Повышение эффективности промышленного производства хитозана с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии и разработка методики определения молекулярно-массового распределения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Гринь, Андрей Владимирович

• Гринь, Андрей Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гринь, Андрей Владимирович

Введение.

1. Литературный обзор.

1.1. Хитин как сырье для получения хитозана.

1.2. Способы получения хитозана.

1.3. Хроматографические методы в контроле качества хитозана.

1.4. Биологические свойства низкодисперсного хитозана

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Повышение эффективности промышленного производства хитозана с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии и разработка методики определения молекулярно-массового распределения»

Актуальность темы. Хитин был открыт в 1811 г. (Н. Braconnot, A. Odier), хитозан - в 1859 г. (С. Rouget), хотя свое нынешнее название получил в 1894 г. (F. Hoppe-Seyler). В первой половине XX в. к хитину и его производным был проявлен заслуженный интерес, в частности, к нему имели непосредственное отношение три Нобелевских лауреата: Е. Fisher (1903) синтезировал глюкозамин, P. Karrer (1929) провел деградацию хитина с помощью хитин аз и, наконец, W.N. Haworth (1939) установил абсолютную конфигурацию глюкозамина. В России первые работы по хитину относятся к 1933-1934 гг. (П.П. Шорыгин), хотя широкомасштабные исследования были начаты около 30 лет назад. Сегодня интерес к этим биополимерам небывало возрос. Чем больше ученые узнают о свойствах хитина и хитозана, тем шире сфера их практического использования. И с каждым годом возникают совершенно новые и неожиданные направления. К числу основных областей использования хитозана можно отнести медицину, ветеринарную медицину, сельское хозяйство, косметологию и пищевую промышленность.

Источники получения хитозана имеются во многих странах, но промышленное производство хитина и хитозана освоено преимущественно в Японии (в 1998 г. произведено 2500 т хитина и хитозан) США (производится около 1000 т хитозана в год) и Китае (около 400 т в год).

От способа получения хитозана и методов контроля зависит его качество и стандартность (К.Г. Скрябин, Г.А. Вихорева, В.П. Варламов, 2002; В.М. Быкова, С.В. Немцев, 2002; А.И. Албулов и др., 2005).

В ряде работ показаны технологические и методические проблемы получения стандартных препаратов хитозана и пути их решения (Д.В. Герасименко, 2005 и др.).

В настоящее время высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является наиболее информативным методом анализа биологически активных соединений - исследования белков, ферментов, аминокислот, пептидов, моно-, олиго- и полисахаридов и др. (Я.И. Яшин, А.Я. Яшин, 2003).

Эксюпозионная ВЭЖХ является одним из основных методов определения молекулярно-массового распределения (ММР) полимеров (Б.Г. Беленький, JI.3. Виленчик, 1978; W. W. Yau, J.J. Kirkland, D.D. Bly, 2001); ММР хитозана (J. Brugnerotto, J. Desbrieres, G. Roberts, M. Rinaudo, 2001; C.A. Лопатин, M.C. Дербенева, C.H. Куликов, В.П. Варламов, О.А. Шпигун, 2008).

Цель и задачи работы. Целью настоящей работы является разработка методов повышения эффективности промышленного производства хитозана с использованием метода ВЭЖХ и разработка методики определения ММР полимерных молекул хитозана и содержания примесных соединений.

Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:

1. Усовершенствовать отдельные технологические стадии получения хитозана и содержания примесных соединений.

2. Разработать методику определения качества хитозана с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Оценить пригодность высокосшитого ПДВБ сорбента для приготовления высокоэффективных хроматографических колонок (ВЭХК). Выбрать стандарты молекулярных масс для их градуировки.

3. Применить метод ВЭЖХ для контроля в технологическом процессе разработки и совершенствования препаратов хитозана для народного хозяйства.

4. Оценить биологическую активность полученого хитозана.

Научная новизна работы.

Впервые усовершенствован и оптимизирован технологический процесс производства хитозана с использованием экструдеров для измельчения и деацетилирования хитина.

Впервые использованы коммерческие ферментные препараты, широко применяемые в кормопроизводстве для неспецифического гидролиза хитозана и получения низкомолекулярных олигомеров.

Впервые определено ММР полимерных молекул хитозана, содержание хитозан-хитиновых полимерных молекул и хитозан-белковых комплексов в препаратах хитозана при использовании ВЭХК (150 х 3 мм), заполненной моносферическими зёрнами высокосшитого ПДВБ сорбента диаметром 10 мкм [патент России № 2295127].

Впервые в качестве элюента и для растворения проб препаратов хитозана использован 3-4 % водный раствор уксусной кислоты. Определение ММР полимерных молекул хитозана в препаратах хитозана осуществляли на рефрактометрическом детекторе по первому хроматографическому пику, а содержание хитозан-хитиновых полимерных молекула и хигозан-белкового комплекса рассчитывали по площадям второго и третьего хроматографических пиков.

Впервые установлено, что на ВЭХК с высокосшитым ПДВБ сорбентом разделяются полимерные молекулы хитозана по эксклюзионному механизму, а элюирование хитозан-хитиновых полимерных молекул и хитозан-белкового комплекса по сорбционному механизму.

Впервые определены качественные отличия промышленно выпускаемых хитозанов, полученных различными способами.

Впервые показана биологическая активность промышленно получаемых хитозанов с различной молекулярной массой, охарактеризованных по молекулярно-массовому распределению и содержанию примесных соединений.

Практическая значимость работы.

1. Оптимизированы и усовершенствованы существующие технологии промышленного производства хитозана, улучшены его физико-химические характеристики, повышена биологическая активность.

2. Разработана методика определения в препаратах хитозана ММР полимерных молекул хитозана и содержания примесных соединений при использовании ВЭХК (150 х 3 мм), заполненной моносферическими зёрнами высокосшитого ПДВБ сорбента и 3-4 % водного раствора уксусной кислоты в качестве элюента.

3. Разработанная методика позволяет проводить качественный экспресс-контроль на производстве, обеспечивая высокие характеристики препаратов хитозана.

4. Разработанная методика позволяет контролировать физико-химические процессы, протекающие в препаратах хитозана при хранении.

5. Проведённые исследования позволили произвести промышленные партии хитозана с заданными свойствами и исследовать их в качестве лечебных и профилактических препаратов в животноводстве и ветеринарии.

На защиту выносятся:

1. Способы повышения эффективности промышленного производства хитозана.

2. Исследования высокосшитого ПДВБ сорбента, размер пор 500 А, в виде моносферических зёрен диаметром 10 мкм для приготовления хроматографических колонок. Исследования по оценке подвижных фаз для разделения на ВЭХК, детектированию полимерных молекул хитозана, проведению пробоподготовки высоко- и низкомолекулярного хитозана для хроматографического анализа.

3. Исследования ММР высоко- и низкомолекулярного хитозана, содержания примесных соединений в препаратах, полученных различными способами с использованием разработанной методики.

