Послеожоговая репарация кожи при воздействии компонентов пуповинной крови человека: экспериментальное исследование тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат биологических наук Ажикова, Альфия Кадыровна

• Ажикова, Альфия Кадыровна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ажикова, Альфия Кадыровна

I Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфофункциональные особенности строения кожи человека

1.1.1. Структура кожи в норме 13* |

1.1.2. Структура кожи при термических воздействиях 32 j

1.2 . Топографоанатомические особенности кожи человека 4 2 j

1.3. Регенерация кожи

1.4. Морфогенетические аспекты регенерации кожи

1.5. Методы лечения ожогов

1.6. Методы и особенности применения пуповинной крови 62(

ГЛАВА II МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Планирование и организация эксперимента

2.2. Подготовка пуповинной крови человека для лечения ожогов кожи

2.3. Методы исследования

ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Отработка методики применения пуповинной крови человека для лечения ожогов кожи

3.2. Морфологическая характеристика используемых методов лечения ожогов кожи 8f

3.3. Морфо-функциональная характеристика используемых методов лечения ожогов кожи 1 -1—

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Послеожоговая репарация кожи при воздействии компонентов пуповинной крови человека: экспериментальное исследование»

Формируя общий покров организма человека, кожа выполняет разнообразные функции. Она обеспечивает взаимодействие организма с внешней средой, образует связи практически со всеми системами органов - нервной, сердечно-сосудистой, эндокринной, пищеварительной, выделительной, иммунной защиты, и поэтому даже по внешнему виду кожи всегда можно сделать первые выводы о состоянии здоровья человека (Калантаевская К.А., 2000).

Ожоговые поражения кожи стали в современном мире одним из наиболее социально значимых и распространенных типов травматических повреждений у человека (Азолов В.В., Жегалов В.А., Дмитриев Г.И., 1997).

В современном мире резко повысились частота и тяжесть термических поражений, а также возросла летальность среди пораженных огнем, которая в России достигла 3,3 % (Герасимова Л.И. с соавт., 2003), особенно среди детей раннего возраста (Будкевич Л.И., 1998) .

В последние годы для улучшения результатов лечения ожоговых ран и снижения травматичности хирургического лечения, снятия остроты дефицита донорского материала, стали осуществлять трансплантацию клеток кожи и биоинженерных конструкций с иммобилизованными клетками дермы (Расулов М.Ф. с соавт.,2005).

В связи с развитием учения о стволовых клетках (Фриденштейн А.Я.,1991) появилась возможность их успешного применения в практической медицине для 4 ускоренного закрытия ожоговых повреждений кожи, в частности, использования для этого мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток - стволовых клеток костного мозга (Викторов И.В., 2 001) . Источниками стволовых клеток могут также служить зародышевый материал и пуповинная кровь (Chunmeng S. et al.,2004).

Однако применение фетальных фибробластов имеет морально-этические ограничения и юридические проблемы забора и использования материала (Расулов М.Ф.,2007). Высокая себестоимость процедуры наращивания клеточной массы кератиноцитов и фибробластов в культуре, трудности получения костного мозга способствовали поиску альтернативного источника стволовых клеток -пуповинной крови (Шумаков В.И, Онищенко Н.А., 2009).

Пуповинная кровь (ПК) представляет особый интерес ввиду ее доступности, относительной легкости получения и безопасности для потенциального донора (Белоконева О.С., 2002). Она содержит в своем составе биологически активные компоненты, активирующие репаративно-пролиферативные процессы: витамины, гормоны, ферменты, белки. Весьма важно, что через активацию репаративно-пролиферативных процессов можно добиться снижения выраженности воспалительной реакции не только непосредственно в месте приложения активирующего усилия (Саидгалин Г.З., Салистый П.В.,Панова О.В. и др. 2000), но и в отдаленных органах и тканях, что является результатом существования реципрокных отношений между этими процессами гомеостаза (Воздвиженский С. И. с соавт. , 1999).

В литературе мы не обнаружили публикации, обосновывающие клинико-биологическую целесообразность применения пуповинной крови для лечения ожоговых больных. Возникла задача экспериментального исследования этой проблемы.

Проводя анализ современных публикаций, мы обратили внимание на то, что в арсенале средств современной комбустиологии практически отсутствуют препараты на основе пуповинной крови или методы терапии клеточными элементами пуповинной крови, направленно восстанавливающие репаративные процессы в поврежденных тканях и органах.

Таким образом, учитывая вышеизложенное, целью нашего исследования явилось сравнительное экспериментальное выявление особенностей послеожоговой репарации кожи крыс в условиях воздействия биологически активных компонентов пуповинной крови человека и при стандартном лечении.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Разработать методику применения пуповинной крови человека, как нативной, так и криоконсервированной, для лечения ожогов кожи.

2. Провести оценку процессов репарации ожогов кожи крыс в норме, как местно, так и на уровне целостного организма.

3. Экспериментально изучить в сравнении процессы репарации ожогов кожи крыс при воздействии нативной пуповинной крови человека и при использовании препарата «10% линимент синтомицина»

4. Провести сравнительную оценку процессов репарации ожогов кожи экспериментальных животных при использовании нативной и криоконсервированной пуповинной крови человека.

5. Оценить влияние препаратов на количественные изменения периферической крови белых крыс, на биохимические показатели перекисного окисления липидов в печени крыс после термической травмы.

Научная новизна исследования заключается в том, что впервые изучено влияние пуповинной крови на регенераторные процессы в тканевых структурах кожи после ожоговой травмы при её аппликации на ожоговую поверхность.

Впервые установлена динамика изменений клеточного состава ожоговых ран при экспериментальной ожоговой травме в условиях воздействия пуповинной крови.

