methyltransferase gene EZH2 in myeloid disorders // Nat Genet. 2010. - V. 42. - P.722-726.

108. Ernst T., Erben P., Muller M.C et al. Dynamics of BCR-ABL mutated clones prior to hematologic or cytogenetic resistance to imatinib // Haematologica. 2008. - V.93, № 2, - P. 186-192.

109. Fefer A., Buckner C.D., Thomas E.D., et al. Cure of hematologic neoplasia with transplantation of marrow from identical twins // N Engl J Med. 1977. - V.297. -P.146-148.

110. Fefer A., Cheever M.A., Thomas E.D. et al. Disappearance of Phi-positive cells in four patients with chronic granulocytic leukemia after chemotherapy., irradiation and marrow transplantation from an identical twin // N Engl J Med. 1979. -V.300, № 7. - P.333-337.

111. Fioretos T., Strombeck B., Sandberg T., et al. Isochromosome 17q in blast crisis of chronic myeloid leukemia and in other hematologic malignancies is the result of clustered breakpoints in 17pll and is not associated with coding TP53 mutations // Blood. 1999. - V.94. - P.225-232.

112. Franke T.F., Kaplan D.R., Cantley L.C. PI3K downstream AKTion blocks apoptosis // Cell. 1997. - V.88. - P.435-7.

113. Gabert J, Beillard E, van der Velden V.H. et al. Standardization and quality control studies of 'real-time' quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia - a Europe Against Cancer program. // Leukemia. 2003 - V.17, № 12. - P. 2318-2357.

114. Gaiger A., Henn T., Horth E., et al. Increase of bcr/abl chimeric mRNA expression in tumor cells of patients with chronic myeloid leukemia precedes disease progression // Blood. 1995. - V.86. - P.2371-2378.

115. Gambacorti-Passerini C.B., Gunby R.H., Piazza R., et al. Molecular mechanisms of resistance to imatinib in Philadelphia-chromosome-positive leukaemias // Lancet Oncol. 2003. - V.4, № 2. - P.75-85.

116. Gelsi-Boyer V., Trouplin V., Adelaide J. et al. Mutations of polycomb-associated gene ASXL1 in myelodysplastic syndromes and chronic myelomonocytic leukaemia // Br J Haematol 2009. - V. 145. - P.788-800.

117. Germer S., Holland M.J., Higuchi., R. et al. High-throughput SNP allele-frequency determination in pooled DNA samples by kinetic PCR. // Genome Res.2000. - V. 10, №2. -P. 258-266.

118. Ghaffari S., Jagani Z., Kitidis C., et al. Cytokines and BCR-ABL mediate suppression of TRAIL-induced apoptosis through inhibition of forkhead F0X03a transcription factor//Proc Natl Acad Sei USA. 2003. - V.100. - P.6523-6528.

119. Goldman J. Management of chronic myeloid leukemia // Semin Hematol. 2003.-V.40.-P. 1-103

120. Goldman J.M., Baughan A.S., McCarthy D.M. et al. Marrow transplantation for patients in the chronic phase of chronic granulocytic leukaemia // Lancet 1982. - V.2. - P.623-625.

121. Goldman J.M., Gale R.P., Horowitz M.M. et al. Bone marrow transplantation for chronic myelogenous leukemia in chronic phase. Increased risk for relapse associated with T-cell depletion. // Ann Intern Med. 1988 - V.108, № 6. -P.806-814.

122. Goldman J.M., Szydlo R., Horowitz M.M. et al. Choice of pretransplant treatment and timing of transplants for chronic myelogenous leukemia in chronic phase // Blood. 1993 - V..82 , № 7. - P.2235-2238.

123. Gorre M.E., Mohammed M., Ellwood K et al. Clinical resistance to STI-571 cancer therapy caused by BCR-ABL gene mutation or amplification // Science. 2001. - V. 293, № 5531. - P. 876-880.

124. Goyama S., Yamamoto G., Shimabe M. et al. Evi-1 is a critical regulator for hematopoietic stem cells and transformed leukemic cells // Cell Stem Cell. 2008. -V. 3. - P.207-220.

125. Gratwohl A., Brand R., Apperley K., et al. Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia in Europe 2006: transplant activity., long-term data and current results. An analysis by the Chronic Leukemia Working Party of the European Group for Blood and Marrow Transplantation (EBMT). // Haematologica 2006. - V.91. - P.513-521.