4. Применение метода ВЭЖХ по разработанной методике для определения качественных характеристик в промышленных препаратах хитозана ЗАО "Биопрогресс" и фирмы "Флюка".

5. Исследование биологических свойств хитозана с дифференцированной молекулярной массой.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на заседаниях Ученого Совета Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности, Щелково, 20042006; Международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности. Щелково, 2005; Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства", посвященной 75-летию института экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского НАН Беларуси и 100-летию со дня рождения академика Р.С. Чеботарева, Минск, 2005; Международноц научно-практической конференции "Перспектива и проблемы развития биотехнологии в рамках единого экономического пространства стран содружества", Минск-Нарочь, 2005; VIII Международной конференции "Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана", Казань, 2006; Международной научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов", Щёлково, 2007; конференции "Основные проблемы ветеринарной медицины и стратегия борьбы с заболеваниями сельскохозяйственных животных в современных условиях", Махачкала, 2007; Всероссийском симпозиуме "Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях", посвящённом юбилею профессора О.Г. Ларионова, Москва-Клязьма, 2007; Всероссийском симпозиуме "Хроматография и хромато-масс-спектрометрия", посвящённом 100-летию со дня рождения профессора А.В. Киселёва, Москва-Клязьма, 2008; IX Международной конференции "Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана", Ставрополь, 2008.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе патент РФ.

Внедрение. В 2006-2008гг. изготовлены и паспортизированы по разработанной методике 80 кг низкомолекулярного хитозана, полученного путем ферментативного и химического гидролиза, 60 кг сукцината хитозана, 40 кг гидрохлорида хитозана. Изготовлена опытная партия зубной пасты с хитозаном в количестве 4 кг.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Гринь, Андрей Владимирович

5. Выводы

1. Усовершенствована технология получения хитозана, повышена стабильность качественных показателей получаемых продуктов, снижены затраты сырья в 2,8 раза и энергоемкость процесса в 4-8 раз.

2. Получен низкомолекулярный хитозан методом неспецифической деполимеризации хитозана с помощью коммерческих ферментных препаратов.

3. Определены ММР полимерных молекул хитозана с ММ 504 Да — 2000 кДа, содержания хитозан-хитиновых полимерных молекул и хитозан-белковых комплексов в препаратах хитозана на ВЭХК с высокосшитым ПДВБ сорбентом в виде моносферических зёрен диаметром 10 мкм. В качестве элюента использован 3-4 %-й водный раствор уксусной кислоты.

4. Разработана методика, позволяющая проводить исследования качества препаратов произведенного хитозана и коммерческих образцов после продолжительного хранения.

5. Проведены исследования по оптимизации молекулярной массы и молекулярно — массового распределения хитозанов, применяемых в животноводстве, ветеринарии и биотехнологии.

6. Скармливание хитозана телятам повышало привесы живой массы на 12,7% и 13,6% после 3 и 5 месяцев откорма, соответственно, по сравнению с контролем.

7. Хитозан обладает высокой антимикробной активностью в отношении микобактерий М. Smegmatis и грибов Penicillium vermaesseni.

8. Показано, что хитозан в качестве ранозаживляющего средства эффективен при лечении ран различной этиологии.

1.5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ литературных сведений показывает расширение спектра направлений и объёма использования хитозана и его производных. В народном хозяйстве постоянно возрастает потребление и совершенствуются способы получения хитозана, различающегося по своим свойствам. Разрабатываемые и внедряемые технологии ориентируют на снижение энергозатрат, ресурсосбережение, повышение экологической чистоты производства. Все это достигается за счет применения современных технических средств и автоматизации процессов.

Разрабатываются новые методы оценки качества хитозана. Со второй половины XX века быстрыми темпами идет внедрение хитозана и продуктов на его основе во многие сферы народного хозяйства, лавинообразно расширяются направления исследования этого полимера. По оценкам специалистов хитозан станет одним из основных полимеров ХХЗ века.

Поэтому разработка и усовершенствования новых методов исследования хитозана, оценки его свойств, совершенствования промышленных технологий его производства, и расширение областей применения, применения, являются актуальными задачами для научных исследований, что, несомненно, имеет важное народно-хозяйственное значение.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

Использованное оборудование.

Хроматографическую систему, состоящую из следующих частей: насосы высокого давления ("Кнауер", Германия), которые обеспечивают расходы элюента в изократическом и градиентном режимах 0,1-10,0 мл/мин; инжектор ("Кнауер", Германия) с объёмом дозирующей петли 10 и 20 мкл; хроматографическая колонка из стекла (150 мм х 3 мм) с металлическими фильтрами, заполненная высокосшитым ПДВБ сорбентом с размером пор 500 А, в виде моносферических зёрен диаметром 10 мкм; дифференциальный рефрактометрический детектор RIDK-102 с проточной кварцевой кюветой объемом 10 мкл ("Laboratorni pristroje prana", Чехословакия); ультрафиолетовый детектор — спектрофотометр 195-900 нм с проточной кварцевой кюветой объемом 7 мкл ("Хитачи", Япония); программа "Экохром" с интерфейсом, обеспечивающая соединение детекторов с компьютером для записи и расчёта хроматограмм (разработана ведущим конструктором Института органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН Бойцовым В.Н.); самописец TZ-4620 ("Laboratorni pristroje prana", Чехословакия). Пробы вводили с помощью стеклянного микрошприца объёмом 25 мкл (Hamilton, США).

Устройство для набивки колонок для ВЭЖХ (Россия); колонки из стекла длиной 150 мм, внутренним диаметром 3 мм с металлическими фильтрами (Чехословакия).

Высокосшитый ПДВБ сорбент, с размером пор 500 А, в виде моносферических зёрен диаметром 10 мкм синтезирован Сочилиной К.О. и Сочилиным В.А. в соответствии с [32] АНО "Синтез полимерных сорбентов"

Упаковку хроматографических колонок из стекла высокосшитым ПДВБ сорбентом в виде моносферических зёрен диаметром 10 мкм осуществляли совместно с Хабаровым В.Б. и Прониным А.Я. в соответствии с [45] в лаборатории физико-химических основ хроматографии и хромато-масс-спектрометрии Института физической химии и электрохимии им. А.Н. Фрумкина РАН.

Для градуировки ВЭХК с ПДВБ сорбентом использовали стандарты молекулярных масс декстранов Т-серии с ММ 504 Да - 2000 кДа фирмы "Serva" [181].

Для измерения рН использовали рН-метр-иономер "Экотест-2000" (НПП "Эконикс", Россия). Центрифуга марки OTP 101К; ультратермостат марки <<Sanyo»[50].

