Применение лазерно-флюоресцентных методов в диагностике и лечении больных с абдоминальной хирургической инфекцией тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.17, кандидат наук Кузьмина, Александра Геннадиевна

• Кузьмина, Александра Геннадиевна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Кузьмина, Александра Геннадиевна

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Абдоминальная хирургическая инфекция. Определение и понятия

1.2. Микробиологическая структура абдоминальной хирургической инфекции

1.3. Принципы определения чувствительности микробов к антибактериальным препаратам

1.4. Методы определения чувствительности микробов к антимикробным препаратам

1.5. Неоднозначность современных подходов к назначению противомикробных препаратов

1.6. Метод лазерной флюоресцентной диагностики

1.7. Естественные флюорофоры - клетки живого организма

1.8. Опыт в изучении спектральных характеристик различных микроорганизмов

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика больных

2.2. Методы исследования

2.2.1.Методы микробиологических исследований

2.2.2.Метод флюоресцентного анализа плазмы крови на аппарате «Спектролюкс-МБ»

2.3. Методика проводимого исследования

2.4. Статистическая обработка клинического материала

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Анализ клинического течения, микробной контаминации, возможности прогнозирования течения абдоминальной инфекции у пациентов с острыми воспалительными заболеваниями органов брюшной полости

3.2. Сравнительная характеристика особенностей микробной контаминации брюшной полости при микробиологическом методе исследования и

лазерной флюоресценции

3.3. Антибактериальная терапия по данным лазерной флюоресценции. Антибиотикорезистентность микробной флоры у больных с перитонитом

3.4. Выявление туберкулеза у хирургических больных с абдоминальной хирургической инфекцией

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК АББЕРЕВИАТУР И СОКРАЩЕНИЙ

APACHE III - Acute Physiology and Chronic Health Evaluation III;

SIRS - systemic inflammatory response syndrome;

SOFA - Sepsis-related Organ Failure;

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения;

ДНК - двенадцатиперстная кишка;

ЛФ - лазерная флюоресценция;

ЛФД - лазерная флюоресцентная диагностика;

МИЛ - Мангеймский индекс перитонита;

МПК - минимальная подавляющая концентрация;

ОРИТ - отделение реанимации и интенсивной терапии;

СОЭ - скорость оседания эритроцитов;

ФА - флюоресцентный анализ;

ФБУНМНИИЭМ - Федеральное бюджетное учреждение науки Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии;

ЦИК - циркулирующий иммунный комплекс;

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Применение лазерно-флюоресцентных методов в диагностике и лечении больных с абдоминальной хирургической инфекцией»

Введение

Актуальность темы

Одной из наиболее сложных проблем в хирургии остаётся лечение абдоминальных гнойно-воспалительных заболеваний и их осложнений. В структуре хирургической заболеваемости перитонит и вызывающие его деструктивные поражения органов брюшной полости занимают одно из первых мест. Летальность при распространенных формах перитонита составляет 15-20%, за последние 20-30 лет заметного снижения летальности не отмечено [76, 78]. Высокая летальность при перитоните зависит от позднего обращения больных за медицинской помощью, увеличения числа больных пожилого и старческого возраста со сниженной иммунобиологической реактивностью, страдающих тяжелыми сопутствующими заболеваниями; увеличения числа онкологических заболеваний, осложняющихся перитонитом [38]. Более того, в последние годы приходится сталкиваться с запущенными формами этих заболеваний.

Локальное воспаление, сепсис, тяжелый сепсис и полиорганная недостаточность - это звенья одной цепи в реакции организма на воспаление вследствие микробной инфекции [72, 73, 75, 78].

Абдоминальную хирургическую инфекцию можно рассматривать как совокупность утвердившихся в клинической медицине нозологических форм, отражающих осложненное течение острых хирургических заболеваний и повреждений, но допустимо и иначе - с позиций единой клинической проблемы сепсиса. Как известно, брюшина непременно отвечает воспалением на любой патологический процесс, индуцированный инфекционно-воспалительной или травматической деструкцией органов живота и таза. При этом обширная площадь брюшинного покрова, достигающая двух квадратных метров, его сложное строение, реактивность, а также важность физиологических функций-экссудативной, резорбтивной и барьерной - не оставляют сомнений в опасности распространенного воспаления брюшины для жизнедеятельности организма [37].

Современные положения комплексного лечения абдоминального сепсиса основываются на принципах этиотропной, патогенетической направленности терапии и хирургии, цель которых ликвидация инфекции брюшной полости, устранение эндотоксикоза и полиорганной недостаточности.

Любое деструктивное поражение органов брюшной полости является по сути своей абдоминальным инфекционным заболеванием, часто приводящим к развитию абдоминального, порой инкурабильного сепсиса. В этом аспекте роль полноценной антибактериальной терапии после операции в комплексном лечении трудно переоценить. Ранняя адекватная антибиотикотерапия способна предотвратить генерализацию инфекции, развитие различных послеоперационных осложнений и фатальную полиорганную недостаточность [38]. Современная хирургическая концепция ведения больных с абдоминальным сепсисом требует не только адекватного хирургического пособия, но и проведения ранней рациональной антибиотикотерапии, ее мониторинга, определения степени эндотоксикоза, микробиологического мониторинга абдоминальной хирургической инфекции. Микробиологическая диагностика сепсиса является определяющей в выборе адекватных режимов антибактериальной терапии.