126. Gratwohl A., Hermans J., Goldman J.M., et al. Risk assessment for patients with chronic myeloid leukaemia before allogeneic blood or marrow transplantation. Chronic Leukemia Working Party of the European Group for Blood and Marrow Transplantation. // Lancet 1998. - V.352. - P. 1087-1093.

127. Greenman C., Stephens P., Smith R et al. Patterns of somatic mutation in human cancer genomes // Nature 2007. - V. 446, № 7132. - P. 153-158

128. Griswold I.J., MacPartlin M., Bumm T. et al. Kinase domain mutants of BCR-ABL exhibit altered transformation potency., kinase activity, and substrate utilization., irrespective of sensitivity to imatinib // Mol. Cell Biol. 2006. - V.26, № 16. - P. 6082-6093

129. Groschel S., Lugthart S., Schlenk R. F. et al. High EVI1 expression predicts outcome in younger adult patients with acute myeloid leukemia and is associated with distinct cytogenetic abnormalities // J Clin Oncol 2010. - V. 28. -P.2101-2107.

130. Gruber F.X., Lamark T., Anonli A., et al. Selecting and deselecting imatinib-resistant clones. - P. observations made by longitudinal., quantitative monitoring of mutated BCR-ABL // Leukemia 2005. - V. 19, № 12. - P. 2159-2165

131. Guo J.Q., Wang J.Y., Arlinghaus R.B. Detection of BCR-ABL proteins in blood cells of benign phase chronic myelogenous leukemia patients // Cancer Res. 1991. - V.51. - P.3048-3051.

132. Hanfstein B., Muller M.C., Kreil S et al. Dynamics of mutant BCR-ABL-positive clones after cessation of tyrosine kinase inhibitor therapy // Haematologica 2011. - V. 96, № 3, - P. 360-366

133. Hansen J.A., Gooley T.A., Martin P.J. et al. Bone marrow transplants from unrelated donors for patients with chronic myeloid leukemia // N Engl J Med. 1998. - V.338, № 14. - P.962-968.

134. Hantschel O., Nagar B., Guettler S., et al. A myristoyl/phosphotyrosine switch regulates c-Abl // Cell. 2003. - V.112, № 6. - P.845-857.

135. Hehlmann R., Hochhaus A., Kolb H.J. et al. Interferon-alpha before allogeneic bone marrow transplantation in chronic myelogenous leukemia does not affect outcome adversely., provided it is discontinued at least 90 days before the procedure // Blood. 1999. - V.94, № 11. - P.3668-3677.

136. Heinemann F.M., Ferencik S., Ottinger H.D. et al. Impact of disparity of minor histocompatibility antigens HA-1., CD31., and CD49b in hematopoietic stem cell transplantation of patients with chronic myeloid leukemia with sibling and unrelated donors //Transplantation. 2004. - V. 77, № 7. - P.l 103-1106.

137. Heisterkamp N., Jenster G., ten Hoeve J. et al. Acute leukaemia in bcr/abl transgenic mice // Nature. 1990. - V. 344. - P.251-253.

138. Hochhaus A., Kreil S., Corbin A et al. Roots of clinical resistance to STI-571 cancer therapy // Science. 2001. - V. 293, № 5538. - P 2163-2172

139. Hochhaus A., Kreil S., Corbin A.S. et al. Molecular and chromosomal mechanisms of resistance to imatinib (STI571) therapy // Leukemia. 2002. - V. 16. - P. 2190-2196.

140. Hochhaus A., La Rosée P. Imatinib therapy in chronic myelogenous leukemia: strategies to avoid and overcome resistance // Leukemia. 2004. - V.18, № 8. -P. 1321-1331.

141. Hoelbl A., Schuster C., Kovacic B., et al. Stat5 is indispensable for the maintenance of bcr/abl-positive leukaemia // EMBO Mol Med. 2010. - V.2. - P.98-110.

142. Holtz M.S., Forman S.J., Bhatia R. Non-proliferating CML CD34+ progenitors are resistant to apoptosis induced by a wide range of proapoptotic stimuli // Leukemia. 2005. - V.19, № 6. - P.1034-1041.

143. Horowitz M.M., Rowlings P.A., Passweg J.R. Allogeneic bone marrow transplantation for CML. A report from the International Bone Marrow Transplant Registry // Bone Marrow Transplant. 1996. - V.17. - P.S5-S6.

144. Hu Y., Liu Y., Pelletier S., et al. Requirement of Src kinases Lyn., Hck and Fgr for BCR-ABLl-induced B-lymphoblastic leukemia but not chronic myeloid leukemia // Nat Genet. 2004. - V.36, № 5. - P.453-461.

