Применение метода электрочувствительных зон в фармацевтическом анализе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Доренская Анна Викторовна

• Доренская Анна Викторовна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Доренская Анна Викторовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Природные и синтетические кумарины: общая характеристика, лекарственные средства на основе кумаринов, перспективы их использования в медицине

1.1.1 Общая характеристика

1.1.2 Фармакопейные лекарственные препараты (ЛП) группы кумаринов, методы их анализа

1.1.3 Перспективы применения кумаринов в практической медицине

1.2 Комбинированные производные кумарина как новые терапевтические агенты

1.2.1 Гибридные молекулы, классификация и их значение

1.2.2 Подходы к созданию новых гибридных молекул на основе производных кумарина

1.3 Синтез и антикоагулянтная активность комбинированных производных кумарина

1.3.1 Механизмы действия варфарина и его место в современной антикоагулянтной терапии

1.3.2 Синтез и исследование антикоагулянтной активности производных 4-оксикумарина

1.3.3 Антикоагулянтная активность природных и синтетических комбинированных кумаринов, не содержащих в 4 положении оксигруппы

1.4 Синтез и противовирусная активность комбинированных производных кумарина

1.4.1 Перспективы создания на основе кумаринов анти-ВИЧ агентов

1.4.2 Гибридные кумарины как антивирусные средства против гепатита

1.4.3 Гибридные производные кумарина в качестве противогриппозных агентов

1.4.4 Гибридные кумарины как перспективные агенты против вирусов герпеса

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. СИНТЕЗ, СВОЙСТВА И ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРЫ ГИБРИДЫХ МОЛЕКУЛ НА ОСНОВЕ ПРОИЗВОДНЫХ КУМАРИНА

3.1 Синтез известных (модельных) гибридных молекул на основе производных кумарина

3.1.1 Синтез диуманкала (АВ-3) и иммунакора (АВ-5)

3.1.2 Синтез 4-метил-анкардина (АВ-4)

3.1.3 Синтез 4-[2-(кумарин-4-илокси)этилокси]кумарина (АВ-36)

3.2 Синтез, свойства и изучение структуры новых гибридных молекул производных 1,4-дигиропиридина-кумарина

3.2.1 Синтез гибридных молекул амлодипина с замещенными производными кумарин-4-ил-уксусной кислоты

3.2.2 Синтез гибридных молекул амлодипина с замещенными производными (кумарин-7-ил)окси уксусной кислоты

3.2.3 Синтез гибридных молекул амлодипина с остолевой кислотой

3.2.4 Синтез гибридных молекул амлодипина с 7-(2-бромэтокси)-4-метилкумарином

3.2.5 Изучение физико-химических свойств и структурных особенностей новых гибридных молекул производных 1,4-дигидропиридина-кумарина

3.3 Синтез, свойства и изучение структуры новых гибридных молекул производных фенолокислота-кумарина

3.3.1 Синтез и установление строения гибридных молекул салициловой кислоты-кумарина

3.3.2 Синтез и установление строения гибридных молекул метилсалицилата-кумарина

3.3.3. Синтез и установление строения гибридных молекул ацетилсалициловой кислоты-кумарина

3.4 ^нтез, свойства и изучение структуры новых гибридных молекул на основе варфарина

3.4.1 Изучение структурных особенностей исходного соединения варфарина

3.4.2 Синтез 4-((4-метилкумарин-7-ил)окси)этокси-3-(3-оксо-1-фенил-бутил)кумарина (АВ-27), 3-(3-оксо-1-фенилбутил)-4-(2-((2-оксо-кумарин-7-ил)окси)-этокси)кумарина (АВ-28) и 3-(3-оксо-1-фенилбутил)-4-(2-((2-оксо-кумарин-4-ил)окси)-этокси)кумарина (АВ-30)

3.4.3 Синтез 3-(3-оксо-1-фенилбутил)-2Н-хромен-4-ил 2-гидроксибензоата (АВ-29) и 3-(3-оксо-1-фенилбутил)-2Н-хромен-4-ил 2-ацетоксибензоата (АВ-24)

3.4.4 Синтез 2-оксо-3-(3-оксо-1-фенилбутил)-2Н-хромен-4-ил 2-(7-метокси-2-оксо-2Н-хромен-8-ил)ацетата (АВ-34)

3.4.5 Изучение физико-химических свойств и структурных особенностей новых гибридных молекул на основе варфарина

3.5. Синтез, свойства и изучение структуры новых гибридных молекул производных тритерпеноида-кумарина

3.5.1. Синтез 3,28-ди-О-(7-метилкумарин-4-ил)ацетата бетуленола (АВ-41) и 28-О-(7-метилкумарин-4-ил)ацетата бетуленола (АВ-42)

3.5.2. Синтез 3,28-ди-О-(7-метоксикумарин-8-ил)ацетата бетуленола (АВ-43)

3.5.3. Синтез 28-О-(7-метоксикумарин-8-ил)ацетата бетуленола (АВ-49)

3.5.4. Синтез 3,28-ди-О-(2-(кумарин-7-ил)окси)ацетата бетуленола (АВ-51)

3.5.5. Синтез 3-О-(7-метоксикумарин-8-ил)ацетата аллобетуленола (АВ-45), 3-О-(7-метилкумарин-4-ил)ацетата аллобетуленола (АВ-46) и 3-О-(2-(кумарин-7-ил)окси)ацетата аллобетуленола (АВ-50)

3.5.6. Синтез (2-((кумарин-7-ил)окси)этил) 3-оксо-20(29)-лупен-28-оата (АВ-53) и (2-((кумарин-7-ил)окси)этил) 3-гидрокси-20(29)-лупен-28-оата (АВ-54)

3.5.7 Изучение физико-химических свойств и структурных особенностей новых гибридных молекул производных тритерпеноида-кумарина

ГЛАВА 4. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ГИБРИДНЫХ МОЛЕКУЛ НА ОСНОВЕ ПРОИЗВОДНЫХ КУМАРИНА

4.1. Общие положения

4.2 Изучение антиаритмической активности гибридных молекул производных 1,4-дигидропиридина-кумарина

4.2.1 Оценка влияния исследуемых соединений на параметры ЭКГ

4.2.2 Антиаритмическая активность исследуемых веществ на хлоридкальциевой модели аритмии

4.2.3 Взаимосвязь между структурой и антиаритмической активностью гибридных молекул 1,4-дигидропиридина-кумарина

4.3 Изучение антикоагулянтной активности гибридных молекул производных фенолокислота-кумарина и на основе варфарина

4.3.1 Антикоагулянтная активность гибридных молекул производных фенолокислота-кумарина

4.3.2 Антикоагулянтная активность гибридных молекул на основе варфарина

4.3.3 Острая токсичность и гистологические изучение наиболее активных соединений

4.3.4 Взаимосвязь между структурой и антикоагулянтной активностью гибридных молекул производных фенолокислота-кумарина и на основе варфарина

4.4 Антикоагулянтная активность производных диуманкала

4.5 Изучение иммуномодулирующей активности гибридных молекул производных тритерпеноида-кумарина

4.5.1 Взаимосвязь между структурой и иммуномодулирующей активностью гибридных

молекул производных тритерпеноида -кумарина

4.6 Изучение противовирусной активности гибридных молекул производных тритерпеноида-кумарина

ГЛАВА 5. СТАНДАРТИЗАЦИЯ НАИБОЛЕЕ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

5.1 Стандартизация 4-(2-хлорфенил)-3-(этоксикарбонил)-5-(ме- токсикарбонил)-6-метил-2-[[2-^-((7-метокси-2-оксо-2Н-хромен-4-ил)ацетил)-амино]этокси]метил]-1,4-дигидропиридина (АВ-12)

5.1.1 Разработка стандартного образца (СО) АВ-12

5.1.2 Разработка параметров стандартизации субстанции АВ-12

5.2 Стандартизация 2-оксо-3-(3-оксо-1-фенилбутил)-2Н-хромен-4-ил 2-(7-метокси-2-оксо-2Н-хромен-8-ил)ацетата (АВ-34)

5.2.1 Разработка стандартного образца (СО) АВ-34

5.2.2 Разработка параметров стандартизации субстанции АВ-34

5.3 Стандартизация 4-метил-анкардина (АВ-4) и иммунакора (АВ-5)

5.3.1 Разработка стандартных образцов (СО) АВ-4 и АВ-5

5.3.2 Разработка параметров стандартизации субстанций АВ-4 и АВ-5

5.4. Разработка методик ВЭЖХ-анализа диуманкала, декурсинола и

обтусифола

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ И ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ А

ПРИЛОЖЕНИЯ Б

ПРИЛОЖЕНИЯ В

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Применение метода электрочувствительных зон в фармацевтическом анализе»

Актуальность темы исследования

Одной из актуальных задач современной фармацевтической науки является поиск новых высокоэффективных лекарственных средств путем модификации природных и синтетических соединений. Среди биологически активных веществ весьма важными в практическом отношении являются производные 2Н-1-бензопиран-2-она (2Н-хромен-2-она, кумарина). Кумарины составляют большую группу, включающую более 2500 широко распространенных в растительном мире соединений. В настояшее время к кумаринам и их производным уделяют большое внимание многие исследователи из-за их выраженных фармакологических активностей, таких как антикоагулянтной, противовирусной, противоопухолевой, анти-ВИЧ, противобактериальной, иммуномодулирующей, антиаритмической, противотуберкулезной и других активностей.

За последние несколько лет, с развитием биоорганической и фармацевтической химии, комбинированный (гибридный) подход при создании новых высокоактивных гибридных лекарственных средств, получил значительное внимание, поскольку он позволил синтезировать целый ряд гибридных субстанций с множественной или улучшенной биологической активностью по отношению к исходным соединениям.

Таким образом, синтез и исследование фармакологических свойств гибридных молекул, полученных путем комбинации кумаринов с различными биоактивными молекулами, является актуальным направлением при создании новых высокоэффективных лекарственных средств для лечения многих заболеваний.

Цель исследования

Целью данной работы является синтез новых ковалентно комбинированных производных 2Н-1-бензопиран-2-она, изучение их физико-химических свойств и фармакологической активности, разработка методик контроля качества для стандартизации отобранных наиболее активных соединений.

Задачи исследования:

1. Осуществить синтез новых, ранее не описанных в литературе, комбинированных производных 2Н-1-бензопиран-2-она, установить их строение современными спектральными методами: ИК-, ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии, изучить их физико-химические свойства.

2. Провести фармакологический скрининг синтезированных комбинированных производных 2Н-1-бензопиран-2-она, выявить взаимосвязь между их структурой и биологической активностью.

3. Разработать методики контроля качества для стандартизации отобранных наиболее перспективных соединений и оформить соответствующие нормативные документы.

Научная новизна работы ♦♦♦ Впервые:

- Синтезированы 34, не описанных в литературе, комбинированных производных молекул 2Н-1-бензопиран-2-она. Изучены польностью их физические, спектральные (ИК-, 1Н-, 13С-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии) и хроматографические (ТСХ) свойства.

- Изучена антиаритмическая активность 10 комбинированных производных 1,4-дигидропиридина-кумарина, из которых наиболее активным оказалось соединение 4-(2-хлорфенил)-3-(этоксикарбонил)-5-(метоксикарбонил)-6-метил-2-[[2-[№((7-метоксикумарин-4-ил)ацетил)амино]этокси]метил]-1,4-дигидропиридина (АВ-12).

- Изучена антикоагулянтная активность 15 комбинированных производных феноло-кислота-кумарина и варфарина, наиболее выраженную автивность проявило вещество 2-оксо-3-(3-оксо-1-фенилбутил)-кумарин-4-ил 2-(7-метокси-2-оксо-кумарин-8-ил)ацетата (АВ-34).

- Испытана иммуномодулирующая активность 8 комбинированных производных тритерпеноида-кумарина, из которых наиболее активным оказалось соединение (2-((кумарин-7-ил)окси)этил) 3-гидрокси-20(29)-лупен-28-оата (АВ-54).

- Испытана противовирусная активность 3 комбинированных производных тритерпеноида-кумарина, из которых 3,28-ди-0-(7-метилкумарин-4-ил)ацетат бетуленола (АВ-41) показал слабую активность, а АВ-54 проявил выраженную активность в отношении вируса гриппа A/California/07/09 (H1N1)pdm09 in vivo в дозе 10 мг/кг.

- Изучена острая токсичность 10 отобранных наиболее перспективных соединений.

- Разработаны стандартные образцы АВ-12, АВ-34, АВ-4 (4-метил-анкардина) и АВ-5 (иммунакора) и методы стандартизации их субстанций.

Теоретическая значимость

В результате проведенных исследований создана теоретическая база перспективного направления синтеза высокоэффективных, малотоксичных биологически активных гибиридных соединений на основе производных 2Н-1-бензопиран-2-она.