Изучены морфологические особенности заживления раневых дефектов кожного покрова после термической травмы при использовании пуповинной крови в сравнении с 10% линиментом синтомицина.

Исследованы качественные и количественные изменения клеток периферической крови экспериментальных животных (крыс) после термической травмы и её лечения биологически активными компонентами пуповинной крови человека.

Разработан способ лечения раневых дефектов кожного покрова после термической травмы за счет использования биологически активных компонентов пуповинной крови человека (заявка на изобретение «Биологический стимулятор для интенсификации поврежденной кожи» авторы Ажикова А.К., Лазько М.В., регистрационный номер 2008151998 от 2 6.12.2008.).

Научно-практическая значимость работы. Результаты настоящего исследования демонстрируют преимущество использования пуповинной крови как альтернативного способа лечения ожоговых повреждений кожи. Внедрение способа лечения раневых дефектов кожного покрова после термических ожогов за счет использования пуповинной крови человека позволит оптимизировать течение репаративных процессов в ране и снизить риск формирования рубцов.

На основании экспериментальной части диссертации был выигран открытый конкурс № 2008-Н-0 67 Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в рамках реализации Программы «СТАРТ-09»: Лот № 2. Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в области медицины, фармакологии, биотехнологии для медицины (Направление Н 2).

Подписан государственный контракт № 6550р/9141 от 21.01.2009 г. Тема НИОКР «Исследование репаративной возможности поврежденной кожи белых крыс в условиях воздействия биологически активных компонентов пуповинной крови человека». Результаты НИОКР зарегистрированы во Всероссийском Научно-техническом информационном центре (ВНТИЦ), работе присвоен регистрационный номер № 01200956788.

Внедрение результатов исследования

Разработанная методика применения пуповинной крови человека для целей комбустиологии, сравнительные комплексные данные о процессах заживления ожоговых дефектов кожи крыс в норме, а также при воздействии нативной и криоконсервированной пуповинной крови человека, не только в месте ожоговой раны, но и на уровне целостного организма, раскрывают перспективы поиска оптимальных методов лечения ожогов.

Разработанный открытый способ лечения ожогов, базирующийся на замене химического медикаментозного струпа биологическим, может активно применяться в медицинской практике. Преимущества способа заключаются в следующем. При воздействии пуповинной крови человека на обожженную поверхность отмечается отчетливый болеутоляющий эффект, образуется более тонкий струп, под ним быстро протекает эпителизация, рубцов почти не образуется.

Основные положения и выводы работы используются при обучении студентов, слушателей на кафедрах биотехнологии и биоэкологии, зооинженерии и морфологии животных Естественного института Астраханского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Разработанная методика применения пуповинной крови человека для целей комбустиологии отличается безопасностью, эффективностью и простотой выполнения.

2. Раневой процесс как местно, так и на уровне организма при лечении дефектов кожного покрова после термического воздействия имеет более благоприятное течение при использовании пуповинной крови человека в сравнении с традиционным лечением 10%-ным линиментом синтомицина.

3. Пуповинная кровь проявляет качества индуктора пролиферационной активности эпителиальных и содинительнотканных элементов, приводящий к значительному сокращению продолжительности всех стадий раневого процесса.

4. Пуповинная кровь допускает криоконсервирование, приводящее, однако, к снижению репаративных свойств.

Апробация результатов исследования

Материалы диссертационного исследования на IV международной конференции "Фундаментальные

10 исследования" (Доминиканская республика, 2009), на IV научной международной конференции «Проблемы международной интеграции национальных образовательных стандартов», (Париж-Лондон, 2 009) .

Научно-исследовательская работа одержала победу в открытом конкурсе № 2008-Н-067 Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в рамках реализации Программы «СТАРТ-09»: Лот №2. Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в области медицины, фармакологии, биотехнологии для медицины (Направление Н2) (Пятигорск, 2009) .

Положения диссертации были доложены на заседаниях кафедр биотехнологии и биозкологии, зооинженерии и морфологии животных Естественного института

Астраханского государственного университета (Астрахань, апрель 2010).

Личный вклад автора в работы, выполненные в соавторстве, результаты которых включены в диссертацию, включает теоретическое обоснование проблем, выбор общего направления исследований, непосредственное участие в постановке экспериментов и выполнении исследований.

Публикации по теме диссертации

По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, в т.ч. 1 статья в реферируемом журнале ВАК РФ, 1 статья опубликована в зарубежном издании.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Ажикова, Альфия Кадыровна

выводы

1.Разработана методика использования пуповинной крови человека, как нативной, так и криоконсервированной, для лечения ожогов кожи, отличающаяся безопасностью, эффективностью и простотой выполнения.

2.Местный ожог кожи крысы вызывает комплекс выраженных морфологических и функциональных реакций, как локально, так и на уровне целостного организма, которые значительно нарушают его клеточный и гуморальный гомеостаз.

3.Сравнительная оценка процессов репарации ожогов кожи крыс при различных видах лечения выявила значительные преимущества нативной пуповинной крови человека, которые проявляются и непосредственно в месте ожога и на уровне целостного организма.

4.Криоконсервация пуповинной крови в выбранных условиях снижает, но не устраняет ее противоожоговую активность.

5.Сравнительный анализ биохимических показателей периферической крови и печени у крыс контрольной и опытных групп показал, что воздействие пуповинной кровью способствует быстрой нормализации гемограммы в целом, нормализует перекисное окисление липидов в печени, активизирует иммунный ответ, что, несомненно, можно отнести к хорошим прогностическим признакам при лечении кожных ожоговых ран.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ожог, а если говорить более точно, ожоговая болезнь, представляет собой не только, да и не столько местный патологический процесс, а страдание, несомненно, захватывающее организм в целом.

