Предупреждение биодеструкции химреагентов при разработке нефтяных месторождений тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.15.06, кандидат технических наук Резяпова, Ирина Борисовна

• Резяпова, Ирина Борисовна
• кандидат технических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат технических наук Резяпова, Ирина Борисовна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. Зараженность нефтяных месторождений сульфатвосстанав- 11 ливающнми бактериями, отрицательные последствия их жизнедеятельности при добыче нефти (аналитический обзор литературы)

1.1. Распространенность сульфатвосстанавливающих бактерий в 13 водах нефтяных месторождений

1.2.Место сульфатвосстанавливающих бактерий в смешанном 14 сообществе микроорганизмов

1.3.Факторы, влияющие на сульфатредукцию в призабойной зо- 17 не и нефтяном пласте

1.4.Методы исследования сульфатвосстанавливающих бактерий

1.5.Влияние сульфатвосстанавливающих бактерий на прони- 29 цаемость пород

1 .б.Ингибиторная защита металлов от коррозии в средах, со-

держащих сульфатвосстанавливающие бактерии

2. Экспериментальное определение распространенности суль- 37 фатвосстанавливающих бактерий на нефтяных месторождениях

2.1. Разработка способа обнаружения сульфатвосстанавливаю- 3

щих бактерий в нефтепромысловых средах 2.2.Определение видовой принадлежности сульфатвосстанав-

ливающих бактерий методом геномной дактилоскопии 2.3. Экспериментальное определение зараженности нефтяных

месторождений сульфатвосстанавливающими бактериями

3. Влияние химических продуктов, применяемых при добыче 52 нефти, на сульфатредукцию

3.1. Поверхностно-активные вещества и композиции на их ос- 56 нове

3.2. Деэмульгаторы 62 3.3 .Ингибиторы коррозии и ингибиторы асфальто-смолистых

и парафиновых отложений

3.4. Полимеры

3.5. Бактерициды

4. Биодеструкция нефтевытесняющих агентов под действием 78 сульфатвосстанавливающих бактерий

4.1.Исследование биодеструкции неионогенных ПАВ под дей- 78 ствием сульфатвосстанавливающих бактерий

4.2.Изучение кинетики биодеструкции НПАВ с учетом факто- 81 ров, влияющих на нее в пласте

4.3.Изучение биодеструкции НПАВ в составе товарных форм

5. Влияние сульфатвосстанавливающих бактерий и биоцид- 95 ной обработки на проницаемость пористых сред

6. Предупреждение биоповреждений, вызываемых сульфат- 104 восстанавливающими бактериями

6.1 .Биостойкие нефтевытесняющие составы на основе поверх-

ностно-активных веществ с синергизмом антимикробных свойств

6.2.Технико-экономическая эффективность применения

результатов исследований ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Предупреждение биодеструкции химреагентов при разработке нефтяных месторождений»

ВВЕДЕНИЕ

Заводнение нефтяных пластов, проводимое для поддержания пластового давления и интенсификации добычи нефти является основной причиной распространенности микроорганизмов различных физиологических групп на нефтяных месторождениях, наибольший ущерб из которых причиняют сульфатвос-станавливающие бактерии (СВБ).

Жизнедеятельность СВБ вызывает ряд серьезных проблем, связанных с экологическим и экономическим ущербом на нефтяных месторождениях. К ним относятся: биологическая коррозия металла, загрязнение сероводородом добываемой нефти, газа и воды; закупоривание призабойной зоны скважин и продуктивного пласта и снижение фильтрационных характеристик пород и нефтеотдачи.

Поэтому выявление и идентификация сульфатвосстанавливающих бактерий на нефтяных месторождениях, прогнозирование и исследование влияния факторов на образование биогенного сероводорода и других отрицательных последствий их жизнедеятельности является актуальным.

Диссертация выполнена по планам НИР БашНИПИнефти и НИИнефте-отдача в соответствии с координационными программами и постановлениями ГКНТ, Миннефтепрома, в том числе: проблема 0.10.08, задание 04; 34.4: разработать, испытать и внедрить высокоэффективные бактерициды, ингибиторы-бактерициды, технологию их применения для подавления жизнедеятельности коррозионноопасных микроорганизмов и защиты нефтепромыслового оборудования от коррозии; программа работ по повышению эффективности разработки нефтяных месторождений (протокол коллегии МНП № 45 от 28-29.10.85 г.); общесоюзная программа 017 «Нефтедобыча», задание 02.02.01Т, Т2б; 013.015, 013004, задание 01.02, Т1а; планы НИОКР МНТК «Нефтеотдача» 04.02.0, этап Т2а и 04.02.05.Т, Т1б; общесоюзная программа фундаментальных исследований

«Проблемы биоповреждений» на 1989-2000 г.г., раздел 1.5. «Биоповреждения в нефтяной промышленности. Защита».

Целью данной диссертационной работы является повышение эффективности разработки нефтяных месторождений за счет предупреждения отрицательного воздействия сульфатвосстанавливающих бактерий на фильтрационно-емкостные характеристики пород продуктивных пластов и на технологические реагенты, используемые в процессах добычи нефти. При выполнении работы решались следующие задачи:

1. Разработка и усовершенствование способа обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах, апробация новой методики идентификации их видового состава.

2. Исследование и анализ уровня зараженности пластовых вод и системы ППД залежей Урало-Поволжья и Западной Сибири сульфатвосстанавливающими бактериями. Классификация нефтяных месторождений по степени зараженности закачиваемых вод.

3. Оценка влияния химических реагентов, применяемых при разработке и эксплуатации нефтяных месторождений, на процесс образования биогенного сероводорода.

4. Изучение и предупреждение биодеструкции неионогенных и анионактивных ПАВ, используемых для интенсификации добычи нефти и увеличения нефтеотдачи пласта, под действием сульфатвосстанавливающих бактерий, в том числе в сообществе с микроорганизмами нефтяных месторождений.

5. Оценка эффективности композиций поверхностно-активных веществ и биоцидов для подавления сульфатвосстанавливающих бактерий. Создание биостойких нефтевытесняющих составов.

6. Исследование влияния сульфатвосстанавливающих бактерий в сообществе с микроорганизмами нефтепромысловых вод на фильтрационно-емкостные характеристики продуктивных пластов.

Научная новизна.

1. Впервые разработана методика оценки влияния химических продуктов, применяемых в процессах разработки нефтяных месторождений, на суль-фатредукцию. Выявлен характер влияния ПАВ, деэмульгаторов, ингибиторов коррозии, ингибиторов АСПО, полимеров и бактерицидов на образование биогенного сероводорода.

2. Впервые экспериментально установлена способность сульфатвосстанавли-вающих бактерий подвергать биодеструкции неионогенные ПАВ и использовать продукты деструкции для построения внутриклеточных структур.

3. Установлена зависимость степени снижения концентрации неионогенных ПАВ за счет биодеструкции сообществами микроорганизмов нефтяных месторождений, включающих СВБ, от активности микроорганизмов, общей минерализации воды и начальной концентрации НПАВ. Предложена эмпирическая формула для расчета этой зависимости.

4. Обнаружен синергетический эффект смеси биоцидов с неионогенными и анионактивными ПАВ для подавления сульфатвосстанавливающих бактерий. Найдено оптимальное соотношение компонентов, составляющее 1:2 для смеси ЛПЭ-11в : АФ 9-12; и 1:1 для смеси ЛПЭ-1369 : сульфонол.

5. В лабораторных модельных условиях установлено существенное влияние микроорганизмов на ухудшение фильтрационно-емкостных характеристик пористой среды и показана возможность эффективного восстановления последних при биоцидной обработке.

В диссертационной работе разработаны и защищаются следующие положения:

1. Способ обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах.

2. Методика и результаты испытаний влияния химических реагентов, применяемых при разработке нефтяных месторождений, на сульфатредукцию.

3. Способность сульфатвосстанавливающих бактерий подвергать биодеструкции неионогеиные ПАВ и использовать продукты деструкции для построения внутриклеточных структур.

4. Синергизм биоцидной активности смесей НПАВ и АПАВ с бактерицидами ЛПЭ-11в и ЛПЭ-1369.

5. Результаты экспериментов по исследованию влияния микроорганизмов и бактерицида ЛПЭ-11в на фильтрационные характеристики пород и на коэффициент вытеснения.

Практическая ценность.

1. Создан и внедрен на практике способ обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах (А. с. 1152261 СССР / Б.И.-1985.-№ 15).

2. Экспериментально проведено микробиологическое обследование закачиваемых и попутно добываемых вод более 30 нефтяных месторождений Урало-Поволжья и Западной Сибири, выполнена классификация этих месторождений по степени зараженности закачиваемых вод.

3. Разработан стандарт объединения СТО 03-135-84 «Влияние химических продуктов на сульфатредукцию. Методы испытаний», составлен перечень продуктов, используемых при добыче нефти с указанием экспериментально полученных данных о характере и степени их влияния на образование биогенного сероводорода.

4. Созданы и предложены к применению нефтевытесняющие составы на основе поверхностно-активных веществ с добавкой биоцидов с повышенной биостойкостью.

Апробация работы. Основные положения работы обсуждены на VII съезде Всесоюзного микробиологического общества «Экологическая, геохимическая деятельность микроорганизмов и охрана окружающей среды» (Алма-Ата, 1985); областной научно-технической конференции «Проблемы разработки нефтяных и газовых месторождений и интенсификации добычи нефти» (Астра-

хань, 1989); на научно-технических конференциях, организованных Научным Советом по биоповреждениям АН СССР: «Современные средства и методы химической защиты от коррозии и биоповреждений» (Казань, 1990); на IV всесоюзной конференции по биоповреждениям (Н.Новгород, 1991); «Биоповреждения в промышленности» (Пенза, 1993); на научно-технической конференции «Проблемы нефтегазового комплекса России» (Уфа, 1998); на заседаниях Ученых советов БашНИПИнефти, НПО Союзнефтеотдачи и Отделения нефти и газа АН РБ (1984-1997 г.г.).

По результатам исследований опубликовано 24 печатные работы, в том числе 1 монография, 1 изобретение, 10 научных статей, 2 руководящих документа и стандарта и 10 тезисов докладов на республиканских и всесоюзных съездах и конференциях.

Диссертационная работа состоит из введения, 6 глав, заключения и списка литературы. Работа изложена на 131 стр. машинописного текста, в том числе содержит 23 таблицы и 16 рисунков. Список литературы включает 118 наименований.

Основные результаты в диссертации получены в результате экспериментальных и теоретических исследований.

В первой главе рассмотрены отрицательные последствия жизнедеятельности СВБ, связанные с экологическим и экономическим ущербом на нефтяных месторождениях : загрязнение сероводородом добываемой воды, нефти и газа; биологическая коррозия нефтепромыслового оборудования; закупоривание призабойной зоны скважин и пласта. В аналитическом обзоре литературы обобщены современные представления о физиологической группе сульфатвос-станавливающих бактерий, их распространенности, месте в смешанном сообществе микроорганизмов нефтяных месторождений, факторах, влияющих на их жизнедеятельность в призабойной зоне и нефтяном пласте. Проанализированы и систематизированы современные методы, применяемые для исследования сульфатвосстанавливающих бактерий. Обобщены данные по изучению жизне-

деятельности сульфатвосстанавливающих бактерий в комплексе с другими микроорганизмами в пористых средах, их влиянию на проницаемость пород. На основе аналитического обзора литературных данных сформулированы основные цели и задачи исследований.

Во второй главе для выявления сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых водах и культивирования создан и использован новый способ обнаружения на основе усовершенствования питательной среды Постгейта, содержащей стимулирующую добавку, введение которой в состав в небольшом, по сравнению с другими компонентами среды, количестве ускоряет инициацию роста бактерий, увеличивает их сульфатредуцирующую активность. Это позволяет сократить время, необходимое на анализ, в 3-5 раз и повысить его точность.

С использованием разработанного способа выполнено экспериментальное обследование зараженности сульфатвосстанавливающими бактериями более 30 нефтяных месторождений Урало-Поволжья, Западной Сибири и других регионов. Получены данные, которые свидетельствуют о практически повсеместной распространенности сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых водах по всей системе пласт-скважина-наземное оборудование.

Совместно с Отделом биохимии и цитохимии УНЦ РАН выполнена работа по оценке возможности определения видового состава сульфатвосстанавливающих бактерий методом геномной дактилоскопии. Применительно к суль-фатвосстанавливающим бактериям данный метод рассмотрен впервые.