Лабораторные исследования проводили в двухшнековом экструдере фирмы "Berstorff" (Германия) в течение 3 мин при различной температуре (5-180°С) и влажности полимера (5 и 70 %). Дезацетилировали хитин при 180 °С 5-кратным мольным избытком NaOH с последующей очисткой полученного хитозана. В очищенных и высушенных образцах весовым методом определяли содержание растворимой в 0,1 М НС1 фракции. Гранулометрический анализ проводили с использованием набора сит [167].

Микрофотографии получены на растровом электронном микроскопе JSM-5300LV фирмы "Jed"[67].

Получение коллоидного хитина краба: 20 г хитина краба заливали 200 мл 85% ортофосфорной кислоты, размешивали и оставляли на 24 ч при комнатной температуре. Далее смесь прогревали на бане при температуре 40-50°С в течение 30 мин, после чего добавляли дистиллированную воду и фильтровали через стеклянный фильтр. Коллоидный хитин отмывали до нейтрального значения рН. Содержание сухого вещества, определенное после лиофильного высушивания аликвоты суспензии, составило 10 мг/мл. Использован крабовый высокомолекулярный хитозан (СД 85%, MM (Mw) 790 кДа), предоставленный ВНИТИБП и ЗАО "Биопрогресс".

Для сравнительных исследований использовали три образца хитозана низкой, средней и высокой вязкости фирмы "Флюка" (Япония)[196].

Хитиназную активность определяли по количеству восстанавливающих Сахаров по реакции с 3,5-динатросалициловой кислотой [64], используя в качестве субстрата коллоидный хитин.

А=показание прибора' 3/0,11 0,22 15 (мк моль/мин мл ), где

15 - время реакции (мин);

0,11 - коэффициент прибора;

0,22 — молекулярный вес N-ацетил-Б-глюкозамина;

3 - разведение реакционной среды.

Определение хитобиазной активности: 0,5 мл п-нитрофенил-ГЧ-ацетил-В-D-глюкозаминида в ОД М Na-фосфатном буфере рН 6,5 с концентрацией 1 мг/мл инкубировали с 0,5 мл раствора фермента в том же буфере при 37 С в течение 15 мин. Реакцию останавливали добавлением 2,5 мл 0,5 М Na2C03. Измеряли оптическое поглощение на спектрофотометре "Spekol-11" (Германия) при длине волны (А,) 440 нм. За единицу активности принимали количество фермента, выделяющегося 1 мин в условиях опыта.

Активность рассчитывали по формуле:

A=D4o5 ' V0/18,5" Ve' t (uM п-нитро фенола/ мл мин), где

Vo-объем реакционной среды (мл);

Уе-объем ферментного препарата (мл); t-время реакции (мин);

18,5-коэффициент молярной экстинкции п-нитрофенола или A=D405 'Уо/18,5 Ve t с (uM п-нитрофенола/мг мин), где с-концентрация белка в ферментном препарате (мг/мл). Удельная активность F выражали в единицах на мл раствора или на мг белка.

Протеазную активность определяли по количеству растворимых продуктов гидролиза, используя в качестве субстрата азоказеин: ПА=А44о/время инкубации (ед/мл).

Степень деацетилирования (СД) хитозана определяли методом кондуктометрического титрования [73]. Для этого навеску образцов хитозана (50-100 мг) суспендировали в 5 мл 0,1 н HCI и 25 мл дистиллированной воды. Полученный раствор титровали 0,1 М NaOH, добавляя его порциями по 0,1 мл через каждые 30 сек при постоянном перемешивании. Количество щелочи в мл, необходимое для титрования свободных аминогрупп, определяли из графика зависимости электропроводности раствора от объема щелочи, рассчитывая «плато» на двоякоизломанной кривой титрования. Расчет СД вели по формуле: СД=Мх'УШр+(Мх+Мхт)-У1Ч х 100%=203'V'N/p+42'VN х 100%, где: Мх - молекулярная масса звена хитина; Мхщ - молекулярная масса звена хитозана;

V - разница объемов NaOH («плато»), определяем из графика, мл; N - нормальность NaOH; р - навеска хитозана, мг.

2.2. Усовершенствование технологии производства хитозана.

2.2.1. Усовершенствование технологии производства хитозана с высокой молекулярной массой.

Деацетилароваиие хитина экструзионным способом.

Как уже было отмечено в литературном обзоре, среди производных хитина наиболее изучен хитозан - продукт дезацетилирования хитина, получаемый обработкой хитина концентрированными водными растворами NaOH. При всех имеющихся различиях известным способам получения хитозана присуши общие недостатки: использование большого избытка агрессивных дезацетилирующих реагентов и, как следствие этого, необходимость утилизации сточных вод для обеспечения экологической чистоты процесса.

Разработка новых методов синтеза производных хитина, в частности хитозана, является одним из перспективных направлений современной химии полисахаридов.

Поскольку в условиях совместного воздействия высокого давления и сдвиговых деформаций протекают реакции получения некоторых производных целлюлозы в тех случаях, когда все компоненты реакции являются твердыми веществами, можно было ожидать, что в таких условиях будет происходить взаимодействие в твердой фазе между другим представителем класса полисахаридов — хитином и щелочью с образованием хитозана.

Полученные результаты по дезацетилированию хитина в твердом состоянии при различных молярных соотношениях и различных температурах представлены в таблице 1. Как видно из приведенных данных, увеличение избытка (количества) NaOH приводит к повышению степени дезацетилирования (СД) и растворимости получаемых продуктов. Для получения практически полностью дезацетилированного продукта с растворимостью 90 % достаточным является 5-кратный мольный избыток едкого натра, в то время как в известных способах получения хитозана используют не менее 10 молей NaOH на 1 моль хитина.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гринь, Андрей Владимирович, 2008 год

1. Беленький Б.Г., Виленчик JI.3. Хроматография полимеров. М.: Химия, 1978, с. 139-145.

2. Бондаренко В.М., Червинец В.М., Воробьев А.А. Роль персистирующих условнопатогенных бактерий в патогенезе язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003. № 4. С. 11-17.

3. Быков В.П. Состояние и перспективы развития производства хитина, хитозана и продуктов на их основе из панциря ракообразных // Материалы Пятой конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». -М.: ВНИРО. 1999. С. 15-17.

4. Варламов В.П. Антибактериальная активность водорастворимых низкомолекулярных хитозанов в отношении различных микроорганизмов // Прикладная биохимия и микробиология.-2004.-Т.40.-№3.-С.301-306.

5. Варламов В.П., Ильина А.В., Банникова Г.Е., Немцев С.В., Ильин Л.А., Чертков К.С., Андрианова И.Е., Платонов Ю.В., Скрябин К.Г. Патент РФ № 2188829. Способ получения низкомолекулярного хитозана для противолучевых препаратов / Опубл. в Б.И. 2002. - № 25.

6. Варламов В.П., Стояченко И.А., Буданов М.В. Патент РФ № 2073016. Способ получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана / Опубл. в Б.И. 1997. -№4.