145. Hughes T., Branford S. Molecular monitoring of BCR-ABL as a guide to clinical management in chronic myeloid leukaemia // Blood Rev. 2006. - V. 20, № 1. -P.29-41.

146. Hughes T., Deininger M., Hochhaus A., et al. Monitoring CML patients responding to treatment with tyrosine kinase inhibitors. Review and recommendations for harmonizing current methodology for detecting BCR-ABL transcripts and kinase domain mutations and for expressing results // Blood. 2006. - V.108, № 1. - P.28-37.

147. Hughes T., Saglio G., Branford S. et al. Impact of baseline BCR-ABL mutations on response to nilotinib in patients with chronic myeloid leukemia in chronic phase // J. Clin. Oncol. 2009. - V.27, № 25. - P. 4204-4210.

148. Iacob R.E., Pene-Dumitrescu T., Zhang J. et al. Conformational disturbance in Abl kinase upon mutation and deregulation // Proc. Natl Acad. Sci. USA 2009.-V. 106, №5.-P. 1386-1391.

149. Ilaria R.L., Van Etten R.A. P210 and P190BCR/ABL induce the tyrosine phosphorylation and DNA binding activity of multiple specific STAT family members //J Biol Chem. 1996. - V.271. - P.31704-31710.

150. Jabbour E., Cortes J., Santos F.P. et al. Results of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation for chronic myelogenous leukemia patients who failed tyrosine kinase inhibitors after developing BCR-ABL1 kinase domain mutations // Blood. 2011. - V.117, № 13. - P.3641-3647.

151. Jabbour E., Jones D., Kantarjian H.M., et al. Long-term outcome of patients with chronic myeloid leukemia treated with second-generation tyrosine kinase inhibitors after imatinib failure is predicted by the in vitro sensitivity of BCR-ABL kinase domain mutations // Blood. 2009. - V.l 14. - P.2037-2043.

152. Jamieson C.H.M., Ailles L.E., Dylla S.J. et al. Granulocytemacrophage progenitors as candidate leukemic stem cells in blast-crisis CML // N Engl J Med. 2004.-V.351.-P.657-667.

153. Janes M.R., Limon J.J., So L., et al. Effective and selective targeting of leukemia cells using a TORC1/2 kinase inhibitor // Nat Med.2010. - V.16. - P.205-213.

154. Jin G., Yamazaki Y., Takuwa M. et al. Tribl and EVI1 cooperate with Hoxa and Meisl in myeloid leukemogenesis // Blood. 2007. - V.109. - P.3998^1005.

155. Kantarjian H.., Giles F., Wunderle., L. et al. Nilotinib in imatinib-resistant CML and Philadelphia chromosome-positive ALL. // N Engl J Med. 2006. - V.354. -P.2542-2551.

156. Kantarjian., H.., Pasquini., R., Hamerschlak., N. et al. Dasatinib or highdose imatinib for chronic-phase chronic myeloid leukemia after failure of first-line imatinib - a randomized phase 2 trial // Blood. 2007. - V.109. - P.5143-5150.

157. Kelliher M.A., McLaughlin J., Witte O.N. et al. Induction of a chronic myelogenous leukemia-like syndrome in mice with v-abl and BCR/ABL // Proc Natl Acad Sci USA. 1990. - V.87. - P.6649-6653.

158. Kirstetter P., Thomas M., Dierich A. et al.. Ikaros is critical for B cell differentiation and function // Eur J Immunol. 2002. - V.32. - P.720-730.

159. Koeffler H.P., Golde D.W. Chronic myelogenous leukemia - new concepts (second of two parts) // N Engl J Med 1981. - V.304. - P. 1269-1274.

160. Komarova N.L., Wodarz D. Drug resistance in cancer: principles of emergence and prevention. // Proc. Natl Acad. Sci. USA 2005. - V.l02, № 27. -P. 9714-9719.

161. Kurokawa M., Mitani K., Irie K. et al. The oncoprotein Evi-1 represses TGF-beta signalling by inhibiting Smad3 // Nature. 1998. - V.394. - P.92-96.

162. Kurokawa M., Mitani K., Yamagata T. et al. The evi-1 oncoprotein inhibits c-Jun N-terminal kinase and prevents stress-induced cell death. // EMBO J

2000.-V.19.-P.2958-2968.

163. Langemeijer S.M., Kuiper R.P., Berends M. et al. Acquired mutations in TET2 are common in myelodysplastic syndromes. // Nat Genet. 2009. - V. 41. - P.838--842.