В третьей главе изучено влияние около 80 химических продуктов (ПАВ, ингибиторов коррозии и АСПО, деэмульгаторов, полимеров, бактерицидов) на сульфатредукцию музейных и накопительных культур сульфатвосстанавливающих бактерий, разработана и внедрена методика оценки, которая позволяет в лабораторных условиях определить характер (подавление, стимулирование, отсутствие влияния) и степень влияния химреагентов на сульфатредукцию. Проведенные исследования по оценке влияния химических продуктов на суль-

фатредукцию позволяют внести коррективы в технологию их применения при разработке и эксплуатации нефтяных месторождений и рекомендовать их использование с учетом влияния на сульфатредукцию. Составлен перечень химреагентов с указанием характера влияния на образование сероводорода суль-фатвосстанавливающими бактериями.

В четвертой главе установлена способность СВБ подвергать биодеструкции нефтевытесняющие агенты, получены эмпирические формулы, описывающие кинетику биодеструкции НПАВ с учетом факторов, влияющих на нее в пласте: его начальной концентрации, содержания минеральных солей в среде, деструктивной активности сообществ микроорганизмов, выделенных из нефтепромысловых сред конкретных нефтяных месторождений. Установлены особенности биодеструкции НПАВ в составе товарных форм.

В пятой главе изучено влияние сульфатвосстанавливающих бактерий на фильтрацию в пористых средах, выполнено моделирование бактериальной закупорки керна, показана возможность удаления биообразований и восстановления его проницаемости обработкой биоцидом ЛПЭ-11в.

В шестой главе предложены биостойкие нефтевытесняющие составы с синергизмом антимикробных свойств: АПАВ+ЛПЭ-1369; НПАВ+ЛПЭ-11; выявлено оптимальное соотношение компонентов в составе.

Работа выполнена в институтах БашНИПИнефть и НИИнефтеотдача (НПО Союзнефтеотдача) под руководством доктора технических наук Хазипова Р.Х., которому автор выражает благодарность за всестороннюю поддержку и внимание.

1. ЗАРАЖЕННОСТЬ НЕФТЯНЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ

СУЛЬФАТВОССТАНАВЛИВАЮЩИМИ БАКТЕРИЯМИ, ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ

ПОСЛЕДСТВИЯ ИХ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ ПРИ ДОБЫЧЕ НЕФТИ

(АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

Сульфатвосстанавливающие бактерии представляют собой группу таксо-иомически очень разнообразных бактерий, имеющих сходную экологию и физиологию - все они являются строгими анаэробами, способны использовать сульфат или другие соединения серы в качестве терминального акцептора электронов в диссимиляторной энергетической реакции в противоположность другим бактериям, которые используют сульфат только для формирования серосодержащих компонентов клетки. Отличительной чертой всех известных видов сульфатвосстанавливающих бактерий является способность в качестве конечного продукта сульфатредукции образовывать сероводород в большом количестве [1].

Приняв во внимание физиологические особенности сульфатвосстанавливающих бактерий можно заключить, что их развитие в природе возможно в водах, где имеется достаточное количество органического субстрата и сульфата при отсутствии или незначительном содержании кислорода. Заводняемые нефтяные месторождения, обогащенные сульфатами, являются природной экосистемой, благоприятной для роста и активности этих микроорганизмов [2].

Жизнедеятельность сульфатвосстанавливающих бактерий вызывает ряд серьезных проблем на нефтяных месторождениях, которые рассмотрены в опубликованном обзоре [3]. К ним относятся загрязнение сероводородом добываемой продукции, коррозия, закупоривание призабойных зон скважин и продуктивного пласта микробными телами и продуктами их метаболизма.

Сероводород, образованный в результате жизнедеятельности СВБ, циркулируя в системе пласт-скважина-наземное оборудование при аварийных

ситуациях, разгерметизации оборудования загрязняет воздух, почву, наземные и подземные воды. Он является высокотоксичным газом, есть мнение, что сульфиды, производимые бактериями, в такой же степени токсичны, как и цианиды [4]. Постоянное воздействие сероводорода даже в невысокой концентрации влияет на нервную, сердечно-сосудистую систему и наследственность человека, о чем были сообщения в периодической печати. Таким образом, в районах нефтедобычи жизнедеятельность СВБ отрицательно сказывается на экологии, оказывает влияние на флору, фауну, здоровье проживающего населения и персонала.

Другим отрицательным последствием воздействия сульфатвосстанавли-вающих бактерий в составе биоценозов, приводящим к огромному экономическому ущербу, является ухудшение технологических характеристик химреагентов, используемых при добыче нефти. В частности, СВБ в сообществе с другими микроорганизмами вызывают биодеструкцию компонентов бурового раствора, что приводит к вынужденному перерасходу основных химических реагентов на восстановление его свойств [5]; биоповреждение веществ, используемых для увеличения нефтеотдачи, ухудшение основных технологических параметров нефтевытесняющих растворов [6,7].

Экономический и экологический ущерб от биокоррозии, вызываемой СВБ, наиболее велик в нефтедобывающей промышленности за счет сокращения сроков службы трубопроводов и резервуаров и создания аварийных ситуаций. Особенно опасно то, что сульфатвосстанавливающие бактерии способны вызывать питтинговую коррозию, приводящую к перфорации труб и другого оборудования. Скорость коррозии металлов в системе заводнения в результате воздействия СВБ в отдельных случаях может возрасти в несколько раз, при этом срок службы оборудования сокращается до 0,5...2 лет вместо 15. Наличие биопленок, образующихся на поверхности металла с участием СВБ, снижает эффективность ингибиторной защиты, что приводит к дополнительным затратам [8-10].

Аморфный сульфид железа, образуемый в результате взаимодействия сероводорода с ионами железа обладает высокой адгезионной способностью и осаждается на породах продуктивного пласта вместе со слизью и бактериальной биомассой, значительно снижая проницаемость пласта-коллектора, приемистость скважин и нефтеотдачу в целом. Кроме того, сульфид железа под действием электролитов коагулируется с образованием рыхлых гидрофобных хлопьев, эти хлопья переходят в нефтяную фазу или скапливаются на границе раздела. При этом ухудшается подготовка воды и нефти, так как повышается стойкость эмульсий и, соответственно, увеличивается расход де-эмульгаторов.

1.1. Распространенность сульфатвосстанавливающих бактерий в

водах нефтяных месторождений

Вопросу о распространенности СВБ в нефтяных коллекторах посвящено огромное количество публикаций отечественных и зарубежных исследователей. Сведения о зараженности СВБ системы ППД и призабойных зон скважин нефтяных месторождений Азербайджана, Урало-Поволжья и Западной Сибири, свидетельствуют о практически повсеместном их распространении [11-16].

СВБ вносятся в пласт еще на стадии разведочного бурения вместе с закачиваемой водой, реагентами для бурения. В буровых растворах для развития СВБ создаются благоприятные условия за счет уменьшения конвекционных потоков и снижения кислородного стресса.

При интенсификации добычи нефти заводнением в пласт вместе с закачиваемой водой, содержащей естественную микрофлору, вносится огромное количество бактерий, в том числе СВБ. Время появления сероводорода в продукции добывающих скважин при первичном заражении пластов зависит от длительности формирования биоценоза в призабойных зонах нагнетательных скважин и скорости прохождения фронта нагнетаемой воды от забоев

нагнетательных скважин до добывающих. Период формирования сообщества микроорганизмов на участках месторождения, заводняемого речной водой, составляет 3-4 месяца, а скорость продвижения фронта воды от забоев нагнетательных скважин зависит от структурных особенностей коллектора и темпов разработки месторождения. При заводнении участков Самотлорского месторождения речной водой сероводород в продукции добывающих скважин появился через 1,7-5 лет в зависимости от темпов разработки [17]. Видимо, аналогичная скорость распространения СВБ по пласту имеет место и на месторождениях Урало-Поволжья.

Для высокопроницаемых пластов на основе обработки результатов обследования скважин Арланской группы предложены формулы для расчета радиуса и объема зоны активной сульфатредукции с учетом приемистости, проницаемости и пористости пласта [18]. В основе этих формул лежат представления о том, что для развития СВБ при прочих благоприятных условиях требуется наличие биообразований, состоящих из сообщества микроорганизмов и илистых частиц и, что область активных биогенных процессов совпадает с областью заиливания пласта [18].

На практике СВБ вместе с другими микроорганизмами, попадая в пласт с потоком нагнетаемой воды, проходят по коллектору и обнаруживаются в продукции добывающих скважин. Активные формы СВБ были обнаружены не только в радиусе 3-5 метров, но и при значительном удалении от забоя нагнетательной скважины [19].

1.2. Место сульфатвосстанавливающих бактерий в смешанном

сообществе микроорганизмов

Анализ литературных данных, посвященных изучению закономерностей и особенностей функционирования микроорганизмов в пласте привел к заключению, что формирование сообществ микроорганизмов в призабойной зоне и

продуктивном пласте разрабатываемого нефтяного месторождения происходит поэтапно, в результате последовательного аэробно-анаэробного окисления углеводородов и других компонентов нефти микроорганизмами [20-21].

На первом этапе заводнения в призабойной зоне формируется сообщество аэробных микроорганизмов, основными представителями которых являются углеводород- и нефтеокисляющие бактерии, сапрофиты, олигокарбофилы, метанотрофные и некоторые другие бактерии. В качестве источников углерода и энергии они используют углеводороды и другие компоненты остаточной нефти, органические вещества, содержащиеся в закачиваемой поверхностной воде и биомассу отмерших клеток бактерий. В результате их жизнедеятельности образуются продукты окисления нефти, такие как низко- и высокомолекулярные спирты, летучие жирные кислоты, углекислота и т.д., а также расходуется весь кислород, содержащийся в закачиваемой воде, т.е. создается анаэроб-ность пластовой среды [20-23].

На втором этапе окисленные продукты потребляются анаэробными группами микроорганизмов - сульфатредукторов, метаногенов, ацетогенов и других. В результате обобщения литературных данных и опубликованных экспериментальных работ нами составлена упрощенная схема, отражающая процесс формирования сообщества микроорганизмов в при забойной зоне и продуктивном пласте в результате последовательного преобразования остаточной нефти [2023] (рис. 1).

В соответствии с развитием биогенных процессов сульфатвосстанавли-вающие бактерии занимают свою экологическую нишу в цепочке трансформации органического вещества в нефтяном пласте микроорганизмами, вступая с ними в синтрофные взаимодействия. Например, обеспечение лактатокисляю-щих видов СВБ источниками углерода в пласте реализуется в бинарных син-трофных культурах [24-26]. Экспериментально доказано образование сероводорода культурой De5м//ov/6r/o с1е8и1/ипсат при потреблении органического вещества, образуемого метанокисляющими бактериями МеШЬБтт МсИо-

АЭРОБЫ

(в оборудовании и призабойной зоне)

АНАЭРОБЫ

(в пласте)

Закачиваемая вода

Кислород,

^растворенные

'органические вещества

Метано-окисляющие бактерии

Олигокарбо-филы

Сапрофиты

Т7

Углеводороды

метан

продукты окисления^ метана

компоненты нефти продукты окисл. нефти

4-

биомасса бактерий

сероводород

сульфаты

ацетат метано^

Ацетогенные бактерии

н2+со2

Жирные кислоты, спирты, альдегиды, эфиры, Н2, Си2

Сульфатвосстанав-

ливающие _бактерии

сульфиды

Метаногенные бактерии

О метан --►

Другие анаэробы

Рис. 1. Схема развития микробиологических процессов на разрабатываемом нефтяном месторождении

Обозначение: ¡§¡1 - биообразования (микробные клетки, экзополисахариды, слизь и т.д)

о\

Бропит: метанокислящие бактерии выделяют в среду формиат, который потребляется СВБ в условиях градиента окислительно-восстановительного потенциала [24]. Подобные этим процессы синтрофных взаимодействий СВБ с представителями других групп микроорганизмов могут происходить в заводняемых нефтяных пластах.

Способность СВБ к образованию консорциумов с другими микроорганизмами обеспечивает их активность в субоптимальных условиях : при повышенных температурах, отсутствии доступного субстрата и т.д. Это подтверждает наличие уникальных приспособительных способностей у СВБ к существованию в условиях нефтяного пласта.

1.3. Факторы, влияющие на сульфатредукцию в призабойной зоне и

нефтяном пласте

Органический субстрат. Концентрация органического субстрата является важнейшим фактором, оказывающим влияние на активность СВБ в водах нефтяных месторождений [27-28]. Для роста и жизнедеятельности СВБ получают энергию в результате окисления органических питательных веществ за счет редукции сульфатов в сульфид, поэтому активность, количество и виды СВБ, встречающихся на нефтяном месторождении, зависят от наличия и количества органических субстратов.

