Посттравматическая пластичность мотонейронов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, доктор медицинских наук Исламов, Рустем Робертович

• Исламов, Рустем Робертович
• доктор медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Исламов, Рустем Робертович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна.

Положения, выносимые на защиту.

Научно-практическая ценность.

Апробация работы.

Реализация результатов исследования.

Структура и объём диссертации.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Опыты на животных.

2.1.1. Объекты исследования.

2.1.2. Хирургические вмешательства.

2.1.2.1. Операции на седалищном нерве.

2.1.2.2. Овариэктомия.

2.1.3. Фармакологические воздействия.

2.1.3.1. Неорганическое железо (FeCl3) и железотранспортирующий белок трансферрин.

2.1.3.2. 17|3-эстрадиол и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (тамоксифен и аналог ралоксифена LY117018).

2.1.3.3. Фармакологические воздействия в экспериментах по изучению ретроградного аксонного транспорта.

2.1.3.4. Короткая интерферирующая РНК в исследованиях синтеза белка в аксоне.

2.1.4. Поведенческий тест.

2.2. Гистологические методы.

2.2.1. Полутонкие срезы.

2.2.2. Выявление активности АТФазы миозина.

2.2.3. Иммуногистохимические методы.

2.2.3.1. Скелетные мышцы крыс и морских свинок.

2.2.3.2. Спинной мозг и седалищный нерв мышей.

2.2.4. Морфометрический анализ Fluorogold-позитивных мотонейронов.

2.3. Иммуноблотинг.

2.4. Методы исследования экспрессии генов.

2.4.1. Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией.

2.4.2. Полимеразная цепная реакция в реальном времени.

2.4.3. Матричная гибридизация комплементарной ДНК.

2.5. Радиоавтографические методы.

2.5.1. Радиоиммунологический метод определения концентрации 17р-эстрадиола в сыворотке крови.

2.5.2. Радиоавтографический метод выявления 17Р-эстрадиола в нервной ткани.

2.6. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ АГОНИСТОВ РЕЦЕПТОРОВ ЭСТРОГЕНОВ НА ПОСТТРАВМАТИЧЕСКУЮ РЕГЕНЕРАЦИЮ ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО НЕРВА.

3.1. Уоллеровская дегенерация и регенерация периферического нерва.

3.2. Нейропротекторное действие эстрогенов.

3.3. Влияние 17Р-эстрадиола на регенерацию седалищного нерва у овариэктомированных мышей.

3.3.1. Восстановление функционального индекса седалищного нерва.

3.3.2. Морфометрический анализ регенерации седалищного нерва.

3.3.3. Иммуноэкспрессия Hsp25 в поясничном отделе спинного мозга.

3.4. Влияние селективных модуляторов рецепторов эстрогенов на регенерацию седалищного нерва у овариэктомированных мышей.

3.4.1. Селективные модуляторы рецепторов эстрогенов.

3.4.2. Влияние тамоксифена на восстановление функционального индекса седалищного нерва у овариэктомированных мышей.

3.4.3. Влияния LY117018 на регенерацию седалищного нерва у овариэктомированных мышей.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Посттравматическая пластичность мотонейронов»

Актуальность проблемы

Одним из фундаментальных свойств организма является восстановление утраченной или повреждённой структуры. Эффективность регенерации определяется характером популяций клеток (эмбриональная, статическая, растущая, обновляющаяся). В статической популяции особое место занимают нейроны (Leblond 1964). Начиная с работ Сантьяго Рамон-и-Кахаля, приложившего клеточную теорию к нервной ткани (Cajal, 1909-1911), проблема регенерации нейронов остаётся одной из важнейших в нейробиологии. До сих пор в научной литературе резонирует пророческое высказывание Кахаля: ". .в конце развития родники роста и регенерации аксонов и дендритов высыхают безвозвратно. Посередине взрослости нервные пути — нечто фиксированное, законченное и неизменное. Всё может погибнуть, ничто не может регенерировать. Науке будущего предписано изменить, если возможно, это суровое правило" (Cajal, 1928).

Проблема регенерации в нервной ткани имеет не только теоретическое значение. Её актуальность для практической медицины представляется очевидной. При этом особую важность приобретает изучение регенерации периферического нерва. Дегенерация аксонов в периферических нервах может быть вызвана травмами опорно-двигательного аппарата, токсическими воздействиями, дефектами образования миелина, нарушениями аксонного транспорта, гипоксией и многими другими факторами. В реальной клинической ситуации наиболее часто встречаются травматические повреждения периферических нервных стволов, сопутствующие производственному, транспортному, спортивному и бытовому травматизму. Нарушение анатомической целостности нервного ствола приводит к полному выпадению функции нерва. Повреждения отростков двигательных и чувствительных нейронов вызывают паралич иннервируемых мышц и анестезию, а дегенерация аксонов вегетативных нейронов сопровождается сосудодвигательными расстройствами. При значительном расхождении центрального и периферического отрезков повреждённого нерва хаотично растущие нервные волокна на конце центрального отрезка образуют ампутационную неврому, которая препятствует реиннерва-ции органов-мишеней, в результате чего наступают атрофия скелетных мышц, дегенеративные изменения суставов, остеопороз. Необходимость более шубокого и всестороннего изучения механизмов регенерации периферического нерва обусловлена не только медицинскими запросами, но и имеет огромное социальное значение, поскольку реабилитация больных с посттравматическими повреждениями нерва до сих пор остаётся неразрешённой проблемой.

Важным аспектом посттравматической регенерации периферического нерва является изучение механизмов модуляции пластичности фенотипа регенерирующих мотонейронов. Пластичность, с одной стороны, отражает вариабельность генетически детерминированных признаков, а с другой — характер (созидательный или разрушительный) внутриклеточных процессов (Корочкин, 2002). При этом можно надеяться, что выяснение роли конкретных сигнальных каскадов в поддержании регенерации на клеточном уровне позволит разработать механизмы модуляция пластичности нейронов. На самом деле суть проблемы значительно глубже, речь идёт о (1) вызванной активности конкретного спектра генов в аксотомиро-ванных мотонейронах, (2) функциональной значимости активированных генов и (3) факторах, регулирующих активность функционально значимых генов.

Информационные межклеточные взаимодействия в системе "мотонейрон-скелетная мышца" модулируют активность разнообразных генов, контролирующих фенотипические признаки обоих клеточных партнёров. Травма периферического нерва прерывает регуляторные отношения между мотонейронами и скелетной мышцей. В денервированной мышце развивается постденервационный синдром (Полетаев, 1980; Shackelford and Lebherz, 1981; Волков и Полетаев, 1982; Bayline, Khoo et al., 1998). При этом в силу пластичности фенотипа скелетная мышца изменяет чувствительность к гуморальным факторам (Улумбеков и Резвяков, 1980; Резвяков, 1982; Валиуллин, 1996). Поэтому — в рамках проблемы реиннервации скелетной мышцы — особое значение приобретает вопрос о факторах, модулирующих фенотипические признаки мышечных волокон в условиях денервации. Однако восстановление координированных функций в системе "мотонейрон-скелетная мышца" в первую очередь зависит от пластичности мотонейронов. Спектр транскрибируемых генов в аксотомированных мотонейронах во многом повторяет таковой в ходе нейроонтогенеза и характеризуется повышенной активностью генов, контролирующих навигацию и рост аксонов, восстановление нервно-мышечного контакта (Purves and Lichtman, 1983). Вместе с тем пластические изменения фенотипа мотонейронов в условиях аксотомии изучены недостаточно. Не выяснены границы вариабельности генетически детерминированных признаков. Неизвестно, активность каких ещё генов регулирует процессы внутриклеточной регенерации. Не изучены временные характеристики активности генов.

Систематические исследования в этом направлении выявили спектр генов (гомейозисных, факторов транскрипции, рецепторов факторов роста, протеин киназ, антиапоптозных и многих других), ориентированных на внутриклеточную регенерацию (Kaiser and Nisenbaum, 2003; Resnick, Schmitt et al., 2004). При этом функциональная значимость ряда генов, активированных в ходе регенерации мотонейронов, остаётся неизученной. Неизвестно, насколько закономерна активация этих генов в аксотомированных мотонейронах и в каких внутриклеточных каскадах участвуют продукты их экспрессии. В рамках этого вопроса особый интерес представляет исследование экспрессии рецепторов сигнальных молекул, регулирующих ангиогенез, — сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и эндотелинов. Нервы и сосуды формируют ветвящуюся сеть, согласованно продвигаясь единым маршрутом в раннем онтогенезе (Shima and Mailhos, 2000). Известно, что усиление экспрессии VEGF играет важную роль не только в росте сосудов, но и в навигации аксонов (Miao, Soker et al., 1999). Синтез VEGF в гладкомышечных клетках сосудов стимулируют эндотелины (Kozawa, Kawamura et al., 2000). Причём эндотелиновая система per se имеет выраженную нейропротекторную функцию (Yagami, Ueda et al. 2002). Следовательно, в нервной ткани роль ангиогенных факторов заключается не только в обеспечении роста сосудов и доставки к нервным клеткам кислорода и питательных веществ — сигнальные молекулы ангиогенеза дополнительно функционируют как нейротрофические факторы (Ehrenreich, Nau et al., 2000; Oosthuyse, Moons et al., 2001). Вместе с тем, до сих пор неясны механизмы нейропротектор-ной функции этих молекул, поэтому выяснение характера экспрессии рецепторов VEGF и эндотелинов в мотонейронах представляется перспективным для исследования механизмов выживания нейронов в условиях аксотомии.

Другой важный вопрос в понимании механизмов модуляции фенотипа аксотомированных мотонейронов касается возможности направленной стимуляции внутриклеточных сигнальных каскадов, обеспечивающих регенерацию аксонов. Навигация и рост регенерирующих аксонов на большие расстояния (более 1 м у человека) регулируются разнообразными сигнальными молекулами (Челышев, 1995). Нейротрофические факторы, факторы роста, цитоки-ны, молекулы адгезии и межклеточного матрикса, обеспечивающие элонгацию аксона, продуцируются шванновскими клетками (Zochodne, Cheng et al., 2001; Kubo, Yamashita et al., 2002), скелетными мышечными волокнами

Sakuma, Watanabe et al. 2001), макрофагами (Shamash, Reichert et al., 2002) и фибробластами (Pu, Zhuang et al., 1999). Однако не существует однозначного, и тем более, исчерпывающего ответа на вопрос, какие из этих факторов могут быть рекомендованы для стимуляции регенерации периферического нерва в практической медицине. Наряду с этим неясно влияние гуморальной системы на аксотомированные мотонейроны. Важность изучения влияния гормонов на регенерацию мотонейронов обусловлена их способностью оказывать регуляторное влияние на уровне как спинного мозга, так и периферического нерва (Jones, Brown et al., 2001; Storer, Houle et al., 2002; Fiore, Inman et al., 2004). На наш взгляд, в этом плане значительный интерес представляют стероидные гормоны — эстрогены.