Практическая значимость работы

Впервые разработаны способы синтеза 34 комбинированных производных 2Н-1-бензопиран-2-она, установлены способы определения подлинности всех синтезированных соединений методами ИК-, 1Н-, 13С-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.

Из числа синтезированных соединений 33 вещества подвергнуты скрининг-испытание на антиаритмическую, антикоагулянтную, иммуномодулирующую и противовирусную активности.

Разработаны проекты нормативных документов: ФСП на субстанции (АВ-4, АВ-5, АВ-12 и АВ-34).

По результатам исследования наиболее активных новых соединений и новому назначению диуманкала в качестве непрямого антикоагулянта поданы 4 заявки в «Федеральную службу по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам» на выдачу патентов Российской Федерации на изобретения.

Из числа указанных субстанций диуманкал (АВ-3) является субстанцией двух известных лекарственных препаратов (диуманкала и анкардина) антиангинального действия, разрешенных приказом министра здравоохранения РФ (приказ № 202 от 1.07.1997) к применению в медицинской практике для лечения ишемической болезни сердца (ИБС) у взрослых. Исходя из результатов сравнительного фармакологического изучения субстанций известного антикоагулянта непрямого дейстиия варфарина и диуманкала в нашей работе показано, что субстанция диуманкала обладает более высокой антикоагулянтной активностью, практически не токсична и не проявляет те побочные действия, характерные для варфарина. Поэтому диуманкал (АВ-3) рекомендуется для клинических испытаний по новому назначению в качестве антикоагулянта непрямого действия, для замены варфарина в клинической практике.

Также рекомендуются к более глубоким фармакологическим исследованиям и клиническим испытаниям следующих запатентованных новых гибридных субстанций: АВ-4, АВ-5, АВ-12, АВ-34 и АВ-54.

Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую деятельность кафедры фармацевтической химии (акт внедрения от 17 июня 2018 г.), центра «Центр коллективного пользования «Аналитический центр» ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России (акт внедрения от 20 июня 2018 г.) и лаборатории химиотерапии вирусных инфекций ФГБУ «НИИ гриппа им. А. А. Смородинцева» Минздрава России (акт внедрения от 16 августа 2018 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Синтез, физико-химические свойства нового класса гибридных молекул на основе производных кумарина и определение их структурных особенностей современными физико-химическими методами.

2. Результаты фармакологических исследований синтезированных соединений и установление закономерности их взаимосвязи между «структура-активность».

3. Стандартизация и валадация разработанных методик количественного определения отобранных наиболее перспективных соединений (АВ-12, АВ-34, АВ-4 и АВ-5) методом ВЭЖХ.

4. Разработка новых методик ВЭЖХ-анализа для модельных соединений диуманкала (АВ-3), декурсинола (АВ-38) и обтусифола (АВ-39).

5. Рекомендуемые нормы качества на AB-4 (4-метил-анкардина), АВ-5 (иммунакора), АВ-12 (амлокума) и АВ-34 (остовара).

Методология и методы исследования

Методологическая основа построена на информационном поиске и анализе работ зарубежных и отечественных ученых в области синтеза и исследований фармакологической активности комбинированных производных 2Н-1-бензопиран-2-она. В процессе исследований были использованы современные методы: ИК-, ЯМР-спектроскопии, УФ-спектрофотометрии, ВЭЖХ, ГЖХ-МС и масс-спектрометрии высокого разрешения. Методы in vivo для оценки фармакологической активности и токсичности исследуемых соединений. Математическая обработка данных проводилась с использованием современных компьютерных программ.

Степень достоверности и апробация результатов

Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на российских и международных научных конференциях: IV международной научной конференции молодых ученых и студентов «Перспективы развития биологии, медицины и фармации» », инициированной советом молодых ученых фонда первого президента Республики Казахстан-Лидера Нации и Южно-Казахстанской государственной фармацевтической академии, в год празднования 25-летия независимости Республики Казахстан (Республика Казахстан, г. Шымкент, 2016; VII, VIII Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 2017, 2018); XV международной научно-практической конференции (Германия, Мюнхен, 2017); IV, V Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации» (Санкт-Петербург, 2016, 2017).

Публикации

Основное содержание диссертации представлено в 20 публикациях, в том числе 4 заявки на выдачу патентов РФ, 5 статьей в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ и 1 статья в издании, индексируемом в наукометрической базе Scopus.

Связь задач исследования с планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом исследовательских работ ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России в рамках одного из основных научных направлений «Синтез, изучение строения, фармакологического действия новых биологических веществ или модифицированных субстанций, препаратов и разработка валидированных методик их стандартизации» (номер государственной регистрации 01201252028).

Соответствие работы паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования

специальности, конкретно пунктам 1, 2 и 3 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Личный вклад автора. Автор непосредственно участвовал в изучении и обобщении данных отечественной и зарубежной литературы, синтезе 34 новых гибридных соединений, обработке и обосновании экспериментальных данных, апробации результатов исследований, подготовке и написании научных публикаций по результатам выполненной работы. В целом, степень участия автора в получении научных результатов работы составляет более 90 %.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 256 страницах машинописного текста, включает 71 таблиц, иллюстрирована 122 рисунками и состоит из введения, обзора литературы по теме исследования, главы «Материалы и методы исследования», 3 глав собственных исследований, заключения, списка сокращений и условных обозначений, списка литературы, приложений. Список литературы включает 167 источника, в том числе 115 на иностранных языках.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Природные и синтетические кумарины: общая характеристика, лекарственные средства на основе кумаринов, перспективы их использования в медицине

1.1.1 Общая характеристика

Кумарины и его производные являются важнной группой природных соединений, широко распространенных в растительном мире. Они представляют собой ненасыщенные ароматические лактоны, в основе которых лежит 5,6-бензо-а-пирон (кумарин) - лактон цис-орто-оксикоричной кислоты (рисунок 1.1) [12].

О \ соон

он

цис-орто- гидрокси-

коричная кислота

Рисунок 1.1 - Структуры цис-орто-оксикоричной кислоты и кумарина Овое название кумарины получили от народного названия южного американского дерева тонка душистого (Dipteryx odorata или Coumarouna odorata, сем. Fabaceae) - французское слово «coumarou», одного из источников, из которых кумарин был впервые выделен в качестве природного вещества в 1820 году [149].

Кумарины широко распространены в растительном мире. Они обнаружены в более, чем в 200 видах высших и низших растений из 40 семейств. В настоящее время производные кумарина обнаружены в значительных растениях семейств: Apiaceae (Umbelliferae), Rutaceae, Asteraceae (Compositae), Fabaceae (Leguminosae) (рисунок 1.2) [127]. Некоторые кумарины также встречаются в продуктах животного происхождения (желчь бобра, сельди и другие) и в микроорганизмах: Streptomyces chartreuse, S. Viridis, S. Nivous, Aspergillus flavus, A. Melleus, A. Ochraceus, Penicillum canescens и др [64, 148].

Интересно отметить, что к настоящему времени в мировой литературе известно более 2500 производных кумарина природного происхождения [109, 148]. Кумарины локализуются в различных органах растений, чаще всего в корнях, коре, плодах и семенах, меньше их в листьях, стеблях [71]. Содержание их в разных растениях колеблется от 0,2 до 10 %, причем часто можно встретить 5-10 кумаринов различной структуры в одном растении [38]. Роль кумаринов в растительном мире пока еще не достаточно выяснена, но она разнообразна. Одни из них являются ингибиторами роста, другие стимулируют прорастание семян. Иногда кумарины выступают в роли защитных факторов против заболеваний и вредителей растений, предохраняют молодые органы растения от избыточного действия ультрафиолетовых лучей [38].

ТЬуше1аеасеае Щ 121

Могасеае Щ 135

01еасеае Щ 149

БаЬасеае И 237

ЛБ1егасеае 830

ЯШлсеае

Лр1асеае

0

1000

1683

2000

3041

3000

4000

Рисунок 1.2 - Количество кумаринов, выделенных из разных семейств растений Существуют разные классификации производных кумарина. Как правило, они классифицированы в соответствии с наиболее распространенными ядрами кумаринов: простые кумарины, сложные кумарины и различные кумарины [17, 109]. По литературным данным [148], все известные кумарины в зависимости от химической структуры делят на следующие групы: простые кумарины, фуранокумарины, дигидрофуранокумарины, пиранокумарины, дигдропиранокумарины, фенилкумарины и бискумарины (рисунок 1.3).

Пиранокумарины

Дигдропирано-кумарины

Фенилкумарины

Бискумарины

Простые кумарины Кумарин, Эскулетин, скополетин, фракцин, остенол, остол, герниарин, умбеллиферон и др.

Фуранокумарины Псорален, Ангелицин, Бергаптен, Ороселол, Пимпинеллин, Метоксален, Дискофоридин и др.

■ Дигидрофурано-кумарины ■- Нодакенин, Глаупалол, Циклонеомаммеин, Изогерберакумарин, рутаретин, феламидин и др.

Линейный тип

Ксантилетин, грандивитин, Агасиллин,Сезелин и др.

Ангулярный тип

Инофиллум А, В, С, Е, Р, G1 G2, Каланолид А, В, (+)-Дигидрокаланолид А и В, Псевдокордитолид и др.

Виснадин, Дигидросамидин, Келлактон, декурсинол

Маммеа А/АВ, Маммеа В/В, Изоглицикумарин, Инфлакумарин А, Изодиспар В, Диспардиол В и др.

Дикумарол и др.

Рисунок 1.3 - Основные типы кумаринов, выделенных из растений

1.1.1.1 Биосинтез кумаринов

Большинство известных природных кумаринов, за несколькими исключениями, в качестве заместителя имеют -ОН группу в положении 7. Например, 7-гидроксикумарин, обычно известный под тривиальным названием, как умбеллиферон, часто расценивается как предшественник более сложных кумаринов, как в структурном, так и в биогенетическом плане [12, 148]. Поэтому в растениях умбеллиферон может быть синтезирован из фенилаланина. Один из биогенетических путей синтеза умбеллиферона иллюстрируется следующим образом (рисунок 1.4).

но

Фенилаланин

соон

__________________________J

соон

но ^ он

о-оксикумаровая кислота

НО

деаминирование

деглюкозилирование

О

СООН

но

й1и

шюкозид-о-оксикумаровой кислоты (цис-форма)

НО

СООН

2-гидроксилирование

п-кумаровая кислота (транс-форма)

глюкозилирование

НО

СООН

о-ети

глюкозид-о-оксикумаровои кислоты (транс-форма)

лактонизация

ОН

СООН

изомеризация

Рисунок 1.4 - Схема биогенетического образования умбеллиферона в растениях Биогенетическая путь образования фуранового кольца в фуранокумаринах, может быть сформировано, когда пренильная группа кумарина взаимодействует с ортофенольным фрагментом [12]. Окислительное взаимодействие может привести к образованию гидроксиизопропил-дигидрофурана, который при дегидрогенизации теряет гидрокси-изопропильную группу, образуя незамещенное кольцо фурана (рисунок 1.4). Когда присоединение пренильной группы умбеллиферона происходит в положении 6, это взаимодействие приводит к образованию деметилсуберозина, через (+)-мармезин, и наконец к линейному фурокумарину псоралену. С другой стороны, введение пренильной группы в положении 8 приводит к образованию ангулярного фуранокумарина ангелицина через остенол и (-)-клумбианетин. Альтернативная окислительная циклизация может формировать гидроксидигидропиран, который при дегидратации образует линейный и ангулярный пиранокумарины ксантилетин и сеселин, соответственно. Таким образом, известные природные кумарины, а именно, фурокумарины и пиранокумарины разделены на два типа: "линейный" и "ангулярный". Биогенетические пути образования фурано- и пиранокумаринов представлены на рисунке 1.5.

Рисунок 1.5 - Биогенетические пути образования фурано- и пиранокумаринов в растениях 1.1.1.2 Физико-химические свойства кумаринов

Физические и химические свойства кумаринов, как и других органических соединений, главным образом, используются, для их анализа и подтверждения структурных особенностей

Большинство кумаринов твердые, обычно кристаллические вещества белого цвета, и имеют довольно определенную температуру плавления, кроме тех, которые разлагаются при плавлении. Сам кумарин возгоняется с парами воды, практически все его производные, нерастворимы или умеренно растворимы в воде, но растворимы в бензоле, эфире, хлороформе, этиловом спирте и других органических растворителях [38].

