Применение реакции иммунофлюоресценции для диагностики ротавирусной диареи новорожденных телят тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Нди, Кристофер

• Нди, Кристофер
• кандидат ветеринарных наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Нди, Кристофер

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. КМССЙФИКАЦИЯ РОТАВИРУСОВ

2. ЭПИЗООТОЛОГИЯ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

3. БИОЛОГИЯ РОТАВИРУСОВ

4. ПАТОГЕННОСТЪ И АНТИГЕННЫЕ ВЗАИГЮДЕЙСТВИЯ

МЕЖДУ РОТАВИРУСАМИ

5. ИММУНИТЕТ ПРИ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

6. ДИАГНОСТИКА РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЩ/М

7. ПРИМЕНЕНИЕ ИММУН(тЮОРЕСЦЕНЦИИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ТЕЛЯТ '

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

1.1. Приготовление первично-трипсинизированной культуры клеток почек эмбрионов коров /ПЭК/

1.2. Получение сублиний клеток почек эмбрионов коров /ПЭК/ и изучение изменений морфологии клеток в монослое под воздействием различных факторов

1.3. Отработка методики культивирования лабораторного штамма ротавируса £>А II в монослоях клеточных культур ПЭК и СПЭВ, выращенных на покровных стеклах

1.4. Обнаружение специфического ротавирусного антигена в клеточных культурах ПЭК и СПЭВ на покровных стеклах, инфицированных лабораторным штаммом ротавируса обезьян Ък II

1.5. Гипериммунизация коз

1.6. Гипериммунизация морских свинок

1.7. Гипериммунизация кроликов

1.8. Прямой метод реакции иммуноголюоресценции

1.9. Непрямой метод реакции иммунофлюоресценвди

1.10. Обнаружение ротавирусного антигена при помощи ' РИФ в материалах, отобранных от больных и павших с признаком диареи новорожденных телят

1.11. Приготовление мазков из фекалий в полевых условиях

1.12. Приготовление мазков из фекалий в лаборатории

1.13. Приготовление мазков со слизистой прямой кишки больных диареей телят

1.14. Обнаружение ротавируса в фекалиях больных диареей телят на культурах клеток ПЭК и СПЭВ в РИФ

1.15. Приготовление мазков-отпечатков из слизистой тонкого отдела кишечника павших от диареи новорожденных телят

1.16. Приготовление гистосрезов стенки тонкого отдела кишечника павших от диареи телят для исследования в РИФ

1.17. Выяснение возможности титрования ротавируса в суспензии клеток СПЭВ при помощи РИФ

1.18. Исследование возможности использования РИФ при титровании ротавируса и постановке реакции виру снейтрализации

1.18.1. Титрование в РИФ ротавируса £>А II

1.18.2. Постановка реакции нейтрализации на клетках

ПЭК и СПЭВ по ЦПД и РИФ

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Приготовление первично-трипсинизированной культуры почек эмбрионов коровы /НЭК/

2.2. Получение сублиний ПЭК и изучение изменений морфологии клеток в монослое под воздействием различных Факторов

2.3. Отработка методики культивирования лабораторного штамма ротавируса вА II в монослоях клеточных культур ПЭК и СПЭВ '

2.4. Обнаружение специфического ротавирусного антигена в клеточных культурах ПЭК и СПЭВ на покровных стеклах, инфицированных лабораторным штаммом ротавируса обезьян БА II

Результаты исследований в РИФ материалов от больных и павших с диареей новорожденных телят

Исследование возможности использования реакции иммунофлюоресценции при титровании ротавируса и постановке реакции вируснейтрализации

ОБСУЖДЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ

ВЫВОДЫ

Практические предложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Применение реакции иммунофлюоресценции для диагностики ротавирусной диареи новорожденных телят»

В последние годы заметное распространение приняла ротавирусная диарея новорожденных телят, которая наносит наиболее существенный экономический ущерб скотоводству.По мере накопления информации о свойствах ротавирусов стало ясно место этих вирусов в семействе Reov-iridae , что было признано Международным комитетом по таксономии вирусов /72/.К тому же, теперь есть доказательство того, что ротавирусы достаточно отличаются от рео- и орбивирусов, а это оправдывает выделение их в отдельный род. Данное предложение впервые высказано в 1974 году /75 / , когда было предложено название - ротавирус из-за сходства между этими вирионами и колесиками. Некоторые ученые эти вирусы предлагали называть "дуовирусами" /57/ , признавая двуслойный капсид и дуоденальный источник не- 7 которых штаммов вируса у человека.Самые ранние исследования ротавирусной инфекции у животных проводили Light and Hedes /1943/, вызывая диарею у телят при помощи фекальных фильтратов от больного диареей ребенка. В 1976 году было доказано, что данный вирус является ротавЕгрусом /135/. Было доказано также, что возбудителем эпизоотической - 8 диареи мышат /102/ является РШ{-содержащий ротавирус /89; 223/. Обезьяньи вирус / s A-II/ /114/ является ротавирусом, который патогенен для телят и поросят^гнотобиотов /166/. Современные исследования ротавирусов начались с выделения возбудителя от диарейных телят в США, и затем от детей и телят в Великобритании и Австралии, которыми установлено, что возбудитель этой болезни относится к CeMelCTByReovlrxdae С рОДОвыгд названием "ротавирус" /33; 78; 129; 220/.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Нди, Кристофер