Биологическое влияние эстрогенов в организме млекопитающих не ограничивается эффектами на клетки-мишени в органах репродуктивной системы. Согласно современным представлениям, функциональное значение эстрогенов выходит за рамки "женских половых гормонов" (Allen and Doisy, 1983). Многочисленные исследования установили высокую значимость эстрогенов для развития и функционирования мозга (Lee and McEwen, 2001). Разработка гипотезы о стимулирующем влиянии эстрогенов на регенерацию периферических нервов представляется перспективной по нескольким причинам. Эстрогены — ключевые гормоны при тканевой регенерации в органах женской половой системы. Вместе с тем эффект эстрогенов на регенерацию распространяется и на другие системы, в частности на нервную ткань (McEwen and Alves, 1999). Липофильные гормоны свободно проникают через плазматическую мембрану нейронов, изменяя режим функционирования клетки через классический и/или альтернативный механизм (Watson and Gametchu, 1999). Показано, что эстрогены проявляют нейропротекторные свойства при ишемии и травмах головного мозга (Behl, 2001). Заместительная терапия эстрогенами у женщин постклимактерического периода предупреждает развитие болезни Альцхаймера (Slooter, Bronzova et al., 1999) и способствует частичной коррекции двигательных расстройств при болезни Пар-кинсона (Tsang, Но et al., 2000). В этой связи необходимо отметить, что экспрессия эстрогеновых рецепторов документирована не для всех нейронов ЦНС; в частности, не установлен факт их экспрессии для мотонейронов спинного мозга. Поэтому до сих пор не известны эффекты эстрогенов на регенерацию периферического нерва. Не исследованы также механизмы нейропротектор-ного действия эстрогенов при аксотомии мотонейронов.

Разработка гипотезы о стимулирующем влиянии эстрогенов на регенерацию периферического нерва имеет важное значение не только для выяснения механизмов действия эстрогенов на внутриклеточные восстановительные процессы, но и для клинического применения гормонов. Однако, вследствие того, что эстрогены активируют пролиферацию эпителиальных клеток молочных желёз и матки, применение эстрогенов может быть крайне ограничено. В то же время работами последних лет было показано, что синтетические фармакологические вещества, селективно ингибирующие рецепторы эстрогенов в тканях репродуктивных органов, обладают нейропротекторными свойствами эстрогенов (Grandbois, Morissette et al., 2000; Callier, Morissette et al., 2001). При этом влияние этих препаратов на регенерацию периферического нерва не изучено.

Анализ состояния проблемы регенерации периферического нерва на сегодняшний день свидетельствует об актуальности исследования посттравматической пластичности фенотипа мотонейронов. Выяснение механизмов регуляции активности конкретного спектра генов в денервированной скелетной мышце и регенерирующих мотонейронах является основой в исследованиях направленной стимуляции регенерации периферических нервов и восстановления функции скелетных мышц у человека.

Цель и задачи исследования

Целью исследования является анализ механизмов регуляции посттравматической пластичности фенотипа мотонейронов спинного мозга и скелетных мышц в условиях повреждения периферического нерва и фармакологических воздействий на его регенерацию. Для достижения этой цели были поставлены следующие конкретные задачи:

1. В аксотомированных мотонейронах спинного мозга мышей изучить экспрессию: а) рецепторов эстрогенов а и Р, б) VEGF и его рецепторов Flk-1 и Fit-1; в) рецепторов эндотелинов ЕТА и ЕТВ.

2. Исследовать влияние 17Р-эстрадиола и селективного модулятора эстроге-новых рецепторов аналога ралоксифена LY117018 на регенерацию седалищного нерва у мышей.

3. Выяснить механизмы действия агонистов рецепторов эстрогенов на внутриклеточную регенерацию мотонейронов спинного мозга у мышей после повреждения седалищного нерва.

4. Изучить экспрессию генов в поясничном отделе спинного мозга мышей после повреждения седалищного нерва на фоне воздействия 17Р-эстрадиола.

5. Исследовать влияние 17Р-эстрадиола на ретроградный аксонный транспорт и внутриаксонный синтез белка в мотонейронах спинного мозга у мышей.

6. Исследовать влияние железотранспортирующего белка трансферрина и ионов трёхвалентного железа на фенотипические признаки медленной камбаловидной мышцы крысы и морской свинки в условиях денервации и блокады аксонного транспорта.

7. Исследовать влияние одностороннего повреждения седалищного нерва на пластичность фенотипов медленной камбаловидной и быстрой червеобразной мышц в опытной и контралатеральной конечностях у крыс.

Научная новизна

В работе охарактеризована активность генов в спинном мозге мышей после передавливания седалищного нерва и выявлена роль эстрогенов в регенерации периферических нервов. Все приведённые в этом разделе основные научные результаты получены впервые. После передавливания седалищного нерва у мышей 17Р-эстрадиол и аналог ралоксифена LY117018 ускоряют рост и созревание нервных волокон, что приводит к более ранней реиннервации скелетных мышц. Методами иммуногистохимии, иммуноблотинга и полимеразной цепной реакции получены доказательства экспрессии рецепторов эстрогенов а и Р в мотонейронах спинного мозга. Аксотомия существенно увеличивает продукцию обеих изоформ рецепторов эстрогенов в спинном мозге. При этом рецепторы эстрогенов перемещаются в составе антероградного аксонного транспорта и аккумулируются в регенерирующих нервных волокнах. Выявлены геномный и негеномный механизмы действия эстрогенов на аксотомиро-ванные мотонейроны. Через геномный механизм 17Р~эстрадиол активирует транскрипцию генов-регуляторов клеточной пролиферации, роста, дифферен-цировки, апоптоза. По альтернативному негеномному механизму эстрогены путём активации протеин киназы, регулируемой внеклеточным сигналом (ERK), усиливают ретроградный аксонный транспорт и поддерживают синтез белка в аксоплазме.

Установлено облигатное участие рецепторов VEGF и эндотелинов в регенерации мотонейронов. В мотонейронах спинного мозга выявлена ядерная локализация рецептора VEGF (Fit-1) и рецептора эндотелинов (ЕТВ). В аксотомирован-ных мотонейронах показано усиление экспрессии VEGF, его рецептора Flt-1 и рецептора эндотелинов ЕТВ как на уровне гена, так и белка. Обнаружено, что 17{3-эстрадиол потенцирует экспрессию VEGF в аксотомированных мотонейронах.

Исследование внутриаксонного синтеза белка методом РНК-интерференции показало, что короткая интерферирующая РНК, апплицированная на центральный отрезок периферического нерва, может быть трансфецирована в аксоплазму мотонейронов. Интерферирующая РНК, комплементарная мРНК нейрональной формы (3-тубулина, локально ингибирует трансляцию белка в аксоплазме, что приводит к структурным повреждениям микротрубочек и нарушению аксонного транспорта в мотонейронах спинного мозга.

В условиях повреждения седалищного нерва показано, что влияние гуморальных факторов на фенотип мышцы обусловлено характером повреждения нерва. В медленной камбаловидной мышце железотранспортирующий белок трансферрин при перерезке нерва (блокада проведения импульсов и аксонного транспорта) увеличивает экспрессию медленного миозина, а при аппликации колхицина на нерв (блокада аксонного транспорта) — быстрого. Одностороннее повреждение седалищного нерва вызывает изменение фенотипа скелетных мышц не только в опытной конечности, но и в контралатеральной. В быстрой червеобразной и медленной камбаловидной мышцах контралатеральной конечности увеличивается относительное содержание медленных мышечных волокон.

Положения, выносимые на защиту

1. Усиление экспрессии генов эстрогеновых рецепторов (а и (3), рецептора сосудистого эндотелиального фактора роста (Flt-1) и рецептора эндотелинов (ЕТВ) в мотонейронах спинного мозга поддерживает регенерацию двигательных нервных волокон и восстановление функций в системе "мотонейрон-скелетная мышца".

2. Агонисты эстрогеновых рецепторов стимулируют регенерацию мотонейронов через геномный и негеномный сигнальные пути. Альтернативный негеномный путь реализуется за счёт активации ERK-зависимого внутриклеточного сигнального каскада.

Научно-практическая ценность

Теоретическое значение результатов проведённых исследований определяется раскрытыми закономерностями пластичности фенотипов клеточных партнёров в системе "мотонейрон-скелетная мышца" в условиях повреждения периферического нерва. Анализ экспрессии 1176 генов в поясничном отделе спинного мозга после передавливания седалищного нерва представляет интерес для понимания патогенеза нейродегенеративных процессов в спинном мозге. Выявленный спектр активированных генов в аксотомированных мотонейронах дополняет существующее представление о механизмах внутриклеточной регенерации. Данные о пластичности фенотипа скелетных мышц в денервированной и контралатеральной конечностях следует учитывать при выяснении компенсаторных механизмов, способствующих выживанию скелетной мышцы до восстановления иннервации, и могут быть использованы для разработки методов коррекции фенотипических изменений в денервированных скелетных мышцах в практической медицине.

В работе сформулировано представление о механизме стимулирующего влияния эстрогенов на регенерацию нервной ткани. Выявленный положительный эффект 17Р-эстрадиола и селективного модулятора рецепторов эстрогенов аналога ралоксифена LY117018 на регенерацию периферического нерва и восстановление функции денервированных скелетных мышц имеет прикладное значение в клинике нервных болезней. Выяснение механизмов действия агонистов эстрогеновых рецепторов на аксотомированные мотонейроны позволяет расширить существующие представления о нейропротекторной функции эстрогенов при ишемии, травмах и возрастных изменениях ЦНС. Выяснение механизмов перекрёстного взаимодействия эстрогенов с сигнальными каскадами сосудистого эндотелиального фактора роста и эндотелинов открывает новые перспективы для направленной стимуляции регенерации периферического нерва.

Результаты исследования внутриаксонного синтеза белка методом РНК-интерференции имеют общебиологическое значение. Полученные доказательства высокоселективной посттранскрипционной блокады трансляции белка в аксонах мотонейронов спинного мозга с помощью короткой интерферирующей РНК in vivo могут найти применение в генной терапии.

Апробация работы

Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на VI Всесоюзной конференции по биохимии мышц (Тбилиси, 1989); Всесоюзном симпозиуме "Структурно-энергетическое обеспечение механической работы мышц" (Москва, 1990); Международной конференции "Лабораторные животные для медико-биологических и биотехнологических исследований" (Москва, 1990); VI Всесоюзном симпозиуме "Физиология медиаторов. Периферический синапс" (Казань, 1991); Обществе анатомов (Марбург, 1994); II Республиканской научной конференции молодых учёных и специалистов (Казань, 1996); Конференции анатомов, гистологов и эмбриологов "Влияние антропогенных факторов на структурное состояние органов, тканей и клеток организма человека и животных" (Казань, 1997); V Всероссийской школе молодых учёных "Актуальные проблемы нейробиологии" (Казань, 1998); VI Европейском конгрессе по невропатологии (Барселона, 1999); Международном конгрессе по миологии (Ницца, 2000); Международной конференции "Физиология мышечной деятельности" (Москва,

2000); XVIII Съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Казань,

2001); Международном симпозиуме "Нейробиология развития" (Сидней, 2001); V, VI, VII Симпозиумах по нейробиологическим исследованиям в Университете Восточной Каролины (Гринвилл, 2001, 2002, 2003); Международных конгрессах "Экспериментальная биология" (Новый Орлеан, 2002; Сан-Диего, 2003; Вашингтон, 2004); 32-м, 33-м Съездах общества нейробиологов (Орландо, 2002; Новый Орлеан, 2003); Международном симпозиуме "Биологическая подвижность" (Пущино на Оке, 2004); XIX Съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004); Расширенном заседании общества патофизиологов г. Казани (Казань, 2004); V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004).

Реализация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 45 печатных работ (статьи — 11, тезисов — 34). Материалы диссертации включены в лекционные курсы для студентов Казанского государственного медицинского университета по патофизиологии, гистологии, анатомии и физиологии. Результаты исследования положены в основу разработки перспективы клинического применения селективных модуляторов рецепторов эстрогенов при лечении ишемических повреждений периферического нерва и стимуляции посттравматической регенерации аксонов в

Научно-исследовательском центре Татарстана "Восстановительная травматологии и ортопедия".

Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, изложения материалов и методов исследования, 6 глав результатов исследований, общего заключения с выводами, указателя литературы. Каждая глава результатов исследования включает обзор литературы, описание экспериментальных данных, обсуждение и заключение. Диссертация изложена на 191 страницах, содержит 11 таблиц, 67 иллюстраций. Список литературы включает 304 источника на русском и английском языках.

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Исламов, Рустем Робертович

Выводы

1. 17р~эстрадиол и селективный модулятор рецепторов эстрогенов аналог ралоксифена LY117018 оказывают нейропротекторное действие на аксотомирован-ные мотонейроны. Эти агонисты рецепторов эстрогенов ускоряют рост и созревание регенерирующих нервных волокон и тем самым потенцируют восстановление функции скелетных мышц.

2. Стимулирующий эффект 17|3-эстрадиола на регенерацию седалищного нерва опосредован рецепторами эстрогенов: а) мотонейроны спинного мозга мыши экспрессируют обе изоформы рецепторов эстрогенов (ERa и ERp). ER конститутивно присутствуют как в перикарионе (имеют ядерно-цитоплазматическую локализацию), так и в нервных отростках; б) экспрессия мРНК ERa и ERP существенно увеличивается после аксотомии мотонейронов; в) ERa и ERP перемещаются в составе антероградного аксонного транспорта и аккумулируются в регенерирующих аксонах периферического нерва.

3. В спинном мозге мышей после передавливания периферического нерва повышается активность генов, ответственных за выживание нейронов и внутриклеточную регенерацию. 17р-эстрадиол усиливает транскрипцию генов, активированных аксотомией, по классическому и альтернативному пути.

4. Индуцированная эстрогенами экспрессия гена VEGF усиливает нейропро-текторный эффект эстрогенов: а) мотонейроны экспрессируют VEGF и его рецепторы Flk-1 и Flt-1. VEGF и Flk-1 имеют ядерно-цитоплазматическое распределение, Flt-1 локализуется исключительно в ядрах мотонейронов; б) аксотомия увеличивает экспрессию VEGF и его рецептора Fit-1. Активация VEGF/Flt-1 каскада по аутокринному и/или паракринному механизму под держивает выживание аксотомированных мотонейронов.

5. Активированная эндотелиновая система усиливает антиапоптозный эффект эстрогенов и VEGF: а) мотонейроны экспрессируют обе изоформы рецепторов эндотелинов ЕТД и ЕТВ. ЕТД локализуется в цитоплазме, ЕТВ — в ядрах мотонейронов; б) в аксотомированных мотонейронах усиливается экспрессия ядерной изоформы эндотелинового рецептора ЕТВ и подавляется экспрессия цитоплазмати-ческой (ЕТД). Антипапоптозное действие активированных ЕТВ реализуется путём регуляции гомеостаза кальция в нуклеоплазме.

6. Эстрогены через альтернативный негеномный механизм путём активации ERK-каскада потенцируют ретроградный аксонный транспорт и стимулируют внутриаксонный синтез белка: а) ERK является облигатным фактором, регулирующим ретроградный аксонный транспорт. Активированный эстрогенами ERK-каскад вызывает фосфорили-рование различных белков аксоплазмы, в частности, МАР-2 и Hsp25, стабилизирующие тубулиновые микротрубочки и актиновые филаменты, что играет важную роль в регуляции аксонного транспорта; б) эффективность ретроградного аксонного транспорта зависит от синтеза (3-тубулина в аксоне. 17(3-эстрадиол частично снимает блокирующий эффект ингибитора синтеза белка циклогексимида на аксонный транспорт путём активации ERK-зависимой трансляции белка в аксоплазме.

7. Влияние гуморальных факторов на скелетную мышцу зависит от характера повреждения периферического нерва. В условиях перерезки нерва трансферрин увеличивает относительное содержание медленных мышечных волокон, а при блокаде аксонного транспорта — быстрых.

8. Одностороннее повреждение седалищного нерва индуцирует фенотипические изменения в мышцах обеих конечностей. В контралатеральных быстрой и медленной мышцах после перерезки или передавливания нерва увеличивается относительное содержание медленных мышечных волокон.

166

ГЛАВА 9. ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ

В ходе исследования проблемы регенерации периферического нерва мы проанализировали механизмы модуляции пластичности фенотипа мотонейронов поясничного отдела спинного мозга и экстрафузальных мышечных волокон скелетных мышц конечностей в условиях повреждения седалищного нерва у лабораторных животных (мыши, крысы, морской свинки). В соответствии с поставленной целью, нами экспериментально проверена гипотеза о влиянии агонистов рецепторов эстрогенов (17Р-эстрадиола и селективного модулятора рецепторов эстрогенов аналога ралоксифена LY117018) на посттравматическую пластичность мотонейронов спинного мозга мыши и выявлены механизмы модуляции пластичности фенотипа клеток в ходе регенерации. Согласно нашим данным, агонисты рецепторов эстрогенов имеют выраженный нейропротекторный эффект в ходе регенерации двигательных волокон периферического нерва. 17р-эстрадиол и LY117018 поддерживают рост и созревание регенерирующих аксонов, ускоряют восстановление функции скелетных мышц. Нами впервые показано, что в мотонейронах спинного мозга мыши экспрессируются обе изоформы рецепторов эстрогенов (ERa и ERP). В ответ на аксотомию экспрессия ERa и ERP существенно усиливается как на уровне мРНК, так белка. Следовательно, для обеспечения внутриклеточных процессов регенерации в мотонейронах увеличивается потребность в рецепторах эстрогенов. При этом эстрогены влияют на режим функционирования клетки через геномный и негеномный механизмы.

Геномный механизм действия эстрогенов на аксотомированные мотонейроны был изучен методом матричной гибридизации комплементарной ДНК. Из 1176 ДНК-проб, иммобилизированных в матрицу, была зарегистрирована активность 265 генов, среди которых 42 гена имели повышенную активность и 21 ген — пониженную. По классическому геномному пути 17Р-эстрадиол усиливал транскрипцию гена сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF). Через альтернативный геномный механизм, например, путём активации киназы, регулируемой внеклеточным сигналом (ERK), эстрогены стимулировали экспрессию мРНК ней-ромодулина (GAP-43), индуцированного гипоксией фактора-la (HIF-la) и, вероятно, многих других ERK-активируемых генов. Анализ экспрессии генов в аксо-томированных мотонейронах выявил, что одним из механизмов нейропротектор-ного действия эстрогенов является модуляция экспрессии VEGF. Исходя из полученных данных о дифференциальной активности генов рецепторов эстрогенов

ERa и ERp), рецепторов VEGF (Flk-1 и Flt-1) и рецепторов эндотелинов (ЕТД и ЕТ0), нами сформулировано представление о перекрёстном антиапоптозном сигнале эстрогенов, VEGF и эндотелинов в мотонейронах в ответ на аксотомию.

В исследованиях альтернативного механизма действия эстрогенов впервые получены доказательства значимости эстрогенов в регуляции аксонного транспорта и внутриаксонного синтеза белка через активацию ERK-зависимых внутриклеточных каскадов. Нами установлено, что ERK является одним из факторов, контролирующих транспортные потоки в аксоне, при этом 17р-эстрадиол существенно повышает экспрессию ERK в спинном мозге, а также увеличивает накопление и фос-форилирование белка в нервных волокнах периферического нерва. Активированный эстрогенами ERK-каскад усиливает аксонный транспорт и стимулирует синтез белка в аксоне. Подтверждением участия эстрогенов в синтезе белка в аксоплазме служат полученные нами данные о трансляции нейрональной формы р-тубулина внутри аксона и потенцирующем влиянии 17р-эстрадиола на аксонный транспорт в присутствии ингибитора синтеза белка циклогексимида.

Таким образом, эстрогены оказывают модулирующее влияние на посттравматическую пластичность мотонейронов, которая выражается в интенсификации процессов внутриклеточной регенерации. В аксотомированных мотонейронах эстрогены поддерживают выживание мотонейронов, стимулируют рост и созревание аксонов, контролируют аксонный транспорт и синтез белка в аксоплазме. Уникальная способность эстрогенов воздействовать на мотонейроны по классическому и альтернативному пути многократно усиливает эффекты гормонов на регенерацию аксонов. Особенно следует отметить возможность эстрогенов регулировать жизненно важные функции мотонейронов, не только на уровне перикариона, но и на всём протяжении аксона.

Применительно к скелетной мышце пластичность её фенотипа была изучена на основании типирования мышечных волокон по качественному составу миозинов. В дополнение к существующим представлениям о пластичности денервированной скелетной мышцы нами показано, что железотранспор-тирующий белок трансферрин усиливает эффект фактора, инициирующего изменения фенотипа мышцы. Так, в денервированной мышце трансферрин повышает экспрессию медленного миозина, а при блокаде аксонного транспорта — быстрого. Согласно нашим данным, перепрограммирование синтеза миозинов наблюдается не только в мышцах денервированной конечности.

В ответ на одностороннее повреждение нерва в контралатеральных быстрой и медленной мышцах увеличивается относительное содержание медленных мышечных волокон.

Проведённое нами исследование выявило новые закономерности пластической реакции мотонейронов и скелетной мышцы в условиях повреждения периферического нерва. Нами установлена важная роль эстрогенов в посттравматической регенерации аксонов. В этой связи, на наш взгляд, представляется перспективной разработка клинического применения селективных модуляторов рецепторов эстрогенов для стимуляции посттравматической регенерации периферического нерва у человека.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Исламов, Рустем Робертович, 2004 год

1. Валитов И.С. Электрофизиологическое исследование секреции медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки в условиях колхициновой блокады аксонного транспорта / И.С. Валитов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1982. — N 94. — С. 6-8.

2. Валиуллин В.В. Нейротрофический контроль и гуморальная регуляция пластичности скелетной мышцы: Дис. на соискание учёной степени доктора биологических наук: 14.00.23.—Казань, 1996. — 212 е.: ил. 26.-Библиогр.: с. 183-212.

3. Волков Е.М. Влияние денервации и возможные механизмынейротрофичес-кого контроля хемочувствительной и электрогенной мембраны скелетных мышечных волокон / Е.М. Волков, Г.И. Полетаев // Успехи физиологических наук. — 1982.—N13.—С. 9-30.

4. Женевская Р.П. Нервно-трофическая регуляция пластической активности мышечной ткани / Р.П. Женевская. — Москва: Наука, 1974. — 240 с.

5. Киясов А.П. Межклеточные взаимодействия в ходе онтогенеза и репаратив-ной регенерации печени: Дис. на соискание учёной степени доктора медицинских наук: 14.00.16 и 14.00.23.—Казань, 1999.—223 е.: ил. 50.—Библиогр.:с. 197-223.

6. Корочкин Л.И. Биология индивидуального развития / Л.И. Корочкин. Москва: Изд-во Московского ун-та, 2002. — 264 с.

7. Мирзабеков А.Д. Применение матричных биочипов с иммобилизованной ДНК в биологии и медицине / А.Д. Мирзабеков, Д.В. Прокопенко, В.Р. Че-чёткин // Информационные медико-биологические технологии. — 2002. — С. 166-198.

8. Полетаев Г.И. Денервационные изменения мембраны мышечного волокна / Г.И. Полетаев // Нервный контроль структурно-функциональной организации скелетных мышц. — JI.: Наука, 1980. — С. 7-21.

9. Резвяков Н.П. Общие закономерности дифференцировки и пластичности скелетных мышц: Дис. на соискание учёной степени доктора медицинских наук:1400.23. —Казань, 1982. —250 е.: ил.102. — Библиогр.: с. 215-250.