Наиболее важным различимым физическим свойством для большинства природных и синтетических кумаринов является их флуоресценция, которую они проявляют в ультрафиолетовом свете при 254 и 365 нм. Достаточно отметить, что многие производные кумарина, такие, как 7-гидроксикумарин (умбеллиферон) и его производные флуоресцируют даже под видимым светом. Флуоресценция кумаринов широко используется не только для их обнаружения на бумаге и тонкослойных хроматограммах, но и в лазерной технике при разработке различных высокочувствительных приборов, поскольку многие из них в УФ-свете проявляют, характерную для каждой группе кумаринов флуоресценцию [12]. Например, 7-гидроксикумарины флуоресцируют голубым цветом, 7-алкоксикумарины имеют фиолетовую флуоресценцию, 5,7-дигидроксикумарины имеют тенденцию к синей флуоресценции, фуранокумарины линейного типа имеют желтую флуоресценцию, тогда как ангулярные

фурокумарины (например, 6-метокси-ангелицин) флуоресцирует синим цветом. 3',4'-дигидропиранокумарины линейного и ангулярного типа проявляют ярко-фиолетовую флуоресценцию [38].

Кроме того, усиления флуоресценции при обработке растворов кумаринов парами аммиака позволяет определить наличие фенольной гидроксильной группы в структуре кумаринов. Например, синяя флуоресценция, изменяющаяся на интенсивную зеленую флуоресценцию в щелочном растворе, свидетельствует о наличие в 7 положении гидроксильной группы. Следует отметить, что некоторые производные кумарина, в зависимости от характера, имеющихся в их структуре заместителей, отклоняются от вышеописанных норм [12, 38].

Таким образом, представленные факты о зависимости между структурой и флуоресценцией кумаринов позволяет произвести их групповую идентификацию.

Поскольку соединения кумаринового ряда являются циклическими сложными эфирами (5-лактонами) очень важно, на наш взгляд, кратко рассмотреть их реакционную способность, особенно по отношению к щелочам и кислотам [38].

1.1.1.3 Методы выделения, индентификации и количественное определение кумаринов

Кумарины выделяют непосредственно из сухих или свежих растений с помошью экстракции растворителем с различной полярности [12]. Для извлечения кумаринов из растений обычно на первом этапе используют неполярные растворители, например, петролейный эфир, диэтиловый эфир, а затем полярные растворители, таких как, ацетон, хлороформ, метанол, этанол и др. Хотя наиболее насыщенные кислородом кумарины являются умеренно растворимыми в петролейном эфире. Последний часто используется для начальной экстракции с целью выделения эфирных масел, в которых кумариновые производные хорошо растворимы. Многие кумарины легко кристаллизуются непосредственно из сконцентрированного экстракта в процессе охлаждения извлечения. Другой удобный подход, был описан в работе [117]. Экстракцию из растительного материала первоначально проводили ацетоном. Затем экстракт концентрировали приблизительно до одной трети его начального объема. После испарения ацетона остаток растворяли в хлороформе, упаривали и хроматографировали на колонке [12, 117].

Для очистки кумаринов от сопутствующих веществ возможно использование метода омыления, подробно описанного в литературе [53, 136]. Основой данного метода является способность лактонного (а-пиронового) кольца раскрываться под действием щелочи с образованием кумаринатов - солей О-кумариновой кислоты и вновь замыкаться при последующем подкислении. Существенными недостатками этого метода являются возможность образования вторичных продуктов распада кумаринов, дегидратация и изомеризация некоторых оксикумаринов.

Следует отметить, что в настоящее время очистку и разделение кумаринов, содержащихся в различных растительных экстрактах, обычно проводят методом колоночной хроматографии с использованием различных сорбентов и систем растворителей.

В качестве сорбента при хроматографировании кумаринов чаще всего используется нейтральная окись алюминия (активность по Брокману), различные марки силикагеля, сефадексов, полиамидов, а в качестве элюентов таких растворителей, как гексан - эфир, гексан-этиацетат, петролейный эфир-этилацетат, и петролейный эфир-ацетон и др. В указанных системах очистки многие кумарины и линейные фурокумарины были разделены успешно. Для разделения полярных производных кумарина были использованы другие комбинации растворителей таких, как хлороформ-этилацетат, дихлорметан-эфир, гексан-этилацетат-метанол, гексан-ацетон и гексан-хлороформ-эфир [12, 117].

Проведение хроматографического разделения кумаринов на колонке осуществляется с использованием бумажной (БХ), а чаще - тонкослойной (ТСХ) хроматографии, что позволяет быстро устанавливать однородность исследуемых веществ и обнаруживать даже незначительные их количества. Для ТСХ наиболее часто применяются пластинки Силуфол или Сорбфил, а в качестве систем растворителей - смеси бензола и ацетона (1:2), бензола, метанола и ацетона (8:2:10), гексана и хлороформа, толуола и н-бутанола (гидрокси- и метоксикумарины) спирта этилового и хлороформа (5,5:4,5), хлороформа и формамида (скополетин), этилацетата и бензола (1:2), диэтилового и петролейного эфира (фурокумарины) и другие [12, 36, 40, 117].

Для обнаружения веществ на хроматограмме обычно используют, как уже было отмечено, их флуоресдептные свойства до и после опрыскивания их 2Н раствором КОН, а также цветные реакции с диазосоединениями, в некоторых случаях с реактивом Драгендорфа и парами иода [40]. Флуоресценция кумариновых соединений под УФ-лампой дает возможность выявить их положение на хроматограмме. Однако только по флуоресценции нельзя делать окончательного заключения о структуре, так как многие соединения обладают близкой по окраске флуоресценцией, но отлигчаются по характеру и положению заместителей в молекуле. Все же по флуоресценции с некоторой степенью достоверности можно различать кумарины, фурокумарины, дигидрофурокумарины. Алкоксилированные в 5- и 8-положениях фурокумарины обладают желтой флуоресценцией в УФ-областн (ксантотоксин, пмператорин, прангенин, бергаптен, изоимператорин, оксипейцеданин) [38]. Некоторое представление о структуре, в частности о наличии определенных функциональных групп, дает использование для опрыскивания реактивов, образующих окрашенные соединения с кумаринами.

Идентичность выделенного вещества устанавливают по температуре плавления и современными спектральными методами: ИК-, ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и ВЭЖХ [12, 14].

1.1.2 Фармакопейные лекарственные препараты (ЛП) группы кумаринов,

методы их анализа

Кумарин и его производные обладают разнообразной фармакологической активностью, в частности антикоагулятной, антимикробной, антидепрессантной, антиоксидантной, противовоспалительной, противоопухолевой, противовирусной, антигиперлипидемической, анти-ВИЧ и др. действиями [12, 18, 114, 141]. В настоящее время на основе производных кумарина созданы целый ряд лекарственных средств (ЛС), которые с успехом применяются как в отечественной так и в зарубежной лечебной практике [15, 28, 137] (таблица 1.1).

Таблица 1.1 - Зарегистрированные лекарственные средства на основе производных кумарина

Структура, название ЛС, фармакол огическая группа ЛП ( ЛФ) Фирма-производитель ( страна) Регион применения

1 2 3 4

Гимекоромон сн3 XXI но^^сАо Желчегонное средство, Гепатопротекторы, Спазмолитическое Кантабилине (кап., таб.) (Чешская Республика), Merck-Lipha (Франция ) Европа

Изохол (драже) Zentiva (Чешская Республика) Европа

Хол-спазмолеттен (таб. п/о) Dolorgiet (Германия ) Европа

Одестон (таб.) Pabianice (Россия) Россия

Проендотел (кап.) Baucah & Lomb (Италия) Европа

Аценокумарол " о ОМа Антикоагулянтное непрямого действия Коарол (таб.) Andromaco (Чили) Южная Америка

Мини-синтром (таб.) Novartis (Франция) Европа

Синтром (таб.) Novartis (Франция, Австралия, Германия) Европа

Синтром Митис (таб.) Novartis (Нидерланды) Европа

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Доренская Анна Викторовна, 2015 год

- 32 с.

30. Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издания. Том 1. - М.: ФЭМБ, 2015. - 1469 с.

31. Дзяк, Г. В. Антикоагулянты непрямого действия в кардиологии: показания и противопоказания, дозирование и осложнения / Г. В. Дзяк, Л. И. Васильева, Л. В. Сапожниченко // Лки Украни. - 2009. - №. 7. - С. 115-121.

32. Задионченко, В. С. Место Варфарина в лечении и профилактике тромбоэмболий / В. С. Задионченко, Г. Г. Шехян, А. М. Щикота, А. А. Ялымов. // РМЖ. - 2011. - Т. 19. - №. 26. - С. 1648-1657.

33. Ивкин, Д. Ю. Антиаритмические, антикоагуляционные и центральные эффекты комбинированных гетероциклических соединений 2-Н-1-бензопиран-2-онового ряда: дис. фарм. наук: 14.04.02 / Ивкин Дмитрий Юрьевич - Спб., 2011. -106 с.

34. Каверина, Н. В. Экспериментальное изучение новых антиаритмических средств / Н.В. Каверина, С.Ю. Бердяев, Е.П. Кищук и др. // Ведомости фармакологического комитета. - 1998. -№. 2. - С. 11-18.

35. Ковалева, Е. Л. Совершенствование методологических подходов к стандартизации фармацевтических субстанций / Е. Л. Ковалева, В. Л. Багирова, К. С. Шахназаров // Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Том 44. - № 1. - С. 35-42.

36. Комиссаренко, Н. Ф. Флавоноиды и кумарины некоторых растений Сибири и Дальнего Востока / Н. Ф. Комиссаренко, П. Г. Левашова, Г. П. Шнякина // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Всесоюз. конф. Томск. - 1989. - С. 81-82.

37. Кропачёва, Е. С. Исследование фармакогенетики варфарина и клопидогрела для оптимизации антитромботической терапии / Е. С. Кропачёва и др. - ООО М.: "Издательская группа" Дуэт, 2015.

38. Кузнецова, Г. А. Природные кумарины и фурокумарины / Г. А. Кузнецова -Наука: Ленингр. отд-ние, 1967. - 247 с.

39. Кулешова, Э. В. Антагонисты кальция и их роль при лечении заболеваний сердечнососудистой системы (часть 1) / Э. В. Кулешова // Вестник аритмологии. - 1998. - №. 10. - С. 5058.

40. Ложкин, А. В. Природные кумарины: методы выделения и анализа (обзор) / А. В. Ложкин, Е. И. Саканян // Химико-фармацевтический журнал. - 2006. - Т. 40. - №. 6. - С. 47-56.

41. Нгуен, В. Х. Синтез, структурные особенности и биологическая активность производных бетуленола: дис. фарм. наук: 14.04.02 / Нгуен Ван Хай. - Спб., 2013. -175 с.

42. Нгуен, К.Б. Синтез и структурный анализ нового класса гибридных молекул 1,4-дигидропиридинил-кумаринов / К.Б. Нгуен // Сборник материалов VII Всероссийской всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», Санкт- Петербург, 24-25 апреля 2017 г. - Спб: Изд-во СПХФА, 2017. - С. 129-130.

43. Нгуен, К.Б. Разработка и валидация метода ВЭЖХ для стандартизации субстанции декурсинола / К.Б. Нгуен // Сборник материалов VII Всероссийской всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация -потенциал будущего», Санкт-Петербург, 23-24 апреля 2018 г. - Спб: Изд-во СПХФА, 2018. - С. 638-642.

44. Нгуен, К.Б. Изучение фармакологической активности комбинированныых производных варфарина / К.Б. Нгуен, А.З. Абышев // Сборник материалов IV международной научной конференции молодых ученых и студентов « Перспективы развития биологии, медицины и фармации» », инициированной советом молодых ученых фонда первого президента Республики Казахстан - Лидера Нации и Южно-Казахстанской государственной фармацевтической академии, в год празднования 25-летия независимости Республики Казахстан, г. Шымкент, Республика Казахстан, 9-10 декабря, 2016 г. - С. 211-216.

45. Новоселов, В. П. Судебная медицина: вопросы, проблемы, экспертная практика / В. П. Новоселов. - Абакан: STT Publishing, 2016.

46. Прозоровский, В. Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки / В. Б. Прозоровский // Фармакология и токсикология. - 1978. - Т. 34. - С. 497-502.

47. Производные 2Н-1-бензопиран-2-она, проявляющие антикальциевую активность: пат. 2242471 Рос. Федерация : МПК С07Б331/06, С07Б407/12, А61К 31/352, А61Р9/06 (2000.01) / А. З. Абышев, Э. М. Агаев; заявитель и патентообладатель Абышев Азад Зияд олгы - No 2003123723/04 ; заявл. 31.07.2003 ; опубл. 20.12.2004 - 19 с.

48. Руководство для предприятий фармацевтической промышленности / Методические рекомендации. - М. : Издательство «Спорт и Культура -2000», 2007. - 192 с.

49. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

50. Способ получения таблеток диуманкала - forte по 0, 01 г: пат. 2187303 Рос. Федерация: МПК А61К 31/352 / А. З. Абышев, Э. М. Агаев, О. В. Маринщенко; заявитель и патентообладатель Абышев Азад Зияд олгы.- № 2000125661/14; заявл. 12.10.2000; опубл. 20.08.2002. - 8 с.

51. Средство для лечения ишемической болезни сердца: пат. 2155036 Рос. Федерация: МПК А61К 31/35 / А. З. Абышев, Г. И. Дьячук; заявитель и патентообладатель Абышев Азад Зияд олгы, Дьячук Георгий Иванович - № 98120274/14; заявл. 11.11.1998 ; опубл. 27.08.2000. - 13 с.

52. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения: Отраслевой стандарт : ОСТ 91500.05.001.00 : утвержденный Министром здравоохранения РФ 01.11.2001. -М. : 2001.

53. Aboo, Sh. Coumarins and alkaloids of Aegle marmelo / Sh. Aboo, K.Randhir, P. S. Satya // Phytochem - Vol. 12. - № 8. - P. 2071-2072.

54. Abyshev, A. Z. Synthesis and antiviral activity of benzopyran-2-one derivatives / A. Z. Abyshev, A. T. Alekseev, V. G. Platonov, I. A. Byrkin. // Pharmaceutical chemistry journal. - 1996. -Vol. 30. - №. 7. - P. 441-444.

55. Abyshev, A. Z. Synthesis and anticoagulant activity of some derivatives of warfarin / A. Z. Abyshev, E.M. Agaev, I. K. Zhurkovich, D.Yu. Ivkin, D.S. Lissitzky, K.B. Nguyen // Azerbaijan Pharmaceutical and Pharmacotherapy Journal. - 2017. - Vol. 17. - №. 1. - P. 11-14.

56. Abyshev, A. Z. Synthesis, physico-chemical analysis and pharmacological activity of new conjugated coumarin - betulenol hybrids / A. Z. Abyshev, H. V. Nguyen, D. Yu. Ivkin., N. C. Bang // Science and Education: Materials of the XV international research and practice conference, Munich, 1112 april 2017. - Munich (Germany): Vela-Verlag, 2017 - P. 44-52.

57. Akhtar, R. Synthesis of ciprofloxacin-based compounds: A review / R. Akhtar et. al. // Synthetic Communications. - 2016. - Vol. 46. - №. 23. - P. 1849-1879.

58. Al-Amiery, A. A. The use of umbelliferone in the synthesis of new heterocyclic compounds / A. A. Al-Amiery, A. Y. Musa, A. A. H. Kadhum, A. B. Mohamad // Molecules. - 2011. - Vol. 16. - №. 8. - P. 6833-6843.

59. Amin, K. M. New series of 6-substituted coumarin derivatives as effective factor Xa inhibitors: Synthesis, in vivo antithrombotic evaluation and molecular docking / K. M. Amin, N. M. A. Gawad, D. E. A. Rahman // Bioorganic chemistry. - 2014. - Vol. 52. - P. 31-43.

60. Au, N. Pharmacogenomics of 4-hydroxycoumarin anticoagulants / N. Au, A. E. Rettie // Drug metabolism reviews. - 2008. - Vol. 40. -№ 2. - P. 355-375.

61. Babe, L. M. Viral proteases: evolution of diverse structural motifs to optimize function / L. M. Babe, C. S. Craik // Cell. - 1997. - Vol. 91. - №. 4. - P. 427-430.

62. Barnette, D. A. Stereospecific Metabolism of R-and S-Warfarin by Human Hepatic Cytosolic Reductases / D.A. Barnette, et al. // Drug Metabolism and Disposition. - 2017. - Vol. 45. - №. 9. - P. 1000-1007.

63. Bhavsar, D. Synthesis and in vitro anti-HIV activity of N-1, 3-benzo [d] thiazol-2-yl-2-(2-oxo-2H-chromen-4-yl) acetamide derivatives using MTT method / D. Bhavsar, J. Trivedi, S. Parekh. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2011. - Vol. 21. - №. 11. - P. 3443-3446.

64. Bogdal, D. Coumarins: fast synthesis by Knoevenagel condensation under microwave irradiation / D. Bogda // Journal of Chemical Research, Synopses. - 1998. - № 8. - P. 468-469.

65. Bourinbaiar, A. S. Effect of the oral anticoagulant, warfarin, on HIV-1 replication and spread / A. S. Bourinbaiar, X.Tan, R. Nagorny // Aids. - 1993. - Vol. 7. - №. 1. - P. 129.

66. British Pharmacopoeia. British Pharmacopoeia 2013 (BP 2013) [Электронный ресурс]. -London (UK): MHRA, 2012.

67. Calderone, V. An update on hybrid drugs in cardiovascular drug research / V. Calderone // Expert opinion on drug discovery. - 2008. - Vol. 3. - №. 12. - P. 1397-1408.

68. Chauhan, S. S. Trioxaquines: hybrid molecules for the treatment of malaria / S. S. Chauhan, M.Sharma, P. M. S. Chauhan // Drug News & Perspectives. - 2010. - Vol. 23. - №. 10. - P. 1323-1347.

69. Chavan, R. R. Microwave-assisted synthesis, computational studies and antibacterial/anti-inflammatory activities of compounds based on coumarin-pyrazole hybrid / R. R. Chavan, K. M. Hosamani // Royal Society open science. - 2018. - Т. 5. - №. 5. - С. 172-435.

70. ClinicalTrials. gov [Электронный ресурс]. US National Institutes of Health. - Режим доступа: https://clinicaltrials.gov (дата обращения: 20.05.2018).

71. Cuellar, A. Farmacognosia y productos naturales / A. Cuellar, M. Miranda // La Habana: Editorial Félix Varela. - 2001. - P. 207-213.

72. Dharmaratne, H. R. W. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase activity by cordatolides isolated from Calophyllum cordato-oblongum / H. R. W. Dharmaratne, W. M. A.P. Wanigasekera, E. Mata-Greenwood, J. M. Pezzuto. // Planta medica. - 1998.

- Vol. 64. - №. 05. - P. 460-461.

73. Dougall, H. T. A comparative review of the adverse effects of calcium antagonists / H. T. Dougall, J. McLay // Drug Safety. - 1996. - Vol. 15. - №. 2. - P. 91-106.

74. Eikelboom, J. W. Antiplatelet Drugs. Antithrombotic Therapy and Prevention of Thrombosis, 9th ed: American College of Chest Physicians Evidence-Based Clinical Practice Guidelines / J. W. Eikelboom, J. Hirsh, F. A. Spence, et. al. // CHEST. - 2012. - Vol. 141. - № 2. - P. e89S-e119S.

75. Fasco, M. J. R-and S-Warfarin inhibition of vitamin K and vitamin K 2, 3-epoxide reductase activities in the rat / M. J. Fasco, L. M. Principe. // Journal of Biological Chemistry. - 1982. - Vol. 257.

- №. 9. - P. 4894-4901.

76. Flavin, M. T. Synthesis, chromatographic resolution, and anti-human immunodeficiency virus activity of (±)-calanolide A and its enantiomers / M. T. Flavin, J. D. Rizzo, A. Khilevich, et.al. // Journal of medicinal chemistry. - 1996. - Vol. 39. - №. 6. - P. 1303-1313.

77. Ghannadi, A. Anti-viral evaluation of sesquiterpene coumarins from Ferula assa-foetida against HSV-1 / A. Ghannadi, K. Fattahian, Y. Shokoohinia, M.Behbahani, A. Shahnoush // Iranian journal of pharmaceutical research: IJPR. - 2014. - Vol. 13. - №. 2. - P. 523.

78. Goldbourt, U. Early administration of nifedipine in suspected acute myocardial infarction. The secondary prevention reinfarction Israeli nifedipine trial 2 study / U. Goldbourt, S. Behar, H. ReicherReiss // Arch. Intern. Med. - 1993. -Vol. 153.- P. 345-353.

79. Guasch, L. Tautomerism of warfarin: combined chemoinformatics, quantum chemical, and NMR investigation / L. Guasch, M. L. Peach, M. C. Nicklaus // The Journal of organic chemistry. -2015. - Vol. 80. - №. 20. - P. 9900-9909.

80. Guo, Q. Synthesis and in-vitro antimycobacterial activity of fluoroquinolone derivatives containing a coumarin moiety / Q. Guo, M. Liu, L. Feng, K. Lv, Y. Guan, H. Guo, C. Xiao // Archiv der Pharmazie. - 2011. - Vol. 344. - №. 12. - P. 802-809.

81. Harrich, D. Mechanistic aspects of HIV-1 reverse transcription initiation / D. Harrich, B. Hooker // Reviews in medical virology. - 2002. - Vol. 12. - №. 1. - P. 31-45.

82. Hassan, M. Z. Therapeutic potential of coumarins as antiviral agents / M. Z. Hassan, H. Osman, M. A. Ali, M. J. Ahsan. // European journal of medicinal chemistry. - 2016. - Vol. 123. - P. 236-255.

83. He, M. Structural forms of phenprocoumon and warfarin that are metabolized at the active site of CYP2C9 / M. He, K. R. Korzekwa, J. P. Jones, A. E. Rettie, W. F. Trager. // Archives of biochemistry and biophysics. - 1999. - Vol. 372. - № 1. - P. 16-28.

84. Herlitz, J. Effect of fixed low dose warfarin added to aspirin in the long term after acute myocardial infarction; the LoWASA Study / J. Herlitz, J. Holm, M. Peterson // European heart journal.

- 2004. - Vol. 25. - №. 3. - P. 232-239.

85. Hodge, H. C. Tabulation of toxicity classes / H. C. Hodge, J. H. Sterner. // American Industrial Hygiene Association Quarterly. - 1949. - Vol. 10. - №. 4. - P. 93-96.

86. Howard, C. R. Emerging virus diseases: can we ever expect the unexpected? / C. R. Howard, N. F. Fletcher // Emerging microbes & infections. - 2012. - Vol. 1. - №. 12. - P. e46.

87. Huang, L. Anti-AIDS agents. 15. Synthesis and anti-HIV activity of dihydroseselins and related analogs / L. Huang, Y. Kashiwada, L. M. Cosentino, S. Fan, et.al. // Journal of medicinal chemistry. - 1994. - Vol. 37. - №. 23. - P. 3947-3955.

88. Huang, L. 3',4'-Di-o-(-)- camphanoyl-(+)-ciskhellactone and related compounds: A. new class of potent anti- HIV agents / L. Huang, Y. Kashiwada, L. M. Cosentino, S. Fan, K.H. Lee. // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. - 1994. - Vol. 4. - №. 4. - P. 593-598.

89. Hurlen, M. Warfarin, aspirin, or both after myocardial infarction / M. Hurlen, M. Abdelnoor, P. Smith, et. al. // New England Journal of Medicine. - 2002. - Vol. 347. - №. 13. - P. 969-974.

90. Hwu, J. R. Synthesis of new benzimidazole-coumarin conjugates as anti-hepatitis C virus agents / J. R. Hwu, R. Singha, S. C. Hong, et. al. // Antiviral Research. - 2008. - Vol. 77. - №. 2. - P. 157-162.

91. Hwu, J. R. Coumarin- purine ribofuranoside conjugates as new agents against hepatitis C virus / J. R. Hwu, S. Y. Lin, S. C. Tsay, E. De Clercq, P. Leyssen, J. Neyts. // Journal of medicinal chemistry.

- 2011. - Vol. 54. - №. 7. - P. 2114-2126.

92. Imaeda, Y. Discovery of sulfonylalkylamides: A new class of orally active factor Xa inhibitors / Y. Imaeda, T. Miyawaki, H. Sakamoto // Bioorganic & medicinal chemistry. - 2008. - Vol. 16. - №. 5. - P. 2243-2260.

93. Indian Pharmacopoeia. The Indian pharmacopoeia commission. Central Indian Pharmacopoeia Laboratory, Ministry of Health and Family Welfare, Govt of India, Sector. - 2007. - Vol. 23.

94. Ishikawa, T. Synthesis of toddacoumaquinone, a coumarin-naphthoquinone dimer, and its antiviral activities / T. Ishikawa, K. Kotake, H. Ishii, // Chemical and pharmaceutical bulletin. - 1995. -Vol. 43. - №. 6. - P. 1039-1041.

95. Jayashree, B. S. Antioxidant analgesic and anti-inflammatory activities of some selected heteroaryl substituted coumarins / B. S. Jayashree, S. Arora, Y. Nayak // Pharmacologyonline. - 2008. - Vol. 2. - P. 404-410.

96. Karthik, S. Photoresponsive coumarin-tethered multifunctional magnetic nanoparticles for release of anticancer drug / S. Karthik, N. Puvvada, B. P. Kumar, S. Rajput // ACS applied materials & interfaces. - 2013.- Vol. 5. - №. 11. - P. 5232-5238.