1. С целью установления цредварительного диагноза на рота вирусную инфекцию при массовых диареях новорожденных телят мо жет быть эффективно использована реакция иммунофлюоресценции /РИФ/ даш исследования мазков из фекалий или мазков-отпечатков слизистой тонкого отдела кишечника павших животных.2. РИФ позволяет выявлять в 53-54^ случаев специфический антиген в препаратах из фекалий, полученных от больных диареей телят, а также в клетках ПЭК после инфицирования их этими мате- 116 риалами.3 . Частота обнаружения при помощи РИФ ротавирусного анти гена в мазках-отпечатках и гистосрезах тонкого отдела кишечни ка павших от диареи телят зависела от места взятия материала и способа его приготовления. Чаще всего обнаруживался спеодфичес кий антиген в срезах и мазках-отпечатках, изготовленных из пе редней и средней части тощей кишки и 12-перстной кишки, реже из подвздошной и задней части тощей кишки.4. Специфическое свечение в зараженных клетках ПЭК и ШЭВ адаптированным к ним ротав11русом s А II отмечалось через 6-10 часов после инфицирования, максимальное свечение большинства клеток монослоя наблюдалось к 24г-30 часу.5. Опыты по культивированию и титрованию штамма sA I I , а также по обнаружению вируса в суспензии из фекалий больных ди ареей телят показали, что клетки ПЭК обладают более высокой чувствительностью к ротавирусу, чем СПЭВ.

6. Адаптация и культивирование ротавируса в клетках СПЭВ и ПЭК стали возможными лишь после добавления в питательную сре ду 2 мкг/мл трипсина, а также после обработки этим ферментом вируссодержащего материала в дозе 10 мкг/мл.7. Одновременным титрованием ротавируса sA I I и постанов кой реакции вируснейтрализации в клетках СПЭВ и ПЭК по ЦЦЦ и РИФ показана возможность эффективного использования последней для титрования вируса и определения вируснеитрализующих свойств иммунных сывороток. Цитопатические изменения в клетках ПЭК и СПЭВ во всех случаях наступали значительно реже, чем обнаружи вался в этих клетках ротавирусный антиген. 8. С целью получения клеток ПЭК для проведения исследова ния РИФ необходимо брать эмбрионы 2-3 месячного возраста, трип синизацию проводить не позже чем через 3 часа после отбора по чек. Оптимальной посевной концентрацией как для первичной куль туры, так и для субжший клеток ПЭК является концентрация 700-

800 тыс/мл. Эффективной ростовой средой при получении клеток ПЭК является среда, состоящая из 2 частей гидролизата лакталь бумина, I части среды 199 и 10% сыворотки крови крупного рога того скота.П р а к т и ч е с к и е п р е д л о ж е н и я Рекомендовать в комплексе с другими методами использовать реакцию иммунофлюоресценции для диагностики ротавирусной диа реи новорожденных телят, а также для изучения взаимодействия вирус-клетка и определения инфекционности вируссодержащих ма териалов, особенно при отсутствии цитопатических свойств штагл мов ротавируса,

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Нди, Кристофер, 1984 год

1. Дроздов Г., Покровокий В.И., Ротавйрусный гастроэнтерит. МапмловВ.!!. «•= "Медавдна". 1962, 0.92-94.

2. Завьялова Г.Н. Экспериментальное обоснование промышленной технологии первичных культур клеток. Автореферат кандидатской диссертации, Владимир, 1970.

3. Зыкина Н.А. Внутриутробное развитие крупного рогатого скота черно-пестрой породы. В кн. : "Профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных". Труды Кировского сельскохозяйственного института. 1975, 12, 24-27. - 119 -

4. Краснобаев Е.А, Вирусная диарея крупного рогатого скота. В кн.: Лабораторная диагностика вирусных болезней животных. М., ^ 'Колос", 1972, 414 с.