Результаты этиотропной терапии абдоминальной хирургической инфекции значительно лучше, чем эмпирической [75]. Одним из основополагающих моментов лечения больных с абдоминальным сепсисом является адекватная антибактериальная терапия в раннем послеоперационном периоде. Традиционные методы определения антибиотикочувствительности довольно длительны и, зачастую, позволяют оценить антибактериальную терапию лишь post factum. В послеоперационном периоде приходится прибегать к эмпирической антибактериальной терапии без микробиологического подтверждения микробной флоры. Проводимая антибактериальная терапия часто не является адекватной и в свою очередь может способствовать развитию послеоперационных осложнений, как системных, так и местных, экономически большим затратам, увеличению сроков лечения, повышению уровня летальности.

Антибактериальная терапия абдоминальной хирургической инфекции проводится до достижения стойкой положительной динамики состояния больного и исчезновения основных симптомов инфекции. В связи с отсутствием патогномоничных признаков бактериальной инфекции абсолютные критерии прекращения антибактериальной терапии установить сложно. Как правило, вопрос о прекращении терапии решается индивидуально на основании комплексной оценки динамики состояния больного. Критерии проведения адекватной антибиотикотерапии:

• положительная динамика основных симптомов инфекции;

• отсутствие признаков системной воспалительной реакции;

• нормализация функции желудочно-кишечного тракта;

• нормализация количества лейкоцитов в крови и лейкоцитарной формулы;

• отрицательный микробиологический посев.

Сохранение только одного признака бактериальной инфекции не является абсолютным показанием для продолжения антибактериальной терапии. Изолированная субфебрильная лихорадка (максимальная дневная температура в пределах 37,9°С) без ознобов и изменений в периферической крови может быть проявлением постинфекционной астении или не бактериального воспаления после оперативного вмешательства и не требует продолжения антибактериальной терапии, также как и сохранение умеренного лейкоцитоза при отсутствии сдвига лейкоцитарной формулы влево и других признаков бактериальной инфекции. Обычные сроки антибактериальной терапии составляют от 5 до 10-14 дней, а при показаниях и более длительный срок, до 21 дня. Более длительная антибиотикотерапия нежелательна из-за развития возможных осложнений лечения, риска селекции резистентных штаммов и развития суперинфекции [38].

Только соблюдение условий выбора эффективных препаратов при

использовании методов экспресс-диагностики может способствовать

рациональному использованию антимикробных препаратов тем самым снизить

частоту развития гнойно-воспалительных заболеваний и, таким образом, приведет

к сокращению сроков госпитализации (самая большая статья расходов на

7

оказание медицинской помощи), а также позволит снизить показатели заболеваемости и летальности [29]. Наиболее значимо определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам в отношении 2 групп, аэробов и анаэробов, среди которых выделяется большое число антибиотикоустойчивых штаммов [1].

Результаты лечения гнойно-воспалительных заболеваний нередко остаются неудовлетворительными: это и медленное течение, рецидивы, суперинфекции, резистентность к антибиотикам и, иногда, летальный исход, например при тяжелом сепсисе, панкреонекрозе и др. При этом препараты подбирают эмпирически, что в свою очередь зачастую ведет к формированию антибиотико-резистентных штаммов. В этой связи важным является разработка новых клинико-микробиологических методов выбора антимикробных препаратов [55]. Выявленные закономерности флюоресценции микроорганизмов в чистых и смешанных культурах явились экспериментальным обоснованием применения экспресс метода флюоресцентного для выявления микробов и процессов, вызванных микробами, для экспресс-диагностики гнойно-воспалительных заболеваний различной этиологии и локализации. Особенно эффективен метод в выявлении и оценке эффективности лечения данных заболеваний в ургентной хирургии.

Применение флюоресцентного анализа при подборе ранней рациональной антибактериальной терапии у больных с абдоминальной хирургической инфекцией послужило поводом к проведению данного исследования.

Цель исследования

Исследование возможностей повышения эффективности дифференциальной лазерно - флуоресцентной диагностики за счёт привлечения многофакторного статистического анализа спектральных данных у больных с хирургической абдоминальной инфекцией, подбор рациональной антибактериальной терапии по сравнению с классическими микробиологическими показателями.

Задачи исследования

1. Определить возможности экспресс - диагностики этиологии абдоминальной хирургической инфекции с использованием метода флюоресцентного анализа;

2. Разработать методику выбора ранней рациональной антибактериальной терапии пациентов с абдоминальной хирургической инфекцией на основе спектрального анализа лазерно - индуцированной флуоресценции плазмы крови;

3. На основе метода флюоресцентного анализа определить эффективность проводимой антибактериальной терапии при лечении больных с абдоминальной хирургической инфекцией;

4. Определить степень влияния раннего начала рациональной антибактериальной терапии на результаты лечения больных с абдоминальной хирургической инфекцией;

5. Провести сравнительный анализ лазерно - флуоресцентного исследования перитонеального экссудата со стандартными микробиологическими методами.

Научная новизна работы

Впервые проведена сравнительная оценка между лазерно - флуоресцентным и микробиологическим методом диагностики возбудителя у больных с абдоминальной хирургической инфекцией, с последующим ранним подбором рациональной антибактериальной терапии на основе полученных данных.

Практическая ценность работы

Выведена концепция ранней рациональной антибактериальной терапии у пациентов с абдоминальной хирургической инфекцией на основе спектрального анализа лазерно - индуцированной флуоресценции плазмы крови;

Определена возможность проведения мониторинга в спектрах эффективности проводимой антибактериальной терапии при лечении больных с абдоминальной хирургической инфекцией.

Выявлены критерии верификации основного возбудителя в аэробно-анаэробных ассоциациях экспресс-методом за 6 часов; назначения антибактериальной терапии, основываясь на чувствительности макроорганизма.

Использование разработанного метода в практическом здравоохранении позволит так же проводить микробиологический мониторинг устойчивости возбудителей в рамках системы эпидемиологического надзора и предупреждения распространения устойчивых форм микроорганизмов.