97. Kashman, Y. The calanolides, a novel HIV-inhibitory class of coumarin derivatives from the tropical rainforest tree, Calophyllum lanigerum / Y. Kashman, K. R. Gustafson, et.al. // Journal of medicinal chemistry. - 1992. - Vol. 35. - №. 15. - P. 2735-2743.

98. Katsori, A. M. Coumarin derivatives: an updated patent review (2012-2014) / A. M. Katsori, D. Hadjipavlou-Litina // Expert opinion on therapeutic patents. - 2014. - Vol. 24. - №. 12. - P. 13231347.

99. Kontogiorgis, C. Coumarin-based drugs: a patent review (2008-present) / C. Kontogiorgis, A. Detsi, D. Hadjipavlou-Litina // Expert opinion on therapeutic patents. - 2012. - Vol. 22. - №. 4. - P. 437-454.

100. Kumar, J. A. Synthesis, anticancer activity and photophysical properties of novel substituted 2-oxo-2H-chromenylpyrazolecarboxylates / J. A. Kumar, G. Saidachary et.al. // European journal of medicinal chemistry. - 2013. - Vol. 65. - P. 389-402.

101. Kuznetsova, G. A. Natural (-)-7-methoxy-8-(P,y-dihydroxyisopentyl)-coumarin / G. A. Kuznetsova, A. Z. Abyshev // Chemistry of Natural Compounds. - 1965. - Vol. 1. - №. 4. - P. 220-223.

102. Laskowski, S. C. Coumarins. II. Derivatives of Coumarin-3-and-4-Acetic Acids / S. C. Laskowski, R. O. Clinton. // Journal of the American Chemical Society. - 1950. - Vol. 72. - №. 9. - P. 3987-3991.

103. Liu, X. H. Synthesis and molecular docking study of novel coumarin derivatives containing 4, 5-dihydropyrazole moiety as potential antitumor agents / X. H. Liu, H. F. Liu, J. Chen et.al. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2010. - Vol. 20. - №. 19. - P. 5705-5708.

104. Lowitz, J. T. Uber eine neue, fast benzoeartige substanz der briken / J. T. Lowitz // Crell's Chem. Ann. - 1788 -Vol.1 - P. 312-317.

105. Ma, T. Chemical library and structure-activity relationships of 11-demethyl-12-oxo calanolide A analogues as anti-HIV-1 agents / T. Ma, L. Liu, H. Xue, L. Li, C. Han, et.al. // Journal of medicinal chemistry. - 2008. - Vol. 51. - №. 5. - P. 1432-1446.

106. Mahajan, D. H. Synthesis and Studies of New 2-(Coumarin-4-yloxy)-4, 6-(substituted)-s-Triazine Derivatives as Potential Anti-HIV Agents / D. H. Mahajan, et al. // Archiv. der. Pharmazie. -2009. - T. 342. - №. 5. - C. 281-290.

107. Manolov, I. Synthesis, toxicological, anticoagulant activity and quantumchemical study of bis-coumarin and other coumarin derivatives / I. Manolov, I. Dimitrov, N. Danchev, I. Kostadinova // World J. Res. Rev. - 2016. - Vol. 3. - P. 50-62.

108. Matos, M. J. A new series of 3-phenylcoumarins as potent and selective MAO-B inhibitors / M. J. Matos et al. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2009. - Vol. 19. - №. 12. - P. 32683270.

109. Matos, M. J. Coumarins-an important class of phytochemicals / M. J. Matos, L. Santana, E. Uriarte, O. A. Abreu, E. Molina, E. G. Yordi // In Phytochemicals-Isolation, Characterisation and Role in Human Health, InTech. - 2015. - P. 113-139.

110. Matthew, L. Y. C. The vasorelaxation effect of osthole, derived from Radix Angelicae Pubescentis, in porcine coronary artery / L. Y. C. Matthew, W. Keung, D. K. Yeung. // The FASEB Journal. - 2007. - Vol. 21. - №. 6. - P. A1165.

111. Mazumder, A. Antiretroviral agents as inhibitors of both human immunodeficiency virus type 1 integrase and protease / A. Mazumder, S. Wang, et.al. // Journal of medicinal chemistry. - 1996. -Vol. 39. - №. 13. - P. 2472-2481.

112. Meunier, B. Hybrid molecules with a dual mode of action: dream or reality? / B. Meunier // Accounts of chemical research. - 2007. - Vol. 41. - №. 1. - P. 69-77.

113. Miller, L. C. Estimation of the ED50 and its error by means of logarithmic-probit graph paper / L. C. Miller, M. L. Tainter. // Proceedings of the society for Experimental Biology and Medicine. -1944. - Vol. 57. - №. 2. - P. 261-264.

114. Mishra, S. Hybrid molecules: The privileged scaffolds for various pharmaceuticals / S. Mishra, P. Singh // European journal of medicinal chemistry. - 2016. - Vol. 124. - P. 500-536.

115. Morens, D. M. Emerging infectious diseases in 2012: 20 years after the institute of medicine report / D. M. Morens, A. S. Fauci // MBio. - 2012. - Vol. 3. - №. 6. - P. e00494-12.

116. Muller, J. E. Nifedipine therapy for patients with threatened and acute myocardial infarction: a randomized, double-blind, placebo-controlled comparison / J. E. Muller, J.Morrison, P. Stone. et al. // Circulation. - 1984. - Vol. 69. - №. 4. - P. 740-747.

117. Murray, R. D. The Natural Coumarins: Occurrence, Chemistry and Biochemistry / R. D. Murray, H. J. Mendez, S. A. Brown. - Chichester: John Wiley and Sons 1982. - 702 c.

118. Naik, R. J. Click Chemistry Approach for Bis-Chromenyl Triazole Hybrids and Their Antitubercular Activity / R. J. Naik et al. // Chemical biology & drug design. - 2012. - Vol. 80. - №. 4. - P. 516-523.

119. Neyts, J. Structure- activity relationship of new anti-Hepatitis C virus agents: Heterobicycle-coumarin conjugates / J. Neyts, E. De. Clercq, R. Singha, et. al. // Journal of medicinal chemistry. -2009. - Vol. 52. - №. 5. - P. 1486-1490.

120. Ng, H. J. New anticoagulants and the management of their bleeding complications / H. J. Ng, M. Crowther // Transfusion alternatives in transfusion medicine. - 2006. - Vol. 8. - №. s1. - P. 12-19.

121. Nutescu, E. A. Pharmacology of anticoagulants used in the treatment of venous thromboembolism / E. A. Nutescu, A. Burnett, J. Fanikos, S. Spinler, A. Wittkowsky // J. Thromb Thrombolysis. - 2016. - Vol. 41. - № 1. - P. 15-31.

122. Patel, R. V. Synthesis of coumarin-based 1,3,4- oxadiazol-2ylthio-N-phenyl/benzothiazolyl acetamides as antimicrobial and antituberculosis agents / R. V. Patel, P. Kumari, D. P. Rajani, K. H. Chikhalia. // Medicinal Chemistry Research. - 2013. - Vol. 22. - №. 1. - P. 195-210.

123. Patil, A. D. The inophyllums, novel inhibitors of HIV-1 reverse transcriptase isolated from the Malaysian tree, Calophyllum inophyllum Linn / A. D. Patil, A. J. Freyer, D. S. Eggleston, et.al. // Journal of Medicinal Chemistry. - 1993. - Vol. 36. - №. 26. - P. 4131-4138.

124. Paul, K. Synthesis of new conjugated coumarin-benzimidazole hybrids and their anticancer activity / K. Paul, S. Bindal, V. Luxami // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2013. - Vol. 23.

- №. 12. - P. 3667-3672.

125. Penta, S. Advances in Structure and Activity Relationship of Coumarin Derivatives / S. Penta.

- Academic Press, 2015.

126. Preusch, P. C. A chemical model for the mechanism of vitamin K epoxide reductase / P. C. Preusch, J. W. Suttie // The Journal of Organic Chemistry. - 1983. - Vol. 48. - №. 19. - P. 3301-3305.

127. Ribeiro, C. V. Tendencias evolutivas de familias produtoras de cumarinas em angiospermae / C. V. Ribeiro, M. A. Kaplan // Quim Nova. - 2002. - Vol. 25. - P. 533-548.

128. Sandhu, S. Coumarin hybrids as novel therapeutic agents / S. Sandhu, Y.Bansal, O.Silakari, G. Bansal // Bioorganic & medicinal chemistry. - 2014. - Vol. 22. - №. 15. - P. 3806-3814.

129. Sashidhara, K. V. Synthesis and anti-inflammatory activity of novel biscoumarin-chalcone hybrids / K. V. Sashidhara et al. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2011. - Vol. 21. - №. 15. - P. 4480-4484.

130. Sashidhara, K. V. Discovery of coumarin-monastrol hybrid as potential antibreast tumor-specific agent / K. V. Sashidhara, S. R. Avula,, K. Sharma. // European journal of medicinal chemistry.

- 2013. - Vol. 60. - P. 120-127.

131. Sashidhara, K. V. Coumarin-trioxane hybrids: Synthesis and evaluation as a new class of antimalarial scaffolds / K. V. Sashidhara et al. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2012. -Vol. 22. - №. 12. - P. 3926-3930.

132. Sashidhara, K. V. Synthesis and in vitro evaluation of novel coumarin-chalcone hybrids as potential anticancer agents / K. V. Sashidhara, A. Kumar, M. Kumar et.al. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2010. - Vol. 20. - №. 24. - P. 7205-7211.

133. Sashidhara, K. V. Synthesis and antihyperlipidemic activity of novel coumarin bisindole derivatives / K. V. Sashidhara et. al. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2010. - Vol. 20. -№. 22. - P. 6504-6507.

134. Shi, Y. Synthesis and evaluation of a class of new coumarin triazole derivatives as potential antimicrobial agents / Y. Shi, C. H. Zhou // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2011. - Vol. 21.

- №. 3. - P. 956-960.

135. Shih, S. R. BPR2-D2 targeting viral ribonucleoprotein complex-associated function inhibits oseltamivir-resistant influenza viruses / S. R. Shih, J. T. Horng, L. L. Poon, et. al. // Journal of antimicrobial chemotherapy. - 2009. - Vol. 65. - №. 1. - P. 63-71.

136. Shiraishi, Y. Coumarin-thiourea conjugate as a fluorescent probe for Hg (II) in aqeous media with a broad pH range 2-12 / Y. Shiraishi, S. Sumiya, T. A. Hirai // Org. Biomol. Chem. - 2010. - Vol. 8. - № 2. - P. 1310-1314.

137. Sweetman, S. C. Martindale: The Complete Drug Reference. 36th Edition / Ed. S.C Sweetman -London: Pharmaceutical Press, 2009. - 3694 с.

138. Takeuchi, Y. Anti-AIDS agents 28. Synthesis and anti-HIV activity of methoxy substituted 3',4'-di-O-(-)-camphanoyl-(+)-cis-khellactone (DCK) analogues / Y. Takeuchi, L. Xie, L. M. Cosentino, K. H. Lee. // Bioorg. Med. Chem. Lett.. - 1997. - Vol. 7. - P. 2573-2578.

139. Thaisrivongs, S. Structure-based design of HIV protease inhibitors: 4-hydroxycoumarins and 4-hydroxy-2-pyrones as non-peptidic inhibitors / S. Thaisrivongs et al. // Journal of medicinal chemistry.

- 1994. - Vol. 37. - №. 20. - P. 3200-3204.

140. Thaisrivongs, S. Structure-based design of novel HIV protease inhibitors: carboxamide-containing 4-hydroxycoumarins and 4-hydroxy-2-pyrones as potent nonpeptidic inhibitors / S.Thaisrivongs et al. // Journal of medicinal chemistry. - 1995. - Vol. 38. - №. 18. - P. 3624-3637.

141. Thakur, A. Coumarins as anticancer agents: A review on synthetic strategies, mechanism of action and SAR studies / A. Thakur, R. Singla, V. Jaitak // European journal of medicinal chemistry. -2015. - Vol. 101. - P. 476-495.

142. The European Pharmacopoeia, 9 th edition (Ph. Eur. 9 th) [Электронный ресурс]. -Strasbourg (France): EDQM Council of Europe, 2010. - Режим доступа: http://online6.edqm.eu/ep902/ (дата обращения: 18.05.2018).

143. The international pharmacopoeia. World Health Organization, 2006. - Vol. 1.

144. The Japanese Pharmacopoeia, Sixteenth Edition (JP 16) [Электронный ресурс]. - Tokyo (Japan): Pharmaceuticals and Medical Devices Agency, 2011. - Режим доступа: http://ipdb.nihs.go.jp/ip16e/ (дата обращения: 18.05.2018).