164. le Coutre P., Kreuzer K.A., Pursche S., et al. Pharmacokinetics and cellular uptake of imatinib and its main metabolite CGP74588 // Cancer Chemother Pharmacol. 2004. - V.53, № 4. - P.313-323.

165. Lee S J., Kukreja M., Wang T. et al. Impact of prior imatinibmesylate on the outcome of hematopoietic cell transplantation for chronic myeloid leukemia // Blood. 2008. - V.l 12, № 8. - P.3500-3507.

166. Lee T.S., Potts S.J., Kantarjian H. et al. Molecular basis explanation for imatinib resistance of BCR-ABL due to T315I and P-loop mutations from molecular dynamics simulations. // Cancer. 2008. - V.ll, № 8. - P. 1744-1753

167. Ley T.J., Ding L., Walter MJ. et al. DNMT3A mutations in acute myeloid leukemia. // N Engl J Med. 2010. - V. 363. - P.2424-2433.

168. Lichty B.D., Keating A., Callum J. et al. Expression of p210 and pl90 BCR-ABL due to alternativesplicing in chronic myelogenous leukaemia. // Br J Haematol. 1998. - V.103, № 3. - P.711—715.

169. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method // Methods.

2001. - V.25, № 4. - P.402^408.

170. Lowenberg B. Minimal residual disease in chronic myeloid leukemia // N Engl J Med. 2003. - V.349, № 15. - P. 1399-1401.

171. Lugthart S., Figueroa M.E., Bindels E. et al. Aberrant DNA hypermethylation signature in acute myeloid leukemia directed by EVI1II Blood. 2011. -V. 117. -P.234-241.

172. Ly C., Arechiga A.F., Melo J.V. et al. BCR-ABL kinase modulates the translation regulators ribosomal protein S6 and 4E-BP1 in chronic myelogenous

leukemia cells via the mammalian target of rapamycin. // Cancer Res. 2003. - V.63. -P.5716-5722.

173. Makishima H., Jankowska A.M., Tiu R.V. et al. Novel homo- and hemizygous mutations in EZH2 in myeloid malignancies. // Leukemia. 2010. - V. 24. -P. 1799-1804.

174. Margueron R., Reinberg D. The Polycomb complex PRC2 and its mark in life // Nature. 2011. - V. 469. - P.343-349.

175. Martin M.G, Uy G.L, Procknow E. et al. Allo-SCT conditioning for myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia with clofarabine, cytarabine and ATG. // Bone Marrow Transplant. 2009. - V.44. - P. 13-17.

176. Martin P.J., Clift R.A., Fisher L.D. et al. HLA-identical marrow transplantation during accelerated-phase chronic myelogenous leukemia. - P. analysis of survival and remission duration. // Blood. 1988. - V.72, № 6. - P. 1978-1984.

177. Martin-Perez D., Piris M.A., Sanchez-Beato M. Polycomb proteins in hematologic malignancies // Blood. 2010. - V. 116. - P.5465-5475.

178. Mayerhofer M., Aichberger K.J., Florian S., et al. Identification of mTOR as a novel bifunctional target in chronic myeloid leukemia. - P. dissection of growth-inhibitory and VEGF-suppressive effects of rapamycin in leukemic cells // FASEB J. 2005. - V.19. - P.960-962.

179. McGlave P.B, Shu X.O, Wen W. et al. Unrelated donor marrow transplantation for chronic myelogenous leukemia: 9 years' experience of the national marrow donor program. // Blood. 2000. - V.95. - P. 2219-2225.

180. Melo J.V., Barnes D.J. Chronic myeloid leukaemia as a model of disease evolution in human cancer. // Nat Rev Cancer. 2007. - V.7. - P.441^153.

181. Melo J.V., Deininger M.W.N. Biology of chronic myelogenous leukemia— signaling pathways of initiation and transformation // Hematol Oncol Clin North Am. 2004. - V.18. - P.545-568.

182. Mitani K., Ogawa S., Tanaka T. et al. Generation of the AML1-EVI-1 fusion gene in the t(3;21)(q26;q22) causes blastic crisis in chronic myelocytic leukemia // EMBO J. 1994. - V.13. - P.504-510.

183. Mohi M.G., Boulton C., Gu T.L., et al. Combination of rapamycin and protein tyrosine kinase (PTK) inhibitors for the treatment of leukemias caused by oncogenic PTKs. // Proc Natl Acad Sci USA. 2004. - V.101. - P.3130-3135.