Поэтому наше исследование было направлено и на изучение локальных изменений структуры кожи после воздействия термического фактора, и на исследование в этом случае некоторых гомеостатических механизмов.

Данная работа преследовала также цель дать сравнительную оценку эффективности новых методов лечения ожогов кожи нативной, а также криоконсервированной пуповинной кровью человека по сравнению с классическим методом лечения таких травм 10% линиментом синтомицина.

Мы исходили из представления о главенствующей роли в репаративном послеожоговом процессе биологически активных клеточных элементов пуповинной крови по сравнению с неактивными. Было выявлено, что на количественное соотношение биологически активных (живых) и неактивных (мертвых) клеток пуповинной крови человека влияют время хранения и объем собранной крови.

В частности, определено, что после 10 часов хранения при -4С° количество жизнеспособных клеточных элементов в пуповинной крови человека резко и статистически достоверно снижается. Поэтому мы для лечебных целей и для криоконсервирования использовали только те образцы крови, которые хранились при данных условиях не более 8 часов.

Одним из побочных, но практически важных результатов нашей работы является установление того факта, что объем получаемой пуповинной крови находится в прямопропорциональной зависимости от массы новорожденного.

Также весьма интересным является выявление феномена, впрочем, требующего дальнейших исследований, свидетельствующего о прямопропорциональной зависимости количества биологически активных (живых) клеточных элементов нативной пуповинной крови человека от её получаемого объема.

Продемонстрировано наличие врожденной стерильности нативной пуповинной крови человека, что весьма практически важно, т.к. избавляет от необходимости проводить её стерилизацию, которая неизбежно ухудшила бы репаративные свойства. Наблюдаемую в незначительном числе случаев микробную обсемененность нативной пуповинной крови вполне можно объяснить недостатками техники её забора.

Включение в задачи нашего исследования изучения метода лечения ожогов кожи криоконсервированной пуповинной кровью человека объясняется чрезвычайной практической значимостью его в условиях возможного дефицита нативной пуповинной крови. Было установлено, что, хотя на 7 сутки криоконсервации содержание жизнеспособных клеточных элементов в крови уменьшается почти в 3 раза, терапевтический эффект остается на приемлемом уровне и превосходит классический метод.

Гистологическое исследование срезов кожи межлопаточной области спины в месте ожоговой травмы подтверждает правильность суждений в отношении большего

107 терапевтического эффекта со стороны пуповинной крови по сравнению с лечением классическим препаратом сравнения. В частности, толщина росткового слоя эпидермиса в зоне эпителизации раневой поверхности достоверно выше при лечении нативной и криоконсервированной пуповинной кровью.

Ускорение темпов заживления ожоговых ран под влиянием терапии пуповинной кровью достигается за счет ослабления выраженности деструктивно-воспалительной фазы раневого процесса и активизации пролиферативно-репаративной фазы.

Заживление ожоговых ран в данном случае сопровождается более быстрым темпом разрастания сосудистой сети и формирования грануляционной ткани, а также активизацией краевой эпителизации, что происходит на фоне устранения иммунной дисрегуляции в ране.

Тяжелая термическая травма сопровождается развитием интоксикации и кровь, в первую очередь, подвергается действию токсических веществ, возникших в очаге поражения.

Исследование таких основополагающих гематологических показателей, как содержание эритроцитов, гемоглобина и перекисной резистентности эритроцитов свидетельствует, во-первых, о значительном поражении системы крови под воздействием местного действия термического фактора и, во-вторых, о наибольшем нормализующем влиянии на данные параметры гомеостаза противоожогового применения нативной пуповинной крови человека. Использование криоконсервированной крови в этом плане также эффективно и превосходит по действенности классический метод.

В патогенезе ожоговой токсемии исключительно важным звеном является нарушение функций печени, поскольку печень является главным детоксицирующим органом. Известно, что сразу после термической травмы печень подвергается влиянию токсических веществ на фоне резко сниженной ее антитоксической функции.

Обращает на себя внимание влияние местного ожога кожи, а затем его терапии или ее отсутствия на окислительно-восстановительный баланс организма, который мы оценивали по содержанию ацилгидроперекисей в плазме крови экспериментальных животных и концентрации малонового диальдегида в их печени.

Ожог, даже местный, смещает окислительно-восстановительный баланс организма таким образом, что в крови и печени повышается содержание гидроперекисей и интенсифицируются процессы перекисного окисления липидов.

Адекватная эффективная терапия ожогов, а в нашем случае это применение пуповинной крови человека, способствует нормализации этих механизмов и нейтрализует нарушения метаболизма.

Подводя итог обсуждению результатов, можно отметить явное преимущество нативной пуповинной крови как стимулятора репарации термически поврежденной кожи, что позволяет ее считать эффективным альтернативным методом лечения ожоговых травм.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ажикова, Альфия Кадыровна, 2010 год

1. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия Текст. Руководство / Г. Г. Автандилов - М.: Медицина, 1990. -384 С. - Библиогр.: с. 150-382.

2. Автандилов, Г. Г. Перспективы применения вероятностных принципов изучения проблем нормальной и патологической морфологии Текст. /Г. Г. Автандилов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии.- 1977.- № 5.- С.5-13. -Библиогр.: с. 5-10.

3. Азолов, В.В. Термические поражения и их последствия: прошлое, настоящее и будущее Текст. / В. В. Азолов,

4. B.А.Жегалов В.А., Г.И.Дмитриев // Тез. докл.VI съезда травмотологов и ортопедов России, Н-Новгород, 1997.1. C. 53 Библиогр.: с. 53.