145. The United States Pharmacopeia 32. National Formulary 27 (USP 32-NF 27) [Электронный ресурс]. - Rockville (MD): United States Pharmacopeial Convention, 2008. - Режим доступа: http://www.uspbpep.com (дата обращения: 18.05.2018).

146. Torres, F. C. New insights into the chemistry and antioxidant activity of coumarins / F. C. Torres et al. // Current topics in medicinal chemistry. - 2014. - Vol. 14. - №. 22. - P. 2600-2623.

147. Valente, E. J. Structure of warfarin in solution / E. J. Valente, E. C. Lingafelter, W. R. Porter, W. F. Trager // Journal of medicinal chemistry. - 1977. - Vol. 20. - №. 11. - P. 1489-1493.

148. Venugopala, K. N. Review on Natural Coumarin Lead Compounds for Their Pharmacological Activity / K. N. Venugopala, V. Rashmi, B. Odhav // Biomed Research International. - 2013. - P. 563-568.

149. Vogel, A. Darstellung von Benzoesaure aus der Tonka-Boline und aus den MeliIoten-oder Steinklee-Blumen / A. Vogel // A.. Ann. Phys. - 1820. - Vol. 64. - P. 161-166.

150. Vukovic, N. Synthesis and Antimicrobial Evaluation of Some Novel 2-Aminothiazole Derivatives of 4-Hydroxy-chromene-2-one / N. Vukovic et al. // Archiv der Pharmazie. - 2008. - Vol. 341. - №. 8. - P. 491-496.

151. Wang, S. Discovery of novel, non-peptide HIV-1 protease inhibitors by pharmacophore searching / S. Wang, G. W. A. Milne, et. al. // Journal of medicinal chemistry. - 1996. - Vol. 39. - №. 10. - P. 2047-2054.

152. Whitlon, D. S. Mechanism of coumarin action: significance of vitamin K epoxide reductase inhibition / D. S. Whitlon, J. A. Sadowski, J. W. Suttie // Biochemistry. - 1978. - Vol. 17. - №. 8. - P. 1371-1377.

153. Willette, R. E. Coumarins I. Isolation, purification, and structure determination of pteryxin and suksdorfin / R. E. Willette, T. O. Soine // Journal of pharmaceutical Sciences. - 1962. - Vol. 51. -№. 2. - P. 149-156.

154. World Health Organization Media Centre [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.who.int/ru/home (дата обращения: 20.05.2018).

155. Xie, L. Anti-AIDS agents. Part 47:| synthesis and anti-HIV activity of 3-substituted 3', 4'-Di-O-(S)-camphanoyl-(3' R, 4' R)-(+)-cis-khellactone derivatives / L. Xie, G. Allaway, C. Wild, N. Kilgore, K. H. Lee. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2001. - Vol. 11. - №. 17. - P. 22912293.

156. Xie, L. Anti-AIDS Agents. 52. Synthesis and Anti-HIV Activity of Hydroxymethyl (3 'R, 4 'R)-3 ', 4 '-Di-O-(S)-camphanoyl-(+)-cis-khellactone Derivatives / L. Xie, D. Yu, C. Wild, et.al. // Journal of medicinal chemistry. - 2004. - Vol. 47. - №. 3. - P. 756-760.

157. Xie, L. Anti-AIDS Agents. 37. Synthesis and Structure- Activity Relationships of (3 'R, 4 'R)-(+)-cis-Khellactone Derivatives as Novel Potent Anti-HIV Agents / L. Xie, Y. Takeuchi, L. M. Cosentino, K. H. Lee. // Journal of Medicinal Chemistry. - 1999. - Vol. 42. - №. 14. - P. 2662-2672.

158. Xie, S. S. Design, synthesis and evaluation of novel tacrine-coumarin hybrids as multifunctional cholinesterase inhibitors against Alzheimer's disease / S. S. Xie, X. B. Wang, J. Y. Li, L. Yang, L. Y. Kong. // European journal of medicinal chemistry. - 2013. - Vol. 64. - P. 540-553.

159. Xue, H. Highly suppressing wild-type HIV-1 and Y181C mutant HIV-1 strains by 10-chloromethyl-11-demethyl-12-oxo-calanolide A with druggable profile / H. Xue, X. Lu, P. Zheng, et.al. // Journal of medicinal chemistry. - 2010. - Vol. 53. - №. 3. - P. 1397-1401.

160. Yang, Z. Y. Anti-AIDS agents 31.1 synthesis and anti-HIV activity of 4-substituted 3', 4'-di-O-(-)-camphanoyl-(+)-cis-khellactone (DCK) thiolactone analogs / Z.Y. Yang, Y. Xia, P. Xia, L. M. Cosentino, K. H. Lee. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 1998. - Vol. 8. - №. 12. - P. 14831486.

161. Yeh, J. Y. Anti-influenza drug discovery: structure- activity relationship and mechanistic insight into novel angelicin derivatives / J. Y. Yeh, M. S. Coumar, J. T. Horng, H. Y. // Journal of medicinal chemistry. - 2010. - Vol. 53. - №. 4. - P. 1519-1533.

162. Young, R. J. Structure and property based design of factor Xa inhibitors: Biaryl pyrrolidin-2-ones incorporating basic heterocyclic motifs / R. J. Young, A. D.Borthwick, D.Brown. // Bioorganic & medicinal chemistry letters. - 2008. - Vol. 18. - №. 1. - P. 28-33.

163. Zavrsnik, D. Benzylidene-bis-(4-hydroxycoumarin) and benzopyrano-coumarin derivatives: synthesis, 1H/13C-NMR conformational and X-ray crystal structure studies and in vitro antiviral activity evaluations / D. Zavrsnik, S. Muratovic, D. Makuc. // Molecules. - 2011. - Vol. 16. - №. 7. - P. 60236040.

164. Zghab, I. Regiospecific synthesis, antibacterial and anticoagulant activities of novel isoxazoline chromene derivatives / I. Zghab, B. Trimeche, M. B.Mansour, et.al // Arabian Journal of Chemistry. - 2017. - Vol. 10. - P. S2651-S2658.

165. Zhang, Z. R. Osthole: A review on its bioactivities, pharmacological properties, and potential as alternative medicine / Z. R. Zhang, W. N. Leung, H. Y. Cheung, C. W. Cha // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. - 2015. - Vol. 2015.

166. Zhong, M. G. Natural products as a source of anti-herpes simplex virus agents / M. G. Zhong, Y. F. Xiang, X. X. Qiu, Z. Liu, K. Kitazato, Y. F. Wang. // RSC Advances. - 2013. - Vol. 3. - №. 2. -P. 313-328.

167. Zhou, Z. W. Progress in study of chemical constituents and anti-tumor activities of Cnidium monnieri / Z. W. Zhou, P. X. Liu // China journal of Chinese materia medica. - 2005. - Vol. 30. - №. 17. - P. 1309-1313.

ПРИЛОЖЕНИЯ А

АКТ О В НЕД!_______

РЕЗУЛЬТАТОВ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ РАБОТЫ

Наименование предложений для внедрения: результаты разработки методик синтеза и контроля качества для стандартизации новых гибридных соединений производных 2Н-1-бензопиран-2-она, полученные при выполнении диссертационной работы «Синтез, физико-химические свойства и фармакологическая активность ковалентно комбинированных производных 2Н-1-бензоииран-2-она».

Результаты представлены в следующих публикациях и нормативных документах:

• Проекты ФСП «Остовар, субстанция», «Амлокум, субстанция», «4-метил-анкардин, субстанция» и «Иммунакор. субстанция».

• Abyshev, A.Z. Synthesis and anticoagulant activity of some derivatives of warfarin / A.Z. Abyshev, E.M. Agayev, I.K. Zhurkovich, D.Yu. Ivkin, D.S. Lissitzky, K.B. Nguyen // Azerbaijan Pharmaceutical and Pharmacotherapy Journal. - 2017. -Vol. 17. -№. 1. - P. 11 -14.

• Абышев, А.З. Синтез и антиаритмическая активность новых гибридных молекул 1,4-дигидропиридина-кумарина / Абышев А.З., Нгуен К. Б., Ивкин Д. Ю., Нгуен Г. X. И. // Бутлеровские сообщения. - 2018. - Т. 53. -№ 1. - С. 121-129.

• Абышев, А. 3. Синтез, физико-химический анализ и фармакологическая активность некоторых производных варфарина / А. 3. Абышев, И. К. Журкович, Д. Ю. Ивкин, К.Б. Нгуен // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2017. - Т. 19. - № 2. - С. 192-

• Абышев, А.З. Антикоагулянтное средство непрямого действия на основе новой гибридной молекулы варфарина с остолевой кислотой / А.З. Абышев, Н.К. Банг, P.A. Абышев, Д.Ю. Ивкин, Н.Т.Х. Иен, A.C. Ивкина // Заявка № 2018111165/15 (017258), дата выдачи заявки 28.03.2018, уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 17.04.2018.

• Абышев, А.З. Антиаритмическое средство на основе гибридной молекулы амлодипина с (7-метоксикумарин-4-ил) уксусной кислотой / А.З. Абышев, Н.К. Банг, Р. А. Абышев, Д.Ю. Ивкин, Н..Т. X. Иен, A.C. Ивкина // Заявка № 2018111168/15(017261), дата выдачи заявки 28.03.2018, уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 20.04.2018.

Автор разработки: Нгуен Конг Баиг, аспирант кафедры фармацевтической химии ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет».

Где и куда внедрено: использовано в научно-исследовательской и образовательной деятельности кафедры фармацевтической химии ФГБОУ ВО «СПХФУ» Минздрава России в рамках дисциплин «Фармацевтическая химия».

Результаты внедрения: результаты проведенного исследования способствуют освоению методик синтеза и контроля качества для стандартизации новых гибридных молекул на основе производных 2Н-1-бензопиран-2-она.

198.

Зав.кафедрой фармацевтической химии ФГБОУ ВО «СПХФУ», к.хим.н., доцент

О.Ю. Стрелова

«УТВЕРЖДАЮ»

Проректор по научной работе ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России

аофессор icÏQK Е.В.

АКТ О ВНЕДРЕНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКО

Наименование предложений для внедрения: результаты разработки методик контроля качества для стандартизации субстанций производных 2Н-1-бензопиран-2-она, полученные при выполнении диссертационной работы «Синтез, физико-химические свойства и фармакологическая активность ковалентно комбинированных производных 2Н-1-бензопиран-2-она». Результаты представлены в следующих публикациях и нормативных документах:

• Проекты ФСП «Остовар, субстанция», «Амлокум, субстанция».

• Абышев, А.З. Антикоагулянтное средство непрямого действия на основе новой гибридной молекулы варфарина с остолевой кислотой / А.З. Абышев, Н.К. Банг, Р.А. Абышев, Д.Ю. Ивкин, Н.Т.Х. Иен, А.С. Ивкина // Заявка № 201811 1165/15 (017258), дата выдачи заявки 28.03.2018, уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 17.04.2018.

• Абышев, А.З. Антиаритмическое средство на основе гибридной молекулы амлодипинас (7-метоксикумарин-4-ил) уксусной кислотой / А.З. Абышев, Н.К. Банг, Р. А. Абышев, Д.Ю. Ивкин, Н..Т. X. Иен, А.С. Ивкина // Заявка № 2018111168/15(017261), дата выдачи заявки 28.03.2018, уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 20.04.2018.

• Abyshev, A.Z. Synthesis and anticoagulant activity of some derivatives of warfarin / A.Z. Abyshev, E.M. Agayev, I.K. Zhurkovich, D.Yu. Ivkin, D.S. Lissitzky, K.B. Nguyen // Azerbaijan Pharmaceutical and Pharmacotherapy Journal. -2017. -Vol. 17. -№. 1. - P. 11-14.

• Абышев, А.З. Синтез, физико-химический анализ и фармакологическая активность некоторых производных варфарина / А.З. Абышев, И.К. Журкович, Д.Ю. Ивкин, К.Б. Нгуен // Разработка и регистрация лекарственных средств. -2017. - Т. 19. -№ 2. - С. 112118.

• Абышев, А.З. Синтез и антиаритмическая активность новых гибридных молекул 1,4-дигидропиридина-кумарина / Абышев А.З., Нгуен К. Б., Ивкин Д. Ю., Нгуен T. X. И. // Бутлеровские сообщения. - 2018. - Т. 53. -№ 1. - С. 121-129.

Автор разработки: Нгуен Конг Банг, аспирант кафедры фармацевтической химии ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет».

Где и куда внедрено: использовано в деятельности научно-исследовательского центра «Центр коллективного пользования «Аналитический центр» ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России в целях стандартизации субстанций производных 2Н-1-бензопиран-2-она в т.ч. остовара и амлокума.