Считают, что в отношении используемых органических компонентов СВБ более ограничены, чем аэробные микроорганизмы. Для СВБ типичными субстратами являются относительно простые соединения с низкой молекулярной массой, такие как жирные кислоты, спирты, водород, т.е. в среде обитания, в том числе в такой, как заводняемый нефтяной пласт, СВБ зависимы от других бактерий, которые подвергают деструкции сложные органические соединения, поставляя субстраты для СВБ. В результате жизнедеятельности других бактерий в наибольшем количестве образуются такие продукты, как углекислый газ,

водород, ацетат, пропионат и бутират [27], которые являются хорошими субстратами для СВБ.

В ряде работ по обследованию нефтяных месторождений показано, что производные жирных кислот, в частности ацетат, обнаруживают в значительном количестве в водах призабойных зон нагнетательных скважин, где сформированы сообщества аэробных и факультативно анаэробных бактерий, окисляющих остаточную нефть. Предполагается, что этот ацетат и другие производные жирных кислот могут служить субстратами для сульфатвосстанавли-вающих бактерий [16,28].

Розанова Е.П. с соавторами на основании ряда наблюдений сделала предположение, что в пласте функции СВБ, специализирующихся на окислении лактата, заключаются в метаболизме водорода, образованными бродильными микроорганизмами, поскольку все СВБ, выделяемые на лактате, способны к потреблению водорода [14].

Потребление сульфатвосстанавливающими бактериями водорода, образованного другими видами микроорганизмов, расширяет их метаболическую многосторонность и обеспечивает гибкость СВБ в заселении широкого круга экологических условий. В отсутствии органического субстрата СВБ способны воздействовать на водород и образовывать сульфид из сульфатов без сопутствующего роста биомассы [29]. Более вероятно, что этот процесс имеет место в системе подготовки воды, в трубопроводах и коммуникациях, где находится корродируемый металл, который является поставщиком водорода для СВБ.

Наряду с перечисленными выше субстратами в качестве доноров электронов СВБ могут использовать одновалентные спирты, формиат, кислоты, имеющие разветвленную цепь атомов углерода и многие другие соединения, перечень которых постоянно пополняется.

Так, в последние годы появилась обширная информация о том, что чистые культуры СВБ способны использовать гексадекан, толуол, катехол, ин-

дол, т.е. достаточно сложные органические соединения, что позволяет им не зависеть от микроорганизмов других физиологических групп, поставляющих легкодоступные органические субстраты [30-32].

Сульфат и другие акцепторы электронов. Самым доступным естественным акцептором электронов для СВБ в нефтяном пласте являются сульфаты. В результате окисления сульфатвосстанавливающими бактериями органических субстратов образуются электроны и передаются по электронно-транспортной цепи для выработки энергии и редукции сульфату [1].

Концентрация сульфатов является вторым по значимости после концентрации органических субстратов фактором, влияющим на активность СВБ в водах нефтяного месторождения. Недостаток сульфатов ограничивает содержание и активность СВБ в водных средах. Как правило, нефтепромысловые воды содержат сульфаты в достаточном для активности СВБ количестве. На тех нефтяных месторождениях, пластовые воды которых содержат небольшое количество сульфатов, может происходить выщелачивание их из пород при разбавлении пластовых вод закачиваемыми пресными, что объясняется увеличением растворимости этих солей при снижении общей минерализации вод. По Постгейту оптимальный рост Оези1/оу1Ьпо йези^ипсат обеспечивает 100 мг/дм3 сульфата [33], а по Зобеллу скорость образования сероводорода в результате размножения клеток СВБ не тормозится, если содержание сульфата не менее 10 мг/дм [34].

Следует отметить, что СВБ способны развиваться и выделять сероводород в отсутствие сульфата, используя сульфит, тиосульфат, дитионат, гидросульфит, тетратионат, метабисульфит и другие соединения серы [1,34], что существенно расширяет ареал их существования и сероводородобразующую активность. В некоторых случаях СВБ вместо сульфата в качестве альтернативного акцептора электронов используют нитрат, в этом случае образуется не сульфид, а аммоний.

Недавно показано, что СВБ могут восстанавливать помимо сульфатов соединения железа, хрома, урана [16].

Водородный показатель и окислительно-восстановительный потенциал среды. Активность СВБ редко встречается вне пределов рН 6...9 в лабораторных условиях. Оптимум рН для большинства видов СВБ составляет 7,0...7,5. Однако в условиях с неблагоприятным рН СВБ могут формировать микрониши, в которых они достаточно защищены за счет создания буфферных систем продуктами своего метаболизма, а именно /Н2 Б и НСОз 7СОз [27].

Как указывают Бекинг и Вуд на влияние рН на СВБ в природных условиях, а также в контролируемых лабораторных культурах оказывает воздействие окислительно-восстановительный потенциал окружающей среды (ЕЬ) и другие факторы. Жизненное пространство для СВБ по Бекингу ограничено линиями стабильности воды, оптимальные условия роста для СВБ создаются при рН 6...9 иЕЬ от 0 до -350 тУ [35].

Известно, что все СВБ являются строгими анаэробами. Их чистые культуры требуют не только отсутствия кислорода для роста, но также и низкого окислительно-восстановительного потенциала - примерно 0...-100 тУ в среде. Однако исследования показали, что в аэрируемой среде, сульфатвосстанавли-вающие бактерии хотя и теряют активность, но не погибают в течение длительного времени. Предполагается, что это происходит за счет защитного действия ферментов каталазы и дисмутазы [36], а также за счет существования СВБ в анаэробных микронишах [29]. Образование и существование таких микрониш объясняется двумя причинами. Во-первых, в результате дыхания аэробных бактерий потребляется кислород и создаются анаэробные условия для СВБ. Во-вторых, сероводород, образованный СВБ, это восстановитель, который реагирует с кислородом при нормальных температурах и снижает окислительно-восстановительный потенциал среды, вот почему, однажды возникнув, колонии СВБ могут защитить себя от токсичного воздействия кислорода [27] .

Содержание и состав минеральных солей. Среди минеральных компонентов нефтепромысловых вод наибольшее влияние на сульфатвосстанавливаю-щие бактерии оказывает хлористый натрий. Соленость считают важным фактором, влияющим на зараженность пласта СВБ, так как обычно активность этих бактерий ограничена содержанием хлористого натрия ниже 10 % [34,37].

Жизнедеятельность СВБ возможна в водных средах с различной концентрацией минеральных солей. Виды СВБ, обитающие в пресных водах, выживают в рассоле с 28-30 г/дм хлористого натрия. В противоположность им гало-толерантные штаммы не могут жить в пресных водах и требуют для роста 20-30 г/дм3 хлористого натрия и иногда некоторого количества солей магния для оптимального роста [27]. Существуют также галотолерантные СВБ, растущие и в пресной и в соленой воде. Исследования Постгейта показали, что метаболическая активность отдельных видов СВБ резко убывает, если содержание

л

хлористого натрия возрастает от 50 до 100 г/дм [37].

На отношение СВБ к различным концентрациям соли влияют также температура, концентрация ионов водорода, гидростатическое давление, химический состав воды и другие факторы [27].

В табл. 1 показано влияние различной минерализации нефтепромысловой

о

воды, отобранной из НСП «Нурлино» с первоначальной плотностью 1,015 г/см и зараженностью СВБ 104 кл/дм3 при самопроизвольном нарастании ее солесо-держания в контакте с каменной солью на концентрацию жизнеспособных клеток сульфатвосстанавливающих бактерий [38].

Таблица 1

Концентрация солей, г/дм3 Плотность раствора, г/см3 Число клеток СВБ 1 з в 1 см

60 1,015 104

140 1,140 103

220 1,180 ю2

317 1,195 0

В естественных соленых средах активность сульфатвосстанавливающих бактерий иногда существует около точки насыщения соли, однако нет сообщений об экстремально галофильных СВБ, которым действительно требуется такая высокая концентрация соли для оптимального роста [27].

Очевидно, некоторые СВБ могут выносить достаточно высокие концентрации соли и жить, хотя и с пониженной метаболической активностью в среде с концентрацией соли около точки насыщения, достаточно далекой от оптимума. Метаболической активности и обмену веществ в клетках бактерий в концентрированных растворах соли препятствует осмотическое давление на клетки, в таких средах обычно длиннее стадия покоя клеток [34].

Концентрация других элементов в пластовых водах оказывает на СВБ меньшее влияние, чем хлористый натрий, гораздо важнее их наличие. По Бе-кингу и Вуду соотношение одновалентных катионов к двухвалентным не является критическим для сульфатредукции, а также не являются критическими относительные концентрации ионов хлорида, бикарбоната и сульфата [35].

Также как и другим видам бактерий для СВБ необходим фосфат. По данным Розановой [39] содержание фосфатов в нефтепромысловых водах обычно исчисляются десятыми долями мг/дм .

В качестве источника азота СВБ используют соли аммония, хотя также могут потреблять нитраты, гидроксиламин и, возможно, некоторые аминокислоты. Некоторые виды СВБ способны фиксировать газообразный азот, но этот механизм нехарактерен для нефтеносных пластов. Данных по содержанию аммиака и нитратов в пластовых водах немного. Как правило, пластовые

о

воды всегда содержат аммонийные соли более 20 мг/дм , иногда в водах с

о

высокой соленостью их количество превышает 150 мг/дм [39]. По другим

•л

данным пластовые воды содержат 87-250 мг/дм ионов аммония [29].

Для роста СВБ требуется обязательное присутствие железа - не менее 0,002% в среде, сульфатредукция может стимулироваться добавлением следов макро- и микроэлементов [40].

При опреснении пластов в результате закачки воды при заводнении следует ожидать активизации жизнедеятельности СВБ в результате создания для них более благоприятных условий и расширения жизненного пространства за счет снижения солености среды.

Температура и давление. Температурный интервал существования СВБ очень широк : от отрицательных температур в вечномерзлых почвах и в морских глубинах до температур, превышающих 100° С в глубоководных гидротермальных выходах. В нефтяных пластах жизнедеятельность и активность СВБ имеют место в более узком интервале : мезофилы рода Desulfovibrio существуют в интервале температур 25-44° С, Desulfotomaculum- при 30-37° С, верхний предел 42°С, термофилы рода Desulfovibrio существуют при температурах 50..85° С, оптимум 65° С, рода Desulfotomaculum 65...70° С, оптимум 55° С, но могут расти и при 30...37° С [34,37].

Результаты исследований последних лет существенно расширили существовавшие до недавнего времени представления о температурных пределах возможной жизнедеятельности СВБ в водах нефтяных месторождений. Получены данные, которые свидетельствуют о выделении активных СВБ из высокотемпературных нефтяных пластов, температура которых достигает 100° С [4144].

Давление также влияет на рост, размножение и физиологию клеток СВБ, в частности на скорость энзиматических реакций. При повышенном давлении у СВБ наблюдаются такие изменения в метаболизме, как, например, количество образуемого сульфида. По данным Зобелла промытые клетки Desulfovibrio, выращенные в атмосфере водорода с нормальным давлением, восстанавливают сульфат и выделяют сероводород в 3-4 раза быстрее при давлении в 100 МПа, чем при давлении в 10-30 МПа. При давлении выше 150 МПа эти реакции прекращались из-за необратимой инактивации энзиматической системы клеток СВБ [34].

Воздействие температуры и давления на СВБ обычно взаимосвязано, существует определенное "окно", в котором возможна активность СВБ [29]. Известны случаи выделения спорообразующего штамма СВБ в консорциуме с термофильным бродилыциком из морского нефтяного месторождения, имеющего температуру 60-100° С и давление 20-40 МПа [26,41]. Норвежскими учеными из пластовых вод нефтяного месторождения в Северном море, имеющего температуру пластовых вод 60-85° С при давлении 30 МПа выделены культуры термофильных бактерий, относящихся к родам Desulfotomaculum, Thermodesulfobacterium и Archaeoglobus, а также не образующую спор термофильную СВБ, окисляющую ацетат [44]. Необходимым условием функционирования таких СВБ при высокой температуре в лабораторных экспериментах является сохранение давления той среды, из которой они были выделены [42].