5. Андреева, Л.Ю. Стволовые гемопоэтические клетки в крови онкологических больных: экспрессия CD34 и колониеоб-разование Текст. / Л.Ю. Андреева, Н.Н. Тупицын, Г.Ш. Овумян и др.// Гематология и трансфузиология -1999.-№ 44 -С.З-б. Библиогр.: с. 4-5.

6. Барышев, Б.А. Влияние методов замораживания и размораживания плазмы крови на активность прокоагулянтов и антитромбина-III Текст. / Б.А. Барышев, Е.А. Селиванов, В.И. Колябинская и др.// Вестник хир. 2002. -№ 6.- С.55-56. - Библиогр.: с. 55.

7. Белоконева, О.С. Праматерь всех клеток (эмбриональная стволовая клетка) Текст. / О.С. Белоконева // Биология в школе. 2002.- №8. - С.18-21. - Библиогр.: с. 18-19.

8. Берлин, JI.Б. Морфология кожи после ожогов и свободной пересадки Текст. / Л.Б. Берлин // Л.: Медицина. -1986. 222 с. - Библиогр.: с. 100-120.

9. Блуда, В. П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза Текст. / В. П. Блуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг// Томск. 1980. - 136 с. - Библиогр.: с. 90-114 .

10. Бобова, Л.П, Кузнецов С.Л., Сапрыкин В. П. Гистофизио-логия крови и органов кроветворения и иммуногенеза Текст. (учебное пособие)/ Л. П. Бобова, С.Л. Кузнецов, В.П. Сапрыкин //- М.: Изд. «Новая волна» 2003. -156 с. - Библиогр.: с. 150-156.

11. Ю.Будкевич, Л.И. Современные методы хирургического лечения детей с тяжелой термической травмой Текст. : авто-реф. дис. .док.мед.наук. / И.Л. Будкевич // М. - 1998. - 39 с. - Библиогр.: с. 150-156.

12. Ведерникова, О.Л. Результаты лечения больных с тяжелой термической травмой Текст. / О. Л. Ведерникова, В. А.

13. Верхнев, Е.Н. Аганина// Тез. докл. VII Всерос. научно-практ. конф. по проблеме термических поражений. Челябинск, - 1999 - С. 12-13. - Библиогр.: с. 12.

14. Викторов, И. В. Стволовые клетки мозга млекопитающих: Биология стволовых клеток in vitro и in vivo Текст. / И.В.Викторов // Известия Ак.Наук. Серия Биологическая.-2001-№б -С.646-655. Библиогр.: с. 646-650.

15. Виноградова, Е.В. Региональные особенности архитектоники волокнистого каркаса дермы кожи человека Текст. / Е.В. Виноградова, И.Н. Михайлов // Архив анат. 1978. - т. LXXV, №. 7.- С.91-97. - Библиогр.: с. 92-95.

16. Вихриев, Б. С. Ожоги Текст./ Б.С.Вихриев, В.М. Бурмистров// Руководство для врачей, 2-е изд., перераб. и доп. JI.: Медицина -1986. - 272 с. - Библиогр.: с. 63-272 .

17. Владимиров, Ю. А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах Текст. / Ю. А. Владимиров, А. И. Арчаков. М.: Наука, 1972. - 252 с. - Библиогр.: с. 120-252.

18. Владимирская, Е.Б. Биологические основы и перспективы терапии стволовыми клетками Текст. / Е.Б. Владимирская, С. А. Майорова, С. А. Румянцев, А. Г. Румянцев. М.: ИД МЕДПРАКТИКА - М. - 2005. - 393 с. -Библиогр.: с. 12-35.

19. Герасимова, JI. И. Термические и радиационные ожоги Текст. /Л.И. Герасимова, В. Н.Жижин, Е. В. Кижаев и др.//- М. : Медицина, 1996. 244 с. - Библиогр.: с. 150-164.

20. Глукман, Е. Заготовка и транспортировка пуповинной крови в Европе Текст. / В. Роха, К. Хастанг // Вест.службы крови России.- 1998.- № 4- С. 31- 37. -Библиогр.: с. 31-33.

21. Графова, Г. Я. Цитоархитектоника эпидермиса и эпидермально-пролиферативные единицы (ЭПЕ) Текст. / Г.Я. Графова // Арх. анат. 1982. - № 82(4) - С. 73-85. - Библиогр.: с. 73-75.

22. Графова, Г.Я. Гистоавторадиографическое исследование эпителия кожи в зонах огнестрельной раны Текст. / Г.Я. Графова // Гистогенез и регенерация тканей. СПб., 1995 - С. 7-8. - Библиогр.: с. 7.

23. Гришкевич, В. М. Руководство по реабилитации обожженных Текст. / В.М.Гришкевич, В.Ю. Мороз// М. : Медицина 1996 - С. 5-16. ~ Библиогр.: с. 72-77.

24. Данилов, Р.К. Регенерация кожи Текст. / Р.К. Данилов, Г.Я. Графова// Руководство по гистологии. Спб. : СпецЛит, 2001; 2: С. 45-52. Библиогр.: с. 45-48.

25. Дубинская, В. А. Кожа человека: влагообмен и старение Текст. / В.А. Дубинская, Е.В. Виноградова // Клинини-ческая геронтология.- 2000.- Т. 6, № 7-8. С.22-26. -Библиогр.: с. 25-26.

26. Иванова, Н.Т. Атлас клеток крови (сравнительная морфология и классификация форменных элементов крови рыб) / Н.Т. Иванова //М. Легкая и пищевая промышленность. -1982.- 184 с.

27. Калантаевскаял К.А. Морфология и физиология кожи человека Текст. / К.А. Калантаевская // Вопр. теор. и клин, медицины. Киев - Здоров'я - 2000- 2 67 с. -Библиогр.: с. 152-159.

28. Кассирский, Г. А. Клиническая гематология Текст. / Г.А.Кассирский, Г. А. Алексеев// М. 1970. - с. 156.