Положения, выносимые на защиту

1. Метод флюоресцентного анализа позволяет по биологическому материалу (плазма крови) выявить превалирующую микрофлору (аэробную или анаэробную);

2. Определив превалирующую микрофлору возможно в течение 2-4 часов от момента забора крови и подобрать оптимальную антибактериальную терапию. Индивидуально, для каждого больного;

3. Возможности флюоресцентного анализа позволяют выявить сопутствующие заболевания, микробной природы, в частности туберкулез;

4. Экономические затраты на проведение флюоресцентного анализа значительно ниже по сравнению с затратами на подготовку и проведение традиционных микробиологических исследований.

Публикации

По материалам диссертационной работы опубликовано три статьи [39, 40, 98] Апробация работы

Результаты, полученные в процессе выполнения работы, доложены на Международных конференциях «Прогрессивные лазерные технологии» Болгария 2011 г, Щвейцария 2012г. и на Всероссийской конференции общих хирургов с международным участием. Красноярск 2012г.[53, 99, 100]

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Абдоминальная хирургическая инфекция. Определение и понятие.

Определение «интраабдоминальной инфекции» используется для обозначения широкого спектра инфекционных процессов, как правило, развивающихся при воздействии микроорганизмов, колонизирующих желудочно-кишечный тракт и проникающих в другие, обычно стерильные области брюшной полости [32]. Основными причинами инраабдоминальных инфекционных процессов являются поражения различных органов: дистального отдела пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки, червеобразного отростка, паренхиматозных органов, тонкой, ободочной кишки [32].

Причины перитонита и абдоминальной хирургической инфекции [32]:

• Травма органов брюшной полости;

• Перфоративные язвы желудка и ДНК;

• Перфорация толстой и тонкой кишки различной этиологии;

• Острый аппендицит;

• Воспалительная деструкция дивертикула Меккля или толстой кишки;

• Неспецифический язвенный колит, болезнь Крона;

• Ишемия кишечника как следствие кишечной непроходимости, нарушения мезентериального кровотока;

• Острый холецистит;

• Инфицированные формы деструктивного панкреатита;

• Ятрогенные повреждения желудочно-кишечного тракта;

С клинических позиций в отношении выбора хирургической тактики, так и планирования выбора режима антибактериальной терапии гнойно-воспалительные процессы в брюшной полости подразделяются на две категории [32];

• Осложненные инфекции;

• Неосложненные инфекции;

Так при неосложненной инфекции отсутствуют признаки распространенного перитонита и выраженной системно воспалительной реакции. В данную категорию можно отнести: травматические перфорации кишечника, перфоративные язвы желудка и ДНК в первые часы от момента прободения, острый аппендицит без деструкции червеобразного отростка и перитонита, абсцедирование или распространения инфекционного процесса на другие органы [32].

Особенностью осложненных инфекций брюшной полости является распространение инфекции за пределы зоны возникновения, т.е. развития неотграниченного перитонита или абсцедирования [32]. Так, при перфорации гастродуоденальных язв через несколько часов перитонеальный экссудат содержит грамотрицательные факультативные и облигатные анаэробы. Перфорация тонкой или толстой кишки спустя несколько часов приводит к инфицированию брюшной полости грамотрицательными факультативными бактериями и анаэробной облигатной микрофолорой, грамположительными кокками и палочками, что сопровождается развитием перитонита [32]. Следует отметить, что одни лишь временные интервалы в развитии брюшной полости в развитии инфекции брюшной полости являются относительными критериями в дифференцировке осложненной и неосложненной внутриабдоминальной инфекции. Так, например, если операция выполнена в первые часы после перфорации стенки полого органа, то микробиологические данные, в большинстве случаев, будут отражать лишь характер микрофолоры перфорированного органа. В более поздние сроки микробный спектр будет включать уже ассоциации аэробной и анаэробной флоры.

1.2 Микробиологическая структура абдоминальной хирургической инфекции

На сегодняшний день в большинстве крупных многопрофильных медицинских стационарах при хирургической инфекции частота грамположительной и грамотрицательной микробной флоры оказалась приблизительно равной. Это произошло в результате увеличения роли в патологии таких бактерий, как Streptococcus spp., Staphylococcus и Enterococcus spp. Инвазивность лечения и усиление действия неблагоприятных факторов, подавляющих системы противоинфекционной системы организма, увеличили долю инфекций, вызванных условно патогенными микроорганизмами, в особенности S.epidermidis. Среди популяции различных видов стафилококка - возбудителей сепсиса наблюдается неуклонное увеличение метициллин (оксациллин)-резистентных штаммов.

Исчезновение доминирующей роли грамотрицательных микроорганизмов сопровождается изменениями этиологической структуры внутри группы [78]. Существует определенная взаимосвязь между локализацией очага инфекции и характером микрофлоры, запускающей инфекционно-воспалительный процесс. Немаловажное значение имеет факт патогенетического участия в септическом процессе кишечника. Патологическая колонизация кишечной микрофлоры. Нарушение микроциркуляции ведут к нарушению проницаемости слизистой оболочки, что сопровождается транслокацией бактерий и их токсинов в портальную систему, а затем - в систему общей циркуляции [78, 111, 112, 113].

Микробиологическая диагностика позволяет идентифицировать возбудителей,

определить их чувствительность к антимикробным препаратам и тем самым

своевременно оптимизировать режим их назначения. Подтвержден

полимикробный характер абдоминальной инфекции, с возможным участием

широкого спектра аэробных и анаэробных грамположительных и

грамотрицательных бактерий. Основными возбудителями инфекционных

заболеваний и осложнений у хирургических больных являются

грамотрицательные бактерии. Особое место среди которых занимают

13

представители энтеробактерий, псевдомонады, а также неспорообразующие анаэробы, особенно бактероиды. В общей структуре гнойной инфекции при операциях на органах брюшной полости грамположительные микроорганизмы составляют одну треть. При внутрибрюшных абсцессах различной локализации установлено преобладание анаэробных микроорганизмов в ассоциации с аэробами [1].