Химические продукты, применяемые при добыче нефти. Все более широкое распространение при добыче нефти получают процессы химической обработки скважин и промыслового оборудования с теми или иными целями : для увеличения нефтеотдачи с помощью полимеров, ПАВ и композиций на их основе, предотвращения и удаления асфальтосмолистых и парафиновых отложений, предупреждения образования или разрушения устойчивых водонефтяных эмульсий, защиты от выпадения солей, антикоррозионного ингибирования, для промывки призабойной зоны и оборудования и т.д. Перечень химических реагентов, применяемых в нефтедобыче, увеличивается с каждым годом. В системе пласт-скважина-наземное оборудование происходит их взаимодействие с сульфатвосстанавливающими бактериями, последствия которого могут носить отрицательный характер. Например, на нефтяном месторождении в Техасе после закачивания в пласт воды, содержащей полимерные субстраты, скорость коррозии возросла. Микробиологические исследования показали, что коррозия обусловлена активизацией роста сульфатвосстанавливающих бактерий, расщепляющих полимер. В результате трубы забились отложениями, состоящими из микробной биомассы, слизи, сульфидов и капелек нефти. Восстановить нор-

новить нормальную работу оборудования удалось только путем введения в пласт двух биоцидных соединений [45]. Очевидно, легче было предупредить данную ситуацию, чем бороться с последствиями. В нашей стране систематический контроль влияния на сульфатредукцию всех химических продуктов, предлагаемых к использованию в процессах нефтедобычи, отсутствует. Поэтому прогнозирование усиления активности сульфатвосстанавливающих бактерий в присутствии тех или иных химпродуктов является актуальной задачей, которая решалась в данной работе.

1.4. Методы исследования сульфатвосстанавливающих бактерий

Обнаружение и количественный учет СВБ в нефтепромысловых средах обычно осуществляют культуральными и прямыми методами.

Культуральные методы. Для оценки зараженности нефтепромысловых сред сульфатвосстанавливающими бактериями и предотвращения их воздействия на пласт и оборудование, необходимо обнаружить и выделить их из среды обитания. Для этого используют элективные питательные среды, обеспечивающие преимущественное развитие этой группы микроорганизмов, для которой характерна общность физиологических свойств.

В практике наиболее широко распространен культуральный метод десятикратных предельных разведений [46]. Сущность метода заключается в определении минимального количества посевного материала, содержащего одну бактериальную клетку. Для этого 1 см исследуемой воды стерильным шприцем вводят во флакончик, содержащую 9 см3 жидкой питательной среды. Пол

еле перемешивания из этого флакончика отбирают 1см жидкости и, соблюдая стерильность, переносят в следующий флакончик. Таким образом, готовят серию последовательных десятикратных разведений исследуемого образца воды в жидкой питательной среде, затем их инкубируют при температуре, присущей исследуемому месторождению. О росте СВБ судят по почернению пи-

тательной среды за счет образования сульфида железа в результате взаимодействия сероводорода, выделяемого СВБ, с ионами двухвалентного железа питательной среды. При этом считают, что для потемнения среды достаточно присутствия одной клетки сульфатвосстанавливающих бактерий [47]. Обработку результатов производят методом инвариационной статистики с использованием статистических таблиц Мак-Креди [46].

Для более полного выявления различных видов СВБ в водах нефтяных месторождений используют как жидкую питательную среду Постгейта "В" с лактатом натрия [47], так и среду Видделя и Пфеннига с ацетатом натрия, бути-ратом натрия в качестве источника углеродного питания [1,48]. Состав и особенности приготовления питательных сред для СВБ описаны во многих лабораторных руководствах [47,48].

Описанный выше метод предельных десятикратных разведений имеет ряд недостатков: требуется большая продолжительность культивирования (по ОСТ 39-151-83 [49]-15 суток, по стандарту ВР-38 Американского нефтяного института - до 28 суток).

С целью сокращения времени культивирования используются различные приемы: рекомендуется добавлять в питательную среду различные микроэлементы и биогенные стимуляторы, пластовую воду 20-30% по объему или хлористый натрий в количествах, примерно соответствующих его содержанию в природной воде, откуда ведется выделение бактерий. Известно о стимулирующем влиянии на СВБ различных ионов металлов: железа, присутствие которого обязательно для активности СВБ, макроколичеств марганца, молибдена [40]. Для увеличения содержания в питательной среде доступного для СВБ железа добавляют ЭДТА, который образует комплексы с железом, при этом уменьшается уровень осаждения сульфидов железа и снижается угнетение роста культуры СВБ [50]. Однако, время культивирования сульфатвосстанавливающих бактерий на этих средах является продолжительным, поэтому дальнейшее совершенствование питательных сред, позволяющее повысить точность опре-

деления при сокращении времени культивирования по прежнему остается актуальным и являлось одной из задач, которая решалась в данной работе.

Кроме основного метода десятикратных разведений используют и его разновидности, например, выращивание СВБ в трубочках, содержащих мягкую агаровую среду и серийные разведения исследуемого образца воды [51]. Результаты по численности СВБ получают подсчетом числа видимых дискретных колоний с учетом степени разведения исходной пробы. При культуральном способе обнаружения СВБ в толще агаровой среды количество сульфатвосста-навливающих бактерий характеризуется скоростью, с которой возникает потемнение [51]. Для обнаружения СВБ можно применять выращивание бактерий в больших шприцах, позволяющее наблюдать процесс роста в динамике [52].

Прямые методы. В отличие от культуральных в процессе использования прямых методов обнаружения и количественного учета СВБ их выращивания не требуется, определяют прямо число клеток СВБ или их клеточных компонентов.

При фотометрическом методе определения АТФ учитывается относительное число всех видов микроорганизмов, включая СВБ, поэтому метод чаще применим для оценки общей микробиологической зараженности нефтепромысловых вод [53].

Более специфичным является эпифлуоресцентный метод с использованием антител [54]. Антитела, помеченные специальным флуоресцирующим компонентом, могут прикрепляться только к определенным участкам поверхности клетки СВБ. При последующем просмотре в микроскоп клетки СВБ идентифицируют по флуоресцирующему зеленому ободку.

В другом методе учитываются антитела, прикрепляющиеся к специфическому ферменту, существующему только внутри клетки СВБ - аденозин-5'-фосфосульфатредуктазе [55].

В работе [51] выполнено сравнение различных методов определения численности СВБ по критериям точности, времени анализа, пригодности для

лабораторных и полевых измерений и имеющихся ограничений. Обнаружено, что при определении числа СВБ культуральными методами получаются заниженные результаты, использование расплавленного агара не обеспечивает достаточной чувствительности при малом числе СВБ, а при их большом числе -точности оценки; использование флуоресцирующих добавок применимо для сред, содержащих до 104 клеток СВБ/см3, требует 2-3 часов времени и использования дорогого специального микроскопа, наличие в исследуемых образцах взвешенных твердых частиц снижает точность результатов. Метод окрашивания с использованием антител АФС-редуктазы является быстрым (15 минут) и простым методом обнаружения и подсчета СВБ, который может быть применим в полевых условиях, но для этого необходим специальный тест-комплект. Его точность соответствует точности результатов получаемых при культивировании СВБ, но использование ограничено уровнем зараженности 10 клеток СВБ/см3. Для более точной оценки зараженности СВБ авторы рекомендуют комбинирование различных методов [51].

Об активности сульфатвосстанавливающих бактерий в пластовых средах обычно судят по содержанию их клеток в единице объема и по образованию сероводорода - основного продукта их жизнедеятельности. Индекс активности СВБ, определяется скоростью образования сероводорода в питательной среде, инокулированной исследуемым материалом. Расчет индекса активности I производится по формуле [52] :

100

1=—, (1) а

где а - время в сутках появления признаков бактериального роста - черного осадка с момента посева пробы. Индекс активности удобно использовать при сопоставительном анализе активности СВБ в различных точках исследуемой системы.

Достоверные данные об активности СВБ в нефтепромысловых средах можно получить путем оценки интенсивности сульфатредукции в изолирован-

ных пробах радиоизотопным методом с использованием меченых соединений серы (Na235S04) [47,48]. Если прирост сероводорода в сутки составляет от

о

1 мг/дм и более, то его можно определить аналитически. Если же прирост составляет десятые и сотые доли мг/дм3 сероводорода в сутки, то в пробу добавляют радиоактивный по сере сульфат и измеряют радиоактивность образующейся сульфидной серы, затем рассчитывают интенсивность редукции сульфатов [47].

Прогнозирование сероводородного загрязнения нефтяного пласта в результате жизнедеятельности СВБ имеет актуальное значение, в особенности в последнее время, в результате вступления большинства месторождений в позднюю стадию разработки. Попытка прогнозирования биогенной сульфатредук-ции, опираясь на математическую модель развития процесса, была предпринята Аметовым A.M. [56]. Приняв ряд ограничений и допущений, автор заключил, что призабойная зона нагнетательной скважины служит "генератором" сероводорода, который распространяется в глубь пласта вместе с закачиваемой водой. При прекращении поступления бактерий в пласт биоценоз может оставаться в призабойной зоне или вымываться в глубь пласта в зависимости от скорости фильтрации воды. Наиболее серьезным недостатком указанной модели является допущение о взвешенном состоянии бактерий в воде, так как большинство видов микроорганизмов формирует биообразования.

Анализ влияния всех факторов на сульфатредукцию позволяет заключить, что возможность существования жизнеспособных клеток СВБ в пласте определяется достаточностью физико-химических условий среды обитания, а наиболее лимитирующими факторами являются содержание доступного органического субстрата и сульфатов. Интенсивность сульфатредукции зависит также от времени разработки месторождения, распространенности зоны активной сульфатредукции, оборачиваемости сточных нефтепромысловых вод, от постоянства физико-химических условий в пласте, от состава и концентрации химических продуктов, закачиваемых в пласт, и других причин. Комплекс-

ный учет всех факторов позволит более точно прогнозировать загрязнение пласта биогенным сероводородом и обоснованно принимать меры по его предотвращению.

1.5. Влияние сульфатвосстанавливающих бактерий

на проницаемость пород

Поведение и жизнедеятельность СВБ в такой трехфазной системе как нефтяной пласт (нефть-вода-порода) зависит не только от физико-химических условий среды (температуры, давления, рН, минерального состава, окислительно-восстановительного потенциала и наличия питательных веществ), но и от параметров, характеризующих саму поровую систему, таких как проницаемость, пористость, геометрия и распределение пор по размерам и других. В по-ровых нефтенасыщенных средах большую роль играют такие свойства микроорганизмов как адсорбционная способность, структура, липофильность и электрокинетические свойства клеточкой оболочки [57-60].

Исследования зарубежных и отечественных ученых показали, что в нефтяном пласте микроорганизмы существуют не в виде разрозненных клеток, свободно плавающих в среде, а формируют биообразования, прикрепленные к поверхности породы, которые значительно влияют на технологический режим добычи нефти, снижают проницаемость пород и нефтеотдачу [57-61].

СВБ по своей природе относятся к типу прикрепляющихся бактерий, то есть они разрастаются колониями, прикрепляясь к поверхностям. Пробы планктонных бактерий - организмов, живущих в водных потоках, не являются полностью представительными. В работе Галбрейта и Лофгрена показано, что средние значения концентрации планктонных СВБ находятся в линейной зависимости от толщины биопленки, если последняя составляет 0,8-3,2 мм [62].

Согласно современным воззрениям развитие биопленки имеет несколько этапов [36,63]. Прикреплению микроорганизмов обычно предшествует адсорб-

ция на поверхности органических молекул, составляющих питательный субстрат для микроорганизмов. Затем следует прикрепительная фаза, в которой на число прикрепленных микроорганизмов влияют различные факторы, в частности, условия потока в основном объеме жидкости. В начальный период времени прикрепление бактерий к твердым поверхностям носит чисто физико-химический характер и является обратимым [63]. Распределение прикрепленных бактерий случайно, и дальнейшее увеличение биомассы зависит от роста бактерий [36]. На следующей стадии развития бактерии образуют специальные структуры, происходит синтез внеклеточного полисахарида. Благодаря этому экзополисахариду происходит более сильное, по сравнению с первоначальным, сцепление бактерий с поверхностью и образуется межклеточная матрица биопленки, состоящая из микроорганизмов многих видов. Количество выделяемого микроорганизмами экзополисахарида так велико, что созревшая биопленка может содержать только 10% и менее (по сухому весу) микробных клеток [36].

В естественных условиях в процессе прикрепления и роста биопленки может наблюдаться определенная последовательность микроорганизмов. В начальный момент времени биопленку образуют аэробные бактерии (в нефтяном пласте это сообщество углеводород-, нефтеокисяющих и олигокарбофиль-ных бактерий). В толще более развитой биопленки создаются анаэробные условия, то есть даже в присутствии кислорода под слоем бактериальной слизи создаются идеальные условия для роста облигатно анаэробных микроорганизмов [29,36]. Выявлено, что популяции неподвижных бактерий в биопленке остаются на постоянном уровне в течение длительного времени и не подвергаются самопроизвольному отмиранию при условии постоянства состава в основном потоке среды [36].

