Повышение эффективности программ ВРТ у пациентов с прогнозируемым субоптимальным ответом путем применения рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Нгуен Конг Туан

• Нгуен Конг Туан
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Нгуен Конг Туан

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Субоптимальный ответ яичников на КОС: определение понятия, предикторы и методы преодоления

1.1.1. Представление о субоптимальном ответе яичников на КОС

1.1.2. Предикторы субоптимального ответа яичников на КОС

1.1.3. Методы преодоления субоптимального ответа яичников на КОС

1.2. Современное представление о Г-КСФ и его роли в репродуктологии

1.2.1. Общая характеристика Г-КСФ

1.2.2. Роль Г-КСФ в репродуктологии

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Клинико-анамнестический метод

2.2.2. Гормональный метод исследования

2.2.3. Эхографический метод

2.2.4. Контролируемая овариальная стимуляция у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом яичников на КОС

2.2.5. Оценка оплодотворения и характеристика эмбриогенеза

2.2.6. Статистический метод

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. РЕЗУЛЬТАТЫ РЕТРОСПЕКТИВНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1.1. Клинико-анамнестические характеристики у обследованных женщин

3.1.2. Характеристика акушерско-гинекологического статуса у обследованных женщин

3.1.3. Характеристика гормонального статуса и овариального резерва у обследованных женщин

3.1.4. Факторы риска развития субоптимального ответа яичников на КОС

3.1.5. Модели и шкала прогнозирования развития субоптимального ответа яичников на КОС

3.1.6. Характеристика проведенных протоколов КОС и эмбриологических данных в циклах ЭКО/ИКСИ

3.1.7. Результаты анализа корреляционной взаимосвязи

3.1.8. Эффективность проведенных программ ЭКО/ИКСИ у обследованных женщин

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОСПЕКТИВНОГО РАНДОМИЗИРОВАННОГО СРАВНИТЕЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

3.2.1. Клинико-анамнестические характеристики у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом яичников на КОС

3.2.2. Характеристика акушерско-гинекологического статуса у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом яичников на КОС

3.2.3. Результаты лабораторных исследований у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом яичников на КОС

3.2.4. Характеристика гормонального статуса и овариального резерва у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом яичников на КОС

3.2.5. Результаты исследований Г-КСФ в сыворотке крови и в ФЖ иммуноферментным методом

3.2.6. Характеристика спермограммы у супругов обследованных женщин

3.2.7. Характеристика проведенных протоколов КОС в циклах ЭКО/ИКСИ у обследованных женщин

3.2.8. Эмбриологические характеристики протоколов ЭКО/ИКСИ у обследованных женщин

3.2.9. Показатели эффективности проведенных программ ЭКО/ИКСИ у обследованных женщин

3.2.10.Корреляционная взаимосвязь между различными показателями у обследованных женщин

3.2.11.Факторы, модели и способ прогнозирования наступления клинической беременности в циклах ЭКО/ИКСИ у женщин с прогнозируемым

субоптимальным ответом яичников на КОС

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время ЭКО является самым эффективным, прогрессивно развивающимся методом лечения бесплодия и занимает важное место в современной медицине. Известно, что на результативность каждого протокола влияет много различных факторов [169]. Особое клиническое значение для успеха программ ЭКО имеет ответ яичников на контролируемую овариальную стимуляцию (КОС) гонадотропинами. По количеству полученных ооцитов в циклах ЭКО/ИКСИ, градация ответной реакции яичников на стимуляцию разделяется на: слабый ответ (0 - 3 ооцита); субоптимальный ответ (4 - 9 ооцитов); нормальный (10 - 15 ооцитов) и избыточный (>15 ооцитов) [48, 165]. Среди женщин со слабым ответом на стимуляцию яичников эффективность программ ВРТ очень низкая, поэтому многие исследования направлены на преодоление именно этой проблемы. В частности, установлены критерии прогнозирования слабого ответа [94], создаются протоколы, ориентированные на данную клиническую группу, включающие определенные дозы гормонов, продолжительность стимуляции и рекомендации для использования различных медикаментозных препаратов в качестве адъювантной терапии [19, 119]. С другой стороны известно, что большое количество полученных ооцитов не всегда сопровождается высокой эффективностью программ ВРТ, и может повышать риск развития синдрома гиперстимуляции яичников [41, 150]. Женщинам из этой клинической группы также уделяется большое внимание исследователей и клиницистов. Разработаны различные эффективные меры профилактики, что привело к снижению частоты синдрома гиперстимуляции яичников в протоколах ЭКО. В то же время имеется достаточно многочисленная когорта пациентов, у которых отмечается промежуточный характер ответа на стимуляцию препаратами гонадотропинов в циклах ВРТ. Их относят к так называемому субоптимальному ответу на стимуляцию, когда число полученных ооцитов в результате проведения пункции фолликулов превышает 4, но не достигает 10. Встречаемость субоптимального ответа на КОС оказалась достаточно высокой и составляет 43,3% по данным Human Fertilisation and Embryology Authority (HFEA) [41, 165]. Однако,

в отличии от ситуации со слабой ответной реакцией яичников, существует очень мало исследований, направленных на определение факторов риска и способов прогнозирования развития субоптимального ответа, отсутствуют, также общепринятые критерии диагностики субоптимального ответа на КОС в протоколах ЭКО/ИКСИ. В то же время, имеются доказательные результаты исследований, свидетельствующие о том, что эффективность протоколов ЭКО/ИКСИ у больных с субоптимальным ответом существенно ниже, чем у пациенток с нормальным ответом яичников [9, 12, 41, 61, 215]. Научные исследования, направленные на поиск и разработку методов преодоления субоптимального ответа и повышения эффективности протоколов ЭКО/ИКСИ у данной когорты женщин фрагментарны и единичны. Согласно вышеизложенным причинам, изучение факторов риска развития, поиск и разработка способа прогнозирования, а также оптимальных подходов для повышения результативности циклов ЭKO/ИКСИ у данной когорты женщин имеет безусловную актуальную медико-социальную направленность.

Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ; G-CSF; CSF-3) -гликопротеин, который способствует пролиферации, дифференцировке и активации клеток линии гранулоцитов [13]. В последние десятилетия во многих научно-исследовательских работах доказано, что Г-КСФ оказывает положительное влияние на репродуктивную функцию женского организма и позволяет повысить эффективность программ ВРТ в преодолении бесплодия [2, 13, 235]. Так, японские исследователи подтвердили терапевтическое значение Г-КСФ в индукции овуляции у пациенток с синдромом лютеинизации неовулирующего фолликула (ЛНФ) [104, 106]. Появились сообщения о том, что концентрация Г-КСФ в фолликулярной жидкости (ФЖ) имеет прямую корреляционную связь с частотой имплантации и наступления клинической беременности в циклах ЭКО/ИКСИ [55, 126]. В последние годы активно исследовался препарат рекомбинантного Г-КСФ в протоколах ЭКО/ИКСИ у женщин, имеющих тонкий эндометрий. Было показано, что внутриматочная перфузия рекомбинантного Г-КСФ не только увеличивает толщину эндометрия, но и повышает частоту имплантации и наступления

беременности [89, 229]. Чрезвычайно важно принять во внимание данные о безопасности влияния рекомбинантного Г-КСФ на течение беременности [232]. Несмотря на то, что положительный эффект Г-КСФ на результативность программ ВРТ у различных когорт пациенток был доказан, до сих пор не существует исследований, направленных на изучение роли Г-КСФ в протоколах ЭКО/ИКСИ у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом на КОС. С учетом вышеизложенного понятна актуальная необходимость проведения дополнительных исследований эффективности Г-КСФ в репродуктивной медицине, позволяющих патогенетически и дифференцированно рекомендовать этот метод к внедрению в широкую клиническую практику.

Цель исследования.

Повышение эффективности программ ЭКО/ИКСИ у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом на КОС путем применения рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора.

Задачи исследования.

1. Исследовать анамнестические, клинические, лабораторные и инструментальные характеристики у женщин с субоптимальным ответом на КОС.

2. Изучить особенности программ ЭКО/ИКСИ у женщин с субоптимальным ответом на КОС.

3. Определить концентрацию Г-КСФ в сыворотке крови, в фолликулярной жидкости и взаимоотношение между этими показателями и эмбриологическими характеристиками у пациентов с прогнозируемым субоптимальным ответом.

4. Изучить влияние применения рекомбинантного Г-КСФ на параметры эффективности программ ВРТ (количество ооцитов, зигот, эмбрионов хорошего качества и замороженных эмбрионов; частоту имплантации и наступления клинической беременности) у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом.

5. Определить основные факторы, разработать модель и шкалу прогноза развития субоптимального ответа яичников на КОС, а также определить

показатели, прогнозирующие повышение эффективности программ ВРТ у пациентов с прогнозируемым субоптимальным ответом на стимуляцию.

Научная новизна и теоретическая значимость исследования.

- Впервые проведён комплексный анализ предиктивных факторов развития субоптимального ответа на КОС в программах ЭКО/ИКСИ

- Впервые разработана математическая модель, а также балльная шкала прогнозирования развития субоптимального ответа на КОС в программах ЭКО/ИКСИ.

- Проведена сравнительная оценка результативности и безопасности стандартного протокола КОС с антагонистами ГнРГ и протокола КОС с антагонистами ГнРГ в сочетании с препаратом рекомбинантного Г-КСФ. Было выявлено, что подкожное применение препаратов рекомбинантного Г-КСФ в программах ЭКО/ИКСИ у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом на КОС улучшает ответную реакцию яичников на стимуляцию овуляции гонадотропинами, увеличивает количество полученных и зрелых ооцитов, 2PN зигот, эмбрионов хорошего качества, а также количество крио-консервированных эмбрионов.

- Впервые установлена достоверная корреляционная связь между концентрацией Г-КСФ в сыворотке крови и ФЖ с общим количеством полученных ооцитов, а также количеством зрелых ооцитов, что подтверждает позитивный эффект Г-КСФ в процессе фолликулогенеза у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом.

- Впервые доказано, что использование рекомбинантного Г-КСФ в протоколах ЭКО/ИКСИ у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом на КОС приводит к значительному увеличению частоты имплантации и наступления клинической беременности.

Практическая значимость исследования.

Разработан новый способ прогнозирования развития субоптимального ответа на контролируемую овариальную стимуляцию в программах ЭКО/ИКСИ (патент № Яи 2774145 С1 от 15.06.2022 г.).

Разработан протокол КОС с антагонистами ГнРГ в сочетании с подкожным применением рекомбинантного Г-КСФ, который позволяет достичь повышения результативности программ ЭКО/ИКСИ у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом яичников на стимуляцию.

На основе метода логистической регрессии и алгоритма Байесовского усреднения моделей разработан простой способ прогнозирования наступления клинической беременности у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом на основе оценки отношения уровней Г-КСФ в ФЖ и в сыворотке крови и морфологической оценки эмбрионов.

Разработан алгоритм оптимизации лечения бесплодия методом ЭКО/ИКСИ для когорты пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Основными факторами риска развития субоптимального ответа на КОС являются: возраст пациенток > 35 лет; наличие субоптимального ответа в анамнезе; операции на органах малого таза; КАФ < 10; концентрация АМГ в сыворотке крови < 2,56 нг/мл; концентрация ФСГ в сыворотке крови > 8,71 МЕ/л.

2. Подкожное применение рекомбинантного Г-КСФ у женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом достоверно улучшает ответную реакцию яичников на КОС, что выражается в получении большего числа ооцитов, а также количества зрелых ооцитов и эмбрионов высокого качества, определяющих повышение общей эффективности программ ВРТ.

3. Результативность протоколов ЭКО/ИКСИ у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом на КОС зависит от качества полученных эмбрионов и отношения уровней Г-КСФ в фолликулярной жидкости и сыворотке крови.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Повышение эффективности программ ВРТ у пациентов с прогнозируемым субоптимальным ответом путем применения рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора»

Апробация работы.

Материалы диссертационной работы доложены на XXIII Международной медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье», Санкт-Петербург, 2020 г.; XXI Всероссийском научно-образовательном форуме «Мать и Дитя», Москва,

2020 г.; XXIV Международной медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье», Санкт-Петербург, 2021 г.; «XV Международном конгрессе по репродуктивной медицине», Москва, 2021 г.; XXXIV Международном конгрессе с курсом эндоскопии: «Новые технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний», Москва, 2021 г.; XIV Региональном научно-образовательном форуме «Мать и Дитя» и Пленуме Правления Российского общества акушеров-гинекологов, Москва, 2021 г.; XXII Всероссийском научно-образовательном форуме «Мать и Дитя», Москва, 2021 г.; «III научно-практической конференции для акушеров-гинекологов Оттовские чтения», Санкт-Петербург,

2021 г.; «XVI Международном конгрессе по репродуктивной медицине», Москва,

2022 г. II научно-практической конференции с международным участием. «Здоровье женщин, плода, новорожденного», Санкт-Петербург, 2022 г.

Разработанные шкала прогнозирования субоптимального ответа яичников на КОС и схема лечения бесплодия у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом в программах ЭКО/ИКСИ внедрены в практику работы отдела вспомогательных репродуктивных технологий ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта» и учебный процесс кафедры акушерства, гинекологии и репродуктологии Медицинского факультета ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет»

Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 12 печатных работ, в том числе 1 патент на изобретение и 4 научные статьи в рецензируемых научных

журналах и изданиях, определенных ВАК, а также в международной базе данных Scopus.

Личный вклад автора.

Исследование проведено аспирантом в отделе вспомогательных репродуктивных технологий (заведующий - д.м.н., профессор Гзгзян Александр Мкртичевич) и лаборатории эндокринологии репродукции (заведующий - к.м.н., Ткаченко Наталия Николаевна) ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта». Автор самостоятельно выполнил сбор материалов, проводил анализ и статистическую обработку полученных результатов исследования.

Структура и объём диссертации.

Текст рукописи изложен на 132 страницах машинописного текста. Состоит из оглавления, введения, литературного обзора, глав с описанием материалов и методов исследования, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списков сокращений и литературы. Работа иллюстрирована 24 рисунками и 23 таблицами. В библиографический список включено 15 отечественных и 220 зарубежных источников.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Субоптимальный ответ яичников на КОС: определение понятия,

предикторы и методы преодоления.

1.1.1. Представление о субоптимальном ответе яичников на КОС

История ЭКО формировалась и развивалась со второй половины прошлого века, благодаря огромному вкладу многочисленных исследователей во всем мире [44]. В 1978 году 25 июля в Англии состоялось важнейшее событие - родился первый ребенок по программе ЭКО [197] и с тех пор методы вспомогательных репродуктивных технологий добились больших успехов в качестве самого распространенного и эффективного способа лечения бесплодия. Так, сорок лет спустя, к 2018 году в мире более 8 миллионов детей родились с помощью ЭКО. По данным РАРЧ к 2019 году в России проведено 165463 циклов ЭКО/ИКСИ, что вывело Россию по активности применения вспомогательных репродуктивных технологий на первое место в Европе. Однако, несмотря на быстрое и успешное развитие в настоящее время ВРТ сталкиваются со множеством сложных проблем: старший возраст женщин, особенности окружающей среды, социальные условия и многие другие факторы оказывают влияние на эффективность ЭКО. Прежде всего нельзя не признать, что успешность каждого цикла ЭКО/ИКСИ зависит от ответной реакции яичников на стимуляцию экзогенными гонадотропинами. Чтобы повысить эффективность циклов ЭКО/ИКСИ, снизить число осложнений необходимо использовать индивидуальный подход для каждой женщины. Одним из важнейших компонентов такого подхода является оценка степени ответа на КОС в зависимости от количества полученных ооцитов: слабый (низкий, бедный); субоптимальный; нормальный (оптимальный) и избыточный [48, 165]. Известно, что в связи с очень низкой частотой наступления беременности и последующих родов живыми детьми у женщин со слабым ответом проводились многочисленные исследования, ориентированные на разработку оптимальных подходов к преодолению бесплодия в данной когорте женщин [11, 19, 115, 119]. В то же время у женщин с предикторами гиперстимуляции яичников были разработаны

различные протоколы ЭКО/ИКСИ, определяющие профилактику и снижение частоты развития этого грозного осложнения. На этом фоне к когорте женщин с субоптимальным ответом на КОС не проявили должного внимания ни клиницисты, ни исследователи [165]. Более того, понятие субоптимальный ответ на стимуляцию яичников для большинства клиницистов оказалось даже незнакомым и эту когорту женщин обычно не принято выделять из категории женщин, имеющих нормальный ответ. Однако, имеются данные о том, что частота наступления беременности и родов живыми детьми у женщин с субоптимальным ответом достоверно ниже по сравнению с аналогичными показателями у женщин, имеющих нормальный ответ на КОС [9, 12, 41, 61, 215]. С целью повышения эффективности программ ВРТ в целом и непосредственно для женщин с субоптимальным ответом на КОС необходимо провести детальные исследования именно этой когорты пациентов.