1.3 Принципы определения чувствительности микробов к антимикробным препаратам

Определение чувствительности возбудителя заболевания к антимикробным препаратам, наряду с тщательной бактериологической диагностикой заболевания с выделением и идентификацией возбудителя, является главным условием для рациональной терапии бактериальной инфекции.

В настоящее время в клинической практике существуют два принципа назначения антибактериальных препаратов: эмпирическое и этиотропное [22]. Эмпирическое назначение антибиотиков подразумевает применение антибактериальной терапии, основанной на знаниях о природной чувствительности бактерий, эпидемиологических данных о резистентности микроорганизмов в регионе или стационаре, а также результатах контролируемых клинических исследований [47]. Несомненным преимуществом эмпирического назначения антибактериальных препаратов является возможность быстрого начала терапии. При таком подходе необходимо осуществлять постоянный контроль и эпидемиологический надзор за развитием резистентности, а на основании полученных данных лабораторного исследования корректировать продолжительность лечения и режимы дозирования антимикробных препаратов в соответствии со структурой резистентности. Данные литературы указывают на значительные трудности в выборе адекватной антибактериальной терапии при инфекциях, вызванных полирезистентными штаммами грамотрицательных и грамположительныхбактерий бактерий, такими как - Staphylococcus aureus, Enterococcus spp., Pseudomonas aeruginosa или Klebsiella pneumoniae и т.д. [22]. Однако, в одном из исследований было показано, что только 30% всей

14

антимикробной терапии применяется целенаправленно на основании данных микробиологического исследования [110]. При неэффективности проводимой антибактериальной терапии нозокомиальных инфекций, когда затруднительно предположить возбудителя и его чувствительность к антибиотикам, необходимо проводить этиотропную терапию. Этиотропное назначение антибиотиков предполагает выделение возбудителя инфекции из клинического материала и определение его чувствительности к антибиотикам. Получение корректных данных возможно только при грамотном выполнении всех звеньев бактериологического исследования: от взятия клинического материала, транспортировки его в бактериологическую лабораторию, идентификации возбудителя до определения его чувствительности к антибиотикам и интерпретации полученных результатов [61, 86, 87, 88, 89, 90, 92, 93].

Кроме противомикробного спектра, эффективность противомикробной терапии зависит от многих факторов, таких как тканевая концентрация антибиотика, проницаемость через гистогематические барьеры, период полувыведения. Однако, если лекарство неактивно против типичных возбудителей болезни, самые высокие концентрации в очаге инфекции, оптимальный режим дозирования и абсолютная безопасность не имеют смысла. Все эти параметры можно сравнивать только для тех препаратов, которые обладают необходимой активностью против микробов.

1.4 Методы определения чувствительности микробов к антимикробным препаратам

Используемые в настоящее время методы определения чувствительности

микроорганизмов к антибиотикам делятся в основном на две группы: методы

диффузии в агар с применением стандартных бумажных дисков, пропитанных

антибиотиками и методы серийных разведений антибиотиков в жидкой или

плотной питательной среде. Методы серийных разведений основаны на

непосредственном изучении величины минимальных концентраций антибиотиков

в жидкой или плотной питательной среде, задерживающих (подавляющих) рост

тестируемых культур. Антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую

15

питательную среду (бульон) или в агар. При этом используют двойные последовательные разведения концентрации антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). Диапазон серии разведений зависит от установленных критериев чувствительности; она может быть начата и закончена на различных этапах. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по McFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После заражения исследуемые образцы инкубируют при 37°С в течение 16-20 часов или более в зависимости от появления роста в контроле (контрольная пробирка содержит бульон без антибиотика и культуру для каждого испытуемого штамма) и проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл. Отсутствие роста во всех пробирках, кроме контрольной, свидетельствует о том, что МПК антибиотика в отношении микроба ниже используемой концентрации [58, 81, 82].

В зависимости от объема используемой жидкой питательной среды выделяют методы серийных микро- и макроразведений (пробирочный), описанные выше. Область применения макрометода из-за низкой производительности ограничивается случаями необходимости оценки чувствительности единичных штаммов. Преимуществами микрометода является высокая производительность и возможность длительного хранения заранее приготовленных планшет. Тестирование проводят при величине контрольного объема 0,2 мл и меньше, что позволяет значительно сократить количество расходных материалов.

Метод серийных микроразведений в бульоне легко поддается модификациям для разработки тест-систем. Использование тест-систем позволяет избегать трудоемких процедур по стандартизации подготовительных этапов, но при этом обеспечивает получение достоверных количественных результатов по уровню антибиотикорезистентности [63]. Разновидностью метода серийных разведений является также метод, основанный на использовании только двух пороговых концентраций антибактериальных препаратов, соответствующих пограничным значениям МПК. Является весьма экономичным и простым в исполнении методом и позволяет получить качественные результаты, т.е. распределить штаммы по чувствительности на три категории (чувствительный, резистентный, умеренная чувствительность) [79]. Этот принцип исследования широко используется в автоматизированных системах для определения чувствительности микроорганизмов. Автоматические системы учета результатов метода серийных разведений (например, Baxter MicroScan, AutoSCAN-4) автоматизированные инкубационные системы со встроенными фотометрами, нефелометрически регистрирующие рост бактерий или его отсутствие через 24 часа после внесения микроорганизмов в лунки микропанелей. Принцип действия основан на учете разницы оптической плотности среды в лунках, где есть рост бактерий, и в лунках, где его нет.