Считается, что среди всех видов микроорганизмов, встречающихся в пласте, СВБ оказывают наиболее отрицательную роль в снижении проницаемости породы за счет двойного воздействия. Во-первых, как и все остальные микроорганизмы они вызывают закупорку нагнетательных скважин и пласта за счет

образования бактериальной биомассы. Во-вторых, в результате взаимодействия между конечными продуктами метаболизма СВБ и растворенными солями закачиваемой воды происходит образование нерастворимых соединений, в том числе сульфида железа, которые осаждаются на поверхности породы и служат причиной ее закупорки. Если такой сульфид железа и другие осадки смачиваются нефтью, то удалить его не так просто. Шарпли, проанализировав взаимосвязь между количеством и видами бактерий при закачке воды в процессе заводнения и степенью закупорки нагнетательной скважины, назвал сульфатвос-станавливающие бактерии, железобактерии и слизеобразующие бактерии «наихудшими нарушителями проницаемости». Автор считает, что 30000 бактерий/см вызывают серьезную закупорку породы - коллектора с проницаемостью 0,02 мкм [64].

При фильтрации сточной воды, содержащей накопительную культуру СВБ, через образцы кернов франко-турнейского комплекса отмечено значительное снижение относительной проницаемости образца керна - с 23,5% до 94,6 %. Общее количество бактерий при прохождении через керн снижалось, процент задержки бактерий в кернах при фильтрации промысловых сточных вод, содержащих СВБ составлял 45-60 % [65].

Микроскопическое исследование секций керна, содержащих бактерии, показало, что проникновение бактерий неравномерно в отдельных частях одного и того же керна. Сделан вывод, что даже в кернах с низкой проницаемостью существуют поры, достаточные для прохождения микроорганизмов [66]. Моделирование процессов фильтрации живых клеток через керн показало, что бактерии могут проникать в толщу пористых коллекторов при диаметре пор более 20 мкм [66]. Апдеграфф показал, что поры должны быть как минимум в два раза больше диаметра кокков или коротких палочек, чтобы клетки могли проходить через породу без серьезных затруднений [58]. Нефтесодержащие породы, имеющие достаточное количество пор диаметром более 3 мкм будут пропускать значительное количество клеток сульфатвосстанавливающих бактерий

диаметром 0,6 мкм и длиной 3 мкм. Такие породы являются высокопроницаемыми, более 0,1 мкм2. При умеренной и высокой пористости нефтеносной породы СВБ распространяются практически с той же скоростью, что и закачиваемая в пласт вода [58].

Таким образом, можно заключить, что скорость снижения проницаемости нефтесодержащих пород зависит от их пористости, размера и геометрии пор, начальной проницаемости, гидродинамических характеристик потока, размеров и видов бактериальных клеток.

В литературе есть много сведений, свидетельствующих, что активность прикрепленных бактерий может поддерживаться значительно меньшим уровнем питательных веществ, растворенных в жидкости. Характерной особенностью микроорганизмов в биообразованиях является их более высокая устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды [59,67]. Например, лабораторные исследования на колоночной модели с песком (размер гранул 200-600 мкм, что эквивалентно высокопроницаемому пласту) показали, что уровень образования сероводорода СВБ, сформировавшими устойчивую биопленку, выше, чем полученный при исследовании в колбах [29]. Более того, после прекращения поступления питательных веществ в систему продолжалось образование небольших количеств сероводорода (1-3 мг/дм3) через 11 недель после прекращения поступления питательного субстрата - ацетата натрия. После введения порции питательных веществ через 24 часа наблюдалось повышение уровня сероводорода, то есть способность таких "проголодавшихся" культур СВБ, существующих в виде биопленки, образовывать сероводород быстро нарастает: у заселившихся в пласт СВБ трудно снизить активность, ограничивая снабжение их питательными компонентами [29].

Дальнейшее изучение влияния СВБ в комплексе с другими микроорганизмами на фильтрационные характеристики пород и поиск путей восстановления их проницаемости представляют собой актуальную задачу и рассмотрены в данной работе.

1.6. Ингибиторная защита металлов от коррозии в средах, содержащих сульфатвосстанавливающие бактерии

Промысловые опыты свидетельствуют о том, что в полевых условиях СВБ на поверхности металла находятся в ассоциации с другими микроорганизмами в виде биопленки [62]. Такие биопленки обладают гетерогенностью, как в отношении составляющих их микроорганизмов, так и физико-химических параметров, таких, например, как окислительно-восстановительный потенциал. Изучение биокоррозии в комплексных биопленках, образованных на поверхности металла, может дать результаты, более приближенные к реальным.

Очевидно, что при изучении коррозионного процесса, анализе его механизма или при оценке эффективности ингибиторов необходимо изучать неразрушенную биопленку, а не жидкостную фазу потока, так как биопленка может содержать в многие сотни раз больше микроорганизмов, чем жидкая фаза.

Процесс развития микробных обрастаний на поверхности металлических труб для закачки воды в нефтяной пласт можно изучать, помещая образцы металла в подающие воду трубы и микроскопируя их поверхность. Например, в опытах канадских исследователей сканирующая электронная микроскопия поверхности образцов показала неравномерное распределение на поверхности коррозионных отложений с различной структурой и плотностью (обнаружено по крайней мере 4 типа отложений). Клетки бактерий присутствовали в основном в отложениях пористой структуры и не встречались в тонких слоях сульфида, покрывавших большую часть поверхности образцов [68].

Обзор методов, которые могут быть использованы для обнаружения и оценки коррозионной активности микроорганизмов, выполнен в работе Гайдар ди [69], где обсуждаются возможности микроскопических методов, в том числе флуоресцентной микроскопии, качественного и количественного анализа

АТФ, эргостерина, фосфолипидов, иммунологических методов, измерения уровня дыхания, эстеразной активности и уровня биогенной сульфатредукции.

Наиболее важным с точки зрения коррозии является создание анаэробных условий в толще биопленки. Установлено, что когда толщина биопленки достигает 10-25 мкм, у основания этой биопленки создаются анаэробные условия [58]. Это говорит о том, что даже в аэробных условиях под тонким слоем слизи или биопленкой могут быть созданы идеальные условия для роста облигат-но анаэробных СВБ с вытекающими отсюда проблемами образования сульфида и коррозии. Добавим, что биопленка снабжает клетки питательными веществами и удерживает продукты коррозии в дискретных микронишах. Предполагается, что внеклеточные полимеры могут играть прямую роль в коррозии и служить веществом, в которое поглощаются электроны на катоде [36]. При образовании биопленки на поверхности металла возможно образование и функционирование эффективно действующих пар дифференциальной аэрации, что вносит дополнительный вклад в стимулирование коррозии черных металлов в присутствии бактерий.

Для предотвращения биокоррозии наилучшим решением является использование инертных, некорродирующих материалов. Можно применять катодную защиту железа жертвенным анодом или э.д.с., однако, этот метод, хотя и защищает металл, но не подавляет активность СВБ. Более того, возросший отрицательный потенциал обеспечивает дальнейшее образование водорода -донора электронов для сульфатвосстанавливающих бактерий [70]. Наиболее эффективно для решения коррозионных проблем, вызываемых СВБ, использование бактерицидов и ингибиторов-бактерицидов.

Покрывая слоем поверхность металлического оборудования, биопленки делают неэффективным воздействие ингибиторов коррозии, препятствуя образованию сплошной пленки ингибитора на поверхности металла. Обнаружено, что многие ингибиторы коррозии способны подвергаться биодеградации [71,72]. Выход может быть найден в применении ингибиторов-биоцидов, т.е.

реагентов, обладающих как ингибирующими, так и бактерицидными свойствами. Так, например, опытно-промышленные испытания показали, что при применении реагентов, обладающих комплексным действием, удельные порывы водоводов снижаются с момента начала дозировки и защитный эффект по удельным порывам составлял 75-80 % (реагенты А-1, А-2). На участке, где использовали реагент А-3, обладающий только ингибирующим действием, защитный эффект по порывам трубопроводов стабилизировался только через 2-3 месяца после применения ингибитора и составлял также 70-80 % [73].

Наблюдающуюся закономерность можно объяснить различием механизма действия реагентов. В первом случае в результате проникновения ингибитора-бактерицида в поры биопленки микроорганизмы, находящиеся в последней, погибают и прекращается генерация сероводорода под осадком, что приводит к резкому снижению скорости коррозии. При использовании реагентов, обладающих только ингибирующим действием, генерация сероводорода в порах осадка не прекращается, и защитное действие может проявиться только после завершения адсорбционных процессов и достижения молекулами ингибитора поверхности металла, на что требуется значительное время [9]. В некоторых случаях при сильной бактериальной зараженности попытка применить обычные ингибиторы без бактерицидных свойств не дает положительных результатов [10].

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ СУЛЬФАТВОССТАНАВЛИВАЮЩИХ БАКТЕРИЙ НА НЕФТЯНЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЯХ

2Л. Разработка способа обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах

Наиболее оптимальной для выделения сульфатвосстанавливающих бактерий из среды обитания является питательная среда, разработанная Постгейтом, которая содержит основные вещества для их роста [33]. Состав среды претерпел ряд усовершенствований, например, в среду стали добавлять стерильную пластовую воду, содержащую микроэлементы, и дрожжевой экстракт в качестве источника органических стимуляторов роста [52].

С целью дальнейшего усовершенствования состава питательной среды для обнаружения и выделения сульфатвосстанавливающих бактерий из пластовых вод в качестве таких стимулирующих добавок нами был изучен широкий спектр различных химических соединений: поверхностно-активные вещества, полимеры, органические кислоты, спирты, органические и неорганические соединения самария и другие вещества.

Сущность эксперимента по выявлению стимулирующих сульфатредук-цию добавок заключалась в том, что в питательную среду Постгейта вводили исследуемые соединения в низкой концентрации и инкубировали в ней культуру сульфатвосстанавливающих бактерий ВКМВ -1388. По истечении определенного срока - через 3, 5, 15 суток проводили определение концентрации клеток сульфатвосстанавливающих бактерий и количества образованного ими сероводорода в среде.

В результате скрининга выявлено химическое соединение, которое проявило наибольший стимулирующий эффект - двойной нитрат самария с пиридином. Результаты экспериментального исследования влияния двойного нитрата самария на сульфатредукцию представлены на рис. 2.

"s 650 -1

к -5

S я U S 600 -

я

с. н Я вв С. 550 -

я Я в о ч о ва 500 -

й о с.

и 450

400

концентрация сероводорода в контрольном опыте без стимулирующей добавки

-1-1-1-1-1-1-1-:-1-1

0,001 0,002 0,003 0,004 0,005 0,006 0,007 0,008 0,009 0,01

Концентрация двойного нитрата самария с пиридином, % масс.

Рис. 2. Зависимость количества образующегося биогенного сероводорода от добавки двойного нитрата самария с пиридином в питательной среде Постгейта

Обозначение:

- 3 дня инкубации

■ 5 дней инкубации

Из представленных данных видно, что введение в состав питательной среды двойного нитрата самария с пиридином в небольшом по сравнению с другими компонентами среды количестве (0,0005...0,0100 %) увеличивает их сульфатредуцирующую активность (уже на третьи сутки в среде, содержащей 0,0005 % добавки образуется столько же сероводорода, сколько на обычной среде - через 15 суток). Визуальные наблюдения показали, что в среде с добавкой ускоряется инициация роста бактерий, т.е. отмечено начало прорастания (почернение) уже через сутки, по сравнению с двумя-тремя сутками на обычной среде. Таким образом, введение стимулирующей добавки двойного нитрата самария с пиридином в питательную среду позволяет сократить время инкубирования пробы на питательной среде с добавкой и, соответственно, время, необходимое на анализ с 15 до 3...5 суток, т.е. в 3-5 раз, что существенно при большом объеме микробиологических обследований нефтепромысловых сред.

На способ обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий получено авторское свидетельство СССР № 1152261 [74]. Изобретение успешно применяется на нефтяных промыслах Урало-Поволжья и Западной Сибири с 1986 года. Экономический эффект от внедрения изобретения на промыслах

Республики Башкортостан в 1986-90гг. составил 179 808 тысяч рублей в ценах того времени, что отражено в актах внедрения авторского свидетельства.

2.2. Определение видовой принадлежности сульфатвосстанавли-

вающих бактерий методом геномной дактилоскопии

В водах нефтяного месторождения может присутствовать одновременно несколько различных видов или штаммов сульфатвосстанавливающих бактерий, обладающих различной метаболической активностью. При решении ряда проблем, связанных с защитой от биоповреждений объектов нефтяной промышленности, например, при оценке распространенности СВБ по всему пласту, возникает необходимость определения не только наличия и количества, но и таксономического положения выделенных штаммов сульфатвосстанавливающих бактерий. Для установления родовой принадлежности микроорганизмов, выделяемых из вод нефтяных месторождений, а также их видовой дифференциации, используются различные методы: традиционные культуральные, морфофизиологические, биохимические тесты, которые многостадийны, длительны, требуют большого числа повторностей, и более современные методы: на основе анализа состава клеточных жирных кислот [75], полярных липидов [76], на основе филогенетического анализа [77].