7. Герасименко Д.В., Авдиенко И.Д., Банникова Г.Е., Зуева

8. Горовой Л.Ф., Косяков В.Н. Сорбционные свойства хитина и его производных // Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. -М.: Наука. 2002. С. 217246.

9. Етсуко Накао (Япония). Патент РФ № 2057760. Олигомер хитина или хитозана и способ его получения./ Опубл. в Б.И. 1996. - № 10.

10. Ильина А.В., Варламов В.П., Мелентьев A.M., Актуганов Г.Э.

11. Деполимеризация хитозана хитинолитическим комплексом бактерии рода Bacillus sp. 739 // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. Т. 37. № 2. С. 160-163.

12. Ильина А.В., Татаринова Н.Ю., Тихонов В.Е., Варламов В.П. Внеклеточные протеиназа и хитиназа, продуцируемые культурой Streptomyces kursanovii II Прикладная биохимия и микробиология. 2000. Т. 36. №2. С. 173-177.

13. Ильина А.В., Ткачева Ю.В., Варламов В.П. Деполимеризация низкокомолекулярного хитозана ферментным препаратом Целловиридин Г20Х // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. Т. 38. №2. С. 132-135.

14. Кайминын И.Ф. Физико-химические свойства хитозана и возможности его практического использования // Матер. V Междунар. конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». -М.: ВНИРО. -1999.-С.230-231.

15. Кленкова Н.И. Структура и реакционная способность целлюлозы.-JL: Наука. Ленинградское отделение, 1976.- с. 152-191.

16. Кочкина З.М., Чирков С.Н. Влияние производных хитозана на репродукцию колифагов Т2 и Т7 // Микробиология. 2000. Т.69. № 2. С. 257260.

17. Кочкина З.М., Сургучева Н.А., Чирков С.Н. Инактивация колифагов производными хитозана // Микробиология.-2000.-Т.69.-№2.-С.261-265.

18. Кулев Д.Х., Львова Е.Б. Хитинсодержащая пищевая добавка из мицелиальной биомассы Aspergillus niger II Матер. VI Междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». -М.: ВНИРО. 2001. С. 204-207.

19. Куприна Е.Э., Водолажская СВ. Способы получения и активации хитина и хитозана // Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. -М.: Наука. 2002. С. 44-63.

20. Максимов В.И., Родоман В.Е., Лунцевич В.Г. Фитоактивные хитиновые соединения (Обзор) // Прикладная биохимия и микробиология. 1997. Т. 33. №4. С. 355-362.

21. Максимов В.И., Денисов В.М., Макаров Н.В. Патент РФ № 1571047. Способ получения водорастворимых олигосахаридов / Опубл. в Б.И. 1990. - № 22.

22. Маслова Г.В. Теория и практика получения хитина электрохимическим способом // Хитин и хитозан: Получение, свойстваи применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. — М.: Наука. 2002. С. 24-43.

23. Мелентьев А.И., Актуганов Г.Э. Выделение, очистка и характеристик^-хитиназы Bacillus sp. 739 // Прикладная биохимия и микробиология. 1999. Т 35. № 6. С. 624-628.

24. Пириева Д.А., Чигалейчик А.Г., Тиунова Н.А., Рылкин С.С Физиолого-биохимические свойства Actinomyces kurssanovii активного продуцента хитиназы // Микробиология. 1977. Т. 46. № 4. С. 661 — 665.

25. Плиско Е.А., Нудьга JI.A. Хитин и его химические превращения /*У Успехи химии. 1984. Т. 46. № 8. С. 14704487.

26. Порфирьева О.В., Юсупова Д.В., Зоткина H.JL, Соколова Р.Б, Габдрахманова JI.A. Хитинолитический комплекс Serratia marcesceixsи особенности его биосинтеза//Микробиология. 1997. Т. 66. № 3. С. 347-353.

27. Пронин А.Я., Хабаров В.Б., Оспенникова О.Г., Пикулина JI.B., Антипине

28. JI.M., Ларионов О.Г. Патент РФ № 2280252. Способ определения молекулярно— массового распределения олигомеров этоксисилоксанов в гидролиз ованных je^ негидролизованных этилсиликатах / Опубл. в Бюл. № 20, 2006 г.

29. Роговина С.З. Химическая модификация природных полисахаридов целлюлозы, хитина и хитозана в твердой фазе под действиезкя: сдвиговых деформаций: Дисс. Доктора хим. Наук. Москва. 2003. 163с.

30. Сео С.-Б., Рю Ч.-С, Ким Х.-Б., Ан Г.-В., Джо Б.-К., Каджиучи "Г. Получение многофункционального низкомолекулярного хитозана jetего применение в косметике // Косметическая химия. 2003. № 1. С. 26-30.

31. Сочилина К.О., Сочилин В.А. Патент РФ № 2163911. Способ получениесорбентов для хроматографии. Опубл. в Бюл. № 7, 2001 г.

32. Степнова Е.А., Тихонов В.Е., Лопатин С.А., Варламов В.П., Ямсков Зависимость фунгицидной активности хитозана от его молекулярного веса. Вестник Московского университета им. М.В. Ломоносова. Серия 2. Химия. 200~7. Т. 48. №5. С. 314-316.

33. Стояченко И.А. Выделение, очистка хитиназ Str. kurssanovii и ферментативное расщепление хитина и хитозана. Диссертация к.х.н. Институт Биохимии. 1992. 169с.

34. Тиунова Н.А. Хитинолитические ферменты микрорганизмов // Успехииологической химии. 1989. Т. 30. С. 199-219.

35. Тюпенко Г.И., Скорикова Е.Е., Зязин А.Б. Электрофорез хитозана при лечении заболеваний пародонта // Матер. VI Междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана». -М.: ВНИРО. 2001. С. 241248.

36. Тютерев C.JI. Молекулярные механизмы действия хитозана вкачестве средства, повышающего болезнеустойчивость растений // Материалы Седьмой Междунар. конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». -М.: ВНИРО. 2003. С.118-121

37. Усманов Т.И., Рашидова С.Ш., Ашуров Н.Ш., Султанов А.Ж. Исследование микроструктуры цепи хитозанов методом ЯМР-спектроскопии// Материалы Пятой конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана».- М. ВНИРО, 1999. С.263-265.

38. Феофилова Е.П. Клеточная стенка грибов.-М.: Наука. 1983. 315с.

39. Хабаров В.Б., Пронин А.Я., Антипин JI.M. Некотрые особенности хроматографического поведения олигомеров кремнийорганических соединений.// Всероссийский симпозиум "Хроматография и хроматографические приборы". Сборник тезисов. М. 2004. С. 101.

40. Хабаров В.Б., Пронин А.Я., Буряк А.К. Патент РФ № 2330280. Способ определения форм существования и молекулярно-массового распределения полимерных молекул кремниевой кислоты в геотермальных водных растворах / Опубл. в Бюл. № 21, 2008 г.