10. Резвяков Н.П. Изменение свойств быстрой и медленной мышц крысы при перекрёстной иннервации / Н.П. Резвяков, Е.Е. Никольский // Физиологический журнал СССР. — 1978. — N 64. — С. 1117-1123.

11. Ромейс Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс.- Москва: Ин. лит-ра, 1953. —718 с.

12. Студитский А.Н. Восстановление мышц у высших млекопитающих/А.Н. Сту-дитский, З.П. Игнатьева. Москва: Изд-во. АН СССР, 1961. — 191с.

13. Улумбеков Э.Г. Развитие механизмов регуляции скорости сокращения мышечных волокон в онтогенезе / Э.Г. Улумбеков // Проблемы миогенеза. — JL: Наука, 1981. —С. 175-187.

14. Улумбеков Э.Г. Нейротрофический контроль фазных мышечных волокон / Э.Г. Улумбеков, Н.П. Резвяков // Нервный контроль структурно-функциональной организации скелетных мышц. — Л.: Наука, 1980. — С. 84-104.

15. Челышев Ю.А. Трофическая функция чувствительных нейронов: Дис. на соискание учёной степени доктора медицинских наук: 14.00.23. — Казань, 1983. — 354 е.: ил.107. — Библиогр.: с. 313-354.

16. Челышев Ю.А. Факторы под держания регенерации периферических нервов / Ю.А Челышев // Успехи физиологических наук. — 1995. —N26. — С. 57-77.

17. Челышев Ю.А. Развитие, фенотипическая характеристика и коммуникации шванновских клеток / Ю.А. Челышев, К.И. Сайткулов // Успехи физиологических наук. — 2000. — N 31. — С. 54-69.

18. Шенкман Б.С. Пластичность скелетных мышц. Эффекты тренировки и гравитационной разгрузки. Дис. на соискание учёной степени доктора биологических наук: 03.00.13. и 14.00.23. —Москва, 1999.

19. Штранкфельд И.Г. Изменения сократительного аппарата мышц при денервации / И.Г. Штранкфельд, И.Е. Москаленко // Нервный контроль структурно-функциональной организации скелетных мышц.—JL: Наука, 1980. — С. 36-51.

20. Albuquerque E.X. A comparative study of membrane properties of innervated and chronically denervated fast and slow skeletal muscles of the rat / E.X. Albuquerque, S.Thesleff//Acta Physiol Scand. — 1968. —V. 73, N4. —P. 471-480.

21. Alvarez J. Protein synthesis in axons and terminals: significance for maintenance, plasticity and regulation of phenotype. With a critique of slow transport theoiy / J. Alvarez, A. Giuditta,E. Koenig // Prog Neurobiol. — 2000. — V. 62, N 1. — P. 1-62.

22. Amphlett G.W. Cross innervation and the regulatoiy protein system of rabbit soleus muscle / G.W. Amphlett, S.V. Perry, H. Syska, M.D. Brown,G. Vrbova//Nature.1975. — V. 257, N 5527. — P. 602-604.

23. Ausoni S. Expression of myosin heavy chain isoforms in stimulated fast and slow rat muscles / S. Ausoni, L. Gorza, S. Schiaffino, K. Gundersen,T. Lomo // J Neurosci.1990. —V. 10, N 1. — P. 153-160.

24. Baas P.W. Microtubule transport in the axon / P.W. Baas // Int Rev Cytol. — 2002. —V. 212. —P. 41-62.

25. Bayline R.J. Innervation regulates the metamorphic fates of larval abdominal muscles in the moth, Manduca sexta / R.J. Bayline, A.B. Khoo, R. Booker // Dev Genes Evol. — 1998. — V. 208, N 7. — P. 369-381.

26. Be'eri H. The cytokine network of wallerian degeneration: IL-10 and GM-CSF / H. Be'eri, F. Reichert, A. Saada, S. Rotshenker // Eur J Neurosci. — 1998. — V. 10, N 8. —P. 2707-2713.

27. Behl C. Estrogen, mystery drug for the brain? : the neuroprotective activities of the female sex hormone. C. Behl 2001. - Springer, Wein ; New York, 228 pp.

28. Bennett B.L. SP600125, an anthrapyrazolone inhibitor of Jun N-terminal kinase /B.L. Bennett, D.T. Sasaki, B.W. Murray, E.C. O'Leaiy, S.T. Sakata, W. Xu, J.C. Leisten, A. Motiwala, S. Pierce, Y. Satoh, S.S. Bhagwat, A.M. Manning, D.W. Anderson // Proc

29. Natl Acad Sci U S A. — 2001. — V. 98, N24. — P. 13681-13686.

30. Bertrand J.R. Covalent coupling of a PIM-1 oncogene targeted PNA with an antennapedia derived peptide / J.R. Bertrand, N. Sumbatyan, C. Malvy // Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. — 2003. —V. 22, N 5-8. — P. 1611-1613.

31. Betz W.J. The effects of partial denervation at birth on the development of muscle fibres and motor units in rat lumbrical muscle / W.J. Betz, J.H. Caldwell, R.R. Ribchester //J Physiol.— 1980. —V. 303,N —P. 265-279.

32. Beyer C. Nongenomic effects of oestrogen: embryonic mouse midbrain neurones respond with a rapid release of calcium from intracellular stores / C. Beyer, H. Raab // Eur J Neurosci. — 1998. — V. 10, N 1. — P. 255-262.

33. Beyer C. Estrogenic stimulation of neurite growth in midbrain dopaminergic neurons depends on cAMP/protein kinase A signalling / C. Beyer,M. Karolczak // J Neurosci Res. — 2000. — V. 59, N 1. — P. 107-116.

34. Bi R. The tyrosine kinase and mitogen-activated protein kinase pathways mediate multiple effects of estrogen in hippocampus / R Bi, G. Broutman, M.R Foy, RF. Thompson, M. Baudry // Proc Natl Acad Sci USA. — 2000. — V. 97, N 7. — P. 3602-3607.

35. Bishop D.L. The effects of denervation location on fiber type mix in self-reinnervated mouse soleus muscles / D.L. Bishop, R.L. Milton // Exp Neurol. — 1997.1. V. 147,N1.—P. 151-158.

36. Bishop D.L. Nimodipine suppresses preferential reinnervation of mouse soleus muscles by slow alpha-motoneurons /D.L. Bishop, R.L. Milton // Exp Neurol. — 1998.1. V. 154, N2.— P. 366-370.

37. Bkaily G. ET-1 stimulates Ca2+ currents in cardiac cells / G. Bkaily, S. Wang, M. Bui, D. Menard //J Cardiovasc Pharmacol. —1995. —V. 26 Suppl 3, N—P. S293-296.

38. Black M.M. Slow components of axonal transport: two cytoskeletal networks / M.M. Black, R.J. Lasek // J Cell Biol. — 1980. — V. 86, N 2. — P. 616-623.

39. Blum A. Effects of oestrogens and selective oestrogen receptor modulators on serum lipoproteins and vascular function / A. Blum, R.O. Cannon, 3rd // Curr Opin1.pidol. — 1998. — V. 9, N 6. — P. 575-586.

40. Bradke F. Neuronal polarity: vectorial cytoplasmic flow precedes axon formation / F. Bradke, C.G. Dotti // Neuron. — 1997. — V. 19, N 6. — P. 1175-1186.

41. Breedlove S.M. Sex differences in the pattern of steroid accumulation by motoneurons of the rat lumbar spinal cord / S.M. Breedlove, A.P. Arnold // J Comp Neurol. — 1983. — V. 215, N 2. — P. 211-216.

42. Brennecke J. Towards a complete description of the microRNA complement of animal genomes / J. Brennecke, S.M. Cohen // Genome Biol. — 2003. — V. 4, N 9.—P. 228.

43. Brennecke J. bantam encodes a developmentally regulated microRNA that controls cell proliferation and regulates the proapoptotic gene hid in Drosophila / J. Brennecke, D.R.Hipfner, A. Stark, R.B. Russell, S.M. Cohen//Cell.—2003.—V. 113, N1. —P. 25-36.

44. Branson F.H. Circulating concentrations of FSH, LH, estradiol, and progesterone associated with acute, male-induced puberty in female mice / F.H. Branson, C. Desjardins // Endocrinology. — 1974. — V. 94, N 6. — P. 1658-1668.

45. Brown A. Axonal transport of membranous and nonmembranous cargoes: a unified perspective / A. Brown // J Cell Biol. — 2003. — V. 160, N 6. — P. 817-821.

46. Brown R.H. Amyotrophic lateral sclerosis: pathogenesis / R.H. Brown, Jr., W. Robberecht // Semin Neurol. — 2001. — V. 21, N 2. — P. 131-139.

47. Bryant H.U. Selective estrogen receptor modulators: an alternative to hormone replacement therapy / H.U. Bryant, W.H. Dere // Proc Soc Exp Biol Med. — 1998. — V. 217, N 1. — P. 45-52.

48. Buckingham М.Е. Skeletal muscle myogenesis: the expression of actin and myosin mRNAs / M.E. Buckingham, M. Carvatti, A. Minty, B. Robert, S. Alonso, A. Cohen, R Daubas, A. Weydert // Adv Exp Med Biol. — 1982. — V. 158, N — P. 331-347.

49. Burke K.A. Immunohistochemical detection of estrogen receptor alpha in male rat spinal cord during development / K.A. Burke, D.M. Schroeder, R.A. Abel, S.C. Richardson, R.M. Bigsby, K.P. Nephew // J Neurosci Res. — 2000. — V. 61, N 3. — P. 329-337.

50. Bungner О. V. Uber die Degenerations-und Regenerationsvorgange am Nerven nach Verletzungen. / O.V. Bungner // Beitr. Pathol. Anat. — 1891.—V. 10, N — P. 321-387.

51. Cajal S.R. Histologic du systeme nerveux de l'homme et des vertebres. Translated as "Histology of the nervous system of man and vertebrates" by S wanson N. and S wanson L.W. Oxford University Press, New York, 1995, Maloine, Paris, 1909-1911.

52. Cajal S.R. Degeneration and Regeneration of the Nervous System. S.R. Cajal 1928. Oxford University Press London: Humphrey Milford. pp. 769

53. Cajal S.R. Recollection of my life. S.R. Cajal 1937. -Memories ofthe Americam philosophical society, V. 8, pt. 1-2, Philadelphia.

54. Callier S. Neuroprotective properties of 17beta-estradiol, progesterone, and raloxifene in МРТР C57B1/6 mice / S. Callier, M. Morissette, M. Grandbois, D. Pelaprat, T. Di Paolo // Synapse. — 2001. —V. 41, N 2. — P. 131-138.

55. Capano C.P. Occurrence and sequence complexity of polyadenylated RNA in squid axoplasm / C.P. Capano, A. Giuditta, E. Castigli, B.B. Kaplan // J Neurochem. — 1987. —V. 49, N 3. — P. 698-704.

56. Caplen N.J. Specific inhibition of gene expression by small double-stranded RNAs in invertebrate and vertebrate systems / N.J. Caplen, S. Parrish, F. Imani, A. Fire, R.A. Morgan // Proc Natl Acad Sci U S A. — 2001. — V. 98, N 17. — P. 9742-9747.

57. Cato A.C. Rapid actions of steroid receptors in cellular signaling pathways / A.C. Cato, A. Nestl, S. Mink // Sci STKE. — 2002. — V. 2002, N 138. — P. RE9.