В данной работе изучена возможность использования методики идентификации видового состава микроорганизмов по РД 39-102-91 [78] для различных видов сульфатвосстанавливающих бактерий. В качестве генетических маркеров могут выступать те или иные устойчиво наследуемые и сохраняющиеся в ряду поколений признаки и свойства организма, которые поддаются количественной или качественной регистрации и способны служить индивидуальными характеристиками отдельных организмов или разных групп организмов. Развитие методов клонирования ДНК, возможность идентификации с помощью молекулярной гибридизации уникальных генов в ДНК высших орга-

низмов позволили перейти к анализу генетической вариабельности непосредственно на уровне геномной ДНК бактерий.

Метод основан на существовании гипервариабельных повторяющихся последовательностей в геномах микроорганизмов. Полиморфные последовательности легко выявляются при использовании прямого блот-гибридиза-ционного анализа гомологичных фрагментов ДНК разной длины, образующихся после гидролиза геномной ДНК рестриктазами. При блот-гибридиза-ционном анализе ДНК микроорганизмов с ДНК гибридизационного зонда выявляется уникальное распределение полос, соответствующее отдельным фрагментам ДНК, что и используется для родо- и видоспецифичной диагностики [79]. Вариабельность длины рестриктазных фрагментов можно определить у большого числа индивидуумов одновременно и относительно просто. Это позволяет проводить диагностику микроорганизмов, а также популяционные исследования в широких масштабах.

Совместно с Отделом биохимии и цитохимии УНЦ РАН нами выполнена работа по оценке возможности использования метода для решения конкретной задачи - определения таксономической принадлежности сульфатвосста-навливающих бактерий [80]. Таксономическая идентификация достигается при сравнительном анализе размеров электрофоретических фрагментов гибридизи-рующихся участков ДНК неизвестных и контрольных (известных) видов бактерий. Для идентификации микроорганизмов необходимо составить каталог длин фрагментов ДНК коллекционных культур микроорганизмов с известной родовой и видовой принадлежностью. Затем определяют по данной методике значения длин фрагментов ДНК изучаемой культуры и путем сравнения с эталоном устанавливают род и вид. Важным моментом в решении поставленной задачи стал подбор гибридизационных зондов для проведения молекулярного анализа ДНК: рибосомная ДНК Е. соН и бактериофаг М-13 содержат нуклео-тидные последовательности, гомологи которых найдены в геномах всех микроорганизмов.

Применительно к сульфатвосстанавливающим бактериям данный метод

рассмотрен впервые. Метод оценки видового состава микроорганизмов включает следующие стадии:

1. Выделение хромосомной ДНК бактерий.

2. Выделение одноцепочечной ДНК рибосомной ДНК Е. coli или бактериофага М-13 (эталонных).

3. Расщепление ДНК бактерий на фрагменты рестриктазой.

4. Фракционирование фрагментов ДНК путем электрофореза в агарозных гелях, окраска и фотографирование окрашенных гелей.

5. Перенос фрагментов ДНК на нитроцеллюлозные фильтры.

6. Гибридизация ДНК, иммобилизированной на нитроцеллюлозных фильтрах с меченой одноцепочечной ДНК бактериофага М-13.

7. Радиоавтография, т.е. экспонирование на рентгеновскую пленку, оценка длины фрагментов ДНК, специфичных для данного вида бактерий.

По указанной схеме метод опробован с использованием музейных и накопительных культур микроорганизмов - представителей микрофлоры нефтяных месторождений. Для определения полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ДНК разных видов и штаммов микроорганизмов была использована рестриктаза Bam HI. 10 мкг ДНК каждого образца расщепляли данным ферментом в течение 8-12 часов, фракционировали в 1%-ном геле агарозы, фрагменты ДНК переносили на нитроцеллюлозные фильтры и гибридизировали с ранее клонированными фрагментами рибосомной ДНК Е. coli или ДНК фага М13.

На рис.3 (фото) представлена блот-гибридизационная картина фрагментов ДНК сульфатвосстанавливающих бактерий Desulfovibrio desulfuricans (1), тионовых железобактерий Thiobacillus ferrooxidans (2), полученная при использовании рестриктазы Bam HI, и, для сравнения, маркерной ДНК фага X, расщепленной рестриктазой Hind III с известной подвижностью и молекулярным весом (3).

-г.

Заключение диссертации по теме «Разработка и эксплуатация нефтяных и газовых месторождений», Резяпова, Ирина Борисовна

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Экспериментально определено содержание сульфатвосстанавливающих бактерий в закачиваемых и попутно добываемых водах более 30 нефтяных месторождений Урало-Поволжья и Западной Сибири; проведена классификация этих месторождений по степени зараженности закачиваемых вод. Показано, что СВБ оказывают отрицательное влияние на разработку и эксплуатацию нефтяных месторождений при заводнении, а продукты их жизнедеятельности вызывают интенсивное сероводородное загрязнение нефтепромыслового оборудования.

2. Установлена возможность применения метода геномной дактилоскопии для видовой идентификации сульфатвосстанавливающих бактерий. Для количественной оценки их содержания в промысловых водах создан и внедрен на практике способ обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах (АС СССР № 1152261 Б.И. 1985.-№ 15). Применение предложенного способа позволило повысить точность количественной оценки уровня зараженности сульфатвосстанавливающими бактериями, а также значительно уменьшить сроки и материальные затраты на проведение данных анализов.

3. Испытано большое количество химических продуктов, применяемых при добыче нефти, на предмет их влияния на образование биогенного сероводорода. Составлен перечень химреагентов с указанием экспериментально полученных данных о характере и степени их влияния на сульфатредукцию коллекционных и накопительных культур СВБ. Разработан стандарт объединения СТО 03-135-84 «Влияние химических продуктов на сульфатредукцию. Методы испытаний».

4. Впервые экспериментально установлена способность сульфатвосстанавливающих бактерий подвергать биодеструкции неионогенные ПАВ и использовать продукты деструкции для построения внутриклеточных структур. Выявлены факторы, влияющие на биодеструкцию НПАВ и композиций на их основе под воздействием сообществ микроорганизмов, включающих СВБ; подобраны расчетные зависимости, описывающие кинетику процесса.

5. В лабораторных модельных условиях экспериментально установлено существенное влияние сульфатвосстанавливающих бактерий в сообществе с микроорганизмами промысловых вод на ухудшение фильтрационно-емкостных характеристик продуктивных пластов. Экспериментально показана возможность эффективного применения биоцидной обработки реагентом ЛПЭ-11в для восстановления данных характеристик пласта.

6. Обнаружен синергетический эффект при смешении биоцидов с неионо-генными и анионактивными поверхностно-активными веществами для подавления роста сульфатвосстанавливающих бактерий. Установлено оптимальное соотношение компонентов в смеси. Созданы и предложены к применению эффективные нефтевытесняющие составы с повышенной биостойкостью на основе поверхностно-активных веществ. Предложенные биоцид-ные нефтевытесняющие составы успешно прошли промысловые испытания на месторождениях Башкортостана и Западной Сибири и показали высокую технологическую и экономическую эффективность.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Резяпова, Ирина Борисовна, 1999 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. PfennigN., Widdel F., Thuper Y.G. The Dissimilatory Sulfate-reducing Bacteria.- The Procariotes.-v.l.-Berlín: Springer.-1981. - P.926 - 940.

2. Хазипов P.X., Резяпова И.Б., Силищев H.H. Биоповреждения в нефтяной промышленности // Познание, освоение и сбережение недр республики Башкортостан. Основные научные результаты по темам АН РБ в 1993 году,-Уфа, 1994.-С.76-77.

3. Резяпова И.Б. Сульфатвосстанавливающие бактерии при разработке нефтяных месторождений,- Уфа : Гилем, 1997,- 52 с.

4. Микробиологические проблемы в горючих веществах - диагностика и контроль/ комментарий Джоржа Бекеса //АНК «Башнефть» из Rohn and Haas Austria № 33 1 43452819 от 11.05.92.

5. Карасева Э.В., Молодова Е.А., Пензина М.Л., Вахрушев Л.П. Микробное повреждение буровых растворов // сб. Биоповреждения и защита материалов биоцидами. - М.,1988,- С.99-107.

6. Хазипов Р.Х., Исмагилов Т.А., Шарафутдинов Б.М., Сафонов Е.Н., Парамонов С.В. Разработка технологии защиты ПАА от биодеструкции // Нефт. хоз-во.-1992.-№12.-С. 17-20.

7. О биоразрушении неионогенных ПАВ под действием микрофлоры промысловых вод/ Охрана окружающей среды при нефтедобыче и использование водных ресурсов / Кравчук В.Н., Хазипов Р.Х. //Тр./ Башнипи-нефть.-1984.-Вып.6.-С. 84-88.

8. Липович Р.А., Гоник А.А., Низамов К.Р., Асфандияров Ф.А., Рождественский Ю.Г., Гетманский М.Д. Микробиологическая коррозия и методы ее предотвращения.-М.: ВНИИОЭНГ.-1977-(Обзорн. информ. Сер. Коррозия и защита в нефтегазовой промышленности).-49 с.

9. Кильдибеков И.Г., Асфандияров Ф.А., Низамов К.Р., Липович Р.Н. Опыт применения ингибиторов бактериальной коррозии на промыслах Башкирии // Материалы Всес. научно-технич. семинара « Особенности заражения нефтяных пластов микроорганизмами»,- М.: ВНИИОЭНГ,- 1980.-е. 62.

10. Асфандияров Ф.А., Кильдибеков И.Г., Низамов K.P. Методы борьбы с сульфатвосстанавливающими бактериями и вызываемой ими коррозией ста-ли.//о.и. Сер. коррозия и защита в нефтяной промышленности.- М.: ВНИИОЭНГ, 1983,- 30 с.

П.Розанова Е.П., Галушко А.С.Микрофлора воды бактериальных фильтров призабойных зон нагнетательных скважин нефтяного пласта при застойном режиме //Микробиология.-1987.-т. 58.- вып. 4.-С. 653-657.

12. Хазипов Р.Х., Калимуллин A.A., Матыцина О.И., Васильев А.И. Особенности заражения сульфатвосстанавливающими бактериями нефтяных месторождений Башкирии //Материалы Всесоюзного научно-техн. семинара.-М.:ВНИИОЭНГ,1980.-С.57-59.

13. Исследование процесса сульфатредукции в системе подготовки сточных вод на Кушкульском месторождении. Теория и практика применения новых методов увеличения нефтеотдачи/ Хазипов Р.Х., Матыцина О.И., Котова Т.П., Нурмухаметова З.Т. //Тр./ Башнипинефть.-1981.-Вып.62,-С.107-110.

14. Розанова Е.П., Галушко A.C., Иванова А.Б. Распространение сульфат-восстанавливающих бактерий, использующих лактат и жирные кислоты, в анаэробных экотопах заводняемых нефтяных коллекторов // Микробиология,- 1991,- т. 60,- вып. 2,- С. 360-366.

15. Розанова Е.П., Назина Т.Р. Распространение сообщества сульфатвос-станавливающих бактерий в нефтяных месторождениях Апшерона // Микробиология.- 1981,- т. 50,- вып. 3,- С. 566-570.

16. Назина Т.Н., Иванова А.Е., Голубева О.В., Ибатуллин Р.Р., Беляев С.С., Иванов М.В. Распространение сульфат- и железоредуцирующих бактерий в пластовых водах Ромашкинского нефтяного месторождения // Микробиология,-1995.-т.64, вып.2.-С.242-251.

17. Вавер В.И. Факторы, определяющие содержание сероводорода в продукции скважин, и методы борьбы с микробиологической сульфатредукцией

на нефтяных месторождениях Нижневартовского региона // Коррозия и за-щита.-1983.-№2.-С.5-6.

18. Ягафарова Г.Г., Бикчентаева А.Г., Ягафаров Р.Г. Влияние активного ила в призабойной зоне на биогенную сульфатредукцию // Нефт. хоз-во,-1982.-№ 1.-С.34-37.

19. Хазипов Р.Х., Кравчук В.Н., Наумова Т.В. Микробиологическое обследование закачиваемых и извлекаемых вод на опытных участках испытания неионогенных ПАВ // Нефт. хоз-во.-1982.-№ 5.-С. 61-63.