41. Хабаров В.Б., Пронин А.Я., Ермаков В.В., Буряк А.К., Хабаров М.В. Патент Рф № 2278379. Способ приготовления высокоэффективных колонок с полимерными сорбентами для жидкостной хроматографии / Опубл. в Бюл. № 17, 2006 г.

42. Химическая энциклопедия. М., 1988. Т. 1. С. 147.

43. Чирков С.Н. Противовирусная активность хитозана // Прикладнаябиохимия и микробиология. 2002. Т. 38. № 1. С. 5-13.

44. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Высокоэффективная жидкостная хроматография.

45. Состояние и перспективы. Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева "100 лет хроматографии", 2003, т. XLVII, № 1, с. 64-79.

46. Allenmark S.G., Andersson S.// Chromatogr., 666, 167-179, 1994.

47. Alonso M.J., Sanchez A. The potential of chitosan in ocular drug delivery //J. Pharm. Pharmocol. 2003. V. 55. № 11. P. 1451-1463.

48. AlsarraLA., Betigeri S.S., Zhang H., Evans B.A., Neau S.H. Molecular weight and degree of deacetylation effects on lipase-loaded chitosan bead characteristics // Biomaterials.-2002.-V.23.-P.3637-3644.

49. Anthonsen M.W., Verum K.M. Solution properties of chitosans: Conformation and chian stiffness with different degress of N-acetylation // Carbohydrate Polymers, 1993. -V. 22. — P. 193-201.

50. Bacon A., Makin J., Sizer P.J., Jabbal-Gill I., Hinchcliffe M., Ilium L., Chatfleld S., Roberts M. Carbohydrate biopolymers enhance antibody responses to mucosally delivered vaccine antigens // Infec. Immunity. 2000. V. 68. № 10. P. 5764-5770.

51. Berger J., Reist M., Mayer J.M., Felt O., Gurny R. Structure and interactions in chitosan hydrogels formed by complexation or aggregation for biomedical applications //Eur. J. Pharm. Biopharm. 2004. V. 57. № 1. P. 35-52.

52. Berger J., Reist M., Mayer J.M., Felt O., Peppas N.A., Gurny R. Structure and interactions in covalently and ionically crosslinked chitosan hydrogels for biomedical applications //Eur. J. Pharm. Biopharm. 2004. -V. 57. P. 19-34.

53. Berth G., Dautzenberg H. The degree of acetylation of chitosans and its effect on the chain conformation in aqueous solution // Carbohydr. Polym. -V.47. -2002. -P.39-51.

54. Bough W.A., Solter W.L., Wu A.C.M. et al. // Biotechnol., Bioengin. 1978. V. 20.-P. 1931-1943.

55. Brugnerotto L, Lizardi J., Goycoolea F.M., Argiielles-Monal W., Desbrieres J. An infrared investigation in relation with chitin and chitosan characterization //Polymer. 2001. V. 42. P. 3569-3580.

56. Brugnerotto J., Desbrieres J., Roberts G., Rinaudo M. Characterization of chitosan by steric exclusion chromatography / J. Polymer, 2001, v. 42, p. 9921-9927.

57. Brurberg M.B., Eijsink G.H., Haandrikman F.J. Chitinase В from S.marcescens BJL 200 is exported to the periplasm without processing // Microbiol. 1994. V.141. №2. P.123-131.

58. Budanova N., Shapovalova E., Lopatin S., Varlamov V., Shpigun O. // Chromatographia. 2004. -V. 59. -N 11/12. -P. 709-713.

59. Byun H.G., Kim Y.T., Park P.J., Kim S.K. // Carbohydr. Polym. 2005. V. 61. -P. 198-202.

60. Carunchio V., Girelli A.M., Messina A. // J. Chromatogr., 23, 731-735, 1987.

61. Cass Q.B., Bassi A.L., Matlin S.A. // Chirality, 8, 131-135, 1996.

62. Chatelet C, Damour O., Domard A. Influence of the degree of acetylation on some biological properties of chitosan films // Biomaterials. 2001. V. 22. P. 261-268.

63. Chimiak V., Poionski J. // J. Chromatogr., 115, 635-641, 1975.

64. Chitin Handbook / Eds. Muzzarelli R.A.A., Peter M.G. Grottammare: Atec Edizioni. 1999. P. 534.

65. Choi B.-K., Kim K.-Y, Yoo Y.-J., Oh S.-J., Choi J.-H., Kim C.-Y. In vitro antimicrobial activity of a chitooligosacharide mixture against Actitinomyces emcomitans and Streptococcus mutants II Int. J. Antimicrob. Agents.-200l.-V. 18.-P.553-557.

66. Chung Y.C., Wang H.L., Chen Y.M., Li S.L. Effect of abiotic factors on the antibacterial activity of chitosan against waterborne pathogens // Bioresour. Technol.-2003.-V.88.-№> 3.-P.179-184.

67. Cuero R.G. Antimicrobial action of exogenous chitosan // EXS.-1999.-V.87.-P.315-333.

68. Davankov V. //Adv. Chromatogr., 18, 139-144, 1980.

69. DomarA.//Ibid. 1993.-N2.-P. 10-15.

70. Felt O., Carrel A., Baehni P., Buri P., Gurny R. Chitosan as tear substitute: a wetting agent endowed with antimicrobial efficacy // J. Ocul. Pharmacol. Ther.-2000.-V.16.-№3.-P.261-270.

71. Feofilova E.P., Mar'in A.P., Tereshina V.M., Nemsev D.M., Kozlov V.P. Role of components of cell walls in metal uptake by Aspergillus niger II Res. Environ. Biotech.-2000.-V.3.-P.61-69.

72. Focher В., Naggi A. et al. Chitosans from Euphausia superba. 2: Characterization of solid state structure // Carbohydr. Polym. 1992. -V. 18. -N 1. P. 43-49.

73. Foster A.B., Hackman R.H. // Nature. 1957. V. 180. - P. 40-44.

74. Franko R, Senso A., Minguillon C., Olivtros L. // J. Chromatogr., 796, 265-272, 1998.

75. Gil G., del Monaco S., Cerrutti P., Galvagno M. Selective antimicrobial activity of chitosan on beer spoilage bacteria and brewing yeasts // Biotechnology Letters.-2004.-V.26.-P.569-574.

76. Guggi D., Kast C.E., Bernkop-Schnurch A. In vivo evaluation of an oral salmon calcitonin-delivery system based on a thiolated chitosan carrier matrix // Pharm. Res. 2003. V. 20. № 12. P. 1989-1994.

77. Graslund S., Nordlund P., Weigelt J. et al. Protein production and purification // Nature Methods. 2008. V. 5. - N 2. - P. 135-145.

78. Harpster M.H., Dunsmuir P. Nucleotide seguence of the chitinase В gene of S.marcescens QMB 1466 //Nucl. Acids Research. 1989. V.17. № 13. P.5395-5402.