29. Катинас, Г. С. К методике анализа количественных показателей в цитологии Текст. /Г. С. Катинас, Ю. 3. Полонский // Цитология.- 1969.- №.3.- С. 399-403.

30. Катинас, Г. С. О нахождении стандартной ошибки среднего с учетом изменчивости признака в пределах организма Текст. / Г. С. Катинас, В. И. Булгак, Е. Н. Никифорова, К. М. Светикова // Арх. анат.гистол.и эмбриол.- 1969.- №.9. С. 97-104.

31. Козак, М.Ф. Биометрия Текст. / М.Ф.Козак // Учеб.пособие Астрахань: Изд-во Астраханского педагог.ин-та.-14 илл., 22 табл.- 1995,- 164 с. - Библиогр.: с. 12-22.

32. Кочетов, Т. А. Практическое руководство по энзимологии /Т. А. Кочетов. М. : Высшая школа, 1980. - 60 с.

33. Лакин, Г.Ф. Биометрия Текст. / Г.Ф. Лакин // Учеб.пособие для биолог.спец.вузов.- 3-е изд., перераб. и доп.- М.: Высшая школа, 1980.- 293 е., илл.

34. Малахов, С.Ф. Новые подходы к лечению тяжелых ожогов: трансплантация выращенных в культуре кератиноцитов Текст. / С.Ф. Малахов, Б.А.Парамонов, А.В.Емельянов и др.// Военно-медицинский журнал -1997. Т 318. -№ 9. -С.16-19. - Библиогр.: с. 19.

35. Матчин, Е. Н. Клинико-морфологическая оценка результатов комбинированной аутодермопластики с трансплантацией культивированных фибробластов у обожженных Текст. /

36. Е.Н.Матчин, А. А. Алексеев // Эл. версия журн. Комбу-стиология, 2000.

37. Машковский, М.А. Лекарственные средства Текст. / М.А. Машковский //Пособие для врачей. М.: Медицина 1993. -Т. 2. - С. 471- 472. - Библиогр.: с.472.

38. Ноздрачев, А.Д. Общий курс физиологии человека и животных Текст./А. Д. Ноздрачев, Ю.И. Баженов, И.А.Баранникова и др.// В 2 кн. Кн.2. Физиология висцеральных систем: Учеб. Для биол. и медиц. спец. вузов; Под ред.

39. A.Д.Ноздрачева. М.: Высш.Шк., 1991.- 528 е.: илл.

40. Ноздрин, В.И., Гистофармакологические исследования кожи (наш опыт) Текст. / В.И. Ноздрин, Т.А. Белоусова,

41. B.И.Альбанова, О.И. Лаврик // Москва: Изд. ЗАО «Ретино-иды», 2006 г. -376 е., 65 таблиц, 31 рис. Библиогр.: с. 8-89, 179-185.

42. Парамонов, Б. А. Ожоги Текст. / Б.А.Парамонов, О. Я.Порембский, В. Г. Яблонский // Руководство для врачей. СПб. - 2000. - 480 с. - Библиогр.: с.26-85.

43. Приказ Президента РФ «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» Текст. / Приказ РФ от 22 апреля 1985 г. № 535.

44. Расулов, М. Ф. Трансплантация мезенхимальных стромаль-ных клеток костного мозга для лечения термических ожогов кожи Текст. / М.Ф.Расулов// Автореф. дис. . докт. мед. наук. М. - 2007. - 4 6 с. - Библиогр.: с. 26-44.

45. Ронин, B.C. Руководство к практическим занятиям по методам клинических клинических лабораторных исследований Текст. / B.C. Ронин, Г.М. Старобинед // Учеб. пособие, 4-е изд., перераб. и доп. М. : Медицина- 1989. -320с.

46. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально биологических клиник (вивариев).- М.: МЗ СССР, 1973.-24 с.

47. Серов, В. В. Соединительная ткань: Функциональная морфология и общая патология) / В.В. Серов, А. Б.Шехтер // М. 1981. - С. 8-34.

48. Сологуб, В. К. Клиническое применение консервированных биопокрытий для ран и ожогов Текст. / В.К. Сологуб, Д. А. Донецкий, В.Я. Борисов, Г.Б. Яковлев, М.Г. Лагвилава// Бюлл. экспер. биол. и мед. 1990. - № 4.-С. 8.

49. Соболева, Э.Л. Стволовые клетки костного мозга и атеросклероз Текст. / Э.Л.Соболева, З.А.Габбасов // Природа.-2005.- №10 -с.36-39.

50. Сперанский, B.C. Органы чувств. Общий покров тела Текст. / Лекции по анатомии Саратов: Изд. Саратовского мед.ин-та, 1996. - 38 с.

51. Стальная, И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Т. Гаришвили // Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. - С.66 - 68.

52. Туманов, В. П. Способ получения трансплантата из культивированных фибробластов человека для лечения обожженных Текст. / В.П.Туманов// Межд.симп."Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи". Тула - 1996. - с.11.

53. Туманов, В. П. Использование культивированных фибробластов при лечении ожоговых ран/ В. П.Туманов, Е. В.Глущенко, С. С.Морозов, Д. С. Саркисов // Бюлл. зкспер. биол. и мед. 1990. - № 4. -С. 400-402. -Библиогр.: с.4 01-402.

54. Улумбеков, Э.Г. Кожа и ее производные Текст. / Э.Г.У-лумбеков, Ю.А. Челышев // В кн.: Гистология. М. : ГЭО-СТАР-МЕД, 2001. С.483-502.

55. Фриденштейн, А.Я. Стволовые остеогенные клетки костного мозга Текст. / А.Я.Фриденштейн // Онтогенез 1991. -т.22. - № 2 - С.189-197. - Библиогр.: с.189-192.