Диффузионные методы менее точны, чем методы разведений, но более просты в исполнении и позволяют определять чувствительность к нескольким антимикробным препаратам одновременно.

Методы диффузии в агар основаны на способности антибактериальных агентов диффундировать в плотную питательную среду, образуя зону с постепенно убывающей концентрацией препарата от места его аппликации (диск с антибиотиком) к периферии. В настоящее время существуют две основные модификации диффузионного метода: диско-диффузионный и Е-тест. При определении чувствительности на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие

17

определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков, так как микроорганизмы растут на плотной питательной среде лишь на таком расстоянии от диска, где концентрация антибиотика ниже его МПК. После инкубации чашек в термостате при температуре 35°-37°С в течение 24 часов учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах. Диаметр этой зоны является мерой чувствительности микроорганизма к антибиотику. Метод определения чувствительности с помощью дисков является качественным, позволяющим установить факт чувствительности или устойчивости возбудителя инфекции к данному антибиотику. Вместе с тем установлена коррелятивная зависимость размеров зон задержки роста испытуемого микроба и значений МПК антибиотика, которая дает возможность оценить степень чувствительности количественно [36, 62].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кузьмина, Александра Геннадиевна, 2015 год

Список литературы

1. Абдоминальная хирургическая инфекция. Российские национальные рекомендации / Под ред. В. С. Савельева. - М., 2011 г., с. 18-30.

2. Автандилов А.Г., Диденко JI.B., Шустова Н.М. Инфекционный фактор в патогенезе артериальной гипертензии у подростков (клинико-бактериологическое и электронно-микроскопическое исследование. // Успехи теоретической и клинической медицины. Материалы 1 научной сессии Российской медицинской академии последипломного образования. Москва. -1995. с.167-168.

3. Александров М.Т., Таубинский И.М., КозьмаС. Ю. Способ для обнаружения и оценки концентраций анаэробных бактерий в биологическом субстрате. // Патент РФ №97100364 от 21.01.97.

4. Александров М.Т., Бажанов H.H., Воробьев А.А, Пашков Е.П. Проблема диагностики анаэробной инфекции и дисбактериоза в клинической стоматологии// Росс.ж. «Вестник Росс. Акад. мед. наук», 1999.-С.13-18;

5. Александров М.Т., Таубинскнй И.М., Козьма С.Ю. Применение флуоресцентной спектроскопии для экспресс-оценки состояния микрофлоры желудочно-кишечного тракта// «Биомедицинская радиоэлектроника». - 2000. №11,3,7

6. Александров М.Т., Морозова O.A., Круглов А.Н., Эрдес СИ., Пашков Е.П. Новый метод лазерной спектрофлюоресценции в диагностике дисбиоза кишечника у детей. Тез. докл. конф. «Актуальные проблемы абдоминальной патологии у детей».М., 2001. - с . 99-100;

7. Александров М.Т., Морозова O.A. Пашков Е.П. Метод флюоресцентной диагностики - метод индикации микрофлоры человека в норме и патологии// ЖМЭИ - 2001 №3,с.57-60.

8. Александров М.Т., Хоменко В.А., Гапоненко О.Г. Пробный носитель и способ быстрого измерения абсолютной концентрации бактерий в биосубстрате по их фотолюминесценции (варианты). Патент РФ № 2255978, 23.12.2002г.

9. Александров М.Т., Хоменко В.А., Гапоненко О.Г. Способ люминесцентной диагностики и/или качественной оценки состояния биологического объекта и устройство для его осуществления. Патент РФ № 2254372, 30.06.2004г.

Ю.Александров М.Т., Афанасьева Р.А., Гапоненко О.Г и др. Лазерная флуоресцентная диагностика в медицине и биологии. НПЦ Спектролюкс, Москва. 2007 г.

П.Александров М.Т. Лазерная клиническая биофотометрия, теория, эксперимент, практика. Москва: Техносфера, 2008.- 584 с

12.Андреев И.Л. Какой скелет в шкафу нашего организма. //Российская федерация сегодня. 2005г. №3, с.74-79.

1 З.Андреев И. Л. Что может быть практичнее хорошей теории .//Российская федерация сегодня. 2006г. №6, с.56-61.

14. Антибактериальная терапия. Практическое руководство. Под ред. Страчунского Л.С., Белоусова Ю.Б., Козлова С.Н. М., Фармединфо. 2000.

15.Бахшиев Н.Г. Спектроскопия межмолекулярных взаимодействий. Л.: Наука. 1972.

16.Баркаган З.С. Очерки антитромбатической фармакопрофилактики и терапии. М. Ньюдиамед. 2000. 148 с.

17.Белобородов В.Б. Антибактериальная терапия инфекций в отделениях реанимации и интенсивной терапии / Мед. Альманах Университеты Практикующего врача, вып. 2, Антимикробная терапия тяжелых инфекций в стационаре. - М. 2003. с. 4-20;

18.Белобородова Н.В. Стратегия и тактика антибиотикотерапии. Докторская диссертация д.м.н., микробиология, педиатрия. Российский государственный медицинский университет, Москва, 1996.

19.Белобородова Н.В., Попов Д. А. Поиск "идеального" биомаркера бактериальных инфекций. Клиническая анестезиология и реаниматология. 2006г.Т.З, с. 30-39.

20.Богданов М.Б., Черненькая Т.Б. Влияние антибактериального препарата на устойчивость возбудителей. Клиническая фармакология и терапия, 2000, 9(2): 33-35.

21.Богданов М.Б., Подольцев А.Л., Сосновская И.В., Черненькая Т.В.Оценка экономической эффективности микробиологических исследований в многопрофильном стационаре// Клиническая фармакология и терапия, 2003, 12(2): стр. 38-43.