79. Heterogeneous N-deacetylation of chitin in alkaline solution / K.L.B.Chang, G. Tsai, J. Lee, W.-R. Fu//Carbohydr. Res. 1997. -V. 303. P. 327-332.

80. Hirano S., Matsumura T. // Carbohydr. Res. 1987. V. 165. - P. 12-122.

81. Howling G.I., Dettmar P.W., Goddard P.A., Hampson F.C., Dornish M, Vood E.J. The effect of chitin and chitosan on the proliferation of human skin ibroblasts and keratinocytes in vitro // Biomaterials. 2001. V. 22. P. 2959-2966.

82. Hsu S., Whu S.W., Tsai C-L., Wu Y.-H., Chen H.-W., Hsieh K.-H. Chitosan as scaffold materials: effects of molecular weight and degree of deacetylation // J. Polymer Research. 2004. V. 11. P. 141-147.

83. Huang M., Khor E., Lim L.-Y. Uptake and cytotoxicity of chitosan molecules and nanoparticles: effects of molecular weight and degree of deacetylation // Pharmaceutical Research. 2004. V. 21. № 2. P. 344-353.

84. Isogai A. Molecular mass distribution of chitin and chitosan // In book: Chitin handbook. Ed.: R.A.A. Muzarelli, M.G. Peter Italy: Atec, Grottamare. -1997. -P. 103108.

85. Jeon Y.J., Kim S.K. Production of chitooligosaccharides using an ultrafiltration membrane reactor and their antimicrobial activity // Carbohydr. Polym. -V.41. -2000. -P.133-141.

86. Jia Z., Shen D., Xu W. Synthesis and antibacterial activities of quaternary ammonium salt of chitosan // Carbohydr. Res.-2001.-V.333.-P.1-6.

87. Juang R-S., Shao H-J. A simplified equilibrium model for sorbtion of heavy metal ions from aqueous solutions on chitosan // Water Research. -V.36, N12. -2002. -P.2999-3008.

88. Kato Y., Onishi H., Machida Y. Application of chitin and chitosan darivatives in the pharmaceutical field // Curr. Pharm. Biotechnol. 2003. V. 4. № 5. P. 303-309.

89. Kelly H.M., Deasy P.B., Ziaka E., Claffey N. Formulation and preliminary in vivo dog studies of a novel drug delivery system for the treatment of periodontitis // Int. J. Pharm. 2004. V. 274. № 1-2. P. 167-183.

90. Khor E., Lim L.Y. Implantable applications of chitin and chitosan // Jiomaterials. 2003. V. 24. P. 2339-2349.

91. Koga D., Mitsutomi M., Kono M. etal. //Exs. 1999. -V. 87. P. 111-123.

92. Kollar R, Petracova E., Ashwell G., Robbins P.W., Cabib E. Architecture of the yeast cell wall // J.Biol.Chem. 1995. V.270. №3 P.I 170-1178.

93. Kuberka M., Heschel I., Glasmacher В., Rau G. Preparation of collagen scaffolds and their applications in tissue engineering // Biomed. Tech. 2002. V. 47. Suppl. l.Pt 1. P. 485-487.

94. Kumar A.B.V., Varadaraj M.C., Lalitha R.G., Tharanathan R.N. Low molecular weight chitosans: preparation with the aid of papain and characterization/ZBiochim. Biophys. Acta.- 2004.-V.1670.-P. 137-146.

95. Kumar B.A., Varadaraj M.C, Tharanathan R.N. Low molecular weight chitosan—preparation with the aid of pepsin, characterization, and its bactericidal activity // Biomacromolecules. -2007.-V.8.-N.2.-P.566-572.

96. Kumar M.N.V.R. A review of chitin and chitosan applications (Review) // Leact. Functional Polymers. 2000. V. 46. P. 1-27.

97. Kuprina E., Batchische E. Electrochemical method for obtaining water-soluble oligomers of chitin // Book of abstracts of 10th International Conference on Chitin & Chitosan, 6-9 September 2006. Le Corum-Montpellier France, 2006. - P. 84.

98. Kurashi Y., Ono H., Wang В., Egashiram O. Kazuya, Anal. Sci., 13, 47-52, 1997.

99. Kurita K. Chitin and chitosan: functional biopolymers from marine Crustaceans // Marine Biotech. 2006. V. 8. - P. 203-226.

100. Kurita K., Sannan Т., Iwakura Y. Studies on chitin. 4. Evidence for formation of block and random copolymers of N-acetyl-D-glucosamine and D-glucosamine by hetero- and homogeneous hydrolysis // Macromol. Chem. 1977. V. 178.-N 12.-P. 3197-3202.

101. Lamarque G., Chaussard G., Domard A. Thermodynamic aspects of the heterogeneous deacetylation of beta-chitin: Reactionn mechanisms // Biomacromolecules. 2007. -V. 8. -N 6. P. 1942-1950.

102. Lim S.-H., Hudson S.M. Review of chitosan and its derivatives as antimicrobial agents and their uses as textile chemicals // J. Macromol. Sci. 2003. V. 43. №2. P. 223-269.

103. Lim H.-S., Kim Y.-S., Kim S.-D. Pseudomonas stutzeri YPL-1 genetic transformation and antifungal mechanism against Fusarium solani, an agent of plant root rot//Appl. Environ. Microbiol. 1991. V.57. № 2. P.510-516.

104. Lim S.-H., Hudson S.M. Application of a fiber-reactive chitosan derivative о cotton fabric as an antimicrobial textile finish // Carbohydr. Polym. 2004. V. 56. P. 227-234.

105. Liu H., Mao J., Yao K., Yang G., Cui L., Cao Y. A study on a chitosan-gelatin-hyaluronic acid scaffold as artificial skin in vitro and its tissue engineering applications // J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 2004. V. 15. № 1. P. 25-40.

106. Liu X.F., Guan Y.L., Yang D.Z., Li Z., Yao K.D. Antibacterial action of chitosan and carboxymethylated chitosan // J. Appl. Polym. Sci.-2001.-V.79.-P.1324-1335.

107. Lusena C.V., Rose R.C. // J. Fish Res. Board Can. 1953. V. 10. - P. 521525.

108. MacLaughlin F.C., Mumper R.J., Wang J., Tagliaferri J.M., Gill I.,Hinchcliffe M., Rolland A.P. Chitosan and depolimerized chitosan oligomers as condensing carriers for in vivo plasmid delivery // J. Control. Release.-1998.-V.56.-№1-3.-P.259-272.

109. Madhavan P., Ramachandran Nair K.G. // Fishery Technol. 1974. V. 11.-P. 50-53.

110. Malaeh M., Charlet G., Arul J. Depolymerisation of chitosan // In book: Chitin and chitosan in life and science. Ed.: T. Uragimi, K. Kurita, T. Fukamizo. Tokyo: Kodasha Scientific LTD. -2001. P.28-35.