184. Morishita K., Parker D.S., Mucenski M.L. et al. Retroviral activation of a novel gene encoding a zinc finger protein in IL-3-dependent myeloid leukemia cell lines // Cell. 1988. - V.54. - P.831-840.

185. Mucenski M.L., Taylor B.A., Ihle J.N. et al. Identification of a common ecotropic viral integration site., Evi-1., in the DNA of AKXD murine myeloid tumors. // Mol Cell Biol. 1988. - V.8. - P.301-308.

186. Mullighan C.G., Miller C.B., Radtke I., et al. BCRABL1 lymphoblastic leukaemia is characterized by the deletion of Ikaros // Nature. 2008. - V.453. - P.110-114.

187. Nagao R., Ashihara E., Kimura S. et al. Growth inhibition of imatinib-resistant CML cells with the T315I mutation and hypoxia-adaptation by AV65 - a novel Wnt/beta-catenin signaling inhibitor. // Cancer Lett. 2011. - V.312. - P. 91-100.

188. Nagar B., Bornmann W.G., Pellicena P., et al. Crystal structures of the kinase domain of c-Abl in complex with the small molecule inhibitors PD173955 and imatinib (STI-571) // Cancer Res. 2002. - V.62, № 15. - P.4236-4243.

189. Nicolini F.E., Basak G.W., Soverini S. et al. Allogeneic stem cell transplantation for patients harboring T315I BCR-ABL mutated leukemias. // Blood. 2011. - V.118, № 20. - P.5697-5700.

190. Nicolini F.E., Mauro M.J., Martinelli G. et al. Epidemiologic study on survival of chronic myeloid leukemia and Ph(+) acute lymphoblastic leukemiapatients with BCR-ABL T315I mutation. // Blood. 2009. - V.l 14, № 26. - P.5271—5278.

191. Nikoloski G., Langemeijer S M., Kuiper R P. et al. Somatic mutations of the histone methyl transferase gene EZH2 in myelodysplasia syndromes. // Nat Genet 2010. - V. 42. - P.665-667.

192. No well P.C., Hungerford D.A. A minute chromosome in human chronic granulocitic leukemia// Science. 1960. - V.32. - P.1497-501.

193. O'Brien S.G., Guilhot F., Larson R.A., et al. Imatinib compared with interferon and low-dose cytarabine for newly diagnosed chronic-phase chronic myeloid leukemia // N Engl J Med. - 2003. - V.348. - P.994-1004.

194. O'Hare T., Walters D.K., Stoffregen E.P et al. In vitro activity of Bcr-Abl inhibitors AMN107 and BMS-354825 against clinically relevant imatinib-resistant Abl kinase domain mutants // Cancer Res 2005. - V. 65(11). - P. 4500-4505.

195. Oehler V.G., Gooley T., Snyder D.S. et al. The effects of imatinib mesylate treatment before allogeneic transplantation for chronic myeloid leukemia. // Blood. 2007. - V.109, № 4. - P. 1782-1789.

196. Oehler V.G., Radich J.P., Storer B. et al. Randomized trial of allogeneic related bone marrow transplantation versus peripheral blood stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia. // Biol Blood Marrow Transplant. 2005. - V. 11, № 2. -P.85-92.

197. Ogawa S, Kurokawa M, Tanaka T, et al . Increased Evi-1 expression is frequently observed in blastic crisis of chronic myelocytic leukemia. // Leukemia. 1996. - V. 10, №5.-P. 788-794.

198. Ogawa S, Mitani K, Kurokawa M, et al . Abnormal expression of Evi-1 gene in human leukemias. // Hum Cell. 1996. - V. 9, № 4. - P. 323-332.

199. O'Hare T., Shakespeare W.C., Zhu X., et al. AP24534., a pan-BCR-ABL inhibitor for chronic myeloid leukemia., potently inhibits the T315I mutant and overcomes mutation-based resistance. // Cancer Cell. - 2009. - V.16. - P.401-412.

200. Orum H., Jakobsen M., Koch T. et al. Detection of the factor V Leiden mutation by direct allele specific hybridization of PCR amplicons to photoimmobilized locked nucleic acids. // Clinical Chemistry. - 1999. -V. 45. - P. 1898-1905.

201. Pabst T. Mutations of the myeloid transcription factor CEBPA are not associated with the blast crisis of chronic myeloid leukaemia. // Br J Haematol. 2006. -V. 33.-P. 400-402.

202. Paquette R.L., Nicoll J., Chalukya M. et al. Frequent EVI1 translocations in myeloid blast crisis CML that evolves through tyrosine kinase inhibitors. // Cancer Genet. 2011. - V.204, № 7. - P.392-397.