Под понятием субоптимального ответа на КОС (suboptimal response to controlled ovarian Stimulation) нередко понимается группа пациентов, у которых получается от 4 до 9 ооцитов в одном цикле стимуляции [28, 165]. В отличии от понятия бедного ответа в литературе до настоящего времени отсутствует четкая дефиниция субоптимального ответа на КОС. В некоторых исследованиях субоптимальный ответ на КОС определяется в ходе стимуляции суперовуляции по следующим критериям: суммарная доза ФСГ, концентрация Е2, количество фолликулов диаметром >10 мм на 7-ой день стимуляции [205]. Встречаемость субоптимального ответа на стимуляцию яичников достаточно высокая, и по данным Human Fertilisation and Embryology Authority составляет 43,3 % (174057/402185) циклов ЭКО/ИКСИ с субоптимальным ответом на начатый цикл стимуляции овуляции в протоколах ЭКО [41, 165]. О необходимости выделения женщин с субоптимальным ответом на КОС в отдельную группу пациентов, было получено доказательное заключение в результате масштабного исследования из Бельгии и Дании: во-первых, большая доля пациентов с субоптимальным ответом на КОС в популяции женщин, проходящих лечение бесплодия по программам ВРТ; во-вторых следует учитывать, что в клинических наблюдениях среди женщин с субоптимальным ответом коррекция дает больше шансов получить адекватное

количество ооцитов, чем у пациенток со слабым ответом, и в-третьих авторы подчеркивают, насколько необходимо изучать детально и разрабатывать возможность индивидуального похода для каждой категории женщин, вступающих в протоколы ЭКО/ИКСИ для того, чтобы повысить эффективность программ ВРТ [41, 165].

1.1.2. Предикторы субоптимального ответа яичников на КОС

Среди существующих предикторов субоптимального ответа на КОС необходимо в первую очередь рассмотреть возраст женщины. Беременность у женщины старшего возраста часто сопровождается осложнениями, имеющими серьезные последствия не только для плода, но для здоровья и жизни матери. Необходимо признать, что исторически в процессе естественного отбора сложилась ситуация, когда очевидно, что биологический возраст женщины и ее репродуктивный возраст не совпадают и эти различия поставили перед современной репродуктологией целый ряд сложно решаемых задач. За последние десятилетия многочисленные исследования направлены на изучение особенностей фолликулогенеза и их влияния на качество ооцитов и эмбрионов у женщин старшего возраста. Известно, что с увеличением возраста происходят необратимые изменения в тканях яичников. Уменьшение объёма стромы яичников, количества примордиальных фолликулов, гормональных рецепторов на фоне перестройки архитектоники системы кровоснабжения ведет к снижению ответа яичников на стимуляцию гонадотропинами в программах ЭКО/ИКСИ от субоптимального до слабого и, в итоге, даже к отсутствию ответа. Из-за митохондриальной дисфункции, укорочения теломеры и возможной структурной хромосомной аномалии возраст оказывает влияние не только на количество, но и на качество ооцитов и развивающихся впоследствии эмбрионов [68, 128]. С увеличением возраста вследствие неправильной сегрегациии хромосом во время оогенеза ухудшается качество ооцитов и увеличивается количество анеуплоидных эмбрионов [131, 144, 184]. В анализе хромосомного набора материалов, полученных от более 15000 биопсий трофодермы, было обнаружено, что в возрасте

после 30 лет частота анеуплоидных эмбрионов увеличивается и достигает 88,2% в возрасте 44 лет [213]. В то же время по результатам предимплантационной генетической диагностики, проведенной на 7753 эмбрионах, было установлено, что встречаемость эуплоидных эмбрионов у женщин в возрасте старше 43 лет не превышает 15% [40]. Частота родов живыми детьми у женщин, проходивших лечение бесплодия в течении 5 лет, также коррелирует с возрастом и уменьшается от 80% у женщин в возрасте менее 30 лет до 26% у женщин старше 40 лет [212]. Наряду со снижением овариального резерва и изменением кровоснабжения яичников, у женщин старшего возраста наблюдается снижение количества и чувствительности гормональных рецепторов, что требует для стимуляции яичников применения повышенных доз экзогенного гонадотропина. Следует также учитывать, что у женщин старшего возраста наблюдается высокая частота таких заболеваний как эндометриомы и опухолевидные образования яичников, проводящие к снижению овариального резерва. Согласно критериям Bologna (2011) и по классификации POSEIDON (2016), возраст женщины рассматривается в качестве основного предиктивного фактора сниженного ответа яичников на стимуляцию [28, 94]. В отличии от ситуации со слабым ответом возрастные критерии для прогноза субоптимального ответа на КОС в настоящее время отсутствуют, однако появились сообщения о том, что у женщин 35 лет и старше ответ яичников на стимуляцию гонадотропинами снижается и нередко соответствует субоптимальному [83, 184].

Наряду с возрастом, при оценке овариального резерва используются такие показатели, как концентрация антимюллерова гормона (АМГ) и ФСГ в сыворотке крови на 2-ой или 3-ий день менструального цикла, а также количество антральных фолликулов (КАФ) на основании ультразвукового исследования (УЗИ) позволяют прогнозировать степень ответа яичников на КОС. При снижении чувствительности яичников к эндогенному ФСГ по механизму обратной связи происходит стимуляция гипоталамуса и гипофиза, секреция ФСГ повышается, соответственно высокая базальная концентрация ФСГ в крови является одним из маркеров недостаточности овариального резерва. Более того, овариальный ответ на

стимуляцию зависит от молекулярной структуры ФСГ и ФСГ-рецепторов. Женщины-носительницы полиморфизма ФСГ-рецепторов Ser680Ser, GG генотип FSHR rs1394205 и GG генотип FSHR rs6165 имеют низкий овариальный ответ и для стимуляции яичников в программах ВРТ требуется увеличение дозы экзогенного ФСГ [43, 57, 58, 62, 130, 161, 220, 224]. Таким образом, полиморфизм ФСГ-рецепторов и высокую базальную концентрацию ФСГ можно обоснованно рассматривать в качестве предикторов субоптимального ответа на КОС в программах ВРТ.

Давно известно, что ключевую роль в процессе фолликулогенеза и овуляции играет ЛГ. В 2009 году в своем исследовании Carlo Alviggi и коллеги сообщили о взаимосвязи между наличием ЛГ-Р варианта (v-PLH) и субоптимальным ответом яичников на стимуляцию рекомбинантными ФСГ [198]. ЛГ-Р вариант (v-PLH) в связи с низкой био-активностью может приводить к резистентности яичников на стимуляцию рекомбинантными ФСГ [18]. В недавнем исследовании при определении ассоциативной связи между концентрацией ЛГ, измеряемой в начале овариальной стимуляции и уровнем ответа яичников было установлено, что именно у женщин с концентрацией ЛГ < 0,5 МЕ/л вероятность развития субоптимального ответа достигает 39,1% [166]. Кроме того, в случае гомозиготного LHCGR S312 полиморфизма рецепторов ЛГ наблюдается более высокая частота наступления клинической беременности по сравнению с женщинами, носителями гомозиготного LHCGR N312 [58]. При этом выявлена предиктивная роль базальной концентрации ЛГ относительно субоптимального ответа яичников на агонисты ГнРГ в качестве триггера и доказана возможность улучшить исход цикла ЭКО/ИКСИ при дополнительном введении 1000 МЕ ХГЧ в комбинации с агонистом ГнРГ [77].

В настоящее время, спустя 40 лет после первого описания функции АМГ, его концентрация в сыворотке крови используется как важный и объективный показатель овариального резерва [29, 59, 70, 121]. АМГ - гликопротеин, секретируемый гранулёзными клетками вторичных, преантральных и маленьких антральных фолликулов [30, 142]. Начиная с периода полового созревания,

продукция АМГ постепенно снижается и ассоциируется с возрастом [35]. АМГ выполняет ключевую роль в процессе перехода примордиальных фолликулов из состояния покоя в фазу активного роста, оказывает влияние на чувствительность к ФСГ и механизм отбора фолликулов [233]. Отмечается сильная корреляция между концентрацией АМГ в сыворотке крови, возрастом и количеством антральных фолликулов [35]. Наряду с этим, концентрация АМГ является одним из самых важных предикторов овариального ответа на стимуляцию яичников гонадотропинами в циклах ЭКО/ИКСИ [32, 34, 143, 159, 160, 181]. Недавно коллеги из Китая в своем исследовании сообщили, что концентрация АМГ сильно коррелирует с количеством полученных ооцитов в цикле ЭКО/ИКСИ с применением медроксипрогестерона ацетата в начале стимуляции (г8 = 0,744; р <0,001) [32]. Более того, по результатам целого ряда исследований также выявлена ассоциативная связь с различной степенью корреляции (0,35 < г < 0,88) между уровнем АМГ в сыворотке крови и количеством полученных ооцитов [31, 37, 71, 92, 95, 146, 190, 196]. В то же время, многие исследователи предпринимали попытку определить пороговый уровень АМГ для прогноза овариального ответа на КОС, но полученные результаты неоднозначны [31]. Тем не менее в 2019 году группа исследователей из Пакистана показала, что концентрация АМГ в сыворотке крови имеет четкую корреляционную связь не только с количеством полученных ооцитов, но и с их качеством [158]. Следует обратить внимание на то, что при низкой концентрации АМГ в сыворотке крови риск развития субоптимального ответа достаточно высокий. Однако, пороговое значение прогнозирования развития субоптимального ответа на КОС в протоколах ЭКО/ИКСИ, не было установлено. Кроме этого, в последние годы было доказано, что уровень АМГ и частота наступления беременности также имеют корреляционную связь [191, 195, 208].

Одним из важных показателей овариального резерва является также количество антральных фолликулов (КАФ), измеряемое на 2-ой или 3-ий день менструального цикла перед началом стимуляции [59]. В ходе стимуляции под влиянием препаратов ФСГ антральные фолликулы растут и достигают диаметра

доминантного фолликула. Стоит отметить, что в зависимости от целого ряда факторов не все антральные фолликулы превращаются в доминантные. В последние годы в качестве предиктора резистентности яичников на стимуляцию экзогенными гонадотропинами стали использовать отношение КАФ к количеству полученных ооцитов (Follicle-to-Oocyte Index) [17, 230]. Было установлено, что количество полученных ооцитов достоверно коррелирует с КАФ [158]. У женщин, имеющих перед началом стимуляции КАФ менее 10, риск развития субоптимального ответа выше, а частота наступления беременности в программах ВРТ ниже по сравнению с клиническими наблюдениями, в которых у женщин КАФ было более 10 [9, 50, 71]. Таким образом, КАФ перед стимуляцией признано достоверным предиктором для оценки овариального ответа. Более того, в ряде исследований была обнаружена ассоциативная связь между КАФ и частотой наступления клинической беременности в циклах ЭКО/ИКСИ [71, 132, 145, 167].

Перенесённые операции, хронический воспалительный процесс в яичниках, такие заболевания яичников, как эндометриоз, опухолевидные образования приводят к уменьшению объёма стромы яичников, изменению структуры и функции системы кровоснабжения яичников [24, 49, 82, 127, 199, 207]. В связи с потерей определенного объема ткани яичников после хирургического вмешательства в объеме овариоэктомии, цистэктомии, резекции яичников, эксцизии и коагуляции очагов эндометриоза, отмечается снижение овариального резерва [24, 127, 207]. Кроме того, применение определенных хирургических энергий в ходе операции ведет к термическим повреждениям ткани яичников с последующим развитием фиброза в зоне фолликулярного аппарата и сети сосудов [82, 127, 199]. С другой стороны, объёмные образования яичников (эндометриома, большие кисты, новообразования) могут оказывать непосредственное негативное влияние на репродуктивную функцию, а, именно, нарушать фолликулогенез и снижать овариальный ответ на КОС в программах ВРТ [24, 129]. Также отмечено, что длительное воздействие ряда медиаторов воспаления может приводить к перестройке структуры ткани яичников, снижению чувствительности рецепторов, нарушению развития фолликулов [52, 225]. Таким образом, у женщин после

оперативных вмешательств на яичниках, перенесенного воспалительного процесса и при наличии объёмных образований риск развития субоптимального ответа яичников на КОС увеличивается.

За последние годы, как во всем мире, так и, особенно, в европейских странах отмечается явная тенденция к росту числа лиц с ожирением [1, 47, 173]. Ожирение рассматривается как эндокринная патология, оказывающая негативное воздействие на различные системы организма человека, в том числе репродуктивную. Многочисленными исследованиями показано, что эффективность программ ВРТ у женщин с ожирением ниже по сравнению с женщинами, имеющими нормальный ИМТ [1, 97, 163]. В связи с изменением овариального резерва, нарушением метаболизма стероидов, с уменьшением содержания глобулина, связывающего половые гормоны и с инсулин-резистентностью у женщин с ожирением отмечается снижение ответа яичников на стимуляцию экзогенным ФСГ [8, 79, 149, 154, 162]. В то же время избыток адипоцитов оказывает негативное влияние не только на количество, но и на качество ооцитов [149]. Таким образом, нормализация массы тела перед вступлением в протокол ЭКО/ИКСИ является безусловным условием для снижения риска субоптимального овариального ответа на КОС и определяет возможность улучшить эффективность программ ВРТ.

1.1.3. Методы преодоления субоптимального ответа яичников на КОС

1.1.3.1. Увеличение дозы ФСГ

В процессе стимуляции овуляции экзогенный ФСГ выполняет ключевую роль в развитии и дифференцировке фолликулов. Одной из основных стратегий предупреждения развития субоптимального ответа яичников на КОС является увеличение дозы ФСГ [17]. Этот метод позволяет повысить эффективность протоколов ЭКО/ИКСИ для женщин с прогнозируемым субоптимальным ответом, как и у женщин со слабым ответом. В ретроспективном исследовании, включающем 160 женщин с субоптимальным ответом на КОС в протоколах с антагонистом ГнРГ и с нормальным овариальным резервом, ЭгакороШов е1 а!,

(2018) показали, что при увеличении дозы рекомбинантного ФСГ, количество полученных ооцитов и эмбрионов хорошего качества на 3-ий день развития достоверно выше при сравнении с предыдущими циклами (9 уб. 6 ооцитов, р < 0,001; 4 уб 3 эмбрионов хорошего качества, р < 0,001). Более того, авторы также отметили, что повышение дозы рекомбинантного ФСГ на 50 МЕ позволяет получить на 1 ооцит больше [203]. Как было указано, у женщин, носителей полиморфизма ФСГ-рецепторов Бег6808ег, ОО генотип ББИК гб1394205 и ОО генотип ББИЯ гб6165 риск развития субоптимального ответа на КОС увеличивается. Соответственно, для данной когорты женщин, увеличение дозы экзогенных ФСГ также является эффективным методом преодоления субоптимального ответа. Коллеги из Германии показали, что при увеличении дозы ФСГ со 150 МЕ до 225 МЕ в день у женщин, носительниц полиморфизма ФСГ -рецепторов Бег6808ег, улучшается ответная реакция яичников [194]. Также отмечено, что при использовании дозы ФСГ > 200 МЕ в день для стимуляции овуляции в циклах ЭКО, количество полученных ооцитов выше, чем при применении меньших доз (< 150 МЕ) [54].

1.1.3.2. Использование рекомбинантного ФСГ

На основании результатов ряда исследований и мета-анализов доказано, что по сравнению с использованием человеческого менопаузального гонадотропина, как в длинном протоколе, так и в протоколе с анта-ГнРГ применение рекомбинантного ФСГ достоверно повышает количество получаемых ооцитов [38, 84, 120, 137, 155]. Следовательно, женщинам с прогнозируемым субоптимальным ответом на КОС, очевидно, предпочтительнее проводить стимуляцию препаратами рекомбинантного ФСГ.

1.1.3.3. Сочетанное применение рекомбинантного ЛГ

Необходимо отметить, что помимо ФСГ, в фолликулогенезе и овуляции важная роль принадлежит ЛГ. В ряде исследований, и мета-анализах была определена роль препаратов рекомбинантного ЛГ в программах ВРТ [5, 6, 179, 180,

200, 205]. Так, Краснопольская К.В. и соавт. (2019), показали, что частота имплантации и наступления беременности в циклах ЭКО у женщин, с прогнозируемым субоптимальным/слабым ответом яичников достоверно выше при применении комбинированного препарата (р-ФСГ и р-ЛГ) по сравнению с использованием р-ФСГ (15,3% vs 10,2%; 28,6% vs 19%; p < 0,05 соответственно). В той же работе было показано, что использование комбинированных препаратов (р-ФСГ и р-ЛГ) для стимуляции овуляции способствует снижению частоты реализации субоптимального/слабого ответа у этих пациенток [5]. В Кокрановском обзоре (2017), выполненным M. Mochtar и соавт., было показано, что сочетанное применение препарата р-ЛГ и р-ФСГ в ходе стимуляции яичников у женщин со сниженным овариальным резервом позволяет повысить успешность программ ВРТ [179]. Yilmaz F.Y. et al., (2015) изучали эффективность рекомбинантного препарата ЛГ в протоколе КОС с агонистом ГнРГ у когорты женщин с субоптимальным ответом, определяемым на 7-ой или 8-ой день стимуляции и пришли к выводу, что частота имплантации (36,1% vs 15% соответственно; p < 0,02) и наступления клинической беременности (42,2% vs 23,5% соответственно; p < 0,05) существенно выше при дополнительном применении 75 МЕ р-ЛГ, чем при увеличении дозы р-ФСГ на 75 МЕ [205]. В ряде сообщении" также подчеркивается, что с целью улучшения эффективности ЭКО/ИКСИ у женщин старшего возраста (35-39 лет), имеющих высокий риск развития субоптимального ответа яичников при применении ФСГ, целесообразно назначать препарат рекомбинантного ЛГ [180, 200]. В недавнем мета-анализе, выполненном Conforti A. и соавт., (2019) было установлено, что у женщин с ожидаемым слабым ответом на стимуляцию овуляции, относящихся к группам 1 и 2 по классификации POSEIDON, отмечается при применении р-ЛГ достоверное повышение количества полученных ооцитов (OR 1,98; p = 0,03), частоты имплантации (OR 2,62; p = 0,004) и наступления клинической беременности (OR 2,03; p = 0,003) [223].