56. Хабриев, Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ Текст. / Р.У.Хабриев // Под общей редакцией чл.-корр. РАМН проф. Р.У.Хабриева М.: Изд-во ЗАО «Шико» -2005 - 827 с.

57. Хрущев, Н.Г. Тканевые системы со стволовыми клетками Текст. / Н.Г.Хрущев // Онтогенез 1991- т.22, № 2, С. 118-123 .

58. Чертков, И.Л. Нормальное кроветворение: стволовая кроветворная клетка Текст. / И.Л. Чертков //

59. Гематология и трансфузиология.- 1993.- т. 38, № 4, С. 3-4. Библиогр.: с.4.

60. Чертков И.Л. Как обеспечивается поддержание кроветворной системы Текст. / И.Л. Чертков, Н.И. Дризе // Гематология и трансфузиология. 1998. - т. 43. - № 4. -С.3-8. - Библиогр.: с.4-7.

61. Шиффман, Ф.Д. Патофизиология кожи Текст. /Ф.Д. Шифф-ман // СПб.: Невский Диалект, 2000. 448 с. Библиогр.: с.150-158.

62. Шумаков, В. И. Биологические резервы клеток костного мозга и коррекция органных дисфункций Текст. /В. И. Шумаков, Н.А. Онищенко; под ред. Академика Шумакова В.И., профессора Онищенко Н.А // Москва: Лавр, 2009. - 308 с. - Библиогр.: с. 110-128.

63. Ai, G. The experimental study of bone marrow mesenchymal stem cells on the repair of skin wound combined with local radiation injury/ G.Ai, , Y.Su, G. Yan et al. // Zhonghua Yi Xue Za ZhL, 2002. V. 82, № 23. -P. 1632-1636.

64. Alitalo, K. Extracellular matrix proteins of human epidermal keratinocytes and feeder T3 cells/ K.Alitalo, , E. Kuismaren, R.Mullula et al. // J. Cell Biol., 1982. -V. 94. P. 409-505.

65. Badiavas, E. V. The potential of bone marrow cells to orchestrate homeostasis and healing in skin/ E. V. Ba-diavas // Blood Cells Mol. Dis, 2004. V. 32, JMb 1. -P. 21-23.

66. Badiavas, E. V., Participation of bone marrow derived cells in cutaneous wound healing/ E. V. Badiavas, M.Abedi, J.Butmarc et al. // J. Cell. Physiol., 2003. -V. 196, № 2. P. 245-250.

67. Brazelton, T.R. From Marrow to Brain: Expression of Neuronal Phenotypes in Adult Mice from Adult Bone Marrow-Derived Cells/ T.R. Brazelton, Rossi F.M. et al.//. 2000, Science, № 290: P. 1775-1779.

68. Chunmeng, S. Effects of dermal multipotent cell transplantation on skin wound healing / S. Chunmeng, C. Tianmin, S. Yongping et al. // J. Surg. Res., 2004. -V. 121, № 1. -P. 13-19.

69. Corradini, P., Reduced-intensity conditioning followed by allografting of gemalopoietic cells can produce clinical and molecular remissions in patients with poor-risk hematologic malignancies / P. Corradini,

70. С.Tarella, A. Olivieri et al.//Blood, 99 (1):2002 -P. 75-82.

71. Dantzer, D. Effect of radiation and cell implantation on wound healing in a rat model/ D. Dantzer, P.Ferguson, R. P. Hill et al. // J. Surg. Oncol., 2003. V. 83, № 3. -P. 185-190.

72. Deng, W., Engrafted bone marrow-derived flk- mesenchymal stem cells regenerate skin tissue/ W. Deng, Q.Han, L.Liao et al. // Tissue Eng., 2005. V. 11, № 1-2. -P. 110-119.

73. Detmar, M. L. Hypoxia regulates the expression of vascular permeability factor/ vascular endothelial growth factor (VPF/VEGF) and its receptors in human skin /М. L. Detmar F.Brown, B.Berse // J. Invest. DermatoL, 1997. -V. 108. P. 263-268.

74. Dorling, A. Prospects for xeno-grafting / A.Dorling, R. I.Lechler // Current Opinion in Immunol., 1994, V. 6, № 5. - P. 765-769.

75. Dormady, S. P. Immortalized multipotential mesenchymal cells and the hematopoietic microenvironment/ S. P. Dormady, O.Bashayan, R.Dougherty et al. // J. Hema-tother. Stem. Cell. Res., 2001. V. 10, № 1. - P. 125-140.

76. Egeland, T. Stem cell transplantation — more than bone marrow transplantation /Т. Egeland, E.Thorny// Nord Med., № 110 ( 12 ): 1995- P. 307-309.

77. Eridani, S. Cytokine effect on ex vivo expansion of haemopoietic stem cells from different human sources/ S.Eridani, U.Mazza, P.Massaro, M.L. Targia, A.T.Maio-lo, A.Mosca// Biotherapy. 11(4):1998 P. 291-296.

78. Good, R.A. Bone marrow transplamtation for immunodeficiencies and autoimmunities/ R.A. Good, T.Verjee // Biol. Blood Marrow Transplant., 7(3): 2001.- P. 123-135.

79. Gyger, M. Immunology of allogenesic peripheral blood mononuclear cells mobilized with granulocyte-colony stimulating factor/ M. Gyger, R.K. Stuart, С.Perreault// Bone Marrow Transplant.-2000.-26.-1-16.

80. Hansbrough, J.F. Burn wound closure with CAE & fibroblasts attached on to a collagen-glycosaminoglycan substrate / J.F. Hansbrough, S.T. Boyce et al.// JAMA 1989. Vol.262 N15 P.2125-2130.