22.Богданов М. Б. Алгоритмы и организация антибиотикотерапии. Руководство для врачей. -М.: Издательский дом Видар - М, 2004.-219с.

23.Борисов И.А. Некоторые особенности перитонита как аэробно-анэробной инфекции: Автореф. Дис. канд. мед. наук. Л., 1986.

24.Буянов В.М., Родоман Г.В., Лаберко Л.А. Классификация хирургических перитонитов. //Труды 1 Московского Международного Конгресса хирургов. М., 1995. С.15-16.

25.Богданов М.Е., Черненькая Т.Б. Алгоритмы и организация антибиотикотерапии. Руководство для врачей. - М.: Издательский дом Видар-М, 2004.-219 с.

26.Бюллетень программы ВОЗ по борьбе с туберкулезом в Российской Федерации, выпуск 4, июль, Москва - 2007 г.)

27.Векшин Н.Л. Флюоресцентная спектроскопия биополимеров. - Пущино: «Фотон-век», 2006, 168 с.

28.Векшин Н.Л. Дробный перенос энергии в эксимерах и эксиплексах. Препринт. АН СССР, Пущино, 1989.

29.Руководство по инфекционному контролю в стационаре. Перевод с англ./ Под ред. Р. Венцеля, Т. Бревера, Ж.-П. Бутулера - Смоленск: МАК-МАХ, 2003.

30.«Руководство по легочному и внелегочному туберкулезу» под ред. Левашова Ю.Н., СП, Элби-СПб, 2006 г.

31 .Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., Флюоресцетные зонды в исследовании

биологических мембран. М.: Наука, 1980.

125

32.Гельфанд Б.Р., Гологорский В.А., Буркевич С.З. Абдоминальный сепсис: современный взгляд на нестареющую проблему. // Вестник интенсивной терапии. 1996.№4. с.29-35.

33.Гельфанд Б.Р., Буркевич С.З., Гиткович В.Е. и др. Абдоминальный сепсис: современный взгляд на нестареющую проблему. // Вестник интенсивной терапии. 1997.№1. с. 73-79.

34.Гельфанд Е.Б. Абдоминальный сепсис при перитоните: клиническая характеристика и эффективность антибактериальной терапии. Автореф. Дис. канд. мед. наук. М.,1999.

Зб.Гельфанд Е.Б., Гологорский В.А., Гельфанд Б.Р. Абдоминальный сепсис: интегральная оценка тяжести состояния больных и полиорганной дисфункции // Анестизиология и реаниматология. 2000. №3. с.29-33.

36.Гивенталь Н.И., Ведьмина Е.А., Богданова Л.Ф., и др. Об унификации методов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Полуколичественная и количественная оценка результатов диффузионного теста. Антибиотики 1980; 6:420-4

37.Гостищев В. К., Сажин В. П., Авдовенко А. Л. //Перитонит. -1992 -г. С. 8-30

38.Гостищев В.К. //Инфекции в хирургии. -2007- С. 20-25,462-470

39.Гостищев В.К., Хоменко В.А., Кузьмина А.Г., Кузьмин Г.П., ИваховГ.Б. Применение метода флюоресцентного анализа для экспресс - диагностики антибиотикочувствительности микрофлоры у больных с абдоминальной инфекцией. Лазерная медицина. 2013, Т. 17, вып.З, стр.44-48

40.Гостищев В.К., Хоменко В.А., Кузьмина А.Г., Кузьмин Г.П., Ивахов Г.Б. Метод флюоресцентного анализа для экспресс - диагностики антибиотикочувствительности микрофлоры у больных с абдоминальной инфекцией. Московский хирургический журнал. 2014, т.2 (36), стр.21-25.

41.Диденко Л.В., Шустова Н.М., Андриевская С.Г., Константинова Н.Д., Снегирева А.Е.// Исследование бактериемии бактериологическими и электронно-микроскопическими методами. Клиническая лабораторная диагностика №9. 1988. С.11.

42.Диденко JI.B. Бактериемия: Основы патогенеза при инфекционных и неинфекционных заболеваниях. Автореферат на соискание степени д.м.н., М. 2001г.

43.Диденко Л.В. Ультраструктурный анализ как метод изучения бактериемии при инфекционных заболеваниях. Вестник Российской Академии медицинских наук. 2001. 11. С.33-39.

44.Диденко Л.В. Изучение гемокультур больных генерализованными формами иерсиниоза методами сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии.// Тез. Докл.ХП Российского симпозиума по растровой электронной микроскопии. Черноголовка. 2001. С.35.

45.Евстигнеев А.Р. Лазерные фотометры для экспериментально-клинической медицины. Электронная промышленность. 1987, №1.

46.Ермолаев В.Л., Бодунов., Свешников Е.Б., Шахвердов Т.А. Безизлучательный перенос энергии электронного возбуждения. Л.: Наука. 1977.

47.Ефименко H.A., Базаров A.C., проф.Белобородов В.Б. и др. Антибиотикопрофилактика и антибиотикотерапия основных форм хирургических инфекций.-М. ГВМУ МО РФ.2004., с. 46.

48.Жемчугов В.Е. Как мы делали химические вакцины. Записки о современных «охотниках за микробами». М.: Наука, 2004. - 349с;

49.3убков M. H./ Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии. М.: Издательство МГУП, 2002.-272с

50.Карнаухов В.Н. «Люминесцентный спектральный анализ клетки» M - Наука, 1978г

51 .Клиническое применение прокальцитонина (ПКТ) для диагностики и мониторинга сепсиса, BRAHMS. 2004, c.l 1.