203. Pellicano F., Simara P., Sinclair A., et al. The MEK inhibitor PD184352 enhances BMS-214662-induced apoptosis in CD34+ CML stem/progenitor cells. // Leukemia. 2011. - V.25. - P. 1159-1167.

204. Pendergast A.M., Muller A .J., Havlik M.H. et al. BCR sequences essential for transformation by the BCR-ABL oncogene bind to the ABL SH2 regulatory domain in a non-phospho tyrosine- dependent manner // Cell. 1991. - V.66. - P.161—171.

205. Pendergast A.M., Quilliam L.A., Cripe L.D. et al. BCR-ABL-induced oncogenesis is mediated by direct inter- action with the SH2 domain of the GRB-2 adaptor protein. // Cell. 1993. - V.75. - P. 175-185.

206. Peng B., Hayes M., Resta D., et al. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of imatinib in a phase I trial with chronic myeloid leukemia patients. // J Clin Oncol. 2004. - V. 22, № 5. - P.935-942.

207. Perrotti D. BCR-ABL suppresses C/EBPa xpression through inhibitory action of hnRNP E2. // Nature Genet. 2002. - V. 7730. - P. 48-58.

208. Picard S., Titier K., Etienne G., et al. Trough imatinib plasma levels are associated with both cytogenetic and molecular responses to standard-dose imatinib in chronic myeloid leukemia/// Blood. 2007 - V. 109, № 8. - P.3496-3499.

209. Puil L., Liu J., Gish G., et al. BCR-ABL oncoproteins bind directly to activators of the Ras signalling pathway. //EMBO J 1994. - V.13. - P.764-773.

210. Quintâs-Cardama A., Gibbons D.L., Kantarjian H., et al. Mutational analysis of chronic myeloid leukemia (CML) clones reveals heightened BCR- ABL1 genetic instability and wild-type BCR-ABLl exhaustion in patients failing sequential imatinib and dasatinib therapy. // Blood. 2007. - V.110. Abstract 1938.

211. Radich J.P., Dai H., Mao M., et al. Gene expression changes associated with progression and response in chronic myeloid leukemia. // Proc Natl Acad Sci U S A. 2006. - V.103. - P.2794-2799.

212. Radich J.P., Gooley T., Bensinger W., et al. HLA-matched related hematopoietic cell transplantation for chronic-phase CML using a targeted busulfan and cyclophosphamide preparative regimen. // Blood. 2003. - V.102. - P.31-35.

213. Raza A., Buonamici S., Lisak L. et al. Arsenic trioxide and thalidomide combination produces multi- lineage hematological responses in myelodysplastic syndromes patients., particularly in those with high pre-therapy EVI1 expression // Leuk Res. 2004. - V.28. - P.791-803.

214. Regl G., Kasper M., Schnidar H., et al. Activation of the BCL2 promoter in response to Hedgehog/GLI signal transduction is predominantly mediated by GLI2. // Cancer Res. 2004. - V.64. - P.7724-7731.

215. Roche-Lestienne C., Soenen-Cornu V., Grardel-Duflos N et al. Several types of mutations of the Abl gene can be found in chronic myeloid leukemia patients resistant to STI571., and they can pre-exist to the onset of treatment. // Blood 2002. -V. 100, №3.-P. 1014-1018.

216. Samanta A.K., Chakraborty S.N., Wang Y. et al. Jak2 inhibition deactivates Lyn kinase through the SET-PP2A-SHP1 pathway., causing apoptosis in drugresistant cells from chronic myelogenous leukemia patients. // Oncogene. 2009. -V.28. - P. 1669-1681

217. Saussele S., Lauseker M., Gratwohl A. et al. - V. German CML Study Group. Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (alio SCT) for chronic myeloid leukemia in the imatinib era. Evaluation of its impact within a subgroup of the randomized German CML Study IV // Blood. 2010 - V.115, № 10. - P.1880-1885.

218. Sauvageau M., Sauvageau G. Polycomb group proteins: multi-faceted regulators of somatic stem cells and cancer // Cell Stem Cell. 2010. - V. 7. - P.299-313.

219. Savage D.G., Szydlo R.M.., Goldman J.M. Clinical features at diagnosis in 430 patients with chronic myeloid leukemia seen at a referral centre over a 16-year period. // Br J Haematol. 1997. - V.96. - P.lll-116.

220. Sawyers C.L., Callahan W., Witte O.N. Dominant negative MYC blocks transformation by ABL oncogenes // Cell. 1992. - V.70. - P.901-910.