58. Chang J. Replication ofthe human hepatitis delta virus genome Is initiated in mouse hepatocytes following intravenous injection of naked DNA or RNA sequences / J.

59. Chang, L.J. Sigal, A. Lerro, J. Taylor // J Virol. — 2001. — V. 75, N 7. — P. 3469-3473.

60. Chintalgattu V. Cardiac myofibroblasts: a novel source of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors Flt-1 and KDR / V. Chintalgattu, D.M. Nair, L.C. Katwa // J Mol Cell Cardiol. — 2003. — V. 35, N 3. — P. 277-286.

61. Chow J. Astrocyte-derived VEGF mediates survival and tube stabilization of hypoxic brain microvascular endothelial cells in vitro / J. Chow, O. Ogunshola, S.Y. Fan, Y. Li, L.R. Ment, J. A. Madri//Brain Res Dev Brain Res. —2001.—V. 130,N 1.—P. 123-132.

62. Chun J.T. Differential compartmentalization of mRNAs in squid giant axon / J.T. Chun, A.E. Gioio, M. Crispino, A. Giuditta, B.B. Kaplan // J Neurochem. — 1996. — V. 67, N5. — P. 1806-1812.

63. Coleman M.P. Axon pathology in neurological disease: a neglected therapeutic target /M.P.Coleman, V.H. Perry//Trends Neurosci. —2002.—V.25,N 10.—P. 532-537.

64. Corfas G. Differential expression of ARIA isoforms in the rat brain / G. Corfas, K.M. Rosen, H. Aratake, R Krauss, G.D. Fischbach//Neuron.—1995.—V. 14,N1.—P. 103-115.

65. Costello B. Factors influencing GAP-43 gene expression in PC 12 pheochromocytoma cells / B. Costello, A. Meymandi, J.A. Freeman // J Neurosci. — 1990.—V. 10, N4. — P. 1398-1406.

66. Crispino M. Neurofilament proteins are synthesized in nerve endings from squid brain / M. Crispino, C.P. Capano, B.B. Kaplan, A. Giuditta // J Neurochem. —1993. — V. 61, N3. — P. 1144-1146.

67. Cyr M. Estrogen-like activity of tamoxifen and raloxifene on NMDA receptor binding and expression of its subunits in rat brain / M. Cyr, C. Thibault, M. Morissette, M. Landry, T. Di Paolo // Neuropsychopharmacology. — 2001.—V. 25, N 2. — P. 242-257.

68. Dardes R.C. Regulation of estrogen target genes and growth by selective estrogen-receptor modulators in endometrial cancer cells / R.C. Dardes, J.M. Schafer, S.T. Pearce, C. Osipo, B. Chen, V.C. Jordan// Gynecol Oncol. — 2002. —V. 85, N 3.—P. 498-506.

69. Davies S.P. Specificity and mechanism of action of some commonly used protein kinase inhibitors / S.P. Davies, H. Reddy, M. Caivano, P. Cohen // Biochem J. — 2000.1. V.351,NPt 1. —P. 95-105.

70. Davis L. Protein synthesis within neuronal growth cones / L. Davis, P. Dou, M. DeWit, S.B. Kater // J Neurosci. — 1992. — V. 12, N 12. — P. 4867-4877.

71. Delcroix J.D. NGF signaling in sensory neurons: evidence that early endosomes carry NGF retrograde signals / J.D. Delcroix, J.S. Valletta, C. Wu, S.J. Hunt, A.S. Kowal, W.C. Mobley //Neuron. — 2003. — V. 39, N 1. — P. 69-84.

72. D'Orleans-Juste P. Function of the endothelin(B) receptor in cardiovascular physiology and pathophysiology /P. D'Orleans-Juste, J. Labonte, G. Bkaily, S. Choufani, M. Plante, J. Honore // Pharmacol Ther. — 2002. — V. 95, N 3. — P. 221-238.

73. Elbashir S.M. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells / S.M. Elbashir, J. Harborth, W. Lendeckel, A. Yalcin, K. Weber, T. Tuschl // Nature. — 2001. — V. 411, N 6836. — P. 494-498.

74. Eugenin J. Incorporation of amino acids into the axoplasm is enhanced by electrical stimulation of the fiber / J. Eugenin, J. Alvarez // Brain Res. — 1995. — V. 677, N2. — P. 319-325.

75. Falls D.L. Fischbach. ARIA, a protein that stimulates acetylcholine receptorsynthesis, is a member of the neu ligand family / D.L. Falls, K.M. Rosen, G. Corfas, W.S. Lane, G.D. Fischbach// Cell. — 1993. — V. 72, N 5. — P. 801-815.

76. Fire A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans / A. Fire, S. Xu, M.K. Montgomery, S.A. Kostas, S.E. Driver, C.C. Mello // Nature. — 1998. — V. 391, N 6669. — P. 806-811.

77. Frostick S.P. Schwann cells, neurotrophic factors, and peripheral nerve regeneration / S.P. Frostick, Q. Yin, G.J. Kemp // Microsurgery. — 1998. — V. 18, N 7.1. P. 397-405.

78. Funakoshi H. Muscle-derived neurotrophin-4 as an activity-dependent trophic signal for adult motor neurons / H. Funakoshi, N. Belluardo, E. Arenas, Y. Yamamoto, A. Casabona, H. Persson, C.F. Ibanez // Science. — 1995. — V. 268, N 5216. — P. 1495-1499.

79. Gaete J. Regenerating axons of the rat require a local source of proteins / J. Gaete, G. Kameid, J. Alvarez //Neurosci Lett. — 1998. — V. 251, N 3. — P. 197-200.

80. Gan L. Specific interference with gene expression and gene function mediated by long dsRNA in neural cells / L. Gan, K.E. Anton, B.A. Masterson, V.A. Vincent, S. Ye, M. Gonzalez-Zulueta//J Neurosci Methods. —2002. —V. 121,N2. —P. 151-157.

81. Gardner J.P. Endothelin-induced calcium responses in human vascular smooth muscle cells / J.P. Gardner, G. Tokudome, H. Tomonari, E. Maher, D. Hollander, A. Aviv //Am J Physiol. — 1992. — V. 262, N 1 Pt 1. — Р. C148-155.

82. Gauthier G.F. Distribution and properties of myosin isozymes in developing avian and mammalian skeletal muscle fibers / G.F. Gauthier, S. Lowey, P.A. Benfield, A.W. Hobbs // J Cell Biol. — 1982. —V. 92, N 2. — P. 471-484.

83. Gauthier G.F. Myosin isozymes in normal and cross-reinnervated cat skeletal muscle fibers / G.F. Gauthier, R.E. Burke, S. Lowey, A. W. Hobbs // J Cell Biol. — 1983.1. V. 97,N3. —P. 756-771.

84. Geum D. Phosphorylation-dependent cellular localization and thermoprotective role of heat shock protein 25 in hippocampal progenitor cells / D. Geum, G.H. Son, K. Kim // J Biol Chem. — 2002. — V. 277, N 22. — P. 19913-19921.

85. Gioio A.E. Kinesin mRNA is present in the squid giant axon / A.E. Gioio, J.T.

86. Chun, M. Crispino, C.P. Capano, A. Giuditta, B.B. Kaplan // J Neurochem. — 1994. — V. 63, N 1. — P. 13-18.

87. Giuditta A. Factors for protein synthesis in the axoplasm of squid giant axons / A. Giuditta, S. Metafora, A. Felsani, A. Del Rio // J Neurochem. — 1977.—V. 28, N 6.1. P. 1393-1395.

88. Giuditta A. Ribosomal RNA in the axoplasm of the squid giant axon / A. Giuditta, A. Cupello, G. Lazzarini // J Neurochem. — 1980. —V. 34, N 6. — P. 1757-1760.

89. Giuditta A. Active polysomes in the axoplasm of the squid giant axon / A. Giuditta, E. Menichini, C. Perrone Capano, M. Langella, R. Martin, E. Castigli, B.B. Kaplan // J Neurosci Res. — 1991. — V. 28, N 1. — P. 18-28.

90. Goldstein L.S. Microtubule-based transport systems in neurons: the roles of kinesins and dyneins / L.S. Goldstein, Z. Yang //Annu Rev Neurosci.—2000.—V. 23, N—P. 39-71.

91. Gordon D.A. Distribution of developmental myosin isoforms in isolated A-segments / D.A. Gordon, S. Lowey // J Muscle Res Cell Motil. — 1992. — V. 13, N 6.1. P. 654-667.

92. Gorza L. Slow-to-fast transformation of denervated soleus muscles by chronic high-frequency stimulation in the rat / L. Gorza, K. Gundersen, T. Lomo, S. Schiaffino, R.H. Westgaard // J Physiol. — 1988. — V. 402, N — P. 627-649.

93. Grandbois M. Ovarian steroids and raloxifene prevent MPTP-induced dopamine depletion in mice / M. Grandbois, M. Morissette, S. Callier, T. Di Paolo // Neuroreport.2000. —V. 11, N2. — P. 343-346.

94. Green P.S. 17 alpha-estradiol exerts neuroprotective effects on SK-N-SH cells / P.S. Green, J. Bishop, J.W. Simpkins//JNeurosci. — 1997. — V. 17,N2. — P. 511-515.

95. Green S. Human oestrogen receptor cDNA: sequence, expression and homology to v-erb-А/ S. Green, P. Walter, V. Kumar, A. Krust, J.M. Bornert, P. Argos, P. Chambon //Nature. — 1986. — V. 320,N 6058. — P. 134-139.

96. Greene G.L. Sequence and expression of human estrogen receptor complementary DNA/ G.L. Greene, P. Gilna, M. Waterfield, A. Baker, Y. Hort, J. Shine // Science. — 1986. — V. 231, N 4742. — P. 1150-1154.

97. Greenfield J.G. Greenfield's Neuropathology / J.G. Greenfield, J.H. Adams, J. A.N. Corsellis, L. Duchen.W//, 4th / edn., Wiley, New York, 1984,1126 , 2. of plates pp.

98. GuoZ. Estradiol-inducedNongenomic Calcium Signaling Regulates Genotropic Signaling in Macrophages / Z. Guo, J. Krucken, W.R Benten, F. Wunderlich // J Biol Chem. — 2002. — V. 277, N 9. — P. 7044-7050.

99. Guth L. Effects of cross-reinnervation on some chemical properties of red and white muscles of rat and cat / L. Guth, P.K. Watson, W.C. Brown // Exp Neurol. — 1968.1. V.20,N1. —P.52-69.

100. Guth L. Procedure for the histochemical demonstration of actomyosin ATPase / L. Guth, F.J. Samaha // Exp Neurol. — 1970. — V. 28, N 2. — P. 365-367.

101. Hagiwara Y. Iron supports myogenic cell differentiation to the same degree as does iron-bound transferrin / Y. Hagiwara, K. Saito, S. Atsumi, E. Ozawa // Dev Biol.1987. — V. 120, N 1. — P. 236-244.

102. Hasegawa T. Fe (3+) promotes in vitro growth of myoblasts and other cells from chick embryos / T. Hasegawa, K. Saito, I. Kimura, E. Ozawa // Proc J Acad. — 1981. — V. N 6. — P. 206-210.

103. Hirata K. Myelin phagocytosis by macrophages and nonmacrophages during Wallerian degeneration / K. Hirata, M. Kawabuchi // Microsc Res Tech. — 2002. — V. 57, N6. — P. 541-547.

104. Hoffman P.N. The slow component of axonal transport. Identification of major structural polypeptides of the axon and their generality among mammalian neurons / P.N. Hoffman, R.J. Lasek // J Cell Biol. — 1975. — V. 66, N 2. — P. 351-366.