111. Margot M., Hauk H.E. // Chromatographia, 26, 3-11, 1988.

112. Meyer H., Butte W., Schlaak M. Influence of chitosan on bacterial growth// Chitosan in Pharmacy and Chemistry. Eds.: R.A.A. Muzzarelli, C. Muzzarelli.

113. Mima S., Miya M., Iwamoto R., Yoshikawa S. // J. Appl. Polym. Sci. 1983. -V. 26.-N6.-P. 1909-1917.'

114. Mima S., Miya M., Iwamoto R., Yoshikawa S. Highly deacetylated chitosan and its properties //J. Appl. Polym. Sci. 1983. V. 28. -N 6. -P. 1909-1917.

115. Moorjani M.N., Achuta V., Khasim D.I. // J. Food Sci. Technol. 1975. V. 12.-P. 187-190.

116. Muzzarelli R.A.A. Chitin. Oxford: Pergamon Press, 1977. 309 p.

117. Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C. Chitosan chemistry: relevance to the biomedical sciences //Adv. Polym. Sci. 2005. -V. 186. P. 151-209.

118. Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C, Tarsi R., Miliani M., Gabbanelli F.,Cartolari M. Fungistatic activity of modified chitosans against Saprolegnia paras//7ca//Biomacromolecules.-2001.-V.2.-P. 165-169.

119. No H.K., Park N.Y., Lee S.H., Meyers S.P. Antibacterial activity of chitosans and chitosan oligomers with different molecular weights // Int. J. Food. Microbiol.-2002.-V.74.-№l-2.-P.65-72.

120. Okazaki K., Kato F., Watanabe N. Purification and properties of twochitinases from Streptomyces sp. J-13-3 // Biosci. Biotech. Biochem. 1995. V.59. № 8. P.1586-1587.

121. Onsoyen E., Skaugrud O. Metal recovery using chitosan // J. Chem. fechnol. Biotechnol. 1990. V. 49. № 4. P. 395-404.

122. Ottoy M.H., Varum K.M., Christensen B.E., Anhonsen M.W., Smidsrod O. // Carbohydr. Polym. 1996. -V. 31. P. 253-261.

123. Ottoy M.H., Varum K.M., Smidsrod O. Compositional heterogeneity of heterogeneously deacetylated chitosans // Carbohydr. Polym. 1996. V. 29. -N 1. - P. 17-24.

124. Park, Pyo-Jam, Lee H., Kim S. Preparation of hetero-chitooligosaccharides and their antimicrobisl activity on Vibrio parahaemolyticus // J. Microbiol. Biotechnol. -V.14, №1. -2004. -P.41-47.

125. Pash H., Trathnigg В. HPLC of Polymer. Berlin. Springer. 1998. P. 47. Atec.Italy. -2002.-P. 157-163.

126. Pat. 4066735 US С 01 F 11/46.

127. Payne G.F., Raghavan S.R. Chitosan: a soft interconnect for hierarchical assembly of nano-scale components // Soft Matter. 2007. -V. 3. P. 497-652.

128. Peluso G., Petillo O., Ranieri M., Santin M., Ambrosio L., Calabro D., Avallone В., Balsamo G. Chitosan-mediated stimulation of macrophage function // Biomaterials. 1994. V. 15. № 15. P. 1215-1220.

129. Percot A., Chaussard G., Sorlier P. et al. Overall consideration on the evolution of the study of chitosan properties // Advances in Chitin Science. Vol. VII / Ed. by I. Boucher, K. Jamieson, A. Retnakaran. Montreal, 2004. P. 1-6.

130. Pettersen H., Sannes A., Holme H.K., Kristensen A.H., Dornish M, Smidsrod O. Thermal depolymerization of chitosan salts // In: Advan. Chitin Sci. / Ed M.G. Peter, A. Domard, R.A.A. Muzzarelli. Potsdam. Germany. 1999. P. 422-428.

131. Pyo-Jam P., Lee H., Kim S. // J. Microbiol. Biotechnol. 2004. V. 14. - P. 41-47.

132. Rabea E.I., Badawy M. E.-T., Stevens C.V., Smagghe G., Steurbaut W. Chitosan as antimicrobial agent: applications and mode of action // Biomacromolecules.-2003.-V.4.-№6.-P. 1457-1465.

133. Rauws A.G., Groen K. // Chirality, 6, 72-75, 1994.

134. Rinaudo M., Domard A. Solution properties of chitosan // Chitin and Chitosan, G. Skjek-Braek, T. Anthonsen, P. Sandford (eds.), Elsevier Applied Science, London, 1989.-P. 71-86.

135. Roberts G.F.A. // Advances in chitin science. 7th ICCC, 3-5 September 1997, Lyon, France, 1997. - P. 22-31.

136. Roberts G.F.A. // Chitin Newsletter, 1993. N 1. -P. 21-23.

137. Roberts G.F.A. Chitin Chemistry. L.: Macmillan Press, 1992. 352 p.

138. Robertas J.D., Monzingo A.F. //Exs. 1999.-V. 87.-P. 125-135.

139. Roller S., Covill N. The antifungal properties of chitosan in laboratory media and apple juice // Int. J. Food. Microbiol.-1999.-V.47.-№ 1-2,- P.67-77.

140. Rowena L., Cabib R., Cabib E. // Anal, biochem. 1982. V. 127. - P. 402412.

141. Sabnis S.,. Block L.H. Chitosan as an enabling excipient for drug delivery systems. I. Molecular modifications // Int. J. Biol. Macromol. 2000. V. 27. № 3. P. 181-186.

142. Sano H., Shibasaki K., Matsukubo Т., Takaesu Y. Effect of molecular mass and degree of deacetylation of chitosan on adsorption of Streptococcus sobrinus 6715 to saliva treated hydroxyapatite // Bull. Tokyo Dent. Coll.2002.-V.43.-№2.-P.75-82.

143. Savard Т., Beaulieu C, Boucher Г, Champagne C.P. Antimicrobial action of hydrolyzed chitosan against spoilage yeasts and lactic acid bacteria of fermented vegetables // J. Food Prot.-2002.-V.65.-№5.-P. 828-833.

144. Schatz C., Viton C., Delair Т., Pichot C., Domard A. Typical physicochemical behaviors of chitosan in aqueous solution // Biomacromol. -V.4.2003. -P.641-648.

145. Send S., Ikinci G., Kas S., Yousefi-Rad A., Sargon M.F., Hincal A.A. Chitosan films and hydrogels of chlorhexidine gluconate for oral mucosal delivery Ш. J. Pharm.-2000.-V.l 93 .-№2.-P. 197-203.

146. Senel S., McClure S.J. Potential applications of chitosan in veterinary medicine//Adv. Drug. Deliv. Rev. 2004. V. 56. № 10. P. 1467-1480.