5. Ласковый В.Н. II. Никольский В,В. О выделении вирусных агентов при гастроэнтеритах поросят методом иммунофлюоресценции. Тр. Саратов. Н.-й. Вет. ст., 1980., 14, 34-36. Инфекционный вирусный гастроэнтерит свиней. К.: ^'Урожай", 1964,

6. Осидзе Д.Ф. Получение культур клеток из тканей животных и их использование в вирусологии. М.: "ВНИИТЭИСК", 1975, 103 с.

7. Самойлов П.П., Пантелеев Ю.В., Сюрин В.И. Изоляция цитопатогеиного ротави-руса телят. Вопросы Ветеринарии, 1982, I, 61-64.

8. Сергеев В.А. 15, Сергеев В.А. Выделение двух линий перевиваемых клеток почек и сердца крупного рогатого скота. Цитология, 1963, 5,1, 104-107. Размножение вирусов животных в культуре ткани. М., "Колос", 1966, 289 с.

9. Смирнова Г.А., Гаври- Особенности роста почечного эпите- лов В.И. ля овцы в культуре ткани. Вопросы Вирусологии, I96I, 2, 227-231.

10. Собко А.И., Купчинский А.Г. Ультраструкт '^рные особенности - Балштрин Ю А CTaTitrevo А П ротавируса обнаруженного у ьарштеин IU.A., отарчеус д.п. о^л^ ^^ щ. гастроэнтеритом свиней. Микробиологический Журнал, I98I, 43, 2 , 499-500.

12. Сюрин В.Н. Аденовирусная инфекизя крупного рогатого скота, В кн. : Лабораторная диагностика вирусных болезней 2ШВ0ТНЫХ. М., "Колос", 1972, 414с.

13. ADAI^ S U.R., KRAFT L.M. Epizootic, diarrhea of infant mice: identification of the etiologic agent. Science., 1963, 141, 359 - 360,

14. ALBREY M.B., MURPHY A.M. Rotavirus gro;-rth in bovine monolayers. lancet., 1976, 1, 753.

15. AD'IEIDA J. Multiple viruses present in the faeces of a. scouring calf. Voter. Rec. 1978, 102, 170 -171.

16. BABIUK L.A., MOHAMffiD K., Rotavirus isolaton and cultivation in the pre- SPENCE L., FAUVEL M., sence of trypsin. J. Clin, Microbiol., 1977, PETRO R. 6, 610 - 617.

17. BAWATVALA J.E., TOTTERDELL., In-vitro detection of human rotaviruses. BARBARil., CHRYSTIE L., lancet.,'1975, 11, 821. UOODE G.N.

18. BARNETT B.B., SPENDLOVE R.S., ImTiunofluorescent cell assay of neonatal PETERSON M.H., HSU L.Y., calf diarrhea virus. Can. J. Сотр. Med.,

19. ASALLE V.A., EGBERT L.N. 1975, 39, 4-62.

20. BARNETT B.B., SPENDLOVE R.S., Effect of enzymes on rotavirus infectivi- CLARK M.L. ty. J. Clin, bucrobiol., 1979, Ю , 111.

21. BERGELAiro M.E., McADARAGH J.P., Proceedings of 26 western poultry STOTZ I. disease conference and 11 poxjltry health symposium. J. south Dakota state Univ., 1977, 129 - 130.

22. BISHOP R.F., DAVIDSON G.P., Virus particles in epithelial cells of du«- HOLtiES I.H., RUCK B.J. denal mucosa from children with acute nonbacterial gastroenteritis. Lancet., 1973, 11, 1281 1283. - 122 -

23. BOHL E.H., SAIF L.J., Porcine pararotavirus: Detection, differentia- THEIL K.W., AGUES A.G., tion from rotavirus, and pathogenesis in gno-CROSS R.F. tobiotic pigs. J. Clin. Microbiol., 1982, 15, 312.

24. BORDEN E.C., SHOPE R.E., Physico-chemical and morphological relation- MURPHY F.A. ships of some arthropod-borne viruses to blue-tongue virus- a medical taxonomic group. Electron microscopic studies. J. Gen. Virol., 1971, 13, 261 - 271.