20. Бердичевская М.В. Влияние длительного заводнения нефтяной залежи на развитие биоценоза и активность пластовой микрофлоры // Микробиология,- 1982,-т. 51,- вып. 1.-С. 146-151.

21. Беляев С.С., Лауринавичус К.С., Образцова А.Я., Горлатов С.Н., Иванов М.В. Микробиологические процессы в призабойной зоне нагнетательных скважин нефтяных месторождений //Микробиология,- 1982,-т. 51.-вып. 6,-С. 997-1001.

22. Розанова Е.П. Сульфатредукция и водно-растворенные вещества в заводняемом нефтяном пласте // Микробиология.-1978.-т.47.-вып. З.-С. 495499.

23. Розанова Е.П., Борзенков И.А., Беляев С.С., Иванов М.В. Метаболизм низших спиртов, ацетата и бикарбоната в заводняемых нефтяных пластах // Микробиология,- 1993,-т. 62,-вып. 3,-С. 574 - 582.

24. Розанова Е.П., Назина Т.Н. Разложение ацетата бинарной синтрофной ассоциацией, включающей сульфатвосстанавливающие бактерии // Микро-биология.-1985,- т.54.-вып. 3.-С.497-498.

25. Галушко Ф.С. Образование сероводорода Desulfovibrio desulfuricans в ассоциации с метаноокисляющими бактериями // Микробиология,- 1987.т. 56,-вып. 4,- С. 691-693.

26. Rosner J.T., Torsvik N., Lien T., Graue A. Dégradation of glucose and production of H2S by a consorptium of termophilic bacteria under simulated reser-

voir conditions // Microbial Enchanc. Oil Recover Resent Adv.-1989.-P.265-276.

27. Cordruwisch R., Klelnitz W., Wlddel F. Sulfate-Reducing Bacteria and Their Economic Activities // SPE 13554.-Symp. on Oilfield and Geotermal Chemistry.-Arizona, April 9-11, 1985,-P.53-58.

28. Назина Т.Н., Иванова A.E., Благов A.B. Микробиологическая характеристика нефтяных пластов полуострова Мангышлак//Микробиология,-1993.- т.62,вып.З.-С. 583-592.

29. Herbert B.N., CilbertP.D., Stockdale Н., Watkinson R.J. Factors, Controlling the Activity of Sulfate-Reducing Bacteria in Reservoir during Water Injections // Offshore Eur. 85 Conf. Aberdeen, 10-13 Sept.-1985.-v.l.-C.l-10.

30. Aeckerberg Frank, Bak Friedhelm, Widdel Friedrich. Anaerobic oxidation of saturated hydrocarbons toC02 by a new type of sulfate-reducing bacterium //Arch. Microbiol.-l 991.-1 56, №1.-P.5-14.

31. Beller Harry R., Reinhard Martin, Crbic-Galic Dunja. Metabolic by-products of anaerobic toluene degradation by sulfate-reducing enrichment cultures //Appl. and Environ. Microbiol.-1992.-58.-№ 69.-P.3192-3195.

32. Kuever Jan., Kulmer Juergen, Jannsen Sigrid, Fischer Ulrich, Blotevogel Karl-Heinz. Isolation and characterization of a new spore-forming sulfate-reducing bacterium growing by complete oxidation of catechol // Arch.Microbiol.- 1993,- 159, №3.-P.282-288.

33. Postgate J.R. The Reduction of Sulphur Compounds by Desulfovibrio desul-furicans II Gen. Microbiol.- № 5,- 1951,- P.725-728.

34. ZoBell C.T. Ecology of Sulfate-Reducing Bacteria // Producers Monthly.-1958.-№7.-v.22.- P. 12-29.

35. Baas Becking, Wood E.J.F. Biological Processes in the Estuarine Environment. Kn. Ned. Acad. Weten. Proc.-V.58.-1955.-P.160-181.

36. Hamilton W.A. Sulfate-Reducing Bacteria and Anaerobic Corrosion// Annu. Rev. Microbiol.-v.39. -Palo Alfo Calif.-1985.P.197-217.

37. Postgate J. The Sulfate—Reducing Bacteria.- London: Cambridge University Press.-1984.

38. Гоник A.A., Сабирова A.X., Юдина Е.Г. Прогнозирование жизнедеятельности сульфатвосстанавливающих бактерий при хранении нефти в подземных хранилищах //Нефт. хоз-во.-1990,- №3.-С.60-61.

39. Розанова Е.П., Кузнецов С.И. Микрофлора нефтяных месторождений.-М.:Наука, 1974.-198 с.

40. Рубенчик Л.И. Сульфатредуцирующие бактерии. -М.:Изд.АН СССР.-1947.-94 с.

41. Magot М., Carreau L., Matheron R., Gaumette P. Thermophilic Bacteria from an Oil-Producing Well //6th Int. Symp. Microb. Ecol. (ISME-6) .-Barcelona, 6-11 Sept., 1992.-P.209.

42. Rosner J.T., Graue Arne, Lien Torleiv. Activity of Sulfate-Reducing Bacteria under Simulated Reservoir Conditions // SPEProd. Eng.-1991.-8, №2.-P.217-220.

43. Beeder Janich, Torsvik Т., Lien Torleiv. Thermophilic Acetate-Oxidising Sulfate-Reducing Bacterium from Oil Fields Waters // Int. Conf. Thermophiles: Sci. and Technol., Reykjavik, 23-26 Aug.1992.-P.59.

44. Lien Т., Beeder J., Nilsen R.K., Rosner J.T. et. al. Thermophilic Sulfate-Reducing Bacteria from Waterflooded Oil Reservoirs in the North Sea // Int.Conf. Thermophiles: Sci. and Technol., Reykjavik. 23-26 Aug.-1992.-P.53.

45. Liftman E.S. Microbiologically influenced corrosion of oilfield producing well equipment: Corrosion 87, San Francisco, Calif., March 9-13, 1987.-Pap.№ 372.-P.9.

46. Егоров H.C. Руководство к практическим занятиям по микробиологии,-1983.-М.: МГУ.-221 с.

47. Романенко В.И., Кузнецов С.И. Экология микроорганизмов пресных водоемов.-Л.: Наука, 1974.-194 с.

48. Назина Т.Н., Розанова Е.П., Беляев С.С., Иванов М.В. Химические и микробиологические методы исследования пластовых жидкостей и кернов нефтяных месторождений :Пущино,1988,- Препринт.-25 с.

49. OCT 39-151-83. Метод обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в водах нефтепромыслов. -М.: Изд-во стандартов, 1983.-13 с.

50. Hauser I.I., Holder G.F. Iron availability in mixed cultures of sulfate-reducing bacteria // Biotecnol. andBioeng. 1986.-28, № 1.-P.101-105.

51. Tatnall R.E., Stanton K.M., Eberrsole R.C. Testing for the Presence of Sulfate-Reducing Bacteria //Corrosion/88, St. Louis, M.O. Paper N88.-1988.-P.71-80 .

52. Розанова Е.П. Методы культивирования и идентификации анаэробных бактерий, восстанавливающих серу и ее окисленные соединения / Теоретические и методические основы изучения анаэробных микроорганизмов.-1978.-Пущино:АН СССР,- С. 123-134.

53.Littman E.S. Oil Field Bactericide Parameters as measured by ATP Analisis // Int. Symp. of oil Field Chemistry of the Society of Petroleum Engineers of Alme, Paper № 5312 -Dallas, TX, 1975.

54.Pope D.H.. Discussion of Methods for the Detection of Microorganisms involved in Microbiologically Influenced Corrosion .- NACE-8.-1985.-Houston.-P 275-283.

55.Sulfate-Reducing Bacteria Detection. Patent Application ICR 7780-USSN 946, 547,- Du Pont Co by J.M. Odom., L.J. Gawel, 1987.

56. Аметов A.M. Математическое моделирование биогенной сульфатредук-ции в заводняемых карбонатных нефтяных коллекторах // Изв. ВУЗов. Нефть и газ.-1981 ,-№7.-С.27-31.

57. Geesey G.G., Mittelman М.М., Lien V.T. Evalution of slime - producing bacteria in oil-field core flood experiments // Appl. and Environ. Microbiol.-1987.-53.-№ 2.-G.278-283.

58. David M. Updegraff. The effect of microorganisms on the permeability and porosity of petroleum reservoir rock // Microbial Enchanced Oil Recovery.-1982.-№ 6.-C.37-44.

59. Diekmann R., Naujoks M., Gerdes-Kuhn M., Hempul D.C. Effect of suboptimal enviromental conditions on immobilizated bacteria growing in continious culture // Biopress Eng.-1990. - v.5, № 1. -C.13-17. 60.Shaw J.W., Bramhile Wardlaw N.C., Costerton J.W. Bacterial fouling in a model core system //Appl. Fnd Environ. Microbiol.-1985.-49.-N 3.-P. 693-701.

61. Costerton J.W., Blinkinsopp S.A., Khoury A.E. Penetrability, antibiotic sensivity and bioelectric control of bacterial biofilms // 6-th Int. Symp. Microb. Ecol. (ISME-6).-Barselona, 1992.-P.123.

62. Galbraith J.V., Lofgren K.L. Update of monitoring microbial corrosion in Prudhoe Bay's produced water and seawater floods // Mat.Performans.-1987.-№l.-C.42-49.

63. Loosdrecht van M.C.M., Licema J., Norde W., Zehnder A.J.B. Bacterial adhesion: a physicochemical approach // Microbial Ecol.-1989.-17, № 1.-P1-15.

64. Sharpley J.M. Bacteria in flood water: what are they what they mean // Petroleum Eng.-l961.-33, №2.-P.55-67.

65. Зайцева T.A., Вакуленко JI.B. Изменение проницаемости коллекторных пород под влиянием микроорганизмов при захоронении сточных вод / Тр. Пермского политехнич. института. - Пермь, 1983,- 17с.

66. Cusack F., Lappin-Scott Н.М., Costerton J.W. Bacteria can plugg waterflood injection wells // Oil and Gas J.-1987.-85.-N 45.-P. 59-64.

67.Costerton J.W., Lashen E.S. Influence of biofilm on efficasy of biocides on corrosion-causing bacteria // National Association of Corrosion Engineers. -1984. -P.13-17.

68. Ferris F.G., Jack T.R., Bramhill B.J. Corrosion products, associated with attached bacteria at an oil field injection plant // Can. J. Microbiol. -1992.-38, № 12.-P.1320-1324.

69. Gaylarge Christine C. Advances in detection of microbiologically induced corrosion//Int. Biodeterior. Bull. -1990. -26, № 1. -P. 11-12.

70. Hardy J.A. Utilization of cathodic hydrogen by sulfate-reducing bacteria // Brit. Corros. J. -1983. -P. 190-193.

71. Bacterial degradation of inhibitors // 6 th Eur. Symp. Corros. Inhibitors. Ferrara.- 1985.-v.2.- P. 1091-1101.

72. Iverson Warren P. Microbial corrosion of metals // Adv. Appl. Microbiol.-v.32.- Orlando etc.- 1987.-P.1-36.

73. Кильдибеков И.Г., Сунгатуллина Ф.И., Морозов B.M., Нагуманова Л.А., Матыцина О.И. Опыт применения ингибиторов-бактерицидов для подавления сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах // Тез. докл. Третьей респ. научно-техн. конф. молодых ученых и специалистов по проблемам сбора, подготовки и транспорта нефти,- Уфа, 1978,- С. 18.

74. А.с. 1152261 СССР, МКИ С12 Q 1/04, С 12 N1/20. Способ обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах/ Хи-саева Д.А., Хазипов Р.Х., Журавлев Е.Ф., Резяпова И.Б. № 3550138/28-13; Заявлено 22.12.84; Опубл. Бюл.№ 15//Открытия.Изобретения.-1985.-№ 15,-С.198.

75. Vainshtein М.В., Hippe H., Kroppenstedt R.M. Cellular Fatty Acids of Sulfate-Reducing Bacteria: Use for Classification// AAMJ.-1993.-2, №l.-P.59-60.

76. Sokolov M.Jn., Goppenberg Th.E.. Fredrickson H.L. Polar Lipid Taxonomy of Sulfate-reducing Bacteria //6th Int. Symp. Microb. Ecol. (ISME-6).-Barcelona, 1992.-C.245.

77. Hemsen Hermie J., Wullings Bart, Akkermans Antoon D.L., Ludwig Wolfgang, Stems Aliens J.M. Philogenetic analysiss of Syntrophobacter wolumi reveals a relationship with sulfate-reducing bacteria // Arch. Microbiol.- 1993.160, № 3,- P.238-240.