1.1.3.4. Двойная стимуляция

Двойная стимуляция (Double Stimulation or DuoStim) - это метод КОС, при котором происходит стимуляции в одном и том же менструальном цикле как в фолликулярной фазе, так и в лютеиновой фазе. DuoStim применяется женщинам с прогнозируемым субоптимальным/слабым ответом с целью увеличения количества полученных ооцитов и последующего развития эуплоидных эмбрионов [76, 98, 139, 216]. В мета-анализе, выполненном Vaiarelli A. и соавт., (2018) показано, что процент эуплоидных бластоцист увеличивается с 42,3% после стимуляции яичников только в фолликулярной фазе до 65,5% после дополнительной стимуляции в лютеиновой фазе [76]. Следует также обратить внимание на то, что результативность стимуляции в лютеиновой фазе, определяемая количеством полученных ооцитов, MII ооцитов и наличием, как минимум, одной эуплоидной бластоцисты не уступает аналогичным показателям стимуляции в фолликулярной фазе [98].

1.1.3.5. Адъювантная терапия

Соматотропин гормон (СТГ) (гормон роста) активирует клетки-мишени непосредственно с помощью специфических рецепторов или через продукцию инсулиноподобного фактора роста I (IGF-1). Соматотропин оказывает влияние на синтез инсулиноподобного фактора роста I (IGF-1) в яичниках, который усиливает овариальную чувствительность к гонадотропинам, стимулирует развитие фолликулов, продукцию эстрогена и созревание ооцитов [219, 234]. В 1988 году появилось первое сообщение об использовании гормона роста в качестве адъювантной терапии для стимуляции яичников гонадотропинами [116]. В Кокрановском обзоре (2010), J.M. Duffy et al., указывается на результативность адъювантной терапии соматотропным гормоном в программах ВРТ у женщин со сниженной чувствительностью яичников на стимуляцию гонадотропинами. Считается, что именно использование гормона роста в протоколах ЭКО/ИКСИ позволяет повысить частоту наступления беременности (OR 3,28; 95% CI 1,73 -6,20) и родов живыми детьми (OR 5,39; 95% CI 1,89 - 15,35) при отсутствии

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Нгуен Конг Туан, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Влияние избытка массы тела и ожирения на эффективность программ вспомогательных репродуктивных технологий / М.Р. Махмадалиева, И.Ю. Коган, Д.А. Ниаури [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2018. - Т. 67, № 2. - С. 32-39.

2. Возможности применения гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в репродуктивной медицине / К.Т. Нгуен, Д.А. Ниаури, Н.И. Тапильская [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2021. - Т. 70, №2 2. - С. 119-128.

3. Возрастные изменения активности овариальной ароматазы у женщин с неэндокринными факторами бесплодия и синдромом поликистозных яичников / П. Яковлев, Н. Ткаченко, И. Коган [и др.] // Проблемы репродукции. - 2020. - Т. 26, № 1. - С. 59-66.

4. Комбинированное применение гранулоцитарного колониестимулирующего фактора у пациенток с повторными неудачами имплантации / Н.И. Тапильская, Л.Х. Джемлиханова, И.О. Крихели [и др.] // Проблемы репродукции. - 2020. - Т. 26, № 2. - С. 62-68.

5. Краснопольская, К.В. ЛГ-содержащие препараты гонадотропинов в программах ЭКО (обзор литературы) / К.В. Краснопольская, Е.А. Соколова, А.Н. Бекетова // Проблемы репродукции. - 2019. - Т. 25, № 3. - С. 72-81.

6. ЛГ-содержащие рекомбинантные и мочевые гонадотропины в предупреждении ослабленной реакции яичников в программе ЭКО / К.В. Краснопольская, Т.А. Назаренко, А.Н. Бекетова [и др.] // Проблемы репродукции. - 2013. - № 4. - С. 67-70.

7. Объедкова, К. В. Адьювантная терапия препаратами рекомбинантного соматотропного гормона для оптимизации протоколов экстракорпорального оплодотворения у пациенток со «слабым» ответом яичников: Дисс. кандидата мед. наук / Объедкова К. В. - Санкт-Петербург., 2018. 120 с.

8. Овариальный резерв у женщин с ожирением / О.Р. Григорян, Р.К. Михеев, Е.Н. Андреева [и др.] // Ожирение и метаболизм. - 2019. - Т. 16, № 3. - С. 69-75.

9. Основные характеристики протоколов ЭКО/ИКСИ у пациенток с субоптимальным ответом на контролируемую овариальную стимуляцию / К.Т. Нгуен, Л.Х. Джемлиханова, М.Р. Махмадалиева [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2021. - Т. 70, № 1. - С. 109-118.

10. Пат. 2774145 Российская Федерация, МПК А 61 B 8/00, G 01 N 33/74. Способ прогнозирования развития субоптимального ответа на контролируемую овариальную стимуляцию в программах ЭКО/ИКСИ / К.Т. Нгуен, М.Р. Махмадалиева, К.В. Объедкова [и др.]; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта. - № 2021132474; заявл. 08.11.2021; опубл. 15.06.2022, Бюл. № 17. - 10 с.

11. Применение андрогенов и ингибиторов ароматазы в программах экстракорпорального оплодотворения у пациенток со слабым ответом яичников на стимуляцию / А.И. Меркулова, Л.Х. Джемлиханова, Д.А. Ниаури [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2019. - Т. 68, № 6. - С. 37-46.

12. Субоптимальный ответ на контролируемую овариальную стимуляцию в циклах ЭКО/ИКСИ / К.Т. Нгуен, Д.А. Ниаури, Л.Х. Джемлиханова [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2020. - Т. 69, № 6. - С. 61-70.

13. Тапильская, Н.И. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор как ключевой регулятор инвазивного потенциала эмбриона и рецептивности эндометрия / Н.И. Тапильская, А.М. Гзгзян, И.Ю. Коган // Журнал акушерства и женских болезней. - 2019. - Т. 68, № 1. - С. 83-92.

14. Храмцова, А. Современный взгляд на проблему «тонкого» эндометрия: пути решения в программах вспомогательных репродуктивных технологий (обзор литературы) / А. Храмцова, Н. Башмакова // Проблемы репродукции. - 2019. - Т. 25, № 4. - С. 69-76.

15. Эффективность применения рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в протоколах ЭКО/ИКСИ у пациенток с прогнозируемым субоптимальным ответом на контролируемую овариальную

стимуляцию / К.Т. Нгуен, И.Ю. Коган, Д.А. Ниаури [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2022. - Т. 71, № 1. - С. 59-70.

16. Absence of correlation between follicular fluid volume and follicular granulocyte colony-stimulating factor, a predictor of embryo implantation and successful delivery / L. Noel, A.F. Donneau, C. Jouan [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2020. - Vol. 36, N 3. -P. 268-272.

17. Abu-Musa, A. Novel Physiology and Definition of Poor Ovarian Response; Clinical Recommendations / A. Abu-Musa, T. Haahr, P. Humaidan // Int J Mol Sci. -2020. - Vol. 21, N 6. - P.

18. A common polymorphic allele of the LH beta-subunit gene is associated with higher exogenous FSH consumption during controlled ovarian stimulation for assisted reproductive technology / C. Alviggi, K. Pettersson, S. Longobardi [et al.] // Reprod Biol Endocrinol. - 2013. - Vol. 11, N - P. 51.

19. A djuvant treatment strategies in ovarian stimulation for poor responders undergoing IVF: a systematic review and network meta-analysis / Y. Zhang, C. Zhang, J. Shu [et al.] // Human Reproduction Update. - 2020. - Vol. 26, N 2. - P. 247-263.

20. Age related normogram for antral follicle count in general population and comparison with previous studies / G. Bozdag, P. Calis, D. Zengin [et al.] // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. - 2016. - Vol. 206, N - P. 120-124.

21. Age-related changes in ovarian volume, antral follicle counts and basal FSH in women with normal reproductive health / A. Erdem, M. Erdem, K. Biberoglu [et al.] // J Reprod Med. - 2002. - Vol. 47, N 10. - P. 835-839.

22. Age-related normogram for antral follicle count: McGill reference guide / B. Almog, F. Shehata, E. Shalom-Paz [et al.] // Fertil Steril. - 2011. - Vol. 95, N 2. - P. 663666.

23. Age-specific reference values for serum FSH and estradiol levels throughout the reproductive period / V. Grisendi, E. Spada, C. Argento [et al.] // Gynecol Endocrinol. -2014. - Vol. 30, N 6. - P. 451-455.

24. Alammari, R. Impact of Cystectomy on Ovarian Reserve: Review of the Literature / R. Alammari, M. Lightfoot, H.C. Hur // J Minim Invasive Gynecol. - 2017. - Vol. 24, N 2. - P. 247-257.

25. Altmäe, S. Growth Hormone and Endometrial Receptivity / S. Altmäe, L. Aghajanova // Front Endocrinol (Lausanne). - 2019. - Vol. 10, N - P. 653.

26. AMH and AFC as predictors of excessive response in controlled ovarian hyperstimulation: a meta-analysis / S.L. Broer, M. Dólleman, B.C. Opmeer [et al.] // Hum Reprod Update. - 2011. - Vol. 17, N 1. - P. 46-54.

27. Androgens (dehydroepiandrosterone or testosterone) for women undergoing assisted reproduction / H.E. Nagels, J.R. Rishworth, C.S. Siristatidis [et al.] // Cochrane Database Syst Rev. - 2015. - Vol. N 11. - P. Cd009749.

28. A new more detailed stratification of low responders to ovarian stimulation: from a poor ovarian response to a low prognosis concept / C. Alviggi, C.Y. Andersen, K. Buehler [et al.] // Fertil Steril. - 2016. - Vol. 105, N 6. - P. 1452-1453.

29. Anti-Mullerian hormone (AMH) as a predictive marker in assisted reproductive technology (ART) / A. La Marca, G. Sighinolfi, D. Radi [et al.] // Hum Reprod Update. - 2010. - Vol. 16, N 2. - P. 113-130.

30. Anti-Müllerian hormone expression pattern in the human ovary: potential implications for initial and cyclic follicle recruitment / C. Weenen, J.S. Laven, A.R. Von Bergh [et al.] // Mol Hum Reprod. - 2004. - Vol. 10, N 2. - P. 77-83.

31. Anti-Müllerian hormone for prediction of ovarian response in Chinese infertile women undergoing IVF/ICSI cycles: a prospective, multi-centre, observational study / R. Li, F. Gong, Y. Zhu [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2016. - Vol. 33, N 4. - P. 506512.

32. Anti-müllerian Hormone for the Prediction of Ovarian Response in Progestin-Primed Ovarian Stimulation Protocol for IVF / J. Huang, J. Lin, H. Gao [et al.] // Front Endocrinol (Lausanne). - 2019. - Vol. 10, N - P. 325.

33. Anti-Müllerian hormone levels to predict oocyte maturity and embryo quality during controlled ovarian hyperstimulation / L. Melado Vidales, A. Fernández-Nistal, V. Martínez Fernández [et al.] // Minerva Ginecol. - 2017. - Vol. 69, N 3. - P. 225-232.

34. Antimüllerian hormone in gonadotropin releasing-hormone antagonist cycles: prediction of ovarian response and cumulative treatment outcome in good-prognosis patients / J.C. Arce, A. La Marca, B. Mirner Klein [et al.] // Fertil Steril. - 2013. - Vol. 99, N 6. - P. 1644-1653.

35. Antimüllerian hormone serum levels: a putative marker for ovarian aging / A. de Vet, J.S. Laven, F.H. de Jong [et al.] // Fertil Steril. - 2002. - Vol. 77, N 2. - P. 357-362.

36. A pilot cohort study of granulocyte colony-stimulating factor in the treatment of unresponsive thin endometrium resistant to standard therapies / N. Gleicher, A. Kim, T. Michaeli [et al.] // Hum Reprod. - 2013. - Vol. 28, N 1. - P. 172-177.

37. A prospective, comparative analysis of anti-Müllerian hormone, inhibin-B, and three-dimensional ultrasound determinants of ovarian reserve in the prediction of poor response to controlled ovarian stimulation / K. Jayaprakasan, B. Campbell, J. Hopkisson [et al.] // Fertil Steril. - 2010. - Vol. 93, N 3. - P. 855-864.

38. A randomized assessor-blind trial comparing highly purified hMG and recombinant FSH in a GnRH antagonist cycle with compulsory single-blastocyst transfer / P. Devroey, A. Pellicer, A. Nyboe Andersen [et al.] // Fertil Steril. - 2012. -Vol. 97, N 3. - P. 561-571.

39. A randomized clinical trial of endometrial perfusion with granulocyte colony-stimulating factor in in vitro fertilization cycles: impact on endometrial thickness and clinical pregnancy rates / D.H. Barad, Y. Yu, V.A. Kushnir [et al.] // Fertil Steril. - 2014.

- Vol. 101, N 3. - P. 710-715.

40. Array CGH analysis shows that aneuploidy is not related to the number of embryos generated / B. Ata, B. Kaplan, H. Danzer [et al.] // Reprod Biomed Online. -2012. - Vol. 24, N 6. - P. 614-620.

41. Association between the number of eggs and live birth in IVF treatment: an analysis of 400 135 treatment cycles / S.K. Sunkara, V. Rittenberg, N. Raine-Fenning [et al.] // Hum Reprod. - 2011. - Vol. 26, N 7. - P. 1768-1774.

42. Association of serum anti-Müllerian hormone and other factors with cumulative live birth rate following IVF / K.L. Hu, F.T. Liu, H. Xu [et al.] // Reprod Biomed Online.

- 2020. - Vol. 40, N 5. - P. 675-683.

43. Association of Thr307Ala and Asn680Ser of Follicle-Stimulating Hormone Receptor Gene Polymorphisms with Gonadotropin Administration during Controlled Ovarian Hyperstimulation / Q.-X. Meng, D. Song, H. Li [et al.] // Reproductive and Developmental Medicine. - 2018. - Vol. 2, N 2. - P. 81-87.

44. Biggers, J.D. IVF and embryo transfer: historical origin and development / J.D. Biggers // Reprod Biomed Online. - 2012. - Vol. 25, N 2. - P. 118-127.

45. Blastocyst culture and transfer: analysis of results and parameters affecting outcome in two in vitro fertilization programs / W.B. Schoolcraft, D.K. Gardner, M. Lane [et al.] // Fertil Steril. - 1999. - Vol. 72, N 4. - P. 604-609.

46. Blastocyst score affects implantation and pregnancy outcome: towards a single blastocyst transfer / D.K. Gardner, M. Lane, J. Stevens [et al.] // Fertil Steril. - 2000. -Vol. 73, N 6. - P. 1155-1158.

47. Blüher, M. Obesity: global epidemiology and pathogenesis / M. Blüher // Nat Rev Endocrinol. - 2019. - Vol. 15, N 5. - P. 288-298.

48. Broekmans, F.J. The sub-optimal response to controlled ovarian stimulation: manageable or inevitable? / F.J. Broekmans // Hum Reprod. - 2015. - Vol. 30, N 9. - P. 2009-2010.

49. Cecchino, G.N. Endometrioma, fertility, and assisted reproductive treatments: connecting the dots / G.N. Cecchino, J.A. Garcia-Velasco // Curr Opin Obstet Gynecol. - 2018. - Vol. 30, N 4. - P. 223-228.

50. Change in oocyte yield in repeated in vitro fertilization cycles: effect of ovarian reserve / E.E. Eppsteiner, A.E. Sparks, D. Liu [et al.] // Fertil Steril. - 2014. - Vol. 101, N 2. - P. 399-402.

51. Chromosomal localization of the human G-CSF gene to 17q11 proximal to the breakpoint of the t(15;17) in acute promyelocytic leukemia / M.M. Le Beau, R.S. Lemons, J.J. Carrino [et al.] // Leukemia. - 1987. - Vol. 1, N 12. - P. 795-799.

52. Chronic Pelvic Inflammation Diminished Ovarian Reserve as Indicated by Serum Anti Mülerrian Hormone / L. Cui, Y. Sheng, M. Sun [et al.] // PLoS One. - 2016. - Vol. 11, N 6. - P. e0156130.

53. Chronological age vs biological age: an age-related normogram for antral follicle count, FSH and anti-Mullerian hormone / B. Wiweko, D.M. Prawesti, A. Hestiantoro [et al.] // J Assist Reprod Genet. - 2013. - Vol. 30, N 12. - P. 1563-1567.