147. Shahabuddin M., Vinetz J.M. // Exs. 1999. V. 87. - P. 223-234.

148. Shepherd R., Reader S., Falshaw A. Chitosan functional properties // Glycoconjugate J. 1997. V. 14. P. 535-542.

149. Shibata Т., Okamoto I., Ishi K. // J. Liq. Chromatogr., 9, 313-340, 1986.

150. Singla A.K., Chawla M. Chitosan: some pharmaceutical and biological aspects an update // J. Pharm Pharmocol. 2001. V. 53. № 8. P. 1047-1067.

151. Sionkowska A., Wisniewski M., Skopinska J., Kennedy C.J., Wess T.J. Molecular interactions in collagen and chitosan blends // Biomaterials. 2004. V. 25. P. 795-801.

152. Smith J., Wood E., Dornish M. Effect of chitosan on epithelial cell tight junctions //Pharmaceutical Research.-2004.-V.21.-№l.-P.43-49.

153. Sorlier P., Denuziere A., Viton C, Domard A. Relation between the degree of acetylation and electrostatic properties of chitin and chitosan //Biomacromolecules.-2001.-V.2.-№3.-P.765-772.

154. Sosa M.A., Fazely F., Koch J.A., Vercellotti S.V., Ruprecht R.M. N-carboxymethylchitosan-N, O-sulfate as an anti-HIV-l agent//Biochem. Biophys.Res.Commun.-1991.-V.174.-№2.-P.489-496.

155. Stevens W.F., Win N.N., Ng H. et al. // Advances in chitin science, 7th ICCC, Lyon, 1997. P. 40-47.

156. Stoyachenko LA., Varlamov V.A.S Davankov V.A. Chitinases of Streptomyces kurssanovii: purification and some properties // Carbohydr. Polym. 1994. V. 24. №1. P. 47-54.

157. Stoyachenko I.A., Varlamov V.P., Davankov V.A. // Carbohydr. Polym. 1994.-V. 24.-P. 47-54.

158. Suryanarayana R.Y., Yashodho S.V., Mahendrakak N.S. et al. // Indian J. Technol. 1987.-V. 25.-N4.-P. 194-196.

159. Synowiecki J., Al-Khateeb N.A. Production, properties, and some new applications of chitin and its derivatives // Crit. Rev. Food. Sci. Nutr. 2003. V. 43. № 2. P. 145-171.

160. TOinmeraas K., Varum K.M.,Christensen B.E., Smidsrad O. Preparation and characterization of oligosaccharides produced by nitrous acid depolymerization of chitosans //Carbohydr. Res. 2001. V. 333. P. 137-144.

161. Tang Z.H., Hou C.L., Chen Q.Q. Experimental study on bacteriostatic of chitosan and sodium hyaluronate // Zhongguo. Xiu. Fu. Chong. Jian. Wai. Ke. Za. Zhi.-2002.-V.16.-№4.-P.259-261.

162. Terbojevich M., Carraro C., Cosani A. Solution studies of the chitin-lithium chloride-N,N,dimethylacetamide system // Carbohydrate Research, 1988. V. 180. - P. 73-86.

163. Terbojevich M., Cosani A. Molecular weight determination of chitin and chitosan // In book: Chitin handbook. Ed.: R.A.A. Muzarelli, M.G. Peter Italy: Atec, Grottamare. -1997. -P.87-101.

164. Terbojevich M., Cosani A., Como G., Marsano E., Bianchi E. Chitosan: chain rigidity and mesophase formation // Carbohydrate Research, 1991. V. 209. — P. 251-260.

165. Thongngam M., McClements D.J. Characterization of interactions between chitosan and an anionic surfactant // J. Agric. Food Chem. 2004. V. 52. № 4. P. 987-991.

166. Torrado S., Prada P., Torre P.M., Torrado S. Chitosan-poly (acrylic) acid polyionic complex: in vivo study to demonstrate prolonged gastric retention // Biomaterials. 2004. V. 25. P. 917-923.

167. Tsai G.-J., Hwang S.-P. In vitro and in vivo antibacterial activity of shrimp chitosan against some intestinal bacteria // Fisheries Sci.-2004.-V.70.-P.675-681.

168. Tsezos, M., Voiesky, B. Biotechnology and Bioengineering. 1981.23.-P. 583-604.

169. Tsezos, M., Voiesky, B. Biotechnology and Bioengineering. 1982.24.-P. 385-401.

170. Ueno H., Mori Т., Fujinaga T. Topical formulations and wound healing applications of chitosan //Adv. Drug. Deliv. Rev. 2001. V. 52. № 2. P. 105-115.

171. Vaara M. Agents that increase the permeability of the outer membrane // Microbiol. Rev.-1992.-V.56.-№ 3.-P.395-411.

172. Ward H.D., Alroy J., Lev B.I., Keusch G.T., Pereira M.E.A. Identification of chitin as a srtuctural component of Giardia cysts II Infection and Immunity. 1985. V. 49. №3. P. 629-634.

173. Wu A.C.M., Bough W.A., Conrad E.C., Alden K.E. Determination of molecular-weight distribution of chitosan by high-performace liquid chromatography / J. of Chromatography, 1976, v. 128, p. 87-99.

174. Xie W., Xu P., Wang W., Liu Q. Preparation of water-soluble chitosan derivatives and their antibacterial activity // J. Appl. Polym. Sci. 2002. V. 85. P. 1357-1361.

175. Yamato M., Mitamura S., Fujimoto C. // JP 02127401.1990. Japan.

176. Yau W. W., Kirkland J.J., Bly D.D. Modern Size-Exclusion liquid chromatograhy. Practice of Gel permleation and Gel Filtration Chromatograhy. New York-Chichester-Brisban-Toronto, 1979. P. 393.

177. Yi H., Wu L.-Q., Bentley W.E., Ghodssi R., Rubloff G.W., Culver J.N., Payne G.F. Biofabrication with chitosan // Biomacromolecules. 2005. V. 6. - P. 28812894.

178. Yoon H.G., Kim H.Y., Hong B.S. et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2001.-V. 65.-P. 802-809.

179. You H.J., Park K.H., Kim Y.H., Kim Y.J., Choi J.H., Lee S.H. Separation and purification of low molecular weight chitosan using multi-step membrane separation process. US Patent 5.730.876., 2002.

180. Zarzycki R., Modrzejewska Z. Use of chitosan in medicine and biomedical engineering//Polim. Med. 2003. V. 33. № 1-2. P. 47-58.

181. Zhang H., Neay S.H. In vitro degradation of chitosan by a commertial enzyme preparation effect of molecular weight and degree of deacetilation //Biomaterials. 2001. V. 22. P. 1653-1658.

182. Zhang M., Tan Т., Yuan H., Rui C. Insecticidal and fungiddal activities ofchitosan and oligo-chitosan//J. Bioact. Compat. Polym. 2003. V. 18. P. 391-400.