25. DAVIDSON G.P., BISHOP R.F., TOIJNLEY R.R.¥., HOU-fflS I.H., RUCK B.J. Importance of a new virus in acute sporadic enteritis in children. lancet., 1975, 1, 242 - 246. 124 -

29. ELLENS D.J., DE LEEUl-J P.U., STRJIVER P.J., VAN BALMN J.A.

32. ESPEJO R.T., CALDERON E., GONZALEZ. ESPEJO R., MilRTINEZ E.,

33. OPEZ S., MUNOZ 0. Distinct reovirus-like agents associated г^/ith acute infantile gastroenteritis.. J. Clin. Microbiol,, 1977, 6, 502 - 5o6. Different polypeptide composition of two human rotavirus types. Infect. Immun., 1980, 28, 1, 230 - 237. - 125 -

34. ESTES M.K., GRAHAM D.Y., GERBA СР., SMITH E.M.

35. FAUVEL M., SPENCE L., BABIUK L.A., PETRO R., BLOCK S.

36. FERNELIUS A.L., RITCHIE A.E, CLASSICK L.G., NORI'IAN J.O., MEBUS СA.

37. FLEVJETT Т.Н., BRYDEN A.S., DAVIES H.A.

38. FLEIJETT Т.Н., BRYDEN A.S., DAVIES H.A., UOODE G.N., BRIDGER J.C, DERRICK J.

39. FLEIJETT Т.Н., DAVIES H.A., BRYDEN A.S., ROBERTSON M.J.

40. FLEl'JETT Т.Н., BRYDEN A.S., DAVIES H.A.

42. FOSTER L.G., PETERSON M.V., SPENDLOVE R.S.

43. HOBES I.H., RUCK-B.J., BISHOP R.F., DAVIDSON G.P.

44. INABA Y., SATO K., TAMH/iSHI E . , SATODA K. 9 2 . JOHNSON R.H.

45. I^LICA A.R., GARON C.F. FfATT R.G., 1-IEBUS C.A., VAN KIRK D.H., CHANOCK R.M. IL\PIKIAM A.Z.

46. I^LTER S.S., HEBERLING R.L. RODRIGUEZ A.R., LESTER T.L.

47. KAPIKIAN A.Z., KIMH.W., IJYATT R.G.,RODRIGUEZ IJ.J., ROSS S., CLINE U.L., PARROT R.H., CHANOCK R.M.

48. IvAPIKIAN A.Z., VJIATT R.G., GREEI^ERG H.B., KALICA A.R. KIM H.W., BRilNDT CD.

49. KAUSHIRK A.K., SRIVASTAVA PRASAD S. 101 . котаз В.

53. LEEUT-J P.D.DE. Rotavirus infecties bij kalveren. Tijdschr. Diergeneesk., 1976, 23, 1298. - 1 2 8 -

54. ЬЕЕШЛ P.D. DE. 109. шиши J . , МЬй-ЕШСК М., STROBBE R.

59. MiATSUNO S., INOUYE S., KONO R. An antigenic subunit present in rotavirus infected faeces. J. Virol,, 1977, 34, 325 - 329. Plaque assay of neonatal calf diarrhea virus and the neutralizing antibody in human sera. J. 61in. Microbiol., 1977a, 5, 1.

60. MAYR A. Control of acute virus diseases of calves in the Federal Republic of Germany. Veter. Sc. Communic, 1979, 3, 3 - 19. - 129 -

62. McMLTY M.S., ALLAN G.M., Isolation of cytopathic calf rotavirus. KcFERRilN J.B. Res. Vet. Sci., 1976a, 21, 114 - 115.

63. McNULTI M.S., ALLAN G.M., Comparison of methods for diagnosis of CURRIN IJ.L., McFElffiAN J.B. rotavirus infection of calves. Vet. Rec, 1976, 98, 4-63 - 46Л.

64. MciraLTY M.S., McFERRAN J.B., Studies on rotavirus infection and BRYSON D.G., LOGAN E.F., diarrhea in young calves. Vet. Rec, 1976, CURRAN W.L. 99, 229 - 230.

65. McMLTY M.S., CURRAN ¥.L., The morphogenesis of a cytopathic bovine McFERRAN J.B., rotavirus in I^ ladin-Darby bovine kidney cells. J. Gen. Virol., 1976c, 33, 503 -508.

66. McNTJLTY M.S., ALUN G.M., Cell culture studies xath a cytopathic McFERRjiN J.B. bovine rotavirus. Arch. Virol., 1977, 54, 201 - 209.

67. McNULTY M.S., ALLflN G.M., Synthesis of coreless, probably defective McFERRilN J.B. virus particles in cell cultures infected with rotaviruses. Arch. Virol., 1978, 58, 193.

68. MEBUS СA. Reovirus-like calf enteritis. Amer. J. Dig. Dis., 1976, 21, 592 - 598.

69. MEBUS C.A. Viral calf enteritis. Symposium : Biological agents causing infections in dairy cattle. J. Dairy Sci., 1976, 59, 1175 -1178.