105. Hon S. Distinct tissue distribution and cellular localization of two messenger ribonucleic acids encoding different subtypes of rat endothelin receptors / S. Hori, Y.

106. Komatsu, R. Shigemoto, N. Mizuno, S. Nakanishi I I Endocrinology. —1992. —V. 130, N4. —P. 1885-1895.

107. Horn K.L. The physiology of nerve injury and repair / K.L. Horn, R.L. Crumley // Otolaryngol Clin North Am. — 1984. — V. 17, N 2. — P. 321-333.

108. Hosli E. Histochemical and electrophysiological evidence for estrogen receptors on cultured astrocytes: colocalization with cholinergic receptors / E. Hosli, W. Ruhl, L. Hosli // Int J Dev Neurosci. — 2000. — V. 18, N 1. — P. 101-111.

109. Hughes P.M. Comparison of matrix metalloproteinase expression during Wallerian degeneration in the central and peripheral nervous systems / P.M. Hughes, G.M. Wells, V.H. Perry, M.C. Brown, K.M. Miller//Neuroscience. — 2002. — V. 113, N2. —P. 273-287.

110. Huttelmaier S. Raverl, a dual compartment protein, is a ligand for PTB/hnRNPI and microfilament attachment proteins / S. Huttelmaier, S. Illenberger, I. Grosheva, M. Rudiger, RH. Singer,B.M. Jockusch//J Cell Biol. — 2001.—V. 155,N5. —P. 775-786.

111. Hutvagner G. Sequence-specific inhibition of small RNA function / G. Hutvagner, MJ. Simard, C.C. Mello, P.D. Zamore // PLoS Biol. — 2004. — V. 2, N 4. — P. E98.

112. Ide C. Peripheral nerve regeneration / C. Ide //Neurosci Res. —1996.—V. 25, N2. —P. 101-121.

113. Ilan N. Vascular endothelial growth factor expression, beta-catenin tyrosine phosphorylation, and endothelial proliferative behavior: a pathway for transformation? / N. Ilan, A. Tucker, J.A. Madri // Lab Invest. — 2003. — V. 83, N 8. — P. 1105-1115.

114. Inserra M.M. Functional indices for sciatic, peroneal, and posterior tibial nerve lesions in the mouse / M.M. Inserra, D.A. Bloch, D.J. Terris // Microsurgery. —1998. — V. 18, N2. —P. 119-124.

115. Ivanova T. Rapid stimulation of the PI3-kinase/Akt signalling pathway in developing midbrain neurones by oestrogen / T. Ivanova, P. Mendez, L.M. Garcia-Segura, C. Beyer // J Neuroendocrinol. — 2002. — V. 14, N 1. — P. 73-79.

116. Jensen E.a.J.H. Basic guides to the mechanism of estrogen action. / E.aJ.H. Jensen // Rec Prog Horm Res. — 1962. — V. N 18. — P. 387-414.

117. Jezierski M.K. Estrogen enhances retrograde transport of brain-derived neurotrophic factor in the rodent forebrain / M.K. Jezierski, F. Sohrabji // Endocrinology. — 2003. —V. 144, N 11.— P. 5022-5029.

118. Jin К. Vascular endothelial growth factor (VEGF) stimulates neurogenesis in vitro and in vivo / K. Jin, Y. Zhu, Y. Sun, X.O. Mao, L. Xie, D.A. Greenberg // Proc Natl Acad Sci U S A. — 2002. — V. 99, N 18. — P. 11946-11950.

119. Jockusch B.M. From the nucleus toward the cell periphery: a guided tour for mRNAs / B.M. Jockusch, S. Huttelmaier, S. Illenberger // News Physiol Sci. — 2003.1. V. 18,N — P. 7-11.

120. JoleszF. Development, innervation, and activity-pattern induced changes in skeletal muscle / F. Jolesz, F.A. Sreter // Annu Rev Physiol. — 1981. — V. 43, N—P. 531-552.

121. Jones K.J. Neuroprotective effects of gonadal steroids on regenerating peripheral motoneurons / K.J. Jones, T.J. Brown, M. Damaser // Brain Res Brain Res Rev. — 2001.

122. V. 37, N 1-3. — P. 372-382.

123. Jordan V.C. Biochemical pharmacology of antiestrogen action / V.C. Jordan // Pharmacol Rev. — 1984. — V. 36, N 4. — P. 245-276.

124. Jung—Testas I. Actions of steroid hormones- and growth factors on glial cells of the central and peripheral nervous system /1. Jung-Testas, M. Schumacher, P. Robel, E.E. Baulieu // J Steroid Biochem Mol Biol. — 1994. — V. 48, N 1. — P. 145-154.

125. Kaiser S. Evaluation of common gene expression patterns in the rat nervous system / S. Kaiser, L.K. Nisenbaum // Physiol Genomics. — 2003.—V. 16, N 1. — P. 1-7.

126. Kaspar B.K. Retrograde viral delivery of IGF-1 prolongs survival in a mouse ALS model / B.K. Kaspar, J. Llado, N. Sherkat, J.D. Rothstein, F.H. Gage // Science. — 2003. — V. 301, N 5634. — P. 839-842.

127. Katwa L.C. The upregulation of endothelin and its receptors in porcine coronary arteries in a double balloon injury model of restenosis / L.C. Katwa, S.E. Campbell, M.A. Tanner, P.R. Myers // Basic Res Cardiol. — 1999. — V. 94, N 6. — P. 445^53.

128. Kleiman R. Development of subcellular mRNA compartmentation in hippocampal neurons in culture / R. Kleiman, G. Banker, O. Steward // J Neurosci. — 1994. v. 14,N3 Pt 1. — P. 1130-1140.

129. Klinge C.M. Estrogen receptor interaction with estrogen response elements / C.M. Klinge // Nucleic Acids Res. — 2001. — V. 29, N 14. — P. 2905-2919.

130. Koenig E. Synthetic Mechanisms in the Axon. Ii. Rna in Myelin-Free Axons ofthe Cat / E. Koenig // J Neurochem. — 1965. — V. 12, N — P. 357-361.

131. Koenig E. Synthetic Mechanisms in the Axon. I. Local Axonal Synthesis of Acetylcholinesterase / E. Koenig // J Neurochem. — 1965. — V. 12, N — P. 343-355.

132. Koenig E. Ribosomal RNA in Mauthner axon: implications for a protein synthesizing machinery in the myelinated axon / E. Koenig // Brain Res. — 1979. —V. 174, N1. — P. 95-107.

133. Koenig E. Cortical plaque-like structures identify ribosome-containing domains in the Mauthner cell axon / E. Koenig, R. Martin // J Neurosci. — 1996. — V. 16, N 4. — P. 1400-1411.

134. Koenig E. Cryptic peripheral ribosomal domains distributed intermittently along mammalian myelinated axons / E. Koenig, R. Martin, M. Titmus, J.R. Sotelo-Silveira / / J Neurosci. — 2000. — V. 20, N 22. — P. 8390-8400.

135. Ко vacs Z. VEGF and fit. Expression time kinetics in rat brain infarct / Z. Kovacs, K. Ikezaki, K. Samoto, T. Inamura, M. Fukui // Stroke. — 1996. — V. 27, N 10. — P. 1865-1872; discussion 1872-1863.

136. Krum J.M. VEGF mRNA and its receptor flt-1 are expressed in reactive astrocytes following neural grafting and tumor cell implantation in the adult CNS / J.M. Krum, J.M. Rosenstein // Exp Neurol. — 1998. —V. 154, N 1. — P. 57-65.

137. Krum J.M. Inhibition of endogenous VEGF impedes revascularization and astroglial proliferation: roles for VEGF in brain repair / J.M. Krum, A. Khaibullina //

138. Exp Neurol. — 2003. —V. 181, N 2. — P. 241-257.

139. Kubo T. Analysis of genes induced in peripheral nerve after axotomy using cDNAmicroarrays / T. Kubo, T. Yamashita, A. Yamaguchi, K. Hosokawa, M. Tohyama // J Neurochem. — 2002. — V. 82, N 5. — P. 1129-1136.

140. Kuiper G.G. Cloning of a novel receptor expressed in rat prostate and ovary / G.G. Kuiper, E. Enmark, M. Pelto-Huikko, S. Nilsson, J.A. Gustafsson // Proc Natl Acad Sci USA. — 1996. — V. 93, N 12. — P. 5925-5930.

141. Landry M. Estrogenic properties of raloxifene, but not tamoxifen, on D2 and D3 dopamine receptors in the rat forebrain / M. Landry, D. Levesque, T. Di Paolo // Neuroendocrinology. — 2002. — V. 76, N 4. — P. 214-222.

142. Leblond C. Classification of cell population on the basis of their proliferative behavior. In: International symposium control of cell division and the induction of cancer / C. Leblond // Nat. Cancer Inst. Monograph.— 1964. —V. 14,N —P. 119-150.

143. Lee H. Regulation of estrogen receptor nuclear export by ligand-induced and p3 8-mediated receptor phosphorylation / H. Lee, W. Bai // Mol Cell Biol. — 2002.—V. 22, N 16. — P. 5835-5845.

144. Lee S.J. Neurotrophic and neuroprotective actions of estrogens and their therapeutic implications / S.J. Lee, B.S. McEwen // Annu Rev Pharmacol Toxicol. — 2001.—V. 41,N —P. 569-591.

145. Lee S.K. Organization and translation of mRNA in sympathetic axons / S.K.1.e, P.J. Hollenbeck // J Cell Sci. — 2003. — V.l 16, N Pt 21. — P. 4467-4478.

146. Li B. VEGF-induced activation of the PI3-K/Akt pathway reduces mutant SODl-mediated motor neuron cell death / B. Li, W. Xu, C. Luo, D. Gozal, R. Liu // Brain Res Mol Brain Res. — 2003. — V. 111, N 1-2. — P. 155-164.

147. Li X. The preventive and interventional effects of raloxifene analog (LY117018 HCL) on osteopenia in ovariectomized rats / X. Li, M. Takahashi, K. Kushida, T. Inoue // J Bone Miner Res. — 1998. — V. 13,N6. —P. 1005-1010.

148. LiuF. Hydrodynamics-based transfection in animals by systemic administration of plasmid DNA / F. Liu, Y. Song,D. Liu // Gene Ther. — 1999. — V. 6, N 7.—P. 1258-1266.

149. Loo L.S. Cortical expression of endothelin receptor subtypes A and В following middle cerebral arteiy occlusion in rats / L.S. Loo, Y.K. Ng, Y.Z. Zhu, H.S. Lee, P.T. Wong //Neuroscience. — 2002. —V. 112, N 4. — P. 993-1000.

150. Mangelsdorf D.J. The nuclear receptor superfamily: the second decade / D.J. Mangelsdorf, C. Thummel, M. Beato, P. Herrlich, G. Schutz, K. Umesono, B. Blumberg, P. Kastner, M. Mark, P. Chambon, et al. // Cell. — 1995. — V. 83, N 6. — P. 835-839.

151. Markelonis G.J. Sciatin: purification and characterization of a myotrophic protein from chicken sciatic nerves / G.J. Markelonis, V.F. Kemerer, Т.Н. Oh // J Biol Chem. — 1980. —V. 255, N 19. — P. 8967-8970.

152. Markelonis G.J. Sciatin is a transferrin-like polypeptide / G.J. Markelonis, R.A. Bradshaw, Т.Н. Oh, J.L. Johnson, O.J. Bates // J Neurochem. — 1982. — V. 39, N 2. —P. 315-320.