78. РД 39-102-91. Хазипов P.X., Вахитов B.A., Гимаев Ф.Р. Методика идентификации видового состава микроорганизмов нефтяных месторождений.-Уфа, 1991,-12 с.

79. Рысков А.П., Токарская О.Н., Вербовская Л.В., Джинарадзе А.Г., Гинцбург А.Л., Вигангирова К.А., Шубин Ф.Н., Смирнов Г.Б. Геномная дактилоскопия микроорганизмов: использование в качестве гибридизаци-онного зонда ДНК фагаМ13 //Генетика.-1988.-24,№7,- С. 1310-1313.

80. Резяпова И.Б., Хазипов Р.Х., Вахитов В.А. Использование методов геномной дактилоскопии для идентификации микроорганизмов нефтяных месторождений // Проблемы нефтегазового комплекса России: Тезисы докладов научно-технической конф.-Уфа, 1998.-С. 127.

81. Bearden J.C. Gene.-1978.- V.6.-N3.-P. 231-234.

82. Содействие в проведении закачки биоцида ЛПЭ-11 на Уршакском месторождении: Отчет о НИР / НПО Союзнефтеотдача; Руководители Р.Х. Хазипов, H.H. Силищев.-Уфа, 1991.-73 с.

83. Хазипов Р.Х., Резяпова И.Б. Влияние химических продуктов на сульфат-редукцию. Методы испытаний: Стандарт ПО Башнефть СТО 03-135-84,-Уфа, 1984,- 24 с.

84. Плохинский H.A. Биометрия,- М.:МГУ.-1970.-367 с.

85. Хазипов Р.Х., Резяпова И.Б. Влияние неионогенных поверхностно-активных веществ на сульфатредукцию //Микробиология.-1985.-Т.54, вып.4,- С. 563-565.

86. Резяпова И.Б., Хазипов Р.Х. Биоразлагаемость и влияние на жизнедеятельность сульфатвосстанавливающих бактерий оксиэтилированного ал-килфенола в смеси с н-бутанолом //Микробиология.-1991.-т. 60, вып.5,-С.872-878.

87. Хазипов Р.Х., Резяпова И.Б. Влияние ингибиторов коррозии и деэмуль-гаторов на процесс сульфатредукции// Нефтяное хозяйство.-1985.-№ 12,-С.46-47.

88. Резяпова И.Б. Применение нефтевытесняющих агентов с учетом сульфатредукции // Проблемы разработки нефтяных и газовых месторождений и интенсификации добычи нефти: Тезисы докл. к областной научно-технической конференции,- Астрахань, 1989,- С. 65-66.

89. Резяпова И.Б. Исследование влияния химических продуктов на сульфат-редуцирующую способность СВБ // Экология, геохимическая деятельность микроорганизмов и охрана окружающей среды: Тезисы докл. VII съезда Всесоюзного микробиологического общества,- Алма-Ата, 1985.-е.156.

90. Хазипов Р.Х., Резяпова И.Б., Силищев H.H. Особенности сульфатре-дукции при применении химических продуктов в процессах добычи нефти //Нефт. хозяйство.-1991.-№6.-С.36-38.

91. Bunch R.L., Chambers G.W.// J. Water Pollut. Contr.Fed.1967.-v.39.-N2,-P.181.

92.Хазипов P.X., Кравчук B.H., Байков У.М., Касьянов В.А., Плошкина Н.В. Методика и результаты определения биоразрушения неионогенных ПАВ, применяемых для увеличения нефтеотдачи // Проблемы использования химических средств с целью увеличения нефтеотдачи пластов: VI республ. межотрасл. научно-практ. конф.-Уфа, 1981.-С. 19-20.

93. Кравчук В.Н., Хазипов Р.Х. О биоразрушении неионогенных ПАВ под действием микрофлоры промысловых вод //Охрана окружающей среды при нефтедобыче и использовании водных ресурсов / Тр. БашНИПИнефть,-1984.-Вып.68.-С.84-88.

94.Резяпова И.Б. Исследование кинетики биодеструкции НПАВ АФ 9-12 сообществами микроорганизмов нефтяных месторождений// IV Всесоюзная конференция по биоповреждениям. Тез. докл.- Н. Новгород, 1991.-С. 63.

95. Стыскин E.JL, Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография.- М.:Химия, 1986.-288 с.

96. Пустыльник Е.И. Статистические методы анализа и обработки наблюдений,-М.:Наука, 1968.-288 с.

97.Мейдональд Дж. Вычислительные алгоритмы в прикладной статистике. Пер. с англ. (Под ред. Демиденко Е.З.) М.: Финансы и статистика.-1988,-350с.

98.Фахретдинов Р.Н., Фазлутдинов К.С., Нигматуллина Р.Ф. и др. // Доклады АН СССР.-т.301.-№2,- С.355.

99. Хазипов Р.Х., Резяпова И.Б., Силищев H.H., Алмаев Р.Х.., Багманов Р.Ф. Оценка биоцидного воздействия на проницаемость закупоренных микроорганизмами керновых образцов в модельном эксперименте // В сб. Разработка

и совершенствование методов увеличения нефтеотдачи трудноизвлекаемых запасов.-Уфа : Гилем.-1998.-С.184-191.

100. Силищев H.H., Резяпова И.Б., Логинова С.А., Хазипов Р.Х.. Исследование влияния естественной микрофлоры закачиваемых вод на фильтрационные характеристики пород и эффективность биоцида по восстановлению проницаемости и увеличению коэффициента нефтеотдачи // Проблемы нефтегазового комплекса России: Тезисы докладов научно-технической конф,-Уфа, 1998.-С.126.

101. ОСТ 39-195-86. Нефть. Метод определения коэффициента вытеснения нефти водой в лабораторных условиях. -М.: Изд-во стандартов, 1986.-11 с.

102. РД 39-0147035-209-87. Методическое руководство по определению технологической эффективности гидродинамических методов повышения нефтеотдачи пластов,- М.: ВНИИ, 1987.

103. Сазонов Б.Ф. Совершенствование технологии разработки нефтяных месторождений при водонапорном режиме.-М.: Недра, 1973.-238 с.

104. Силищев H.H., Резяпова И.Б., Хазипов Р.Х.., Новоселов В.И. Биоцид-ная защита систем оборотного водоснабжения нефтехимических предприятий// Биоповреждения в промышленности. Тез. докладов конференции Совета по биоповреждениям АН РФ,- Пенза, 1993.-С.69-70.

105. Резяпова И.Б., Силищев H.H., Хазипов P.P., Нугаев Р.Я. Мониторинг биообразований оборотного водоснабжения нефтеперерабатывающих заводов // Башкирский химический журнал.-т.5.-№4.-1998.-С.62-63.

106. Силищев H.H., Резяпова И.Б., Хазипов Р.Х. Применение биоцида ЛПЭ-11в для предотвращения биоповреждений в системе оборотного водоснабжения ПО «Искож» //Башкирский экологический вестник.-№3.-1998.-С. 69-70.

107. Резяпова И.Б., Силищев H.H., Хазипов Р.Х.. Применение биоцидов для защиты ПАВ от биодеструкции // Современные средства и методы химической защиты от коррозии и биоповреждений: Тезисы докл.- Казань, 1990,- С.32-34.

108. Хазипов Р.Х., Исмагилов Т.А., Алмаев Р.Х., Силищев H.H., Шарафут-динов Б.М., Телин А.Г., Резяпова И.Б., Сафонов E.H., Асмоловский B.C., Парамонов C.B., Черепанов K.M. Инструкция по применению уротропино-вых оснований для стабилизации водного раствора полиакриламида : РД 39-5794688-288-89Р.-Уфа, 1989,- 17 с.

109. Хазипов Р.Х., Силищев H.H., Резяпова И.Б., Рзаева Ф.М., Мамед-заде У.А. Учет влияния сульфонола и его смеси с биоцидом ЛПЭ-1369 на активность гетеротрофных микроорганизмов при воздействии на пласты // Азербайджанское нефтяное хозяйство.1991.-№12.-С.48-51.

110. Резяпова И.Б., Хазипов Р.Х., Силищев H.H. Влияние сульфонола и его смесей с биоцидом Азин-6 на сульфатредукцию //Азербайджанское нефтяное хозяйство. -1992,- №5.-С.38-40.

111. Абрамзон A.A., Зайченко Л.П., Файнгольд С.И. Поверхностно-активные вещества.- Л.: Химия,- 1988,- 257 с.

112. Хазипов Р.Х., Силищев H.H., Соколова Т.А., Рзаева Ф.М., Аскерова Э.А. Исследование нефтевытесняющей способности композиции раствора сульфонола и биоцида ЛПЭ-1369 // Азербайджанское нефтяное хозяйство.-1990.-№8.-С.31-35.

113. РД 39Р-0135496-013-90. Инструкция по применению сульфонола с добавкой реагента для защиты от биологической деструкции,- Баку: АзНИПИ-нефть.-16 с.

114. Хазипов Р.Х., Ганиев P.P., Игнатьева В.Е., Герштанский С.С., Кисля-ков Ю.П., Живайкин Б.Ф. Применение неионогенных ПАВ с добавкой понизителя адсорбции и биодеструкции для повышения нефтеизвлечения // Нефт. хоз-во.-1990.-№ 12,- С. 46-49.

115. Силищев H.H., Резяпова И.Б., Поздеев О.В., Петина Н.Ф., Хазипов Р.Х. Технология совместного применения ингибиторов коррозии и биоцидов для повышения эффективности защиты от корррозии // Биоповреждения в промышленности. Тез. докладов конференции Совета по биоповреждениям АН РФ,-Пенза, 1993.-С.70-71.

116. Силищев H.H., Матяшов C.B., Новоселов В.И., Резяпова И.Б., Хази-пов Р.Х. Биоцидная добавка для повышения эффективности действия ингибиторов коррозии // ЭИ. Защита от коррозии и охрана окружающей среды. -М. : ВНИИОЭНГ, 1991.-№ 10.-С.5-7.

117. Резяпова И.Б., Силищев H.H., Хазипов Р.Х.., Нугаев Р.Я. Экологические проблемы биогенной сульфатредукции на нефтяных месторождениях // Проблемы нефтегазового комплекса России: Тезисы докладов научно-технической конф.-Уфа, УГНТУ.-1998.- С.53.

118. Повышение нефтеотдачи путем предотвращения биоповреждений в призабойной зоне и продуктивном пласте / Р.Х. Хазипов // Сб. научных трудов/ СибНИИНП «Состояние и перспективы внедрения методов повышения нефтеотдачи пластов месторождений Западной Сибири,- Тюмень. - 1990,-С.130-135.

АКТ

о внедрении результатов диссертационной работы Резяповой И.Б. «Биоповреждения при добыче нефти сульфатвосстанавливающими бактериями» на соискание ученой степени кандидата технических наук

Настоящий акт составлен в том, что результаты диссертационной работы Резяповой И.Б. использованы на более чем 30 нефтяных месторождениях Урало-Поволжья и Западной Сибири при проведении микробиологических исследований для опытно-промысловых испытаний и применения физико-химических методов повышения нефтеотдачи пластов и средств защиты от биокоррозии и биоповреждений.

При непосредственном участии Резяповой И.Б. разработана питательная среда для обнаружения сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтепромысловых средах (АС 1152261), которая с 1986 года изготовляется в лаборатории нефтяной микробиологии и применяется непосредственно в лабораторной практике или передается в ЦНИПРы нефтегазодобывающих управлений АНК Башнефть.

Так, в период с1986 по 1990 г.г. питательная среда по АС 1152261 использовалась во ВНИИ по повышению нефтеотдачи и НГДУ Арлан-нефть, Ишимбайнефть, Туймазанефть и др. со следующим экономическим эффектом:

1986 г. ВНИИ по повышению нефтеотдачи - 27361 руб.

НГДУ «Арланнефть»

- 1290 руб.

- 29230 руб.

- 3135 руб.

- 7127 руб.

1987 г. ВНИИ по повышению нефтеотдачи ОНГДУ «Ишимбайнефть» НГДУ «Туймазанефть»

1988 г. ВНИИ по повышению нефтеотдачи - 37460 руб.

1989 г. ВНИИ по повышению нефтеотдачи - 46195 руб.

1990 г. ВНИИ по повышению нефтеотдачи - 28010 руб. Итого: 179808 руб.

С 1991 г. по настоящее время экономический эффект не определялся. Кроме того, в ПО Башнефть утвержден и с 1984 года внедрен стандарт СТО 03-135-84. «Влияние химических продуктов на сульфатредукцию. Методы испытаний».

Зам. директора Зав.отделом № 3

Ф.А. Селимов В.Г. Султанов