70. MEBUS C.A., UNDERDAHL N.R., Calf diarrhea (scours) reproduced T^jith a RHODES M.B., TT;JIEHAUS H.J. virus from a field outbreak. Bull. Neb. Agric. Exp. Statn., 1969, 233, 1 - I6.

73. MORIи M., blRIVIERE S . , 1.i\LLIER R.

74. MORIN M., L/iRIVIERE S . , 1.ilLLIER R.

76. MURPHY A.M., ALBREI M.B., CREl-JE E.B.

79. OBIJESKI J . F . , PALMER E .L . , MiilRTIN M.L.

82. OXENDER U.D., NEirrilN L .E . , MORROIJ D.A.

83. PALMER E . L . , lilRTIN M.L., MTJRFHY F.A

87. PAB-SNT P . , I'LuRSOLAIS G., ЕАШ/ЕЕ H. , LAMONTAGNE L . , A3SAF R., i-iAROIS P.

89. SGHMFER D.H., SCOTT F.U. 174-. SCHMGL R.D., K0LMS3 I.H.

90. Sli-ihOIJ A., xlLi'^iTO S., KERMANDEZ F., YOLICEN R.K., MATA L.

91. SN0DGRAS3 D.R., ЗЖТН TJ., GRAY E.U., HEIffiliJG J.A.

92. SHODGiUSS D.R., HERRIrlD J.A. GFJiY E.O.

93. SPENCE L., FAUYEL M., PETRO R., BLOGFx S.

94. STAIR E.L., MEBUS C.A., TN^IEHAUS M.J., UilDERDAHL N.R.

98. THE 1-JrIO/FAO PROGxRAtl-'IE ON COi-ffARATIVE VIROLOGY.

99. TliEODORIDIS L . , PR0ZE3KY., ELS H.J .

100. THOULESS Ы.Е., BRYDEN A.S., FLEl-JETT Т.Н. Serotypes of human rotavirus. 1.ancet., 1978, 1, 39.

101. THURBER E.T., BASS E.P., BECiffibniiUJER H.H. Field trial evaluation of a reo-coronavirus calf diarhea vaccine. Canad. J. Сотр. Hed., 1977, Л1, 131 - 136.

103. TODD D., McMLTY M.S. Biochemical studies on a reovirus- like agent (rotavirus) from lambs. J. Virol., 1977, 21, 1215 - 1218.

104. TORRES M.A., WIATT R.G., MSBUS СA., miDERDAHL N.R., KAPIKIAN A.Z. Diarrhea caused in gnotobiotic piglets by the reovirus-like agent of human infantile gastroenteritis. J. Inf. Dis., 1976, 133, 22 - 27.

105. TRUSZGZYNSKI M., LIS H. Bydta rola rota -i coronawirusov; w schorzeniach. Med. Veter., 1980, 36, 321 - 323.

106. TUFTOSSON В., JOHNSON T. Immunoelectroosmophoresis for detection of reo-like virus methodology and comparison with electron microscopy. Experentia., 1976, 36, 498.

107. TZIPORI S., CAPLE S.IJ., BUTLER K.

108. TZIPORI S., 1!ILLL\MS I.H. Isolation of rotavirus from deer. Vet. Rec, 1976, 99, 398. Diarrhea in piglets inoculated \-ri-th rotavirus. Aust. Vet. J., 1978, 54, 188 - 192. - 136 -

112. TON BONSDORFF C.H., HOVI L. TEVALVOTO А.Ы. IIANDERLER A., KUNZLI C , KUNZ U., STECK F. 211. 212. l-^ LCH A.В 213. lELCH A.В . , TlttEKilUS M.J. 21Л. IJELLS R., SNODGR.ASS D.

113. I'JELLS P .U. , SNODGR^ ISS D.R., HERRING J . A . , DAWSON McL.

114. Ш1ТЕ R.G. WIITE G.B.B., A3HT0N G.I., ROBERTS 0., PAimY H.E.

118. WOODE G.N., BEWM.E., DENrHS M.J. Transmission of Ьгяаап rotaviruses to gnotoblotic piglets. Vet. Rec, 1978, 102, ЗОЛ - 341. Studies on cross protection induced in calves by rotaviruses of calves, children and foals. Vet. Rec, 1978, ЮЗ, 304 - 306.

120. IfYATT R.G., MEBUS С A., YOLKEN R.H., ItALICA A.R., JAl'.'lES H.D., liAPIKIAN A.Z., CHANOCK R.M.

122. ZI33IS G., LAIffiERT J . P . Different serotypes of human rotavirus. Is.ncet., 1978, 1, 38 - 39.