52.Колесов А.П., Борисов И.А., Кочеровец., Столбовой A.B. Перитонит как аэробно-анэробная инфекция. Вестник хирургии. 1987. Т.139. №7. С.57-60

53. Кузьмина А.Г. Применение метода флюоресцентного анализа для экспресс -

диагностики антибиотикочувствительности у больных с абдоминальным

сепсисом в послеоперационном периоде. Материалы YII Всероссийской

127

конференции общих хирургов с международным участием. Красноярск 2012, стр.714-717.

54.Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии. М. 1986.

55.Лазерная флюоресцентная диагностика в медицине и биологии. Теория и возможности применения. / Александров М.Т., Афанасьева P.A., Гапоненко О.Г. и др. «НПЦ Спектролюкс» 2007 г

56.Левшин Л.В., A.M. Салецкий A.M. - Люминесценция и ее измерения. МГУ, 1989, 279 с.

57.Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И. и др.Эпидемиологические аспекты экологии бактерий. М.: Фармарус,1997. 256 с.

58.Лыскина Г.А., Дронов И.А. и др. Определение уровня прокальцитонина крови в педиатрической практике. М.Педиатрия № 4, 2006г.

5 9. Медицинская технология «Применение экспресс метода лазерной флуоресценции для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам» от 07.08.2007 (№ФС-2007/158)

бО.Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987, с.341.

61 .Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков, Москва, 1983 г.

62.Методические указания. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, МУК 4.2.1890-04.М.-2004.С.90.

63.Михайлова B.C., Гаранина E.H., Макарова H.A. Обеспечение качества в лабораториях клинической микробиологии (бактериологии). Клин. лаб. диагностика 1995; с 4, 19-21.

64.Морозова О.А, Экспериментальное обоснование экспресс-метода лазерной флюоресцентной диагностики заболеваний микробной природы: Автореф. дис. канд. мед. наук.-М., 2001. 25с.

65.Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии/под.ред.

Л.С. Страчунского, Ю.Б.Белоусова, С.Н. Козлова / Москва,2002.-381 с

128

66.Прингсгейм П., Флуоресценция и фосфоресценция, перевод с английского, М., 1951

67.Прозоровский В.В., Раковская И.В., Горина Л.Г. и др. Персистенция микоплазм в инфицированном организме: Наблюдения, причины и механизмы, диагностика // Журн. микробиологии, эпидемиологии ииммунобиологии. 1997. №4. С. 47-51.;

68.Прокопьев В.Е. «Биофизические механизмы воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на биологические ткани и оптические методы диагностики их состояния», автореферат диссертации на соискание степени доктора физ.- мат. наук, Томск 2004г.

69.Пунга В.В. Подходы к выявлению туберкулеза.//РМЖ.-2000.21.-с.10-12.

70.Пушкарева В.Е., Емельяненко E.H., Литвин В.Ю- и др. Патогенные листерии в почве и в ассоциации с водорослями: Обратимый переход в некультивируемое состояние // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. №3. С. 3-6.;

71.Романова О.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Л. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий на модели Salmonellatyphymurium: Феномен и генетический контроль// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. №2. С. 23-29.

72.Руднов В.А. Сепсис: терминология. Патогенез, оценка тяжести и интенсивная терапия// Вестник интенсивной терапии. 1997. №4. с.40-45.

73.Руднов В.А. Сепсис: современный взгляд на проблему.// Клиническая антимикробная химиотерапия. 2000. Т.2. №1. с. 2-7.

74.Руководство по внутренним болезням. Туберкулез. Под редакцией академика РАМН А.Г. Хоменко. М.: Медицина, 1996. 186 с.

75.Рябов Г.А. Синдромы клинических состояний.М.: Медицина. 1994. 368с.

76.Руководство по инфекционному контролю в стационаре. Пер. с англ./Под ред. Р. Венцеля, Т.Бревера, Ж.-П. Бутулера. Смоленск: МАКМАХ.2003.

77.Савельев B.C., Гельфанд Б.Р., Бурневич С.З., Гельфанд Е.Б. и др.

Антибиотики и химиотер. 2000; 45 (5):30-5.

129

78.Савельев В. С. //Сепсис в начале 21 века. -2006- С. 5-10

79.Скала Л.З., Сидоренко СВ., Нехорошева А.Г., Лукин И.Н., Грудинииа С.А. Практические аспекты современной клинической микробиологии. Тверь: ООО «Триада», 2004. - 312с

80.Скотникова О.И., Соболев А.Ю., Исаева Е.Л. и др. // Генодиагностика в современной медицине. - М., 2000. - С. 284-285.

81.Фармакотерапия бактериальных инфекций. Руководство по составлению формуляра. УшкалеваЕ. А. и др. М.2001, с.50-97

82. Федоров В.Д., Гостищев В.К., Ермолов А.С. и др. Современные представления о классификации перитонита и системах оценки тяжести состояния больных // Хирургия. 2000. № 4. С. 58-62.

83.Фробишер М. Основы Микробиологии. М. "Мир". 1965г. с.357-358.

84.Хоменко В.А., Александров М.Т., Бажанов Н.Н. и др. Оптико-электронный диагностический комплекс. Патент РФ №35440 2003г.

85.Хоменко В.А. Совершенствование диагностики и лечения больных костно-суставным туберкулезом. Автореферат на соискание степени д.м.н., Санкт-Петербург. 2005г.

86.Цацаниди К.Н. Антибактериальная терапия перитонита// Антибиотики. 1984. Т.29. №4. С.294-295.

87.Чугунов А.О. Микробиологические аспекты распространенного перитонита: Дис. канд. мед. наук. М., 1991.

88.Шуркалин Б.К. Гнойный перитонит. Москва. «Два Мира Принт» 2000. с.62-65.