54. Clinical outcomes in relation to the daily dose of recombinant follicle-stimulating hormone for ovarian stimulation in in vitro fertilization in presumed normal responders younger than 39 years: a meta-analysis / M.D. Sterrenburg, S.M. Veltman-Verhulst, M.J. Eijkemans [et al.] // Hum Reprod Update. - 2011. - Vol. 17, N 2. - P. 184-196.

55. Clinical performance of a specific granulocyte colony stimulating factor ELISA to determine its concentration in follicular fluid as a predictor of implantation success during in vitro fertilization / H. Tournaye, T. D'Hooghe, G. Verheyen [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2020. - Vol. 36, N 1. - P. 44-48.

56. Clinical performance of Diafert® to determine granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) concentration in follicular fluid (FF) as a predictor of implantation during in vitro fertilization (IVF) / J. Foidart, H. Tournaye, T. D'Hooghe [et al.] // Fertility and Sterility. - 2016. - Vol. 106, N 3. - P. e316-e317.

57. Clinical relevance of genetic variants of gonadotrophins and their receptors in controlled ovarian stimulation: a systematic review and meta-analysis / C. Alviggi, A. Conforti, D. Santi [et al.] // Hum Reprod Update. - 2018. - Vol. 24, N 5. - P. 599-614.

58. Combined assessment of polymorphisms in the LHCGR and FSHR genes predict chance of pregnancy after in vitro fertilization / I. Lindgren, M. Baath, K. Uvebrant [et al.] // Hum Reprod. - 2016. - Vol. 31, N 3. - P. 672-683.

59. Committee opinion no. 618: Ovarian reserve testing // Obstet Gynecol. - 2015. -Vol. 125, N 1. - P. 268-273.

60. Concentration of colony-stimulating growth factor (CSF) in uterine flushing as prognostic criterion of IVF cycle outcome in patients with recurrent implantation failure / D. Obidniak, A. Gzgzyan, A. Kalugina [et al.] // Fertility and Sterility. - 2018. - Vol. 110, N 4. - P. e91.

61. Conventional ovarian stimulation and single embryo transfer for IVF/ICSI. How many oocytes do we need to maximize cumulative live birth rates after utilization of all

fresh and frozen embryos? / P. Drakopoulos, C. Blockeel, D. Stoop [et al.] // Hum Reprod. - 2016. - Vol. 31, N 2. - P. 370-376.

62. Could polymorphisms of some hormonal receptor genes, involved in folliculogenesis help in predicting patient response to controlled ovarian stimulation? / M. Cus, V. Vlaisavljevic, K. Repnik [et al.] // J Assist Reprod Genet. - 2019. - Vol. 36, N 1. - P. 47-55.

63. Cumulative live birth rates according to the number of oocytes retrieved after the first ovarian stimulation for in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection: a multicenter multinational analysis including ~ 15,000 women / N.P. Polyzos, P. Drakopoulos, J. Parra [et al.] // Fertil Steril. - 2018. - Vol. 110, N 4. - P. 661-670.e1.

64. Cyclic changes of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) mRNA in the human follicle during the normal menstrual cycle and immunolocalization of G-CSF protein / K. Yanagi, S. Makinoda, R. Fujii [et al.] // Hum Reprod. - 2002. - Vol. 17, N 12. - P. 3046-3052.

65. Cytokines and chemokines in follicular fluids and potential of the corresponding embryo: the role of granulocyte colony-stimulating factor / N. Ledee, R. Lombroso, L. Lombardelli [et al.] // Hum Reprod. - 2008. - Vol. 23, N 9. - P. 2001-2009.

66. Dehydroepiandrosterone (DHEA) supplementation improves in vitro fertilization outcomes of poor ovarian responders, especially in women with low serum concentration of DHEA-S: a retrospective cohort study / C.U. Chern, K.H. Tsui, S.G. Vitale [et al.] // Reprod Biol Endocrinol. - 2018. - Vol. 16, N 1. - P. 90.

67. Dehydroepiandrosterone decreases the age-related decline of the in vitro fertilization outcome in women younger than 40 years old / M. Tartagni, M.V. Cicinelli, D. Baldini [et al.] // Reprod Biol Endocrinol. - 2015. - Vol. 13, N - P. 18.

68. Demographic and evolutionary trends in ovarian function and aging / T. Laisk, O. Tsuiko, T. Jatsenko [et al.] // Hum Reprod Update. - 2019. - Vol. 25, N 1. - P. 34-50.

69. Detection of granulocyte colony-stimulating factor and its receptor in human follicular luteinized granulosa cells / A. Salmassi, A.G. Schmutzler, L. Huang [et al.] // Fertil Steril. - 2004. - Vol. 81 Suppl 1, N - P. 786-791.

70. Dewailly, D. AMH as the primary marker for fertility / D. Dewailly, J. Laven // Eur J Endocrinol. - 2019. - Vol. 181, N 6. - P. D45-d51.

71. Different anti-Mûllerian hormone (AMH) levels respond to distinct ovarian stimulation methods in assisted reproductive technology (ART): Clues to better ART outcomes / R. Ishii, N. Tachibana, R. Okawa [et al.] // Reprod Med Biol. - 2019. - Vol. 18, N 3. - P. 263-272.

72. Discordant anti-mullerian hormone (AMH) and follicle stimulating hormone (FSH) among women undergoing in vitro fertilization (IVF): which one is the better predictor for live birth? / S. Wang, Y. Zhang, V. Mensah [et al.] // J Ovarian Res. - 2018.

- Vol. 11, N 1. - P. 60.

73. Distribution of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) and G-CSF-receptor mRNA and protein in the human fetus / D.A. Calhoun, W.H. Donnelly, Jr., Y. Du [et al.] // Pediatr Res. - 1999. - Vol. 46, N 3. - P. 333-338.

74. Does daily co administration of gonadotropins and letrozole during the ovarian stimulation improve IVF outcome for poor and sub optimal responders? / M. Shapira, R. Orvieto, O. Lebovitz [et al.] // J Ovarian Res. - 2020. - Vol. 13, N 1. - P. 66.

75. Donor treatment with pegylated G-CSF augments the generation of IL-10-producing regulatory T cells and promotes transplantation tolerance / E.S. Morris, K.P. MacDonald, V. Rowe [et al.] // Blood. - 2004. - Vol. 103, N 9. - P. 3573-3581.

76. Double Stimulation in the Same Ovarian Cycle (DuoStim) to Maximize the Number of Oocytes Retrieved From Poor Prognosis Patients: A Multicenter Experience and SWOT Analysis / A. Vaiarelli, D. Cimadomo, E. Trabucco [et al.] // Front Endocrinol (Lausanne). - 2018. - Vol. 9, N - P. 317.

77. Dual trigger for final oocyte maturation improves the oocyte retrieval rate of suboptimal responders to gonadotropin-releasing hormone agonist / X. Lu, Q. Hong, L. Sun [et al.] // Fertil Steril. - 2016. - Vol. 106, N 6. - P. 1356-1362.

78. Duan, J.S. Production of granulocyte colony stimulating factor in decidual tissue and its significance in pregnancy / J.S. Duan // Osaka City Med J. - 1990. - Vol. 36, N 2.

- P. 81-97.

79. Effect of body mass index on the outcome of IVF cycles among patients with poor ovarian response / A.M. Maged, R.M. Fahmy, H. Rashwan [et al.] // Int J Gynaecol Obstet. - 2019. - Vol. 144, N 2. - P. 161-166.

80. Effect of Increased Endometrial Thickness and Implantation Rate by Granulocyte Colony-Stimulating Factor on Unresponsive Thin Endometrium in Fresh In Vitro Fertilization Cycles: A Randomized Clinical Trial / F. Sarvi, M. Arabahmadi, A. Alleyassin [et al.] // Obstet Gynecol Int. - 2017. - Vol. 2017, N - P. 3596079.

81. Effect of intrauterine granulocyte-colony stimulating factor administration on in vitro fertilization outcome in women with moderate-to-severe endometriosis: An RCT / L. Kashani, A. Moini, T. Esfidani [et al.] // Int J Reprod Biomed. - 2021. - Vol. 19, N 8.

- P. 733-740.

82. Effect of laparoscopic endometrioma cystectomy on anti-Müllerian hormone (AMH) levels / Y. Wang, X. Ruan, D. Lu [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2019. - Vol. 35, N 6. - P. 494-497.

83. Effect of women's age on embryo morphology, cleavage rate and competence-A multicenter cohort study / M.L. Grendahl, S.L. Christiansen, U.S. Kesmodel [et al.] // PLoS One. - 2017. - Vol. 12, N 4. - P. e0172456.

84. Effectiveness of highly purified human menopausal gonadotropin vs. recombinant follicle-stimulating hormone in first-cycle in vitro fertilization-intracytoplasmic sperm injection patients / P.G. Hompes, F.J. Broekmans, D.A. Hoozemans [et al.] // Fertil Steril.

- 2008. - Vol. 89, N 6. - P. 1685-1693.

85. Effects of granulocyte colony-stimulating factor on the proliferation and cell-fate specification of neural stem cells / H. Liu, D. Jia, J. Fu [et al.] // Neuroscience. - 2009. -Vol. 164, N 4. - P. 1521-1530.

86. Effects of growth hormone on pregnancy rates of patients with thin endometrium / N. Cui, A.M. Li, Z.Y. Luo [et al.] // J Endocrinol Invest. - 2019. - Vol. 42, N 1. - P. 2735.

87. Efficacy of Intrauterine infusion of granulocyte colony stimulating factor on patients with history of implantation failure: A randomized control trial / M. Eftekhar, S.

Miraj, M. Farid Mojtahedi [et al.] // Int J Reprod Biomed. - 2016. - Vol. 14, N 11. - P. 687-690.

88. Efficacy of Intrauterine Injection of Granulocyte Colony Stimulating Factor (G-CSF) on Treatment of Unexplained Recurrent Miscarriage: A Pilot RCT Study / S. Zafardoust, M.M. Akhondi, M.R. Sadeghi [et al.] // J Reprod Infertil. - 2017. - Vol. 18, N 4. - P. 379-385.

89. Efficacy of intrauterine perfusion of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) for Infertile women with thin endometrium: A systematic review and meta-analysis / Y. Xie, T. Zhang, Z. Tian [et al.] // Am J Reprod Immunol. - 2017. - Vol. 78, N 2. - P.

90. Efficacy of therapies and interventions for repeated embryo implantation failure: a systematic review and meta-analysis / A. Busnelli, E. Somigliana, F. Cirillo [et al.] // Sci Rep. - 2021. - Vol. 11, N 1. - P. 1747.

91. Eftekhar, M. Transvaginal perfusion of G-CSF for infertile women with thin endometrium in frozen ET program: A non-randomized clinical trial / M. Eftekhar, M. Sayadi, F. Arabjahvani // Iran J Reprod Med. - 2014. - Vol. 12, N 10. - P. 661-666.

92. Elgindy, E.A. Anti-Müllerian hormone: correlation of early follicular, ovulatory and midluteal levels with ovarian response and cycle outcome in intracytoplasmic sperm injection patients / E.A. Elgindy, D.O. El-Haieg, A. El-Sebaey // Fertil Steril. - 2008. -Vol. 89, N 6. - P. 1670-1676.

93. Embryo transfer strategy and therapeutic options in infertile patients with thin endometrium: a systematic review / N. Ranisavljevic, J. Raad, T. Anahory [et al.] // J Assist Reprod Genet. - 2019. - Vol. 36, N 11. - P. 2217-2231.

94. ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria / A.P. Ferraretti, A. La Marca, B.C. Fauser [et al.] // Hum Reprod. - 2011. - Vol. 26, N 7. - P. 1616-1624.

95. Evaluation of anti-Müllerian hormone as a test for the prediction of ovarian reserve / J. Kwee, R. Schats, J. McDonnell [et al.] // Fertil Steril. - 2008. - Vol. 90, N 3. - P. 737-743.

96. Expression cloning of a human granulocyte colony-stimulating factor receptor: a structural mosaic of hematopoietin receptor, immunoglobulin, and fibronectin domains /

A. Larsen, T. Davis, B.M. Curtis [et al.] // J Exp Med. - 1990. - Vol. 172, N 6. - P. 15591570.

97. Female obesity is negatively associated with live birth rate following IVF: a systematic review and meta-analysis / N. Sermondade, S. Huberlant, V. Bourhis-Lefebvre [et al.] // Hum Reprod Update. - 2019. - Vol. 25, N 4. - P. 439-451.

98. Follicular versus luteal phase ovarian stimulation during the same menstrual cycle (DuoStim) in a reduced ovarian reserve population results in a similar euploid blastocyst formation rate: new insight in ovarian reserve exploitation / F.M. Ubaldi, A. Capalbo, A. Vaiarelli [et al.] // Fertil Steril. - 2016. - Vol. 105, N 6. - P. 1488-1495.e1.

99. G-CSF as immune regulator in T cells expressing the G-CSF receptor: implications for transplantation and autoimmune diseases / A. Franzke, W. Piao, J. Lauber [et al.] // Blood. - 2003. - Vol. 102, N 2. - P. 734-739.

100. Gardner, David K. In-vitro culture of human blastocyst / D.K. Gardner // Towards reproductive certainty: infertility and genetics beyond 1999. - 1999. - Vol. N -P. 378-388.

101. Gleicher, N. Successful treatment of unresponsive thin endometrium / N. Gleicher, A. Vidali, D.H. Barad // Fertil Steril. - 2011. - Vol. 95, N 6. - P. 2123.e13-7.

102. Granulocyte colony stimulating factor treatment of resistant thin endometrium in women with frozen-thawed blastocyst transfer / M. Kunicki, K. Lukaszuk, J. Liss [et al.] // Syst Biol Reprod Med. - 2017. - Vol. 63, N 1. - P. 49-57.

103. Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) in the mechanism of human ovulation and its clinical usefulness / S. Makinoda, N. Hirosaki, T. Waseda [et al.] // Curr Med Chem. - 2008. - Vol. 15, N 6. - P. 604-613.

104. Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) prevents luteinized unruptured follicle (LUF) caused clomiphene treatment / R. Fujii, T. Shibata, N. Neyatani [et al.] // Fertility and Sterility. - 2013. - Vol. 100, N 3. - P. S258.

105. Granulocyte colony-stimulating factor administration for infertile women with thin endometrium in frozen embryo transfer program / Y. Li, P. Pan, X. Chen [et al.] // Reprod Sci. - 2014. - Vol. 21, N 3. - P. 381-385.

106. Granulocyte colony-stimulating factor as a potential inducer of ovulation in infertile women with luteinized unruptured follicle syndrome / T. Shibata, S. Makinoda, T. Waseda [et al.] // Transl Res. - 2016. - Vol. 171, N - P. 63-70.

107. Granulocyte colony-stimulating factor for intracytoplasmic sperm injection patients with repeated implantation failure: which route is best?f / H.B. Zeyneloglu, Y.A. Tohma, G. Onalan [et al.] // J Obstet Gynaecol. - 2020. - Vol. 40, N 4. - P. 526-530.

108. Granulocyte colony-stimulating factor in repeated IVF failure, a randomized trial / A. Aleyasin, Z. Abediasl, A. Nazari [et al.] // Reproduction. - 2016. - Vol. 151, N 6. -P. 637-642.

109. Granulocyte colony-stimulating factor is present in human milk and its receptor is present in human fetal intestine / D.A. Calhoun, M. Lunoe, Y. Du [et al.] // Pediatrics. - 2000. - Vol. 105, N 1. - P. e7.

110. Granulocyte colony-stimulating factor production by adult T-cell leukaemia cells / K. Matsushita, N. Arima, K. Yamaguchi [et al.] // Br J Haematol. - 2000. - Vol. 111, N 1. - P. 208-215.

111. Granulocyte colony-stimulating factor: a novel mediator of T cell tolerance / S. Rutella, F. Zavala, S. Danese [et al.] // J Immunol. - 2005. - Vol. 175, N 11. - P. 70857091.

112. Granulocyte colony-stimulating factor: A relation between serum and follicular fluid levels and in-vitro fertilization outcome in patients with polycystic ovary syndrome / I. Kahyaoglu, N. Yilmaz, H. Timur [et al.] // Cytokine. - 2015. - Vol. 74, N 1. - P. 113116.

113. Granulocyte-colony stimulating factor as treatment option in patients with recurrent miscarriage / C. Santjohanser, C. Knieper, C. Franz [et al.] // Arch Immunol Ther Exp (Warsz). - 2013. - Vol. 61, N 2. - P. 159-164.

114. Granulocyte-colony stimulating factor may improve pregnancy outcome in patients with history of unexplained recurrent implantation failure: An RCT / S. Arefi, E. Fazeli, M. Esfahani [et al.] // Int J Reprod Biomed. - 2018. - Vol. 16, N 5. - P. 299-304.

115. Growth hormone co-treatment in IVF/ICSI cycles in poor responders / K. Ob'edkova, I. Kogan, I. Krikheli [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2017. - Vol. 33, N sup1.

- P. 15-17.

116. Growth hormone facilitates ovulation induction by gonadotrophins / R. Homburg, A. Eshel, H.I. Abdalla [et al.] // Clin Endocrinol (Oxf). - 1988. - Vol. 29, N 1.