81. Hardi, M.H. The secret life of the hair follicle/ M.H. Hardi //Trends Genet.,1992. Vol.8. -P.55-61.

82. Heuberger, A. Buchi Irreversible Katarakt als mogliche Nebenwirkung von Isotretinoin 1/ A. Heuberger, E.R.

83. Hardi Kim. Monatsbl. Augenheilkd. 1994. — Bd. 204, No.5. - P. 465 - 467.

84. Hilliges, M. Ultrastructural evidence for nerve fibers within all vital layers of the human epidermis/ M. Hilliges, L.X.Wang, O.Johansson // J. Invest. Dermatol. 1995. - Vol. 104, No.1. - P. 134- 137.

85. Hudson, D.L., CD44 is the major peanut lectin—binding glycoprotein of human epidermal keratinocytes and plays a role in intercellular adhesion / D.L. Hudson, J.Sle-man, F.M. Watt // J. Cell Scien. 1995. - Vol. 108, No.5. - p. 1959 - 1970.

86. Hunter, L. The proteins of living psoriatic epidermis/ L. Hunter, D. Skerrow // Biochem. Biophys. Acta. — 2001. Vol. No 714. P. 164- 169.

87. Iyengar, B. The hair follicle: a specialised UV receptor in the human skin?/ B. Iyengar//Biol. Signals Recept. 1998. - Vol. 7, No.3. - P. 188 - 194.

88. Jensen, B.K., The negligible systemic availability of retinoids with multiple and excessive topical application of isotretinoinO,05% gel (Isotrex) in patients with acne vulgaris / B.K. Jensen,L.A.Megann,

89. V.Kachevsky, T.J. Franz // J.Amer. Acad. Dermatol, — 1991. Vol. 24, No.3. - P. 425 -428.

90. Jullien, D. Mechanics and regulation of keratinocyte migration/ D. Jullien, Y.Sarret, C.Stamm et al. Med. Scien. 1993. -Vol.9, No.4. -P.403-411.

91. Jordan, C. The leukemia stem cells/ C. Jordan //-Hematology, 2004.- P.80-83.

92. Karamer, J. Embryonic stem cells-derived chondrogenet-ic differentiation in vitro activation by BMP-2 and ВМР-4/ J. Karamer, C.Hegert, K.Guan, A.Wobus, P.К Muller, J.Rohwedel//- Mech. Dev/-92.-2000- 193 p.

93. Kennedy, W.R. The innervation of human epidermis/ W.R. Kennedy, L. Wendelscha, G.J'ercrabb // J. Neurol. Scien. 1993. - Vol.115, No.2.-P.184- 190.

94. Юб.Корап, R. The use of retinoic acid to probe the relation between hyperproliferation-associated keratins and cell proliferation in normal and malignant epidermal cells/ R. Kopan, F.Fuchs // J. Cell Biol. 1989. -Vol. 109, No.1. - P. 295 -307.

95. Korge, B. Effect of retinoids on hyperproliferation-associated keratins Кб and K16 in cultured human ker-atinocytes: A quantitative analysis/ B. Korge, R.S-tadler, D.Mischke // J.Cell Physiol 2000, V. 120, N1, P. 70-106.

96. Majumdar, M.K. Isolation, characterization, and chon-drogenic potential of human bone marrow-derived multi-potential stromal cells/ M.K. Majumdar, V.Banks, D.P.Peluso, E.A.Morris// J. Cell Physiol 2000, V185, N1, P. 98-106.

97. Manitz, R. On the mathematical modeling of dermal and transdermal drug delivery/ R. Manitz, W.Lucht, K. Strehmel// J. Pharm. Sci. 1998. - Vol. 87, No. 7 . -P. 873- 879.

98. Masunaga, T. Desmoikin /AHNAK protein localizes to the non-desmosomal keratinocyte cell surface of human epidermis/ T. Masunaga, H.Shimizu, A.Ishiko et al.// J. Tnvest. Dermatol. 1995. - Vol. 104, No. 6. - P. 941 -945.

99. Megovern, U.B. Intracellular calcium as a second messenger following growth stimulation of human ker-atinocytes/ U.B. Megovern, K.T.Jones, G.R.Sharpe// Brit. J. Dermatol. 1995. - Vol.132, No. 6. - P. 892 -896.

100. Merritt, A.J. Suprabasal desmoglein 3 expression in the epidermis of transgenic mice results in hyperpro-liferation and abnormal differentiation/ A.J. Merritt, M.Y.Benika, W.Zhai et al.//J. Mol. Cell Biol. 2002. -Vol. 22, No.16. - P. 5846 - 5858.

101. Moll, I. Human Merkel cells — aspects of cell biology, distribution and functions/ I. Moll, M.Roessler, J.M.Brandner et al. // Eur. J. Cell Biol. 2005. -Vol. 84, No.2-3.- P. 259-271.

102. Moll, R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and culturedcells/ R. Moll, W.F. Werner, D.L. Schiller // Cell -1982. -Vol. 31, No.l.-P. 11-24.

103. Montagna, W. The structure and function of skin. Second edition/ W. Montagna // New-York-London: Academ. press, 2002.-454 p.

104. Morrison, S.J. Stem cell potential : can anything make aniting?/ S.J. Morrison // Curr.Biol/-ll-r.7.2001, .-P. 11-15.

105. Narisawa, Y. Apoptotic bulge of the terminal hair pocket-like structures of the follicles of the human scalp/ Y. Narisawa, K.Hashimoto, H.Kohda // J. Dermatol. Sci. 1997. -Vol. 14, No.1. - P.45-53.