89.Bone R.C. Sepsis, the sepsis syndrome, multi-organ failure: a plain for comparable definitions// Ann. Intern. Med. 1991. V. 114. №4. p.332-333.

90.Bone R.C. Immunologic dissonance: a continuing evolution in our understanding of the systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and the multiple organ dysfunction syndrome (MODS)// Ann. Intern. Med. 1996. V. 125. №8. p.680-687.

91.Didenko L.V., Andreevskaya S.G., Ultrastructure of circulating immune

complexes, isolating from the blood plasma of patient, suffering from infection

130

diseases.// The 9-th International congress of immunology. 1995. San-Francisco,California, USA. Abctract Book. P.770.

92.Didenko L.V., Andreevskaya S.G., Konstantinova N.D., Buchwalov I.B. Ultrastructure of circulating immune complexes, isolating from the blood plasma of patient, suffering from infection diseases.//European Journal of Cell Biology EJCB. 1995. Supplement 41. Vol.67, p.98.

93.Didenko L.V., Andreevskaya S.G., Konstantinova N.D., Buchwalov I.B. Ultrastructure of circulating immune complexes, isolating from the blood plasma of patient, suffering from infection diseases.// J. Basic of Microbilogy. 35 (1995) 3. P.163-170.

94.Didenko L.V., Andreevskaya S.G., Konstantinova N.D.// Application of transmission electron microscopy for analysis of ultrastructural organization of circulating immune complexes in patients with typhoid fever and chronic carriers of Salmonella typhi. Russian Journal of immunology. 2000. Vol.5. №2. p. 209216.

95.Didenko L.V., Konstantinova N.D., Andreevskaya S.G., Romanova J.M., Alekseeva N.V. Ultrastructural organization of unculturable forms of Salmonella typhimurium.// Abstr. 9-th International symposium on Microbial Ecology. 2001. Amsterdam. Netherlands, p. 193.

96.Cunney R.J., McNamara E.B., AlansariN.. Loo B., Smyth E.G. Theimpact of blood culture reporting and clinical liaison on the empirictreatment of bacteremia.JClinPathol 1997; 50: 1010-2.

97.Cook D., Salter A.J., Phillips I. Antimicrobial misuse, antibioticpolices and information resources.J AntimicrobChemother.1980; 6: 435-443.

98.GostishchevV.K., KhomenkoV.A., KuzminG.P., KuzminaA.G., IvakhovG.B., GaponenkoO.G.. Laser fluorescence analysis method use for express-diagnosis of antibiotic resistance among abdominal sepsis patient post - operation. Journal of Innovative Optical Health Sciences. 2012, Vol.5, No.3, 1250012, p. 1-7.

99.GostishchevV.K., KhomenkoV.A., KuzminG.P., KuzminaA.G., IvakhovG.B., GaponenkoO.G.. The laser fluorescence analysis method use for express-diagnosis

131

of antibiotic resistance. 20th International Conference on Advanced Laser Technologies - ALT-12,Thun, Switzerland. 2012, p. 283.

100.GostishchevV.K., KhomenkoV.A., KuzminG.P., KuzminaA.G., IvakhovG.B., GaponenkoO.G.. Laser fluorescence analysis method use for express- diagnosis of antibiotic efficiency among peritonitis and abdominal sepsis patient. 19th International Conference on Advanced Laser Technologies - ALT-11, Golden Sands, Bulgaria. 3-8 September 2011, CTp. 32-33.

101.Guillou PJ. Biological variation in the development of sepsis after surgery or trauma// Lancet. 1993. V.342. p.217-222

102.Karavaev V.A., Polyakova I.B., Solntsev M.K., Yurina M.K.Effect of variouschemicalagentsonphotosynthesisstudiedbythemethodoffluorescenceinducti on, Journal of Luminescence. 1998. V.76. P.335

103.Kollef M. N., Vlasnik J. Sharpless L. et al. Scheduled change of antibiotic classes: a strategy to decrease the incidence of ventilatorassociated pneumonia. Am J RespirCrit Care Med 1997; 156: 1040-1048.

104.Kollef M.N. Ventilator-associated pneumonia: the importance of initial empiric antibiotic selection. Infect Med 2000; 17: 278-283.

105.Lee J.T. Surgical wound infections: Surveillance for quality improvement // Surgical Infection. Fry DE(Ed.). Bjston-New York-Toronto-London, Little, Brown and Company. 1995. p. 145-160.

106.Montravers P. Et al. Emergence of antibiotic-resistant bacteria in cases of peritonitis after intraabdominal surgery affects the efficacy of empirical antimicrobial therapy. ClinlnfectDis 1996; 23: 486-494

107.0nderdonk A.B., Bartlett J.G., Lonie T.J. Microbial synergy in experimental intraabdominal abscess// Inf. Immun. 1979. V.13. p.22-26.

108.Philips D., Eigenbrot I.V., Oldham T.C.// In: Biomedical Applications of Spectroscopy, v/25, John Wiley, 1996, p. 89-141.

109.Principles and Practice of Infectious Diseases. Mandell G.L., Bennett J.E., Dolin R. (Eds.). 5th ed. Philadelfiaets.: Churchill Livingstone, 2000.

llO.Reacher M.H., Shan A., Livermore D.M. et al. Bacteraemia and antibiotic resistance of its pathogens reported in Englans and Wales between 1990 and 1998: trend analysis. BMJ 2000; 320: 320-216. 111.Scholar E.M., Pratt W.B. The Antimicrobial Drugs. 2nd ed. 0[ford University Press, 2000.

112.Simon G.L., Gorbach S. L. Intestinal microflora // Med. Clin. N. Am. 1982. V.66. №3. p. 557-574.

113.Vekshin N.L. Photonics of Biopolymers. M.: MGU, 1999; Berlin: Springer, 2002.