- P. 113-117.

117. Growth hormone for in vitro fertilization / J.M. Duffy, G. Ahmad, L. Mohiyiddeen [et al.] // Cochrane Database Syst Rev. - 2010. - Vol. 2010, N 1. - P. Cd000099.

118. Hart, R.J. Growth hormone in IVF cycles: any hope? / R.J. Hart, L. Rombauts, R.J. Norman // Curr Opin Obstet Gynecol. - 2017. - Vol. 29, N 3. - P. 119-125.

119. Hart, R.J. Use of Growth Hormone in the IVF Treatment of Women With Poor Ovarian Reserve / R.J. Hart // Front Endocrinol (Lausanne). - 2019. - Vol. 10, N - P. 500.

120. Human recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) compared to urinary human menopausal gonadotropin (HMG) for ovarian stimulation in assisted reproduction: a literature review and cost evaluation / P.E. Levi Setti, C. Alviggi, G.L. Colombo [et al.] // J Endocrinol Invest. - 2015. - Vol. 38, N 5. - P. 497-503.

121. Hutson, J. The ontogeny of Mullerian inhibiting substance in the gonads of the chicken / J. Hutson, H. Ikawa, P.K. Donahoe // J Pediatr Surg. - 1981. - Vol. 16, N 6. -P. 822-827.

122. Identification and characterization of receptors for granulocyte colony-stimulating factor on human placenta and trophoblastic cells / H. Uzumaki, T. Okabe, N. Sasaki [et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. - 1989. - Vol. 86, N 23. - P. 9323-9326.

123. Identification of a functional receptor for granulocyte colony-stimulating factor on platelets / K. Shimoda, S. Okamura, N. Harada [et al.] // J Clin Invest. - 1993. - Vol. 91, N 4. - P. 1310-1313.

124. Immunohistochemical Study on the Expression of G-CSF, G-CSFR, VEGF, VEGFR-1, Foxp3 in First Trimester Trophoblast of Recurrent Pregnancy Loss in

Pregnancies Treated with G-CSF and Controls / F. Scarpellini, F.G. Klinger, G. Rossi [et al.] // Int J Mol Sci. - 2019. - Vol. 21, N 1. - P.

125. Impact of antimüllerian hormone assays on the outcomes of in vitro fertilization: a prospective controlled study / M. Aboulghar, W. Saber, Y. Amin [et al.] // Fertil Steril.

- 2014. - Vol. 101, N 1. - P. 134-137.

126. Impact of follicular G-CSF quantification on subsequent embryo transfer decisions: a proof of concept study / N. Ledee, V. Gridelet, S. Ravet [et al.] // Hum Reprod. - 2013. - Vol. 28, N 2. - P. 406-413.

127. Impact of hemostatic methods on ovarian reserve and fertility in laparoscopic ovarian cystectomy / J. Xiao, J. Zhou, H. Liang [et al.] // Exp Ther Med. - 2019. - Vol. 17, N 4. - P. 2689-2693.

128. Impact of Maternal Age on Oocyte and Embryo Competence / D. Cimadomo, G. Fabozzi, A. Vaiarelli [et al.] // Front Endocrinol (Lausanne). - 2018. - Vol. 9, N - P. 327.

129. Impact of ovarian endometrioma on assisted reproduction outcomes / S. Gupta, A. Agarwal, R. Agarwal [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2006. - Vol. 13, N 3. - P. 349-360.

130. In Estimated Good Prognosis Patients Could Unexpected "Hyporesponse" to Controlled Ovarian Stimulation be Related to Genetic Polymorphisms of FSH Receptor? / C. Alviggi, A. Conforti, F. Caprio [et al.] // Reprod Sci. - 2016. - Vol. 23, N 8. - P. 1103-1108.

131. Inefficient Crossover Maturation Underlies Elevated Aneuploidy in Human Female Meiosis / S. Wang, T. Hassold, P. Hunt [et al.] // Cell. - 2017. - Vol. 168, N 6. -P. 977-989.e17.

132. Influence of antral follicle count (AFC) on IVF-ET outcome is modulated by age / A. Oppenheimer, A. Bartmann, V. Genro [et al.] // Fertility and Sterility. - 2015. - Vol. 104, N 3. - P. e62.

133. Intrauterine G-CSF Administration in Recurrent Implantation Failure (RIF): An Rct / Z. Kalem, M. Namli Kalem, B. Bakirarar [et al.] // Sci Rep. - 2020. - Vol. 10, N 1.

- P. 5139.

134. Is granulocyte colony-stimulating factor level predictive for human IVF outcome? / A. Salmassi, A.G. Schmutzler, S. Schaefer [et al.] // Hum Reprod. - 2005. -Vol. 20, N 9. - P. 2434-2440.

135. Kamath, M.S. Granulocyte-colony stimulating factor administration for subfertile women undergoing assisted reproduction / M.S. Kamath, R. Kirubakaran, S.K. Sunkara // Cochrane Database Syst Rev. - 2020. - Vol. 1, N 1. - P. Cd013226.

136. Larger oocyte cohorts maximize fresh IVF cycle birth rates and availability of surplus high-quality blastocysts for cryopreservation / M.T. Connell, K.S. Richter, K. Devine [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2019. - Vol. 38, N 5. - P. 711-723.

137. Lehert, P. Recombinant human follicle-stimulating hormone produces more oocytes with a lower total dose per cycle in assisted reproductive technologies compared with highly purified human menopausal gonadotrophin: a meta-analysis / P. Lehert, J.C. Schertz, D. Ezcurra // Reprod Biol Endocrinol. - 2010. - Vol. 8, N - P. 112.

138. Liu, K.E. Management of thin endometrium in assisted reproduction: a clinical practice guideline from the Canadian Fertility and Andrology Society / K.E. Liu, M. Hartman, A. Hartman // Reprod Biomed Online. - 2019. - Vol. 39, N 1. - P. 49-62.

139. Luteal phase after conventional stimulation in the same ovarian cycle might improve the management of poor responder patients fulfilling the Bologna criteria: a case series / A. Vaiarelli, D. Cimadomo, A. Conforti [et al.] // Fertil Steril. - 2020. - Vol. 113, N 1. - P. 121-130.

140. Metcalf, D. Clonal extinction of myelomonocytic leukemic cells by serum from mice injected with endotoxin / D. Metcalf // Int J Cancer. - 1980. - Vol. 25, N 2. - P. 225-233.

141. Moolhuijsen, L.M.E. Anti-Müllerian Hormone and Ovarian Reserve: Update on Assessing Ovarian Function / L.M.E. Moolhuijsen, J.A. Visser // J Clin Endocrinol Metab. - 2020. - Vol. 105, N 11. - P. 3361-3373.

142. Mullerian inhibiting substance in humans: normal levels from infancy to adulthood / M.M. Lee, P.K. Donahoe, T. Hasegawa [et al.] // J Clin Endocrinol Metab. -1996. - Vol. 81, N 2. - P. 571-576.

143. Multicenter evaluation of the Access AMH antimüllerian hormone assay for the prediction of antral follicle count and poor ovarian response to controlled ovarian stimulation / V.L. Baker, C. Gracia, M.J. Glassner [et al.] // Fertil Steril. - 2018. - Vol. 110, N 3. - P. 506-513.e3.

144. Nakagawa, S. Intrinsically Defective Microtubule Dynamics Contribute to Age-Related Chromosome Segregation Errors in Mouse Oocyte Meiosis-I / S. Nakagawa, G. FitzHarris // Curr Biol. - 2017. - Vol. 27, N 7. - P. 1040-1047.

145. Nelson, S.M. Comparison of antimüllerian hormone levels and antral follicle count as predictor of ovarian response to controlled ovarian stimulation in good-prognosis patients at individual fertility clinics in two multicenter trials / S.M. Nelson, B.M. Klein, J.C. Arce // Fertil Steril. - 2015. - Vol. 103, N 4. - P. 923-930.e1.

146. Nelson, S.M. Serum anti-Müllerian hormone and FSH: prediction of live birth and extremes of response in stimulated cycles--implications for individualization of therapy / S.M. Nelson, R.W. Yates, R. Fleming // Hum Reprod. - 2007. - Vol. 22, N 9. -P. 2414-2421.

147. New therapeutic protocol for improvement of endometrial receptivity (PRIMER) for patients with recurrent implantation failure (RIF) - A pilot study / F. Dieamant, L.D. Vagnini, C.G. Petersen [et al.] // JBRA Assist Reprod. - 2019. - Vol. 23, N 3. - P. 250254.

148. Nicola, N.A. Identification of the human analogue of a regulator that induces differentiation in murine leukaemic cells / N.A. Nicola, C.G. Begley, D. Metcalf // Nature. - 1985. - Vol. 314, N 6012. - P. 625-628.

149. Obesity adversely impacts the number and maturity of oocytes in conventional IVF not in minimal stimulation IVF / J.J. Zhang, M. Feret, L. Chang [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2015. - Vol. 31, N 5. - P. 409-413.

150. Oocyte number as a predictor for ovarian hyperstimulation syndrome and live birth: an analysis of 256,381 in vitro fertilization cycles / R.G. Steward, L. Lan, A.A. Shah [et al.] // Fertil Steril. - 2014. - Vol. 101, N 4. - P. 967-973.

151. Oocyte or embryo number needed to optimize live birth and cumulative live birth rates in mild stimulation IVF cycles / A.K. Datta, S. Campbell, N. Felix [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2021. - Vol. 43, N 2. - P. 223-232.

152. Optimal cutoff value of basal anti-mullerian hormone in iranian infertile women for prediction of ovarian hyper-stimulation syndrome and poor response to stimulation / M.M. Aghssa, A.M. Tarafdari, E.S. Tehraninejad [et al.] // Reprod Health. - 2015. - Vol. 12, N - P. 85.

153. Optimum oocyte retrieved and transfer strategy in young women with normal ovarian reserve undergoing a long treatment protocol: a retrospective cohort study / Y.H. Chen, X.H. Xu, Q. Wang [et al.] // J Assist Reprod Genet. - 2015. - Vol. 32, N 10. - P. 1459-1467.

154. Outcome of assisted reproductive technology in overweight and obese women / A. MacKenna, J.E. Schwarze, J.A. Crosby [et al.] // JBRA Assist Reprod. - 2017. - Vol. 21, N 2. - P. 79-83.

155. Outcome of in vitro fertilization following stimulation with highly purified hMG or recombinant FSH in downregulated women of advanced reproductive age: a prospective, randomized and controlled trial / H. Ye, G. Huang, L. Pei [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2012. - Vol. 28, N 7. - P. 540-544.

156. Ovarian biomarkers predict controlled ovarian stimulation for in vitro fertilisation treatment in Singapore / R.W.K. Lee, L.W. Khin, M.S. Hendricks [et al.] // Singapore Med J. - 2020. - Vol. 61, N 9. - P. 463-468.

157. Ovarian cyst removal influences ovarian reserve dependent on histology, size and type of operation / M. Henes, T. Engler, F.A. Taran [et al.] // Womens Health (Lond).

- 2018. - Vol. 14, N - P. 1745506518778992.

158. Ovarian reserve parameters and response to controlled ovarian stimulation in infertile patients / Q.U.A. Siddiqui, S. Anjum, F. Zahra [et al.] // Pak J Med Sci. - 2019.

- Vol. 35, N 4. - P. 958-962.

159. Ovarian response prediction in controlled ovarian stimulation for IVF using anti-Müllerian hormone in Chinese women: A retrospective cohort study / H. Zheng, S. Chen, H. Du [et al.] // Medicine (Baltimore). - 2017. - Vol. 96, N 13. - P. e6495.

160. Ovarian response prediction in GnRH antagonist treatment for IVF using anti-Müllerian hormone / O. Hamdine, M.J. Eijkemans, E.W. Lentjes [et al.] // Hum Reprod. - 2015. - Vol. 30, N 1. - P. 170-178.

161. Ovarian response to follicle-stimulating hormone (FSH) stimulation depends on the FSH receptor genotype / M. Perez Mayorga, J. Gromoll, H.M. Behre [et al.] // J Clin Endocrinol Metab. - 2000. - Vol. 85, N 9. - P. 3365-3369.

162. Overweight and obesity negatively affect the outcomes of ovarian stimulation and in vitro fertilisation: a cohort study of 2628 Chinese women / D. Zhang, Y. Zhu, H. Gao [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2010. - Vol. 26, N 5. - P. 325-332.

163. Overweight and obesity significantly reduce pregnancy, implantation, and live birth rates in women undergoing In Vitro Fertilization procedures / J. Garcia-Ferreyra, J. Carpio, M. Zambrano [et al.] // JBRA Assist Reprod. - 2021. - Vol. 25, N 3. - P. 394402.

164. Pacheco, A. Impact of very low anti-Müllerian hormone on pregnancy success / A. Pacheco, M. Cruz, J.A. Garcia Velasco // Curr Opin Obstet Gynecol. - 2017. - Vol. 29, N 3. - P. 131-135.

165. Polyzos, N.P. Sub-optimal responders following controlled ovarian stimulation: an overlooked group? / N.P. Polyzos, S.K. Sunkara // Hum Reprod. - 2015. - Vol. 30, N 9. - P. 2005-2008.

166. Predicting suboptimal oocyte yield following GnRH agonist trigger by measuring serum LH at the start of ovarian stimulation / B. Popovic-Todorovic, S. Santos-Ribeiro, P. Drakopoulos [et al.] // Hum Reprod. - 2019. - Vol. 34, N 10. - P. 2027-2035.

167. Prediction of in vitro fertilization outcome at different antral follicle count thresholds combined with female age, female cause of infertility, and ovarian response in a prospective cohort of 8269 women / S. Liao, J. Xiong, H. Tu [et al.] // Medicine (Baltimore). - 2019. - Vol. 98, N 41. - P. e17470.

168. Prediction of significant OHSS by ovarian reserve and ovarian response -implications for elective freeze-all strategy / A. Sood, A. Goel, S. Boda [et al.] // Hum Fertil (Camb). - 2020. - Vol. N - P. 1-7.

169. Predictive factors in in vitro fertilization (IVF): a systematic review and metaanalysis / L.L. van Loendersloot, M. van Wely, J. Limpens [et al.] // Hum Reprod Update.

- 2010. - Vol. 16, N 6. - P. 577-589.

170. Predictive value of antral follicle count and serum anti-Müllerian hormone: Which is better for live birth prediction in patients aged over 40 with their first IVF treatment? / Y. Lee, T.H. Kim, J.K. Park [et al.] // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. -2018. - Vol. 221, N - P. 151-155.

171. Pretreatment with coenzyme Q10 improves ovarian response and embryo quality in low-prognosis young women with decreased ovarian reserve: a randomized controlled trial / Y. Xu, V. Nisenblat, C. Lu [et al.] // Reprod Biol Endocrinol. - 2018. - Vol. 16, N 1. - P. 29.

172. Prevalence of chronic endometritis in repeated unexplained implantation failure and the IVF success rate after antibiotic therapy / E. Cicinelli, M. Matteo, R. Tinelli [et al.] // Hum Reprod. - 2015. - Vol. 30, N 2. - P. 323-330.

173. Prevalence of Obesity Among Adults and Youth: United States, 2015-2016 / C.M. Hales, M.D. Carroll, C.D. Fryar [et al.] // NCHS Data Brief. - 2017. - Vol. N 288.

- P. 1-8.

174. Production of the growth factors GM-CSF, G-CSF, and VEGF by human peripheral blood cells induced with metal complexes of human serum gamma -globulin formed with copper or zinc ions / S.B. Cheknev, M.A. Apresova, N.A. Moryakova [et al.] // Mediators Inflamm. - 2014. - Vol. 2014, N - P. 518265.

175. Purification and biochemical characterization of human pluripotent hematopoietic colony-stimulating factor / K. Welte, E. Platzer, L. Lu [et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. - 1985. - Vol. 82, N 5. - P. 1526-1530.

176. Purification of a factor inducing differentiation in murine myelomonocytic leukemia cells. Identification as granulocyte colony-stimulating factor / N.A. Nicola, D. Metcalf, M. Matsumoto [et al.] // J Biol Chem. - 1983. - Vol. 258, N 14. - P. 9017-9023.

177. Recombinant human granulocyte colony-stimulating factor: effects on normal and leukemic myeloid cells / L.M. Souza, T.C. Boone, J. Gabrilove [et al.] // Science. -1986. - Vol. 232, N 4746. - P. 61-65.

178. Recombinant human granulocyte- colony stimulating factor in women with unexplained recurrent pregnancy losses: a randomized clinical trial / A. Eapen, M. Joing, P. Kwon [et al.] // Hum Reprod. - 2019. - Vol. 34, N 3. - P. 424-432.

179. Recombinant luteinizing hormone (rLH) and recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) for ovarian stimulation in IVF/ICSI cycles / M.H. Mochtar, N.A. Danhof, R.O. Ayeleke [et al.] // Cochrane Database Syst Rev. - 2017. - Vol. 5, N 5. - P. Cd005070.

180. Recombinant luteinizing hormone supplementation in assisted reproductive technology: a systematic review / C. Alviggi, A. Conforti, S.C. Esteves [et al.] // Fertil Steril. - 2018. - Vol. 109, N 4. - P. 644-664.