153. Markelonis G.J. Sciatin: a myotrophic protein increases the number of acetylcholine receptors and receptor clusters in cultured skeletal muscle / G.J. Markelonis, Т.Н. Oh, M.E. Eldefrawi, L. Guth // Dev Biol. — 1982. — V. 89, N 2. — P. 353-361.

154. Markus A. Neurotrophic factors and axonal growth / A. Markus, T.D. Patel, W.D. Snider//CurrOpinNeurobiol. —2002.—V. 12,N5. —P. 523-531.

155. Martin K.C. Local protein synthesis and its role in synapse-specific plasticity / K.C. Martin, M. Barad, E.R Kandel // Curr OpinNeurobiol.—2000.—V. 10, N 5.—P. 587-592.

156. Matsuura A. Stimulatory interaction between vascular endothelial growth factor and endothelin-1 on each gene expression / A. Matsuura, W. Yamochi, K. Hirata, S. Kawashima, M. Yokoyama // Hypertension. — 1998. — V. 32, N 1. — P. 89-95.

157. Maurer M.H. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptorsin rat neural stem cells / M.H. Maurer, W.K. Tripps, R.E. Feldmann, Jr., W. Kuschinsky // Neurosci Lett. — 2003. — V. 344, N 3. — P. 165-168.

158. McCaffrey A.P. A story of mice and men / A.P. McCaffrey, M.A. Kay // Gene Ther. — 2002. — V. 9, N 23. — P. 1563.

159. McCaffrey A.P. RNA interference in adult mice / A.P. McCaffrey, L. Meuse, T.T. Pham, D.S. Conklin, G.J. Hannon, M.A. Kay//Nature.—2002.—V. 418, N 6893.—P. 38-39.

160. McEwen B.S. Estrogen actions in the central nervous system / B.S. McEwen, S.E. Alves // Endocr Rev. — 1999. — V. 20, N 3. — P. 279-307.

161. McEwenB.S. Invited review: Estrogens effects on the brain: multiple sites and molecular mechanisms/B.S. McEwen// J Appl Physiol.—2001.—V. 91, N 6.—P. 2785-2801.

162. Medina V.M. Spinal cord dynorphin: positive region-specific modulation during pregnancy and parturition / V.M. Medina, L. Wang, A.R. Gintzler // Brain Res. — 1993.1. V. 623,N1.—P. 41-46.

163. Mermelstein P.G. Estradiol reduces calcium currents in rat neostriatal neurons via a membrane receptor / P.G. Mermelstein, J.B. Becker, D.J. Surmeier // J Neurosci. — 1996. — V. 16, N2. — P. 595-604.

164. Mesples B. Effects of interleukin-10 on neonatal excitotoxic brain lesions in mice / B. Mesples, R Plaisant, P. Gressens // Brain Res Dev Brain Res. — 2003. — V. 141, N 1-2. — P. 25-32.

165. Meyer D. Isoform-specific expression and function of neuregulin / D. Meyer, T. Yamaai, A. Garratt, E. Riethmacher-Sonnenberg, D. Kane, L.E. Theill, C. Birchmeier //Development. — 1997. —V. 124,N 18. — P. 3575-3586.

166. Miana-Mena RJ. Fragment С tetanus toxin: a putative activity-dependent neuroanatomical tracer / F.J. Miana-Mena, M.J. Munoz, J. Ciriza, J. Soria, P. Brulet, P. Zaragoza, R. Osta // Acta Neurobiol Exp (Wars). — 2003. — V. 63, N 3. — P. 211-218.

167. Ming G.L. Adaptation in the chemotactic guidance of nerve growth cones / G.L. Ming, S.T. Wong, J. Henley, X.B. Yuan, H.J. Song, N.C. Spitzer, M.M. Poo // Nature. — 2002. — V. 417, N 6887. — P. 411-418.

168. Montgomery M.K. RNA as a target of double-stranded RNA-mediated genetic interference in Caenorhabditis elegans / M.K. Montgomery, S. Xu, A. Fire // Proc Natl Acad Sci USA.— 1998. — V. 95, N 26. — P. 15502-15507.

169. Mooradian A.D. Antioxidant properties of steroids / A.D. Mooradian // J Steroid Biochem Mol Biol. — 1993. — V. 45, N 6. — P. 509-511.

170. Moss R.L. Estrogen: mechanisms for a rapid action in CA1 hippocampal neurons /R.L. Moss, Q. Gu// Steroids. — 1999. —V. 64,N 1-2. — P. 14-21.

171. Murakami T. Hypoxic induction of vascular endothelial growth factor is selectively impaired in mice carrying the mutant SOD1 gene / T. Murakami, H. Ilieva, M. Shiote, T. Nagata, I. Nagano, M. Shoji,K. Abe//Brain Res.—2003.—V. 989,N2. —P. 231-237.

172. Nakamizo T. Protection of cultured spinal motor neurons by estradiol / T. Nakamizo, M. Urushitani, R. Inoue, A. Shinohara, H. Sawada, K. Honda, T. Kihara, A. Akaike, S. Shimohama // Neuroreport. — 2000. — V. 11, N 16. — P. 3493-3497.

173. Nico B. Vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor-2 expression in mdx mouse brain / B. Nico, P. Corsi, A. Vacca, L. Roncali, D. Ribatti // Brain Res. — 2002. — V. 953, N 1-2. — P. 12-16.

174. Oh Т.Н. Persistence in degenerating sciatic nerve of substances having a trophic influence upon cultured muscle / Т.Н. Oh, G.J. Markelonis, RJ. Reier, A.A. Zalewski //

175. Exp Neurol. — 1980. — V. 67, N 3. — P. 646-654.

176. Olsen P.H. The lin-4 regulatory RNA controls developmental timing in Caenorhabditis elegans by blocking LIN-14 protein synthesis after the initiation of translation / P.H. Olsen, V. Ambros // Dev Biol. — 1999. — V. 216, N 2. — P. 671-680.

177. Ozawa E. Trophic and myogenic effects with special reference to transferrin / E. Ozawa//Adv Exp Med Biol. — 1985. — V. 182, N —P. 123-127.

178. Palay S.L. The fine structure of neurons / S.L. Palay, G.E. Palade // J Biophys Biochem Cytol. — 1955. — V. 1, N 1. — P. 69-88.

179. Palay S.L. The axon hillock and the initial segment / S.L. Palay, C. Sotelo, A. Peters, P.M. Orkand // J Cell Biol. — 1968. — V. 38, N 1. — P. 193-201.

180. Papakonstanti E.A. Association of PI-3 kinase with PAK1 leads to actin phosphorylation and cytoskeletal reorganization / E.A. Papakonstanti, C. Stournaras // Mol Biol Cell. — 2002. — V. 13, N 8. — P. 2946-2962.

181. Park W.C. Selective estrogen receptor modulators (SERMS) and their roles in breast cancer prevention / W.C. Park, V.C. Jordan // Trends Mol Med. — 2002. — V. 8, N2. —P. 82-88.

182. Patrone C. Estrogen receptor-dependent regulation of sensory neuron survival in developing dorsal root ganglion / C. Patrone, S. Andersson, L. Korhonen, D. Lindholm // Proc Natl Acad Sci U S A. — 1999. — V. 96, N 19. — P. 10905-10910.

183. Pedram A. Vasoactive peptides modulate vascular endothelial cell growth factor production and endothelial cell proliferation and invasion / A. Pedram, M. Razandi, R.M. Hu, E.R. Levin // J Biol Chem. — 1997. — V. 272, N 27. — P. 17097-17103.

184. Pette D. Transformation of morphological, functional and metabolic properties of fast-twitch muscle as induced by long-term electrical stimulation / D. Pette, C.

185. Heilmann // Basic Res Cardiol. — 1977. — V. 72, N 2-3. — P. 247-253.

186. Pfaff D. Atlas of estradiol-concentrating cells in the central nervous system of the female rat / D. Pfaff, M. Keiner // J Comp Neurol. —1973. — V. 151, N 2. — P. 121 -158.

187. Pomonis J.D. Expression and localization of endothelin receptors: implications for the involvement of peripheral glia in nociception / J.D. Pomonis, S.D. Rogers, C.M. Peters, J.R. Ghilardi, P.W. Mantyh // J Neurosci. — 2001. — V. 21, N 3.—P. 999-1006.

188. Powell H.C. The Pathology of the Myelinated Axon, Pathology of the peripheral myelinated axon. H.C. Powell 1985. Igaku-Shoin, New York, 29 pp.

189. Purves D. Specific connections between nerve cells / D. Purves, J. W. Lichtman //Annu Rev Physiol. — 1983. — V. 45, N — P. 553-565.

190. ResnickD.K. Molecular evidence of repair and plasticity following spinal cord injury / D.K. Resnick, C. Schmitt, G.S. Miranpuri, V.K. Dhodda, J. Isaacson, R. Vemuganti //Neuroreport. — 2004. — V. 15, N 5. — P. 837-839.

191. Reynolds A.J. Anterograde and retrograde transport of active extracellular signal-related kinase 1 (ERK1) in the ligated rat sciatic nerve / A.J. Reynolds, I.A. Hendry, S.E. Bartlett // Neuroscience. — 2001. — V. 105, N 3. — P. 761-771.

192. Richardson K.C. Embedding in epoxy resins for ultrathin sectioning in electron microscopy / K.C. Richardson, L. Jarett, E.H. Finke // Stain Technol. — 1960. — V. 35.1. P. 313-323.

193. Rodgers E.E. Functions of PI 3-kinase in development of the nervous system / E.E. Rodgers, A.B. Theibert // Int J Dev Neurosci. — 2002.—V. 20, N 3-5. — P. 187-197.

194. Rogers S.D. Endothelin В receptors are expressed by astrocytes and regulate astrocyte hypertrophy in the normal and injured CNS / S.D. Rogers, C.M. Peters, J.D. Pomonis, H.

195. Hagiwara, J.R. Ghilardi, P.W. Mantyh // Glia. — 2003.—V. 41, N 2.—P. 180-190.

196. Sagot Y. Differential effects of neurotrophic factors on motoneuron retrograde labeling in a murine model of motoneuron disease / Y. Sagot, T. Rosse, R. Vejsada, D. Perrelet,A.C. Kato//J Neurosci. —1998. —V. 18,N3. —P. 1132-1141.

197. Salmons S. Significance of impulse activity in the transformation of skeletal muscle type / S. Salmons, RA. Sreter//Nature. —1976.—V. 263, N 5572.—P. 30-34.

198. Sanchez C. Phosphorylation of microtubule-associated protein 2 (MAP2) and its relevance for the regulation of the neuronal cytoskeleton function / C. Sanchez, J. Diaz-Nido, J. Avila // Prog Neurobiol. — 2000. — V. 61, N 2. — P. 133-168.

199. Sang N. МАРК signaling up-regulates the activity of hypoxia-inducible factors by its effects on p300 /N. Sang, D.P. Stiehl, J. Bohensky, I. Leshchinsky, V. Srinivas, J. Caro // J Biol Chem. — 2003. — V. 278, N 16. — P. 14013-14019.

200. Santella L. Calcium signaling in the cell nucleus / L. Santella, E. Carafoli // FasebJ.—1997. —V. 11,N 13. — P. 1091-1109.

201. Sato M. Longitudinal and cross-sectional analysis of raloxifene effects on tibiae from ovariectomized aged rats /М. Sato, J. Kim, L.L. Short, C.W. Slemenda, H.U. Bryant // J Pharmacol Exp Ther. — 1995. — V. 272, N 3. — P. 1252-1259.