Результаты внедрения: результаты способствуют повышению объективности стандартизации новых фармацевтических субстанций остовара и амлокума. Разработанные методики контроля качества апробированы в работе ЦКП «Аналитический центр» по стандартизации АФС.

Начальник ЦКП «Аналитический центр» д.фарм.н., доцент кафедры фармацевтической химии

И.И. Тернинко

«УТВЕРЖДАЮ» Заместитель директора по научной работе ФГБУ «НИИ гриппа им. A.A. Смородинцева»

России

ва Л.М.

2018 г.

АКТ О ВНЕДРЕНИ1 РЕЗУЛЬТАТОВ НАУЧНО-ИССЛЕДОВА

Наименование предложений для внедрения: материалы диссертационной работы «Синтез, физико-химические свойства и фармакологическая активность ковалентно комбинированных производных 2Н-1-бензопиран-2-она».

Автор разработки: Нгуен Конг Банг, аспирант кафедры фармацевтической химии ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет».

Где и куда внедрено: использовано в научно-исследовательской лаборатории химиотерапии вирусных инфекций ФГБУ «НИИ гриппа им. A.A. Смородинцева» Минздрава России в рамках изучении противовирусной активности гибридных молекул нового класса тритерпеноида-кумарина.

Результаты внедрения: использование полученных результатов в научно-исследовательском процессе с целью углубленного исследования в качестве противовирусных средств гибридных молекул тритерпеноида-кумарина. в т.ч. 3,28-ди-О-(7-метилкумарин-4-ил)ацетата бетуленола и 28-0-(7-метоксикумарин-8-ил)ацетата бетуленола.

Зав. лабораторией химиотерапии вирусных инфекций

ФГБУ «НИИ гриппа им. A.A. Смородинцева» Минздрава России

канд. биол. наук

Форма № 94 ИЗ, ПМ, ПО-2016

Федеральная служба по интеллектуальной собственности

Федеральное государственное бюджетное учреждение

* «Федеральный институт промышленной собственности»

* (ФИПС)

Берсжкопскаяиаб.,30,корп. 1, Москва, Г-59, ГСП-5,125993 Телефон [phone] Факс [phone]

УВЕДОМЛЕНИЕ О ПРИЕМЕ И РЕГИСТРАЦИИ ЗАЯВКИ

28.03.2018 017258 2018111165

Дата поступления Входящий № Регистрационный №

I Зйяплсиис о пыдаче патент* Российской Федерации иа изобретение

поЛЙШ (21) РЕГИСТРАЦИОННЫЙ Л ВХОДЯЩИЙ л

• ПС 011*1 (8$) ДАТА ПЕРЕИОДА ШКА),|»ГОЯ1»ОЯ 1м»«ч на иамио«алы1ук14*<У

0<И) (¡тлл*ч>п»о**чЛ *ли*р жмаЬ**вроЛ*оЛ галчт V Опяы шж^шроЛняЛ нодочи. >оМ1»о«1#и11»1« жцундачим «п)сшгямач) □(17) (натр и Лняа ыгжОучироЛнМ лрбитцяи □(М) /начгр ератЛспо* ммы и дет ч ноЛт) □ (»7) АДРЕС ДЛЯ ПЕРЕПИСКИ /почякмкл» фатп* и ьчиуммы Ч'У шшмжмонм адргсата)' 198328, Сапкт-Нстсрбург, ул. Маршала Захарова, дом 14, корпус 2, кв. 338 Абышсв Азад Зняд огл ы Телефон: [phone] Фмс: Адрес электронной почти: а/вЬухЬвУ^швН.ги АДРЕС ДЛЯ СЕКРЕТНОЙ ПЕРЕПИСКИ ^»•пммалим Я«»«« -С итоЛ/итлю) .. отл п 81 С , 1. V ш 240 60 -л

ЗАЯВЛЕНИЕ о выдаче патента Российской Федерации •!■ иювретсиие В Федеральную службу по интеллектуальной еоЛетаениосгн • Бережковская наб., л. 30, корп. 1, г. Москве, Г-59, ГСП-Э, 125993, Российская Федерация ОТ й п 30 МАР 2018

(54) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ' АНТИКОАГУЛЯНТНОК СРЕДСТВО НЕПРЯМОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ НОВОЙ ГИБРИДНОЙ МОЛЕКУЛЫ ВАРФАРИИА С ОСГОЛЕВОЙ КИСЛОТОЙ «

(71) ЗАЯВИТЕЛЬ (фаччтц шд. от*т*>(носмЬи* -аатпш) фюич»е*оеч ИДЕНТИФИКАТОРЫ ЗАЯВИТЕЛЯ 240 60 16 с/

ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «СИР». Парадная ул., д. 3, корп. 2, пои. 230Н, г. Санкт-Петербург, 191014, Россия ОГРН 11678471В5437 КПП 7*4201001

□»обретение создано и спет средстя федерального бюджета Заявитель является: □ государственным )аказчнком □ муниципальным мкатчиком ИСГЮЯККТеЛЬ работ ИНН 7840049950 СНИЛС ДОКУМЕНТ н»* «"«>

□ исполнителен работ по: □ государственному контракту □ иуишшп&льному контракту МКЮЧИК работ Ьуихипь -аюмхоюнм) КОД СТРАНЫ ГптчшустФММы) пи

Контракт от Л

(74) ПРЕДСТАВИТЕЛЬ^ ЗАЯВИТЕЛЯ оттстго (яоаидчн при наичии) мил т я/нйеяапммт Ли мдгчн» по ям/«»с яетгх* «оыкикя фа-чихш. ими М МШ ' ФвЛфЯЯИюй шигммм а ш уиоаа) □ патентный поперешгий □ представитель по доверенности □ представитель по закону

Ы/йо

Общее количество документов в листах 49 Лицо, зарегистрировавшее документы

Из них - количество листов комплекта изображений изделия (для промышленного образца) 0 Сергеева Н.Н.

Количество платежных документов 1

Сведения о состоянии делопроизводства по заявка,» размещаются на сайта Ф1ШС по адресу «www.fips.ru» в разделе «Информационныересурсы / Открытые реестры»

/

Форма № 94 ИЗ, ПМ, П0-2016

Федеральная служба по интеллектуальной собственности

Федеральное государственное бюджетное учреждение

« «Федеральный институт промышленной собственности» * (ФИПС)

Бережковская наб.,30, корп. 1,Москва,Г-59,ГСП-5,125993 Телефон [phone] Факс [phone]

УВЕДОМЛЕНИЕ О ПРИЕМЕ И РЕГИСТРАЦИИ ЗАЯВКИ

28.03.2018 017261 2018111168

Дата поступления Входящий № Регистрационный №

I Заявление о выдаче патента Российской Федерации иа изобретении

пкШ&и (л«Г» f*mtтри*««) TffMiWW"" (21) РЕГИСТРАЦИОННЫЙ*» входящий м •

♦мс Itun (IS) ЛАГА ПЕРЕВОДА MMu„,«i«woa им» НВЦПЩШН пункту

а <и) АДРЕС ЛИН ПЕРЕПИСКИ /Ълитмщ) адргс, фамипм и илцшш им м»1имм>мм«г оЛрката) 198328, Санкт-Петербург, ул. Маршала Захаром, лом 14, корпус 2, кв. 338 Абишев Азад Зняд оглы ' 1 QT Я 17 30 MAP ¿018

дата шжйуиср&ИчоН иск яоуияцгим ttuucmuM) 0(87) (1mittp ш Лота oad/> *4JKi)>mfod*oi iihhJ tavu рИММНИМ щдпйщч) я/Лгшия/м

(«oi»4» от»*»*»«* мш « Дям от лоОичц) □ (97) Телефон: [phone] . Факс: £ Адрсс злектрокной почты: каЬузЬс\'@Л1а11.ги АД Г ЕС ДЛЯ СЕКРЕТНОЙ ПЕРЕПИСКИ Г, 140 60 is

ЗАЯВЛЕН IIE и выдаче пагенга Российской Федерации иа нмбрегеяке В Федеральную службу по интеллектуальной еоСсгаенности Бережковская наЯ., д. 30, корп. 1, г. Москва, Г-59, ГСП-3, 11*993, Российская Федерация СЕ

- - — - - (54) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ АНТИАРИТМИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ИА ОСНОВЕ ГИБРИДНОЙ МОЛЕКУЛЫ АМЛОДИПИНА С (7-МЕТОКСИКУМАРИН»4-ИЛ)УКСУСНОЙ КИСЛОТОЙ

(71) ЗАЯВИТЕЛЬ <*»«•■«. ««, „^м, (япсм jvyfl tin ившиимтиг юрМичюлюл»* ¡соиленоуч* rntwy AI«>M#H(")J темп ИДЕ НТИФИ КАТОРЫ ЗАЯВИТЕЛЯ

ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «СИР». Парадная ул., д. 3, корп. 2, пом. 23ОН, г. Санкт-Петербург, 191014, Россия ОГРИ 11678471М6Э7 КПП 784201001

□изобретение создано а спет средств федерального бюджета Заявитель ааласгса : □ государственный нказчмкои □ муниципальным заказчиком ИНН 7840049950 СНИЛС

ДОКУМЕНТ (сер*, мшвр)

□ исполнителей работ по: □ государственному котраету □ муниципальному коотракту заказчик работ 6™=™ КОД СТРАНЫ (гаи он RU

Контракт от №

(74) ПРЕДСТАВНТЕЛЬ(И) ЗАЯВИТЕЛЯ ¡штеяю (лоелгдме при шилпм) длл аатзчгя 3 патпный поверенный 3 представитель по доверенности □ представитель по закону

с.1ужЬ по жпгиижуааымЛ red кяишчктв мы тляпщ мммш в July

¿»It

Общее количество документов в листах 39 Лицо, зарегистрировавшее документы

Из них - количество листов комплекта изображений изделия (для промышленного образца) 0 Сергеева Н.Н.

Количество платежных документов 1

Сведения о состоянии делопроизводства по заявкам размещаются насайте ФИПС по адресу «www.flps.ru» в разделе «Информационныересурсы / Открытые реестры»

ПРИЛОЖЕНИЯ Б

Приложение Б. 1 Проект фармакопейной статьи предприятия АВ-12 (Амлокума)

Амлокум (субстанция)

СПЕЦИФИКАЦИЯ

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОД НОРМА

Описание Визуальный Кристаллический порошок белого цвета, без запаха

Растворимость ГФ XIII (ОФС.1.2.1.0005.15) Легко растворим в хлороформе, мало растворим в этаноле и ацетонитриле, практически нерастворим в воде

Подлинность УФ-, ИК-, ЯМР-спектроскопии. Лактонная проба Соответствует ФСП Желтое окрашивание

Температура плавления ГФ XIII, (ОФС. 1.2.1.0011.15) От 173 до 176 °С

Родственные примеси ВЭЖХ Примесь 7-метокси-4-метилкумарина не более 0,25 %; единичная неидентифи-цированная примесь не более 0,1 %; суммарное содержание примесей не более 0,5 %

Потеря в массе при высушивании ГФ XIII (ОФС.1.2.1.0010.15) Не более 0,5 %.

Сульфатная зола ГФ XIII, (ОФС. 1.2.2.2.0014.15) Не более 0,1%

Тяжелые металлы ГФ XIII (ОФС. 1.2.2.2.0012.15) Не более 0,001%

Остаточные органические растворители ГФ XIII, (ОФС. 1.1.0008.15) Метиленхлорид - не более 0,06 % (600 ррш)

Микробиологическая чистота ГФ XIII (ОФС.1.2.4.0002.15) Категория 2.2

Количественное определение ВЭЖХ От 99,0 до 101,0 % Сз2НззС1Ы:09 в пересчете на сухое вещество

Хранение В хорошо укупоренной упаковке, в защищенном от света месте при температуре не выше 25°С.

Срок ГОДНОСТИ В соответствии с ФСП 3 года

Описание. Кристаллический порошок белого цвета, без запаха.

Растворимость. Легко растворим в хлороформе, мало растворим в этаноле и ацетонитриле, практически нерастворим в воде.

Подлинность. 1. ИК- спектр. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом (1-3 мг субстанции смешивают в 200-300 мг калия бромида), в области от 400 до 4000 см"1, поположению полос поглощения должен соответствовать рисунку спектра стандартного образца амлокума.

2. УФ-спектр. Около 0,025 субстанции (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и растворяют в этаноле при нагревании, охлаждают и доводят объем раствора этанола до метки. 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора этанола до метки и перемешивают. Снимают спектр поглощения полученного раствора в кварцевой кювете с толщиной слоя 10 мм на спектрофотометре в интервале длин волн 220 - 380 нм, используя в качестве раствора сравнения этанола.

Ультрафиолетовый спектр 0,002 % спиртового раствора субстанции в области длин волн от 220 до 380 нм должен иметь минимум при 270 ± 1 нм и максимум при 325 ± 1 нм.