181. Retrospective cohort study: AMH is the best ovarian reserve markers in predicting ovarian response but has unfavorable value in predicting clinical pregnancy in GnRH antagonist protocol / H. Xu, L. Zeng, R. Yang [et al.] // Arch Gynecol Obstet. -2017. - Vol. 295, N 3. - P. 763-770.

182. Review: Chronic endometritis and its effect on reproduction / F. Kimura, A. Takebayashi, M. Ishida [et al.] // J Obstet Gynaecol Res. - 2019. - Vol. 45, N 5. - P. 951960.

183. Root, R.K. Granulocyte colony-stimulating factor and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor: comparisons and potential for use in the treatment of infections in nonneutropenic patients / R.K. Root, D.C. Dale // J Infect Dis. - 1999. - Vol. 179 Suppl 2, N - P. 342-352.

184. Routine morphological scoring systems in assisted reproduction treatment fail to reflect age-related impairment of oocyte and embryo quality / M.H. Stensen, T. Tanbo, R. Storeng [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2010. - Vol. 21, N 1. - P. 118-125.

185. Scarpellini, F. G-CSF pharmacologic supplementation in the ART (Assisted Reproductive Technologies) treatment cycles of low responder women / F. Scarpellini, M. Sbracia, A. Patella // Journal of Reproductive Immunology. - 2009. - Vol. 2, N 81. -P. 158-159.

186. Scarpellini, F. The use of G-CSF for implantation failure in IVF: a clinical trial / F. Scarpellini, M. Sbracia // Fertility and Sterility. - 2011. - Vol. 96, N 3. - P. S93.

187. Scarpellini, F. Use of granulocyte colony-stimulating factor for the treatment of unexplained recurrent miscarriage: a randomised controlled trial / F. Scarpellini, M. Sbracia // Hum Reprod. - 2009. - Vol. 24, N 11. - P. 2703-2708.

188. Secretion of cytokines and chemokines by polarized human epithelial cells from the female reproductive tract / J.V. Fahey, T.M. Schaefer, J.Y. Channon [et al.] // Hum Reprod. - 2005. - Vol. 20, N 6. - P. 1439-1446.

189. Selective stimulation of G-CSF gene expression in macrophages by a stimulatory monoclonal antibody as detected by a luciferase reporter gene assay / Y. Aoki, S. Sha, H. Mukai [et al.] // J Leukoc Biol. - 2000. - Vol. 68, N 5. - P. 757-764.

190. Serum anti-Mullerian hormone and inhibin B levels at ovulation triggering day can predict the number of immature oocytes retrieved in in vitro fertilization cycles / B.C. Jee, S.Y. Ku, C.S. Suh [et al.] // J Korean Med Sci. - 2008. - Vol. 23, N 4. - P. 657-661.

191. Serum anti-Mullerian hormone is associated with oocyte dysmorphisms and ICSI outcomes / E. Azizi, M. Naji, L. Nazari [et al.] // Int J Gynaecol Obstet. - 2019. -Vol. 147, N 2. - P. 179-186.

192. Sharma, R. Organ-specific phenotypic and functional features of NK cells in humans / R. Sharma, A. Das // Immunol Res. - 2014. - Vol. 58, N 1. - P. 125-131.

193. Shorter, S.C. Production of granulocyte colony-stimulating factor at the materno-foetal interface in human pregnancy / S.C. Shorter, G.S. Vince, P.M. Starkey // Immunology. - 1992. - Vol. 75, N 3. - P. 468-674.

194. Significance of a common single nucleotide polymorphism in exon 10 of the follicle-stimulating hormone (FSH) receptor gene for the ovarian response to FSH: a pharmacogenetic approach to controlled ovarian hyperstimulation / H.M. Behre, R.R. Greb, A. Mempel [et al.] // Pharmacogenet Genomics. - 2005. - Vol. 15, N 7. - P. 451456.

195. Sopa, N. Anti-Mullerian Hormone (AMH) is A Good Predictor for Ongoing Pregnancy in Women Undergoing IVF/ICSI in Antagonist Cycles / N. Sopa // Journal of Gynecology and Womens Health. - 2019. - Vol. 13, N 5. - P.

196. Statistically significant changes of antimüllerian hormone and inhibin levels during the physiologic menstrual cycle in reproductive age women / D.M. Wunder, N.A. Bersinger, M. Yared [et al.] // Fertil Steril. - 2008. - Vol. 89, N 4. - P. 927-933.

197. Steptoe, P.C. Birth after the reimplantation of a human embryo / P.C. Steptoe, R.G. Edwards // Lancet. - 1978. - Vol. 2, N 8085. - P. 366.

198. Suboptimal response to GnRHa long protocol is associated with a common LH polymorphism / C. Alviggi, R. Clarizia, K. Pettersson [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2011. - Vol. 22 Suppl 1, N - P. S67-72.

199. Systematic review and meta-analysis of the effect of bipolar electrocoagulation during laparoscopic ovarian endometrioma stripping on ovarian reserve / P. Deckers, S.C. Ribeiro, R.D.S. Simöes [et al.] // Int J Gynaecol Obstet. - 2018. - Vol. 140, N 1. - P. 1117.

200. Tayyar, A.T. Comparison between cycles of the same patients when using recombinant luteinizing hormone + recombinant follicle stimulating hormone (rFSH), human menopausal gonadotropin + rFSH and rFSH only / A.T. Tayyar, S. Kahraman // Arch Med Sci. - 2019. - Vol. 15, N 3. - P. 673-679.

201. The addition of growth hormone adjuvant therapy to the long down regulation protocol in poor responders undergoing in vitro fertilization: Randomized control trial / D.M.R. Dakhly, Y.A. Bassiouny, Y.A. Bayoumi [et al.] // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. - 2018. - Vol. 228, N - P. 161-165.

202. The Effect of Dehydroepiandrosterone (DHEA) Supplementation on IVF or ICSI: A Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials / L. Xu, C. Hu, Q. Liu [et al.] // Geburtshilfe Frauenheilkd. - 2019. - Vol. 79, N 7. - P. 705-712.

203. The Effect of Dose Adjustments in a Subsequent Cycle of Women With Suboptimal Response Following Conventional Ovarian Stimulation / P. Drakopoulos, S. Santos-Ribeiro, E. Bosch [et al.] // Front Endocrinol (Lausanne). - 2018. - Vol. 9, N - P. 361.

204. The effects of human recombinant granulocyte-colony stimulating factor treatment during in vitro maturation of porcine oocyte on subsequent embryonic

development / L. Cai, Y. Jeon, J.D. Yoon [et al.] // Theriogenology. - 2015. - Vol. 84, N 7. - P. 1075-1087.

205. The evaluation of recombinant LH supplementation in patients with suboptimal response to recombinant FSH undergoing IVF treatment with GnRH agonist down-regulation / F. Yazici Yilmaz, H. Görkemli, M.C. Çolakoglu [et al.] // Gynecol Endocrinol. - 2015. - Vol. 31, N 2. - P. 141-144.

206. The impact of a thin endometrial lining on fresh and frozen-thaw IVF outcomes: an analysis of over 40 000 embryo transfers / K.E. Liu, M. Hartman, A. Hartman [et al.] // Hum Reprod. - 2018. - Vol. 33, N 10. - P. 1883-1888.

207. The impact of laparoscopic cystectomy on ovarian reserve in patients with unilateral and bilateral endometrioma / A. Mehdizadeh Kashi, S. Chaichian, S. Ariana [et al.] // Int J Gynaecol Obstet. - 2017. - Vol. 136, N 2. - P. 200-204.

208. The influence of AMH on IVF success / R. Gomez, M. Schorsch, T. Hahn [et al.] // Arch Gynecol Obstet. - 2016. - Vol. 293, N 3. - P. 667-673.

209. The influence of different growth hormone addition protocols to poor ovarian responders on clinical outcomes in controlled ovary stimulation cycles: A systematic review and meta-analysis / X.L. Li, L. Wang, F. Lv [et al.] // Medicine (Baltimore). -2017. - Vol. 96, N 12. - P. e6443.

210. The influence of the site of sperm deposition and mode of oolemma breakage at intracytoplasmic sperm injection on fertilization and embryo development rates / Z.P. Nagy, J. Liu, H. Joris [et al.] // Hum Reprod. - 1995. - Vol. 10, N 12. - P. 3171-3177.

211. The intrauterine perfusion of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) before frozen-thawed embryo transfer in patients with two or more implantation failures / P. Huang, C. Yao, L. Wei [et al.] // Hum Fertil (Camb). - 2020. - Vol. N - P. 1-5.

212. The long-term prognosis for live birth in couples initiating fertility treatments / S.S. Malchau, A.A. Henningsen, A. Loft [et al.] // Hum Reprod. - 2017. - Vol. 32, N 7. - p. 1439-1449.

213. The nature of aneuploidy with increasing age of the female partner: a review of 15,169 consecutive trophectoderm biopsies evaluated with comprehensive chromosomal

screening / J.M. Franasiak, E.J. Forman, K.H. Hong [et al.] // Fertil Steril. - 2014. - Vol. 101, N 3. - P. 656-663.e1.

214. The neglected morula/compact stage embryo transfer / J. Tao, R. Tamis, K. Fink [et al.] // Hum Reprod. - 2002. - Vol. 17, N 6. - P. 1513-1518.

215. The optimum number of oocytes in IVF treatment: an analysis of 2455 cycles in China / J. Ji, Y. Liu, X.H. Tong [et al.] // Hum Reprod. - 2013. - Vol. 28, N 10. - P. 2728-2734.

216. The Ovarian Response After Follicular Versus Luteal Phase Stimulation with a Double Stimulation Strategy / M. Bourdon, P. Santulli, C. Maignien [et al.] // Reprod Sci. - 2020. - Vol. 27, N 1. - P. 204-210.

217. The predictive role of granulocyte colony-stimulating factor and others cytokines in follicular fluid on the embryo implantation / R. Frydman, A. Osipova, M.-P. Piccini [et al.] // Fertility and Sterility. - 2009. - Vol. 92, N 3. - P. S249.

218. Therapeutic role of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) for infertile women under in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) treatment: a meta-analysis / L. Zhang, W.H. Xu, X.H. Fu [et al.] // Arch Gynecol Obstet. - 2018. - Vol. 298, N 5. - P. 861-871.

219. The re-growth of growth hormone in fertility treatment: a critical review / R. Homburg, A. Singh, P. Bhide [et al.] // Hum Fertil (Camb). - 2012. - Vol. 15, N 4. - P. 190-193.

220. The relationship between FSH receptor polymorphism status and IVF cycle outcome: a retrospective observational study / T.E. König, J. van der Lee, R. Schats [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2019. - Vol. 39, N 2. - P. 231-240.

221. The role of G-CSF in recurrent implantation failure: A randomized double blind placebo control trial / F. Davari-Tanha, E. Shahrokh Tehraninejad, M. Ghazi [et al.] // Int J Reprod Biomed. - 2016. - Vol. 14, N 12. - P. 737-742.

222. The role of ovarian reserve markers in prediction of clinical pregnancy / A.G. Zebitay, O. Cetin, F.F. Verit [et al.] // J Obstet Gynaecol. - 2017. - Vol. 37, N 4. - P. 492-497.

223. The role of recombinant LH in women with hypo-response to controlled ovarian stimulation: a systematic review and meta-analysis / A. Conforti, S.C. Esteves, F. Di Rella [et al.] // Reprod Biol Endocrinol. - 2019. - Vol. 17, N 1. - P. 18.

224. The Ser680Asn polymorphism in the follicle-stimulating hormone receptor gene is associated with the ovarian response in controlled ovarian hyperstimulation / X. Huang, L. Li, L. Hong [et al.] // Clin Endocrinol (Oxf). - 2015. - Vol. 82, N 4. - P. 577-583.

225. The specificity of the ovarian reserve of women with chronic salpingoophoritis / V.A. Novikova, F.R. Autleva, A.A. Sorochenko [et al.] // Kuban Scientific Medical Bulletin. - 2018. - Vol. 25, N 6. - P. 119-126.

226. Three different mRNAs encoding human granulocyte colony-stimulating factor receptor / R. Fukunaga, Y. Seto, S. Mizushima [et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. -1990. - Vol. 87, N 22. - P. 8702-8706.

227. Treatment of G-CSF in unexplained, repeated implantation failure: A systematic review and meta-analysis / Y. Jiang, Q. Zhao, Y. Zhang [et al.] // J Gynecol Obstet Hum Reprod. - 2020. - Vol. N - P. 101866.

228. Treatment of thin endometrium with autologous platelet-rich plasma: a pilot study / S. Zadehmodarres, S. Salehpour, N. Saharkhiz [et al.] // JBRA Assist Reprod. -2017. - Vol. 21, N 1. - P. 54-56.

229. Two protocols to treat thin endometrium with granulocyte colony-stimulating factor during frozen embryo transfer cycles / B. Xu, Q. Zhang, J. Hao [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2015. - Vol. 30, N 4. - P. 349-358.

230. Understanding Ovarian Hypo-Response to Exogenous Gonadotropin in Ovarian Stimulation and Its New Proposed Marker-The Follicle-To-Oocyte (FOI) Index / C. Alviggi, A. Conforti, S.C. Esteves [et al.] // Front Endocrinol (Lausanne). - 2018. - Vol. 9, N - P. 589.

231. Use of granulocyte colony-stimulating factor during pregnancy in women with chronic neutropenia / L.A. Boxer, A.A. Bolyard, M.L. Kelley [et al.] // Obstet Gynecol. - 2015. - Vol. 125, N 1. - P. 197-203.

232. Use of granulocyte colony-stimulating factor in ART treatment does not increase the risk of adverse perinatal outcomes / M. Cruz, D. Alecsandru, J.A. Garcia-Velasco [et al.] // Reprod Biomed Online. - 2019. - Vol. 39, N 6. - P. 976-980.

233. Visser, J.A. Anti-Müllerian hormone and folliculogenesis / J.A. Visser, A.P. Themmen // Mol Cell Endocrinol. - 2005. - Vol. 234, N 1-2. - P. 81-86.

234. Wang, R. Growth Hormone as an Adjunct to Controlled Ovarian Hyperstimulation for IVF / R. Wang, R. Hart, R.J. Norman // How to Prepare the Egg and Embryo to Maximize IVF Success. - 2019. - Vol. N - P. 182.

235. Würfel, W. Treatment with granulocyte colony-stimulating factor in patients with repetitive implantation failures and/or recurrent spontaneous abortions / W. Würfel // J Reprod Immunol. - 2015. - Vol. 108, N - P. 123-135.

SAINT PETERSBURG STATE UNIVERSITY

Manuscript copyright

Nguyen Cong Tuan

IMPROVING THE EFFICACY OF ART PROGRAMS IN PATIENTS WITH PREDICTED SUBOPTIMAL RESPONSE BY USING RECOMBINANT GRANULOCYTE COLONY-STIMULATING FACTOR

3.1.4. Obstetrics and gynecology

Dissertation is submitted for the Candidate of Medical Sciences degree

Translation from Russian

Scientific supervisor

Doctor of Medical Sciences, Professor Gzgzyan Alexander Mkrtichevich

Saint Petersburg 2022

134

CONTENTS

INTRODUCTION.....................................................................................................137

CHAPTER 1. LITERATURE REVIEW....................................................................143

1.1. Suboptimal ovarian response to COS: definition, predictors and methods of overcoming.............................................................................................................143

1.1.1. Representation of suboptimal ovarian response to COS.............................143

1.1.2. Predictors of suboptimal ovarian response to COS....................................144

1.1.3. Methods of overcoming the suboptimal ovarian response to COS.............149

1.2. Current understanding of G-CSF and its role in reproductology...................152

1.2.1. General characteristics of G-CSF..............................................................152

1.2.2. Role of G-CSF in reproductology..............................................................154

CHAPTER 2. MATERIALS AND METHODS OF STUDY.....................................161

2.1. Materials.......................................................................................................161

2.2. Methods........................................................................................................165

2.2.1. Clinical and anamnestic method................................................................165

2.2.2. Hormonal method......................................................................................165

2.2.3. Sonographic method..................................................................................166

2.2.4. Controlled ovarian stimulation in patients with predicted suboptimal response...............................................................................................................167

2.2.5. Evaluation of fertilization and characteristics of embryogenesis................170

2.2.6. Statistical method......................................................................................173

CHAPTER 3. RESEARCH RESULTS......................................................................174

3.1. RESULTS OF A RETROSPECTIVE STUDY.............................................174

3.1.1. Clinical and anamnestic characteristics of the examined women...............174

3.1.2. Characteristics of obstetric and gynecological status in the examined women.................................................................................................................175

3.1.3. Characteristics of hormonal status and ovarian reserve in examined women.................................................................................................................177

3.1.4. Risk factors for the development of suboptimal ovarian response to COS . 179

3.1.5. Models and scale for predicting the development of suboptimal ovarian response to COS..................................................................................................181

3.1.6. Characteristics of the performed COS protocols and embryological data in IVF/ICSI cycles...................................................................................................185

3.1.7. Results of correlation analysis...................................................................187

3.1.8. The efficacy of IVF/ICSI programs in the examined women.....................188

3.2. RESULTS OF A PROSPECTIVE RANDOMIZED COMPARATIVE STUDY...................................................................................................................191