106. Olszewski, W.L. Human keratinocyte stem cells survive for months in sodium chloride and can be successfully transplanted/ W.L. Olszewski, M.Moscicka, D.Zolich, Z.-Machowski// Transplant. Proc. -2005. Vol. 37, No. 1. - P. 525 - 526.

107. Panzenbuck, В. Giowth and differentiation of human stem cell factor/erythropoietindependent erythroid progenitor cells in vitro/ B. Panzenbuck, P.Bartunek, M.Y.Mapara, M.Zenke// Blood, 92 (10):1998.- P. 3658-3668.

108. Parkinson, E.K. Hemopoietic stem cell ingibitor (SCI/ MIP- 1-alpha) also inhibites clonogenic epidermal ker-atinocyte proliferation / E.K. Parkinson,G.J. Graham, P.Daubersies et al.// J. Invest. Dermat. — 1993. — Vol. 101, No.2. P. 113 -117.

109. Paus, R. Control of the hair cycle and hair diseases as cycling disorders/ R. Paus// Current opinion in Dermatol. 1996. - No.3. - P. 248-258.

110. Personelle, J. Injection of all-trans retinoic acid for treatment of thin wrindes/ J. Personelle, S.De-CampOS, R.Ruiz de 0. et al.// Aestetic Plast. Surg. — 1997. Vol. 21, No.3. - P. 196- 204.

111. Picardo, M., Characterization of cultured nail matrix cells/ M. Picardo, A.Tosti, C.Marchese et al.// J. Am. Acad. Dermatol. 1994. - Vol. 30. - No.3. - P. 434 -440.

112. Pittenger, M.F. Multilineage Potential of Adult Human Mesenchymal Stem Cells/ M.F. Pittenger, A.M.Mackay, S.С.Beck et. al.// Science , 1999, V.284, 2 april, P. 143-147.

113. Proskop, D.J. One strategy for cells and gene therapy: harnesing the power of adult stem cells to repair tissues/ D.J. Proskop, C.A.Gregory, J.L.Spees //.- Proc.-Nati Acad. Sci. USA-2003.-1917 P.

114. Rocha, V. Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia/ V. Rocha, J.Cornish, E.L.Sievers,

115. A. Filipovich, R.Locatelli, C.Peters, M.Remberger et al. //. Blood. 97(10): 2001.- P. 2962-2971.

116. Rowley, S.D. Experiences of donors enrolled in a randomized study of allogenetic bone marrow or peripheral blood stem cell transplantation/ S.D. Rowley, G.Donaldson, K.Lilleby, W.I.Bensinger, F.R. Appelbaum // Blood, 97 (9): 2001- P. 2541-2548.

117. Seshi, B. Human Bone Marrow Stromal Cell: Coexpres-sion of Markers Specific for Multiple Mesenchymal Cell Lineages/ B. Seshi, S.Kumar, D.Sellers//Blood Cells, Molecules and Diseases , 2000, V.26, N.3, June, P. 234-246.

118. Smikodoub, A. Treatment of patients suffering from autoimmune intestinal diseeases with the use of fetal cell suspensions/ A. Smikodoub, V. Bushnera// Cell Transplantation, 8(2): 1999 P. 122-127.

119. Smikodoub, A. Treatment of patients with diabetes mel-litus complicated with diabetic glomerulosclerosis, chronic renal insufficiency by fetal stem cells/ A. Smikodoub, A.Novytskaja // Minimally Invasive Therapy-5 (1): 1997 P. 39-46.

120. Thaler, M. Comparafive studies of keratins isolated from psoriasis and atopic dermatitis/ M. Thaler, K.-Fukuyama, W.L.Epstein et al. // J. Invest. Dermatol. — 1980. -Vol. 75. P.158.

121. Teraki, Y. Apoptosis and the skin/ Y. Teraki, T.Shio-hara // Eur.J. Dermatol. 1999. - Vol. 9. - P. 413 -425.

122. Weber, J. M. Nosocomial infections in pediatric patients with burns/ J. M. Weber, R. L. Sheridan, M. S.

123. Pasternack et al. // Am. J. Infect. Control., 1997. № 25. - P. 195-201.

124. Werner, S., Large induction of keratinocyte growth factor expression in the dermis during wound healing/ S. Werner, K. G.Peters, M. T. Longaker et al.// Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1992. V. 89. P. 6896-6900.

125. Wilkinson, R. A. Effect of thermal injury with pseudo-moaas aeruginosa infection on pulmonary and systemic bacterial clearance/ R. A. Wilkinson, J. A. Fishman // J. Trauma, 1999. V. 47, № 5. - P. 912-917.

126. Wood, F. M. The use of cultured epithelial autograft in pediatric burn management/ F. M. Wood, M. L. Stoner// Abstracts book of first Interntional Congress Current Concepts in Pediatric Burn Care, 2006. P. 88-89.

127. Wickenhauser, C. Hematopoietic stem cells of the human. Function and morphology/ C. Wickenhauser, J.Thiele, X.Kummel, R.Fischer Pathology, 1995. № 16: P. 1-10.

128. Yohn, J.J. Cultured human keratinocytes synthesize and secrete endothelin/ J.J. Yohn, J.G.Morelli, S.J. Walchak et al.// J. Invest. Dermatol. -1993.-Vol. 100, No.1. -P.23-2 6.

129. Zelickson, A.S. Ultrastructural changes in open comedones following treatment of cystic acne with isotretinoin/ A.S. Zelickson, J.S.Strauss, J. Mottaz// Am. J. Dermatopathol. 1985. Vol. 7 (Jun). P. 241-244.

130. Zhu, G. R. Human bone marrow mesenchymal stem cells express multiple hematopoietic growth factors/ G. R. Zhu, X. У.Zhou, H.Lu et al. // Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi., 2003. V. 11, № 2. P. 115-119.