202. Sato M. Raloxifene, tamoxifen, nafoxidine, or estrogen effects on reproductive and nonreproductive tissues in ovariectomized rats / M. Sato, M.K. Rippy, H.U. Bryant // Faseb J. — 1996. — V. 10, N 8. — P. 905-912.

203. Sato M. Raloxifene: a selective estrogen receptor modulator / M. Sato, AL Glasebrook, and HU Bryant // J Bone Miner Metab. — 1994. — V. 12, N—P. S9-S20.

204. Schacher S. Synapse formation in the absence of cell bodies requires protein synthesis / S. Schacher, F. Wu // J Neurosci. — 2002. — V. 22, N 5. — P. 1831-1839.

205. Scheele W.H. Raloxifene does not cause stimulatory effects on the uterus in healthy postmenopausal women. / W.H. Scheele, Symanowski SM, Neale S, Shah A, Lafortune M and Fugere P // Endocr Soc. — 1997. — V. 79, N — P. 498.

206. Scheetz A.J. NMDA receptor-mediated control of protein synthesis atdeveloping synapses / A.J. Scheetz, A.C. Nairn, M. Constantine-Paton // Nat Neurosci. — 2000. —V.3,N3. —P. 211-216.

207. Scherr M. Gene silencing mediated by small interfering RNAs in mammalian cells / M. Scherr, M.A. Morgan, M. Eder // Curr Med Chem. — 2003. — V. 10, N 3. — P. 245-256.

208. Shackelford J.E. Effect of denervation on the levels and rates of synthesis of specific enzymes in "fast-twitch" (breast) muscle fibers of the chicken / J.E. Shackelford, H.G. Lebherz // J Biol Chem. — 1981. — V. 256, N 12. — P. 6423-6429.

209. Shamash S. The cytokine network of Wallerian degeneration: tumor necrosis factor-alpha, interleukin-1 alpha, and interleukin-lbeta / S. Shamash, F. Reichert, S. Rotshenker // J Neurosci. — 2002. — V. 22, N 8. — P. 3052-3060.

210. Shi S.H. Hippocampal neuronal polarity specified by spatially localized шРагЗ/ тРагб and PI 3-kinase activity / S.H. Shi, L.Y. Jan, Y.N. Jan // Cell. — 2003. —V. 112, N1. —P. 63-75.

211. Shima D.T. Vascular developmental biology: getting nervous / D.T. Shima, C. Mailhos // Curr Opin Genet Dev. — 2000. — V. 10, N 5. — P. 536-542.

212. Shughrue P.J. Comparative distribution of estrogen receptor-alpha and -beta mRNA in the rat central nervous system / P.J. Shughrue, M.V. Lane, I. Merchenthaler // J Comp Neurol. — 1997. —V. 388, N 4. — P. 507-525.

213. Siironen J. Expression of type I and III collagen and laminin betal after rat sciatic nerve crush injury / J. Siironen, E. Vuorio, M. Sandberg, M. Roytta // J Peripher Nerv Syst. — 1996. —V. 1, N 3. — P. 209-221.

214. Simeoni F. Insight into the mechanism of the peptide-based gene delivery system MPG: implications for delivery of siRNA into mammalian cells / F. Simeoni, M.C. Morris, F. Heitz, G. Divita // Nucleic Acids Res. — 2003. — V. 31, N 11. — P. 2717-2724.

215. Simoncini T. Non-genomic actions of sex steroid hormones / T. Simoncini, A.R. Genazzani // Eur J Endocrinol. — 2003. — V. 148, N 3. — P. 281-292.

216. Slooter A.J. Estrogen use and early onset Alzheimer's disease: a populationbased study / A J. Slooter, J. Bronzova, J.C. Witteman, C. Van Broeckhoven, A. Hofinan, C.M. van Duijn // J Neurol Neurosurg Psychiatry. — 1999. — V. 67, N 6.—P. 779-781.

217. Sondell M. Vascular endothelial growth factor is a neurotrophic factor which stimulates axonal outgrowth through the flk-1 receptor / M. Sondell, F. Sundler, M. Kanje // Eur J Neurosci. — 2000. — V. 12, N 12. — P. 4243-4254.

218. Spieker L.E. Endothelin receptor antagonists in congestive heart failure: a new therapeutic principle for the future? / L.E. Spieker, G. Noll, F.T. Ruschitzka, T.F. Luscher // J Am Coll Cardiol. — 2001. — V. 37, N 6. — P. 1493-1505.

219. Squire L.R. Fundamental Neuroscience / L.R. Squire, F.E. Bloom, N.C. Spitzer, J.L. Roberts, M.J. Zigmond, S.K. McConnell //Academic Pr. — 2002.—V. N—P. 1600.

220. Steward O. Protein synthesis at synaptic sites on dendrites / O. Steward, E.M. Schuman // Annu Rev Neurosci. — 2001. — V. 24, N — P. 299-325.

221. Steward O. Translating axon guidance cues / O. Steward // Cell. — 2002. —V. 110, N5. — P. 537-540.

222. Steward O. Compartmentalized synthesis and degradation of proteins in neurons / O. Steward, E.M. Schuman // Neuron. — 2003. — V. 40, N 2. — P. 347-359.

223. Stoll G. Nerve injury, axonal degeneration and neural regeneration: basic insights / G. Stoll, H.W. Muller // Brain Pathol. — 1999. — V. 9, N 2. — P. 313-325.

224. Stumpf W.E. Autoradiographic techniques for the localization of hormones and drugs at the cellular and subcellular level / W.E. Stumpf // Acta Endocrinol Suppl (Copenh). — 1971. —V. 153. —P. 205-222.

225. Svenningsen A.F. Estrogen and progesterone stimulate Schwann cell proliferation in a sex- and age-dependent manner / A.F. Svenningsen, M. Kanje // J Neurosci Res. — 1999. — V. 57, N 1. — P. 124-130.

226. Taleghany N. Differential expression of estrogen receptor alpha and beta in ratdorsal root ganglion neurons /N. Taleghany, S. Sarajari, L.L. DonCarlos, L. Gollapudi, M.M. Oblinger // J Neurosci Res. — 1999. — V. 57, N 5. — P. 603-615.

227. Tanzer L. Gonadal steroid regulation of hamster facial nerve regeneration: effects of dihydrotestosterone and estradiol / L. Tanzer, K. J. Jones // Exp Neurol. — 1997.—V. 146, N1. — P. 258-264.

228. Tobias G.S. Influence of nerve cell body and neurolemma cell on local axonal protein synthesis following neurotomy / G.S. Tobias, E. Koenig // Exp Neurol. — 1975.

229. V. 49, N 1 Pt 1. — P. 235-245.

230. Tower S. The reaction of muscle to denervation / S. Tower // Phsiol. Revs. — 1939.—V. 19. —P. 1-48.

231. Tsang K.L. Estrogen improves motor disability in parkinsonian postmenopausal women with motor fluctuations / K.L. Tsang, S.L. Ho, S.K. Lo // Neurology.—2000. — V. 54, N 12. — P. 2292-2298.

232. Uesugi M. Endogenous endothelin-1 initiates astrocytic growth after spinal cord injury / M. Uesugi, Y. Kasuya, H. Hama, M. Yamamoto, K. Hayashi, T. Masaki, K. Goto // Brain Res. — 1996. — V. 728, N 2. — P. 255-259.

233. Vaillant A.R. Signaling mechanisms underlying reversible, activity-dependent dendrite formation / A.R. Vaillant, P. Zanassi, G.S. Walsh, A. Aumont, A. Alonso, RD. Miller // Neuron. — 2002. — V. 34, N 6. — P. 985-998.

234. M. van den Buuse, K.M. Webber. Endothelin and dopamine release / M. van den Buuse, K.M. Webber // Prog Neurobiol. — 2000. — V. 60, N 4. — P. 385-405.

235. Vita G. Effects of steroid hormones on muscle reinnervation after nerve crush in rabbit / G. Vita, R. Dattola, P. Girlanda, G. Oteri, R Lo Presti, C. Messina // Exp Neurol. — 1983. — V. 80, N 2. — P. 279-287.

236. Wada K. Trophic effect of iron-bound transferrin on acetylcholine receptors in rat skeletal muscle in vivo / K. Wada, S. Ueno, T. Hazama, H. Yoshikawa, S. Ogasahara, M. Takahashi, S. Tarui //Neurosci Lett. — 1983. —V. 38, N 3. — P. 303-307.

237. Wagey R. Phosphatidylinositol 3-kinase activity in murine motoneuron disease:the progressive motor neuropathy mouse / R. Wagey, S. Lurot, D. Perrelet, S.L. Pelech, Y. Sagot, C. Krieger //Neuroscience. — 2001. — V. 103, N 1. — P. 257-266.

238. Wang L. Rapid movement of microtubules in axons / L. Wang, A. Brown // CurrBiol. —2002. —V. 12, N 17. — P. 1496-1501.

239. Watson C.S. Membrane-initiated steroid actions and the proteins that mediate them / C.S. Watson, B. Gametchu // Proc Soc Exp Biol Med. — 1999. —V. 220, N 1. — P. 9-19.

240. Weaker RJ. Autoradiographic localization of estrogen target cells in the spinal cord of the armadillo and baboon: a comparative study / RJ. Weaker, P.J. Sheridan // Histol Histopathol. — 1987. — V. 2, N 2. — P. 143-145.

241. Xu P. The Drosophila microRNAMir-14 suppresses cell death and is required for normal fat metabolism / P. Xu, S.Y. Vernooy, M. Guo, B.A. Hay // Curr Biol. — 2003. —V. 13, N9. — P. 790-795.

242. Yao M. A longitudinal, functional study of peripheral nerve recovery in themouse / M. Yao, M.M. Inserra, MJ. Duh, DJ. Terris /^Laryngoscope. — 1998. — V. 108,N8Ptl. — P. 1141-1145. '

243. Yu J.Y. RNA interference by expression of short-interfering RNAs and hairpin RNAs in mammalian cells / J.Y. Yu, S.L. DeRuiter, D.L. Turner // Proc Natl Acad Sci U S A. — 2002. — V. 99, N 9. — P. 6047-6052.

244. Zhang C.C. Activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway by estrogen or by 4—hydroxytamoxifen is coupled to estrogen receptor-induced apoptosis / C.C. Zhang, D.J. Shapiro // J Biol Chem. — 2000. — V. 275, N 1. — P. 479-486.

245. Zhang H.L. Neurotrophin regulation of beta-actin mRNA and protein localization within growth cones / H.L. Zhang, R.H. Singer, G.J. Bassell // J Cell Biol.1999. —V. 147, N 1. — P. 59-70.

246. Zhou Y. Estrogen rapidly induces the phosphorylation of the cAMP response element binding protein in rat brain / Y. Zhou, J.J. Watters, D.M. Dorsa // Endocrinology.1996. —V. 137, N5. —P. 2163-2166. j

247. Zhu Y.S. DNA binding of hypothalamic nuclear proteins on estrogen response element and preproenkephalin promoter: modification by estrogen / Y.S. Zhu, D. W. Pfaff // Neuroendocrinology. — 1995. — V. 62, N 5. — P. 454-466.

248. Zochodne D.W. Neurotrophins and other growth factors in the regenerative milieu of proximal nerve stump tips / D.W. Zochodne, C. Cheng // J Anat. — 2000.—V. 196 (Pt 2), N —P. 279-283.

249. Zochodne D.W. Peptide accumulations in proximal endbulbs of transected axons / D.W. Zochodne, C. Cheng, M. Miampamba, K. Hargreaves, K.A. Sharkey // Brain Res.2001. — V. 902, N 1. — P. 40-50.