3.2.1. Clinical and anamnestic characteristics in women with predicted suboptimal ovarian response to COS.....................................................................................191

3.2.2. Characteristics of obstetric and gynecological status in women with predicted suboptimal ovarian response to COS...................................................................191

3.2.3. Results of laboratory studies in women with predicted suboptimal ovarian response to COS..................................................................................................194

3.2.4. Characteristics of hormonal status and ovarian reserve in women with predicted suboptimal ovarian response to COS....................................................195

3.2.5. Results of the assessment of G-CSF in serum and FF by the enzyme-linked immunosorbent assay..........................................................................................196

3.2.6. Characteristics of the spermogram.............................................................198

3.2.7. Characteristics of the performed COS protocols in IVF/ICSI cycles in examined women.................................................................................................198

3.2.8. Embryological characteristics of IVF/ICSI protocols in examined women 200

3.2.9. Indicators of the efficacy of IVF/ICSI programs in examined women.......202

3.2.10.Correlation between different indicators in examined women ................................................................................................................. 204

3.2.11.Factors, models and method for predicting the clinical pregnancy in IVF/ICSI cycles in women with predicted suboptimal ovarian response to COS.................208

CHAPTER 4. DISCUSSION OF THE RESULTS.....................................................213

CONCLUSIONS........................................................................................................221

PRACTICAL RECOMMENDATIONS

223

LIST OF ABBREVIATIONS....................................................................................225

REFERENCES..........................................................................................................226

137

INTRODUCTION

Currently, IVF is the most effective, progressively developing method of infertility treatment and occupies an important position in modern medicine. It is known that the efficacy of each protocol is affected by different factors [169]. Special clinical significance for the success of IVF programs is the ovarian response to controlled ovarian stimulation (COS) with gonadotropins. According to the number of oocytes retrieved in IVF/ICSI cycles, the level of the ovarian response to stimulation is divided into: poor response (0 - 3 oocytes); suboptimal response (4 - 9 oocytes); optimal (10 - 15 oocytes) and excessive (> 15 oocytes) [48, 165]. Among women with poor response to ovarian stimulation, the efficacy of ART programs is very low, so several studies are aimed at overcoming this problem. In particular, criteria for predicting poor response have been developed [94], and protocols aimed at this clinical group are being created, including determining doses of hormones, duration of stimulation and recommendations for the use of various medications as adjuvant therapy [19, 119]. On the other hand, a large number of oocytes obtained is not always accompanied by the high efficiency of ART programs and may increase the risk of ovarian hyperstimulation syndrome [41, 150]. This clinical group also receives a lot of attention from researchers and clinicians. Various effective preventive methods have been developed, which has led to a decrease in the frequency of ovarian hyperstimulation syndrome. At the same time, there is a large cohort of patients who have an intermediate ovarian response to stimulation with gonadotropin in IVF cycles. This cohort is called suboptimal ovarian response to COS, when the number of oocytes received after transvaginal follicle puncture is 4 - 9. The frequency of suboptimal response to COS was quite high and is 43.3% according to the Human Fertilization and Embryology Authority (HFEA) [41, 165]. However, unlike poor response, there are very few studies aimed at identifying risk factors and methods for predicting the development of suboptimal response. Until now, criteria for the diagnosis of suboptimal response to COS in IVF/ICSI protocols have not been developed. At the same time, according to the evidence-based research results, the efficacy of IVF/ICSI protocols in patients with suboptimal response is significantly lower than in women with optimal response [9, 12, 41, 61, 215]. Scientific studies aimed at finding and developing methods for overcoming

the suboptimal response and increasing the efficacy of IVF/ICSI protocols in this cohort of women are fragmented and isolated. According to the above reasons, the study of risk factors, search and development of methods for predicting, as well as optimal approaches to increase the effectiveness of IVF/ICSI cycles in this cohort of patients has a topical medical and social orientation.

Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) - a glycoprotein that promotes the proliferation, differentiation and activation of precursor cells of the neutrophilic granulocyte cell lineage [13]. In recent decades, many studies have shown that G-CSF has a positive effect on female reproductive function and improves the efficacy of ART programs in overcoming infertility [2, 13, 235]. Japanese researchers have confirmed the therapeutic effect of G-CSF on ovulation induction in patients with luteinized unruptured follicle syndrome [104, 106]. There have been reports that the follicular G-CSF concentration has a positive correlation with the implantation and clinical pregnancy rate in IVF/ICSI cycles [55, 126]. In recent years, recombinant G-CSF has been actively studied in IVF/ICSI protocols in women with thin endometrium. It has been shown that intrauterine perfusion recombinant G-CSF increases the endometrial thickness and the implantation and pregnancy rate [89, 229]. There was important evidence for the safety of using recombinant G-CSF during pregnancy [232]. Despite the positive effect of G-CSF on the effectiveness of ART programs in various cohorts of patients has been confirmed, until now, there is no study evaluating the G-CSF role in IVF/ICSI protocols in women with predicted suboptimal response to COS. In view of the above, it is necessary to perform additional studies of the efficacy of G-CSF in reproductive medicine, allowing to pathogenetically recommend this method in clinical practice.

The aim of the study.

To improve the efficacy of IVF/ICSI programs in patients with predicted suboptimal response to COS by using recombinant granulocyte colony-stimulating factor.

Objectives of the study.

1. To investigate anamnestic, clinical, laboratory and instrumental characteristics in women with suboptimal response to COS.

2. To study the features of IVF/ICSI programs in women with suboptimal response to COS.

3. To determine the serum and follicular G-CSF concentration and the correlation between these indicators and embryological characteristics in patients with predicted suboptimal response.

4. To investigate the effect of recombinant G-CSF on the parameters of the ART program (number of oocytes, zygotes, good-quality embryos and frozen embryos; implantation and clinical pregnancy rate) in women with predicted suboptimal response.

5. To identify the main factors, develop the model and scale for predicting the development of suboptimal ovarian response to COS, as well as to determine indicators predicting the efficacy of ART programs in patients with predicted suboptimal response to stimulation.

Scientific novelty and theoretical significance of the study.

- For the first time, a comprehensive analysis of predictive factors of the development of suboptimal response to COS in IVF/ICSI programs was performed

- For the first time, the mathematical model and score scale for predicting the development of suboptimal response to COS in IVF/ICSI programs have been developed.

- A comparative assessment of the efficacy and safety of the standard COS protocol with GnRH antagonists and the COS protocol with GnRH antagonists in combination with recombinant G-CSF preparation was performed. It was found that subcutaneous administration of recombinant G-CSF in IVF/ICSI programs in women with predicted suboptimal response to COS improves the ovarian response to ovulation stimulation with gonadotropins, increases the number of retrieved and mature oocytes, 2PN zygotes, good-quality embryos, as well as the number of frozen embryos.

- For the first time, a significant correlation was determined between the serum, follicular G-CSF concentration and the total number of oocytes retrieved, as well as the number of mature oocytes, which confirms the positive effect of G-CSF on folliculogenesis in patients with predicted suboptimal response.

- For the first time, there was proved that using recombinant G-CSF in IVF/ICSI protocols in patients with predicted suboptimal response to COS significantly increases the implantation and clinical pregnancy rate.

Practical significance of the study.

A new method for predicting the development of suboptimal response to controlled ovarian stimulation in IVF/ICSI programs has been developed (patent No. RU 2774145 C1 dated 15.06.2022).

The COS protocol with GnRH antagonists in combination with the subcutaneous administration of recombinant G-CSF has been developed, which allows achieving an increase in the efficacy of IVF/ICSI programs in women with predicted suboptimal ovarian response to stimulation.

Based on logistic regression and the Bayesian model averaging algorithm, a simple method for predicting the clinical pregnancy in patients with predicted suboptimal response has been developed by assessing the ratio of G-CSF levels in the FF and serum and morphological characteristics of embryos.

An algorithm has been developed to optimize the treatment of infertility by IVF/ICSI for the cohort of patients with predicted suboptimal response.

The main provisions for the defense.

1. The main risk factors for the development of suboptimal response to COS are: the patient's age > 35 years; the presence of suboptimal response in the previous cycle; operations on pelvic organs; AFC < 10; serum AMH concentration < 2.56 ng/mL; serum FSH concentration > 8.71 IU/L.

2. Subcutaneous administration of recombinant G-CSF in women with predicted suboptimal response significantly improves the ovarian response to COS expressed in obtaining more oocytes, as well as in a large number of mature oocytes and good-quality embryos, which determines the increase in the efficacy of ART programs.

3. The efficacy of IVF/ICSI protocols in patients with predicted suboptimal response to COS depends on the quality of the embryos and the ratio of G-CSF levels in the follicular fluid and serum.

Approbation.

The materials of the dissertation were presented at the XXIII International Biomedical Conference of Young Researchers "Fundamental Science and Clinical Medicine - Human and health", St. Petersburg, 2020; XXI Russian Scientific and Educational Forum "Mother and Child", Moscow, 2020; XXIV International Biomedical Conference of Young Researchers "Fundamental Science and Clinical Medicine -Human and health", St. Petersburg, 2021; "XV International Congress on Reproductive Medicine", Moscow, 2021; XXXIV International Congress with a course of endoscopy: "New Technologies for Diagnosis and Treatment of Gynecological Diseases", Moscow, 2021; XIV Regional Scientific and Educational Forum "Mother and Child" & the Plenum of the Board of the Russian Society of Obstetricians and Gynecologists, Moscow, 2021; XXII Russian Scientific and Educational Forum "Mother and Child", Moscow, 2021; "III scientific and practical conferences for obstetricians and gynecologists Ott readings", St. Petersburg, 2021; "XVI International Congress on Reproductive Medicine", Moscow, 2022. II scientific and practical conference with international researchers. "Health of women, fetus, newborn", St. Petersburg, 2022.

The developed scale for predicting the suboptimal ovarian response to COS and scheme of infertility treatment in patients with predicted suboptimal response in IVF/ICSI programs have been introduced into the practice of the Department of Assisted Reproductive Technologies of the Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott and into the educational process of the Department of Obstetrics, Gynecology and Reproductology of the Medical Faculty of the St. Petersburg State University"

Publications.

On the topic of the dissertation, 12 printed works have been published, including 1 patent and 4 articles in peer-reviewed scientific journals and publications determined by the Higher Attestation Commission, as well as in the international database Scopus.

The personal contribution of the author.

The study was performed by a postgraduate student at the Department of Assisted Reproductive Technologies (head of Department - MD, PhD, DSci (Medicine), Professor Alexander Mkrtichevich Gzgzyan) and the Laboratory of Endocrinology and Reproduction (head of Laboratory - MD, PhD, Tkachenko Natalia Nikolaevna) of the Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott. The author independently collected materials, analyzed and statistically processed the results of the study.

Structure and volume of the dissertation.

The dissertation represents 132 pages of typewritten text. Consists of content, introduction, literature review, chapters with materials and research methods, the results of the studies, their discussion, conclusions, practical recommendations, list of abbreviations and references. The dissertation is illustrated with 24 figures and 23 tables. The list of references includes 15 domestic and 220 foreign sources.

CHAPTER 1. LITERATURE REVIEW

1.1. Suboptimal ovarian response to COS: definition, predictors and methods of

overcoming.

1.1.1. Representation of suboptimal ovarian response to COS

The history of IVF has been formed and developed since the second half of the last century, thanks to the huge contribution of numerous researchers around the world [44]. In 1978, on July 25, an important event happened in England - the first child was born from the IVF program [197] and since then methods of assisted reproductive technologies have achieved great success as the most common and effective method of infertility treatment. So, forty years later, by 2018, over 8 million children in the world were born from IVF. According to the RAHR, by 2019, 165,463 cycles of IVF/ICSI were carried out in Russia, which brought Russia to the first place in Europe in terms of the activity of the use of assisted reproductive technologies. However, despite the rapid and successful development, ART currently faces many complex problems: the older age of women, environmental features, social conditions and many other factors that influence the efficacy of IVF. First, the success of each IVF/ICSI cycle depends on the ovarian response to stimulation with exogenous gonadotropins. To improve the efficacy of IVF/ICSI cycles, it is necessary to reduce the number of complications using an individual approach for each woman. One of the most important components of this approach is the assessment of the degree of response to COS depending on the number of oocytes received: poor (low); suboptimal; normal (optimal) and excessive response [48, 165]. It is known that because of the meager pregnancy rate and subsequent live birth rate in women with poor response, numerous studies have been conducted aimed at developing optimal approaches to overcoming infertility in this cohort of women[11, 19, 115, 119]. At the same time, in women with predictors of ovarian hyperstimulation, various IVF/ICSI protocols have been developed that determine the prevention and reduction of the incidence of this severe complication. Against this background, neither clinicians nor researchers paid due attention to the cohort of women with suboptimal response to COS [165]. Moreover, the concept of suboptimal response to ovarian stimulation turned out to

be unfamiliar to most clinicians, and this cohort of women is usually not distinguished from the category of women with optimal response. However, there is evidence that the pregnancy and live birth rate in women with suboptimal response is significantly lower compared to similar indicators in women with optimal response to COS [9, 12, 41, 61, 215]. To increase the efficacy of ART programs in women with suboptimal response to COS, it is necessary to perform detailed studies of this cohort of patients.

The suboptimal response to controlled ovarian stimulation is often understood as a group of patients who get from 4 to 9 oocytes in one stimulation cycle [28, 165]. Unlike the concept of poor response, until now, there is no clear definition of suboptimal response to COS in the literature. In some studies, the suboptimal response to COS is determined during the ovulation stimulation by the following criteria: the total dose of FSH, serum E2 concentration, number of follicles > 10 mm on the 7th day of stimulation [205]. The frequency of suboptimal response to ovarian stimulation is relatively high, and according to the Human Fertilization and Embryology Authority is 43.3% (174057/402185) of IVF/ICSI cycles with suboptimal response per ovulation stimulation cycle in IVF protocols [41, 165]. An evidence-based conclusion was obtained as a result of a large-scale study from Belgium and Denmark on the need to allocate women with suboptimal response to COS to a separate group of patients: firstly, a large proportion of patients with suboptimal response to COS in the population of women undergoing infertility treatment with ART programs; secondly, among women with suboptimal response, correction gives more chances to get an adequate number of oocytes than in patients with poor response, and thirdly, the authors emphasize that it is necessary to study in detail and develop the possibility of an individual campaign for each category of women entering into IVF/ICSI protocols to increase the efficacy of ART programs [41, 165].

1.1.2. Predictors of suboptimal ovarian response to COS

Among the existing predictors of suboptimal response to COS, it is necessary first of all to consider the women's age. Pregnancy in an older woman is often accompanied by complications that have serious consequences not only for the fetus but for the health

and life of the mother. It must be recognized that historically, in the process of natural selection, a situation has developed when the biological women's age and her reproductive age do not coincide and these differences have posed several difficult tasks for modern reproductology. Over the past decades, numerous studies have been aimed at studying the features of folliculogenesis and their impact on the quality of oocytes and embryos in older women. As age increases, irreversible changes in ovarian tissues are known to occur. The decrease in the volume of ovarian stroma, the number of primordial follicles, and hormonal receptors based on the restructuring of the architectonics of the blood circulatory system leads to a decrease in the ovarian response to gonadotropin stimulation in IVF/ICSI programs from suboptimal to poor and, as a result, even to absence of response. Due to mitochondrial dysfunction, telomere shortening and possible structural chromosomal abnormality, age has an effect not only on the number but also on the quality of oocytes and subsequently developing embryos [68, 128]. With increasing age, as a result of improper segregation of chromosomes during oogenesis, the quality of oocytes deteriorates and the number of aneuploid embryos increases [131, 144, 184]. In the analysis of the chromosomal materials obtained from more than 15,000 trophectoderm biopsies, it was found that after the age of 30, the frequency of aneuploid embryos increases and reaches 88.2% at the age of 44 [213]. At the same time, according to the results of preimplantation genetic diagnostics performed on 7753 embryos, it was found that the frequency of euploid embryos in women over the age of 43 does not exceed 15% [40]. The live births rate in women who have been undergoing infertility treatment for 5 years also correlates with age and decreases from 80% in women < 30 years to 26% in women > 40 years[212]. Along with the decrease in ovarian reserve and change in ovarian blood circulation, older women have a decrease in the number and sensitivity of hormonal receptors, which requires increased doses of exogenous gonadotropin for ovulation stimulation. It also reported that older women had a high prevalence of diseases such as endometriomas and ovarian tumors, leading to a decrease in ovarian reserve. According to the Bologna criteria (2011) and POSEIDON classification (2016), a woman's age is considered the main predictive factor of reduced ovarian response to stimulation [28, 94]. In contrast to the poor response, there are currently no age criteria

for predicting suboptimal response to COS, however, there have been reports that in women 35 years and older, the ovarian response to gonadotropin stimulation decreases and often corresponds to suboptimal response [83, 184].