3. ЯМР ('Н. 13С) -спектры. ЯМР-спектры субстанции в области от 0 до 9 м.д. и от 0 до 200 м.д., соответственно, должны соответствовать рисунки спектров стандартного образца амлокума.

4. Лактонная проба. 0,02 г субстанции растворяют в 10 мл этанола при нагревании на водяной бане. В две пробирки помещают по 2 мл полученного раствора. В одну пробирку прибавляют 1 мл 10% раствора гидроксида натрия (должен появиться желтое окрашивание), нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 мин и охлаждают. В обе пробирки прибавляют по 5 мл воды. В пробирке, куда щелочь не добавляли, выпадает белый осадок, а раствор со щелочью должен оставаться прозрачными. При прибавлении в него 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной образуется белый осадок.

Температура плав.тения. От 173 до 176 °С (ГФ XIII, ОФС. 1.2.1.0011.15 «Температура плавления»).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Испытуемый раствор. Около 0,025 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ацетонитриле при нагревании, охлаждают и доводят объем раствора до метки и перемешивают.

Раствор сравнения. 1,0 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают. 1,25 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Раствор для проверки пригодности системы. Около 0,0025 г (точная навеска) стандартного образца 7-метокси-4-метилкумарина и 5 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ацетонитриле, доводят объем раствора до метки и перемешивают.

Хроматографа ческие условия

Колонка Подвижная фаза

- 250 х 4,6 мм с октадецилсилил силикагелем (Nucleosil С18), 5мкм;

- ацетонитрил, содержающий 10 % воды и 0,1% муравьиной кислоты

- вода, содержающая 10% ацетонитрила и 0,1% муравьиной кислоты (60:40 по объему);

Скорость потока Детектор Объем пробы Время анализа

- 1 мл / мин;

- спекгрофотометрический, 320 нм;

- 5 мкл;

- 15 мин.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

- коэффициент удерживания пика субстанции не менее 2,0;

- эффективность хроматографической колонки (N), определенная по пику субстанции, не менее 5000 теоретических тарелок;

- фактор асимметрии пика субстанции - не более 1,5.

- разрешение между пиком примеси и пиком субстанции не менее 2,0.

Хроматографируют раствор сравнения и испытуемый раствор.

Площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,25%), площадь единичной неидентифицированной примеси не должна быть более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10%), сумма площадей всех пиков примесей должна быть не более удвоенной площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,2 площади пика на хроматограмме раствора сравнения (0,1 %).

Потеря в массе ири высушивании. Около 0,5 г (точная навеска) субстанции сушат в вакууме при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5 % ГФ XIII (ОФС.1.2.1.0010.15).

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Тяжёлые металлы» в зольном остатке, полученном после сжигания 0,5 г субстанции (ОФС «Сульфатная зола»).

Остаточные органические растворители. Определение проводят методом газовой хроматографии петум анализа равновесной паровой фазы.

Испытуемый раствор. Около 0,05 г субстанции (точная навеска) помещают во флакон для парофазного анализа, прибавляют 5,0 мл диметилформамида, закрывают пробкой и герметично укупоривают.

Стандартный раствор. Около 0,6 г (точная навеска) стандартного образца метиленхлорида помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объём раствора диметилформамида до метки и перемешивают. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объём раствора диметилформамида до метки и перемешивают.

5,0 мл стандартного раствора помещают во флакон для парофазного анализа, закрывают пробкой и герметично укупоривают.

Готовят не менее трех проб испытуемого образца и пяти проб стандартного раствора.

Растворы используют свежеприготовленными.

Хрома тографические условия

Аппаратура

Колонка

Газовый хроматограф Agilent 6850 Series GC System с пламенно-ионизационным детектором (Agilent Technologies Inc., США), автосамплером Agilent 7683 Series injector (США).

Капиллярная колонка HP-FFAP Polyethylene Glycole TPA, длина 50 x 0,320 x 0,5 мкм.

колонки

Температура инжектора Температура детектора Детектор

Температура термостата

40 °С в течение 3 минут, увеличение температуры со скоростью 10 °С/мин до 100 °С, затем подъем температуры до 140 °С со скоростью 20 °С/мин 120 °С 220 °С

Газ носитель

ионизационно-пламенный, расход водорода-40 мл/мин,

расход воздуха - 400 мл/мин

азот, 2 мл/мин, деление потока 10 мл/мин

Время термостатирования Время хроматографирования Вводимый объем

30 мин 15 -20 мин

1 мкл газовой фазы

Хроматографируюг паровую фазу стандартного раствора, получая не менее 5 хромато грамм.

Порядок выхода компонентов: пик метилена хлорида, пик диметилформамида.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хромато графи ческой системы».

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия: эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику метиленхлорида на хроматограмме стандартного раствора, должна быть не менее 10000 теоретических тарелок;

фактор асимметрии пика метиленхлорида на хроматограмме стандартного раствора не более 2,0;

разрешение между пиками метиленхлорида и пиком растворителя (диметилформамида) на хроматограмме стандартного раствора не менее 1,5;

относительные стандартные отклонения времён удерживания и площадей, рассчитанные по пику метиленхлорида на хроматограмме стандартного раствора, не более 5 %.

Хроматографируюг паровую фазу испытуемых растворов, получая не менее 3 хроматограмм.

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с коэффициентом удерживания менее 0,5, пики, относящиеся к растворителю, и системные пики.

Содержание метиленхлорида в субстанции X вычисляют по формуле:

S х аох 5 х Р х 100 Sx ао х Р

где 5 - площадь пика метиленхлорида на хроматограмме испытуемого раствора; 5о - площадь пика метиленхлорида на хроматограммах стандартного раствора;

ао - навеска стандартного образца метиленхлорида, в граммах;

а - навеска субстанции, в граммах;

Р - содержание основного вещества в стандартном образце, в процентах.

Содержание метиленхлорида в субстанции должно быть не более 0,06 % (600 ррт).

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях определения родственных примесей.

Испытуемый раствор. Около 0,025 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ацетонитриле при нагревании, охлаждают и доводят объем раствора до метки и перемешивают.

1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Стандартный раствор. Около 0,025 г (точная навеска) стандартного образца амлокума помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ацетонитриле при нагревании, охлаждают и доводят объем раствора до метки и перемешивают. 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Раствор используют свежеприготовленным.

Хроматографнруют раствор стандартного образца амлокума для проверки пригодности системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

- относительное стандартное отклонение площади пика амлокума должно быть не более 2,0

%;

- коэффициент удерживания пика амлокума должен быть не более 2,0;

- фактор асимметрии пика амлокума должен быть не более 1,5;

- эффективность хроматографической колонки, определенная по пику амлокума должен быть неменее 5000 теоретических тарелок.

Хроматографнруют испытуемый раствор и стандартный раствор и определяют площади пиков исследуемого образца.

Содержание амлокума Сз2НззС1Ы209 в субстанции в пересчете на сухое вещетсво в процентах (X) вычисляют по формуле:

5 х а0 х Р х 100 у - "_

Бо х а * (100 - '

где Б — площадь пика амлокума на хроматограмме испытуемого раствора; Бо - площадь пика амлокума на хроматограмме стандартного раствора; а - навеска субстанции, г; ао - навеска стандартного образца амлокума, г;

Р - содержание Сз;НнС1Ы:Оч в стандартном образце амлокума, %,

XV - потеря в массе при высушивании субстанции, %

Хранение. В хорошо укупоренной упаковке, в защищенном от света месте при температуре не выше 25 °С.

Срок годности. 3 года.

Приложение Б. 2 Проект фармакопейной статьи предприятия АВ-34 (Остовара)

Остовар (субстанция)

СПЕЦИФИКАЦИЯ

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОД НОРМА

Описание Визуальный Кристаллический порошок белого цвета, без запаха

Растворимость ГФ XIII (ОФС.1.2.1.0005.15) Легко растворим в хлороформе, мало растворим в этаноле и ацетонитриле, практически нерастворим в воде

Подлинность УФ-, ИК-, ЯМР-спектроскопии. Лактонная проба Соответствует ФСП Желтое окрашивание

Температура плавления ГФ XIII, (ОФС.1.2.1.0011.15) От 189 до 192 °С

Родственные примеси ВЭЖХ Примесь остолевой кислоты не более 0,3 %; примесь варфарнна не более 0,25 %; единичная неиндентифицированная примесь не более 0,1 %; суммарное содержание примесей не более 0,8 %

Потеря в массе при высушивании ГФ XIII (ОФС.1.2.1.0010.15) Не более 0,5 %.

Сульфатная зола ГФ XIII, (ОФС. 1.2.2.2.0014.15) Не более 0,1%

Тяжелые металлы ГФ XIII (ОФС. 1.2.2.2.0012.15) Не более 0,001%

Остаточные органические растворители ГФ XIII, (ОФС.1.1.0008.15) Метиленхлорид - не более 0,06 % (600 ррт) Метанол - не более 0,3 % (3000 ррт) Пиридин - не более 0,02 % (200 ррт)

Микробиологическая чистота ГФ XIII (ОФС. 1.2.4.0002.15) Категория 2.2

Количественное определение ВЭЖХ От 98,0 до 102,0 % Сз1НмОх в пересчете на сухое вещество

Хранение В хорошо укупоренной упаковке, в защищенном от света месте при температуре не выше 25°С.

Срок годности В соответствии с ФСП 3 года

Описание. Кристаллический порошок белого цвета, без запаха.

Растворимость. Легко растворим в хлороформе, мало растворим в этаноле и ацетонитриле, практически нерастворим в воде.

Подлинность. 1. ИК- спектр. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом (1-3 мг субстанции смешивают в 200-300 мг калия бромида), в области от 400 до 4000 см"1, поположению полос поглощения должен соответствовать рисунку спектра стандартного образца остовар (рисунок 1).

2. УФ-спектр. Около 0,025 субстанции (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и растворяют в этаноле при нагревании, охлаждают и доводят объем раствора этанола до метки. 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора этанола до метки и перемешивают. Снимают спектр поглощения полученного раствора в кварцевой кювете с толщиной слоя 10 мм на спектрофотометре в интервале длин волн 220 - 380 нм, используя в качестве раствора сравнения этанола.

Ультрафиолетовый спектр 0,002 % спиртового раствора субстанции в области длин волн от 220 до 380 нм должен иметь 2 минимума при 247 ± 1 нм, 296 ± 1 нм и 2 максимум при 285 ± 1 нм, 315 ± 1 нм.

3. ЯМР ('И. 13С)-спектры. ЯМР-спектры субстанции в области от 0 до 9 м.д. и от 0 до 208 м.д., соответственно, должны соответствовать рисунки спектров стандартного образца остовара.

4. Лактонная проба. 0,02 г субстанции растворяют в 10 мл этанола при нагревании на водяной бане. В две пробирки помещают по 2 мл полученного раствора. В одну пробирку прибавляют 1 мл 10% раствора гидроксида натрия (должен появиться желтое окрашивание), нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 мин и охлаждают. В обе пробирки прибавляют по 5 мл воды. В пробирке, куда щелочь не добавляли, выпадает белый осадок, а раствор со щелочью должен оставаться прозрачными. При прибавлении в него 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной образуется белый осадок.

Темпера тура илавлення. От 189 до 192 °С (ГФ XIII, ОФС. 1.2.1.0011.15 «Температура плавления»).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Испытуемый раствор. Около 0,025 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ацетонитриле при нагревании, охлаждают и доводят объем раствора до метки и перемешивают.

Раствор сравнения А. 0,005 г (точная навеска) стандартного образца остолевой кислоты (примеси А) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Раствор сравнения Б. 1,5 мл раствора сравннения А переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Раствор сравнения В. 0,005 г (точная навеска) стандартного образца варфарина (примеси В) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Раствор сравнения Д. 1,25 мл раствора сравннения В переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Раствор для проверки пригодности системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 мл испытуемого раствора, 2,5 мл раствора сравнения А и 2,5 мл раствора сравнения В, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы.

Порядок элюирования пиков: приместь А, примесь В, остовар.

Время удерживания остовара около 9,8 мин. Относительное время удерживания примеси А - около 0,47; примеси В - около 0,61 .

Разрешение (II) между пиком примеси А и примеси В должно быть не менее 2,0, между пиками примеси В и остовара - не менее 2,0.

Хроматографируют раствор сравнения Б, Д и испытуемый раствор.

Площадь пика примеси А на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,30 %), площадь пика примеси В на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения Д (не более 0,25 %), площадь единичной неидентифицированной примеси не должна быть более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10%), сумма площадей всех пиков примесей должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,8 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,2 площади пика остовара на хроматограмме раствора для проверки приголности хроматографической системы (0,1 %).