221. Schindler T., Bornmann W., Pellicena P., et al. Structural mechanism for STI-571 inhibition of abelson tyrosine kinase. // Science. 2000. - V.289, № 5486. - P. 1938-1942.

222. Shackelford D., Kenific C., Blusztajn A. et al. Targeted degradation of the AMLl/MDSl/£V7i oncoprotein by arsenic trioxide. // Cancer Res. 2006. - V.66. -P.l 1360-11369.

223. Shah N.P., Nicoll J.M., Nagar B et al. Multiple BCR-ABL kinase domain mutations confer polyclonal resistance to the tyrosine kinase inhibitor imatinib (STI571) in chronic phase and blast crisis chronic myeloid leukemia. // Cancer Cell. 2002. - V.2, № 2. - P. 117-125.

224. Shah N.P., Skaggs B.J., Branford S et al. Sequential ABL kinase inhibitor therapy selects for compound drug-resistant BCR-ABL mutations with altered oncogenic potency. // J Clin Invest. 2007. - V. 117, № 9. - P. 2562-2569.

225. Shah N.P., Tran C., Lee F.Y. et al. Overriding imatinib resistance with a novel ABL kinase inhibitor // Science. 2004. - V. 305, № 5682. - P. 399^101.

226. Shet A.S., Jahagirdar B.N., Verfaillie C.M. Chronic myelogenous leukemia. - P. mechanisms underlying disease progression. // Leukemia. 2002. - V.16. -P. 1402-1411.

227. Shih A., Schairer A., Barrett C.L., et al. Cycling toward leukemia stem cell elimination with a selective sonic hedgehog antagonist. // Blood. 2011. - V.118. -P.3776a.

228. Shimabe M., Goyama S., Watanabe-Okochi N. et al. Pbxl is a downstream target of Evi-1 in hematopoietic stem/progenitors and leukemic cells. // Oncogene. 2009. - V. 28. - P.4364^4374.

229. Sill H., Goldman J.M., Cross N.C. Homozygous deletions of the pl6 tumor-suppressor gene are associated with lymphoid transformation of chronic myeloid leukemia. // Blood. 1995. - V.85. - P.2013-2016.

230. Skorski T., Kanakaraj P., Nieborowska-Skorska M. et al. Phosphatidylinositol-3 kinase activity is regulated by BCR/ABL and is required for the growth of Philadelphia chromosome- positive cells. // Blood. 1995. - V.86. - P.726-736.

231. Smith L.T., Hohaus S., Gonzalez D. A. et al. PU. 1 (Spi-1) and C/EBPa regulate the granulocyte colony-stimulating factor receptor promoter in myeloid cells. // Blood. 1996.-v.88.-P 1234-1247.

232. Soverini S., Gnani A., Colarossi S. et al. Philadelphia-positive patients who already harbor imatinib-resistant Bcr-Abl kinase domain mutations have a higher likelihood of developing additional mutations associated with resistance to second- or third-line tyrosine kinase inhibitors. // Blood. 2009. - V.114, № 10. - P. 2168-2171.

233. Soverini S., Gnani A., De Benedittis C et al. Validation of the New European LeukemiaNet (ELN) recommendations for Bcr-Abl kinase domain mutation analysis in chronic myeloid leukemia: an analysis of the GIMEMA CML Working Party Studies.//Blood. 2011. - V.118, № 21.-P. 112-120

234. Soverini S., Martinelli G., Colarossi S., et al. Presence or the emergence of a F317L BCR-ABL mutation may be associated with resistance to dasatinib in Philadelphia chromosome-positive leukemia. // J Clin Oncol. 2006. - V.24, № 33. -E51-E52.

235. Soverini S., Vitale A., Poerio A., et al. Philadelphia-positive acute lymphoblastic leukemia patients already harbor BCR-ABL kinase domain mutations at low levels at the time of diagnosis. // Haematologica. 2011. - V.96, № 4. - P.552-557.

236. Speck B., Bortin M.M., Champlin R., et al. Allogeneic bone-marrow transplantation for chronic myelogenous leukaemia. // Lancet. 1984. - V.8378. - P.665-668.

237. Spensberger D., Delwel R. A novel interaction between the proto-oncogene EVI1 and histone methyltransferases., SUV39H1 and G9a. // FEBS Lett. 2008. - V.582. - P.2761-2767.

238. Surface L.E., Thornton S.R., Boyer L.A. Polycomb group proteins set the stage for early lineage commitment // Cell Stem Cell. 2010. - V. 7. - P.288-298.