Along with age, when assessing the ovarian reserve, indicators such as the serum anti-Müllerian hormone (AMH) and FSH concentration on the 2nd or 3rd day of the menstrual cycle, as well as the antral follicle count (AFC) based on ultrasound allow predicting the level of ovarian response to COS. With the decrease in the sensitivity of the ovarian receptors to endogenous FSH, the hypothalamus and pituitary gland are stimulated by the feedback mechanism, secretion increases, respectively high basal serum FSH concentration is one of the markers of ovarian insufficiency. Moreover, the ovarian response to stimulation depends on the molecular structure of FSH and FSH receptors. Women carriers of FSH receptor gene polymorphisms Ser680Ser, GG genotype FSHR rs1394205 and GG genotype FSHR rs6165 have low ovarian response and an increase in the dose of exogenous FSH is required for ovarian stimulation in ART programs [43, 57, 58, 62, 130, 161, 220, 224]. Thus, FSH receptor gene polymorphisms and high basal FSH concentration can be considered predictors of suboptimal response to COS in ART programs.

LH plays a key role in folliculogenesis and ovulation. In 2009, in their study, Carlo Alviggi and colleagues reported a correlation between the presences of the LH-ß variant (v-ßLH) and the suboptimal ovarian response to recombinant FSH stimulation [198]. v-ßLH due to low bio-activity can lead to ovarian resistance to stimulation by recombinant FSH [18]. In a recent study, when determining the association between the LH concentration, measured at the beginning of ovarian stimulation and the level of ovarian response, it was found that in women with LH concentration < 0.5 IU/L, the probability of developing suboptimal response reaches 39.1% [166]. In addition, women with homozygous LHCGR S312 gene polymorphism displayed higher clinical pregnancy rates than women with homozygous LHCGR N312 [58]. At the same time, the predictive role of the basal LH concentration relative to the suboptimal ovarian response to GnRH agonists as a trigger was identified and the possibility of improving the IVF/ICSI outcome

with additional administration of 1000 IU hCG in combination with GnRH agonist was proved. [77].

Currently, 40 years after the first description of AMH function, its serum concentration is used as an important and objective indicator of ovarian reserve [29, 59, 70, 121]. AMH - glycoprotein secreted by granulosa cells of secondary, preantral and small antral follicles [30, 142]. Starting from puberty, AMH production gradually decreases and is associated with age [35]. AMH plays a key role in the transition of primordial follicles from inactive condition to active growth and has an impact on FSH sensitivity and the mechanism of follicle selection [233]. There is a strong correlation between serum AMH concentration, age and antral follicle count [35]. Along with this, AMH concentration is one of the most important predictors of ovarian response to ovarian stimulation by gonadotropins in IVF/ICSI cycles [32, 34, 143, 159, 160, 181]. Recently, colleagues from China in their study reported that AMH concentration strongly correlated with the number of oocytes received in the IVF/ICSI cycle using medroxyprogesterone acetate at the start of stimulation (rs = 0.744; p <0,001) [32]. Moreover, several studies also revealed a correlation (0.35 < r < 0.88) between serum AMH concentration and oocyte count [31, 37, 71, 92, 95, 146, 190, 196]. At the same time, a lot of researchers attempted to determine the cutoff value of AMH for predicting ovarian response to COS, but the results are ambiguous [31]. However, in 2019, a team of researchers from Pakistan showed that the serum AMH concentration has a clear correlation not only with the number of oocytes received but also with their quality [158]. It should be noted that with low serum AMH concentration, the risk of developing suboptimal response is quite high. However, the cutoff value for predicting the development of suboptimal response to COS in IVF/ICSI protocols has not been established. In addition, in recent years, it has been demonstrated that the AMH level and the pregnancy rate also correlate [191, 195, 208].

One of the important indicators of ovarian reserve is also the antral follicle count (AFC), measured on the 2nd or 3rd day of the menstrual cycle before the start of stimulation [59]. During stimulation under the influence of FSH drugs, antral follicles grow and reach the diameter of the dominant follicle. Depending on several factors, not all antral follicles turn into dominant ones. In recent years, the Follicle-to-Oocyte Index

has been used as a predictor of ovarian resistance to stimulation with exogenous gonadotropins [17, 230]. It was established that the number of oocytes obtained significantly correlates with AFC [158]. In women who have less than 10 antral follicles before the start of stimulation, the risk of developing suboptimal response is higher, and the pregnancy rate in ART programs is lower compared to women who had more than 10 antral follicles [9, 50, 71]. Therefore, AFC before stimulation is accepted as a reliable predictor for assessing ovarian response. Furthermore, a lot of studies have found an associative relationship between AFC and the clinical pregnancy rate in IVF/ICSI cycles [71, 132, 145, 167].

Pelvic surgery, chronic pelvic inflammatory diseases, ovarian diseases such as endometriosis, and tumors lead to a decrease in the volume of the ovarian stroma, a change in the structure and function of the ovarian blood circulatory system [24, 49, 82, 127, 199, 207]. Due to the reduced volume of ovarian tissue after surgery: oophorectomy, cystectomy, ovarian resection, excision and coagulation of endometriosis, there is a decrease in ovarian reserve [24, 127, 207]. In addition, the use of surgical energies during surgery leads to thermal damage to ovarian tissue with the subsequent development of fibrosis in the follicular apparatus and vascular system [82, 127, 199]. On the other hand, endometrioma, large cysts and neoplasm can have a direct negative impact on reproductive function (disrupt folliculogenesis and reduce ovarian response to COS in ART programs) [24, 129]. It was also noted that the long-term effects of inflammatory mediators can lead to the restructuring of the ovarian tissue, decrease receptor sensitivity, and impairment of follicle development [52, 225]. Thus, in women with previous surgical interventions of the ovaries, pelvic inflammatory diseases and the presence of ovarian tumors, the risk of developing suboptimal ovarian response to COS increases.

In recent years, worldwide, especially in European countries, the number of obese people has increased [1, 47, 173]. Obesity is considered an endocrine pathology negatively impacting various systems of the human body, including the reproductive. Numerous studies have demonstrated that the efficacy of ART programs in obese women is lower compared to women with normal BMI [1, 97, 163]. Due to the change in ovarian reserve, impairment of steroid metabolism, decrease in sex hormone-binding globulin and

insulin resistance, ovarian response to exogenous FSH stimulation is reduced in obese women [8, 79, 149, 154, 162]. At the same time, the excess of adipocytes has a negative effect not only on the quantity but also on the quality of oocytes [149]. Thus, normalization of body weight before the start of IVF/ICSI protocols is the condition for reducing the risk of suboptimal ovarian response to COS and improving the efficacy of ART programs.

1.1.3. Methods of overcoming the suboptimal ovarian response to COS

1.1.3.1. Increasing the FSH dose

During ovulation stimulation, exogenous FSH plays a key role in follicle development and differentiation. One of the main strategies for preventing the development of suboptimal ovarian response to COS is increasing the FSH dose [17]. This method allows to an increase in the efficacy of IVF/ICSI protocols in women with predicted suboptimal response, as well as in patients with poor response. In a retrospective study involving 160 women with suboptimal response to COS in GnRH antagonist protocols and with normal ovarian reserve, Drakopoulos et at., (2018) demonstrated that with an increase in the recombinant FSH dose, the number of oocytes and good-quality embryos on the 3rd day of development was significantly higher compared with previous cycles (9 vs. 6 oocytes, p < 0.001; 4 vs 3 good-quality embryos, p < 0.001). Moreover, the authors also noted that increasing the recombinant FSH dose by 50 IU allows for getting 1 more oocyte [203]. In women carrying polymorphism of FSH receptor gene Ser680Ser, GG genotype FSHR rs1394205 and GG genotype FSHR rs6165, the risk of developing suboptimal response to COS increases. Thus, for this cohort of women, increasing the exogenous FSH dose is also an effective method of overcoming suboptimal response. Colleagues from Germany have demonstrated that increasing the FSH dose from 150 IU to 225 IU per day improves the ovarian response in women with Ser680Ser FSH receptor gene polymorphisms [194]. It was also noted that when using FSH dose > 200 IU per day to stimulate ovulation in IVF cycles, the number of oocytes obtained is higher than when using smaller doses (< 150 IU) [54].

1.1.3.2. Use of recombinant FSH

Based on the results of several studies and meta-analyses, it has been proved that, compared with the use of human menopausal gonadotropin, both in the long protocol and in the anta-GnRH protocol, using recombinant FSH (r-FSH) significantly increases the number of oocytes obtained [38, 84, 120, 137, 155]. Therefore, women with predicted suboptimal response to COS would prefer to be stimulated with recombinant FSH preparations.

1.1.3.3. Combined use of recombinant LH

It should be noted that in addition to FSH, LH plays an important role in folliculogenesis and ovulation. A lot of studies and meta-analyses have identified the role of recombinant LH (r-LH) drugs in ART programs [5, 6, 179, 180, 200, 205]. So, Krasnopolskaya K.V. et al. (2019), showed that the implantation and pregnancy rate in IVF cycles in women with predicted suboptimal/poor ovarian response is significantly higher when using a combined drug (r-FSH and r-LH) compared with the use of r-FSH (15.3% vs 10.2%; 28.6% vs 19%; p < 0.05, respectively). This work also had shown that the use of combined drugs (r-FSH and r-LH) for ovulation stimulation decreases the frequency of suboptimal/poor response in these patients [5]. In the Cochrane review (2017) by M. Mochtar et al., it was shown that the combined use of r-LH and r-FSH during ovarian stimulation in women with reduced ovarian reserve allows increasing the success of ART programs [179]. Yilmaz F.Y. et al., (2015) studied the efficacy of recombinant LH in the GnRH agonist protocol in the cohort of women with suboptimal response determined on day 7 or 8 of stimulation and concluded that the implantation (36.1% vs 15%, respectively; p < 0.02) and clinical pregnancy rate (42.2% vs 23.5%, respectively; p < 0.05) is significantly higher with the addition of 75 IU r-LH than with an increase of 75 IU r-FSH [205]. Several studies also emphasize that to improve the efficacy of IVF/ICSI in older women (35-39 years old) who have a high risk of developing suboptimal ovarian response to COS with FSH, it is advisable to prescribe a recombinant LH drug [180, 200]. In a recent meta-analysis performed by Conforti A. et al., (2019) it was found that r-LH administration in women with predicted poor response to ovulation

stimulation in groups 1 and 2 according to the POSEIDON classification significantly increased the number of oocytes retrieved (OR 1.98; p = 0.03), the implantation (OR 2.62; p = 0.004) and clinical pregnancy rate (OR 2.03; p = 0.003) [223].

1.1.3.4. Double Stimulation

Double Stimulation or DuoStim - COS method in which stimulation occurs in the same menstrual cycle both in the follicular and luteal phase. DuoStim is used in women with predicted suboptimal/poor response to increase the number of oocytes retrieved and the subsequent development of euploid embryos [76, 98, 139, 216]. A meta-analysis performed by Vaiarelli A. et al., (2018) demonstrated that the percentage of euploid blastocysts increases from 42.3% after ovarian stimulation only in the follicular phase to 65.5% after additional stimulation in the luteal phase [76]. It should also be noted that the efficacy of stimulation in the luteal phase, determined by the number of oocytes retrieved, MII oocytes and the presence of at least one euploid blastocyst, is not inferior to analogical stimulation parameters in the follicular phase [98].

1.1.3.5. Adjuvant therapy

Somatotropin hormone (STH) (growth hormone) activates target cells directly with specific receptors or through the production of insulin-like growth factor I (IGF-1). Somatotropin influences the synthesis of the insulin-like growth factor I (IGF-1) in the ovaries, which enhances ovarian sensitivity to gonadotropins, stimulates follicle development, estrogen production, and oocyte maturation [219, 234]. In 1988, the first report appeared on the use of growth hormone as adjuvant therapy to stimulate the ovaries with gonadotropins [116]. The Cochrane review performed by James Duffy et al., (2010) demonstrates the efficacy of adjuvant therapy with somatotropin in ART programs in women with decreased ovarian sensitivity to gonadotropin stimulation. There is determined that the administration of growth hormone in IVF/ICSI protocols increases the pregnancy (OR 3.28; 95% CI 1.73 - 6.20) and live birth rate (OR 5.39; 95% CI 1.89 - 15.35) in the absence of serious side effects [117]. Moreover, a lot of recent studies and meta-analyses have also demonstrated positive effects of somatropin adjuvant therapy in

women with reduced ovarian response to COS with exogenous gonadotropins [25, 118, 119, 201, 209].

There are literature data on the role of androgen drugs as adjuvant therapy in women with predicted suboptimal/low ovarian response to COS [27, 66, 67]. In a retrospective study, our colleagues from Taiwan reported that the use of dehydroepiandrosterone within three months before the start of IVF/ICSI protocols in women with predicted poor response increases the number of retrieved and mature oocytes, good-quality embryos on the 3rd day of in vitro development, improves the clinical pregnancy and live birth rate [66]. In a recent meta-analysis, Li Xu et. al., (2019) confirmed the effectiveness of using androgen preparations before ovarian stimulation in IVF/ICSI programs [202].

In addition to growth hormone and androgens, antioxidant drugs such as co-enzyme Q 10 and letrozole are also used as adjuvant therapy. Co-enzyme Q10 has been shown to improve the function of oocyte mitochondrial function and the production of ATP by mitochondria. The data obtained during the study of the role of co-enzyme Q 10 in women with a reduced ovarian reserve in group 3, according to the POSEIDON classification, allow us to conclude that co-enzyme Q 10 improves the effectiveness of ovarian stimulation and the quality of embryos [171]. Moreover, there is evidence that the administration of letrozole during COS improves ovarian response to ovulation stimulation with gonadotropins and also the effectiveness of IVF/ICSI protocols in patients with poor/suboptimal response [74].

1.2. Current understanding of G-CSF and its role in reproductology

1.2.1. General characteristics of G-CSF

Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) together with granulocyte-macrophage CSF, macrophage CSF and interleukin-3 belong to the colony-stimulating factor group.

G-CSF - a glycoprotein that promotes the proliferation, differentiation and activation of precursor cells of the neutrophilic granulocyte cell lineage [13]. G-CSF was discovered in the mid-1960s by Australian scientists (Metcalf D. et al.) [140]. In 1983,

Nicola N.A. et al., obtained purified G-CSF from the lungs of mice by injecting bacterial endotoxin [176]. 2 years late, human G-CSF was described by Nicola et al. u Welte et al. [148, 175].

The human G-CSF molecule contains 174 amino acids [177], and its mass is 18-19 kDa. The human G-CSF gene consists of 5 exons and 4 introns located on chromosome 17 (q11-22) [51].

First of all, the immune system cells such as monocytes, macrophages [189], T cells [110] and peripheral blood cells [174] participate in the synthesis of granulocyte colony-stimulating factor. In addition, many cell types of the reproductive system also participate in the synthesis of granulocyte colony-stimulating factor. Mostly, G-CSF is produced by granulosa, luteal cells and NK cells, especially endometrial NK cells (CD56bright) [64, 69, 192]. The intensity of G-CSF synthesis during the menstrual cycle is different [64]. According to results of investigating in vitro epithelial cells of the endocervix, endometrium and fallopian tube, J.V. Fahey et al., (2005) reported that epithelial cells of the female genital organs can secrete various cytokines, including G-CS [188]. Moreover, during pregnancy, G-CSF is synthesized by cells in the uteroplacental interface (decidual cells, chorion villi cells) [78, 193]. The G-CSF concentration in the first trimester of pregnancy and before childbirth is higher than in the second trimester.

G-CSF functions are realized through a specific receptor located in myeloproliferative tissues and their cells (macrophages, T cells, platelets and NK cells) [99, 122, 123]. Moreover, G-CSF receptors were found in luteinized ovarian granulosa cells [69], trophoblast cells [122] and placental tissue [96, 226]. Thus, G-CSF actively regulates the function of the reproductive system. Moreover, scientists have discovered G-CSF receptors in almost all fetal tissues. According to a study performed by Calhoun et al., (1999, 2000), these receptors are present in the cells of the fetal kidneys and gastrointestinal tract [73, 109]. In addition, Liu et al., (2009) proved that G-CSF receptors are also found in stem cells of hematopoietic organs and the nervous system [85].

The biological role of G-CSF

G-CSF plays a key role in neutrophil proliferation and differentiation. It stimulates mitogenesis and differentiation of committed stem cells into mature polymorphonuclear leukocytes (PMNL) [183]. In addition, G-CSF impacts the functions of mature neutrophils by expressing CD64, CD11b/CD18, CD14, IL-1 Rap and rTNFR; increased chemotaxis, phagocytosis; delayed apoptosis [183]. According to studies over the past decades, G-CSF is also involved in the regulation of the T cell's function in the immune system. In experimental conditions, colleagues from Australia confirmed that the "graft versus host" reaction in donors receiving G-CSF is significantly reduced [75]. In their study, Rutella et. al., 2015 demonstrated the role of G-CSF in stimulating the differentiation of regular T cells (Treg) and reported that the efficacy of G-CSF administration is associated with an increase in IL-10 production by T cell [111]. On the other hand, G-CSF impacts the toxicity of NK cells in various ways: decreasing the generation of NK cell precursors; reducing expression of activating receptors (NKG2D receptor), weakening cytokine synthesis (interferon-y, GM-CSF, TNF-a, IL-8 and IL-6) [235].

1.2.2. Role of G-CSF in reproductology

1.2.2.1. Role of G-CSF in ovulation induction in women with luteinized

unruptured follicle syndrome