239. Thomas E.D., Clift R.A., Fefer A. et al. Marrow transplantation for the treatment of chronic myelogenous leukemia. // Ann Intern Med. 1986. - V.104, № 2. -P.155-163.

240. Valk P.J., Verhaak R.G., Beijen M.A. et al. Prognostically useful geneexpression profiles in acute myeloid leukemia. // N Engl J Med. 2004. - V.350. -P.1617-1628.

241. van Rhee F., Hochhaus A., Lin F., Melo J.V. et al. pl90 BCR-ABL mRNA is expressed at low levels in p210-positive chronic myeloid and acute lymphoblastic leukemias. // Blood. 1996. - V.87, № 12. - P.5213-5237.

242. Yinatzer U., Taplick J., Seiser C.. et al. The leukaemia-associated transcription factors EVI-1 and MDS1/ EVI1 repress transcription and interact with histone deacetylase. // Br J Haematol. 2001. - V.l 14. - P.566-573.

243. Walter M J., Ding L., Shen D. et al. Recurrent DNMT3A mutations in patients with myelodysplastic syndromes. // Leukemia. 2011. - V.96, № 4. - P.552-557.

244. Walz C., Ahmed W., Lazarides K., et al. Essential role for Stat5a/b in myeloproliferative neoplasms induced by BCR-ABL1 and Jak2V617F in mice. // Blood. 2012. - V.l 19. - P.3550-3560.

245. Watanabe-Okochi N., Kitaura J., Ono R. et al. AML1 mutations induced MDS and MDS/AML in a mouse BMT model // Blood. 2008. - V.l 11. - P.4297^1308.

246. Wendel HG., de Stanchina E., Cepero E., et al. Loss of p53 impedes the antileukemic response to BCR-ABL inhibition. // Proc Natl Acad Sci USA. 2006. -V.103. - P.7444-7449.

247. Willis S.G., Lange T., Demehri S et al. High-sensitivity detection of BCR-ABL kinase domain mutations in imatinib-naive patients: correlation with clonal cytogenetic evolution but not response to therapy. // Blood. 2005. - V. 106, № 6. - P. 2128-2137.

248. Wu J., Meng F., Kong L.Y., et al. Association between imatinib-resistant BCR-ABL mutation-negative leukemia and persistent activation of LYN kinase. // J Natl Cancer Inst. 2008. - V. 100, № 13. - P. 926-939.

249. Wu J., Meng F., Lu H., et al. Lyn regulates BCR-ABL and Gab2 tyrosine phosphorylation and c-Cbl protein stability in imatinib-resistant chronic myelogenous leukemia cells. // Blood. 2008. - V.l 11, № 7. - P.3821-3829.

250. Yatsula B., Lin S., Read A J. et al. Identification of binding sites of EVI1 in mammalian cells. // J Biol Chem. 2005. - V. 280. - P.30712-30722.

251. Yoshimi A., Goyama S., Watanabe-Okochi N. et al. EVI1 represses PTEN expression and activates PI3K/AKT/mTOR via interactions with polycomb proteins. // Blood. 2011. - V. 117. - P.3617-3628.

252. Yoshimi A., Kurokawa M. Key roles of histone methyltransferase and demethylase in leukemogenesis //J Cell Biochem. 2011. - V. 112. - P.415-424.

253. Yuasa H., Oike Y., Iwama A. et al. Oncogenic transcription factor EVI1 regulates hematopoietic stem cell proliferation through GATA-2 expression. // EMBO J. 2005. - V. 24. - P. 1976-1987.

254. Zaucha J.M., Prejzner W., Giebel S. et al. Imatinib therapy prior to myeloablative allogeneic stem cell transplantation. // Bone Marrow Transplant. 2005. -V.36, № 5. - P.417-424.

255. Zhang B., Irvine D., Ho Y.W., et al. Inhibition of chronic myeloid leukemia stem cells by the combination of the Hedgehog pathway inhibitor LDE225 with nilotinib. // Blood. 2010. - V. 116. - P.514a.

256. Zhang X., Ren R. BCR-ABL efficiently induces a myeloproliferative disease and production of excess interleukin-3 and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in mice: a novel model for chronic myelogenous leukemia. // Blood. 1998. - V. 92. - P.3829-3840.

257. Zhou T., Parillon L., Li F. et al. Crystal structure of the T315I mutant of Abl kinase // Chem. Biol. Drug Des. 2007. - V. 70, № 3. - P. 171-181.